JPH10512253A - 表皮細胞用の培養培地として使用される栄養培地と適用 - Google Patents

表皮細胞用の培養培地として使用される栄養培地と適用

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JPH10512253A JP8521480A JP52148096A JPH10512253A JP H10512253 A JPH10512253 A JP H10512253A JP 8521480 A JP8521480 A JP 8521480A JP 52148096 A JP52148096 A JP 52148096A JP H10512253 A JPH10512253 A JP H10512253A
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Abstract

(57)【要約】 局所的組成物を調製するための、動物もしくは細胞由来の生物学的抽出物ではないが、皮膚における生物学的適合性、バイオミメテックおよび生物学的利用可能性を備えた化合物を含む複合栄養培地。前記複合栄養培地は、第一段階で少なくとも一回のクローン増殖をし、生きた栄養層を使用せず、ヒト表皮ケラチン細胞接種物の生存可能なin vitro培養を可能にするのに適した組成を備えている。この組成物は、特に化粧調製物もしくはガレンベース(a galenic base)における活性体として、また、特異的活性体の活性を増強し得るキャリアとして用いられる。

Description

【発明の詳細な説明】 表皮細胞用の培養培地として使用される栄養培地と適用 本願発明は、複合栄養培地、その適用、並びに、局所的に使用される組成物の 製造のための使用、特に局所的な化粧学的もしくは薬学的使用に関する。 本願発明に係る組成物は、特に − ビタミン類および微量元素類、並びに必須アミノ酸の両方について、最適化 された栄養供給、 − 形態学的細胞相互作用を置換することに向けられた細胞成長因子、 − 生理学的条件に近いｐＨおよびモル浸透圧 を付与することにより、皮膚に完全に適応した細胞外環境を得ることを可能にす るものである。 一般的に言って、本願発明に従って、栄養試薬は、ウシ胎児血清等の動物由来 の抽出物、もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽出物を除外して、皮膚に関し て生物学的適合性、バイオミメテックおよび生物学的利用可能性を備えた化合物 を含む複合栄養培地からなる。 本願発明に従って採用された複合栄養培地は、それ自身上および水性媒体中に おいて、ヒト表皮ケラチン細胞の接種物のin vitro培養において生存するのに適 した組成を備えており、最初の継代においてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少 なくとも一つのクローン増殖を含むが、繊維芽細胞等の生きた滋養基質(a livin g nourishing substrate)を含まない。 “生物学的適合性”とは、化合物が皮膚に対して無害である特性を意味すると 解する。 “バイオミメテック”とは、化合物が皮膚に自然の状態で存在することを意味 する。 “生物学的利用可能性”とは、in vitroおよびin vivoの両方において、ヒト 表皮ケラチン細胞によって化合物が吸収される特性を意味すると解する。 当業者は、機械的な試験によって、例えば前記培地を用いてケラチン細胞のin vitro培養を行うことによって、本願発明の複合栄養培地を作製する立場にあり 、その成長は、例えば顕微鏡下で観察することができる。 これに関して、ケラチン細胞のin vitro培養に適した培地が以下の文献に既に 記載されており、生存能力と成長は、現在使用されている試験で調べることがで き、顕微鏡下で直接観察することができる。 − Boyce ST，Ham RG，決められたクローン培養および無血清連続培養における 正常ヒト表皮ケラチン細胞のカルシウム制御された分化、J．Invest．Dermatol ．1983; 81; 33S-40S。 − Boyce ST，Ham RG，無血清培地における正常ヒト表皮ケラチン細胞の培養、 冷凍貯蔵およびクローン生育、J．Tissue Culture Methods．1985; 9; 83-93。 必要であれば、これらの文献の内容を本願明細書中に取り込む。 本願発明に係る複合栄養培地は、アミノ酸類、一つ以上のビタミン類、一つ以 上の細胞成長因子類および一つ以上の無機塩類を含む。 局所的使用のための本願発明の組成物は、人体の表面部と生物学的適合性を有 する相を含み、その相では、少なくとも上記栄養培地が均一に分布している。 本願発明に係る組成物において、栄養試薬が分布された生物学的適合性を備え た相が、前記組成物の付形剤(excipient)、もしくはその一つの成分を構成する ことができる。 本願発明に係る栄養培地に存在する全ての化合物が水溶性であるので、局所的 使用のための組成物を得るために、以下の二つの製剤方法を用いることができる 。 １）本願発明に係る栄養培地を含んだ水性連続相： − ポリサッカリドもしくはセルロースエーテル型の非イオン性水溶性ポリマ ー（高イオン強度の培地と適合するポリマー）で補助された水性ゲルの形態； − 乳化されたシステムの形態（高イオン強度に耐える界面活性剤を用いた油 中水型エマルション）； − 化粧用漿液の形態。 ２）油性連続相、本願発明に係る栄養培地を含む不連続相： − 不連続相のイオン強度が、エマルションの不安定性を必然的に伴うという 理解に基づいて、乳化された形態：しかしながら、より安定性の優れたラメラ(l amellar)もしくは円筒形相(cylindrical phases)、あるいは使用の直前に単に振 るだけで再乳化される二相システムを調製することもできる。 − カプセル化： *脂質相に分散されたポリサッカリド型の堅いカプセル、 *不連続相に分散された、ゼラチン型の柔らかいカプセル。 カプセル化輸送試薬としてのリポソームの使用は、水性連続相のリポソームゲ ルの形態をとることが考えられる。 本願発明に係る組成物は、化粧ベースとして提供することができる。栄養供給 は、表皮細胞の存続、完全性およびバランスの維持の改善に対して顕著に有利で ある。特に、皮膚の主要な本質的性質が永続的ベース(a long-lasting basis)に 維持されること、ダメージに対する耐性が増大すること、並びに、適切であれば 、バランス状態への復帰を促進することを可能にする。 本願発明の他の主題は、土記のベースを含む化粧調製物であり、複合栄養培地 が、ある活性体(an active principle)、もしくは増強可能な他の活性体の存在 下における付形剤を構成する。 本願発明の複合栄養培地は、医薬の調製もしくは生成にも使用される。 弱められた皮膚（刺激を受けた皮膚、あるいは脱水した皮膚、老化した皮膚等 ）に上記培地を使用することにより、皮膚を表皮の表面相の栄養価および水分に 関して十分な状態に復帰させることができる。 本願発明に係る複合栄養培地を含む医薬組成物は、製薬調製ベースとして、ま た特に栄養製薬調製ベースとして提供される。 さらに、実施例に記載する薬学特性を備えている。本願発明の医薬組成物の有 利な適用に従って、移植片を除去した後の、移植片の保存処置が考えられる。II I度の熱傷における、移植片の洗浄および維持に特に適した無菌溶液の形態をと ることが好ましい。 さらに、上述の組成物は、床ずれ、静脈瘤性潰瘍、ストレッチマーク(stretch marks)およびケロイド等の瘢痕化の疾患、および／または瘢痕化の遅延の予防 または治療の効果特性を備えている。 さらに一般的に言えば、本願発明に係る組成物は、他の活性体を任意に備えた 活性体として、しかしまた、特定の活性体の作用を増強する能力の結果の付形剤 として、薬学的製剤において使用されるあらゆる調製物に取り込まれる。 本願発明の特徴、適用および利点は、以下の実施例１〜４および図１〜４に詳 細に記載されている。 実施例１は、本願発明の組成物の製剤の例を与える。 実施例２は、以下の添付図面によって支持されるように、既知の培地と比較し た際の本願発明の組成物の特性を示す。 図１は、特にIRVINE SCIENTIFICおよびGIBCO-BRLにより市販されるＭＣＤＢ１ ５３と称される標準的な商業的培地において３６時間培養した後のヒト表皮の断 面図である。 図２は、緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）、すなわち細胞培養において通常用いられ る平衡化された生理食塩水で３６時間培養した後のヒト表皮の断面図である。 図３は、以下の異なる培養時間 Ａ：１２時間後 Ｂ：２４時間後 Ｃ：３６時間後 における、実施例１に記載された本願発明の栄養培地において培養されたヒト表 皮の断面図である。 実施例３は、本願発明の培地および標準培地で培養した形質転換細胞の増殖を 示す図４に支持されており、標準的組成物と比較した本願発明の組成物による形 質転換細胞の増殖刺激の欠如を示す。 実施例４は、ａ）移植片の処置、ｂ）瘢痕化における本願発明の組成物の薬理 学的な特性を例証する。実施例１： 本願発明の組成物の製剤 実施例２： 実施例１に記載された複合栄養培地の細胞適合性およびパフォーマンス特性を 、単層のヒトケラチン細胞の培養において、並びに、in vitroで再構成されたヒ ト表皮において試験した。 実施例１記載の栄養培地は、それ自身を明らかにする最もわずかな細胞毒性効 果もなしに、少なくとも３６時間生存するのに適した条件下で、単層でケラチン 細胞を培養した。 対称的に、ＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水、細胞培養に広く用いられる平衡化 した生理食塩水）等の慣例的な生存溶液は、培養から１２時間後から細胞毒性を 示す。 図３に一致して、本実施例に従う栄養培地は、３６時間接触させた後でさえ（ 図３Ｃ）、細胞毒性が現れることなく、最適な生存条件下で再構成された正常ヒ ト表皮を培養することができる。培養物は、基底の、棘の、乳房のおよび完全な 正常角化細胞層、もしくは規則的かつ正常な層化を示した。 図３Ｃと、標準的な商業的培地（特にIRVINE SCIENTIFICから市販されている ＭＣＤＢ１５３）の使用を例証する図１とを比較すると、本願発明の培地のパフ ォーマンス特性が同等に良好であることが観察される。 対称的に、ＰＢＳの使用は、図２と一致して、多かれ少なかれ顕著な壊死の兆 候を伴った、あるレベルの基底および棘の層における分化の末端相においてケラ チン細胞の出現を誘導する。異なるケラチン細胞層の構造の完全な欠失を伴う表 皮の全体的な分離も、注目される。実施例３： 形質転換した表皮細胞の生育における本願発明の組成物の効果。 この研究に用いられた組成物は、培地１と称される培地を含む実施例１に記載 されたものである。 ヒトケラチン細胞の自発的形質転換系の生育における組成物１の効果を、標準 培地（ＤＭＥＭ、ダルベッコ修飾表皮培地(Dulbeco Modified Epidermal Medium )＋ウシ胎児血清）で培養された細胞と比較することによって、４日間培養した 後 に試験した。 