JPH1078435A - 被検物質の免疫化学的測定における感度の上昇 - Google Patents
被検物質の免疫化学的測定における感度の上昇Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 多段処理工程を必要とする不均一イムノアッ
セイにおける逆反応による感度の低下を回避した高感度
イムノアッセイ法の開発。 【解決手段】 被検物質の測定方法に際し、測定すべき
被検物質を含有する可能性があるサンプルを被検物質に
対して結合親和性を有し固相に固定化された第一の受容
体Ｒ１に接触させ、被検物質に対して同様に結合親和性
を有する受容体Ｒ２を加え、得られた免疫複合体をさら
に被検物質および同一のまたは第二の固相に固定化され
た受容体Ｒ３に対して結合親和性を有する結合因子と接
触させ、第一の固相または存在する場合には第二の固相
に結合した被検物質の量を適当な様式で検出する方法。
セイにおける逆反応による感度の低下を回避した高感度
イムノアッセイ法の開発。 【解決手段】 被検物質の測定方法に際し、測定すべき
被検物質を含有する可能性があるサンプルを被検物質に
対して結合親和性を有し固相に固定化された第一の受容
体Ｒ１に接触させ、被検物質に対して同様に結合親和性
を有する受容体Ｒ２を加え、得られた免疫複合体をさら
に被検物質および同一のまたは第二の固相に固定化され
た受容体Ｒ３に対して結合親和性を有する結合因子と接
触させ、第一の固相または存在する場合には第二の固相
に結合した被検物質の量を適当な様式で検出する方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は，被検物質（アナラ
イト）の測定方法に関し、測定すべき被検物質を含有す
る可能性があるサンプルを、被検物質に対して結合親和
性を有し固相に固定化された第一の受容体Ｒ１と接触さ
せ、被検物質に対して同様に結合親和性を有する受容体
Ｒ２を加え、得られた免疫複合体をさらに、被検物質お
よび同一のまたは第二の固相に固定化された受容体Ｒ３
に対して結合親和性を有する結合因子と接触させ、第一
の固相または、存在する場合には第二の固相に結合した
被検物質の量を適当な様式で検出する方法である。
イト）の測定方法に関し、測定すべき被検物質を含有す
る可能性があるサンプルを、被検物質に対して結合親和
性を有し固相に固定化された第一の受容体Ｒ１と接触さ
せ、被検物質に対して同様に結合親和性を有する受容体
Ｒ２を加え、得られた免疫複合体をさらに、被検物質お
よび同一のまたは第二の固相に固定化された受容体Ｒ３
に対して結合親和性を有する結合因子と接触させ、第一
の固相または、存在する場合には第二の固相に結合した
被検物質の量を適当な様式で検出する方法である。
【０００２】
【従来の技術】疾患の原因物質、たとえばウイルス、細
菌、アレルゲン、自己抗体またはある種の医薬に対する
特異的抗体の形成を伴う疾患の診断に慣用される免疫学
的方法は、抗体が原因物質の抗原構造と複合体を形成す
る能力に基づくものである。一般に不均一系イムノアッ
セイとして記載されるこれらの方法の一部では、たとえ
ば特異的抗体（被検物質抗体）の含量を試験すべきサン
プルを、適当な既知の支持体材料上に固定化した疾患原
因物質の抗原構造と接触させる。サンプル中に含まれる
被検物質抗体は支持体材料上に固定化された疾患原因物
質の抗原構造に免疫複合体として結合し、検出される。
検出には、サンプルの被検物質抗体と複合体の形成が可
能な検出抗体または他の特異的受容体、たとえばプロテ
インＡが使用される。検出試薬は一般に、結合した抗体
の量を測定技術によって記録可能にする標識をもってい
る。慣用される標識には、たとえば、放射性同位元素、
酵素、蛍光、リン光もしくは発光物質、安定な不対電子
を有する物質、赤血球、ラテックス粒子、磁性粒子およ
び金属ゾルがある。
菌、アレルゲン、自己抗体またはある種の医薬に対する
特異的抗体の形成を伴う疾患の診断に慣用される免疫学
的方法は、抗体が原因物質の抗原構造と複合体を形成す
る能力に基づくものである。一般に不均一系イムノアッ
セイとして記載されるこれらの方法の一部では、たとえ
ば特異的抗体（被検物質抗体）の含量を試験すべきサン
プルを、適当な既知の支持体材料上に固定化した疾患原
因物質の抗原構造と接触させる。サンプル中に含まれる
被検物質抗体は支持体材料上に固定化された疾患原因物
質の抗原構造に免疫複合体として結合し、検出される。
検出には、サンプルの被検物質抗体と複合体の形成が可
能な検出抗体または他の特異的受容体、たとえばプロテ
インＡが使用される。検出試薬は一般に、結合した抗体
の量を測定技術によって記録可能にする標識をもってい
る。慣用される標識には、たとえば、放射性同位元素、
酵素、蛍光、リン光もしくは発光物質、安定な不対電子
を有する物質、赤血球、ラテックス粒子、磁性粒子およ
び金属ゾルがある。
【０００３】これらの方法の場合には、単一段階および
多重段階検出法の両者が知られている。いずれの処理工
程も通常、分離処理（洗浄工程）によって完了する。不
均一イムノアッセイにおける単一工程法の技術は実施が
極めて簡単であるが、すべての疾患標識の検出には適当
ではない。多くの場合技術的理由により、二重または多
重段階処理工程を使用しなければならない。免疫複合体
移送酵素イムノアッセイとして記述される多重段階処理
法も知られている（S. Hashidaら, Journal ofClinical
Laboratory Analysis 8：86-95, 1994）。これらの処
理法では、固相抗原、特異的抗体および標識接合抗原か
らなる総免疫複合体が固相から脱着される。抗体が結合
した固相にピペットで移送したのち、総免疫複合体は結
合され、検出される。
多重段階検出法の両者が知られている。いずれの処理工
程も通常、分離処理（洗浄工程）によって完了する。不
均一イムノアッセイにおける単一工程法の技術は実施が
極めて簡単であるが、すべての疾患標識の検出には適当
ではない。多くの場合技術的理由により、二重または多
重段階処理工程を使用しなければならない。免疫複合体
移送酵素イムノアッセイとして記述される多重段階処理
法も知られている（S. Hashidaら, Journal ofClinical
Laboratory Analysis 8：86-95, 1994）。これらの処
理法では、固相抗原、特異的抗体および標識接合抗原か
らなる総免疫複合体が固相から脱着される。抗体が結合
した固相にピペットで移送したのち、総免疫複合体は結
合され、検出される。
【０００４】これらの方法は極めて特異的であるが、最
初の工程で、固定化された特異的受容体との複合体中に
導入された検出すべき疾患原因物質もしくはそれらに対
する抗体は、以後の反応工程で、本技術分野の熟練者に
は周知の逆反応によって複合体から再び部分的に放出さ
れ、したがって検出反応からエスケープし、その結果と
くに、感度が著しく制限されるという欠点がある。この
