JPH11295311A - 抗体測定方法 - Google Patents
抗体測定方法Info
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- JPH11295311A JPH11295311A JP10309598A JP10309598A JPH11295311A JP H11295311 A JPH11295311 A JP H11295311A JP 10309598 A JP10309598 A JP 10309598A JP 10309598 A JP10309598 A JP 10309598A JP H11295311 A JPH11295311 A JP H11295311A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】体液中に存在する抗体を測定乃至検出する方
法、殊に、臨床検体としての尿中に存在する感染源に向
けられた抗体を精度よく、また簡便かつ特異的に、検出
する方法の提供。 【解決手段】体液中に存在する抗体をサンドイッチ法に
従って検出測定する免疫測定法であって、ＩｇＧのＦｃ
領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いることを
特徴とする抗体測定方法。
法、殊に、臨床検体としての尿中に存在する感染源に向
けられた抗体を精度よく、また簡便かつ特異的に、検出
する方法の提供。 【解決手段】体液中に存在する抗体をサンドイッチ法に
従って検出測定する免疫測定法であって、ＩｇＧのＦｃ
領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いることを
特徴とする抗体測定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、体液中に存在する
抗体を検出乃至測定する方法、殊に、臨床検体としての
尿中に存在する感染源に向けられた抗体を精度よく、ま
た簡便かつ特異的に、検出乃至測定する方法に関する。
抗体を検出乃至測定する方法、殊に、臨床検体としての
尿中に存在する感染源に向けられた抗体を精度よく、ま
た簡便かつ特異的に、検出乃至測定する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】体液中に存在する感染源に向けられた特
異抗体の検出は、感染症の間接的な診断に有用である。
殊に血清等の血液を検体とする抗体測定方法は、その感
度及び特異性が臨床検査法としての有用性を支持するに
十分な程度に改良されており、広く診断分野において採
用されている。
異抗体の検出は、感染症の間接的な診断に有用である。
殊に血清等の血液を検体とする抗体測定方法は、その感
度及び特異性が臨床検査法としての有用性を支持するに
十分な程度に改良されており、広く診断分野において採
用されている。
【０００３】一方、生体試料としての尿は、血液と比較
して、その調製が非侵襲的であり簡便かつ安全なことか
ら、臨床検査において殊に望ましい検体と考えられるも
のの、尿を検体とする抗体測定系は未だ精度上の課題を
残しているのが現状である。
して、その調製が非侵襲的であり簡便かつ安全なことか
ら、臨床検査において殊に望ましい検体と考えられるも
のの、尿を検体とする抗体測定系は未だ精度上の課題を
残しているのが現状である。
【０００４】即ち、尿を検体とする場合には、その中に
存在する抗体量（尿中抗体）が血清中に含まれる抗体量
に較べて低濃度であるがゆえに、より高感度な（偽陰性
が減少される）測定系が必要とされ、更に、検体に由来
すると考えられる非特異反応が高いため、同時に特異性
をも向上させた（偽陽性が減少される）測定系が必要と
される。
存在する抗体量（尿中抗体）が血清中に含まれる抗体量
に較べて低濃度であるがゆえに、より高感度な（偽陰性
が減少される）測定系が必要とされ、更に、検体に由来
すると考えられる非特異反応が高いため、同時に特異性
をも向上させた（偽陽性が減少される）測定系が必要と
される。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、かかる事情
に鑑みて開発されたものであり、体液中に存在する抗体
を、高感度かつ高い特異性をもって検出する測定技術を
提供することを目的とするものである。しかして、本発
明は、尿を検体とする場合にも十分な精度を与える、従
来の課題を解決した優れた抗体測定技術を提供すること
を目的とするものである。
に鑑みて開発されたものであり、体液中に存在する抗体
を、高感度かつ高い特異性をもって検出する測定技術を
提供することを目的とするものである。しかして、本発