細胞を、最初に標準培地に接種し、この培地に接種して二日目まで生育させた 。二日目に、一群の細胞を二つに分け、一方を標準培地で培養し、他方を培地１ で培養した。 。点は２重であり、カウントは４重である。この結果は、平均の標準誤差ＳＥＭ について修正されている。図中の矢印は、培養の第２日目の群の分割に対応する 。 細胞の形態は、用いられた培地に対応して異なる。培地１で培養された細胞の 形態は、ＧＩＢＣＯ-ＢＲＬ ＫＳＦＭ型（緩く結合し、舗装されたような外観が ほとんどないような細胞）の表皮細胞用の準限定培地(a semi-defined medium) を用いて得られた形態と密接に類似している。 顕著な差異は、集密(confluence)になるまで（ここには示されていないが、６ 〜７日）、種々の培地に従って、この系の生育において注目される。 組成物１が、形質転換されたケラチン細胞の増殖に刺激効果を与えないことが 結論付けられる。実施例４： ヒト皮膚移植片の採取および瘢痕化疾患の予防における本願発明の 組成物の影響 試験された組成物は、培地１と称される培地に対応する実施例１に記載された ものである。 ヒト皮膚移植片の採取および瘢痕化疾患の予防における組成物１の影響を、マ ウスモデルで研究した（細胞介在性免疫を欠失した無胸腺マウス(athymic mouse )）。 二種類の移植片、すなわち、培養された表皮と形成外科学に由来するヒトの皮 膚を用いた。移植片を、グループＡマウスについては１ｍｌの組成物１（毎日１ 回の適用）で３０日間洗浄し、グルーブＢマウスについては１ｍｌの緩衝生理食 塩水（ＰＢＳ）で洗浄した（グループ当たり２０匹の動物）。移植片の乾燥を防 ぐために、洗浄後、ツルグラを当てた。 移植片の臨床的な観察を、Ｄ-７、Ｄ-１５およびＤ-３０について行った。 二つのパラメーター、すなわち培養された表皮の壊死および瘢痕化を評価した 。ａ）培養された表皮の壊死（“移植片の採取”） 評価は、０〜３で行った。０＝壊死の兆候なし；１＝わずかな炎症と移植片の 表面的な分解；２＝部分的な壊死；３＝全体的な壊死。 結果は表２にまとめられている。 組成物１は、慣例的な生存溶液（ＰＢＳ）と比べて無胸腺マウスにおける培養 されたヒト表皮の移植片の採取を改善する。最終的な改善が５０％以上となり、 顕著な差異は７日間の処置後から注目される。ｂ）瘢痕化（移植された全体の皮膚を伴う） 評価は、０〜３で行った。０＝瘢痕化疾患なし；１＝瘢痕化の遅延；２＝瘢痕 化の異常を伴った遅延（瘢痕の顆粒化）；３＝肥大性瘢痕。 結果は表３にまとめられている。 組成物１は、瘢痕化工程を顕著に改善し、その効果は、特に処置の３０日後に 顕著である。
【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９７年１月２０日 【補正内容】 請求の範囲 １． 少なくとも複数のアミノ酸、ビタミン、細胞成長因子および無機塩からな り、動物由来もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽出物を除き、それ自身上お よび水性媒体において、最初の継代においてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少 なくとも一つのクローン増殖を含むが、生きた滋養基質を含まない、ヒト表皮ケ ラチン細胞の接種物の生存可能なin vitro培養を可能とする、局所的使用のため の組成物を製造もしくは生成するための複合栄養培地の使用。 ２． 栄養培地の成分が、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテックおよ び生物学的利用可能性を備えたことを特徴とする、請求項１記載の使用。 ３． 複合栄養培地が、成分濃度をｍｇ／ｌで示した以下の組成、 Ｌ-アラニン ９．２ Ｌ-アルギニンＨＣＬ ４２１．４ Ｌ-アスパラギン（無水） １４．２ Ｌ-アスパラギン酸 ４．０ Ｌ-システインＨＣＬ．Ｈ2Ｏ ４２．０ Ｌ-グルタミン酸 １４．８ Ｌ-グルタミン １７５４．４ グリシン ７．６ Ｌ-ヒスチジンＨＣＬ．Ｈ2Ｏ ５０．０ Ｌ-イソロイシン ６．０ Ｌ-ロイシン １３１．２ Ｌ-リシンＨＣｌ ５４．０ Ｌ-メチオニン １３．５ Ｌ-フェニルアラニン １０．０ Ｌ-プロリン ３４．６ Ｌ-セリン １２６．１ Ｌ-スレオニン ２４．０ Ｌ-トリプトフアン ９．３ Ｌ-チロシン２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ １１．７ Ｌ-バリン ７０．３ ビタミン類および細胞成長因子 ｄ-ビオチン ０．０２ 葉酸 ０．８０ ニコチンアミド ０．０４ Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩 ０．３０ ピリドキシンＨＣｌ ０．０６ リボフラビン ０．０４ チアミンＨＣｌ ０．３０ ビタミンＢ12 ０．４１ i-イノシトール １８．０ プトレシン ２ＨＣｌ ０．２０ ピルビン酸ナトリウム ５５．０ チミジン ０．７３ アデニン（ＨＣｌ） ２４．０ ＤＬ-リボ酸 ０．２０ 無機化合物 塩化ナトリウム ６８００．０ ＫＣｌ １１２．０ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２８４．０ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００３ 酢酸ナトリウム ３００．