JPH10511652A

JPH10511652A - Use of MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules for the prevention and / or treatment of inflammatory diseases

Info

Publication number: JPH10511652A
Application number: JP8520220A
Authority: JP
Inventors: ロエネル，ロジェ・パスカル
Original assignee: ラボラトワール・オン・ソシエテ・アノニム; ドイチェ・オム・アルツナイミッテル・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング
Priority date: 1994-12-23
Filing date: 1995-12-27
Publication date: 1998-11-10
Also published as: CN1171117A; BR9510554A; AU4347696A; WO1996020215A2; PL320922A1; SK80697A3; CA2208233A1; EP0800534A2; HUT77468A; CZ186897A3; WO1996020215A3

Abstract

(57)【要約】この発明は、食細胞のようなＭＨＣ−ＩＩ保有細胞の活性化刺激薬と細胞結合ＭＨＣ−ＩＩ分子間の相互作用、リポ多糖体（ＬＰＳ）またはＣＤ１４もしくはＬＰＢのような他の分子との複合体中のＬＰＳと、細胞結合ＭＨＣ−ＩＩ分子との間の相互作用、またはグラム陽性菌の生産物またはグラム陽性菌の生産物とＣＤ１４のような分子との複合体と、細胞結合ＭＨＣ−ＩＩ分子との間の相互作用の干渉に使用するためのＭＨＣ−ＩＩ結合および／またはＭＨＣ−ＩＩ模倣分子に関するものである。ＭＨＣ−ＩＩ結合分子は、任意の抗ＭＨＣ−ＩＩ抗体もしくはそのフラグメント、またはヒト化、２特異性もしくはその他の操作分子などのようなこの抗体から由来する任意の分子でありうる。ＭＨＣ−ＩＩ結合分子は、ＣＤ１４、そのフラグメント、その修飾体またはＭＨＣ−ＩＩ結合性を有するペプチドからなる群から選ぶことができる。 (57) [Summary] The present invention relates to the interaction between stimulators of activation of MHC-II-bearing cells such as phagocytes and cell-bound MHC-II molecules, complexation with lipopolysaccharide (LPS) or other molecules such as CD14 or LPB. Interaction between LPS in the body and cell-bound MHC-II molecules, or the product of Gram-positive bacteria or the complex of a product of Gram-positive bacteria with a molecule such as CD14, and cell-bound MHC-II MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules for use in interfering with interactions with molecules. The MHC-II binding molecule can be any anti-MHC-II antibody or fragment thereof, or any molecule derived from this antibody, such as a humanized, bispecific or other engineered molecule. The MHC-II binding molecule can be selected from the group consisting of CD14, a fragment thereof, a modified form thereof, or a peptide having MHC-II binding properties.

Description

【発明の詳細な説明】炎症性疾患の予防および／または治療に対するＭＨＣ−ＩＩ結合および／またはＭＨＣ−ＩＩ模倣分子の使用この発明は、単独または、ＣＤ１４およびＬＢＰの如き、他の分子との複合体としてのリポ多糖体（ＬＰＳ）のようなトキシン類とその伝達分子間の相互作用に干渉するための、特定分子の使用に関するものである。さらに、この発明は、敗血性ショックのような炎症性疾患の予防および治療におけるこれらの分子の使用に関するものである。リポ多糖体（ＬＰＳ）は、グラム陰性菌の細胞壁の１成分である。グラム陰性菌の感染により生命が危険になる疾患がもたらされうるが、これは、結合によって活性化され腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン１（ＩＬ−１）、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびその他の炎症メディエーターを含む種々のサイトカイン類を分泌する、単球、マクロファージおよび顆粒球のような食細胞に対するＬＰＳの特異的結合により起こるものである。これらの物質は、直接または第２メディエーターによる活性化によって、現象のカスケードを開始させ、凝固システムの異常、血管拡張、多臓器不全および最後に敗血性ショックをもたらす（４、５）。一般に、多数の炎症メディエーターの分泌をもたらす食細胞の顕著な活性化は、全身性炎症性反応症候群（ＳＩＲＳ）と称される症状の発生機序における中心的現象である。ＬＰＳによる活性化の外に、ＳＩＲＳは、細菌またはウイルスによる感染、外傷、熱傷、膵炎、移植片宿主相関病および宿主移植片相関病、食血さらにそのほか多数のもののような種々の他の臨床的症状の結果としても出現しうる。グラム陽性菌からのぶどう球菌トキシンＡのような外毒素により起こる中毒性ショックは、炎症性疾患の一例である。超抗原としても知られるその他の外毒素には、ぶどう球菌トキシンＢおよび連鎖球菌トキシン類がある。ＬＰＳは、グリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−固定単球抗原Ｃ１４に結合することが明らかにされた。ＣＤ１４は、単球、マクロファージおよび顆粒球の表面に存在するが、健常な個人の血清中にＧＰＩアンカーなしの可溶性形態でも見出される。さらに、ＬＰＳによる単球の活性化は、抗ＣＤ１４モノクローナル抗体で阻害されうることが明らかにされた。従って、ＣＤ１４がＬＰＳのレセプターとして作用し（１）、細胞質に対するＬＰＳの作用を仲介することが示唆された。しかし、ＣＤ１４陰性細胞もまたＬＰＳに応答しうる（２、７、８）。さらに、ＣＤ１４は膜通過領域および細胞質領域を欠くグリコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）−固定分子であることがわかってきた（９）。すなわち、ＣＤ１４はシグナルを細胞質に伝達することができない。ＧＰＩ−結合蛋白質がシグナル伝達に膜通過分子の付随を必要とすることは、広く承認された仮説である。すなわち、ＬＰＳおよびおそらくはその他のＳＩＲＳ刺激薬に関する真の伝達分子は、まだ確認されていない。ＬＰＳによる細胞活性化の場合、ＬＰＳによる細胞活性化を説明するためにはＣＤ１４以外の分子を持ち出さなければならない（１０）。ＬＰＳが膜結合または可溶性ＣＤ１４およびＬＰＳ結合蛋白質（ＬＢＰ）と複合体を形成するとの考えが提出された。その他の血清由来分子も、この複合体に関与することがありうる。複合体は、細胞表面上のまだ確認されない分子と相互作用して、細胞の活性化に導く。ＣＤ１４は、グラム陽性およびグラム陰性生物の細菌性エンベロープ産物による細胞活性化の開始に決定的役割を演ずるものとして報告されてきた（１３）。ここでも、その他の膜結合または血清由来分子が、細胞活性化を導く細胞表面分子との相互作用に関与する可能性がある。この発明によると、レセプターとしておよび／またはＬＰＳとＣＤ１４およびＬＢＰのような分子との分子複合体のシグナル伝達要素として作用するＬＰＳによる細胞活性化に、主要組織適合複合体ＩＩ（ＭＨＣ−ＩＩ）分子が必要であることがここに見出された。ヒトでは、ＭＨＣは白血球抗体（ＨＬＡ）として知られている。ＬＰＳ反応性は、細胞膜の表面上におけるＭＨＣクラスＩＩ分子の発現に依存することが示された。本書中で「ＴＨＰ−１^MHC+」と称する細胞系は、ツチヤらによりＴＨＰ−１として報告された、ＭＨＣクラスＩＩ発現単球細胞系である（３）。本書中で「ＴＨＰ−１．６^MHC-」と称する第２の細胞系は、自然突然変異によりＴＨＰ−１^MHC+から誘導されたＭＨＣクラスＩＩ陰性単球細胞系である。ＴＨＰ−１^MHC+細胞はＬＰＳに応答してサイトカインを分泌するが、ＴＨＰ−１．６^MHC-細胞はそうでない。ＣＤ１４陰性、ＭＨＣ−ＩＩ陰性ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）もまたＬＰＳに反応しない。ＭＨＣクラスＩＩ発現およびＬＰＳ反応性は、細胞表面上におけるＭＨＣ−ＩＩ分子の発現に必要な核因子を暗号化するｃＤＮＡであるＣＩＩＴＡをＴＨＰ−１．６^MHC-細胞にトランスフェクションすることにより復活させることができる。細胞に対する他のＳＩＲＳ薬刺激の伝達もまた、ＭＨＣ−ＩＩ分子により仲介される可能性がある。以前、外毒素もまた細胞表面上のＭＨＣ−ＩＩ分子に結合することが既に明らかにされている。その他のグラム陽性菌生産物は、少なくとも一部はＣＤ１４により仲介され、従ってこれらの産物とＣＤ１４との複合体もまたＭＨＣ−ＩＩ分子と相互作用して細胞を活性化するようである。したがって、全身性炎症性反応症候群の予防および／または治療は、ＬＰＳとＣＤ１４およびＬＢＰのような他の分子との複合体（以下、本書中では「ＣＤ１４／ＬＰＳ／ＬＢＰ複合体」として示す）および細胞結合ＭＨＣ−ＩＩ間の相互作用に干渉することにより、実施されうる。この発明によると、この干渉は２種の異なる方法により実施することができる。第１に、細胞結合ＭＨＣ−ＩＩに対するＣＤ１４／ＬＰＳ／ＬＢＰ複合体の結合は、抗ＭＨＣ−ＩＩ抗体、ＣＤ１４またはそれらから誘導されるペプチドのようなＭＨＣ−ＩＩ結合分子により遮断しうる。この型の分子は、ＣＤ１４／ＬＰＳ／ＬＢＰ複合体と競合し、したがって複合体の結合を妨害するが、そのもの自体はＭＨＣ−ＩＩを活性化しない。それ故ＭＨＣ−ＩＩの伝達体機能は遮断される。第２に、循環ＬＰＳまたはＣＤ１４／ＬＰＳ／ＬＢＰ複合体は、ＭＨＣ−ＩＩ模倣分子により捕獲されうる。可溶性ＭＨＣ−ＩＩまたはＭＨＣ−ＩＩ類似分子に結合している複合体は、もはや細胞結合ＭＨＣ−ＩＩに結合することができない。したがって、細胞の活性化が防止される。ＭＨＣ−ＩＩ結合分子は、ＭＨＣ−ＩＩに対するＬＰＳまたはＣＤ１４／ＬＰＳ／ＬＢＰ複合体の結合を遮断する能力をもつあらゆる分子を包含する。特に、これは、細胞のＣＤ１４／ＬＰＳまたはＬＰＳ結合部位を指向するモノクローナルおよびポリクローナルの両抗ＭＨＣ−ＩＩ抗体を包含する。抗体フラグメントもまたＭＨＣ−ＩＩ結合分子として適当である。ＭＨＣ−ＩＩ模倣分子は、可溶性ＭＨＣ−ＩＩ分子自体およびLＰＳまたはＣＤ１４／ＬＰＳ複合体上のＭＨＣ−ＩＩ結合部位を遮断する能力をもつ他のあらゆる分子を包含するものとする。この型の分子は、完全なＭＨＣ−ＩＩ分子またはそのフラグメントもしくはサブユニットを含みうる。さらに、ＭＨＣ−ＩＩを活性化することなくＬＰＳまたはＬＰＳ／ＣＤ１４／ＬＰＢ複合体と結合する能力をもつペプチドも有用でありうる。このようなペプチドは、少なくともＭＨＣ −ＩＩの同族体であり、ペプチドに拮抗体的性質をもたらす適当なＤ−アミノ酸を含むものでありうる。これらの分子は、可溶性形態であるか、または単体の表面に結合されうる。本書中に示した情報に基づいて、当業者は、適当な結合および／または模倣分子を確認できると思われる。この型の分子は、ヒトまたはその他の適当な資源から由来するものであってよく、ＭＨＣ−ＩＩ陽性細胞の細胞培養の上清または細胞溶解物からの分離のような、種々の手段により製造することができる。特に好ましい分離方法は、イムノアフィニティークロマトグラフィーである。また、適当な分子は、遺伝子技術、蛋白質化学的方法またはその他の任意の適当な方法により、製造することができる。この発明によると、これらの２つの型の分子は、敗血性ショックのような炎症性疾患、骨髄移植のような臓器移植後の移植片宿主相関病、移植片拒絶反応、熱傷、事故、膵臓の感染などにより生ずる炎症反応の予防および／または治療に使用することができる。またこの発明は、毛細管漏洩症候群のような、例えば術後に起こるその他の炎症反応、アレルギー性疾患、紅斑性狼そう（ＬＥ）およびその派生形、浮腫性強皮症およびその派生形、好酸球性筋膜炎、シェーグレン症候群、多発性筋炎、皮膚筋炎、結節性動脈周囲炎、ウエジナー肉芽腫、側頭動脈炎、リウマチ性多発筋炎などのような自己免疫疾患、リューマチ様関節炎、若年性慢性関節炎、フェルティー症候群、カプラン症候群、強直性脊椎炎（マリー・ストリュンペル・ベクテレフ病）、乾せん、ライター症候群、ベーチェット症候群のようなリウマチ様疾患の予防および／または治療に適当である。この発明により処置することができ少なくとも部分的に自己免疫機構により生ずるその他の疾患は、なかんずく、真性糖尿病、クローン病、潰瘍性大腸炎、消化管潰瘍、糸球体腎炎および腎炎のような腎感染症、動脈硬化性疾患、多発性硬化症、アルツハイマー病、甲状腺機能昂進、甲状腺機能低減である。またこの発明は、白血病、血球がん、がん腫、繊維腫、肉腫および種々の型の組織球増加症のような腫瘍学的疾患をもった１種以上のヒトの臓器における炎症反応に使用することができる。またこの発明は、エイズのようなウイルス疾患の予防および／または治療に使用することができる。ＬＰＳ刺激は、細胞内のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の複製を増加することが知られている。したがって、この発明のＭＨＣ−ＩＩ結合および／または模倣分子によりＬＰＳによる刺激を遮断すると、この複製刺激が除かれる。それ故、この発明のＭＨＣ−ＩＩ結合および／または模倣分子は、細胞活性化刺激薬によるウイルス複製の刺激の防止により、ＨＩＶ感染細胞に対して保護作用を付与するために使用することができる。実施例に示すデータに基づくと、下記のＬＰＳによる細胞活性化モデルが考えられる。一方では、ＬＰＳは膜結合ＣＤ１４（ｍＣＤ１４）に結合でき、相互作用がリポ多糖体結合蛋白質ＬＢＰにより加速される（１４）。次いでＬＰＳとＧＰＩ固定ｍＣＤ１４およびおそらくＬＢＰの複合体が膜通過ＭＨＣクラスＩＩ分子と相互作用し、シグナル伝達をもたらす。この状況を図３Ａに示す。他方では、ＬＰＳはＬＢＰと一緒に血清中に存在する可溶性ＣＤ１４（ｓＣＤ１４）に結合することができ、次いでこの複合体がＣＤ１４陰性細胞の表面上のＭＨＣクラスＩＩ分子に結合して、ＣＤ１４陰性であるがＭＨＣクラスＩＩ陽性の細胞の活性化をもたらす。この状況を図３Ｂに示す。