明は、尿を検体とする場合にも十分な精度を与える、従
来の課題を解決した優れた抗体測定技術を提供すること
を目的とするものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】既存の血清抗体の測定系
をそのまま尿中抗体の測定に準用した測定法は、非特異
反応が生じることにより偽陽性の結果を与え、検出特異
性・検出精度が劣るという問題点を有する。
をそのまま尿中抗体の測定に準用した測定法は、非特異
反応が生じることにより偽陽性の結果を与え、検出特異
性・検出精度が劣るという問題点を有する。
【０００７】本発明者等は、かかる問題点を解決して尿
を検体とする尿中抗体の高精度測定系を開発すべく、こ
の非特異反応を与える成分につき研究を進めていたとこ
ろ、この成分は、測定系の抗原に非特異的に結合する抗
体成分であることを見出した。更に、この抗体成分は、
ＩｇＧの軽鎖（Ｌ鎖）或いは同Ｆ（ａｂ）領域の抗原性
を保持したＩｇＧ断片化物及び／又は同変性物であり、
通常の血清抗体測定系において採用されている抗体検出
試薬と交叉反応し偽陽性の結果を与えていることを確認
した。
を検体とする尿中抗体の高精度測定系を開発すべく、こ
の非特異反応を与える成分につき研究を進めていたとこ
ろ、この成分は、測定系の抗原に非特異的に結合する抗
体成分であることを見出した。更に、この抗体成分は、
ＩｇＧの軽鎖（Ｌ鎖）或いは同Ｆ（ａｂ）領域の抗原性
を保持したＩｇＧ断片化物及び／又は同変性物であり、
通常の血清抗体測定系において採用されている抗体検出
試薬と交叉反応し偽陽性の結果を与えていることを確認
した。
【０００８】本発明は、かかる知見に基づき完成された
ものであり、下記（１）〜（５）に記載する、体液中に
存在する抗体の測定方法である。
ものであり、下記（１）〜（５）に記載する、体液中に
存在する抗体の測定方法である。
【０００９】（１）サンドイッチ法に従う免疫測定法で
あって、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性を
有する抗体検出試薬を用いることを特徴とする抗体測定
方法。
あって、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性を
有する抗体検出試薬を用いることを特徴とする抗体測定
方法。
【００１０】（２） 体液中に存在する測定対象の抗体
と当該抗体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原と
の免疫反応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された測定
対象抗体と前記抗体検出試薬との反応工程を含む上記
（１）記載の抗体測定方法。
と当該抗体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原と
の免疫反応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された測定
対象抗体と前記抗体検出試薬との反応工程を含む上記
（１）記載の抗体測定方法。
【００１１】（３）上記抗体検出試薬がＦｃ特異的抗Ｉ
ｇＧ抗体である上記（１）又は（２）記載の抗体測定方
法。
ｇＧ抗体である上記（１）又は（２）記載の抗体測定方
法。
【００１２】（４）体液が尿である上記（１）乃至
（３）のいずれかに記載の抗体測定方法。
（３）のいずれかに記載の抗体測定方法。
【００１３】（５）測定対象の抗体が感染源に向けられ
た抗体である上記（１）乃至（４）のいずれかに記載の
抗体測定方法。
た抗体である上記（１）乃至（４）のいずれかに記載の
抗体測定方法。
【００１４】
【発明の実施の形態】本発明の抗体測定方法は、サンド
イッチ法に従う抗体免疫測定法の改良方法であり、体液
に由来する非特異反応を減少させ、その結果偽陽性を減
少させたことに最大の特徴を有する。このような特徴を
有する本発明の抗体測定方法は、測定対象抗体ＩｇＧの
Ｆｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いるこ
とにより達成される。
イッチ法に従う抗体免疫測定法の改良方法であり、体液
に由来する非特異反応を減少させ、その結果偽陽性を減
少させたことに最大の特徴を有する。このような特徴を
有する本発明の抗体測定方法は、測定対象抗体ＩｇＧの
Ｆｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いるこ
とにより達成される。
【００１５】本発明において「体液」とは、抗体の存在
が認められる生体（ヒト、その他の動物を含む）の体液