０（無水） Ｄ-グルコース １０８０．０ ＨＥＰＥＳ（ピペラジン） ６６００．０ ホスホリルエタノールアミン ０．０６７６８ エタノールアミン ０．０４６８４ 硫酸ナトリウム ３．４ 炭酸水素ナトリウム １１６０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １．３９ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １２０．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １３．０〜２２．０５ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１４４ （ＮＨ４）6ＭＯ7Ｏ24.４Ｈ2Ｏ ０．００１２０ Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．１４２ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００００２ ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０００１１ ＮＨ4ＶＯ3 ０．０００５７ を備えていることを特徴とする、請求項１記載の使用。 ４． 請求項１ないし３のいずれか一項に記載された少なくとも一つの栄養培地 が均一に分散した、人体の表面部と生物学的適合性を備えた相を含む局所的使用 用組成物。 ５． 複合栄養培地を含む水性連続相を備えた二相形態、特に水性ゲルまたは油 中水型エマルション形態をとることを特徴とする、請求項４記載の組成物。 ６． 油性連続相を備え、不連続相が複合栄養培地を含む、特にエマルション形 態の、二相形態をとることを特徴とする、請求項４記載の組成物。 ７． 請求項４ないし６のいずれか一項に記載の組成物を含む化粧ベース。 ８． 複合栄養培地が、活性体、もしくは付形剤であって特に他の活性体を増強 する付形剤を構成することを特徴とする、請求項７記載の化粧ベースを含む化粧 調製物。 ９． 動物由来もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽出物を除き、最初の継代 においてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少なくとも一つのクローン増殖を含む が、生きた滋養基質を含まない、それ自身上および水性媒体において、ヒト表皮 ケラチン細胞の接種物の生存可能なin vitro培養に適した組成物を含む、薬剤を 製造もしくは生成するための複合栄養培地の使用。 １０． 栄養培地の化合物が、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテック および生物学的利用可能性を備えたことを特徴とする、請求項９記載の使用。 １１． 複合栄養培地が、成分の濃度をｍｇ／ｌで示した以下の組成、 Ｌ-アラニン ９．２ Ｌ-アルギニンＨＣｌ ４２１．４ Ｌ-アスパラギン（無水） １４．２ Ｌ-アスパラギン酸 ４．０ Ｌ-システインＨＣｌ．Ｈ2Ｏ ４２．０ Ｌ-グルタミン酸 １４．８ Ｌ-グルタミン １７５４．４ グリシン ７．６ Ｌ-ヒスチジンＨＣｌ．Ｈ2Ｏ ５０．０ Ｌ-イソロイシン ６．０ Ｌ-ロイシン １３１．２ Ｌ-リシンＨＣｌ ５４．０ Ｌ-メチオニン １３．５ Ｌ-フェニルアラニン １０．０ Ｌ-プロリン ３４．６ Ｌ-セリン １２６．１ Ｌ-スレオニン ２４．０ Ｌ-トリプトファン ９．３ Ｌ-チロシン ２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ １１．７ Ｌ-バリン ７０．３ ビタミン類および細胞成長因子 ｄ-ビオチン ０．０２ 葉酸 ０．８０ ニコチンアミド ０．０４ Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩 ０．３０ ピリドキシンＨＣｌ ０．０６ リボフラビン ０．０４ チアミンＨＣｌ ０．３０ ビタミンＢ12 ０．４１ i-イノシトール １８．０ プトレシン ２ＨＣｌ ０．２０ ピルビン酸ナトリウム ５５．０ チミジン ０．７３ アデニン（ＨＣｌ） ２４．０ ＤＬ-リポ酸 ０．２０ 無機化合物 塩化ナトリウム ６８００．０ ＫＣｌ １１２．０ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２８４．０ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００３ 酢酸ナトリウム ３００．０（無水） Ｄ-グルコース １０８０．０ ＨＥＰＥＳ（ピペラジン） ６６００．０ ホスホリルエタノールアミン ０．０６７６８ エタノールアミン ０．０４６８４ 硫酸ナトリウム ３．４ 炭酸水素ナトリウム １１６０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １．３９ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １２０．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １３．０〜２２．０５ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１４４ （ＮＨ４）6ＭＯ7Ｏ24.４Ｈ2Ｏ ０．００１２０ Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．