JPH1066596A - 浸透物質の使用 - Google Patents
浸透物質の使用Info
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- JPH1066596A JPH1066596A JP9133370A JP13337097A JPH1066596A JP H1066596 A JPH1066596 A JP H1066596A JP 9133370 A JP9133370 A JP 9133370A JP 13337097 A JP13337097 A JP 13337097A JP H1066596 A JPH1066596 A JP H1066596A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 シリコンなどの非活性表面に対する生物分子
の望ましくない相互作用を低減または阻害するシステム
を開発する。 【解決手段】 シリコン粒子存在下ＰＣＲ反応が阻害さ
れることが示されていたが、本発明は、このようなシリ
コンなどの非活性表面に対する生物分子の非共有相互作
用を低減または阻害するための浸透物質の使用に関す
る。浸透物質としては、両性イオン浸透物質、グリシン
ベタインなどを利用することができる。
の望ましくない相互作用を低減または阻害するシステム
を開発する。 【解決手段】 シリコン粒子存在下ＰＣＲ反応が阻害さ
れることが示されていたが、本発明は、このようなシリ
コンなどの非活性表面に対する生物分子の非共有相互作
用を低減または阻害するための浸透物質の使用に関す
る。浸透物質としては、両性イオン浸透物質、グリシン
ベタインなどを利用することができる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、非活性表面に対す
る生物分子の非共有結合相互作用（non-covalentintera
ctions）を低減または阻害するための浸透物質の使用法
に関する。さらに、本発明は、本発明による使用法に用
いることのできるキットに関する。
る生物分子の非共有結合相互作用（non-covalentintera
ctions）を低減または阻害するための浸透物質の使用法
に関する。さらに、本発明は、本発明による使用法に用
いることのできるキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】新物質の開発は、現代技術の幅広い分野
において大きな影響を与えている。例えば、過去の例と
しては、シリコン、ガリウム亜ヒ酸塩、または多結晶物
質などの導入は半導体技術に根強く浸透した。現代生物
学においても、同様の開発が認められている。すなわ
ち、過去２０年にわたり、ＥＬＩＳＡなどの免疫計量
（immunometric）法において、実験プロトコルの基準化
及び実験結果のおける物質に基づく誤差率の最小化を実
現する物質が確立された。また、これと同様に重要な別
の開発としては、対象となる生物学的化合物を純化及び
分離するために（カラム）クロマトグラフィーにおいて
用いられる新規の担体物質の促進がある。
において大きな影響を与えている。例えば、過去の例と
しては、シリコン、ガリウム亜ヒ酸塩、または多結晶物
質などの導入は半導体技術に根強く浸透した。現代生物
学においても、同様の開発が認められている。すなわ
ち、過去２０年にわたり、ＥＬＩＳＡなどの免疫計量
（immunometric）法において、実験プロトコルの基準化
及び実験結果のおける物質に基づく誤差率の最小化を実
現する物質が確立された。また、これと同様に重要な別
の開発としては、対象となる生物学的化合物を純化及び
分離するために（カラム）クロマトグラフィーにおいて
用いられる新規の担体物質の促進がある。
【０００３】多くの生物学的な分析及び分離技術におい
て科学者が直面する主な問題の一つとして、実験の精度
及び生産収量が、背景問題または望ましくない可能性の
ある不特定相互作用の問題によって損なわれるという問
題がある。かかる問題は、例えば、担体表面に対するタ
ンパク質または他の生物学的な化合物の非共有結合によ
り発生しうる。ＥＬＩＳＡ技術においてかかる問題を解
決するためには、問題の化合物をテストする前に、ポリ
スチロール（polystyrrol）などの担体物質の自由結合
サイトを異種構造タンパク質などの関連のない生物物質
に対して「遮断」する。
て科学者が直面する主な問題の一つとして、実験の精度
及び生産収量が、背景問題または望ましくない可能性の
ある不特定相互作用の問題によって損なわれるという問
題がある。かかる問題は、例えば、担体表面に対するタ
ンパク質または他の生物学的な化合物の非共有結合によ
り発生しうる。ＥＬＩＳＡ技術においてかかる問題を解
決するためには、問題の化合物をテストする前に、ポリ
スチロール（polystyrrol）などの担体物質の自由結合
サイトを異種構造タンパク質などの関連のない生物物質
に対して「遮断」する。
【０００４】最も最近において革命的な分子生物学の技
術は、ＰＣＲ技術である。当然ながら、ＰＣＲの幅広い
適用性に鑑み、この技術の様々な側面をさらに改良すべ
く多大な努力が現在までも、また現在でも行われてい
る。これらの開発の一つとして、微少化されたＰＣＲチ
ップ、すなわち、ＰＣＲ反応チャンバを形成するために
平坦なガラス片に結合された微少化生成シリコンチップ
の開発がある（例えば、Shoffner el al.,"Chip PCR.I.
Surface passivation of microfabricated silicon-gla
ss chips for PCR", Nucl. Acids Res. 24(1996), 375-
379参照のこと）。これまでＰＣＲチップの製造に用い
られてきた天然シリコンがＰＣＲの阻害剤であることが
判明した。そのために研究者たちはかかる阻害剤または
背景問題によって損なわれることのない信頼できるＰＣ
Ｒの結果を得るための物質及び方法を調査し、その結
果、この目標達成のために酸化シリコン（ＳｉＯ2）の
使用を提案した。
術は、ＰＣＲ技術である。当然ながら、ＰＣＲの幅広い
適用性に鑑み、この技術の様々な側面をさらに改良すべ
く多大な努力が現在までも、また現在でも行われてい
る。これらの開発の一つとして、微少化されたＰＣＲチ
ップ、すなわち、ＰＣＲ反応チャンバを形成するために
平坦なガラス片に結合された微少化生成シリコンチップ
の開発がある（例えば、Shoffner el al.,"Chip PCR.I.
Surface passivation of microfabricated silicon-gla
ss chips for PCR", Nucl. Acids Res. 24(1996), 375-
379参照のこと）。これまでＰＣＲチップの製造に用い
られてきた天然シリコンがＰＣＲの阻害剤であることが
判明した。そのために研究者たちはかかる阻害剤または
背景問題によって損なわれることのない信頼できるＰＣ
Ｒの結果を得るための物質及び方法を調査し、その結
果、この目標達成のために酸化シリコン（ＳｉＯ2）の
使用を提案した。
【０００５】このような功績を認めた上で、さらに、一
般的に商業上の利用が可能な表面を修正せずに、あるい
は適当な非活性表面のわずかな部分の使用のみに限定す
ることなく、非活性表面と生物分子の不特定あるいは非
共有相互作用を低減または削除する方法があれば、非常
に望ましく効果的である。このような手段の開発が成功
すれば、その使用はＰＣＲ技術に限定されることなく現
代生物学において幅広く適用できる。例えば 、Ｖｏｌ
ｋｍｕｔｈ及びＡｕｓｔｉｎにより、ＤＮＡ分子のmicr
o-electrophesis（微量電気泳動法）が開発された（Vol
kmuth and Austin, "DNA electrophoresis in microlit
hographic arrays", Nature 358(1992),600-602)参照の
こと）。このような技術は、ベタインなどの浸透物質を
緩衝システムに含むという点からも効果がある。
般的に商業上の利用が可能な表面を修正せずに、あるい
は適当な非活性表面のわずかな部分の使用のみに限定す
ることなく、非活性表面と生物分子の不特定あるいは非
共有相互作用を低減または削除する方法があれば、非常
に望ましく効果的である。このような手段の開発が成功
すれば、その使用はＰＣＲ技術に限定されることなく現
代生物学において幅広く適用できる。例えば 、Ｖｏｌ
ｋｍｕｔｈ及びＡｕｓｔｉｎにより、ＤＮＡ分子のmicr
o-electrophesis（微量電気泳動法）が開発された（Vol
kmuth and Austin, "DNA electrophoresis in microlit
hographic arrays", Nature 358(1992),600-602)参照の
こと）。このような技術は、ベタインなどの浸透物質を
緩衝システムに含むという点からも効果がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このように、本発明の
技術的課題は、上述の従来技術に関する問題を解決し、
非活性表面に対する生物分子の望ましくない相互作用を
低減または阻害するシステムを開発することである。
技術的課題は、上述の従来技術に関する問題を解決し、
非活性表面に対する生物分子の望ましくない相互作用を
低減または阻害するシステムを開発することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明は、非活性表面に対する生物分子の非共有相
互作用を低減または阻害するための浸透物質の使用法を
提供する。本発明によれば、適当な濃度の浸透物質を、
生物分子を含む溶液に加えることにより、前記表面に対
する前記分子の非共有結合相互作用が阻害されないまで
も低減されるという驚くべき効果が得られる。
に、本発明は、非活性表面に対する生物分子の非共有相
互作用を低減または阻害するための浸透物質の使用法を
提供する。本発明によれば、適当な濃度の浸透物質を、
生物分子を含む溶液に加えることにより、前記表面に対
する前記分子の非共有結合相互作用が阻害されないまで
も低減されるという驚くべき効果が得られる。
【０００８】浸透物質（または浸透溶質）は、水による
応力を与えられた（water-stressed）多種の原核生物及
び真核生物有機体から得られる。ハロバクテリアを除く
これらすべての有機体において見られる浸透物質システ
ムの３つの種類は、多価アルコール（グリセロール及び
サッカロースなど）、遊離アミノ酸とそれらの誘導体
（タウリン及びβアラニンなど）、及びメチルアミン
（例えば、トリメチルアミンＮ酸化物（ＴＭＡＯ）、ベ
タイン、及びサルコシン）あるいはメチルアミンと尿素
との組み合わせである（Yancey et al., "Living with