であれば特に限定はないが、一般の臨床検査において検
体とされる、例えば血液、尿、唾液等の体液を好ましく
例示することができる。特に、本発明は、従来から抗体
検出への利用が望まれていた尿検体における検出精度の
問題を解決するものであり、本発明の効果を鑑みれば、
体液として尿を特に好ましく例示することができる。
が認められる生体（ヒト、その他の動物を含む）の体液
であれば特に限定はないが、一般の臨床検査において検
体とされる、例えば血液、尿、唾液等の体液を好ましく
例示することができる。特に、本発明は、従来から抗体
検出への利用が望まれていた尿検体における検出精度の
問題を解決するものであり、本発明の効果を鑑みれば、
体液として尿を特に好ましく例示することができる。
【００１６】また、体液中に存在する測定対象の「抗
体」は、その測定乃至検出が望まれる抗体（ＩｇＧ）で
あれば特に限定はなく、例えば生体にとって異物である
各種の抗原に向けられた抗体であることができる。特に
本発明における当該抗体は、各種感染源に向けられた抗
体であることが好ましい。
体」は、その測定乃至検出が望まれる抗体（ＩｇＧ）で
あれば特に限定はなく、例えば生体にとって異物である
各種の抗原に向けられた抗体であることができる。特に
本発明における当該抗体は、各種感染源に向けられた抗
体であることが好ましい。
【００１７】かかる感染源としては、特に限定はなく、
ヒト、その他の動物へ感染しその結果としての抗体産生
が認められる各種の感染源を挙げることができる。具体
的には、例えば、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ａ
型，Ｂ型及びＣ型等の各種肝炎ウイルス、風疹ウイル
ス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、サイトメ
ガロウイルス等のウイルス類；ヘリコバクターピロリ菌
（H. pylori）や梅毒菌等の細菌類；及びツツガムシ等
の原虫類等を挙げることができる。
ヒト、その他の動物へ感染しその結果としての抗体産生
が認められる各種の感染源を挙げることができる。具体
的には、例えば、ＨＩＶ（ヒト免疫不全ウイルス）、Ａ
型，Ｂ型及びＣ型等の各種肝炎ウイルス、風疹ウイル
ス、インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、サイトメ
ガロウイルス等のウイルス類；ヘリコバクターピロリ菌
（H. pylori）や梅毒菌等の細菌類；及びツツガムシ等
の原虫類等を挙げることができる。
【００１８】本発明における必須の構成としての抗体検
出試薬は、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性
を有する抗体検出試薬として特定される。かかる抗体検
出試薬は、測定対象である抗体（ＩｇＧ）と反応性を有
することによりその検出に使用でき、また、測定対象抗
体ＩｇＧの軽鎖或いはＩｇＧのＦ（ａｂ）領域とは反応
性を示さないことによって特徴付けられる。
出試薬は、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性
を有する抗体検出試薬として特定される。かかる抗体検
出試薬は、測定対象である抗体（ＩｇＧ）と反応性を有
することによりその検出に使用でき、また、測定対象抗
体ＩｇＧの軽鎖或いはＩｇＧのＦ（ａｂ）領域とは反応
性を示さないことによって特徴付けられる。
【００１９】当該抗体検出試薬としては、より具体的に
は、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域を免疫源として調製
したＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体を例示することができ、こ
れは、該免疫源で免疫された任意の被免疫動物から得ら
れる抗血清又はその精製物（ポリクローナル抗体）或は
モノクローナル抗体を包含するものである。また、当該
試薬は、これらの抗体からなる試薬に限定されることな
く、例えば、該ＩｇＧのＦｃ領域に対して特異的に反応
性を有するプロテインＡやプロテインＧ等であってもよ
い。
は、測定対象抗体ＩｇＧのＦｃ領域を免疫源として調製
したＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体を例示することができ、こ
れは、該免疫源で免疫された任意の被免疫動物から得ら
れる抗血清又はその精製物（ポリクローナル抗体）或は
モノクローナル抗体を包含するものである。また、当該
試薬は、これらの抗体からなる試薬に限定されることな