１４２ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００００２ ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０００１１ ＮＨ4ＶＯ3 ０．０００５７ を備えていることを特徴とする、請求項９記載の使用。 １２． 栄養試薬が、薬剤の活性体ではなく、活性体の一つを構成することを特 徴とする、請求項９ないし１１のいずれか一項に記載の使用。 １３． 移植物の防腐処置のための薬剤を得るための、請求項９ないし１２のい ずれか一項に記載の使用。 １４． 疾患および／または瘢痕化の遅延の予防または処置のための、請求項９ ないし１３のいずれか一項に記載の使用。 １５． 請求項９ないし１１のいずれか一項に記載された少なくとも一つの栄養 培地が均一に分散した、人体の表面部と生物学的適合性を備えた相を含む局所的 使用用の薬剤組成物。 １６． 複合栄養培地を含む水性連続相を備えた二相形態、特に水性ゲルまたは 油中水型エマルションの形態をとることを特徴とする、請求項１５記載の組成物 。 １７． 油性連続相、複合栄養培地を含む不連続相を備えた、特にエマルション 形態をとる、二相形態であることを特徴とする、請求項１５記載の組成物。 １８． 請求項１５ないし１７のいずれか一項に記載の組成物を含む薬学的製剤 ベース。 ２０． 移植物の防腐処置用であることを特徴とする、請求項１８記載の薬学的 製剤ベース。 ２１． 疾患および／または瘢痕化の遅延の予防または処置用であることを特徴 とする、請求項１８記載の薬学的製剤ベース。 【手続補正書】 【提出日】１９９７年７月１１日 【補正内容】 特許請求の範囲 １． 少なくとも複数のアミノ酸、ビタミン、細胞成長因子および無機塩からな り、動物由来もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽出物を除き、それ自身上お よび水性媒体において、最初の継代においてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少 なくとも一つのクローン増殖を含むが、生きた滋養基質を含まない、ヒト表皮ケ ラチン細胞の接種物の生存可能なin vitro培養を可能とする、局所的使用のため の組成物を製造もしくは生成するための複合栄養培地の使用。 ２． 栄養培地の成分が、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテックおよ び生物学的利用可能性を備えたことを特徴とする、請求項１記載の使用。 ３． 複合栄養培地が、成分濃度をｍｇ／ｌで示した以下の組成、 Ｌ-アラニン ９．２ Ｌ-アルギニンＨＣＬ ４２１．４ Ｌ-アスパラギン（無水） １４．２ Ｌ-アスパラギン酸 ４．０ Ｌ-システインＨＣＬ．Ｈ2Ｏ ４２．０ Ｌ-グルタミン酸 １４．８ Ｌ-グルタミン １７５４．４ グリシン ７．６ Ｌ-ヒスチジンＨＣＬ．Ｈ2Ｏ ５０．０ Ｌ-イソロイシン ６．０ Ｌ-ロイシン １３１．２ Ｌ-リシンＨＣｌ ５４．０ Ｌ-メチオニン １３．５ Ｌ-フェニルアラニン ０．０ Ｌ-プロリン ３４．６ Ｌ-セリン １２６．１ Ｌ-スレオニン ２４．０ Ｌ-トリプトファン ９．３ Ｌ-チロシン ２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ １１．７ Ｌ-バリン ７０．３ ビタミン類および細胞成長因子 ｄ-ビオチン ０．０２ 葉酸 ０．８０ ニコチンアミド ０．０４ Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩 ０．３０ ピリドキシンＨＣｌ ０．０６ リボフラビン ０．０４ チアミンＨＣｌ ０．３０ ビタミンＢ12 ０．４１ i-イノシトール １８．０ プトレシン ２ＨＣｌ ０．２０ ピルビン酸ナトリウム ５５．０ チミジン ０．７３ アデニン（ＨＣｌ） ２４．０ ＤＬ-リポ酸 ０．２０ 無機化合物 塩化ナトリウム ６８００．０ ＫＣｌ １１２．０ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２８４．０ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００３ 酢酸ナトリウム ３００．０（無水） Ｄ-グルコース １０８０．０ ＨＥＰＥＳ（ピペラジン） ６６００．０ ホスホリルエタノールアミン ０．０６７６８ エタノールアミン ０．０４６８４ 硫酸ナトリウム ３．４ 炭酸水素ナトリウム １１６０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １．３９ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １２０．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １３．０〜２２．０５ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１４４ （ＮＨ４）6ＭＯ7Ｏ24・４Ｈ2Ｏ ０．００１２０ Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．１４２ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００００２ ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０００１１ ＮＨ4ＶＯ3 ０．