water stress: evolution of osmolyte systems "Scien
ce 217 (1982), 1214-1222 参照のこと)。
応力を与えられた（water-stressed）多種の原核生物及
び真核生物有機体から得られる。ハロバクテリアを除く
これらすべての有機体において見られる浸透物質システ
ムの３つの種類は、多価アルコール（グリセロール及び
サッカロースなど）、遊離アミノ酸とそれらの誘導体
（タウリン及びβアラニンなど）、及びメチルアミン
（例えば、トリメチルアミンＮ酸化物（ＴＭＡＯ）、ベ
タイン、及びサルコシン）あるいはメチルアミンと尿素
との組み合わせである（Yancey et al., "Living with
water stress: evolution of osmolyte systems "Scien
ce 217 (1982), 1214-1222 参照のこと)。
【０００９】本発明の主要な効果の一つとして、浸透物
質をかかる溶液に加えるだけで、多種にわたる非活性表
面に対する前記物質の相互作用を適当に低減または阻害
することができる。よって、特定の実験設定または実験
目的を得るために必要な表面を特別に設計もしくは選択
する必要がない。本発明によるさらなる効果として、以
前は困難であった様々な実験の設計を単純化できるた
め、関心のある研究者にとっては時間とコストの節減に
なる。
質をかかる溶液に加えるだけで、多種にわたる非活性表
面に対する前記物質の相互作用を適当に低減または阻害
することができる。よって、特定の実験設定または実験
目的を得るために必要な表面を特別に設計もしくは選択
する必要がない。本発明によるさらなる効果として、以
前は困難であった様々な実験の設計を単純化できるた
め、関心のある研究者にとっては時間とコストの節減に
なる。
【００１０】
【発明の実施の形態】本明細書において用いられる「生
物分子」という用語は、有機体または生物細胞（living
cell）の一部である有機分子、またはかかる分子の誘
導体を意味する。これらの分子の起源は、天然でも合成
でも半合成でもよい。
物分子」という用語は、有機体または生物細胞（living
cell）の一部である有機分子、またはかかる分子の誘
導体を意味する。これらの分子の起源は、天然でも合成
でも半合成でもよい。
【００１１】また、ここで用いられる「非活性（iner
t）」という用語は、「化学的反応能力を全くまたはわ
ずかしか持たない」という意味である。したがって、こ
の用語は、大気中において結合されない状態で発生する
窒素に関する「不活性の性質（inertness）」と同義で
ある。
t）」という用語は、「化学的反応能力を全くまたはわ
ずかしか持たない」という意味である。したがって、こ
の用語は、大気中において結合されない状態で発生する
窒素に関する「不活性の性質（inertness）」と同義で
ある。
【００１２】本発明による使用法の好適な実施形態にお
いて、前記浸透物質は、両性イオン浸透物質である。
いて、前記浸透物質は、両性イオン浸透物質である。
【００１３】本発明の使用法にかかる非常に好適な実施
形態では、前記両性イオン浸透物質は、以下の構造式
（structural formula）を有する。
形態では、前記両性イオン浸透物質は、以下の構造式
（structural formula）を有する。
【００１４】
【化２】 なお、Ｒ1，Ｒ2およびＲ3はＨ（水素），ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5
またはその他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミ
ノ酸残基である。
またはその他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミ
ノ酸残基である。
【００１５】本発明の使用法にかかるさらに好適な実施
形態では、前記両性イオン浸透物質は、アミノ酸または
そのメチル化産物である。
形態では、前記両性イオン浸透物質は、アミノ酸または
そのメチル化産物である。
【００１６】本発明の使用法にかかるさらに別の好適な
実施形態では、前記両性イオン浸透物質は、ベタイン及
び好ましくはグリシンベタインである。
実施形態では、前記両性イオン浸透物質は、ベタイン及
び好ましくはグリシンベタインである。
【００１７】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記浸透物質は、１〜２．５Ｍの最終濃度で存在す
る。
は、前記浸透物質は、１〜２．５Ｍの最終濃度で存在す
る。
【００１８】前記浸透物質の効果的な特性は、この物質
が１Ｍ以下の濃度で反応混合物に含まれる場合に得られ
るが、浸透物質が１〜２．５Ｍの最終濃度で存在する場
合に、特に効果的な結果が得られる。
が１Ｍ以下の濃度で反応混合物に含まれる場合に得られ
るが、浸透物質が１〜２．５Ｍの最終濃度で存在する場
合に、特に効果的な結果が得られる。
【００１９】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記生物分子は、巨大分子（macromolecule）であ
る。
は、前記生物分子は、巨大分子（macromolecule）であ
る。
【００２０】「生物分子」に関する「巨大分子」という
用語は、当該分野の技術者には明らかであり、ここで詳
細な説明は必要でない。
用語は、当該分野の技術者には明らかであり、ここで詳
細な説明は必要でない。
【００２１】本発明の使用にかかる好適な実施形態にお
いては、前記巨大分子は、炭水化物、多核酸またはポリ
ペプチド、またはそれらの混合物または修飾物である。
前記混合物または修飾物は必ずしも生物学的な機能を持
つ必要はない。実際には、その生物学的機能については
（現在のところ）当該技術分野では知られていない（例
えば、ペプチド核酸についての議論（Nielsen et al. S
cience 254 (1991), 1497-1500）を参照のこと）。しか
しながら、前記修正された生物学的巨大分子は、誘導源
である生物学的巨大分子と本質的に同一の物理化学的特
性を有し、例えば分子生物学において同一または同様に
適用できる可能性がある。
いては、前記巨大分子は、炭水化物、多核酸またはポリ
ペプチド、またはそれらの混合物または修飾物である。
前記混合物または修飾物は必ずしも生物学的な機能を持
つ必要はない。実際には、その生物学的機能については
（現在のところ）当該技術分野では知られていない（例
えば、ペプチド核酸についての議論（Nielsen et al. S
cience 254 (1991), 1497-1500）を参照のこと）。しか
しながら、前記修正された生物学的巨大分子は、誘導源
である生物学的巨大分子と本質的に同一の物理化学的特
性を有し、例えば分子生物学において同一または同様に
適用できる可能性がある。
【００２２】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記生物分子は、ペプチドまたはオリゴヌクレオチ
ドまたはこれらの混合物または修飾物である。
は、前記生物分子は、ペプチドまたはオリゴヌクレオチ
ドまたはこれらの混合物または修飾物である。
【００２３】本発明の好適な実施形態においては、前記
多核酸またはオリゴヌクレオチドはＤＮＡである。
多核酸またはオリゴヌクレオチドはＤＮＡである。
【００２４】ここで用いられる「ＤＮＡ」という用語
は、いかなるタイプのＤＮＡ、特にｃＤＮＡ及びゲノム
ＤＮＡを含む。
は、いかなるタイプのＤＮＡ、特にｃＤＮＡ及びゲノム
ＤＮＡを含む。
【００２５】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記多核酸またはオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡで
ある。
は、前記多核酸またはオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡで
ある。
【００２６】本発明において用いられる「ＲＮＡ］とい
う用語は、いかなるタイプのＲＮＡを含めることができ
るが、特にｍＲＮＡを意味する。
う用語は、いかなるタイプのＲＮＡを含めることができ
るが、特にｍＲＮＡを意味する。
【００２７】本発明の別の好適な実施形態においては、
前記非活性表面はシリコン表面、シリコンウェーハ、ガ
ラス表面、またはこれらの混合物または化学的修飾物で
ある。
前記非活性表面はシリコン表面、シリコンウェーハ、ガ
ラス表面、またはこれらの混合物または化学的修飾物で
ある。
【００２８】最も便宜的には、前記物質は製造されたシ
リコンであり、かかるシリコンは、例えば、フォトリソ
グラフィーなどの標準的な製造または処理技術によって
得ることができる。
リコンであり、かかるシリコンは、例えば、フォトリソ
グラフィーなどの標準的な製造または処理技術によって
得ることができる。
【００２９】本発明は、さらに、（ａ）前記のように規
定された浸透物質の濃縮保存溶液と、（ｂ）前記のよう
に規定された浸透物質を含む反応緩衝調整剤と、（ｃ）
前記のように規定された浸透物質を含む酵素調整剤と、
の少なくともいずれか一つを含むキットに関する。
定された浸透物質の濃縮保存溶液と、（ｂ）前記のよう
に規定された浸透物質を含む反応緩衝調整剤と、（ｃ）
前記のように規定された浸透物質を含む酵素調整剤と、
の少なくともいずれか一つを含むキットに関する。
【００３０】本発明によるキットの様々な成分は、好ま
しくは標準的な反応ガラス瓶（reaction vials）中で調
整され、互いに独立している。本発明のキットに含まれ
る保存溶液に使用される濃度は、本発明において効果を
発揮するよう浸透物質を適当に希釈するのに適した濃度
である。本発明の緩衝剤の実施形態（ｂ）及び（ｃ）に
おいては、浸透物質は好ましくは最終的な濃度で包含さ
れている。前記最終濃度の範囲及び限定は、上述の通り
である。
しくは標準的な反応ガラス瓶（reaction vials）中で調
整され、互いに独立している。本発明のキットに含まれ
る保存溶液に使用される濃度は、本発明において効果を
発揮するよう浸透物質を適当に希釈するのに適した濃度
である。本発明の緩衝剤の実施形態（ｂ）及び（ｃ）に
おいては、浸透物質は好ましくは最終的な濃度で包含さ
れている。前記最終濃度の範囲及び限定は、上述の通り
である。
【００３１】
［実施例１］シリコン粒子及び両性イオン浸透物質の存
在下でのポリメレース連鎖反応（ＰＣＲ） 本実施例では、核酸鋳型に依存したＰＣＲ反応における
純粋なシリコン表面等の非活性表面による阻害効果がベ
タインなどの浸透物質の存在により低減されることを示