ＣＤ１４とＭＨＣ−ＩＩの接触を示したが、ＬＢＰとＬＰＳも他のまだ未確認の分子と同様にこの相互作用に関与することができる。また、この場合のＬＢＰの役割はまだ決定されていないが、活性化刺激薬はグラム陽性菌の構成成分でもありうる。ある種の活性化が、ＣＤ１４またはＬＢＰとの複合体を形成することなく直接ＭＨＣ−ＩＩ分子に作用する可能性はこれにより除外されていない。ここに、刺激がＭＨＣ−ＩＩ分子により仲介されることが確認された。したがって、これらの分子の遮断または模倣により、活性化刺激薬の伝達が防止されるはずである。さらに、この発明は、ＭＨＣ−ＩＩ結合分子、ＭＨＣ−ＩＩ模倣分子および一方または両方の型の分子を含む医薬組成物に関するものである。食細胞のようなＭＨＣ−ＩＩ分子発現細胞に対するＬＰＳのような活性化刺激薬と細胞結合ＭＨＣ−ＩＩ分子との間の相互作用に対する干渉のための有効成分として、１種以上のＭＨＣ−ＩＩ結合分子および／またはＭＨＣ−ＩＩ模倣分子を含む医薬組成物は、散剤、けんだく剤、液剤、噴射剤、乳剤、注入剤、吸入剤組成物、軟膏剤またはクリーム剤の形をもち、局所適用、鼻内、直腸、膣および経口、非経口（静脈内、皮内、筋肉内、くも膜下など）または経皮投与、吸入による投与などに使用することができる。この発明の医薬組成物は、活性化合物（類）と、（水性または非水性溶媒、安定剤、乳化剤、界面活性剤、添加剤のような）中立的性格を有し医薬的に許容される賦形剤、さらに必要に応じて着色剤および着香剤を配合すること（すなわち混合、溶解することなど）により、製造することができる。医薬組成物中の有効成分の濃度は、処置の種類および投与方法に応じて０．００１％ないし１００％の間で変化しうる。投与される有効成分の用量も、具体的用途および投与経路により異なるが、例えば体重１ｋｇ当たり０．０１μｇないし１ｍｇ、好ましくは体重１ｋｇ当たり０．１μｇないし１００μｇの間で変化しうる。この発明を以下に示す実施例に基づいて説明するが、これらはこの発明の範囲を制限するものではない。実施例実施例１緒論ＭＨＣ−ＩＩが、ＬＰＳ、ＣＤ１４、ＬＢＰおよびおそらく他の分子がＬＰＳによる食細胞の活性化における伝達体および／またはレセプターであるという仮説を、ＬＰＳによる刺激時におけるＭＨＣクラスＩＩ陽性（ＨＬＡ−ＤＲ）およびＭＨＣクラスＩＩ陰性細胞系によるサイトカイン分泌を比較することにより試験した。サイトカインの分泌は、細胞活性化の指標である。材料および方法ＴＨＰ−１^MHC+は、ヒト由来のＣＤ−４陰性、ＭＨＣクラスＩＩ陽性単球細胞系である（３）。ＴＨＰ−１．６^MHC-は、反復限界希釈法によりクローン化した、ＴＨＰ−１^MHC+の自然発生ＭＨＣクラスＩＩ陰性突然変異である。ＨＬＡ−ＤＲの発現は、ＴＨＰ−１．６^MHC-細胞をＣＩＩＴＡ（クラスＩＩトランスアクティベーター；ＭＨＣクラスＩＩ蛋白質の発現に必要な核蛋白質（１２））でトランスフェクションすることにより再構成した。ＴＨＰ−１^MHC+細胞（野生型）、ＴＨＰ−１．６^MHC-細胞（突然変異細胞系）およびＴＨＰ−１．６^MHC-ＣＩＩＴＡ（ＣＩＩＴＡでトランスフェクションしたＴＨＰ−１．６^MHC-細胞）表面上のＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ１８の発現は、フローサイトメトリーで評価した。種々の細胞系を、１０％ウシ胎児血清を補足し用量０、１、１０、１００ｎｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した培地中において、１０⁶細胞／ｍｌで培養した。２４時間後、上清を採取し、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−８含量について酵素免疫吸着測定法により評価した。結果および検討細胞の生存率は、ＬＰＳ処理により低下しなかった。トリパンブルー染色が示すところでは、９５％以上の細胞が生存した。ＣＤ１８の発現は３種の細胞系で類似しているが、ＴＨＰ−１．６^MHC-細胞はＴＨＰ−１^MHC+細胞より顕著に低い濃度のＨＬＡ−ＤＲしか発現しなかった。ＴＨＰ−１^MHC+細胞をＬＰＳで刺激すると、細胞はＴＮＦ−αおよびＩＬ−８分泌の応答を行った（図１）。反対に、ＨＬＡ−ＤＲ陰性細胞系であるＴＨＰ− １．６^MHC-は、高用量のＬＰＳを用いた場合でもＬＰＳの刺激によりＴＮＦ−α およびＩＬ−８の分泌を誘導しなかった。しかし、ＣＩＩＴＡでのトランスフェクションにより、ＨＬＡ−ＤＲ発現とＬＰＳ反応性は共に復活した。ＨＬＡ−ＤＲ分子の発現は、ＬＰＳによる単球細胞の活性化に必要であったと結論された。実施例２緒論実施例１の知見を確認するため、細胞系システムで得られた結果を、小児初期に重症複合型免疫不全症候群として現れるまれな遺伝性疾患であるＭＨＣクラスＩＩ欠乏症患者から得た細胞を用いて証明した。これらの患者では、ＣＤ１４の発現に影響はなかった。ＭＨＣクラスＩＩ欠乏症患者および対照のヒトのＰＢＭＣを、用量を次第に増加させたＬＰＳの存在下に培養し、これら培養物の上清中のＴＮＦ−αおよびＩＬ−８の濃度を測定した。材料および方法末梢血単球細胞（ＰＢＭＣ）を、ＭＨＣ−ＩＩ欠乏症患者および健常な対照から採取した。患者（図２の左駒、ハッチングした分布図）および健常対照（灰色の分布図）の両ＰＢＭＣの表面上のＨＬＡ−ＤＲ発現を、直接免疫蛍光染色およびフローサイトメトリーで評価した。患者（太線）および対照（細線）のＰＢＭＣを、１０％正常ヒトＡＢ陽性血清を補足し０、１、１０および１００ｎｇ／ｍｌのＬＰＳで刺激した培地中において、１０⁶細胞／ｍｌで培養した。２４時間後、上清を採取し、ＴＮＦ−α含量について酵素免疫吸着測定法により評価した。結果および検討健常なヒトからのＰＢＭＣは、予想通りＬＰＳの刺激に応答してＴＮＦ−αおよびＩＬ−１を分泌した。しかし、患者のＭＨＣクラスＩＩ欠乏ＰＢＭＣは、意味をもつレベルのサイトカインをＬＰＳに応答して分泌しなかった（図２）。すなわち、ＭＨＣクラスＩＩ分子発現のための要件は、ＴＨＰ−１^MHC+群の細胞系に限定されないことが示された。データは、膜結合ＣＤ１４がＬＰＳによる細胞の活性化に必要ではなく（ＴＨＰ−１^MHC+細胞がＣＤ１４を発現しない）、また充分でもない（ＭＨＣクラスＩＩ欠乏症患者のＰＢＭＣが正常レベルのＣＤ１４を発現する）ことを示す。しかし、上に概略を述べた実験は、可溶性ＣＤ１４の役割を扱うものではない。これらすべての実験において、可溶性ＣＤ１４を含む血清を補足した培地を使用した。それ故、ＴＨＰ−１^MHC+、ＴＨＰ−１．６^MHC-およびＴＨＰ−１．６^MH ^- ＣＩＩＴＡ細胞を無血清培地で培養することにより実験を繰り返した。ＬＰＳの用量を次第に増加させて処理しても、意味をもつレベルでのＴＮＦ−αの分泌は生じなかった。この結果は、ＭＨＣクラスＩＩ分子がＬＰＳ反応性に決定的に関与していることを示す。ＨＬＡ−ＤＲ陰性細胞は、ＬＰＳによる刺激でサイトカインを分泌できなかった。ＬＰＳ反応の欠如は、ＬＰＳ反応性の低下を起こすＭＨＣクラスＩＩ発現欠如それ自体ではなく、ＭＨＣクラスＩＩに密接に関連しＣＩＩＴＡによっても調節される因子に関係があるとの反論が出るかも知れない。しかし、ＴＮＦ−α並びにＩＬ−１およびＩＬ−８の分泌も低下したのであるから、ＬＰＳに対する応答による欠陥は、サイトカイン１種のみの分泌に限定されるものではない。さらに、ＭＨＣクラスＩＩ以外に、ＣＩＩＴＡにより調節される分子は、広範な研究にもかかわらず今日まで発見されていない。最後に、患者の疾患はＣＩＩＴＡに関連した欠陥によるものではない。この患者からのエプスタイン・バー・ウイルス（ＥＢＶ）形質転換Ｂ細胞のトランスフェクションにより、ＭＨＣクラスＩＩ分子の発現は復活しなかった。実施例３緒論ＭＨＣクラスＩＩ分子とＣＤ１４の物理的相互作用を３種の異なる方法により明らかにした。第１に、ＭＨＣ−ＩＩ陽性およびＭＨＣ−ＩＩ陰性細胞系の細胞溶解物を、ＭＨＣ−ＩＩ特異的または対照抗体および放射性ＣＤ１４（ＣＤ１４*）または放射性対照分子とインキュベートした。ＭＨＣ−ＩＩとＣＤ１４*の複合体は、プロテインＡ・アガロースおよびＭＨＣ−ＩＩ特異的抗体の相互作用によってのみ沈降できる。対照分子または対照抗体を使用する場合には、沈降物に放射能は見られないはずである。ＭＨＣ−ＩＩが存在しないなら、沈降物に放射能は見られないであろう。第２に、ＭＨＣ−ＩＩを放射性ＣＤ１４とインキュベートした。おそらく、ＭＨＣ−ＩＩ／ＣＤ１４*複合体が形成される。理論的には、これらの複合体は複合体中の２種の相手およびプロテインＡ・アガロースの何れかに特異的な抗体により沈降させることができる。第３に、抗ＣＤ１４抗体がＭＨＣ−ＩＩとＣＤ１４*の相互作用を遮断できるか否かを試験した。これらの実験の原理を、さらに図４に示す。方法１．放射性ＣＤ１４の製造 ³⁵Ｓメチオニンの存在下、製造元（プロメガ、スイス国）のプロトコルにしたがって、ＴＮＴＴ７結合網状赤血球溶解物システムを用いてＰＣＲ法で製造し、ヌクレオチド配列を確認した全長ＣＤ１４ｃＤＮＡのインビトロ転写／翻訳により、組み替え体ＣＤ１４を製造した。対照としては、同一のシステムを使用したインビトロ転写／翻訳により、放射能標識したルシフェラーゼを製造した。２．細胞溶解物の製造いわゆる２９３細胞は、ヒトアデノウイルス５型ＤＮＡ（ＡＴＣＣ番号ＣＲＬ１５７３）で形質変換したヒト胎児腎に由来する。野生型２９３細胞は、蛍光活性化細胞分取装置で分析したところ、ＭＨＣクラスＩＩ分子を発現しない。これらをＭＨＣ−ＩＩ陰性細胞とした。ヒトＭＨＣクラスＩＩのα、βおよび非変異（ｉ）鎖のｃＤＮＡでトランスフェクションした２９３細胞は、アムステルダム、ネザーランズ・カンサー・インスティテュートのジャック・ネフィエス博士から入手した。これらは、ＭＨＣクラスＩＩを発現し、したがってＭＨＣ−ＩＩ陽性細胞として使用する。ＭＨＣクラスＩＩ陽性およびＭＨＣクラスＩＩ陰性細胞系の溶解物は、次のように製造した。５×１０⁶個の細胞をペトリ皿中で１ｍｌの溶解用緩衝液（ベーリンガー・マンハイム製、細胞標識および免疫沈降用キット）中に溶解した。３０分後、溶解した細胞を採取し、超音波処理し（３×１５秒）、次いで３０分間氷上でインキュベートし遠心分離した。上清を、下記のように免疫沈降に付した。３．実験１における免疫沈降ベーリンガー・マンハイム（スイス国）の「細胞標識および免疫沈降用キット」の試薬を用い、そのプロトコルにしたがって免疫沈降を実施した。略述すると、プロテインＡ・アガロースけんだく液５０μｌを用いて試料を予備清澄化した。遠心分離でこのプロテインＡ・アガロースを除去した後、上清を下記の抗体とインキュベートした：Ｌ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲＮＡＴＣＣ番号ＨＢ５５）；１Ｂ５（抗ＭＨＣクラスＩＩ、アムステルダム、ネザーランズ・カンサー・インスティテュートのジャック・ネフィエス博士から入手）；および抗ＣＤ３（ファーミンゲン、アメリカ合衆国サンディエゴ／ＡＭＳバイオテクノロジー、スイス国）。１時間後、プロテインＡ・アガロース５０μｌを加え、試料を３時間インキュベートし、その後６回洗浄した。次いでペレットを緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７．５、２０ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、２ｍＭＰＭＳＦ）３０μｌに再けんだくし、放射能標識ＣＤ１４含有インビトロ転写／翻訳反応で得た溶液５μｌを加え、この混合物を室温で３０分間インキュベートした。遠心分離後、ペレットを洗浄用緩衝液＃２で２回、次いで洗浄用緩衝液＃３で２回洗浄した（緩衝液＃２および＃３はベーリンガー・マンハイム、スイス国、の細胞標識および免疫沈降用キットに由来）。次いで、ペレットを標準ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動仕込み緩衝液に溶解して煮沸し、１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲルでゲル電気泳動し、その後オートラジオグラフィーに付した。４．ＭＨＣクラスＩＩ分子の精製ゴルガら（１５）の記載法を僅かに変更してＴＨＰ−１細胞からＭＨＣクラスＩＩ分子を抽出し精製した。Ｌ２４３（抗ＨＬＡ−ＤＲ、ＡＴＣＣ番号ＨＢ５５）を、ピメルイミド酸ジメチルで架橋することによりプロテインＡ・アガロース４Ｂカラム上に固定した。ＴＨＰ−１細胞を、氷上で、０．１ｍＭＰＭＳＦ含有トリスＨＣｌ、ｐＨ８．０に溶解した。以下の操作はすべて４℃で行った。溶解物を３０００×ｇで遠心分離し、ペレットを上清が澄明になるまで洗浄した。上清を集めて１６００００×ｇで４０分間遠心分離し、ペレットに最終濃度４％のノニデットＰ４０を加えて再溶解した。１６００００×ｇで２時間遠心後、上清を下記の順序で一連のカラム処理に付した：セファロース４Ｂ（１０ｍｌ）、正常家兎血清アフィゲル（１０ｍｌ）、プロテインＡ・セファロース４Ｂ（２ｍｌ）、Ｌ２４３・セファロース４Ｂ（１２ｍｌ）。カラムを、１０ｍＭトリス・ＨＣｌ／０．１％ノニデットＰ４０、ｐＨ８．０（５容量）；１０ｍＭＭＯＰＳ／１４０ｍＭＮａＣｌ／０．１％デオキシコール酸、ｐＨ８．０（２容量）；１０ｍＭトリス・ＨＣｌ／０．１％デオキシコール酸、ｐＨ８．０（４容量）で洗浄した。次いでＬ２４３カラムを他のカラムから外し、５０ｍＭグリシン／０．１％デオキシコール酸、ｐＨ１１．５で手早く溶離させた。１０ｍｌづつのフラクションを集め、溶離され次第２Ｍグリシン、ｐＨ２．０でｐＨ７．０ないし８．０に調整した。溶離したＨＬＡ−ＤＲ分子を、３０キロダルトン分別膜で限外濾過することにより濃縮した。トリス・ＨＣｌ／０．１％デオキシコール酸、ｐＨ８．０で３回洗浄後、蛋白質を同じ緩衝液中に再希釈した。５．実験２における免疫沈降インビトロ転写／翻訳反応で得た放射能標識ＣＤ１４を含有する溶液５０μｌを、約１０ｎｇのＭＨＣクラスＩＩ分子を含む溶液１μｌと混合し、室温で３０分間インキュベートした。次いで、抗体を加え、試料を４℃で１時間インキュベートした。プロテインＡ・アガロース５０μｌを添加後、試料を４℃でさらに３時間インキュベートした。遠心分離し、ペレットを洗浄用緩衝液＃２で２回、次いで洗浄用緩衝液＃３で２回洗浄した（ベーリンガー・マンハイム、スイス国、の細胞標識および免疫沈降用キット）。次いで、ペレットを標準ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動用仕込み緩衝液に溶解して煮沸し、１０％ＳＤＳポリアクリルアミドゲルでゲル電気泳動し、その後オートラジオグラフィーに付した。６．実験３における免疫沈降他の免疫沈降実験について記載したように放射能標識ＣＤ１４を免疫沈降試料に加える前に、ＣＤ１４含有溶液を抗ＣＤ１４抗体のカクテルと室温で１０分間インキュベートした。カクテルは、下記抗ＣＤ１４抗体：ＲＭＯ５２（イムノテック、スイス国）；ＬｅｕＭ３（ベックトン・アンド・ディッキンソン、スイス国）；ＭＹ４（クールター、スイス国）；Ｔｕｋ４（ダコ、スイス国）；それぞれ１０μｇ、および下記抗ＣＤ１４ハイブリドーマ：３Ｃ１０、６３Ｄ３（共にＡＴＣＣから入手）の上清１００μｇからなるものであった。対照として、抗体カクテルの容量と同用量のＰＢＳを、放射能標識したＣＤ１４含有溶液５μｌに加えた。免疫沈降に用いた抗体は、ＭＹ４（抗ＣＤ１４）およびＬ２４３（抗ＭＨＣ− ＩＩ）であった。結果実験１ＭＨＣクラスＩＩ陽性およびＭＨＣクラスＩＩ陰性細胞溶解物を用いるＭＨＣクラスＩＩ分子およびＣＤ１４の共同沈降の実証この実験の結果を図５に示す。