ような多重段階処理法の診断効率は、固定化された受容
体と検出すべき物質の間の逆反応速度が高い場合には、
とくに制限される。たとえば疾患原因物質または医薬に
対する低親和性抗体を用いた場合がこれに該当する。こ
れらの影響は、突然変異が多発し、突然変異後に固定化
された特異的受容体との相互作用が低下する疾患原因物
質または疾患標識の検出のための処理過程においてとく
に、本技術分野の熟練者には周知である。
初の工程で、固定化された特異的受容体との複合体中に
導入された検出すべき疾患原因物質もしくはそれらに対
する抗体は、以後の反応工程で、本技術分野の熟練者に
は周知の逆反応によって複合体から再び部分的に放出さ
れ、したがって検出反応からエスケープし、その結果と
くに、感度が著しく制限されるという欠点がある。この
ような多重段階処理法の診断効率は、固定化された受容
体と検出すべき物質の間の逆反応速度が高い場合には、
とくに制限される。たとえば疾患原因物質または医薬に
対する低親和性抗体を用いた場合がこれに該当する。こ
れらの影響は、突然変異が多発し、突然変異後に固定化
された特異的受容体との相互作用が低下する疾患原因物
質または疾患標識の検出のための処理過程においてとく
に、本技術分野の熟練者には周知である。
【０００５】検出すべき物質の構造的特徴に対する更な
る結合因子の添加によって逆反応の速度がかなり低下す
ることは既にEP 0 572 845号に開示されている。この更
なる結合因子は、検出すべき物質に結合できる２以上の
部位をもたねばならず、検出すべき物質の免疫化学的検
出を妨害してはならない。しかしながら、逆反応の著し
い低下にもかかわらず、この方法でも、疾患原因物質ま
たは医薬に対する特異的低親和性抗体を安全かつ高感度
に検出することは可能ではない。
る結合因子の添加によって逆反応の速度がかなり低下す
ることは既にEP 0 572 845号に開示されている。この更
なる結合因子は、検出すべき物質に結合できる２以上の
部位をもたねばならず、検出すべき物質の免疫化学的検
出を妨害してはならない。しかしながら、逆反応の著し
い低下にもかかわらず、この方法でも、疾患原因物質ま
たは医薬に対する特異的低親和性抗体を安全かつ高感度
に検出することは可能ではない。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】したがって、本発明の
基盤は、これらの欠点をもたない試薬の発見を目的とす
るものであった。最初のインキュベーション工程におい
て既に形成された、固定化された特異的結合成分Ｒ１お
よびそれと生物親和性相互作用を示す被検物質の免疫複
合体の、被検物質に対する特異的結合成分であり一般に
標識されているＲ２とのインキュベーションが完了した
のちに、被検物質とＲ２の免疫複合体のかなりの量が溶
液中に存在することが見出された。この量は実際、EP 0
572 845号に記載されたように被検物質に結合できる２
以上の部位をもつ受容体を添加することにより、固相へ
の結合で低下させることができるが、ある種のサンプル
では依然として、固定化された免疫複合体の量を越える
ものである。
基盤は、これらの欠点をもたない試薬の発見を目的とす
るものであった。最初のインキュベーション工程におい
て既に形成された、固定化された特異的結合成分Ｒ１お
よびそれと生物親和性相互作用を示す被検物質の免疫複
合体の、被検物質に対する特異的結合成分であり一般に
標識されているＲ２とのインキュベーションが完了した
のちに、被検物質とＲ２の免疫複合体のかなりの量が溶
液中に存在することが見出された。この量は実際、EP 0
572 845号に記載されたように被検物質に結合できる２
以上の部位をもつ受容体を添加することにより、固相へ
の結合で低下させることができるが、ある種のサンプル
では依然として、固定化された免疫複合体の量を越える
ものである。
【０００７】しかしながら、驚くべきことに、被検物質
および更なる受容体Ｒ３に親和性を有する結合因子の添
加と更なる受容体Ｒ３の固相への固定化により、被検物
質、Ｒ２および結合因子の非固定化免疫複合体の含量は
さらに低下することが見出されたのである。Ｒ２は一般
に標識をもっているので、シグナルの生成量は著しく上
昇し、その結果、被検物質のアッセイの感度も上昇す
る。しかも、被検物質、Ｒ２および結合因子の免疫複合
体の非固定化部分を受容体Ｒ３で実質的に被覆した第二
の固相に移送したのちには、極めて高感度で特異的なア
ッセイを実施できることが見出された。EP 0 572 845号
において「結合因子」と呼ばれた受容体とは異なり、本
発明による結合因子は、被検物質を結合できる１つの部
位を必要とするのみである。本発明の意味での被検物質
は、たとえば疾患原因物質によって誘発された抗体であ
っても、たとえば疾患原因物質自体のような抗原であっ
てもよい。
および更なる受容体Ｒ３に親和性を有する結合因子の添
加と更なる受容体Ｒ３の固相への固定化により、被検物
質、Ｒ２および結合因子の非固定化免疫複合体の含量は
さらに低下することが見出されたのである。Ｒ２は一般
に標識をもっているので、シグナルの生成量は著しく上
昇し、その結果、被検物質のアッセイの感度も上昇す
る。しかも、被検物質、Ｒ２および結合因子の免疫複合
体の非固定化部分を受容体Ｒ３で実質的に被覆した第二
の固相に移送したのちには、極めて高感度で特異的なア
ッセイを実施できることが見出された。EP 0 572 845号
において「結合因子」と呼ばれた受容体とは異なり、本
発明による結合因子は、被検物質を結合できる１つの部
位を必要とするのみである。本発明の意味での被検物質
は、たとえば疾患原因物質によって誘発された抗体であ
っても、たとえば疾患原因物質自体のような抗原であっ
てもよい。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明は、したがって、 (ａ) 被検物質の測定方法において、(１) 測定すべき
被検物質を含有する可能性があるサンプルを、被検物質
に対して結合親和性を有し固相に固定化された第一の受
容体Ｒ１に接触させ、被検物質に対して同様に結合親和
性を有する受容体Ｒ２を加え、得られた免疫複合体を被
検物質および同一のまたは第二の固相に固定化された受
容体Ｒ３に対して結合親和性を有するが固定化された受
容体Ｒ１に対しては結合親和性をもたず標識されていな
い結合因子と接触させ、(２) 第一の固相または、存在
する場合には第二の固相に結合した被検物質の量を適当
な様式で検出する方法、 (ｂ) ａにおいて、受容体Ｒ１および受容体Ｒ３は同一
の固相に固定化され、Ｒ３は被検物質またはＲ２との生
物親和性相互作用に介入しない方法、 (ｃ) ａにおいて、受容体Ｒ１とＲ３とは異なる固相に
固定化されて、受容体Ｒ１、被検物質、受容体Ｒ２およ
び結合因子を合わせたのちに生じる第一の固相に固定化
されない免疫複合体を第二の固相と接触させる方法、 (ｄ) ｃにおいて、固定化されない免疫複合体を含有す
る溶液を第一の固相から分離し、第一の固相とは空間的