く、例えば、該ＩｇＧのＦｃ領域に対して特異的に反応
性を有するプロテインＡやプロテインＧ等であってもよ
い。
【００２０】尚、これらの抗体検出試薬は、常法に従い
調製することができ、また市販品としても入手すること
ができる。
調製することができ、また市販品としても入手すること
ができる。
【００２１】上記抗体検出試薬は、その検出の為に、通
常の標識剤によって、直接的に修飾されていてもよい
し、また付加的な検出手段により間接的に修飾すること
もできる。
常の標識剤によって、直接的に修飾されていてもよい
し、また付加的な検出手段により間接的に修飾すること
もできる。
【００２２】この標識剤としては、特に制限はされず、
従来公知のもの又は将来使用され得るいずれのものをも
用いることができるが、具体的には125Ｉ、3Ｈ、14Ｃ等
の放射性同位元素類；アルカリホスファターゼ（ＡＬ
Ｐ）、ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）等の酵素類、フルオ
レセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラメチ
ルローダミンイソチオシアネート（ＲＩＴＣ）等の蛍光
物質類；及び１Ｎ−（２，２，６，６−テトラメチル−
１−オキシル−４−ピペリジル）−５Ｎ−（アスパルテ
ート）−２，４−ジニトロベンゼン（ＴＯＰＡ）等が例
示され、これらを標識剤として使用する免疫測定法は、
それぞれラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッ
セイ、フルオロイムノアッセイ及びスピンイムノアッセ
イと称されている。
従来公知のもの又は将来使用され得るいずれのものをも
用いることができるが、具体的には125Ｉ、3Ｈ、14Ｃ等
の放射性同位元素類；アルカリホスファターゼ（ＡＬ
Ｐ）、ペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）等の酵素類、フルオ
レセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラメチ
ルローダミンイソチオシアネート（ＲＩＴＣ）等の蛍光
物質類；及び１Ｎ−（２，２，６，６−テトラメチル−
１−オキシル−４−ピペリジル）−５Ｎ−（アスパルテ
ート）−２，４−ジニトロベンゼン（ＴＯＰＡ）等が例
示され、これらを標識剤として使用する免疫測定法は、
それぞれラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッ
セイ、フルオロイムノアッセイ及びスピンイムノアッセ
イと称されている。
【００２３】尚、これらの標識剤による標識方法や間接
的な標識化による修飾方法、並びにそれらの検出方法等
は、自体公知の方法に従って行うことができる（「単ク
ローン抗体」岩崎辰夫 他著、講談社サイエンティフィ
ク、1984；「酵素免疫測定法」第２版、石川栄治 他
著、医学書院、1982等）。
的な標識化による修飾方法、並びにそれらの検出方法等
は、自体公知の方法に従って行うことができる（「単ク
ローン抗体」岩崎辰夫 他著、講談社サイエンティフィ
ク、1984；「酵素免疫測定法」第２版、石川栄治 他
著、医学書院、1982等）。
【００２４】本発明の測定方法は、上記特定の抗体検出
試薬の使用を必須とし、その限りにおいて、他の基本的
操作等は特に制限されることなく、通常のサンドイッチ
法に従う免疫測定法における方法及び慣用の方法等を広
く採用することができる。
試薬の使用を必須とし、その限りにおいて、他の基本的
操作等は特に制限されることなく、通常のサンドイッチ
法に従う免疫測定法における方法及び慣用の方法等を広
く採用することができる。
【００２５】基本的には、検出を所望する測定対象抗体
と免疫反応（抗原抗体反応）し得る抗原を用いて、該抗
原を体液中に存在する測定対象抗体と免疫反応させ、そ
の結果、当該抗原に結合した測定対象抗体（抗原抗体結
合物）を上記抗体検出試薬にて検出することにより実施
される。
と免疫反応（抗原抗体反応）し得る抗原を用いて、該抗
原を体液中に存在する測定対象抗体と免疫反応させ、そ
の結果、当該抗原に結合した測定対象抗体（抗原抗体結
合物）を上記抗体検出試薬にて検出することにより実施
される。
【００２６】ここで用いられる抗原としては、検出すべ
き測定対象抗体と免疫反応（抗原抗体反応）する抗原で
あれば特に制限はなく、例えば既存の血清抗体測定系に
おいて採用されている抗原等をいずれも良好に採用する
ことができる。これらは、ウイルス等の感染源（乃至異
物）そのものであってもよいが、少なくとも当該感染源
に固有の抗原決定基を有するものであればよい。例え