図の左側はＭＨＣクラスＩＩでトランスフェクションした（すなわちＭＨＣクラスＩＩのα、βおよびｉ−鎖で同時トランスフェクションした）２９３細胞の溶解物を用いて実施した実験の結果を図示するもので、右側にはＭＨＣクラスＩＩ陰性２９３野生型細胞の溶解物を用いた結果が見られる。レーン１および２では、おそらく放射性ＣＤ１４（レーン１）およびルシフェラーゼ（レーン２）にそれぞれ対応する微かなバンドが、対照抗体抗ＣＤ３により非特異的に沈降しているだけである。放射能標識したＣＤ１４（ＣＤ１４*）に対応するバンドはレーン３およびレーン５に明確に見られる。ＭＨＣクラスＩＩ分子を認識する２種の異なる抗体（レーン３：Ｌ２４３；レーン５：１Ｂ５）は、ＣＤ１４*を（共同）沈降している。意味をもつ量の放射能標識した対照蛋白質（ルシフェラーゼ）がこれらの抗体で共同沈降していないので（レーン４および６）、これらの抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体の共同沈降作用はＣＤ１４に特異的である。ＭＨＣクラスＩＩ分子の不存在下（ＭＨＣクラスＩＩ陰性２９３細胞溶解物を使用、レーン７−９）では抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体によるＣＤ１４の沈降がないので、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体によるＣＤ１４の共同沈降はＭＨＣクラスＩＩ分子の存在に依存している。実験２イムノアフィニティーカラムで精製したＭＨＣクラスＩＩ分子を用いるＭＨＣクラスＩＩ分子およびＣＤ１４の共同沈降の実証結果を図６に示す。図の左側は精製ＭＨＣクラスＩＩ分子の存在下で実施した免疫沈降実験の結果を図示するもので、右側には精製ＭＨＣクラスＩＩ分子の不存在下すなわち陰性対照としての緩衝液を用いた実験の結果が見られる。レーン１および４では、対照抗体（抗ＣＤ３）により非特異的に沈降したＣＤ１４に対応する微かなバンドがみられる。レーン３には、ＣＤ１４に対応するバンドが抗ＣＤ１４抗体による沈降で出現している。この実験では沈降を抗ＭＨＣクラスＩＩ分子で行っているが、レーン２では、ＣＤ１４に対応するバンドはレーン３より強度が大きい。精製ＭＨＣクラスＩＩ分子の不存在下では、ＣＤ１４は抗ＣＤ１４抗体で強く沈降するが（レーン６）、他方抗ＭＨＣクラス抗体によるＣＤ１４の共同沈降は背景レベルを超えない（レーン５）。実験３ＣＤ１４とＭＨＣクラスＩＩ分子間の物理的相互作用は、抗ＣＤ１４抗体により阻害することができる結果を図７に示す。レーン１および５は、抗ＣＤ１４抗体ＭＹ４が、ＭＨＣクラスＩＩ分子の存在（レーン１）または不存在（レーン５）（対照）と無関係に、インビトロ転写／翻訳で製造した放射能標識ＣＤ１４を沈降させることを示す。ＣＤ１４は、ＭＨＣクラスＩＩ分子が存在するなら（レーン２）抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体であるＬ２４３により強く沈降するが、ＭＨＣクラスＩＩ分子の不存在下では（レーン６）背景量しかしない。もしＣＤ１４を先ずあらかじめＭＨＣ − ＩＩ分子含有細胞溶解物と混合した抗ＣＤ１４抗体のカクテルで処理するなら、ＣＤ１４は抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体で沈降され得ない。レーン４は、緩衝液（対照）が、抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体によるＣＤ１４の共同沈降に作用をもたないことを示す。レーン７および８は、ＭＨＣクラスＩＩ分子の不存在下で実施したレーン３および４と同一実験の結果を示す。実施例４緒論インビボの細胞活性化におけるＭＨＣ−ＩＩの役割を明らかにするため、ＭＨＣクラスＩＩノックアウトマウスを使用した。もしＭＨＣ−ＩＩがＬＰＳによる活性化機構に関与しているなら、ＭＨＣ−ＩＩを欠くマウスはＬＰＳ刺激による通常の生理学的効果を示さないはずである。同一マウスの血液を使用して、同様な実験をインビトロで実施した。方法インビボ実験では、ＬＰＳ（エシエリキア・コリ０１１１：Ｂ４、滅菌０．９％ＮａＣｌで希釈）１００μｇを野生型Ｃ５７ＢＬ／６およびＢ６−Ａａ⁰／Ａａ⁰ＭＨＣクラスＩＩノックアウトマウス（ホフマン−ラーロッシュ）に静脈注射した。２時間後、マウスを無菌放血により殺した。血液を室温で放置して凝固させ、１３．０００ｒｐｍで５分間遠心分離した。次いで血清を除去した。食細胞活性化のマーカーであるＴＮＦ−αの含量を血清中酵素免疫吸着測定法（バイオソース）で測定した。図８は結果を示す。インビトロ実験では、野生型ＭＨＣ−ＩＩ陽性Ｃ５７ＢＬ／６マウス（図９の黒丸）およびＭＨＣクラスＩＩ遺伝子Ａａ¹の標的破壊によりＭＨＣクラスＩＩの発現が欠如したＢ６−Ａａ⁰／Ａａ⁰マウス（白丸）のヘパリン処理した全血を、ＬＰＳ０、０．１、１、１０および１００ｎｇ／ｍｌの存在下にインキュベートした。インキュベーション４時間後、ＴＮＦ−αのレベルを血漿中酵素免疫吸着測定法（バイオソース）で評価した。図９に結果を示す。ＴＮＦ−αの分泌は、ＭＨＣクラスＩＩ発現マウスまたは細胞で明らかに高い。実施例５緒論ＭＨＣ−ＩＩ結合およびＭＨＣ−ＩＩ模倣分子のインビボ効果を、次のようにして評価した。方法野生型Ｃ５７Ｂ１／６マウスを別個に秤量し、予備実験で決定したＬＤ５０を注射した。ＬＰＳ注射前に、マウスを以下のもので予備処理した：１群：１μｇないし１ｍｇ／体重ｋｇの用量範囲における可溶性ＭＨＣクラスＩＩ分子。２群：同じ用量範囲における抗ＭＨＣクラスＩＩ抗体。３群：食塩水のみ（対照群）。対照として、別に３種の群に可溶性ＭＨＣクラスＩＩ、抗ＭＨＣ−ＩＩまたは食塩水をそれぞれ与え、その後のＬＰＳ処置は行わなかった。生存率を７日間調べた。マウスをはじめの４８時間通常の方法で観察して症状を記録した。ＬＰＳ誘導致死が起こる前に１群のマウスを殺して放血させ、これらの血清ＴＮＦ−α濃度を酵素免疫吸着測定法により測定した。結果死亡率および血清ＴＮＦ−α濃度は、比較した可溶性ＭＨＣクラスＩＩ分子または抗ＭＨＣ−ＩＩ抗体で処理したマウス群で顕著に減少した(結果は図示せず) 。ＭＨＣクラスＩＩ分子または抗ＭＨＣ−ＩＩ抗体で処理したがＬＰＳでの処理をしなかった対照群は、食塩水で処理しＬＰＳで処理しなかったマウスと顕著な差を示さなかった。 DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION MHC-II binding for prevention and / or treatment of inflammatory diseases And / or use of MHC-II mimetic molecules The present invention is directed to a complex, alone or in combination with other molecules, such as CD14 and LBP. Between toxins such as lipopolysaccharide (LPS) and their transport molecules The use of specific molecules to interfere with In addition, the present invention The use of these molecules in the prevention and treatment of inflammatory diseases such as septic shock It is about use. Lipopolysaccharide (LPS) is a component of the cell wall of Gram-negative bacteria. Gram negative Bacterial infections can lead to life-threatening diseases, which can be caused by binding. Activated by tumor necrosis factor-α (TNF-α), interleukin 1 (IL-1 ), Various sites including IL-6, IL-8 and other inflammatory mediators Against phagocytic cells, such as monocytes, macrophages and granulocytes, that secrete cytokines This is caused by specific binding of LPS. These substances can be directly or 2 Activation by mediator initiates a cascade of phenomena, Stem abnormalities, vasodilation, multiple organ failure and eventual septic shock ( 4, 5). In general, the significant activation of phagocytes that leads to the secretion of multiple inflammatory mediators is At the center of the pathogenesis of a condition called systemic inflammatory response syndrome (SIRS) Is a typical phenomenon. In addition to activation by LPS, SIRS is associated with bacteria or viruses. Infection, trauma, burn, pancreatitis, graft-host and host-graft-related diseases, phagocytosis It also appears as a result of various other clinical symptoms, such as many others. sell. Medium caused by exotoxins such as staphylococcal toxin A from gram-positive bacteria Toxic shock is an example of an inflammatory disease. Others, also known as superantigens Toxins include staphylococcal toxin B and streptococcal toxins. LPS is glycosylphosphatidylinositol (GPI) -fixed monocyte antigen It was shown to bind to C14. CD14 is used for monocytes, macrophages and And present on the surface of granulocytes but without GPI anchor in the serum of healthy individuals It is also found in soluble form. In addition, activation of monocytes by LPS is It was shown that it can be inhibited by a noclonal antibody. Therefore, CD14 is L Acts as a receptor for PS (1) and mediates the action of LPS on the cytoplasm It has been suggested. However, CD14 negative cells can also respond to LPS (2, 7, 8). In addition, CD14 is a glycosyl phosphatid lacking the transmembrane and cytoplasmic regions. Diluinositol (GPI)-has been found to be a fixed molecule (9). sand That is, CD14 cannot transmit signals to the cytoplasm. GPI-binding protein It is widely accepted hypothesis that white matter requires the association of transmembrane molecules for signal transduction. It is a theory. That is, for LPS and possibly other SIRS stimulants The true transmitting molecule has not yet been identified. In the case of cell activation by LPS, to explain cell activation by LPS Molecules other than CD14 must be brought out (10). LPS is membrane bound or Is thought to form a complex with soluble CD14 and LPS binding protein (LBP). Was submitted. Other serum-derived molecules may also be involved in this complex You. The complex interacts with unidentified molecules on the cell surface to activate the cell Leads to CD14 is due to the bacterial envelope products of Gram-positive and Gram-negative organisms. Have been reported to play a crucial role in the initiation of cell activation (13). Again, other membrane-bound or serum-derived molecules can be activated by cell surface components that lead to cell activation. May be involved in interaction with offspring. According to the invention, as receptor and / or LPS and CD14 and LPS that acts as a signaling element of a molecular complex with a molecule such as LBP Cell activation requires major histocompatibility complex II (MHC-II) molecules Was found here. In humans, MHC is known as leukocyte antibody (HLA) Have been. LPS reactivity is responsible for the emission of MHC class II molecules on the surface of the cell membrane. It was shown to depend on the actual. In this document, "THP-1^{MHC +}" MHC class II expressing monocyte cell line, reported as THP-1 by Tsuchiya et al. (3). In this document, "HP-1.6^MHC-The second cell line, referred to as " Mutation causes THP-1^{MHC +}MHC class II negative monocyte cell line derived from It is. THP-1^{MHC +}Cells secrete cytokines in response to LPS, HP-1.6^MHC-Cells are not. CD14 negative, MHC-II negative human peripheral Blood mononuclear cells (PBMC) also do not respond to LPS. MHC class II expression and And LPS reactivity are nuclear factors required for MHC-II molecule expression on the cell surface. CIITA, which is a cDNA encoding THP-1.6, is expressed as THP-1.6.