す。なお、本実施例では、Ｓｉｇｍａ社から市販されて
いるグリシンベタインを用いた。
在下でのポリメレース連鎖反応（ＰＣＲ） 本実施例では、核酸鋳型に依存したＰＣＲ反応における
純粋なシリコン表面等の非活性表面による阻害効果がベ
タインなどの浸透物質の存在により低減されることを示
す。なお、本実施例では、Ｓｉｇｍａ社から市販されて
いるグリシンベタインを用いた。
【００３２】シリコンは、半導体技術において非常に重
要な材料であるばかりでなく、生物分野においても重要
である。これはこの物質の取り扱いが容易であり、ま
た、三次元の微小構造を迅速に形成することができるこ
とに由来する。そのため、ＰＣＲを初めとして、純粋な
シリコンの存在下における種々の実験は、例えば、シリ
コン懸濁液を用いた生物学的プロセスの小型化モデルの
確立という観点から、将来大変重要となる。純粋なシリ
コンは、種々の原因より一般にＰＣＲのような生物学的
プロセスを阻害することが知られている。これらの原因
の一つとして、例えば、微少な反応チャンバ内の極小さ
な容積に比して、かなり大きな表面と分子とが相互作用
を行うことが考えられる。
要な材料であるばかりでなく、生物分野においても重要
である。これはこの物質の取り扱いが容易であり、ま
た、三次元の微小構造を迅速に形成することができるこ
とに由来する。そのため、ＰＣＲを初めとして、純粋な
シリコンの存在下における種々の実験は、例えば、シリ
コン懸濁液を用いた生物学的プロセスの小型化モデルの
確立という観点から、将来大変重要となる。純粋なシリ
コンは、種々の原因より一般にＰＣＲのような生物学的
プロセスを阻害することが知られている。これらの原因
の一つとして、例えば、微少な反応チャンバ内の極小さ
な容積に比して、かなり大きな表面と分子とが相互作用
を行うことが考えられる。
【００３３】ＰＣＲにおける純粋なシリコン表面の阻害
効果を試験するために、モデルシステムとして、破砕し
たシリコン粒子の存在下、Ｍ１３ベクターに挿入された
１．２ｋｂのヒト染色体ＤＮＡをＰＣＲにより増幅する
実験を行った。
効果を試験するために、モデルシステムとして、破砕し
たシリコン粒子の存在下、Ｍ１３ベクターに挿入された
１．２ｋｂのヒト染色体ＤＮＡをＰＣＲにより増幅する
実験を行った。
【００３４】反応を行うに当たり、水（図１、レーン２
から５）または１Ｍベタイン溶液（図１、レーン６から
９）に懸濁された種々の量（１０、５０、７５）のシリ
コン粒子、０．２μＭ以下配列を有する２種のプライマ
ー、１００μＭ各ｄＮＴＰ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 及
び２．５ユニットＴａｑポリメレースを含有した１倍濃
度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８
及び５０ｍＭ ＫＣｌ）に、１ｎｇのＭ１３ＤＮＡを懸
濁し、最終容量を５０μｌとしたものを準備した。上記
２種のプライマーの配列は、Ｍ１３−４０（２４塩基）
が、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-３’であり、ま
た、Ｍ１３−Ｒｅｖ（２４塩基）が、５’−TTTCACACAG
GAAACAGCTATGAC-３’である。また、上記においてベタ
インを含有する反応液の場合には、必要な量の水と５Ｍ
ベタインの保存溶液とを混合し最終反応容量の５０μｌ
に調整した。
から５）または１Ｍベタイン溶液（図１、レーン６から
９）に懸濁された種々の量（１０、５０、７５）のシリ
コン粒子、０．２μＭ以下配列を有する２種のプライマ
ー、１００μＭ各ｄＮＴＰ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 及
び２．５ユニットＴａｑポリメレースを含有した１倍濃
度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８
及び５０ｍＭ ＫＣｌ）に、１ｎｇのＭ１３ＤＮＡを懸
濁し、最終容量を５０μｌとしたものを準備した。上記
２種のプライマーの配列は、Ｍ１３−４０（２４塩基）
が、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-３’であり、ま
た、Ｍ１３−Ｒｅｖ（２４塩基）が、５’−TTTCACACAG
GAAACAGCTATGAC-３’である。また、上記においてベタ
インを含有する反応液の場合には、必要な量の水と５Ｍ
ベタインの保存溶液とを混合し最終反応容量の５０μｌ
に調整した。
【００３５】なお、ここで用いたシリコン粒子は、約
０．５ｍｍ ｘ ０．５ｍｍ ｘ ０．３ｍｍのものを
用いた。
０．５ｍｍ ｘ ０．５ｍｍ ｘ ０．３ｍｍのものを
用いた。
【００３６】上記混合液を調整後、以下の条件下でＰＣ
Ｒを行った。ＰＣＲの条件は、９４℃、２０秒間（変
性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、７３℃、２
分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイクル繰り返し
た。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気泳動溶液
（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブロモフェ
ノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で電気泳動
を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ−Ｂｓｔ
ＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
Ｒを行った。ＰＣＲの条件は、９４℃、２０秒間（変
性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、７３℃、２
分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイクル繰り返し
た。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気泳動溶液
（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブロモフェ
ノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で電気泳動
を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ−Ｂｓｔ
ＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
【００３７】電気泳動の結果を図１に示す。なお、図１
の各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２から５：水及び
種々の量のシリコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰ
ＣＲ（５０μｌ）；レーン２：１０粒子；レーン３：５
０粒子；レーン４：７５粒子；レーン５：対照粒子ゼ
ロ；レーン６から９：１Ｍのベタイン及び種々の量のシ
リコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰＣＲ（５０μ
ｌ）；レーン６：１０粒子；レーン７：５０粒子；レー
ン８：７５粒子；レーン９：対照粒子ゼロ。
の各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２から５：水及び
種々の量のシリコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰ
ＣＲ（５０μｌ）；レーン２：１０粒子；レーン３：５
０粒子；レーン４：７５粒子；レーン５：対照粒子ゼ
ロ；レーン６から９：１Ｍのベタイン及び種々の量のシ
リコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰＣＲ（５０μ
ｌ）；レーン６：１０粒子；レーン７：５０粒子；レー
ン８：７５粒子；レーン９：対照粒子ゼロ。
【００３８】図１に示す通り、シリコン粒子の添加量の
増加による阻害効果が、ＰＣＲバッファー中に添加され
た種々のモル濃度のベタインにおいて示された。
増加による阻害効果が、ＰＣＲバッファー中に添加され
た種々のモル濃度のベタインにおいて示された。
【００３９】［実施例２］シリコン粉末及び両性イオン
浸透物質の存在下でのＰＣＲに対する影響 上述したＳｈｏｆｆｎｅｒらにより、近年、ＰＣＲ反応
へのシリコン粉末の阻害効果が示されている。本実施例
は、ＰＣＲの反応バッファー中に浸透物質、例えば両性
イオン浸透物質であるベタインを添加することにより、
上記阻害効果を効果的に低減させることができることを
示す。
浸透物質の存在下でのＰＣＲに対する影響 上述したＳｈｏｆｆｎｅｒらにより、近年、ＰＣＲ反応
へのシリコン粉末の阻害効果が示されている。本実施例
は、ＰＣＲの反応バッファー中に浸透物質、例えば両性
イオン浸透物質であるベタインを添加することにより、
上記阻害効果を効果的に低減させることができることを
示す。
【００４０】ＰＣＲ実験は、モデルシステムとして、ヒ
ト染色体ＤＮＡ由来の１．５ｋｂ断片が挿入されたＭ１
３ベクターを用いて行った。シリコンを含有するＰＣＲ
反応液は、４．６ｍｇシリコン粉末（Ｓｉｇｍａ社、３
２５メッシュ、純度９９％、製品番号２１５６１−９）
を最終容量として１００μｌに調整した。ここで純粋な
シリコン粉末の濃度は、前記Ｓｈｏｆｆｎｅｒらにより
示されたＰＣＲ反応を阻害する濃度とした。
ト染色体ＤＮＡ由来の１．５ｋｂ断片が挿入されたＭ１
３ベクターを用いて行った。シリコンを含有するＰＣＲ
反応液は、４．６ｍｇシリコン粉末（Ｓｉｇｍａ社、３
２５メッシュ、純度９９％、製品番号２１５６１−９）
を最終容量として１００μｌに調整した。ここで純粋な
シリコン粉末の濃度は、前記Ｓｈｏｆｆｎｅｒらにより
示されたＰＣＲ反応を阻害する濃度とした。
【００４１】ＰＣＲを行うに当たり、以下の反応液を調
整した。すなわち、１倍濃度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８及び５０ｍＭ ＫＣｌ）、水
（図２、レーン２）あるいは４．６ｍｇシリコン粉末を
含有する溶液（図２、レーン３から８）、１ｎｇＭ１３
ＤＮＡ、０．３μＭ Ｍ１３−４０プライマーＤＮＡ
（２４塩基、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-
３’）、０．３μＭ Ｍ１３−ＲｅｖプライマーＤＮＡ
