JPH10511400A - 複製障害ＨＩＶ−１ｎｅｆ欠失変異体を含むヒト免疫不全ウイルスワクチンおよび治療方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 現在、後天的免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）と呼ばれる臨床上の疾患の原因であるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対する生のウイルスを用いた特異的な免疫学的治療はない。ＨＩＶの細胞から細胞への増殖とＴ_HELPER（ＣＤ４）細胞におけるその細胞障害性で致命的な影響による体の細胞性免疫系の破壊を含む様々な要因のために、外膜とｇａｇタンパク質に対する体液性免疫応答を刺激するワクチンを改良するいくつかの先行する試みがなされてきたがいずれも成功しなかった。本発明は組み換えｎｅｆ遺伝子が欠失したＨＩＶウイルスクローンを生産する方法を記載する。本発明はさらに、ウイルス粒子の注射可能な懸濁液およびＨＩＶに感染した患者の好ましい治療方法を記載する。ＨＩＶ感染の予防方法も記載されている。好ましい態様はリンパ球様細胞におけるｎｅｆタンパク質によるＩＬ−２ｍＲＮＡおよびＩＦＮγの誘導阻害を取り除き、細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を介するＨＩＶに体する細胞性免疫応答を発達させ、および潜在的宿主に対して野生型ＨＩＶと競合させ、野生型ＨＩＶをｇｐ１２０，ｇｐ４１およびｇａｇタンパク質に対する体液性抗体にさらされる機会を増やすことにより作用すると考えられる。

Description

【発明の詳細な説明】 複製障害ＨＩＶ−１ｎｅｆ欠失変異体を含むヒト免疫不全ウイルスワクチンおよ び治療方法 技術分野 本発明は生きたままの遺伝的に変化したＨＩＶウイルスワクチンを用いるヒト 免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の治療と予防に関する。 背景技術 本発明者が知る限り、治療や予防のために同様な発明を用いた先行技術はない 。 ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）は後天的免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の第一 の病因となる病原体である。ＨＩＶは、ウイルスの様々な種や、また同一の患者 における異なった時に同一のウイルスの種により示される、生物学的表現型の広 い多様性に帰結する高い遺伝的多様性を示す。複製動力学的、血清中和に対する 感受性、抗ウイルス剤耐性、細胞毒性の誘導、および宿主特異性の幅における表 現型が異った種が見つかった。２つの主たるサブタイプＨＩＶ−１とＨＩＶ−２ は非常に近縁のＲＮＡレトロウイルスであるヒトおよび非ヒトの霊長類のレンチ ウイルスのグループの構成員である。 ＨＩＶによる感染は様々なカリニ肺炎（ＰＣＰ）のような日和見感染やカポジ 肉腫（ＫＳ）のような腫瘍を許す犠牲を作る細胞性免疫系の進行していく低 下に到る。免疫系の破壊の機構は細胞性免疫が適切に機能するための道具である ＣＤ４⁺Ｔ_HERPERリンパ球におけるＨＩＶの細胞病理学上の効果であることが知 られている。 ＡＩＤＳとＨＩＶ感染はまず米国や欧州において同性愛の男性、静脈注射によ る薬物使用者、および血友病患者を巻き込んだ。しかし、異性間の感染がアフリ カ（特にルワンダ、ブルンジ、ザイールおよびケニヤ）、ブラジル、インド、ミ ャンマー、およびタイでは普通になり、流行してきた。世界保健機構（ＷＨＯ） によれば、世界中で１千万人以上がＨＩＶに感染していると見積もられる。利用 できるデータはこれらの感染した人のほとんど全員が効果的な治療がないために 死ぬであろうことを示す。 Ｂリンパ球に媒介される体液性抗体応答は通常、膜タンパク質ｇｐ１２０，ｇ ｐ４１、ならびにｇａｇタンパク質ｐ２４、ｐ１７およびｐ１５に対して感染し た人で高い抗体力価で感染した人で強い。