^MHC-Transfect cells Can be resurrected. Transmission of other SIRS drug stimuli to cells is also mediated by MHC-II molecules Could be done. Previously, exotoxins also bind to MHC-II molecules on the cell surface It has already been made clear. At least other gram-positive bacterial products Are also mediated in part by CD14, and therefore complexes of these products with CD14 It also appears to interact with MHC-II molecules to activate cells. Thus, the prevention and / or treatment of systemic inflammatory response syndrome is limited to LPS Complexes with other molecules such as CD14 and LBP (hereinafter "CD1 4 / LPS / LBP complex ") and cell-associated MHC-II It can be implemented by interfering with the action. According to the invention, this interference is of two types Can be implemented by different methods. First, the binding of the CD14 / LPS / LBP complex to cell-associated MHC-II In the case of anti-MHC-II antibody, CD14 or a peptide derived therefrom, Such MHC-II binding molecules. This type of molecule is CD14 / LP It competes with the S / LBP complex and thus prevents binding of the complex, but The body does not activate MHC-II. Therefore, the transmitter function of MHC-II is blocked. You. Secondly, circulating LPS or CD14 / LPS / LBP complex is Can be captured by a mimetic molecule. Soluble MHC-II or MHC-II-like molecule Complexes that are no longer able to bind to cell-bound MHC-II No. Therefore, activation of the cells is prevented. MHC-II binding molecules may be LPS or CD14 / LP against MHC-II Includes any molecule capable of blocking the binding of the S / LBP complex. Especially, This is a monochromator that directs the cell's CD14 / LPS or LPS binding site. And both polyclonal and polyclonal anti-MHC-II antibodies. Antibody fragment Are also suitable as MHC-II binding molecules. MHC-II mimetic molecules are soluble MHC-II molecules themselves and LPS or C Others capable of blocking the MHC-II binding site on the D14 / LPS complex It shall include any molecule. This type of molecule is a complete MHC-II molecule or May include fragments or subunits thereof. Furthermore, MHC-II Ability to bind to LPS or LPS / CD14 / LPB complex without activation Strong peptides can also be useful. Such peptides have at least MHC Suitable D-amino acids which are homologues of -II and which provide the peptide with antagonistic properties May be included. These molecules are either in soluble form or Can be coupled to a surface. Based on the information provided herein, one of ordinary skill in the art will be able to determine suitable binding and / or mimetic components. You can see the child. This type of molecule may be derived from humans or other suitable resources. Like the separation of MHC-II positive cells from cell culture supernatants or cell lysates. It can be manufactured by various means. A particularly preferred separation method is immunoassay. Affinity chromatography. Also, suitable molecules are genetic technology, It can be produced by protein chemical methods or any other suitable method. You. According to the present invention, these two types of molecules are used to treat inflammation, such as septic shock. Sexually transmitted disease, graft-host related disease after organ transplantation such as bone marrow transplantation, graft rejection, fever Used to prevent and / or treat inflammatory reactions caused by wounds, accidents, pancreatic infections, etc. Can be used. The invention also relates to other inflammations that occur, for example, postoperatively, such as capillary leak syndrome. Reaction, allergic disease, erythematous lupus (LE) and its derivatives, edematous Scleroderma and its derivatives, eosinophilic fasciitis, Sjogren's syndrome, polymyositis, skin Dermatomyositis, periarteritis nodosa, Wegener's granuloma, temporal arteritis, polymyalgia Autoimmune diseases such as inflammation, rheumatoid arthritis, juvenile chronic arthritis, Fell Tee syndrome, Kaplan syndrome, ankylosing spondylitis (Marie-Strumpel-Beck) Rheumatism such as tereb disease), psoriasis, Reiter's syndrome, Behcet's syndrome Suitable for prevention and / or treatment of disease. It can be treated by this invention and is at least partially produced by an autoimmune mechanism. Other diseases include, among others, diabetes mellitus, Crohn's disease, ulcerative colitis, Renal infections such as gastrointestinal ulcers, glomerulonephritis and nephritis, arteriosclerotic diseases, multiple sclerosis Thyroid gland, Alzheimer's disease, hyperthyroidism, hypothyroidism. The invention also relates to leukemias, blood cell carcinomas, carcinomas, fibromas, sarcomas and various types of Inflammation in one or more human organs with oncological diseases such as histiocytosis Can be used for reactions. The invention may also be used to prevent and / or treat viral diseases such as AIDS. Can be used. LPS stimulation stimulates intracellular human immunodeficiency virus (HIV) It is known to increase replication. Therefore, the MHC-II coupling of the present invention Blockade of LPS stimulation by binding and / or mimetic molecules Is excluded. Therefore, the MHC-II binding and / or mimetic molecules of the invention Prevents stimulation of viral replication by cell activation stimulants and And can be used to provide a protective effect. Based on the data shown in the examples, the following cell activation model by LPS is considered. Can be On the one hand, LPS can bind to membrane-bound CD14 (mCD14) and Usage is accelerated by the lipopolysaccharide binding protein LBP (14). Then LPS and G Complexes of PI-immobilized mCD14 and possibly LBP are transmembrane MHC class II components Interacts with the offspring, resulting in signal transduction. This situation is shown in FIG. 3A. On the other hand LPS binds to