JPH1077300A

JPH1077300A - プロリルエンドペプチダーゼ阻害ペプチド

Info

Publication number: JPH1077300A
Application number: JP8252222A
Authority: JP
Inventors: Yoshiyuki Saito; 義幸斉藤; Arata Oura; 新大浦; Shoji Kawato; 章嗣川戸; Koji Suginami; 孝二杉並; Satoshi Imayasu; 聰今安
Original assignee: Gekkeikan Sake Co Ltd
Current assignee: Gekkeikan Sake Co Ltd
Priority date: 1996-09-04
Filing date: 1996-09-04
Publication date: 1998-03-24
Anticipated expiration: 2016-09-04
Also published as: JP3880664B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】ペプチドＬｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｒ
ｏ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｌａ
及び／又はｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ（又はＧ
ｌｙ）−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ（又はＡｓｎ）−Ｔｈｒ（又は
Ｖａｌ）−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ
（又はＡｓｎ）−Ｐｒｏ−Ａｒｇを、清酒又は酒粕の蛋
白分解酵素処理、クロマトグラフィー処理により分離、
採取する。【効果】本ペプチドは、すぐれたプロリルエンドペプ
チダーゼ阻害能を有するだけでなく、天然物由来である
ため安全性が高く、痴呆症の予防、治療に有用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、米蛋白由来のペプ
チド及び／又はその誘導体を有効成分とするプロリルエ
ンドペプチダーゼ阻害剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】高齢化社会を迎えた現代にとって老人医
療の重要性が大きくクローズアップされている。その中
でも痴呆症の予防や治療は、本人だけでなく家族や社会
を含めた大きな問題となっている。痴呆症の代表的なも
のには脳血管性痴呆とアルツハイマー型痴呆があり、前
者に比べ後者は原因が未だ完全には解明されていない。
また、アルツハイマー型痴呆は健忘症とも言われ、短期
間の記憶の消失以外には他の運動能力などにあまり障害
が現れないため、介護に重い負担がかかり問題となって
いて治療法の開発が急務となっている。このようにバッ
クグラウンドや発症機構は未だ不明な点も多いが、治療
薬の開発は活発に行われつつあり、臨床試験にまで進ん
でいるものもある。

【０００３】プロリルエンドペプチダーゼ（以下、ＰＥ
Ｐということもある）（ＥＣ３．４．２１．２６）は、
プロリンに特異性を持ち、そのカルボキシル基側でペプ
チドを切断するセリンプロテアーゼで、脳、睾丸、肝臓
での活性が高いことが知られている（蛋白質核酸酵素、
２５、５１３−５２３、（１９８０）、蛋白質核酸酵
素、２９、１２７−１３３、（１９８４））。ＰＥＰは
神経伝達物質サブスタンスＰや記憶に関係していると考
えられるＴＨＲ（甲状腺刺激ホルモン）およびバソプレ
ッシンを分解することが知られている。バソプレッシン
は腎臓での水分再吸収に働くペプチドホルモンである
が、脳内で学習、記憶の過程にも関与しており、このホ
ルモンの分解不活性化がおこると健忘症が進行するとい
う事実がある。また、痴呆症患者のバソプレッシン量
は、正常人のそれより少ないことがわかっている（ＢＩ
ＯＩＮＤＵＳＴＲＹ、４、７８８−７９６、（１９８
７））。

【０００４】バソプレッシンのＰＥＰによる分解は、下
記化１に示される。健康人では脳でのＰＥＰが正常に働
いているが、何らかの理由で調節機構がはずれるとバソ
プレッシンが必要以上に分解され、記憶保持に傷害が現
れる。したがって、この酵素の活性を阻害し痴呆症の治
療をめざす研究がなされている。例えば、プロリルプロ
リナール誘導体（蛋白質核酸酵素、２９、１２７、（１
９８４））、Ｎ−アシルピロリジン誘導体（特開昭６１
−３７７６４、特開昭６１−１８３２９７、特開昭６１
−２３８７７５、特開昭６１−２３８７９９、特開昭６
２−１１４９５７）などがスクリーニングされている。