ば、感染源を加温処理や放射線照射等により不活性化し
たもの、感染源を界面活性剤等で抽出処理して得られる
抗原、また、化学合成や遺伝子工学的手法により人工的
に調製した抗原等を例示することができる。
き測定対象抗体と免疫反応（抗原抗体反応）する抗原で
あれば特に制限はなく、例えば既存の血清抗体測定系に
おいて採用されている抗原等をいずれも良好に採用する
ことができる。これらは、ウイルス等の感染源（乃至異
物）そのものであってもよいが、少なくとも当該感染源
に固有の抗原決定基を有するものであればよい。例え
ば、感染源を加温処理や放射線照射等により不活性化し
たもの、感染源を界面活性剤等で抽出処理して得られる
抗原、また、化学合成や遺伝子工学的手法により人工的
に調製した抗原等を例示することができる。
【００２７】尚、採用しようとする抗原が本発明の測定
法において良好に使用し得るかは、例えば、測定対象抗
体との反応性を常法に従って試験することにより容易に
確認することができる。
法において良好に使用し得るかは、例えば、測定対象抗
体との反応性を常法に従って試験することにより容易に
確認することができる。
【００２８】本発明において当該抗原又は抗体検出試薬
は、所望により、常法に従って各種の任意の固相に固定
化して用いることができる。当該固相としては、この技
術分野において慣用の各種の固相が利用でき、例えばガ
ラス、セルロース粉末、セファデックス、セファロー
ス、ポリスチレン、濾紙、カルボキシメチルセルロー
ス、イオン交換樹脂、デキストラン、プラスチックフィ
ルム、プラスチックチューブ、ナイロン、ガラスビー
ズ、絹、ポリアミン−メチルビニルエーテル−マレイン
酸共重合体、アミノ酸共重合体、エチレン−マレイン酸
共重合体等の種々の素材からなるスティック、ビーズ、
プレート（マイクロプレートを含む）、試験管等を広く
例示できる。
は、所望により、常法に従って各種の任意の固相に固定
化して用いることができる。当該固相としては、この技
術分野において慣用の各種の固相が利用でき、例えばガ
ラス、セルロース粉末、セファデックス、セファロー
ス、ポリスチレン、濾紙、カルボキシメチルセルロー
ス、イオン交換樹脂、デキストラン、プラスチックフィ
ルム、プラスチックチューブ、ナイロン、ガラスビー
ズ、絹、ポリアミン−メチルビニルエーテル−マレイン
酸共重合体、アミノ酸共重合体、エチレン−マレイン酸
共重合体等の種々の素材からなるスティック、ビーズ、
プレート（マイクロプレートを含む）、試験管等を広く
例示できる。
【００２９】固定化方法についても特に制限はなく、物
理的結合及び化学的結合のいずれをも使用できる。例え
ば、共有結合法としてジアゾ法、ペプチド法（酸アミド
誘導体法、カルボキシルクロライド樹脂法、カルボジイ
ミド樹脂法、無水マレイン酸誘導体法、イソシアナート
誘導体法、臭化シアン活性化多糖体法、セルロースカル
ボナート誘導体法、縮合試薬を使用する方法等）、アル
キル化法、架橋試薬による担体結合法（例えば架橋試薬
としてグルタールアルデヒド、ヘキサメチレンイソシア
ナート等を用いるもの）、Ｕｇｉ反応による担体結合法
等の化学的反応：或いはイオン交換樹脂のような担体を
用いるイオン結合法：ガラスビーズ等の多孔性ガラスを
担体として用いる物理的吸着法等が例示できる。
理的結合及び化学的結合のいずれをも使用できる。例え
ば、共有結合法としてジアゾ法、ペプチド法（酸アミド
誘導体法、カルボキシルクロライド樹脂法、カルボジイ
ミド樹脂法、無水マレイン酸誘導体法、イソシアナート
誘導体法、臭化シアン活性化多糖体法、セルロースカル
ボナート誘導体法、縮合試薬を使用する方法等）、アル
キル化法、架橋試薬による担体結合法（例えば架橋試薬
としてグルタールアルデヒド、ヘキサメチレンイソシア
ナート等を用いるもの）、Ｕｇｉ反応による担体結合法
等の化学的反応：或いはイオン交換樹脂のような担体を
用いるイオン結合法：ガラスビーズ等の多孔性ガラスを
担体として用いる物理的吸着法等が例示できる。
【００３０】上記抗原と測定対象抗体との免疫反応（抗
原抗体反応）は、特に制限されず、通常の免疫反応にお
ける条件が採用される。一般には４５℃以下、好ましく
は約４〜４０℃、より好ましくは２５〜４０℃程度の温
度条件下で、抗原と測定対象抗体とを共存させ、約０．
５〜４０時間、好ましくは１〜２０時間程度、放置もし
くはインキュベーションする方法を挙げることができ
る。
原抗体反応）は、特に制限されず、通常の免疫反応にお
ける条件が採用される。一般には４５℃以下、好ましく
は約４〜４０℃、より好ましくは２５〜４０℃程度の温
度条件下で、抗原と測定対象抗体とを共存させ、約０．