に隔離されている第二の固相に移す方法、 (ｅ) ａにおいて、被検物質または受容体Ｒ２が検出可
能な標識をもっている方法、 (ｆ) ｅにおいて、受容体Ｒ２が直接または間接に標識
されている方法、 (ｇ) ａにおいて、被検物質は抗原である方法、 (ｈ) ａにおいて、被検物質は抗体である方法、 (ｉ) ａにおいて、結合因子は抗体または抗体フラグメ
ントおよび更なる構造エレメントを含有する接合体であ
り、抗体または抗体フラグメントは一つの構造エレメン
トに対して結合親和性を有し、更なる構造エレメントは
エレメント被検物質および受容体Ｒ３の群から選択され
る他のエレメントに対して結合親和性を有する方法、 (ｋ) ｉにおいて、結合因子はビオチン化された抗体で
あり、受容体Ｒ３はビオチンに対する抗体である方法、 (ｌ) ｉにおいて、結合因子はビオチン化された抗体で
あり、受容体Ｒ３はアビジンまたはストレプトアビジン
である方法、 (ｍ) ａにおいて、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に
対する抗体を検出するための方法、 (ｎ) ｂにおける方法に使用するための試験キットであ
って、受容体Ｒ１およびＲ３が固定化された固相、なら
びに溶解したまたは溶解可能な形態の結合因子からなる
キット、 (ｏ) ｃにおける方法に使用するための試験キットであ
って、受容体Ｒ１が固定化された第一の固相、受容体Ｒ
３が固定化された第二の固相、および溶解したまたは溶
解可能な形態の結合因子からなるキット、に関する。
被検物質を含有する可能性があるサンプルを、被検物質
に対して結合親和性を有し固相に固定化された第一の受
容体Ｒ１に接触させ、被検物質に対して同様に結合親和
性を有する受容体Ｒ２を加え、得られた免疫複合体を被
検物質および同一のまたは第二の固相に固定化された受
容体Ｒ３に対して結合親和性を有するが固定化された受
容体Ｒ１に対しては結合親和性をもたず標識されていな
い結合因子と接触させ、(２) 第一の固相または、存在
する場合には第二の固相に結合した被検物質の量を適当
な様式で検出する方法、 (ｂ) ａにおいて、受容体Ｒ１および受容体Ｒ３は同一
の固相に固定化され、Ｒ３は被検物質またはＲ２との生
物親和性相互作用に介入しない方法、 (ｃ) ａにおいて、受容体Ｒ１とＲ３とは異なる固相に
固定化されて、受容体Ｒ１、被検物質、受容体Ｒ２およ
び結合因子を合わせたのちに生じる第一の固相に固定化
されない免疫複合体を第二の固相と接触させる方法、 (ｄ) ｃにおいて、固定化されない免疫複合体を含有す
る溶液を第一の固相から分離し、第一の固相とは空間的
に隔離されている第二の固相に移す方法、 (ｅ) ａにおいて、被検物質または受容体Ｒ２が検出可
能な標識をもっている方法、 (ｆ) ｅにおいて、受容体Ｒ２が直接または間接に標識
されている方法、 (ｇ) ａにおいて、被検物質は抗原である方法、 (ｈ) ａにおいて、被検物質は抗体である方法、 (ｉ) ａにおいて、結合因子は抗体または抗体フラグメ
ントおよび更なる構造エレメントを含有する接合体であ
り、抗体または抗体フラグメントは一つの構造エレメン
トに対して結合親和性を有し、更なる構造エレメントは
エレメント被検物質および受容体Ｒ３の群から選択され
る他のエレメントに対して結合親和性を有する方法、 (ｋ) ｉにおいて、結合因子はビオチン化された抗体で
あり、受容体Ｒ３はビオチンに対する抗体である方法、 (ｌ) ｉにおいて、結合因子はビオチン化された抗体で
あり、受容体Ｒ３はアビジンまたはストレプトアビジン
である方法、 (ｍ) ａにおいて、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に
対する抗体を検出するための方法、 (ｎ) ｂにおける方法に使用するための試験キットであ
って、受容体Ｒ１およびＲ３が固定化された固相、なら
びに溶解したまたは溶解可能な形態の結合因子からなる
キット、 (ｏ) ｃにおける方法に使用するための試験キットであ
って、受容体Ｒ１が固定化された第一の固相、受容体Ｒ
３が固定化された第二の固相、および溶解したまたは溶
解可能な形態の結合因子からなるキット、に関する。
【０００９】
【発明の実施の形態】結合因子が標識されていないと
は、本発明の意味では、それが標識をもたないかまたは
少なくとも第一もしくは第二の相への被検物質の結合の
程度を測定するのと同じ標識をもたないことを意味す
る。固定化された受容体Ｒ３を使用できる処理はそれら
のすべての実施態様において本技術分野の熟練者には周
知である。本発明による処理は、最初の工程で被検物質
の好ましくは固定化された特異的受容体への免疫化学的
またはそれに匹敵する結合が行われ、第二の工程で、必
ずしも時間的に別個の工程である必要はないが、直接的
または間接的な検出が行われるすべての免疫化学的処理
に適当な形態で採用できることが重要である。本発明の
処理は、本技術分野の熟練者にサンドイッチＥＬＩＳＡ
として知られている方法での採用が好ましく、標識系と
しては好ましくは酵素の好ましくは発色原もしくは蛍光
原基質との使用、または標識系として化学ルミネッセン
スの使用が好ましい。しかしながら、実施態様の選択は
原理的には本発明の処理の利用可能性には影響しない。
は、本発明の意味では、それが標識をもたないかまたは
少なくとも第一もしくは第二の相への被検物質の結合の
程度を測定するのと同じ標識をもたないことを意味す
る。固定化された受容体Ｒ３を使用できる処理はそれら
のすべての実施態様において本技術分野の熟練者には周
知である。本発明による処理は、最初の工程で被検物質
の好ましくは固定化された特異的受容体への免疫化学的
またはそれに匹敵する結合が行われ、第二の工程で、必
ずしも時間的に別個の工程である必要はないが、直接的
または間接的な検出が行われるすべての免疫化学的処理
に適当な形態で採用できることが重要である。本発明の
処理は、本技術分野の熟練者にサンドイッチＥＬＩＳＡ
として知られている方法での採用が好ましく、標識系と
しては好ましくは酵素の好ましくは発色原もしくは蛍光
原基質との使用、または標識系として化学ルミネッセン
スの使用が好ましい。しかしながら、実施態様の選択は
原理的には本発明の処理の利用可能性には影響しない。
【００１０】用いられる固相は、好ましくはマイクロタ
イタープレート、磁性粒子、ラテックス粒子、またはマ
トリックス−化学試験エレメントたとえば繊維もしくは
膜からなる試験モジュールである。上述のような免疫化
学的方法は、異なる被検物質たとえばＨＩＶ １、ＨＩ
Ｖ２またはＵＣＶ、およびこれらの被検物質に対して産
生される抗体の同時測定に使用できる。このような実施
態様はとくにこの記述により包含される。
イタープレート、磁性粒子、ラテックス粒子、またはマ
トリックス−化学試験エレメントたとえば繊維もしくは
膜からなる試験モジュールである。上述のような免疫化
学的方法は、異なる被検物質たとえばＨＩＶ １、ＨＩ