（２４塩基、５’−TTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-
３’）、２００μＭ各ｄＮＴＰ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ
2 及び１０ユニットＴａｑポリメレースを、最終容量と
して１００μｌに調整したものを準備した。前記４．６
ｍｇシリコン粉末を含有する溶液は、水（図２、レーン
３）、０．５Ｍベタイン溶液（図２、レーン４）、１Ｍ
ベタイン溶液（図２、レーン５）、２Ｍベタイン溶液
（図２、レーン６）を用いて調整した。また、上記にお
いてベタインを含有する反応液の場合には、必要な量の
水と５Ｍベタインの保存溶液とを混合して最終容量の１
００μｌに調整した。
整した。すなわち、１倍濃度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８及び５０ｍＭ ＫＣｌ）、水
（図２、レーン２）あるいは４．６ｍｇシリコン粉末を
含有する溶液（図２、レーン３から８）、１ｎｇＭ１３
ＤＮＡ、０．３μＭ Ｍ１３−４０プライマーＤＮＡ
（２４塩基、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-
３’）、０．３μＭ Ｍ１３−ＲｅｖプライマーＤＮＡ
（２４塩基、５’−TTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-
３’）、２００μＭ各ｄＮＴＰ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ
2 及び１０ユニットＴａｑポリメレースを、最終容量と
して１００μｌに調整したものを準備した。前記４．６
ｍｇシリコン粉末を含有する溶液は、水（図２、レーン
３）、０．５Ｍベタイン溶液（図２、レーン４）、１Ｍ
ベタイン溶液（図２、レーン５）、２Ｍベタイン溶液
（図２、レーン６）を用いて調整した。また、上記にお
いてベタインを含有する反応液の場合には、必要な量の
水と５Ｍベタインの保存溶液とを混合して最終容量の１
００μｌに調整した。
【００４２】上記混合液調整後、以下の条件下でＰＣＲ
反応を行った。すなわち、ＰＣＲの条件は、９４℃、２
０秒間（変性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、
７３℃、２分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイク
ル繰り返した。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気
泳動溶液（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブ
ロモフェノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で
電気泳動を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ
−ＢｓｔＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
反応を行った。すなわち、ＰＣＲの条件は、９４℃、２
０秒間（変性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、
７３℃、２分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイク
ル繰り返した。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気
泳動溶液（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブ
ロモフェノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で
電気泳動を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ
−ＢｓｔＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
【００４３】泳動結果を図２に示す。なお、図２におけ
る各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２：シリコン粉末
を包含しない標準的なＰＣＲバッファ中で行ったＰＣ
Ｒ；レーン３から６：１００μｌのＰＣＲ量において
４．６ｍｇのシリコン粉末を用いて行ったＰＣＲ反応；
レーン３：水をベースにしたバッファ；レーン４；０．
５Ｍベタイン溶液；レーン５：１ベタイン溶液；レーン
６；２Ｍベタイン溶液。
る各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２：シリコン粉末
を包含しない標準的なＰＣＲバッファ中で行ったＰＣ
Ｒ；レーン３から６：１００μｌのＰＣＲ量において
４．６ｍｇのシリコン粉末を用いて行ったＰＣＲ反応；
レーン３：水をベースにしたバッファ；レーン４；０．
５Ｍベタイン溶液；レーン５：１ベタイン溶液；レーン
６；２Ｍベタイン溶液。
【００４４】図２に示す通り、モル濃度のベタインを用
いたＰＣＲは、ＰＣＲを効果的かつ特定的に増幅し、シ
リコン表面の阻害効果を低減させることができることが
示された。
いたＰＣＲは、ＰＣＲを効果的かつ特定的に増幅し、シ
リコン表面の阻害効果を低減させることができることが
示された。
【００４５】
【発明の効果】以上の通り、本発明の浸透物質を用いる
ことにより、非活性表面に対する生物分子の非共有結合
による相互作用を削減または破壊することができる。こ
の結果、種々の生物学的実験の効率を向上させることが
可能となる。
ことにより、非活性表面に対する生物分子の非共有結合
による相互作用を削減または破壊することができる。こ
の結果、種々の生物学的実験の効率を向上させることが
可能となる。
【図１】 シリコン粒子及び両性イオン浸透物質の存在
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
【図２】 シリコン粉末及び両性イオン浸透物質の存在
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成９年９月１８日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正内容】
【書類名】 明細書
【発明の名称】 浸透物質の使用
【特許請求の範囲】
【化１】 Ｒ1，Ｒ2およびＲ3はＨ（水素），ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5または
その他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミノ酸残
基である。
その他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミノ酸残
基である。
【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、非活性表面に対す
る生物分子の非共有結合相互作用（non-covalentintera
ctions）を低減または阻害するための浸透物質の使用法
に関する。さらに、本発明は、本発明による使用法に用
いることのできるキットに関する。
る生物分子の非共有結合相互作用（non-covalentintera
ctions）を低減または阻害するための浸透物質の使用法
に関する。さらに、本発明は、本発明による使用法に用
いることのできるキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】新物質の開発は、現代技術の幅広い分野
において大きな影響を与えている。例えば、過去の例と
しては、シリコン、ガリウム亜ヒ酸塩、または多結晶物
質などの導入は半導体技術に根強く浸透した。現代生物
学においても、同様の開発が認められている。すなわ
ち、過去２０年にわたり、ＥＬＩＳＡなどの免疫計量
（immunometric）法において、実験プロトコルの基準化
及び実験結果のおける物質に基づく誤差率の最小化を実
現する物質が確立された。また、これと同様に重要な別
の開発としては、対象となる生物学的化合物を純化及び
分離するために（カラム）クロマトグラフィーにおいて
用いられる新規の担体物質の促進がある。
において大きな影響を与えている。例えば、過去の例と
しては、シリコン、ガリウム亜ヒ酸塩、または多結晶物
質などの導入は半導体技術に根強く浸透した。現代生物
学においても、同様の開発が認められている。すなわ
ち、過去２０年にわたり、ＥＬＩＳＡなどの免疫計量
（immunometric）法において、実験プロトコルの基準化
及び実験結果のおける物質に基づく誤差率の最小化を実
現する物質が確立された。また、これと同様に重要な別
の開発としては、対象となる生物学的化合物を純化及び
分離するために（カラム）クロマトグラフィーにおいて
用いられる新規の担体物質の促進がある。
【０００３】多くの生物学的な分析及び分離技術におい
て科学者が直面する主な問題の一つとして、実験の精度
及び生産収量が、背景問題または望ましくない可能性の
ある不特定相互作用の問題によって損なわれるという問
題がある。かかる問題は、例えば、担体表面に対するタ
ンパク質または他の生物学的な化合物の非共有結合によ
り発生しうる。ＥＬＩＳＡ技術においてかかる問題を解
決するためには、問題の化合物をテストする前に、ポリ
スチロール（polystyrrol）などの担体物質の自由結合
サイトを異種構造タンパク質などの関連のない生物物質
に対して「遮断」する。
て科学者が直面する主な問題の一つとして、実験の精度
及び生産収量が、背景問題または望ましくない可能性の
ある不特定相互作用の問題によって損なわれるという問
題がある。かかる問題は、例えば、担体表面に対するタ
ンパク質または他の生物学的な化合物の非共有結合によ
り発生しうる。ＥＬＩＳＡ技術においてかかる問題を解
決するためには、問題の化合物をテストする前に、ポリ
スチロール（polystyrrol）などの担体物質の自由結合
サイトを異種構造タンパク質などの関連のない生物物質
に対して「遮断」する。
【０００４】最も最近において革命的な分子生物学の技
術は、ＰＣＲ技術である。当然ながら、ＰＣＲの幅広い
適用性に鑑み、この技術の様々な側面をさらに改良すべ
く多大な努力が現在までも、また現在でも行われてい
る。これらの開発の一つとして、微少化されたＰＣＲチ
ップ、すなわち、ＰＣＲ反応チャンバを形成するために
平坦なガラス片に結合された微少化生成シリコンチップ
の開発がある（例えば、Shoffner el al.,"Chip PCR.I.