不幸にも、これは継続し容赦のない感 染と感染の細胞から細胞への伝達により進行する疾患、多分ＩＬ−２（インター ロイキン２）信号伝達の阻害による細胞障害性Ｔリンパ球の阻害からのいかなる 防御も提供しない。米国国立衛生研究所（ＮＩＨ）は最近初期段階の結果に失望 して、ＨＩＶの様々なウイルスタンパク質由来のワクチンのフェイズＩＩＩとフ ェイズＩＶの治験をやめた。同様に、ＨＩＶに対する細胞性の応答は最初、細胞 障害性（キラー）Ｔリンパ球（ＣＴＬ）のために増殖に強い。不幸にも、これは ウイルスがＣＴＬ認識から逃げることを可能にするｇａｇＣＴＬエピトープの遺 伝的多様性のせいで感染後すぐに低下してしまう。（フィリップ アール イー 等;ネーチャー３４５：４５３、１９９１） ウイルス核酸配列に作用するジドブジンのような様々な薬剤もＨＩＶ感染の治 療のために認可されてきた。これらが初期の段階にとても有望そうだと思われた が、これらに対する耐性の発達により大きな失望と挫折を生んだ。 他の様々なアプローチが求められた。ジョナス サーク博士はネーチャーの論 評において、病気が進行する際に、ｇｐ４１に対する抗体とウイルス中和抗体の 力価は一定だが、細胞毒性（ＡＤＣＣ）に依存する抗体と逆転写酵素に対する抗 体の存在と相関する抗ｐ２４抗体の濃度は減少することを指摘した。彼は発症し たＨＩＶ感染患者の、発症していないＨＩＶ感染患者から得た血清での治療を提 言した。彼は更にＨＩＶに感染した患者に投与されたＨＩＶ免疫原は予防的に働 くと仮説をたてた。（サーク ジェー；血清反応陽性の個体を免役することによ るＡＩＤＳのコントロールに対する予見：ネーチャー ３２７：４７４−４７６ 、１９８７） 弱毒化された生ウイルスと死んだビリオンに仮説を立てられていたが、ヒトの ＨＩＶ感染の予防と治療のいずれにも有意義な方法でこれらを試みた研究者は未 だいない。 ＳＩＶ（シミアン免疫不全ウイルス）はミドリザル、マカークザル，スーティ ー−マンガビーザル、アカゲザル、およびチンパンジーに作用する多様な種を有 する霊長類のレンチウイルスである。サルにおけるＳＩＶ感染は霊長類のレンチ ウイルスの生理学的、病理学的研究に広く用いられてきた。相対的な感染力が決 定されたＳＩＶの人工的に生み出した変異体でサルを感染させてみることにより 膨大な研究がなされてきた。これらの研究の多くはウイルス生活環の生理機能に おけるｎｅｆ遺伝子の役割に焦点をあてた。ｎｅｆ遺伝子は今までに配列が 決定された全ての霊長類のレンチウイスルに存在する。該遺伝子はｅｎｖ遺伝子 の中からまたはその３’末端のすぐ後ろからはじまる、オープンリーディングフ レームからなり、３’末端の長い繰り返し配列のＵ３部分と重なる。該遺伝子は あらかじめＦ，３’−ｏｒｆまたはＢ−ｏｒｆと命名された。それは、感染した 個体でｎｅｆ遺伝子産物に対する抗体により決定されたとおり、インビボで発現 される。ルリア等は少なくともあるｎｅｆ遺伝子産物は活性化試薬ＰＭＡ，ＰＨ Ａおよび／またはＣＤ３、ＴＣＲまたはＣＤ２に対する抗体により誘導されるリ ンパ球様細胞におけるＩＬ−２（インターロイキン２）ｍＲＮＡの誘導を阻害す ることを示した（ルリア Ｓ、チャンバー Ｉ、バーグ Ｐ，ＰｒｏｃＮａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ ８８：５３２６ １９９１）。ケスラー等はイン ビボにおけるオープンフォーム（ｏｐｅｎ ｆｏｒｍｓ）に対してｎｅｆでの終 止コドンの点突然変異の速い回復を発見し、ｎｅｆの開いた、多分機能型に対す る選択圧（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ ｐｒｅｓｓｕｒｅ）を示した。（ケスラー Ｈ Ｗ等；Ｃｅｌｌ，６５：６５１，１９９１）さらにｎｅｆがアカゲザルにおける 活発なウイルスの複製、正常なウイルスの荷重（ｌｏａｄ）の維持、および疾患 の誘導に対して必要であることが明らかにされた。