Ｖ２またはＵＣＶ、およびこれらの被検物質に対して産
生される抗体の同時測定に使用できる。このような実施
態様はとくにこの記述により包含される。
【００１１】本発明の意味では結合因子は、Ｒ２に対す
る１または２以上の生物親和性結合部位を有する特異的
受容体である。さらに、それらは受容体Ｒ３との相互作
用を受ける。結合因子の結合成分（単数または複数）は
抗体、抗体フラグメントまたは抗体もしくは抗体フラグ
メントおよび更なる成分たとえば酵素からなる接合体と
することができる。これらの抗体もしくは抗体フラグメ
ントまたはそれらの接合体は、被検物質あるいは被検物
質およびＲ３に向けられていてもよい。結合因子はま
た、受容体Ｒ３が指向する構造エレメントにカップリン
グする抗体または抗体フラグメントから構成されていて
もよい。
る１または２以上の生物親和性結合部位を有する特異的
受容体である。さらに、それらは受容体Ｒ３との相互作
用を受ける。結合因子の結合成分（単数または複数）は
抗体、抗体フラグメントまたは抗体もしくは抗体フラグ
メントおよび更なる成分たとえば酵素からなる接合体と
することができる。これらの抗体もしくは抗体フラグメ
ントまたはそれらの接合体は、被検物質あるいは被検物
質およびＲ３に向けられていてもよい。結合因子はま
た、受容体Ｒ３が指向する構造エレメントにカップリン
グする抗体または抗体フラグメントから構成されていて
もよい。
【００１２】本発明の意味では受容体Ｒ３は結合因子に
対する１または２以上の生物親和性結合部位を有する特
異的結合成分である。受容体Ｒ３またはこの結合成分の
構成成分は、抗体、抗体フラグメントまたは抗体もしく
は抗体フラグメントおよび更なる成分たとえば酵素から
なる接合体とすることができる。これらの抗体または抗
体フラグメントおよびそれらの接合体は、結合因子に向
けられているか、あるいは結合因子の結合部位によって
認識される抗原構造を含有していてもよい。受容体Ｒ３
はまた、結合因子が指向する構造エレメントにカップリ
ングするタンパク質から構成されていてもよい。
対する１または２以上の生物親和性結合部位を有する特
異的結合成分である。受容体Ｒ３またはこの結合成分の
構成成分は、抗体、抗体フラグメントまたは抗体もしく
は抗体フラグメントおよび更なる成分たとえば酵素から
なる接合体とすることができる。これらの抗体または抗
体フラグメントおよびそれらの接合体は、結合因子に向
けられているか、あるいは結合因子の結合部位によって
認識される抗原構造を含有していてもよい。受容体Ｒ３
はまた、結合因子が指向する構造エレメントにカップリ
ングするタンパク質から構成されていてもよい。
【００１３】抗原の特異的検出のための結合成分の好ま
しい組合せを以下に示す。 Ｒ１： 被検物質に向けられ、固相に固定化された抗
体 被検物質：抗原 Ｒ２： 被検物質に向けられ、標識を提供する抗体
（接合抗体） 結合因子：被検物質に向けられた抗体 Ｒ３： 結合因子に向けられ、固相に固定化された抗
体 抗原の検出に際しては、結合因子としては、固相抗体Ｒ
１または接合抗体Ｒ２の場合と同じエピトープを認識し
ない抗体または抗体フラグメントの使用が好ましい。
しい組合せを以下に示す。 Ｒ１： 被検物質に向けられ、固相に固定化された抗
体 被検物質：抗原 Ｒ２： 被検物質に向けられ、標識を提供する抗体
（接合抗体） 結合因子：被検物質に向けられた抗体 Ｒ３： 結合因子に向けられ、固相に固定化された抗
体 抗原の検出に際しては、結合因子としては、固相抗体Ｒ
１または接合抗体Ｒ２の場合と同じエピトープを認識し
ない抗体または抗体フラグメントの使用が好ましい。
【００１４】特異的抗体の検出のための結合成分の好ま
しい組合せを以下に示す。 Ｒ１： 被検物質がそれに対して向けられた、固相に
固定化された抗原 被検物質：抗体 Ｒ２： 被検物質に向けられ、標識を提供する抗原 結合因子：被検物質に向けられた抗体 Ｒ３： 結合因子に向けられ、固相に固定化された抗
体
しい組合せを以下に示す。 Ｒ１： 被検物質がそれに対して向けられた、固相に
固定化された抗原 被検物質：抗体 Ｒ２： 被検物質に向けられ、標識を提供する抗原 結合因子：被検物質に向けられた抗体 Ｒ３： 結合因子に向けられ、固相に固定化された抗
体
【００１５】特異的抗体の検出のための結合成分のとく
に好ましい組合せを以下に示す。 Ｒ１： 被検物質がそれに対して向けられた、固相に
固定化された抗原 被検物質：抗体 Ｒ２： 被検物質がそれに対して向けられた、標識を
提供する抗原 結合因子：被検物質に向けられ、付加的な非抗体性の内
因性エピトープを有する抗体 Ｒ３： 結合因子の付加的な非抗体性の内因性エピト
ープに向けられ、固相に固定化された抗体
に好ましい組合せを以下に示す。 Ｒ１： 被検物質がそれに対して向けられた、固相に
固定化された抗原 被検物質：抗体 Ｒ２： 被検物質がそれに対して向けられた、標識を
提供する抗原 結合因子：被検物質に向けられ、付加的な非抗体性の内
因性エピトープを有する抗体 Ｒ３： 結合因子の付加的な非抗体性の内因性エピト
ープに向けられ、固相に固定化された抗体
【００１６】抗体および付加的な非抗体性の内因性抗原
（たとえばビオチン）からなる接合体の調製方法は本技
術分野の熟練者には周知である。このような接合体は、
たとえば化学試薬を用いてまたは生物親和性相互作用に
より、それらの出発原料の生物親和性機能を保持させて
調製することができる。ハイブリド分子も化学合成、ハ
イブリドーマ技術または遺伝子操作法によって製造でき
る。
（たとえばビオチン）からなる接合体の調製方法は本技
術分野の熟練者には周知である。このような接合体は、
たとえば化学試薬を用いてまたは生物親和性相互作用に
より、それらの出発原料の生物親和性機能を保持させて
調製することができる。ハイブリド分子も化学合成、ハ
イブリドーマ技術または遺伝子操作法によって製造でき
る。
【００１７】本発明による試薬は、多重処理によるヒト
および動物の診断に使用できる。例としては、ウイルス
（たとえば、Ａ、ＢおよびＣ型肝炎ウイルス、ならびに
各種ＨＩＶ型）の構造特性に対する各種免疫グロブリン
クラスの抗体の検出のための二段階または多重段階試
験、ならびに細菌および寄生虫病原生物、およびアレル
ギー疾患の検出のための処理を挙げることができる。そ
の他の例には、疾患原因物質、たとえばウイルス（たと
えばＢ型肝炎ウイルス）、細菌、寄生虫およびアレルゲ
ン、さらに疾患マーカー（たとえば腫瘍マーカー）の単
一および多重段階検出処理での検出がある。
および動物の診断に使用できる。例としては、ウイルス
（たとえば、Ａ、ＢおよびＣ型肝炎ウイルス、ならびに
各種ＨＩＶ型）の構造特性に対する各種免疫グロブリン
クラスの抗体の検出のための二段階または多重段階試
験、ならびに細菌および寄生虫病原生物、およびアレル
ギー疾患の検出のための処理を挙げることができる。そ
の他の例には、疾患原因物質、たとえばウイルス（たと
えばＢ型肝炎ウイルス）、細菌、寄生虫およびアレルゲ