Surface passivation of microfabricated silicon-gla
ss chips for PCR", Nucl. Acids Res. 24(1996), 375-
379参照のこと）。これまでＰＣＲチップの製造に用い
られてきた天然シリコンがＰＣＲの阻害剤であることが
判明した。そのために研究者たちはかかる阻害剤または
背景問題によって損なわれることのない信頼できるＰＣ
Ｒの結果を得るための物質及び方法を調査し、その結
果、この目標達成のために酸化シリコン（ＳｉＯ2）の
使用を提案した。
術は、ＰＣＲ技術である。当然ながら、ＰＣＲの幅広い
適用性に鑑み、この技術の様々な側面をさらに改良すべ
く多大な努力が現在までも、また現在でも行われてい
る。これらの開発の一つとして、微少化されたＰＣＲチ
ップ、すなわち、ＰＣＲ反応チャンバを形成するために
平坦なガラス片に結合された微少化生成シリコンチップ
の開発がある（例えば、Shoffner el al.,"Chip PCR.I.
Surface passivation of microfabricated silicon-gla
ss chips for PCR", Nucl. Acids Res. 24(1996), 375-
379参照のこと）。これまでＰＣＲチップの製造に用い
られてきた天然シリコンがＰＣＲの阻害剤であることが
判明した。そのために研究者たちはかかる阻害剤または
背景問題によって損なわれることのない信頼できるＰＣ
Ｒの結果を得るための物質及び方法を調査し、その結
果、この目標達成のために酸化シリコン（ＳｉＯ2）の
使用を提案した。
【０００５】このような功績を認めた上で、さらに、一
般的に商業上の利用が可能な表面を修正せずに、あるい
は適当な非活性表面のわずかな部分の使用のみに限定す
ることなく、非活性表面と生物分子の不特定あるいは非
共有相互作用を低減または削除する方法があれば、非常
に望ましく効果的である。このような手段の開発が成功
すれば、その使用はＰＣＲ技術に限定されることなく現
代生物学において幅広く適用できる。例えば 、Ｖｏｌ
ｋｍｕｔｈ及びＡｕｓｔｉｎにより、ＤＮＡ分子のmicr
o-electrophesis（微量電気泳動法）が開発された（Vol
kmuth and Austin, "DNA electrophoresis in microlit
hographic arrays", Nature 358(1992),600-602)参照の
こと）。このような技術は、ベタインなどの浸透物質を
緩衝システムに含むという点からも効果がある。
般的に商業上の利用が可能な表面を修正せずに、あるい
は適当な非活性表面のわずかな部分の使用のみに限定す
ることなく、非活性表面と生物分子の不特定あるいは非
共有相互作用を低減または削除する方法があれば、非常
に望ましく効果的である。このような手段の開発が成功
すれば、その使用はＰＣＲ技術に限定されることなく現
代生物学において幅広く適用できる。例えば 、Ｖｏｌ
ｋｍｕｔｈ及びＡｕｓｔｉｎにより、ＤＮＡ分子のmicr
o-electrophesis（微量電気泳動法）が開発された（Vol
kmuth and Austin, "DNA electrophoresis in microlit
hographic arrays", Nature 358(1992),600-602)参照の
こと）。このような技術は、ベタインなどの浸透物質を
緩衝システムに含むという点からも効果がある。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】このように、本発明の
技術的課題は、上述の従来技術に関する問題を解決し、
非活性表面に対する生物分子の望ましくない相互作用を
低減または阻害するシステムを開発することである。
技術的課題は、上述の従来技術に関する問題を解決し、
非活性表面に対する生物分子の望ましくない相互作用を
低減または阻害するシステムを開発することである。
【０００７】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明は、非活性表面に対する生物分子の非共有相
互作用を低減または阻害するための浸透物質の使用法を
提供する。本発明によれば、適当な濃度の浸透物質を、
生物分子を含む溶液に加えることにより、前記表面に対
する前記分子の非共有結合相互作用が阻害されないまで
も低減されるという驚くべき効果が得られる。
に、本発明は、非活性表面に対する生物分子の非共有相
互作用を低減または阻害するための浸透物質の使用法を
提供する。本発明によれば、適当な濃度の浸透物質を、
生物分子を含む溶液に加えることにより、前記表面に対
する前記分子の非共有結合相互作用が阻害されないまで
も低減されるという驚くべき効果が得られる。
【０００８】浸透物質（または浸透溶質）は、水による
応力を与えられた（water-stressed）多種の原核生物及
び真核生物有機体から得られる。ハロバクテリアを除く
これらすべての有機体において見られる浸透物質システ
ムの３つの種類は、多価アルコール（グリセロール及び
サッカロースなど）、遊離アミノ酸とそれらの誘導体
（タウリン及びβアラニンなど）、及びメチルアミン
（例えば、トリメチルアミンＮ酸化物（ＴＭＡＯ）、ベ
タイン、及びサルコシン）あるいはメチルアミンと尿素
との組み合わせである（Yancey et al., "Living with
water stress: evolution of osmolyte systems "Scien
ce 217 (1982), 1214-1222 参照のこと)。
応力を与えられた（water-stressed）多種の原核生物及
び真核生物有機体から得られる。ハロバクテリアを除く
これらすべての有機体において見られる浸透物質システ
ムの３つの種類は、多価アルコール（グリセロール及び
サッカロースなど）、遊離アミノ酸とそれらの誘導体
（タウリン及びβアラニンなど）、及びメチルアミン
（例えば、トリメチルアミンＮ酸化物（ＴＭＡＯ）、ベ
タイン、及びサルコシン）あるいはメチルアミンと尿素
との組み合わせである（Yancey et al., "Living with
water stress: evolution of osmolyte systems "Scien
ce 217 (1982), 1214-1222 参照のこと)。
【０００９】本発明の主要な効果の一つとして、浸透物
質をかかる溶液に加えるだけで、多種にわたる非活性表
面に対する前記物質の相互作用を適当に低減または阻害
することができる。よって、特定の実験設定または実験
目的を得るために必要な表面を特別に設計もしくは選択
する必要がない。本発明によるさらなる効果として、以
前は困難であった様々な実験の設計を単純化できるた
め、関心のある研究者にとっては時間とコストの節減に
なる。
質をかかる溶液に加えるだけで、多種にわたる非活性表
面に対する前記物質の相互作用を適当に低減または阻害
することができる。よって、特定の実験設定または実験
目的を得るために必要な表面を特別に設計もしくは選択
する必要がない。本発明によるさらなる効果として、以
前は困難であった様々な実験の設計を単純化できるた
め、関心のある研究者にとっては時間とコストの節減に
なる。
【００１０】
【発明の実施の形態】本明細書において用いられる「生
物分子」という用語は、有機体または生物細胞（living
cell）の一部である有機分子、またはかかる分子の誘
導体を意味する。これらの分子の起源は、天然でも合成
でも半合成でもよい。
物分子」という用語は、有機体または生物細胞（living
cell）の一部である有機分子、またはかかる分子の誘
導体を意味する。これらの分子の起源は、天然でも合成
でも半合成でもよい。
【００１１】また、ここで用いられる「非活性（iner
t）」という用語は、「化学的反応能力を全くまたはわ
ずかしか持たない」という意味である。したがって、こ
の用語は、大気中において結合されない状態で発生する
窒素に関する「不活性の性質（inertness）」と同義で
ある。
t）」という用語は、「化学的反応能力を全くまたはわ
ずかしか持たない」という意味である。したがって、こ
の用語は、大気中において結合されない状態で発生する
窒素に関する「不活性の性質（inertness）」と同義で
ある。
【００１２】本発明による使用法の好適な実施形態にお
いて、前記浸透物質は、両性イオン浸透物質である。
いて、前記浸透物質は、両性イオン浸透物質である。
【００１３】本発明の使用法にかかる非常に好適な実施
形態では、前記両性イオン浸透物質は、以下の構造式
（structural formula）を有する。
形態では、前記両性イオン浸透物質は、以下の構造式
（structural formula）を有する。
【００１４】
【化２】 なお、Ｒ1，Ｒ2およびＲ3はＨ（水素），ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5
またはその他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミ
ノ酸残基である。
またはその他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミ
ノ酸残基である。
【００１５】本発明の使用法にかかるさらに好適な実施
形態では、前記両性イオン浸透物質は、アミノ酸または
そのメチル化産物である。
形態では、前記両性イオン浸透物質は、アミノ酸または
そのメチル化産物である。
【００１６】本発明の使用法にかかるさらに別の好適な
実施形態では、前記両性イオン浸透物質は、ベタイン及
び好ましくはグリシンベタインである。
実施形態では、前記両性イオン浸透物質は、ベタイン及
び好ましくはグリシンベタインである。
【００１７】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記浸透物質は、１〜２．５Ｍの最終濃度で存在す
る。
は、前記浸透物質は、１〜２．５Ｍの最終濃度で存在す
る。
【００１８】前記浸透物質の効果的な特性は、この物質
が１Ｍ以下の濃度で反応混合物に含まれる場合に得られ
るが、浸透物質が１〜２．５Ｍの最終濃度で存在する場
合に、特に効果的な結果が得られる。
が１Ｍ以下の濃度で反応混合物に含まれる場合に得られ
るが、浸透物質が１〜２．５Ｍの最終濃度で存在する場
合に、特に効果的な結果が得られる。