soluble CD14 (sCD14) present in serum along with LBP. Combination The complex can then bind to the MHC class on the surface of CD14 negative cells. Activity of CD14 negative but MHC class II positive cells by binding to II molecules Bring about. This situation is shown in FIG. 3B. Shows contact between CD14 and MHC-II However, LBP and LPS, like other yet unidentified molecules, are involved in this interaction be able to. The role of LBP in this case has not yet been determined, The activating stimulant can also be a component of Gram-positive bacteria. Certain activations are associated with CD14 Alternatively, it can act directly on the MHC-II molecule without forming a complex with LBP. Performance is not excluded by this. Here, the stimulation is mediated by MHC-II molecules. It was confirmed that it was through. Therefore, by blocking or mimicking these molecules The transmission of the activating stimulant should be prevented. Further, the present invention relates to MHC-II binding molecules, MHC-II mimetic molecules and Pharmaceutical compositions comprising one or both types of molecules. Like phagocytes Activation stimulants such as LPS for MHC-II molecule expressing cells and cell-bound MH One or more active ingredients for interference with interaction with C-II molecules A pharmaceutical composition comprising an MHC-II binding molecule and / or an MHC-II mimetic molecule Include powders, tablets, liquids, propellants, emulsions, injections, inhalant compositions, ointments Or topical, nasal, rectal, vaginal and oral, parenteral (static) (Intravenous, intradermal, intramuscular, subarachnoid, etc.) or transdermal, inhalation Can be used. The pharmaceutical compositions of this invention comprise an active compound (s) and Or non-aqueous solvents, stabilizers, emulsifiers, surfactants, additives) Contains pharmaceutically acceptable excipients and, if necessary, colorants and flavors (Ie, mixing, dissolving, etc.). The concentration of the active ingredient in the pharmaceutical composition may vary depending on the type of treatment and the method of administration. It can vary between 1% and 100%. The dose of the active ingredient to be administered is also specific Depending on the application and route of administration, for example, from 0.01 μg / kg 1 mg, preferably between 0.1 μg and 100 μg per kg body weight sell. The present invention will be described with reference to the following examples, which are not intended to limit the scope of the present invention. It does not limit.Example Example 1 Introduction MHC-II is LPS, CD14, LBP and possibly other molecules are LPS Is a mediator and / or receptor in the activation of phagocytes by The hypothesis is that MHC class II positive (HLA-DR) upon stimulation with LPS and By comparing cytokine secretion by MHC and MHC class II negative cell lines. Tested. Cytokine secretion is an indicator of cell activation. Materials and methods THP-1^{MHC +}Is a human-derived CD-4 negative, MHC class II positive monocyte cell System (3). THP-1.6^MHC-Was cloned by repeated limiting dilution , THP-1^{MHC +}Is a naturally occurring MHC class II negative mutation. HLA-DR expression was THP-1.6.^MHC-Cells are transferred to CIITA (Class II Transactivator; a nuclear protein required for expression of MHC class II protein (1 It was reconstituted by transfection in 2)). THP-1^{MHC +}Cells (wild type), THP-1.6^MHC-Cells (mutant cell lines) And THP-1.6^MHC-CIITA (transfected with CIITA THP-1.6^MHC-Expression of HLA-DR and CD18 on -Evaluated by cytometry. Various cell lines were supplemented with 10% fetal bovine serum and dosed at 0, 1, 10, 100 ng. In medium stimulated with LPS / ml and 1 μg / ml LPS⁶Cells / m and cultured. Twenty-four hours later, supernatants were collected and analyzed for TNF-α and IL-8 content. And evaluated by enzyme immunosorbent assay. Results and discussion Cell viability was not reduced by LPS treatment. Trypan blue staining indicated There, over 95% of the cells survived. CD18 expression is similar in the three cell lines, but THP-1.6.^MHC-Cells THP-1^{MHC +}It expressed only significantly lower concentrations of HLA-DR than cells. THP-1^{MHC +}When cells are stimulated with LPS, the cells become TNF-α and IL-8 A secretory response was performed (FIG. 1). Conversely, the HLA-DR negative cell line THP- 1.6^MHC-Showed that TNF-α was stimulated by LPS even when a high dose of LPS was used. And did not induce IL-8 secretion. However, transfer at CIITA The HLA-DR expression and LPS reactivity were both restored by the action. HLA-D It was concluded that expression of the R molecule was required for activation of monocyte cells by LPS. Example 2 Introduction In order to confirm the findings of Example 1, the results obtained with the cell-based system MHC class, a rare hereditary disease that manifests itself as severe combined immunodeficiency syndrome This was demonstrated using cells obtained from a II deficiency patient. In these patients, CD14 There was no effect on expression. MHC class II deficiency patients and control human PBM C was cultured in the presence of increasing doses of LPS and the supernatants of these cultures Were measured for TNF-α and IL-8 concentrations. Materials and methods Peripheral blood monocytic cells (PBMCs) are used in patients with MHC-II deficiency and healthy controls. Collected from Patient (left column in Fig. 2, hatched distribution) and healthy control (gray distribution) HLA-DR expression on the surface of both PBMCs by direct immunofluorescence staining and It was evaluated by itometry. PBMC of patient (bold line) and control (thin line) were compared with 10% normal human AB positive serum In medium stimulated with 0, 1, 10 and 100 ng / ml LPS Ten⁶Cultured at cells / ml. After 24 hours, the supernatant was collected and the TNF-α content was determined. Was evaluated by an enzyme-linked immunosorbent assay. Results and discussion PBMCs from healthy humans, as expected, respond to LPS stimulation by TNF-α and And IL-1 were secreted. However, patients' MHC class II deficient PBMCs are not Tasteful levels of cytokines were not secreted in response to LPS (FIG. 2). You That is, the requirement for MHC class II molecule expression is THP-1^{MHC +}Group cell line Is not limited to this. The data show that membrane-bound CD14 is not required for cell activation by LPS (TH P-1^{MHC +}Cells do not express CD14) and not enough (MHC class I I deficiency patients express normal levels of CD14). However, the experiments outlined above do not address the role of soluble CD14 . In all these experiments, media supplemented with serum containing soluble CD14 was used. Used. Therefore, THP-1^{MHC +}, THP-1.6^MHC-And THP-1.6^MH ^- The experiment was repeated by culturing CIITA