ン、さらに疾患マーカー（たとえば腫瘍マーカー）の単
一および多重段階検出処理での検出がある。
【００１８】
【実施例】本発明を以下の実施例によってさらに例示す
る。しかしながら、これらの実施例は、いかなる意味に
おいても本発明を限定するものではないことを理解すべ
きである。
る。しかしながら、これらの実施例は、いかなる意味に
おいても本発明を限定するものではないことを理解すべ
きである。
【００１９】実施例１ ａ）固相の調製 マイクロタイタープレートＢ型（Nunc, Roskilde, Denm
ark）を各ウエルあたり１００μlの被覆溶液〔５０mM炭
酸ナトリウム緩衝液，pH９.５中６００μg／mlの組換え
ｇｐ４１（Behringwerke AG, Marburg, FRG）およびビ
オチンに対するモノクローナル抗体（Behringwerke AG,
Marburg, FRG）１０mg／ml〕と４℃において２４時間
インキュベートする。ついでマイクロタイタープレート
のウエルを各回３００μlの洗浄溶液（５０mM tris，
０.１％Tween ２０, pH７.２）により３回洗浄する。シ
リカゲル上で乾燥したマイクロタイタープレートは、空
気を排除しておけば１年間安定である。
ark）を各ウエルあたり１００μlの被覆溶液〔５０mM炭
酸ナトリウム緩衝液，pH９.５中６００μg／mlの組換え
ｇｐ４１（Behringwerke AG, Marburg, FRG）およびビ
オチンに対するモノクローナル抗体（Behringwerke AG,
Marburg, FRG）１０mg／ml〕と４℃において２４時間
インキュベートする。ついでマイクロタイタープレート
のウエルを各回３００μlの洗浄溶液（５０mM tris，
０.１％Tween ２０, pH７.２）により３回洗浄する。シ
リカゲル上で乾燥したマイクロタイタープレートは、空
気を排除しておけば１年間安定である。
【００２０】ｂ）接合体の調製 ＨＩＶ １−ｇｐ４１ペプチド（IAF Biochem, Laval, C
anada）１０mgを１mlの氷酢酸／水（５０:５０, v／v）
に溶解する。５Ｎ水酸化ナトリウム溶液で中和したの
ち、混合物を10倍モル過剰のＮ−γ−マレイミドブチリ
ルスクシンイミドで処理し室温で１時間インキュベート
する。未反応のヘテロ二官能性試薬はゲルろ過により
（Sepadex G-25）１００mMリン酸ナトリウム、５mMニト
リロトリ酢酸、pH６.０を用いて分離する。
anada）１０mgを１mlの氷酢酸／水（５０:５０, v／v）
に溶解する。５Ｎ水酸化ナトリウム溶液で中和したの
ち、混合物を10倍モル過剰のＮ−γ−マレイミドブチリ
ルスクシンイミドで処理し室温で１時間インキュベート
する。未反応のヘテロ二官能性試薬はゲルろ過により
（Sepadex G-25）１００mMリン酸ナトリウム、５mMニト
リロトリ酢酸、pH６.０を用いて分離する。
【００２１】西洋ワサビペルオキシダーゼ（Behringer
Mannheim, Mannheim, FRG）１０mgを１０mlの１０mMリ
ン酸ナトリウム、１００mM食塩、pH８.０中１０倍モル
過剰の２−イミノチオランと室温で１時間インキュベー
トする。ついで、遊離の修飾試薬をゲルろ過により（Se
padex G-25）１００mMリン酸ナトリウム、５mMニトリロ
トリ酢酸、pH６.０を用いて除去する。両溶出液（ＳＨ
−活性化ペルオキシダーゼおよびマレイミド-修飾ＨＩ
Ｖ １ペプチド）を合わせて室温で一夜インキュベート
する。１／１０容量の１００mMＮ−エチルマレイミドで
反応を停止させたのち、接合体を未反応ＨＩＶ １ペプ
チドからゲルろ過により（Sepadex G-25）精製する。濃
縮（２mg／ml）後、接合体は−２０℃に保存する。
Mannheim, Mannheim, FRG）１０mgを１０mlの１０mMリ
ン酸ナトリウム、１００mM食塩、pH８.０中１０倍モル
過剰の２−イミノチオランと室温で１時間インキュベー
トする。ついで、遊離の修飾試薬をゲルろ過により（Se
padex G-25）１００mMリン酸ナトリウム、５mMニトリロ
トリ酢酸、pH６.０を用いて除去する。両溶出液（ＳＨ
−活性化ペルオキシダーゼおよびマレイミド-修飾ＨＩ
Ｖ １ペプチド）を合わせて室温で一夜インキュベート
する。１／１０容量の１００mMＮ−エチルマレイミドで
反応を停止させたのち、接合体を未反応ＨＩＶ １ペプ
チドからゲルろ過により（Sepadex G-25）精製する。濃
縮（２mg／ml）後、接合体は−２０℃に保存する。
【００２２】ｃ) ＨＩＶ １抗体の検出のための２−工
程酵素イムノアッセイ 抗−ＨＩＶ １の検出のための酵素イムノアッセイは以
下のように実施される。すなわち２５μlのサンプル緩
衝液（０.３Ｍ tris／ＨＣｌ，１％アルブミン，２％Tw
een ２０，pH７.２）を実施例１ａに従って調製したマ
イクロタイタープレートのウエル内で１００μlのヒト
血清と３７℃で３０分間インキュベートする。５０mMの
ＰＢＳ、０.１％Tween ２０で４回洗浄したのち、実施
例１ｂに従って調製された接合体（０.１Ｍ tris／ＨＣ
ｌ，１％アルブミン，２％ Pluronic Ｆ６４，pH８.１
中 １：１,０００）１００μlをピペットによって添加
する。３０分間のインキュベーション(＋３７℃)後にさ
らに４回洗浄工程を行う。結合した抗−ＨＩＶ １抗体
の数に正相関する結合ペルオキシダーゼ活性をＨ2Ｏ2／
テトラメチルベンジジンを加えて測定する。室温で３０
分後に、０.５Ｍ硫酸を加えて基質の変換を停止させ
る。吸光度は４５０nmで測定する。
程酵素イムノアッセイ 抗−ＨＩＶ １の検出のための酵素イムノアッセイは以
下のように実施される。すなわち２５μlのサンプル緩
衝液（０.３Ｍ tris／ＨＣｌ，１％アルブミン，２％Tw
een ２０，pH７.２）を実施例１ａに従って調製したマ
イクロタイタープレートのウエル内で１００μlのヒト
血清と３７℃で３０分間インキュベートする。５０mMの
ＰＢＳ、０.１％Tween ２０で４回洗浄したのち、実施
例１ｂに従って調製された接合体（０.１Ｍ tris／ＨＣ
ｌ，１％アルブミン，２％ Pluronic Ｆ６４，pH８.１
中 １：１,０００）１００μlをピペットによって添加
する。３０分間のインキュベーション(＋３７℃)後にさ
らに４回洗浄工程を行う。結合した抗−ＨＩＶ １抗体
の数に正相関する結合ペルオキシダーゼ活性をＨ2Ｏ2／
テトラメチルベンジジンを加えて測定する。室温で３０
分後に、０.５Ｍ硫酸を加えて基質の変換を停止させ
る。吸光度は４５０nmで測定する。
【００２３】ｄ）ビオチン化抗体の調製 １０mlの１０mMリン酸ナトリウム、１００mM食塩、pH
８.０中、ヒト免疫グロブリンＧに対するモノクローナ
ル抗体(Behringwerke AG, Marburg, FRG）１０mgを１０
mMリン酸ナトリウム、１００mM食塩、pH８.０中１０倍
モル過剰のＮ−ヒドロキシスクシンイミド−Ｘ−ビオチ