野生型ウイルスを感染させら れた全ての動物はＡＩＤＳを発症し、死んだのに対して、ｎｅｆ欠失変異体を接 種された動物は少なくとも３年は発病しなかった。ｎｅｆの欠失はウイルスの複 製を増やしたことが示されたが、ｎｅｆ欠失に対する応答はインビボとインビト ロで異なっているという仮説がたてられた。（ギブズ ＪＳおよびデスロザイア ー ＲＣ「ヒトレトロウイルス」カレン ＢＲ編集、オックスフォード大学出版 、ニューヨーク，１９９３） 本発明の第一の目的は、それゆえ、残ったオープンリーディングフレーム、特 にｔａｔ，ｏｌ，ｇａｇ，ｅｎｖ，およびｖｐｒを保存しつつｎｅｆ遺伝子の実 質的な部分が欠失させるような組み換え技術を用いてＨＩＶウイルスクローンを 生産することである。 本発明の別の目的はＨＩＶに感染した患者にこのｎｅｆ遺伝子欠失組み換えウ イルスを注入し、以下の１つかそれ以上の方法により治療を提供することである 。 ａ）ＨＩＶ抗原提示細胞を認識させることにより、Ｂリンパ球や細胞障害性（ キラー）Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を活性化するＴ_HELPER細胞の正常なＩＬ２および ＩＦＮγを生産させる、 ｂ）細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）を介する野生型ＨＩＶに対する細胞性免 疫応答を、継続的に活性化し、刺激し、維持する、 ｃ）および、潜在的宿主に対して野生型ＨＩＶと競合させ、野生型ＨＩＶがｇ ｐ１２０、ｇｐ４１、およびｇａｇタンパク質に対する体液性抗体にさらされる 可能性を高める。 本発明の第二の目的はＨＩＶのタンパク質のいずれかを発現している細胞に特 異的で、ほぼ永久な長期にわたるＣＴＬの記憶幹細胞を生む細胞障害性Ｔリンパ 球の系統を提供することにより本発明の対象であるｎｅｆ欠失変異体での処置に より売春婦のような危険性の高い個体の予防免疫を提供する。野生型のＨＩＶに よる感染は、これらの個体において、速やかに、効率的に、効果的に処理される 。 発明の開示 ｎｅｆオープンリーディングフレームが欠失したＨＩＶ−１_ELI単離物の組み 換えクローンがＮｃｏＩとＸｈｏＩサイトでのエンドヌクレアーゼによる切断と 、開放端のオリゴヌクレオチドによるエンドフィリングによりプラスミドベクタ ーから構築された。得られたプラスミドＤＮＡはスクリーニングされ、ＤＥＡＥ デキストランを使ってＨｕＴ７８細胞株へトランスフェクションされた。ＨＩＶ ウイルスの増殖はｇｐ４１、ｐ２４，ｐ１７、およびｐ１５のタンパク質の観察 、逆転写酵素活性の観察、およびビリオンの電子顕微鏡による同定により確認さ れた。ウイルス粒子は培地上清から分離され、使用するまで液体窒素で凍結され た。ＨＩＶ感染治療のために、ＨＩＶ感染とＣＤ４−ＣＤ８細胞数の確認を含む 基本的な診断処置、アレルギー反応に対する皮膚テストと告知に基づく同意の後 で、およそ２００，０００，０００ウイルス粒子が静脈注射された。この後でほ ぼ１ヶ月でＣＤ４の数が観察され、さらに追加抗原刺激の２００，０００，００ ０ウイルス粒子が静脈注射された。この後、１ヶ月ごとのＣＤ４の数の観察が１ 年に渡って続けられた。本発明によれば、患者は６−９ヶ月で、正常のＣＤ４の 数を回復し、１年間で免疫系を回復することが期待される。危険性が高い集団に おける野生型ＨＩＶの感染の予防のためには、およそ１，０００，０００ウイル ス粒子が皮下注射され、過敏（アナフィラキシー）反応のような不都合な効果が ないことを確認するために十分な時間患者が観察される。この集団における免疫 は血清変換により確認され、野生型ＨＩＶ感染はＥＬＩＳＡを用いてｎｅｆ遺伝 子産物に対する抗体を検出することにより診断される。 発明を実施するための最良の形態 ヒトリンパ球様細胞株であるＨｕＴ７８細胞はＡＴＣＣ（ロックビル、メリー ランド）から得られ、１０％加熱（５６°Ｆ、３０分）ウシ血清（シグマ化学会 社、セントルイス、ミズーリ）と１０％インターロイキン２−Ｔ細胞増殖因子（ メロイ研究所、スプリングフィールド、バージニア）を含むダルベコの修飾イー グル培地（ギブコ、グランドアイランド、ニューヨーク）で増殖された。