cells in a serum-free medium. LPS TNF-α secretion at meaningful levels even with increasing doses of Did not occur. This result indicates that MHC class II molecules are critically involved in LPS responsiveness. And HLA-DR negative cells secrete cytokines upon stimulation with LPS I didn't come. Lack of LPS response leads to reduced MHC class I Not associated with the lack of I expression per se but by CIITA They may argue that it is related to the factors that are regulated. But TN Since the secretion of F-α and IL-1 and IL-8 also decreased, LPS Defects in response to a response are not limited to the secretion of only one cytokine. No. Furthermore, in addition to MHC class II, molecules regulated by CIITA are widely available. Despite extensive research, it has not been discovered to date. Finally, the patient's disease is CI Not due to ITA related defects. Epstein Bar from this patient -Transfection of virus (EBV) transformed B cells Las II molecule expression was not restored. Example 3 Introduction Physical Interaction of MHC Class II Molecules with CD14 by Three Different Methods Revealed. First, cell lysates of MHC-II positive and MHC-II negative cell lines were HC-II specific or control antibodies and radioactive CD14 (CD14 *) or release Incubated with the radioactive control molecule. The complex of MHC-II and CD14 * Only by the interaction of rotatein A. agarose and MHC-II specific antibodies Can settle. If a control molecule or control antibody is used, the precipitate should not be radioactive. Should not be possible. In the absence of MHC-II, radioactivity is found in the sediment Will not. Second, MHC-II was incubated with radioactive CD14. Probably M An HC-II / CD14 * complex is formed. Theoretically, these complexes are Antibodies specific to either the two partners in the coalescence or to protein A agarose More sedimentation is possible. Third, anti-CD14 antibodies can block the interaction between MHC-II and CD14 * Was tested. The principle of these experiments is further illustrated in FIG. Method1. Production of radioactive CD14 ³⁵Produced (Promega, Switzerland) protocol in the presence of S-methionine Therefore, it is produced by PCR using the TNTT7-binding reticulocyte lysate system, By in vitro transcription / translation of full-length CD14 cDNA whose nucleotide sequence was confirmed Thus, recombinant CD14 was produced. As a control, the same system was used Radiolabeled luciferase was produced by in vitro transcription / translation.2. Cell lysate production So-called 293 cells contain human adenovirus type 5 DNA (ATCC number CRL). 1573). Wild-type 293 cells are When analyzed by a sex cell sorter, it does not express MHC class II molecules. this These were defined as MHC-II negative cells. Α, β and non-mutation of human MHC class II (I) 293 cells transfected with the cDNA of the strand , Dr. Jack Nephies of Netherlands Cancer Institute Obtained from They express MHC class II, and therefore MHC-II positive sex Use as cells. MHC class II positive and MHC class II negative cell lines Was prepared as follows. 5 × 10⁶Individual cells were placed in a Petri dish with 1 ml of lysis buffer (Boehringer (Nheim's kit for cell labeling and immunoprecipitation). After 30 minutes, dissolve Harvested cells are harvested, sonicated (3 × 15 seconds), and then incubated on ice for 30 minutes. And centrifuged. The supernatant was subjected to immunoprecipitation as described below.3. Immunoprecipitation in Experiment 1 Boehringer Mannheim, Switzerland "Cell labeling and immunoprecipitation kits" , Immunoprecipitation was performed according to the protocol. Briefly Samples were pre-clarified using 50 μl of protein A agarose suspension . After removing the protein A-agarose by centrifugation, the supernatant was combined with the following antibody. Incubated: L243 (anti-HLA-DRNA TCC No. HB55); 1 B5 (Anti-MHC Class II, Amsterdam, Netherlands Cancer Inns Anti-CD3 (obtained from Dr. Jack Nephies of Tit); Mingen, San Diego / AMS Biotechnology, USA, Switzerland ). One hour later, 50 μl of protein A agarose was added, and the sample was incubated for 3 hours. And then washed six times. The pellet was then buffered (50 mM Tris, pH 7.5, 20 mM NaCl, (1 mM EDTA, 2 mM PMSF) 30 μl, radioactively labeled CD1 5 μl of the solution obtained from the in vitro transcription / translation reaction containing 4 are added and the mixture is allowed to stand at room temperature. Incubated for 30 minutes. After centrifugation, the pellet is washed twice with washing buffer # 2. And then washed twice with washing buffer # 3 (buffers # 2 and # 3 were -From cell labeling and immunoprecipitation kits from Mannheim, Switzerland). Next Dissolve pellet in standard SDS polyacrylamide gel electrophoresis loading buffer And boil and gel electrophoresed on a 10% SDS polyacrylamide gel. Autoradiography.4. Purification of MHC class II molecules The method described by Gorga et al. (15) was slightly modified to convert MHC class from THP-1 cells. The II molecule was extracted and purified. L243 (anti-HLA-DR, ATCC No. HB55 ) Is cross-linked with dimethyl pimmelidate to give protein A. agarose Fixed on a 4B column. THP-I cells were incubated on ice with 0.1 mM PMSF Dissolved in Tris HCl, pH 8.0. The following operations were all performed at 4 ° C. Dissolution The material was centrifuged at 3000 × g and the pellet was washed until the supernatant was clear. Up The supernatant was collected and centrifuged at 160,000 × g for 40 minutes to give a final concentration of 4% in the pellet. Nonidet P40 was added and redissolved. After centrifugation at 160,000 xg for 2 hours, the supernatant Was subjected to a series of column treatments in the following order: Sepharose 4B (10 ml), positive Regular rabbit serum Affigel (10 ml), Protein A / Sepharose 4B (2 ml) ), L243 Sepharose 4B (12 ml). Column is 10 mM Tris.H Cl / 0.1% Nonidet P40, pH 8.0 (5 vol); 10 mM MOPS / 140 mM NaCl / 0.1% deoxycholic acid, pH 8.0 (2 volumes); 10 Wash with 4 mM tris-HCl / 0.1% deoxycholic acid, pH 8.0 did. The L243 column was then removed from the other columns and 50 mM glycine / 0.1 Eluted quickly with% deoxycholic acid, pH 11.5. 