ンと室温で１時間インキュベートする。ついで遊離の修
飾試薬を１００mM tris、５mMニトリロトリ酢酸、pH７.
０を用いてゲルろ過（Sepadex G-25）により除去する。
８.０中、ヒト免疫グロブリンＧに対するモノクローナ
ル抗体(Behringwerke AG, Marburg, FRG）１０mgを１０
mMリン酸ナトリウム、１００mM食塩、pH８.０中１０倍
モル過剰のＮ−ヒドロキシスクシンイミド−Ｘ−ビオチ
ンと室温で１時間インキュベートする。ついで遊離の修
飾試薬を１００mM tris、５mMニトリロトリ酢酸、pH７.
０を用いてゲルろ過（Sepadex G-25）により除去する。
【００２４】ｅ）本発明の試薬の使用 抗−ＨＩＶ １−陽性および抗−ＨＩＶ １−陰性血清を
実施例１ｃにおける酵素イムノアッセイ（参照システム
Ｉ）により試験する。異常に低い反応性を有する抗−Ｈ
ＩＶ １−陽性サンプルについてはさらに本発明による
アッセイシステム（本発明によるシステムＩ）で試験す
る。このためには、実施例１ｄのように調製されたビオ
チン化抗−ヒトＩｇＧ抗体（１μg／ml）を実施例１ｃ
による接合体溶液にさらに添加する。
実施例１ｃにおける酵素イムノアッセイ（参照システム
Ｉ）により試験する。異常に低い反応性を有する抗−Ｈ
ＩＶ １−陽性サンプルについてはさらに本発明による
アッセイシステム（本発明によるシステムＩ）で試験す
る。このためには、実施例１ｄのように調製されたビオ
チン化抗−ヒトＩｇＧ抗体（１μg／ml）を実施例１ｃ
による接合体溶液にさらに添加する。
【００２５】さらに別の参照システムとして、ビオチン
フラグメントをもたないこの抗−ヒトＩｇＧ抗体を１μ
g／mlの濃度で実施例１ｃの接合体に添加する(参照シス
テムII）。試験の結果（吸光単位）を表１に示す。
フラグメントをもたないこの抗−ヒトＩｇＧ抗体を１μ
g／mlの濃度で実施例１ｃの接合体に添加する(参照シス
テムII）。試験の結果（吸光単位）を表１に示す。
【表１】
【００２６】３つのアッセイシステムにおけるシグナル
形成の著しい差はとくに低親和性のサンプル（たとえば
９１１１／５３）に見ることができる。これらのサンプ
ルでは感度は、参照システムＩに比較してファクター４
まで、参照システムIIに比較して２倍に上昇している。
参照システムＩでも安全に検出される、被覆抗原に対し
て高い親和性を有するサンプルは高い希釈度でも、抗−
ＨＩＶ−陰性血清と同様に、本発明のシステムＩではシ
グナルの増大を示すことがない。
形成の著しい差はとくに低親和性のサンプル（たとえば
９１１１／５３）に見ることができる。これらのサンプ
ルでは感度は、参照システムＩに比較してファクター４
まで、参照システムIIに比較して２倍に上昇している。
参照システムＩでも安全に検出される、被覆抗原に対し
て高い親和性を有するサンプルは高い希釈度でも、抗−
ＨＩＶ−陰性血清と同様に、本発明のシステムＩではシ
グナルの増大を示すことがない。
【００２７】実施例２ ａ）固相の調製 マイクロタイタープレート（Nunc, Roskilde, Denmark,
B型）を各ウエルあたり１００μlの被覆溶液〔５０mM
炭酸ナトリウム緩衝液，pH９.５中マウス免疫グロブリ
ンに対するウサギ抗体（Behringwerke AG, Marburg, FR
G）１０mg／ml〕と４℃において２４時間インキュベー
トする。ついでマイクロタイタープレートのウエルを各
回３００μlの洗浄溶液（５０mM tris，０.１％Tween
２０, pH７.２）により３回洗浄する。シリカゲル上で
乾燥したマイクロタイタープレートは、空気を排除して
おけば１年間安定である。
B型）を各ウエルあたり１００μlの被覆溶液〔５０mM
炭酸ナトリウム緩衝液，pH９.５中マウス免疫グロブリ
ンに対するウサギ抗体（Behringwerke AG, Marburg, FR
G）１０mg／ml〕と４℃において２４時間インキュベー
トする。ついでマイクロタイタープレートのウエルを各
回３００μlの洗浄溶液（５０mM tris，０.１％Tween
２０, pH７.２）により３回洗浄する。シリカゲル上で
乾燥したマイクロタイタープレートは、空気を排除して
おけば１年間安定である。
【００２８】ｂ）ＨＩＶ １抗体を検出するための移送
酵素イムノアッセイ 抗-ＨＩＶ １を検出するための移送酵素イムノアッセイ
は以下のように行う。すなわち２５μlのサンプル緩衝
液（０.３Ｍ tris／ＨＣｌ，１％アルブミン，２％Twee
n ２０，pH７.２）を、実施例１ａに従って調製したマ
イクロタイタープレートのウエル内で１００μlのヒト
血清と３７℃で３０分間インキュベートする。５０mM
ＰＢＳ、０.１％Tween ２０で４回洗浄したのち実施例
１ｂに従って調製された接合体（０.１Ｍ tris／ＨＣ
ｌ，１％アルブミン，２％ PluronicＦ６４，pH８.１中
１：１,０００）１００μlにヒト免疫グロブリンに対す
るモノクローナル抗体１μg／mlの付加的な添加を予め
行い、これをピペットで加える。３０分間のインキュベ
ーション(＋３７℃）後、接合体相の溶液(１００μl)を
ピペットで、実施例２ａにより調製したマイクロタイタ
ープレートのウエルに移す（本発明によるシステムI
I）。さらに、抗原被覆試験プレートは上述のように処
理し、評価する（参照システムIII)。抗体で被覆され、
現在はピペットによって移送された免疫複合体を含有す
る実施例２ａによるマイクロタイタープレートをさらに
３０分間のインキュベーション後に３７℃で４回洗浄す
る。結合した抗−ＨＩＶ １抗体の数に正相関する結合
ペルオキシダーゼ活性を、Ｈ2Ｏ2／テトラメチルベンジ
ジンを加えて測定する。室温で３０分後に、０.５Ｍ硫
酸を加えて基質の変換を停止させる。吸光度は４５０nm
で測定する。試験の結果（吸光単位）を表２に示す。参
照システムIIIと本発明のシステムIIの間のシグナルの
差が、この場合は低親和性サンプルにおいて明瞭に検出
される。本発明のシステムIIでは場合により、２倍の感
度が達成される。対照システムIIIでも安全に検出され
る、被覆抗原に対して高い親和性を有するサンプルは、
高い希釈度でも、抗−ＨＩＶ−陰性血清と同様に、本発
明のシステムIIではシグナルの増大を示すことがない。
酵素イムノアッセイ 抗-ＨＩＶ １を検出するための移送酵素イムノアッセイ
は以下のように行う。すなわち２５μlのサンプル緩衝
液（０.３Ｍ tris／ＨＣｌ，１％アルブミン，２％Twee
n ２０，pH７.２）を、実施例１ａに従って調製したマ
イクロタイタープレートのウエル内で１００μlのヒト
血清と３７℃で３０分間インキュベートする。５０mM
ＰＢＳ、０.１％Tween ２０で４回洗浄したのち実施例
１ｂに従って調製された接合体（０.１Ｍ tris／ＨＣ
ｌ，１％アルブミン，２％ PluronicＦ６４，pH８.１中
１：１,０００）１００μlにヒト免疫グロブリンに対す
るモノクローナル抗体１μg／mlの付加的な添加を予め