細胞は プラスチック製の組織培養皿（ファルコン）で増殖され、ＥＤＴＡを含むトリプ シン（ギブコ、グランドアイランド、ニューヨーク）を使って移された。この細 胞株はＨＩＶ−１_ELI株に感染したＡＩＤＳ患者から得られた末梢血単核細胞（ ＰＢＭＣ）に接種された。ＰＭＢＣはまずフィコールジアトリゾエート（密度１ ．０７７−１．０８０ｇ／ｍｌ，２０℃）（ファルマシアＬＫＢバイオテクノロ ジー、アップサラ、スウェーデン）で単一バンドに分離して調製した。ＰＢＭＣ はＲＰＭＩ１６４０培地で洗浄して、５日間、１μｇ／ｍｌの植物凝集素（シグ マ化学、セントルイス、ミズーリ）で刺激され、先に培養物にいれた植物凝集素 を洗って除いた。分子クローニング技術は、マニアチス Ｔ，フィッチ ＥＦ等 （モルキュラークローニング、ラボラトリーマニュアル、コールドスプリングハ ーバーラボラトリー、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク）に記載のと おり、使用された。感染された細胞株の全細胞ＤＮＡから得られたＨＩＶ−１_{EL I} の非切断（ｎｏｎｃｕｔｔｅｒ）制限エンドヌクレアーゼ（ニューイングラン ド バイオラボ、ビバリー、メリーランド）を使って、細胞のフランキング配列 がある統合されたプロウイルスＤＮＡがバクテリオファージ Ｊ１（プロメガバイオテク、マジソン、ウィスコンシン）のＸｂａＩサイトにク ローンされ、組み換えファージクローンλＨＸＥＬＩが得られた。ベクターＳＰ ６５ｇｐｔはプラスミドｐＳＶ２ｇｐｔのＢａｍＨＩ−ＰｖｕＩＩ断片をＳＰ６ ５のＢａｍＨＩ−ＰｖｕＩＩサイト（プロメガバイオテク、マジソン、ウィスコ ンシン）に結合して構築された。λＨＸＥＬＩクローンの１２．５キロベース（ ｋｂ）ＨｐａＩ−ＸｂａＩ断片がＤＮＡポリメラーゼＩのクレノウ断片で平滑末 端にされ、同様にベクターＳＰ６５ｇｐｔの平滑末端化されたＢａｍＨＩとＥｃ ｏＲＩサイトにクローンされた。得られたクローンＨＸＥＬＩｇｐｔはＨＩＶ− １_ELIとキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ｇｐｔ）配列 を同じ転写方向に持っている。プラスミドベクターを持つプロウイルスはＮｃｏ Ｉ（ベーリンガーマンハイムバイオケミストリー、マンハイム、ドイツ）とＸｈ ｏＩ（ニューイングランドバイオラボ、ビバリー、マサチューセッツ）制限エン ドヌクレアーゼで消化して、続いてバイオサーチサイクロン合成機、逆転写酵素 、およびｄＮＴＰで構築されたオリゴヌクレオチドで末端を埋めて、続いて平滑 末端を結合した。プラスミドはｎｅｆ欠失を含むＨＸＥＬＩｇｐｔの派生物に対 して０．８％アガロースゲル（シグマ化学、セントルイス、ミズーリ）による電 気泳動でスクリーニングした。欠失の正確な位置はＤＮＡポリメラーゼの鎖延長 終結阻害剤−正常なデオキシヌクレオシド三リン酸の２’，３’−ジデオキシお よびアラビヌクレオシド類似体（ｄｄＣＴＰはコラボレイティブリサーチＩｎｃ ．、ワルサム、マサチューセッツから購入し、ａｒａＡＴＰとａｒａＣＴＰはＰ −ＬバイオケミカルＩｎｃ．，ミルウォーキー、ウィスコンシンから購入）を使 って、サンガー Ｆ，ニコルソン Ｓ等（Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ ｏｆ Ｓｃｉ ７４：５４６３−５４６ ７、１９７７）に記載のとおり、ＤＮＡ配列決定により確定された。ヘテロ二重 鎖ＤＮＡはエタノール沈殿に供され、滅菌水に再懸濁された。ＤＮＡの厳密な希 釈が最終的な容量が８０μｌ（ｍｉｃＬ）になるように行なわれた。それぞれの ＤＮＡサンプルに対してオートクレーブによる滅菌の後で２ｍｇ／ｍｌの濃度で ファルマシアから購入したＤＥＡＥデキストラン２０μｌと２倍に濃縮された無 血清ダルベコ修飾イーグル培地（ギブコ、グランドアイランド、ニューヨーク） １００μｌが添加された。