０００５７ を備えていることを特徴とする、請求項１記載の使用。 ４． 請求項１ないし３のいずれか一項に記載された少なくとも一つの栄養培地 が均一に分散した、人体の表面部と生物学的適合性を備えた相を含む局所的使用 用組成物。 ５． 複合栄養培地を含む水性連続相を備えた二相形態、特に水性ゲルまたは油 中水型エマルション形態をとることを特徴とする、請求項４記載の組成物。 ６． 油性連続相を備え、不連続相が複合栄養培地を含む、特にエマルション形 態の、二相形態をとることを特徴とする、請求項４記載の組成物。 ７． 請求項４ないし６のいずれか一項に記載の組成物を含む化粧ベース。 ８． 複合栄養培地が、活性体、もしくは付形剤であって特に他の活性体を増強 する付形剤を構成することを特徴とする、請求項７記載の化粧ベースを含む化粧 調製物。 ９． 動物由来もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽出物を除き、最初の継代 においてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少なくとも一つのクローン増殖を含む が、生きた滋養基質を含まない、それ自身上および水性媒体において、ヒト表皮 ケラチン細胞の接種物の生存可能なin vitro培養に適した組成物を含む、薬剤を 製造もしくは生成するための複合栄養培地の使用。 １０． 栄養培地の化合物が、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテック および生物学的利用可能性を備えたことを特徴とする、請求項９記載の使用。 １１． 複合栄養培地が、成分の濃度をｍｇ／ｌで示した以下の組成、 Ｌ-アラニン ９．２ Ｌ-アルギニンＨＣｌ ４２１．４ Ｌ-アスパラギン（無水） １４．２ Ｌ-アスパラギン酸 ４．０ Ｌ-システインＨＣｌ．Ｈ2Ｏ ４２．０ Ｌ-グルタミン酸 １４．８ Ｌ-グルタミン １７５４．４ グリシン ７．６ Ｌ-ヒスチジンＨＣｌ．Ｈ2Ｏ ０．０ Ｌ-イソロイシン ６．０ Ｌ-ロイシン １３１．２ Ｌ-リシンＨＣｌ ５４．０ Ｌ-メチオニン １３．５ Ｌ-フェニルアラニン １０．０ Ｌ-プロリン ３４．６ Ｌ-セリン １２６．１ Ｌ-スレオニン ２４．０ Ｌ-トリプトファン ９．３ Ｌ-チロシン ２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ １１．７ Ｌ-バリン ７０．３ ビタミン類および細胞成長因子 ｄ-ビオチン ０．０２ 葉酸 ０．８０ ニコチンアミド ０．０４ Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩 ０．３０ ピリドキシンＨＣｌ ０．０６ リボフラビン ０．０４ チアミンＨＣｌ ０．３０ ビタミンＢ12 ０．４１ i-イノシトール １８．０ プトレシン ２ＨＣｌ ０．２０ ピルビン酸ナトリウム ５５．０ チミジン ０．７３ アデニン（ＨＣｌ） ２４．０ ＤＬ-リポ酸 ０．２０ 無機化合物 塩化ナトリウム ６８００．０ ＫＣｌ １１２．０ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２８４．０ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００３ 酢酸ナトリウム ３００．０（無水） Ｄ-グルコース １０８０．０ ＨＥＰＥＳ（ピペラジン） ６６００．０ ホスホリルエタノールアミン ０．０６７６８ エタノールアミン ０．０４６８４ 硫酸ナトリウム ３．４ 炭酸水素ナトリウム １１６０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １．３９ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １２０．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １３．０〜２２．０５ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１４４ （ＮＨ４）6ＭＯ7Ｏ24.４Ｈ2Ｏ ０．００１２０ Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．１４２ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００００２ ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０００１１ ＮＨ4ＶＯ3 ０．０００５７ を備えていることを特徴とする、請求項９記載の使用。 １２． 栄養試薬が、薬剤の活性体ではなく、活性体の一つを構成することを特 徴とする、請求項９ないし１１のいずれか一項に記載の使用。 １３． 移植物の防腐処置のための薬剤を得るための、請求項９ないし１２のい ずれか一項に記載の使用。 １４． 疾患および／または瘢痕化の遅延の予防または処置のための、請求項９ ないし１３のいずれか一項に記載の使用。 １５． 請求項９ないし１１のいずれか一項に記載された少なくとも一つの栄養 培地が均一に分散した、人体の表面部と生物学的適合性を備えた相を含む局所的 使用用の薬剤組成物。 １６． 複合栄養培地を含む水性連続相を備えた二相形態、特に水性ゲルまたは 油中水型エマルションの形態をとることを特徴とする、請求項１５記載の組成物 。 １７． 