【００１９】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記生物分子は、巨大分子（macromolecule）であ
る。
は、前記生物分子は、巨大分子（macromolecule）であ
る。
【００２０】「生物分子」に関する「巨大分子」という
用語は、当該分野の技術者には明らかであり、ここで詳
細な説明は必要でない。
用語は、当該分野の技術者には明らかであり、ここで詳
細な説明は必要でない。
【００２１】本発明の使用にかかる好適な実施形態にお
いては、前記巨大分子は、炭水化物、多核酸またはポリ
ペプチド、またはそれらの混合物または修飾物である。
前記混合物または修飾物は必ずしも生物学的な機能を持
つ必要はない。実際には、その生物学的機能については
（現在のところ）当該技術分野では知られていない（例
えば、ペプチド核酸についての議論（Nielsen et al. S
cience 254 (1991), 1497-1500）を参照のこと）。しか
しながら、前記修正された生物学的巨大分子は、誘導源
である生物学的巨大分子と本質的に同一の物理化学的特
性を有し、例えば分子生物学において同一または同様に
適用できる可能性がある。
いては、前記巨大分子は、炭水化物、多核酸またはポリ
ペプチド、またはそれらの混合物または修飾物である。
前記混合物または修飾物は必ずしも生物学的な機能を持
つ必要はない。実際には、その生物学的機能については
（現在のところ）当該技術分野では知られていない（例
えば、ペプチド核酸についての議論（Nielsen et al. S
cience 254 (1991), 1497-1500）を参照のこと）。しか
しながら、前記修正された生物学的巨大分子は、誘導源
である生物学的巨大分子と本質的に同一の物理化学的特
性を有し、例えば分子生物学において同一または同様に
適用できる可能性がある。
【００２２】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記生物分子は、ペプチドまたはオリゴヌクレオチ
ドまたはこれらの混合物または修飾物である。
は、前記生物分子は、ペプチドまたはオリゴヌクレオチ
ドまたはこれらの混合物または修飾物である。
【００２３】本発明の好適な実施形態においては、前記
多核酸またはオリゴヌクレオチドはＤＮＡである。
多核酸またはオリゴヌクレオチドはＤＮＡである。
【００２４】ここで用いられる「ＤＮＡ」という用語
は、いかなるタイプのＤＮＡ、特にｃＤＮＡ及びゲノム
ＤＮＡを含む。
は、いかなるタイプのＤＮＡ、特にｃＤＮＡ及びゲノム
ＤＮＡを含む。
【００２５】本発明のさらに好適な実施形態において
は、前記多核酸またはオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡで
ある。
は、前記多核酸またはオリゴヌクレオチドは、ＲＮＡで
ある。
【００２６】本発明において用いられる「ＲＮＡ］とい
う用語は、いかなるタイプのＲＮＡを含めることができ
るが、特にｍＲＮＡを意味する。
う用語は、いかなるタイプのＲＮＡを含めることができ
るが、特にｍＲＮＡを意味する。
【００２７】本発明の別の好適な実施形態においては、
前記非活性表面はシリコン表面、シリコンウェーハ、ガ
ラス表面、またはこれらの混合物または化学的修飾物で
ある。
前記非活性表面はシリコン表面、シリコンウェーハ、ガ
ラス表面、またはこれらの混合物または化学的修飾物で
ある。
【００２８】最も便宜的には、前記物質は製造されたシ
リコンであり、かかるシリコンは、例えば、フォトリソ
グラフィーなどの標準的な製造または処理技術によって
得ることができる。
リコンであり、かかるシリコンは、例えば、フォトリソ
グラフィーなどの標準的な製造または処理技術によって
得ることができる。
【００２９】本発明は、さらに、（ａ）前記のように規
定された浸透物質の濃縮保存溶液と、（ｂ）前記のよう
に規定された浸透物質を含む反応緩衝調整剤と、（ｃ）
前記のように規定された浸透物質を含む酵素調整剤と、
の少なくともいずれか一つを含むキットに関する。
定された浸透物質の濃縮保存溶液と、（ｂ）前記のよう
に規定された浸透物質を含む反応緩衝調整剤と、（ｃ）
前記のように規定された浸透物質を含む酵素調整剤と、
の少なくともいずれか一つを含むキットに関する。
【００３０】本発明によるキットの様々な成分は、好ま
しくは標準的な反応ガラス瓶（reaction vials）中で調
整され、互いに独立している。本発明のキットに含まれ
る保存溶液に使用される濃度は、本発明において効果を
発揮するよう浸透物質を適当に希釈するのに適した濃度
である。本発明の緩衝剤の実施形態（ｂ）及び（ｃ）に
おいては、浸透物質は好ましくは最終的な濃度で包含さ
れている。前記最終濃度の範囲及び限定は、上述の通り
である。
しくは標準的な反応ガラス瓶（reaction vials）中で調
整され、互いに独立している。本発明のキットに含まれ
る保存溶液に使用される濃度は、本発明において効果を
発揮するよう浸透物質を適当に希釈するのに適した濃度
である。本発明の緩衝剤の実施形態（ｂ）及び（ｃ）に
おいては、浸透物質は好ましくは最終的な濃度で包含さ
れている。前記最終濃度の範囲及び限定は、上述の通り
である。
【００３１】
【実施例】 ［実施例１］シリコン粒子及び両性イオン浸透物質の存
在下でのポリメレース連鎖反応（ＰＣＲ） 本実施例では、核酸鋳型に依存したＰＣＲ反応における
純粋なシリコン表面等の非活性表面による阻害効果がベ
タインなどの浸透物質の存在により低減されることを示
す。なお、本実施例では、Ｓｉｇｍａ社から市販されて
いるグリシンベタインを用いた。
在下でのポリメレース連鎖反応（ＰＣＲ） 本実施例では、核酸鋳型に依存したＰＣＲ反応における
純粋なシリコン表面等の非活性表面による阻害効果がベ
タインなどの浸透物質の存在により低減されることを示
す。なお、本実施例では、Ｓｉｇｍａ社から市販されて
いるグリシンベタインを用いた。
【００３２】シリコンは、半導体技術において非常に重
要な材料であるばかりでなく、生物分野においても重要
である。これはこの物質の取り扱いが容易であり、ま
た、三次元の微小構造を迅速に形成することができるこ
とに由来する。そのため、ＰＣＲを初めとして、純粋な
シリコンの存在下における種々の実験は、例えば、シリ
コン懸濁液を用いた生物学的プロセスの小型化モデルの
確立という観点から、将来大変重要となる。純粋なシリ
コンは、種々の原因より一般にＰＣＲのような生物学的
プロセスを阻害することが知られている。これらの原因
の一つとして、例えば、微少な反応チャンバ内の極小さ
な容積に比して、かなり大きな表面と分子とが相互作用
を行うことが考えられる。
要な材料であるばかりでなく、生物分野においても重要
である。これはこの物質の取り扱いが容易であり、ま
た、三次元の微小構造を迅速に形成することができるこ
とに由来する。そのため、ＰＣＲを初めとして、純粋な
シリコンの存在下における種々の実験は、例えば、シリ
コン懸濁液を用いた生物学的プロセスの小型化モデルの
確立という観点から、将来大変重要となる。純粋なシリ
コンは、種々の原因より一般にＰＣＲのような生物学的
プロセスを阻害することが知られている。これらの原因
の一つとして、例えば、微少な反応チャンバ内の極小さ
な容積に比して、かなり大きな表面と分子とが相互作用
を行うことが考えられる。
【００３３】ＰＣＲにおける純粋なシリコン表面の阻害
効果を試験するために、モデルシステムとして、破砕し
たシリコン粒子の存在下、Ｍ１３ベクターに挿入された
１．２ｋｂのヒト染色体ＤＮＡをＰＣＲにより増幅する
実験を行った。
効果を試験するために、モデルシステムとして、破砕し
たシリコン粒子の存在下、Ｍ１３ベクターに挿入された
１．２ｋｂのヒト染色体ＤＮＡをＰＣＲにより増幅する
実験を行った。
【００３４】反応を行うに当たり、水（図１、レーン２
から５）または１Ｍベタイン溶液（図１、レーン６から
９）に懸濁された種々の量（１０、５０、７５）のシリ
コン粒子、０．２μＭ以下配列を有する２種のプライマ
ー、１００μＭ各ｄＮＴＰ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 及
び２．５ユニットＴａｑポリメレースを含有した１倍濃
度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８
及び５０ｍＭ ＫＣｌ）に、１ｎｇのＭ１３ＤＮＡを懸
濁し、最終容量を５０μｌとしたものを準備した。上記
２種のプライマーの配列は、Ｍ１３−４０（２４塩基）
が、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-３’（配列番号
１）であり、また、Ｍ１３−Ｒｅｖ（２４塩基）が、
５’−TTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-３’（配列番号２）
である。また、上記においてベタインを含有する反応液
の場合には、必要な量の水と５Ｍベタインの保存溶液と
を混合し最終反応容量の５０μｌに調整した。
から５）または１Ｍベタイン溶液（図１、レーン６から
９）に懸濁された種々の量（１０、５０、７５）のシリ
コン粒子、０．２μＭ以下配列を有する２種のプライマ
ー、１００μＭ各ｄＮＴＰ、１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 及
び２．５ユニットＴａｑポリメレースを含有した１倍濃
度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８
及び５０ｍＭ ＫＣｌ）に、１ｎｇのＭ１３ＤＮＡを懸
濁し、最終容量を５０μｌとしたものを準備した。上記
２種のプライマーの配列は、Ｍ１３−４０（２４塩基）
が、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-３’（配列番号
１）であり、また、Ｍ１３−Ｒｅｖ（２４塩基）が、
５’−TTTCACACAGGAAACAGCTATGAC-３’（配列番号２）
である。また、上記においてベタインを含有する反応液
の場合には、必要な量の水と５Ｍベタインの保存溶液と
を混合し最終反応容量の５０μｌに調整した。
【００３５】なお、ここで用いたシリコン粒子は、約
０．５ｍｍ ｘ ０．５ｍｍ ｘ ０．３ｍｍのものを
用いた。
０．５ｍｍ ｘ ０．５ｍｍ ｘ ０．３ｍｍのものを
用いた。
【００３６】上記混合液を調整後、以下の条件下でＰＣ
Ｒを行った。ＰＣＲの条件は、９４℃、２０秒間（変