行い、これをピペットで加える。３０分間のインキュベ
ーション(＋３７℃）後、接合体相の溶液(１００μl)を
ピペットで、実施例２ａにより調製したマイクロタイタ
ープレートのウエルに移す（本発明によるシステムI
I）。さらに、抗原被覆試験プレートは上述のように処
理し、評価する（参照システムIII)。抗体で被覆され、
現在はピペットによって移送された免疫複合体を含有す
る実施例２ａによるマイクロタイタープレートをさらに
３０分間のインキュベーション後に３７℃で４回洗浄す
る。結合した抗−ＨＩＶ １抗体の数に正相関する結合
ペルオキシダーゼ活性を、Ｈ2Ｏ2／テトラメチルベンジ
ジンを加えて測定する。室温で３０分後に、０.５Ｍ硫
酸を加えて基質の変換を停止させる。吸光度は４５０nm
で測定する。試験の結果（吸光単位）を表２に示す。参
照システムIIIと本発明のシステムIIの間のシグナルの
差が、この場合は低親和性サンプルにおいて明瞭に検出
される。本発明のシステムIIでは場合により、２倍の感
度が達成される。対照システムIIIでも安全に検出され
る、被覆抗原に対して高い親和性を有するサンプルは、
高い希釈度でも、抗−ＨＩＶ−陰性血清と同様に、本発
明のシステムIIではシグナルの増大を示すことがない。
【００２９】
【表２】
Claims (14)
- 【請求項１】 被検物質の測定方法において、 (１) 測定すべき被検物質を含有する可能性があるサン
プルを、被検物質に対して結合親和性を有し、固相に固
定化された第一の受容体Ｒ１と接触させ、被検物質に対
して同様に結合親和性を有する受容体Ｒ２を加え、得ら
れた免疫複合体を、被検物質および同一のまたは第二の
固相に固定化された受容体Ｒ３に対して結合親和性を有
するが固定化された受容体Ｒ１に対しては結合親和性を
もたず、標識されていない結合因子と接触させ、 (２) 第一の固相または、存在する場合には第二の固相
に結合した被検物質の量を適当な様式で検出する方法。 - 【請求項２】 受容体Ｒ１およびＲ３は同じ固相に固定
化され、Ｒ３は被検物質またはＲ２と生物親和性相互作
用をしない請求項１記載の方法。 - 【請求項３】 受容体Ｒ１とＲ３は異なる固相に固定化
され、受容体Ｒ１、被検物質、受容体Ｒ２および結合因
子を合わせたのちに生じた第一の固相に固定化されない
免疫複合体を第二の固相と接触させる請求項１記載の方
法。 - 【請求項４】 固定化されない免疫複合体を含有する溶
液を第一の固相から分離し、第一の固相とは空間的に隔
離されている第二の固相に移す請求項３記載の方法。 - 【請求項５】 被検物質または受容体Ｒ２は検出可能な
標識を有する請求項１記載の方法。 - 【請求項６】 受容体Ｒ２が直接または間接に標識され
ている請求項５記載の方法。 - 【請求項７】 被検物質は抗原である請求項１記載の方
法。 - 【請求項８】 被検物質は抗体である請求項１記載の方
法。 - 【請求項９】 結合因子は抗体または抗体フラグメン
ト、および更なる構造エレメントを含有する接合体であ
り、抗体または抗体フラグメントは一つの構造エレメン
トに対して結合親和性を有し、更なる構造エレメントは
エレメント被検物質および受容体Ｒ３の群から選択され
る他のエレメントに対して結合親和性を有する請求項１
記載の方法。 - 【請求項１０】 結合因子はビオチン化された抗体であ
り、受容体Ｒ３はビオチンに対する抗体である請求項９
記載の方法。 - 【請求項１１】 結合因子はビオチン化された抗体であ
り、受容体Ｒ３はアビジンまたはストレプトアビジンで
ある請求項９記載の方法。 - 【請求項１２】 ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）に対
する抗体の検出のための請求項１記載の方法。 - 【請求項１３】 請求項２記載の方法に使用するための
試験キットであって、受容体Ｒ１およびＲ３が固定化さ
れた固相ならびに溶解したまたは溶解可能な形態の結合
因子からなるキット。 - 【請求項１４】 請求項３記載の方法に使用するための
試験キットであって、受容体Ｒ１が固定化された第一の
固相、受容体Ｒ３が固定化された第二の固相および溶解
したまたは溶解可能な形態の結合因子からなるキット。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19629444:4 | 1996-07-22 | ||
| DE19629444A DE19629444A1 (de) | 1996-07-22 | 1996-07-22 | Sensitivitätssteigerung bei der immunchemischen Bestimmung eines Analyten |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1078435A true JPH1078435A (ja) | 1998-03-24 |
Family
ID=7800445
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9193467A Pending JPH1078435A (ja) | 1996-07-22 | 1997-07-18 | 被検物質の免疫化学的測定における感度の上昇 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6030770A (ja) |
| EP (1) | EP0825441B1 (ja) |
| JP (1) | JPH1078435A (ja) |
| AT (1) | ATE235684T1 (ja) |
| AU (1) | AU2875097A (ja) |
| CA (1) | CA2210916A1 (ja) |
| DE (2) | DE19629444A1 (ja) |
| ES (1) | ES2194139T3 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6699722B2 (en) | 2000-04-14 | 2004-03-02 | A-Fem Medical Corporation | Positive detection lateral-flow apparatus and method for small and large analytes |
| CA2446246A1 (en) * | 2001-05-03 | 2002-11-14 | Immunetics, Inc. | Systems and methods for detection of analytes in biological fluids |
| US7262019B2 (en) * | 2001-05-03 | 2007-08-28 | Immunetics, Inc. | System and methods for detection of Bacillus anthracis related analytes in biological fluids |