油性連続相、複合栄養培地を含む不連続相を備えた、特にエマルション 形態をとる、二相形態であることを特徴とする、請求項１５記載の組成物。 １８． 請求項１５ないし１７のいずれか一項に記載の組成物を含む薬学的製剤 ベース。１９ ． 移植物の防腐処置用であることを特徴とする、請求項１８記載の薬学的 製剤ベース。２０ ． 疾患および／または瘢痕化の遅延の予防または処置用であることを特徴 とする、請求項１８記載の薬学的製剤ベース。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 31/40 Ａ６１Ｋ 31/40 31/415 31/415 31/465 31/465 31/505 31/505 31/52 31/52 31/525 31/525 31/68 31/68 31/70 31/70 33/00 33/00 33/04 33/04 33/06 33/06 33/24 33/24 33/26 33/26 33/30 33/30 33/32 33/32 38/22 37/24 Ｃ１２Ｎ 5/06 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｅ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，Ｕ Ｇ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＺ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，Ａ Ｌ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ， ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＰ，Ｋ Ｒ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ， ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，Ｔ Ｊ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １． 局所的使用のための組成物を製造もしくは生成するための、最初の継代に おいてヒト表皮ケラチン細胞の接種物の少なくとも一つのクローン増殖を含むが 、生きた滋養基質を含まない、ヒト表皮ケラチン細胞の接種物の生存可能な、そ れ自身上および水性媒体における、in vitro培養に適した組成物を含む複合栄養 培地の使用。 ２． 栄養培地の成分が、動物由来もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽出物 を除外して、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテックおよび生物学的利 用可能性を備えたことを特徴とする、請求項１記載の使用。 ３． 複合栄養培地が、アミノ酸類、一つ以上のビタミン類、一つ以上の細胞成 長因子類および一つ以上の無機塩類を含むことを特徴とする、請求項１記載の使 用。 ４． 複合栄養培地が、成分の濃度をｍｇ／ｌで示した以下の組成、 Ｌ-アラニン ９．２ Ｌ-アルギニンＨＣＬ ４２１．４ Ｌ-アスパラギン（無水） １４．２ Ｌ-アスパラギン酸 ４．０ Ｌ-システインＨＣＬ．Ｈ2Ｏ ４２．０ Ｌ-グルタミン酸 １４．８ Ｌ-グルタミン １７５４．４ グリシン ７．６ Ｌ-ヒスチジンＨＣＬ．Ｈ2Ｏ ５０．０ Ｌ-イソロイシン ６．０ Ｌ-ロイシン １３１．２ Ｌ-リシンＨＣｌ ５４．０ Ｌ-メチオニン １３．５ Ｌ-フェニルアラニン １０．０ Ｌ-プロリン ３４．６ Ｌ-セリン ２６．１ Ｌ-スレオニン ２４．０ Ｌ-トリプトファン ９．３ Ｌ-チロシン ２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ １１．７ Ｌ-バリン ７０．３ ビタミン類および細胞成長因子 ｄ-ビオチン ０．０２ 葉酸 ０．８０ ニコチンアミド ０．０４ Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩 ０．３０ ピリドキシンＨＣｌ ０．０６ リボフラビン ０．０４ チアミンＨＣｌ ０．３０ ビタミンＢ12 ０．４１ i-イノシトール １８．０ ブトレシン ２ＨＣｌ ０．２０ ピルビン酸ナトリウム ５５．０ チミジン ０．７３ アデニン（ＨＣｌ） ２４．０ ＤＬ-リポ酸 ０．２０ 無機化合物 塩化ナトリウム ６８００．０ ＫＣｌ １１２．０ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２８４．０ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００３ 酢酸ナトリウム ３００．０（無水） Ｄ-グルコース １０８０．０ ＨＥＰＥＳ（ピペラジン） ６６００．０ ホスホリルエタノールアミン ０．０６７６８ エタノールアミン ０．０４６８４ 硫酸ナトリウム ３．４ 炭酸水素ナトリウム １１６０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １．３９ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １２０．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １３．０〜２２．