【０００５】

【化１】

【０００６】しかし、これらは合成品のため安全性に問
題があり、また構造が類似であるため既に構造活性相関
が明らかとなっているのが現状である（ＡＢＣ、５５、
３７−４３、（１９９１））。このような現状を打破す
るために、安全でしかも合成阻害剤にないユニークな構
造を持った阻害物質が求められている。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
業界のニーズに応えるためになされたものであって、特
に安全性の高いすぐれたＰＥＰ阻害剤を開発する目的で
なされたものである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、本発明者らは、天
然物質中に副作用のないプロリルエンドペプチダーゼ阻
害物質を鋭意検索した結果、米蛋白中に本阻害物質の存
在を認め、当該物質がペプチドＡ：Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓ
ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｓ
ｎ−Ａｌａ、ペプチドＢ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−
Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔ
ｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、ペプチドＣ：
ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−
Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇという構造のペプチドであることを見いだ
し本発明を完成した。本ペプチドの配列は蛋白質データ
ーベースの検索から米蛋白のグリテリン上にあることが
明らかとなった。すなわち、図１に示す、米蛋白グルテ
リンのアミノ酸配列において、Ａは白抜きの位置に、Ｃ
は枠で囲んだ位置に、Ｂは網かけの部分に示す位置に存
在することが判明した。米は日本人が従来から主食とし
た食品であり、米に存在するペプチドは安全性からはな
んら問題のないものである。

【０００９】本発明のペプチドは、米蛋白質から得られ
るが、米蛋白質のほか、米蛋白質含有物質からも得るこ
とができる。米蛋白質含有物質としては、玄米、白米、
糠、また、米を原料とする醸造食品（清酒、味りん、味
噌、醤油など）のほか、その副産物（糠、粕など）から
も得ることができる。

【００１０】本発明のペプチドは、米蛋白質（含有物
質）を分解することによって製造し、酵素分解、化学的
分解、物理的分解等既知の蛋白分解法が適宜使用され
る。酵素分解法はマイルドな条件で行われるので生成ペ
プチドの変性が低い等の利点があり、ペプシン、トリプ
シン、キモトリプシン、フイシンといった動植物起源の
蛋白質分解酵素のほか、微生物起源の蛋白質分解酵素を
用いて処理すればよい。

【００１１】この場合、清酒等発酵が充分に行われたも
のを原料とする場合には、蛋白質分解酵素で処理する必
要はなく、必要あれば濃縮した後、直ちに抽出工程に入
ればよい。また、未処理の米蛋白質のように蛋白質分解
が行われていないものを原料としたり、粕や糠といった
発酵副産物であって分解が充分に行われていないものを
原料とする場合には、酵素処理することが好適である。

【００１２】本発明のペプチドは、米だけからでなく、
その他の穀類、肉類、その他の天然物やその分解物から
単離精製することや、加水分解酵素の逆反応を利用した
ペプチド合成法、遺伝子工学的手法、有機化学的手法で
のペプチド合成法により製造することができる。

【００１３】天然物中からの分離精製は、有姿のままか
必要ならば酸、アルカリ、または酵素により分解したも
のを、必要ならば抽出、濃縮したのち種々の吸着剤に対
する吸着親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性の差、
分子篩効果による溶出速度の差などの通常分離精製に用
いられる方法や、それらを適宜組み合わせておこなえば
よい。

【００１４】例えば、米蛋白質から本ペプチドを分離精
製するには、液化液による清酒醸造法（今安聰ら：農
化，６３，９７１（１９８９））により米から醸造した
清酒を、減圧濃縮した濃縮液を原材料とするか、そのと
きの酒粕を蛋白源とし、それを蛋白分解酵素で分解、濃
縮しプロリルエンドペプチダーゼ阻害活性を指標とし、
種々のクロマトグラフィー、例えば、ＳＰ−セファデッ
クスＣ−２５（ファルマシア社製）、ＳＰ−トヨパール
６５０Ｓ（東ソー社製）によるイオン交換クロマトグラ
フィー、セファデックスＧ−１５（ファルマシア社
製）、トヨパールＨＷ−４０（東ソー社製）によるゲル
濾過、ＣＡＰＣＥＬＬＰＡＫＣ１８（資生堂製）、Ｃ
ｏｓｍｏｓｉｌＣ１８（ナカライテスク社製）などによ
る逆相クロマトグラフィーなどにより実施することがで
きる。