10ml of fraction The solution was collected and eluted with 2M glycine, pH 2.0, pH 7.0-8. Adjusted to zero. The eluted HLA-DR molecules were subjected to ultrafiltration on a 30-kDa separation membrane. Concentrated by passing through. Tris-HCl / 0.1% deoxycholic acid, pH After washing three times with 8.0, the protein was rediluted in the same buffer.5. Immunoprecipitation in Experiment 2 50 μl of solution containing radiolabeled CD14 obtained by in vitro transcription / translation reaction Is mixed with 1 μl of a solution containing about 10 ng of MHC class II molecules and Incubated for minutes. The antibody is then added and the sample incubated at 4 ° C for 1 hour. I did it. After addition of 50 μl of protein A agarose, the samples were further incubated at 4 ° C. Incubated for hours. Centrifuge and pellet twice with washing buffer # 2, then And washed twice with wash buffer # 3 (Boehringer Mannheim, Switzerland, Kit for cell labeling and immunoprecipitation). The pellet is then standard SDS Dissolve in a buffer for Lilamide gel electrophoresis, boil, and add 10% SDS Gel electrophoresis was performed on a acrylamide gel, followed by autoradiography.6. Immunoprecipitation in Experiment 3 Radiolabeled CD14 immunoprecipitated samples as described for other immunoprecipitation experiments Add the CD14 containing solution to the cocktail of anti-CD14 antibodies for 10 minutes at room temperature before adding to Incubated. The cocktail was prepared using the following anti-CD14 antibody: RMO52 (Imnote LeuM3 (Beckton and Dickinson, Switzerland) Country); MY4 (Courter, Switzerland); Tuk4 (Dako, Switzerland); 10 μg and the following anti-CD14 hybridomas: 3C10, 63D3 (both (Obtained from the ATCC). Antibody as control The same volume of PBS as the volume of the cocktail was added to 5 μl of the radiolabeled CD14-containing solution. added. The antibodies used for immunoprecipitation were MY4 (anti-CD14) and L243 (anti-MHC- II). resultExperiment 1 MHC cell using MHC class II positive and MHC class II negative cell lysate Demonstration of co-precipitation of Las II molecule and CD14 The result of this experiment is shown in FIG. The left side of the figure shows MHC class II transfection. (Ie, cotransfection with MHC class II α, β and i-chains). FIG. 9 illustrates the results of experiments performed using lysates of 293 cells). Therefore, on the right side, the results using the lysate of MHC class II negative 293 wild-type cells are shown. Can be seen. In lanes 1 and 2, radioactive CD14 (lane 1) and lucifer Faint bands corresponding to each of the lase (lane 2) were detected by the control antibody anti-CD3. It only sediments non-specifically. Radioactively labeled CD14 (CD14 *) Are clearly seen in lanes 3 and 5. MHC class I Two different antibodies recognizing the I molecule (lane 3: L243; lane 5: 1B5) Has (co-) sedimented CD14 *. Significant amount of radiolabeled control protein Since white matter (luciferase) is not co-precipitated with these antibodies (lanes 4 and 5) And 6), the co-precipitation effect of these anti-MHC class II antibodies is specific for CD14 It is. In the absence of MHC class II molecules (MHC class II negative 293 cell lysis In the lanes 7-9), CD14 was precipitated by anti-MHC class II antibody. Co-precipitation of CD14 by anti-MHC class II antibodies II depends on the presence of the molecule.Experiment 2 MHC class using MHC class II molecule purified by immunoaffinity column Demonstration of co-precipitation of Las II molecule and CD14 FIG. 6 shows the results. The left side of the figure was performed in the presence of purified MHC class II molecules The figure shows the results of immunoprecipitation experiments. On the right side, the absence of purified MHC class II molecules is shown. The results of experiments using buffer in the presence, ie as a negative control, are seen. In lanes 1 and 4, CD non-specifically precipitated by the control antibody (anti-CD3) A faint band corresponding to 14 is seen. Lane 3 contains a CD corresponding to CD14. Appears in the precipitate due to the anti-CD14 antibody. In this experiment, the sedimentation was In the case of class II molecules, the band corresponding to CD14 was observed in lane 2. The strength is greater than that of horn 3. In the absence of purified MHC class II molecules, CD14 Precipitates strongly with anti-CD14 antibody (lane 6), while it precipitates with anti-MHC class antibody. CD14 co-precipitation does not exceed background levels (lane 5).Experiment 3 The physical interaction between CD14 and MHC class II molecules is Can be inhibited FIG. 7 shows the results. Lanes 1 and 5 show that anti-CD14 antibody MY4 Independent of the presence (lane 1) or absence (lane 5) of Las II molecule (control) Shows the precipitation of radiolabeled CD14 produced by in vitro transcription / translation. . CD14 is an anti-MHC class if MHC class II molecules are present (lane 2). Precipitates strongly due to L243, which is a At present (lane 6) there is only background amount. If CD14 first − If treated with a cocktail of anti-CD14 antibodies mixed with a cell lysate containing II molecules, CD14 cannot be precipitated with anti-MHC class II antibodies. Lane 4 shows buffer (vs. Has no effect on the co-precipitation of CD14 by anti-MHC class II antibodies. And Lanes 7 and 8 show lanes performed in the absence of MHC class II molecules. 7 shows the results of the same experiment as in FIGS. Example 4 Introduction To elucidate the role of MHC-II in cell activation in vivo, MH C class II knockout mice were used. If MHC-II is due to LPS Mice lacking MHC-II are LPS-stimulated if implicated in the activation mechanism It should not show normal physiological effects. Same using the same mouse blood Experiments were performed in vitro. Method For in vivo experiments, LPS (Escherichia coli 0111: B4, sterile 0.9 100 μg of wild-type C57BL / 6 and B6-Aa⁰/ A a⁰Intravenous injection into MHC class II knockout mice (Hoffman-La Roche) Fired. Two hours later, the mice were killed by aseptic exsanguination. Leave blood at room temperature to coagulate And centrifuged at 13.000 rpm for 5 minutes. The serum was then removed. Food Serum enzyme immunosorbent assay (TNF-α), a marker for cell activation Osource). FIG. 8 shows the results. In in vitro experiments, wild-type MHC-II positive C57BL / 6 mice (FIG. 9) Black circle) and MHC class II gene Aa¹MHC class II due to target destruction B6-Aa lacking expression of⁰/ Aa⁰Heparin-treated whole blood from mice (open circles) , LPS 0, 0.1, 1, 10 and 100 ng / ml. I did it. After 4 hours of incubation, the levels of TNF-α were determined by plasma enzyme immunoabsorption. The evaluation was made by the color measurement method (biosource). FIG. 9 shows the results. TNF-α secretion is clearly higher in MHC class II expressing mice or cells . Example 5 Introduction The in vivo effects of MHC-II binding and MHC-II mimetic molecules were as follows: Was evaluated. Method Wild-type C57B1 / 6 mice were weighed separately and the LD50 determined in preliminary experiments was determined. Injected. Prior to LPS injection, mice were pre-treated with: Group: Soluble MHC class in a dose range of 1 μg to 1 mg / kg of body weight II molecule. Group 2: anti-MHC class II antibodies in the same dose range. Group 3: saline only (control group). As controls, three separate groups were given soluble MHC class II, anti-MHC-II or Each received saline and no subsequent LPS treatment was given. The survival rate was checked for 7 days. Observe the mice for the first 48 hours in the usual way Was recorded. A group of mice was killed and exsanguinated before LPS-induced lethality occurred. The serum TNF-α concentration was measured by an enzyme-linked immunosorbent assay. result Mortality and serum TNF-α levels were measured for soluble MHC class II Or significantly reduced in the group of mice treated with anti-MHC-II antibody (results not shown) . Treatment with MHC class II molecule or anti-MHC-II antibody but with LPS The control group which was not treated with saline was treated with saline and not treated with LPS, No difference was shown.