性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、７３℃、２
分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイクル繰り返し
た。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気泳動溶液
（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブロモフェ
ノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で電気泳動
を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ−Ｂｓｔ
ＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
Ｒを行った。ＰＣＲの条件は、９４℃、２０秒間（変
性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、７３℃、２
分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイクル繰り返し
た。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気泳動溶液
（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブロモフェ
ノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で電気泳動
を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ−Ｂｓｔ
ＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
【００３７】電気泳動の結果を図１に示す。なお、図１
の各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２から５：水及び
種々の量のシリコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰ
ＣＲ（５０μｌ）；レーン２：１０粒子；レーン３：５
０粒子；レーン４：７５粒子；レーン５：対照粒子ゼ
ロ；レーン６から９：１Ｍのベタイン及び種々の量のシ
リコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰＣＲ（５０μ
ｌ）；レーン６：１０粒子；レーン７：５０粒子；レー
ン８：７５粒子；レーン９：対照粒子ゼロ。
の各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２から５：水及び
種々の量のシリコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰ
ＣＲ（５０μｌ）；レーン２：１０粒子；レーン３：５
０粒子；レーン４：７５粒子；レーン５：対照粒子ゼ
ロ；レーン６から９：１Ｍのベタイン及び種々の量のシ
リコン粒子を用いてバッファ中で行ったＰＣＲ（５０μ
ｌ）；レーン６：１０粒子；レーン７：５０粒子；レー
ン８：７５粒子；レーン９：対照粒子ゼロ。
【００３８】図１に示す通り、シリコン粒子の添加量の
増加による阻害効果が、ＰＣＲバッファー中に添加され
た種々のモル濃度のベタインにおいて示された。
増加による阻害効果が、ＰＣＲバッファー中に添加され
た種々のモル濃度のベタインにおいて示された。
【００３９】［実施例２］シリコン粉末及び両性イオン
浸透物質の存在下でのＰＣＲに対する影響 上述したＳｈｏｆｆｎｅｒらにより、近年、ＰＣＲ反応
へのシリコン粉末の阻害効果が示されている。本実施例
は、ＰＣＲの反応バッファー中に浸透物質、例えば両性
イオン浸透物質であるベタインを添加することにより、
上記阻害効果を効果的に低減させることができることを
示す。
浸透物質の存在下でのＰＣＲに対する影響 上述したＳｈｏｆｆｎｅｒらにより、近年、ＰＣＲ反応
へのシリコン粉末の阻害効果が示されている。本実施例
は、ＰＣＲの反応バッファー中に浸透物質、例えば両性
イオン浸透物質であるベタインを添加することにより、
上記阻害効果を効果的に低減させることができることを
示す。
【００４０】ＰＣＲ実験は、モデルシステムとして、ヒ
ト染色体ＤＮＡ由来の１．５ｋｂ断片が挿入されたＭ１
３ベクターを用いて行った。シリコンを含有するＰＣＲ
反応液は、４．６ｍｇシリコン粉末（Ｓｉｇｍａ社、３
２５メッシュ、純度９９％、製品番号２１５６１−９）
を最終容量として１００μｌに調整した。ここで純粋な
シリコン粉末の濃度は、前記Ｓｈｏｆｆｎｅｒらにより
示されたＰＣＲ反応を阻害する濃度とした。
ト染色体ＤＮＡ由来の１．５ｋｂ断片が挿入されたＭ１
３ベクターを用いて行った。シリコンを含有するＰＣＲ
反応液は、４．６ｍｇシリコン粉末（Ｓｉｇｍａ社、３
２５メッシュ、純度９９％、製品番号２１５６１−９）
を最終容量として１００μｌに調整した。ここで純粋な
シリコン粉末の濃度は、前記Ｓｈｏｆｆｎｅｒらにより
示されたＰＣＲ反応を阻害する濃度とした。
【００４１】ＰＣＲを行うに当たり、以下の反応液を調
整した。すなわち、１倍濃度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８及び５０ｍＭ ＫＣｌ）、水
（図２、レーン２）あるいは４．６ｍｇシリコン粉末を
含有する溶液（図２、レーン３から８）、１ｎｇＭ１３
ＤＮＡ、０．３μＭ Ｍ１３−４０プライマーＤＮＡ
（２４塩基、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-３’
（配列番号１））、０．３μＭ Ｍ１３−Ｒｅｖプライ
マーＤＮＡ（２４塩基、５’−TTTCACACAGGAAACAGCTATG
AC-３’（配列番号２））、２００μＭ各ｄＮＴＰ、
１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 及び１０ユニットＴａｑポリメ
レースを、最終容量として１００μｌに調整したものを
準備した。前記４．６ｍｇシリコン粉末を含有する溶液
は、水（図２、レーン３）、０．５Ｍベタイン溶液（図
２、レーン４）、１Ｍベタイン溶液（図２、レーン
５）、２Ｍベタイン溶液（図２、レーン６）を用いて調
整した。また、上記においてベタインを含有する反応液
の場合には、必要な量の水と５Ｍベタインの保存溶液と
を混合して最終容量の１００μｌに調整した。
整した。すなわち、１倍濃度の緩衝液（１０ｍＭ Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ，ｐＨ８．８及び５０ｍＭ ＫＣｌ）、水
（図２、レーン２）あるいは４．６ｍｇシリコン粉末を
含有する溶液（図２、レーン３から８）、１ｎｇＭ１３
ＤＮＡ、０．３μＭ Ｍ１３−４０プライマーＤＮＡ
（２４塩基、５’−CGCCAGGGTTTTCCCAGTCACGAC-３’
（配列番号１））、０．３μＭ Ｍ１３−Ｒｅｖプライ
マーＤＮＡ（２４塩基、５’−TTTCACACAGGAAACAGCTATG
AC-３’（配列番号２））、２００μＭ各ｄＮＴＰ、
１．５ｍＭ ＭｇＣｌ2 及び１０ユニットＴａｑポリメ
レースを、最終容量として１００μｌに調整したものを
準備した。前記４．６ｍｇシリコン粉末を含有する溶液
は、水（図２、レーン３）、０．５Ｍベタイン溶液（図
２、レーン４）、１Ｍベタイン溶液（図２、レーン
５）、２Ｍベタイン溶液（図２、レーン６）を用いて調
整した。また、上記においてベタインを含有する反応液
の場合には、必要な量の水と５Ｍベタインの保存溶液と
を混合して最終容量の１００μｌに調整した。
【００４２】上記混合液調整後、以下の条件下でＰＣＲ
反応を行った。すなわち、ＰＣＲの条件は、９４℃、２
０秒間（変性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、
７３℃、２分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイク
ル繰り返した。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気
泳動溶液（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブ
ロモフェノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で
電気泳動を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ
−ＢｓｔＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
反応を行った。すなわち、ＰＣＲの条件は、９４℃、２
０秒間（変性）、５５℃、３０秒間（アニーリング）、
７３℃、２分３０秒間（伸長）とし、これを３０サイク
ル繰り返した。反応後、５μｌの反応液に２μｌの電気
泳動溶液（７０％グリセロール、０．０２ｍｇ／ｍｌブ
ロモフェノールブルー）を混合し、アガロースゲル上で
電気泳動を行った。尚、この際にサイズマーカとしてλ
−ＢｓｔＥＩＩを前記ゲル上に同時に泳動した。
【００４３】泳動結果を図２に示す。なお、図２におけ
る各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２：シリコン粉末
を包含しない標準的なＰＣＲバッファ中で行ったＰＣ
Ｒ；レーン３から６：１００μｌのＰＣＲ量において
４．６ｍｇのシリコン粉末を用いて行ったＰＣＲ反応；
レーン３：水をベースにしたバッファ；レーン４；０．
５Ｍベタイン溶液；レーン５：１ベタイン溶液；レーン
６；２Ｍベタイン溶液。
る各レーンには、以下のサンプルを泳動した。レーン
１：λ−ＢｓｔＥＩＩマーカ；レーン２：シリコン粉末
を包含しない標準的なＰＣＲバッファ中で行ったＰＣ
Ｒ；レーン３から６：１００μｌのＰＣＲ量において
４．６ｍｇのシリコン粉末を用いて行ったＰＣＲ反応；
レーン３：水をベースにしたバッファ；レーン４；０．
５Ｍベタイン溶液；レーン５：１ベタイン溶液；レーン
６；２Ｍベタイン溶液。
【００４４】図２に示す通り、モル濃度のベタインを用
いたＰＣＲは、ＰＣＲを効果的かつ特定的に増幅し、シ
リコン表面の阻害効果を低減させることができることが
示された。