【００１５】このようにして得られたペプチドは、後記
する実施例からも明らかなように、卓越したＰＥＰ阻害
能を有し、しかも天然物由来であって安全であり、現に
ウィスター系マウス１０匹を用いた１０日間の急性毒性
試験においても、１０００ｍｇ／ｋｇの経口投与でも死
亡例は認められず、高い安全性が確認された。したがっ
て、本ペプチドは、ＰＥＰ阻害剤、ヒトの痴呆症の予
防、治療剤としてきわめて有用である。また本発明にお
いては、上記ペプチドのほか、上記ペプチドを基本骨格
とし、このペプチドのＮ末端及び／又はＣ末端から任意
のアミノ酸を除いたり、及び／又は、別のアミノ酸等他
の物質に置換してなるペプチド誘導体も、上記ペプチド
と同様に使用することができる。

【００１６】上記目的のために、本ペプチドは非経口的
又は経口的に投与すればよいが、それらの投与方法に適
した形態に製剤することができる。注射剤としての形態
は本ペプチドを製薬補助剤（ｐＨ調節剤、等張剤、保存
剤など）と共に無菌的に溶解すればよい。経口投与剤は
製薬補助剤と共に薬剤の形態（錠剤、カプセル、顆粒剤
など）をとれば良い。その他、吸入剤、外用剤としての
利用も可能である。また本ペプチドは天然型のアミノ酸
のみを含むので安定性が極めて高く、継続的に経口摂取
可能であることから、既存の食品に含有させて痴呆症の
予防、または治療の機能を持たせた機能性食品、特定保
健用食品、栄養剤、または健康食品として食してもよ
い。

【００１７】本ペプチドをヒトに対して適用するには、
静脈、筋肉、又は経口投与するのが好ましい。本ペプチ
ドの薬学的に有効な投与量は、患者の年令および個人個
人の症状等によって異なるが、通常、静脈投与の場合は
ヒト１人当り１日に本ペプチドを０．０１〜１０００ｍ
ｇ／ｋｇ投与し、筋肉投与の場合はヒト１人当り１日に
本ペプチドを０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ投与し、経
口投与の場合はヒト１人当り１日に本ペプチドを０．５
〜２０００ｍｇ／ｋｇ、望ましくは１〜１０００ｍｇ／
ｋｇ投与する。

【００１８】

【実施例１】プロリルエンドペプチダーゼ阻害活性の測
定と阻害ペプチドの精製を次のようにして行った。

【００１９】１）ＰＥＰ阻害活性測定法下記表１の手法にしたがい、ＰＥＰの阻害活性を測定し
た。

【００２０】

【表１】

【００２１】すなわち、ＰＥＰ（フラボバクテリウム属
菌由来）溶液、緩衝液、サンプルを混合した（３０℃、
５分間）。次いでジオキサンにとかした合成基質（Ｚ−
Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ｐＮＡ、Ｚ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｚ−Ｎ
Ｎａｐ、及び／又はＺ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−ＭＣＡ）を加
えて、３０℃で１０分間反応させた。そして塩酸を加え
た後、ＯＤ４１０ｎｍで吸光度を測定した。