| US7387890B2 (en) | 2004-12-16 | 2008-06-17 | Chembio Diagnostic Systems, Inc. | Immunoassay devices and use thereof |
| US7396689B2 (en) * | 2005-02-04 | 2008-07-08 | Decision Biomarkers Incorporated | Method of adjusting the working range of a multi-analyte assay |
| AU2011230619C1 (en) | 2010-03-25 | 2016-06-23 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
| HUE037408T2 (hu) | 2011-06-10 | 2018-08-28 | Univ Oregon Health & Science | CMV glikoproteinek és rekombináns vektorok |
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| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
| ES2631608T3 (es) | 2012-06-27 | 2017-09-01 | International Aids Vaccine Initiative | Variante de la glicoproteína Env del VIH-1 |
| EP2848937A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-18 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel HIV-1 immunogens |
| US10058604B2 (en) | 2013-10-07 | 2018-08-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
| US9931394B2 (en) | 2015-03-23 | 2018-04-03 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble HIV-1 envelope glycoprotein trimers |
| WO2019183334A1 (en) | 2018-03-21 | 2019-09-26 | Waters Technologies Corporation | Non-antibody high-affinity-based sample preparation, sorbents, devices and methods |
| CN113125704B (zh) * | 2019-12-31 | 2025-08-22 | 科美博阳诊断技术(上海)有限公司 | 一种均相化学发光测定试剂盒及其应用 |
| CN113125697B (zh) * | 2019-12-31 | 2024-03-26 | 科美博阳诊断技术(上海)有限公司 | 一种睾酮均相化学发光检测试剂盒及其应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US4495296A (en) * | 1979-05-21 | 1985-01-22 | New York Blood Center, Inc. | Labeled anti-hapten antibodies and their use as a universal reagent for solid phase radio- and/or enzyme-immunoassays |
| US4376110A (en) * | 1980-08-04 | 1983-03-08 | Hybritech, Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4743542A (en) * | 1985-04-11 | 1988-05-10 | Ortho Diagnostic | Method for forestalling the hook effect in a multi-ligand immunoassay system |
| US5312730A (en) * | 1992-05-27 | 1994-05-17 | Ciba Corning Diagnostics Corp. | Immune complex transfer with lypophilic bridge |
| DE4218257A1 (de) * | 1992-06-03 | 1993-12-09 | Behringwerke Ag | Verfahren zur immunchemischen Bestimmung eines Analyten |
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1996
- 1996-07-22 DE DE19629444A patent/DE19629444A1/de not_active Withdrawn
-
1997
- 1997-06-24 AT AT97110263T patent/ATE235684T1/de not_active IP Right Cessation
- 1997-06-24 ES ES97110263T patent/ES2194139T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-24 EP EP97110263A patent/EP0825441B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-06-24 DE DE59709605T patent/DE59709605D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-07-17 US US08/896,056 patent/US6030770A/en not_active Expired - Fee Related
- 1997-07-18 AU AU28750/97A patent/AU2875097A/en not_active Abandoned
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| AU2875097A (en) | 1998-01-29 |
| DE19629444A1 (de) | 1998-01-29 |
| DE59709605D1 (de) | 2003-04-30 |
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