上記ＨｕＴ７８細胞が確実に対数増殖させるためにト ランスフェクションに２４時間先立って新鮮なプレートに移された。これらの増 殖細胞はトリスで緩衝されたｐＨ７．２の等張生理食塩水（シグマ化学、セント ルイス、ミズーリ）中のＥＤＴＡを含んだ０．１％トリプシン（ギブコ、グラン ドアイランド、ニューヨーク）でプレートから取り除かれ、上記のとおり加熱し てトリプシンを不活性化したウシ血清を含む新鮮なダルベコ修飾イーグル培地と 混ぜて、カルターカウンター（Ｃｕｌｔｅｒ ｃｏｕｎｔｅｒ）で細胞数が数え られた。６×１０⁵個の細胞が１２ｍｍ×７５ｍｍの透明なプラスチックチュー ブ（ファルコン＃２０５８）に入った血清を含む２ｍｌダルベコ修飾イーグル培 地に添加された。チューブは５０００ｒｐｍで１分間遠心された。培地はアスピ レーターにつけたピペットを用いて注意深く取り除かれた。ＤＮＡの希釈物の１ ００μｌサンプルがそれぞれのチューブに添加された。チューブは穏やかに振と うされ１時間の間３７℃のＣＯ₂インキュベーターに移された。ラックは１５分 毎に穏やかに振とうされた。インキュベーションの最後に、上記のとおり加熱し たウシ血清を含む新鮮なダルベコ修飾イーグル 培地２ｍｌがそれぞれのチューブに加えられ、チューブが振とうされ、遠心され 、培地は上記のとおり吸引除去された。次いで細胞は、上記のとおり加熱したウ シ血清を含む２ｍｌの新鮮なダルベコ修飾イーグル培地に再懸濁され、３７℃５ ％ＣＯ₂インキュベーターで保温された。培養物はＨＩＶ−１ｇａｇとｅｎｖの 産物ｐ１７，ｐ２４，およびｇｐ４１、逆転写酵素活性、および既に当業者には 公知である電子顕微鏡で見えるビリオンの存在を観察された。培養物のウイルス を含む上清が、１ｍｌあたり２００，０００，０００ビリオン粒子を含むように 、ミリポアフィルター（フィルターサイズ０．４５μｍ、ミリポアコーポレーシ ョン、ベッドフォード、マサチューセッツ）で濾過され、滅菌したバイアルに入 れられた。滅菌したバイアルは液体窒素中で保存された。 実施例 〈実施例１〉 両者ともインドで売春婦をしている２人のボランティア（Ｓ１およびＳ２）は １９８９年にＨＩＶ陽性になった。それから、両者は下痢で体重が減少し、カン ジダとＣＭＶに感染して状態が悪化していた。彼らのＣＤ４の数はそれぞれ３２ ７と２５８であった。家族や友人はＨＩＶ感染のため彼らを見捨て、ほとんど支 援する構造はなかった。詳細な告知に基づく同意、および本発明の使用を含むあ らゆる危険の綿密な説明の後に、彼らにＨＩＶの状態を確認するための生理的な 、確認のためのウエスタンブロットテスト、ＣＤ４−ＣＤ８細胞数の基準線、ウ イルス懸濁液に対する感受性を調べる皮膚テストを行ない、両者はおよそ２００ ，０００，０００ウイルス粒子を含んだ組み換えウイルス懸濁液を静脈 内に投与された。患者は独立した施設に隔離され、すべての彼らとの個人的な接 触には伝染病予防措置を用いた。患者のＣＤ４の数は最初の注射の１カ月後記録 され、彼らは同じ量の２回目の静脈注射を受けた。彼らのＣＤ４の数は追加抗原 刺激の４−６週後、再度記録された。患者は、最初の注射のおよそ４−６週後で 体重が増加し始めて、ＣＤ４の数も下記の表に示すとおり増加した。かれらはそ れぞれ３および４．５月で無症状状態になった。 〈実施例２〉 ヒトの免疫系を移植した１００匹のＳＣＩＤ（重度関連免疫不全症候群（Ｓｅ ｖｅｒ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ Ｓｙｎｄｒｏ ｍｅ）マウスを５０匹づつコントロールと実験グループに分けた。実験グループ は好ましい態様の対象であるｎｅｆ欠失ウイルスの１００万ビリオンを静脈注射 で感染させた。この注射から１ヶ月後両方のグループは野生型のＨＩＶ−１ビリ オンと感染したリンパ球で感染させられた。感染の１ヶ月後、それぞれのグルー プから１０匹のマウスが犠牲にされ、それらのリンパ様組織が調べられた。