【００２２】２）ＰＥＰ阻害ペプチドの精製（１）：酒
粕起源液化液による清酒醸造法により米から清酒を醸造したと
きの酒粕（水分３６％）を１００ｇを２ｌの水に懸濁し
ペプシン（１：６０，０００、シグマ社製）を４０ｍｇ
加え、３７℃、ｐＨ１．５で１時間反応させ、中和した
後、沸騰水浴中で１０分間加熱し、反応を停止した。５
０００回転１０分間の遠心分離により溶解物を得て凍結
乾燥により分解物５．８ｇを得た。次に、０．１％ＴＦ
Ａ含有２０％アセトニトリルで平衡化したフジシリシア
製クロマトレックスＯＤＳ（ＤＭ１０２０Ｔ）に、同様
のバッファーに溶解した液化粕ペプシン分解物（凍結乾
燥品）を吸着させた。その後、アセトニトリル６０％で
溶出させた。

【００２３】吸着画分をＰｒｅｐＮｏｖａ−Ｐａｋ
ＨＲＣ１８（６μｍ６０Ａ２５×１００ｍｍ×２）によ
りＴＦＡ、アセトニトリル系（Ａ：１０％ＣＨ₃ＣＮ
ｉｎ０．１％ＴＦＡ、Ｂ：６０％ＣＨ₃ＣＮｉｎ
０．１％ＴＦＡ５ｍｌ／ｍｉｎＢ．ｃｏｎｃ２０
−５０％／２０ｍｉｎ）で分画した。次に、活性画分を
更にＳｈｏｄｅｘＡｓａｈｉｐａｋＧＳ３２０
２Ｆ２１．５×３００ｍｍにより分画した。（Ａ：ｗａ
ｔｅｒ、Ｂ：ＣＨ₃ＣＮ５ｍｌ／ｍｉｎＢ．ｃｏｎ
ｃ．１０％）

【００２４】続いてμＢｏｎｄａｓｐｈｅｒｅ５μｍ
Ｃ４，１００Ａ１９×１５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）に
より精製を進めた。（Ａ：１０％ＣＨ₃ＣＮｉｎ
０．１％ＴＦＡ、Ｂ：６０％ＣＨ₃ＣＮｉｎ０．１
％ＴＦＡ５ｍｌ／ｍｉｎ，Ｂ．ｃｏｎｃ．４０−７０
％／２０ｍｉｎ）ついで、ＣａｐｃｅｌｌｐａｋＣ１８５μｍ，ＡＧ
１２０Ａ１５×２５０ｍｍ（Ｓｈｉｓｅｉｄｏ）に
よって、アルカリ性（Ａ：５％ＣＨ₃ＣＮｉｎ１０
ｍＭ（ＮＨ₄）₂ＣＯ₃，Ｂ：３５％ＣＨ₃ＣＮｉｎ１
０ｍＭ（ＮＨ₄）₂ＣＯ₃３ｍｌ／ｍｉｎ，Ｂ．ｃｏｎ
ｃ．２０−８０％／２０ｍｉｎ）における逆相ＨＰＬＣ
により精製をおこなった。最後に先の活性画分をμＢｏ
ｎｄａｓｐｈｅｒｅ５μｍＣ４，１００Ａ１９×１
５０ｍｍ（Ｗａｔｅｒｓ）により再度分画し（Ａ：１０
％ＣＨ₃ＣＮｉｎ０．０２％ＴＦＡ、Ｂ：６０％Ｃ
Ｈ₃ＣＮｉｎ０．０２％ＴＦＡ５ｍｌ／ｍｉｎ，
Ｂ．ｃｏｎｃ．６０−７０％／２０ｍｉｎ）、阻害物質
のピークを単離した。

【００２５】次に、阻害ペプチドのアミノ酸シーケンス
をおこなった。その結果阻害ペプチドの配列は以下のよ
うであった。Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａ
ｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｌａ

【００２６】３）ＰＥＰ阻害ペプチドの精製（２）：清
酒起源清酒は当社醸造の純米酒（Ｂｅ＋３．０、アルコール
分１９．４％、酸度１．８０、アミノ酸度１．８
７）を用いた。ＴＦＡを０．１％加えた清酒をフジシリ
シア製クロマトレックスＯＤＳ（ＤＭ１０２０Ｔ）に直
接吸着させ、６０％メタノールで洗浄後、１００％メタ
ノールで溶出させた。吸着画分をＣａｐｃｅｌｌｐａｋ
Ｃ１８５ｍｍ，ＡＧ１２０オングストローム
（溶出条件：１０ｍＭ（ＮＨ₄）₂ＣＯ₃、アセトニトリ
ル１１−２９％／２０ｍｉｎ、５ｍｌ／ｍｉｎ．）、
更にＰｕｒｅｓｉｌＣ１８、（Ｗａｔｅｒｓ）（溶
出条件：０．１％ＴＦＡ、アセトニトリル２０−３
５％／２０ｍｉｎ、５ｍｌ／ｍｉｎ．）、Ａｓａｈｉｐ
ａｋＧＳ３２０（Ｓｈｏｄｅｘ）（溶出条件：蒸留
水、５ｍｌ／ｍｉｎ．）で更に精製した。最後にＤｅｌ
ｔａｐａｋＣ４により（溶出条件：０．０２％ＴＦ
Ａ、アセトニトリル３０−６０％／２０ｍｉｎ、５ｍｌ
／ｍｉｎ．）、２個の阻害ペプチドＢ、Ｃを単離した。

【００２７】精製したペプチドをアミノ酸シーケンサー
により配列分析をおこなったが、配列を確認することは
出来なかった。そこで、本ペプチドのＮ末端アミノ酸は
何らかの官能基で保護されていると考え、脱保護を試み
た。種々検討の結果、ピログルタミン酸アミノペプチダ
ーゼ処理により、本ペプチドは脱保護され配列分析が可
能となった。阻害ペプチドは以下の条件で３７℃で２４
時間処理をした（５ｍＭＤＴＴ、１０ｍＭＥＤＴ
Ａ、０．５ｍＵＰｙｒｏｇｌｕｔａｍａｔｅＡｍｉｎ
ｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ，１００ｍＭｐｈｏｓｐｈａｔ
ｅｂｕｆｆｅｒ）。反応液を凍結乾燥後、Ｎ末端が脱
保護されたペプチドを逆相ＨＰＬＣで分取した。脱保護
したペプチドを分取した後（それぞれＢ′、Ｃ′）、ア
ミノ酸配列を次のように決定した。Ｂ′：Ｌｅｕ−Ｐｈ
ｅ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ
−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｃ′：Ｌ
ｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓ
ｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒ
ｇ。

【００２８】また、確認のためＮ末端保護ペプチドの分
子量はレーザー緩衝飛行時間型質量分析計（ＭＡＬＤＩ
ＴＯＦ−ＭＳ）島津−ＫＲＯＴＯＳＫＯＭＰＡＣＴ
ＭＡＬＤＩ III．により測定した。ペプチドＢ、Ｃ
の分子量（ｍ＋Ｈ）+はＭＡＬＤＩＴＯＦ−ＭＳによ
りそれぞれ１６６４、１６６１という値で得られた。ペ
プチドＢの分子量は配列より得られた、Ｂ′の分子量と
ピログルタミン酸残基である１１１の和と一致した。こ
れらの関係は、ＣとＣ′の間にも成り立った。従って我
々は元のペプチドのアミノ酸配列を以下のように決定し
た。Ｂ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓ
ｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ、Ｃ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ。

【００２９】

【実施例２】プロリルエンドペプチダーゼ阻害ペプチド
の合成を次のようにして行った。

【００３０】酒粕から得たペプチドとそのペプチドのＮ
末から、Ｌｅｕを１又は２残基除いたペプチドをペプチ
ド合成機（ベガ社製、ペプチカプラー２２００）により
合成し、ＨＰＬＣにより精製した。プロリルエンドペプ
チダーゼ阻害活性を測定した。阻害率は次の式により算
出し、得られた結果は、下記表２に示した。阻害率＝（Ａ−Ｂ）×１００／ＡＡ＝阻害剤を含まない場合の４１０ｎｍ吸収値Ｂ＝阻害剤を含む場合の４１０ｎｍ吸収値