いたＰＣＲは、ＰＣＲを効果的かつ特定的に増幅し、シ
リコン表面の阻害効果を低減させることができることが
示された。
【００４５】
【発明の効果】以上の通り、本発明の浸透物質を用いる
ことにより、非活性表面に対する生物分子の非共有結合
による相互作用を削減または破壊することができる。こ
の結果、種々の生物学的実験の効率を向上させることが
可能となる。
ことにより、非活性表面に対する生物分子の非共有結合
による相互作用を削減または破壊することができる。こ
の結果、種々の生物学的実験の効率を向上させることが
可能となる。
【００４６】
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列： CGCCAGGGTT TTCCCAGTCA CGAC 24 配列番号：２ 配列の長さ：２４ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：他の核酸 合成ＤＮＡ 配列： TTTCACACAG GAAACAGCTA TGAC 24
【図面の簡単な説明】
【図１】 シリコン粒子及び両性イオン浸透物質の存在
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
【図２】 シリコン粉末及び両性イオン浸透物質の存在
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
下におけるＰＣＲ産物を電気泳動した際のパターンを示
す図である。
Claims (13)
- 【請求項１】 非活性表面に対する生物分子の非共有結
合による相互作用を削減または破壊するための浸透物質
の使用。 - 【請求項２】 前記浸透物質が両性イオン浸透物質であ
る請求項１に記載の浸透物質の使用。 - 【請求項３】 前記両性イオン浸透物質が以下の構造か
らなる請求項２に記載の浸透物質の使用。 【化１】 Ｒ1，Ｒ2およびＲ3はＨ（水素），ＣＨ3，Ｃ2Ｈ5または
その他任意のアルキルであり、Ｒ’は任意のアミノ酸残
基である。 - 【請求項４】 前記両性イオン浸透物質がアミノ酸また
はアミノ酸のメチル化産物である請求項３に記載の浸透
物質の使用。 - 【請求項５】 前記両性イオン浸透物質がグリシンベタ
インまたはその他のベタインである請求項３に記載の浸
透物質の使用。 - 【請求項６】 前記浸透物質が最終濃度として１から
２．５Ｍの濃度で存在する請求項１〜５のいずれかに記
載の浸透物質の使用。 - 【請求項７】 前記生物分子が巨大分子である請求項１
〜６のいずれかに記載の浸透物質の使用。 - 【請求項８】 巨大分子が炭水化物、ポリ核酸、ポリペ
プチド、これらの組み合わせ、またはこれらの修飾物で
ある請求項１〜６のいずれかに記載の浸透物質の使用。 - 【請求項９】 生物分子がペプチド、オリゴヌクレオチ
ド、これらの組み合わせ、またはこれらの修飾物質であ
る請求項１〜６のいずれかに記載の浸透物質の使用。 - 【請求項１０】 前記ポリ核酸及び前記オリゴヌクレオ
チドがＤＮＡである請求項８又は９に記載の浸透物質の
使用。 - 【請求項１１】 前記ポリ核酸及び前記オリゴヌクレオ
チドがＲＮＡである請求項８又は９に記載の浸透物質の
使用。 - 【請求項１２】 非活性表面がシリコン表面、シリコン
ウェーハ、ガラス表面、これらの組み合わせまたはこれ
らの化学修飾物である請求項１〜１１のいずれかに記載
の浸透物質の使用。 - 【請求項１３】 上記請求項１〜１２のいずれかに記載
された浸透物質の濃縮保存溶液と、 上記請求項１〜１２のいずれかに記載された浸透物質を
含有する反応緩衝液調整物質と、 上記請求項１〜１２のいずれかに記載された浸透物質を
含有した酵素調整物質と、を少なくとも含むキット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE96108278.1 | 1996-05-23 | ||
| EP96108278A EP0808906B1 (en) | 1996-05-23 | 1996-05-23 | Use of an osmolyte for reducing or abolishing non-covalent interactions of biological molecules to inert surfaces |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1066596A true JPH1066596A (ja) | 1998-03-10 |
| JP4113603B2 JP4113603B2 (ja) | 2008-07-09 |
Family
ID=8222814
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP13337097A Expired - Fee Related JP4113603B2 (ja) | 1996-05-23 | 1997-05-23 | 浸透物質の使用 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0808906B1 (ja) |
| JP (1) | JP4113603B2 (ja) |
| AT (1) | ATE196510T1 (ja) |
| DE (1) | DE69610410T2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999009213A1 (en) * | 1997-08-14 | 1999-02-25 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Methods for dna amplification and kits therefor |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE551433T1 (de) | 2005-05-06 | 2012-04-15 | Gen Probe Inc | Verfahren und produkte zum erfassen von nukleinsäurezielen |
| JP7096482B2 (ja) * | 2017-12-05 | 2022-07-06 | 藤倉化成株式会社 | 感作された不溶性担体粒子を含有する免疫測定試薬の劣化防止手段 |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0153875A3 (en) * | 1984-03-01 | 1987-06-24 | The State Of Victoria | Enzyme-linked immunosorbent assay method and test kit |
| DE3717402A1 (de) * | 1987-05-23 | 1988-12-08 | Behringwerke Ag | Verfahren zur bestimmung von proteinen und mittel dazu |
| US5047326A (en) * | 1988-10-07 | 1991-09-10 | Eastman Kodak Company | Immunmological reagent composition and its use in the determination of chlamydial or gonococcal antigens |
| CA2134474C (en) * | 1992-05-01 | 1999-07-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Microfabricated sperm handling devices |
| DE69531487T2 (de) * | 1994-01-31 | 2004-06-17 | The Regents Of The University Of California, Oakland | Methode zur eliminierung von sequenzierartefakten |
| US5512462A (en) * | 1994-02-25 | 1996-04-30 | Hoffmann-La Roche Inc. | Methods and reagents for the polymerase chain reaction amplification of long DNA sequences |
| DE4411588C1 (de) * | 1994-03-30 | 1995-09-28 | Deutsches Rheuma Forschungszen | Puffer für DNA- und RNA-Polymerase-Reaktionen |
-
1996
- 1996-05-23 DE DE69610410T patent/DE69610410T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-05-23 AT AT96108278T patent/ATE196510T1/de active
- 1996-05-23 EP EP96108278A patent/EP0808906B1/en not_active Expired - Lifetime
-
1997
- 1997-05-23 JP JP13337097A patent/JP4113603B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999009213A1 (en) * | 1997-08-14 | 1999-02-25 | Takara Shuzo Co., Ltd. | Methods for dna amplification and kits therefor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE69610410D1 (de) | 2000-10-26 |
| JP4113603B2 (ja) | 2008-07-09 |
| EP0808906A1 (en) | 1997-11-26 |
| ATE196510T1 (de) | 2000-10-15 |
| DE69610410T2 (de) | 2001-05-10 |
| EP0808906B1 (en) | 2000-09-20 |
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