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 38/00 ＡＢＸＡ６１Ｋ 37/02 ＡＢＦＡＣＪＡＢＧＡＤＡＡＡＢＡＤＰＡＢＸＡＤＵＡＣＪＡＤＹＡＤＡ 39/395 ＡＢＥＡＤＰＣ０７Ｋ 14/705 ＡＤＵ 16/28 ＡＤＹＣ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ロエネル，ロジェ・パスカルスイス、ツェーハー−8128ヒンテレック、マイエンライン──────────────────────────────────────────────────続き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code FI A61K 38/00 ABX A61K 37/02 ABF ACJ ABG ADA AAB ADP ABX ADU ACJ ADY ADA 39/395 ABE ADP C07K 14/705 ADU 16 / 28 ADY C12N 5/10 C12N 5/00 B (81) Designated countries EP (AT, BE, CH, DE, DK, ES, FR, GB, GR, IE, IT, LU, MC, NL, PT, SE ), OA (BF, BJ, CF, CG, CI, CM, GA, GN, ML, MR, NE, SN, TD, TG), AP (KE, LS, MW, SD, SZ, UG), AL , AM, AT, AU, AZ, BB, BG, BR, BY, CA, CH, CN, CZ, DE, DK, E, ES, FI, GB, GE, HU, IS, JP, KE, KG, KP, KR, KZ, LK, LR, LT, LU, LV, MD, MG, MK, MN, MW, MX, NO , NZ, PL, PT, RO, RU, SD, SE, SG, SI, SK, TJ, TM, TT, UA, UG, US, UZ, VN (72) Inventors Loener, Roger Pascal Switzerland, Zeha −8128 Hintelek, Maienline

Claims

[Claims] 1. Phase between MHC-II-bearing cell activation stimulant and cell-bound MHC-II molecule MHC-II binding and / or MHC-II models for use in interacting interference Mimetic molecule. 2. To interfere with the interaction between phagocyte activation stimulants and cell-bound MHC-II molecules MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules for use. 3. With lipopolysaccharide (LPS) or other molecules such as CD14 or LPB Used to interfere with the interaction between LPS in cell complexes and cell-associated MHC-II molecules. MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules for use. 4. Gram-positive bacterial products or products of Gram-positive bacteria and components such as CD14 Used to interfere with the interaction between the complex with the offspring and the cell-bound MHC-II molecule MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules for the same. 5. The MHC-II binding molecule is an anti-MHC-II antibody or a fragment thereof. Or from this antibody, such as humanized, bispecific or other engineered molecules The MHC-II binding according to any one of claims 1 to 4, which is any molecule derived therefrom. And / or MHC-II mimetic molecules. 6. The MHC-II binding molecule may be CD14, a fragment thereof, a modified form thereof or Is selected from the group consisting of peptides having MHC-II binding properties. The MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecule according to any one of the above. 7. The MHC-II binding molecule is soluble intact MHC-II, one or more MHC- II soluble subunit, soluble whole MHC-II or its subunit Fragment, a modification of complete MHC-II or a subunit thereof, or M LPS or LPS / CD14 / LB of HC-II or its subunit 5. The method according to claim 1, which is selected from the group consisting of peptides having P-binding properties. The described MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecule. 8. The MHC-II mimetic molecule is bound to a carrier. Is an MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecule according to 7. 9. Inflammatory disease; Septic shock; Graft host after organ transplant such as bone marrow transplant Correlation disease; graft rejection; burns such as adult respiratory distress syndrome, accidents, pancreas Inflammatory reaction in one or more human organs caused by infection of humans; capillary leak An inflammatory response that occurs in one or more human organs postoperatively, such as in a climatic group; one or more humans Allergic disease in human organs; erythematous lupus (LE) and its derivatives, floating Tumor scleroderma and its derivatives, eosinophilic fasciitis, Sjogren's syndrome, polymyalgia Inflammation, dermatomyositis, nodular periarteritis, Wegener's granuloma, temporal arteritis, rheumatic Anti-inflammatory in one or more human organs with autoimmune diseases such as polymyositis Response: Rheumatoid arthritis, juvenile chronic arthritis, Felty syndrome, Kaplan's disease Syndrome, ankylosing spondylitis (Marie-Strumpel-Bectelev disease), psoriasis, rye One or more humans with rheumatoid disease such as Tarr syndrome, Behcet syndrome Inflammatory response in human organs; diabetes mellitus, Crohn's disease, ulcerative colitis, gastrointestinal ulcer , Renal infections such as glomerulonephritis and nephritis, arteriosclerotic diseases, multiple sclerosis, At least partially, such as Ruzheimer's disease, hyperthyroidism, hypothyroidism An inflammatory response in one or more human organs with a disease caused by the autoimmune mechanism; Like leukemia, blood cell carcinoma, carcinoma, fibroma, sarcoma and various types of histiocytosis Inflammatory response in one or more human organs with various oncological diseases; For use in the prevention and / or treatment of such viral diseases. The MHC-II binding and / or MHC-I according to any one of claims 1 to 8. I mimetic molecule. 10. MHC-II binding molecule. 11. MHC-II mimetic molecule. 12. MHC-II binding or mimetic molecule as active ingredient with suitable excipient A pharmaceutical composition comprising: 13. MHC-II-bearing cell activation stimulant and cell-bound MHC-II molecule MHC-II binding and / or M in the manufacture of a pharmaceutical composition for interference of interaction Use of HC-II mimetic molecules. 14． Interference of interactions between phagocyte activation stimulants and cell-bound MHC-II molecules -II binding and / or MHC-II mimicry in the manufacture of pharmaceutical compositions for medical use Use of molecules. 15. Lipopolysaccharide (LPS) or other molecules such as CD14 or LPB For interfering with the interaction between LPS and cell-bound MHC-II molecules in complexes with Use of MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules in the manufacture of a product for. 16. Gram-positive product or Gram-positive product and CD14 Pharmaceutical compositions for interference of the interaction between a complex with a molecule and a cell-bound MHC-II molecule Use of MHC-II binding and / or MHC-II mimetic molecules in production.