コン トロールグループにおいて病理学的実験により小胞の樹状突起 細胞の深刻な減少、著しいシンシチウムの形成、平均ＣＤ４の３８．６％が減少 した末梢血が明らかにされた。実験グループでは最小の病理学的変化とＣＤ４細 胞数の顕著な減少が起こっていないことが明らかにされた。さらに２ヶ月経過し た後、コントロールの動物の５８％が野生型ＨＩＶ−１感染により生じた免疫不 全の結果として死に、一方実験グループの動物には免疫不全の結果として死んだ ものはいなかった。この観察は統計的に重要である（ｐ＜．００１）。実験グル ープから選ばれた２０匹は上記のとおり再度野生型ＨＩＶ−１で感染させたが、 また病理学的応答はなかった。 本発明の対象である組み換えウイルスは病原性がなく、上記のとおり野生型Ｈ ＩＶのＣＤ４細胞障害性効果に由来する免疫を付与し、以下の方法が野生型ＨＩ Ｖ感染する危険性が高い人における予防に対して確立される。： １．細心な生理学的実験とＨＩＶ感染に関しての教育。 ２．組み換えｎｅｆ欠失ＨＩＶウイルスを用いた予防の危険性と告知に基づく同 意の獲得の詳細な議論。議論は標準テストからでは野生型ＨＩＶ感染の診断が不 可能であること、ｎｅｆタンパク質に対する抗体を検出する特別なＥＬＩＳＡを 行なうことの必要性を含む。 ３．０．５ｍｌに懸濁したおよそ１，０００，０００ウイルス粒子が皮下投与さ れる。 ４．対象者はアナフィラキシー反応のような不都合な反応がないことを確認する ために十分な時間観察される。 ５．血清変換（ｓｅｒｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ）で組み換えウイルスに対する免 疫反応の成功が観察される。 上述の記載と実施例は単に具体的にするためになされ、修飾や変更は本発明の 意図と目的からはずれるものではないことは明らかである。 結論、効果および目的 組み変えレトロウイルスの１つの潜在的な用途だけが記載されているが、本発 明の主題は多くのさらに達成するものを含んでいる。該主題はＨＴＬＶウイルス によりおこる白血病のような他のレトロウイルス感染症の予防と治療に広く用い うる。この主題が用いうる既に発見されている他の病原性レトロウイルスがある かもしれない。本発明が遺伝子欠損の位置と程度および／または欠失部位の広が りを変えて修飾されうることは確実にありえる。本発明の上述の好ましい態様の 記載に別の方法を用いて同様な遺伝子欠失を生じることも実施可能である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ (Ｃ１２Ｎ 15/09 Ｃ１２Ｒ 1:92） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，Ｂ Ｒ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ， ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，Ｌ Ｕ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ， ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，Ｖ Ｎ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ｎｅｆ遺伝子のオープンリーディングフレームの少なくとも一部が欠失して いる組み換え変異体を含み、病原性レトロウイルスの感染から回復するのに十分 量が投与される、病原性レトロウイルスに感染している患者を治療するワクチン 。 ２．前記ワクチンが野生型病原性レトロウイルス感染に対する細胞障害性Ｔリン パ球に媒介される免疫を生むのに十分量で健康な個体に投与されることを特徴と する請求項１に記載のワクチン。 ３．請求項１に記載のワクチンを用いて病原性レトロウイルスに感染している患 者を治療する方法。 ４．請求項１に記載の組み換え変異レトロウイルスワクチンを用いて病原性レト ロウイルス感染を予防する方法。