０５ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１４４ （ＮＨ４）6ＭＯ7Ｏ24.４Ｈ2Ｏ ０．００１２０ Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．１４２ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００００２ ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０００１１ ＮＨ4ＶＯ3 ０．０００５７ を備えていることを特徴とする、請求項１記載の使用。 ５． 請求項１ないし４のいずれか一項に記載された少なくとも一つの栄養培地 が均一に分散した、人体の表面部と生物学的適合性を備えた相を含む局所的使用 用組成物。 ６． 複合栄養培地を含む水性連続相を備えた二相形態、特に水性ゲルまたは油 中水型エマルション形態をとることを特徴とする、請求項５記載の組成物。 ７． 油性連続相を備え、不連続相が複合栄養培地を含む、特にエマルション形 態の、二相形態をとることを特徴とする、請求項５記載の組成物。 ８． 請求項５ないし７のいずれか一項に記載の組成物を含む化粧ベース。 ９． 複合栄養培地が、活性体、もしくは付形剤であって特に他の活性体を増強 する付形剤を構成することを特徴とする、請求項８記載の化粧ベースを含む化粧 調製物。 １０． 薬剤を製造もしくは生成するための、最初の継代においてヒト表皮ケラ チン細胞の接種物の少なくとも一つのクローン増殖を含むが、生きた滋養基質を 含まない、ヒト表皮ケラチン細胞の接種物の生存可能な、それ自身上および水性 媒体における、in vitro培養に適した組成物を含む複合栄養培地の使用。 １１． 栄養培地の化合物が、動物由来もしくは細胞由来のあらゆる生物学的抽 出物を除外して、皮膚に関して生物学的適合性、バイオミメテックおよび生物学 的利用可能性を備えたことを特徴とする、請求項１０記載の使用。 １２． 複合栄養培地が、アミノ酸類、一つ以上のビタミン類、一つ以上の細胞 成長因子類および一つ以上の無機塩類を含むことを特徴とする、請求項１０記載 の使用。 １３． 複合栄養培地が、成分の濃度をｍｇ／ｌで示した以下の組成、 Ｌ-アラニン ９．２ Ｌ-アルギニンＨＣｌ ４２１．４ Ｌ-アスパラギン（無水） １４．２ Ｌ-アスパラギン酸 ４．０ Ｌ-システインＨＣｌ．Ｈ2Ｏ ４２．０ Ｌ-グルタミン酸 １４．８ Ｌ-グルタミン １７５４．４ グリシン ７．６ Ｌ-ヒスチジンＨＣｌ．Ｈ2Ｏ ５０．０ Ｌ-イソロイシン ６．０ Ｌ-ロイシン １３１．２ Ｌ-リシンＨＣｌ ５４．０ Ｌ-メチオニン １３．５ Ｌ-フェニルアラニン １０．０ Ｌ-プロリン ３４．６ Ｌ-セリン １２６．１ Ｌ-スレオニン ２４．０ Ｌ-トリプトフアン ９．３ Ｌ-チロシン ２Ｎａ ２Ｈ2Ｏ １１．７ Ｌ-バリン ７０．３ ビタミン類および細胞成長因子 ｄ-ビオチン ０．０２ 葉酸 ０．８０ ニコチンアミド ０．０４ Ｃａ Ｄ-パントテン酸塩 ０．３０ ピリドキシンＨＣｌ ０．０６ リボフラビン ０．０４ チアミンＨＣｌ ０．３０ ビタミンＢ12 ０．４１ i-イノシトール １８．０ プトレシン ２ＨＣｌ ０．２０ ピルビン酸ナトリウム ５５．０ チミジン ０．７３ アデニン（ＨＣｌ） ２４．０ ＤＬ-リポ酸 ０．２０ 無機化合物 塩化ナトリウム ６８００．０ ＫＣｌ １１２．０ Ｎａ2ＨＰＯ4 ２８４．０ ＣｕＳＯ4・５Ｈ2Ｏ ０．００３ 酢酸ナトリウム ３００．０（無水） Ｄ-グルコース １０８０．０ ＨＥＰＥＳ（ピペラジン） ６６００．０ ホスホリルエタノールアミン ０．０６７６８ エタノールアミン ０．０４６８４ 硫酸ナトリウム ３．４ 炭酸水素ナトリウム １１６０．０ ＦｅＳＯ4・７Ｈ2Ｏ １．３９ ＭｇＣｌ2・６Ｈ2Ｏ １２０．０ ＣａＣｌ2・２Ｈ2Ｏ １３．０〜２２．０５ ＺｎＳＯ4・７Ｈ2Ｏ ０．１４４ （ＮＨ４）6ＭＯ7Ｏ24.４Ｈ2Ｏ ０．００１２０ Ｎａ2ＳｉＯ3・５Ｈ2Ｏ ０．１４２ ＭｎＣｌ2・４Ｈ2Ｏ ０．００００２ ＳｎＣｌ2・２Ｈ2Ｏ ０．０００１１ ＮＨ4ＶＯ3 ０．０００５７ を備えていることを特徴とする、請求項１０記載の使用。 １４． 栄養試薬が、薬剤の活性体ではなく、活性体の一つを構成することを特 徴とする、請求項１０ないし１３のいずれか一項に記載の使用。 １５． 移植物の防腐処置のための薬剤を得るための、請求項１０ないし１４の いずれか一項に記載の使用。 １６． 疾患および／または瘢痕化の遅延の予防または処置のための、請求項１ ０ないし１４のいずれか一項に記載の使用。 １７． 請求項１０ないし１３のいずれか一項に記載された少なくとも一つの栄 養培地が均一に分散した、人体の表面部と生物学的適合性を備えた相を含む局所 的使用用の薬剤組成物。 １８． 複合栄養培地を含む水性連続相を備えた二相形態、特に水性ゲルまたは 油中水型エマルションの形態をとることを特徴とする、請求項１７記載の組成物 。 １９． 油性連続相、特にエマルション形態、複合栄養培地を含む不連続相を備 えた、二相形態であることを特徴とする、請求項１７記載の組成物。 ２０． 請求項１７ないし１９のいずれか一項に記載の組成物を含む薬学的製剤 ベース。 ２１． 移植物の防腐処置用であることを特徴とする、請求項２０記載の薬学的 製剤ベース。 ２２． 疾患および／または瘢痕化の遅延の予防または処置用であることを特徴 とする、請求項２０記載の薬学的製剤ベース。
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