【００３１】

【表２】

【００３２】

【発明の効果】本発明によって、すぐれたＰＥＰ阻害剤
が得られる。本阻害剤は、ＰＥＰ阻害能にすぐれている
だけでなく、天然物由来であってきわめて安全性が高い
ため、長期間に亘って投与することが可能であり、特に
痴呆症の予防、治療に有用である。

【００３３】また、本発明においては、ペプチドＡ、
Ｂ、Ｃにおいて、これらを基本骨格とし、このペプチド
のＮ末及び／又はＣ末から任意のアミノ酸を除くか、他
の物質に置き換えることによって得られる新規物質も、
すぐれたＰＥＰ阻害能を有し、本発明に係るＰＥＰ阻害
剤として使用することができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】グルテリンのアミノ酸組成を示す。図中、網か
けした部分は、ペプチドＡ、枠で囲んだ部分はペプチド
Ｂ、白抜きの部分はペプチドＣをそれぞれ示す。また、
これらの配列において、ａ、ｂ、ｃは、それぞれ次の文
献から得たものである。ａ：ｐＲＥＥ７７，Ｆ．Ｔａｋａｉｗａ，Ｓ．Ｋｉｋｕ
ｃｈｉ，Ｋ．ａｎｄＯｏｎｏ，ＦＥＢＳＬＥＴＴＥＲ
Ｓ２０６，３３−３５，（１９８６）ｂ：λＲＧ２１，Ｔ．Ｍａｓｕｍｕｒａ，Ｋ．Ｋｉｄｚ
ｕ，Ｙ．Ｓｕｇｉｙａｍａ，Ｎ．Ｍｉｔｓｕｋａｗａ，
Ｔ．Ｈｉｂｉｎｏ，Ｋ．Ｔａｎａｋａ，ａｎｄＳ．Ｆｕ
ｊｉｉ，ＰｌａｎｔＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏ
ｇｙ，１２，７２３−７２５，（１９８９）ｃ：ｐＲＥＥＫ１，Ｆ．Ｔａｋａｉｗａ，Ｓ．Ｋｉｋ
ｕｃｈｉ，Ｋ．ａｎｄＯｏｎｏ，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃ
ｉｄｓＲｅｓ．，１７，３２８９，（１９８９）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】清酒及び／又は酒粕を蛋白分解酵素で処
理した後、クロマトグラフィー処理することにより、下
記するプロリルエンドペプチダーゼ阻害ペプチドＡ、
Ｂ、及び／又はＣを分離、採取すること、を特徴とする
プロリルエンドペプチダーゼ阻害剤の製造方法。（ペプチドＡ）Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａ
ｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｌａ（ペプチドＢ）ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−
Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ（ペプチドＣ）ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−
Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ
【請求項２】下記の配列を有する新規ペプチドＢ及び
／又はＣ。（ペプチドＢ）ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−
Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ（ペプチドＣ）ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−
Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ
【請求項３】ペプチドＡ：Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−
Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａ
ｌａを基本骨格とし、このペプチドのＮ末又は、Ｃ末か
ら任意のアミノ酸を除くか、他の物質に置き換えること
を特徴としたプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤。
【請求項４】ペプチドＢ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇを有効成分と
するプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤。
【請求項５】ペプチドＣ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇを有効成分と
するプロリルエンドペプチダーゼ阻害剤。
【請求項６】ペプチドＢ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ａｒｇを基本骨格と
し、このペプチドのＮ末又は、Ｃ末から任意のアミノ酸
を除くか、他の物質に置き換えることを特徴としたプロ
リルエンドペプチダーゼ阻害剤。
【請求項７】ペプチドＣ：ｐＧｌｕ−Ｌｅｕ−Ｐｈｅ
−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｓｎ−Ｖａｌ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−
Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ａｓｎ−Ｐｒｏ−Ａｒｇを基本骨格と
し、このペプチドのＮ末又は、Ｃ末から任意のアミノ酸
を除くか、他の物質に置き換えることを特徴としたプロ
リルエンドペプチダーゼ阻害剤。