５〜４０時間、好ましくは１〜２０時間程度、放置もし
くはインキュベーションする方法を挙げることができ
る。
【００３１】なお、かかる抗原抗体反応において、大腸
菌に由来する成分を共存させておいてもよい。かかる大
腸菌由来成分は、大腸菌に由来するものであれば特に制
限されず、例えば大腸菌抽出蛋白やリポポリサッカライ
ド等であってもよい。
菌に由来する成分を共存させておいてもよい。かかる大
腸菌由来成分は、大腸菌に由来するものであれば特に制
限されず、例えば大腸菌抽出蛋白やリポポリサッカライ
ド等であってもよい。
【００３２】次いで、得られる抗原抗体結合物を洗浄し
て、該抗原抗体結合物（測定対象抗体）を抗体検出試薬
と反応させる工程に供せられるが、該反応も上記免疫反
応（抗原抗体反応）条件に準じて実施することができ
る。
て、該抗原抗体結合物（測定対象抗体）を抗体検出試薬
と反応させる工程に供せられるが、該反応も上記免疫反
応（抗原抗体反応）条件に準じて実施することができ
る。
【００３３】これらの反応の条件等（溶媒、ｐＨ、洗浄
条件等）は、通常の免疫測定法（サンドイッチ法）で用
いられるものと同じか若しくはそれに準じた条件等を採
用して行うことができる。例えば、溶媒は、当該反応に
悪影響を与えないものであれば特に制限はなく、具体的
にはクエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩緩衝液、
酢酸緩衝液等のｐＨが約５〜９程度の緩衝液を例示する
ことができる。
条件等）は、通常の免疫測定法（サンドイッチ法）で用
いられるものと同じか若しくはそれに準じた条件等を採
用して行うことができる。例えば、溶媒は、当該反応に
悪影響を与えないものであれば特に制限はなく、具体的
にはクエン酸緩衝液、リン酸緩衝液、トリス塩緩衝液、
酢酸緩衝液等のｐＨが約５〜９程度の緩衝液を例示する
ことができる。
【００３４】このように、体液検体中に存在する検出を
所望する測定対象抗体と測定系の抗原との免疫複合体
（抗原抗体結合物）を生成させ、当該免疫複合体として
の測定対象抗体を該抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性
を有する本発明にかかる抗体検出試薬を用いて検出する
ことにより本発明を実施することができる。
所望する測定対象抗体と測定系の抗原との免疫複合体
（抗原抗体結合物）を生成させ、当該免疫複合体として
の測定対象抗体を該抗体ＩｇＧのＦｃ領域に結合特異性
を有する本発明にかかる抗体検出試薬を用いて検出する
ことにより本発明を実施することができる。
【００３５】尚、体液中における測定対象抗体の存在有
無、或いはその含有量は、常法に従って、抗体検出試薬
の標識に用いた標識剤（或はその間接的な標識）の種類
に応じた標識活性の測定により、或いはその測定値より
換算した抗体力価として評価される。
無、或いはその含有量は、常法に従って、抗体検出試薬
の標識に用いた標識剤（或はその間接的な標識）の種類
に応じた標識活性の測定により、或いはその測定値より
換算した抗体力価として評価される。
【００３６】上記本発明の測定方法を実施するに際して
は、この測定の為の試薬キットを利用することによっ
て、簡便に実施することができる。
は、この測定の為の試薬キットを利用することによっ
て、簡便に実施することができる。
【００３７】本発明は、前記する抗体測定方法を実施す
る為の試薬キットをも提供するものである。
る為の試薬キットをも提供するものである。
【００３８】該試薬キットは、前記の測定対象抗体Ｉｇ
ＧのＦｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬、好ま
しくはＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体を有効成分として含有す
ることを特徴とする。当該キットには、更に測定対象抗
体に応じた各種の抗原試薬を含有することができ、ま
た、これら含有試薬は、測定系に応じて任意に固相化さ
れていても、また標識化されていてもよい。
ＧのＦｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬、好ま
しくはＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体を有効成分として含有す
ることを特徴とする。当該キットには、更に測定対象抗
体に応じた各種の抗原試薬を含有することができ、ま
た、これら含有試薬は、測定系に応じて任意に固相化さ
れていても、また標識化されていてもよい。
【００３９】また、当該試薬キットには、測定の実施の
便益のために、更に適当な反応液、希釈液、洗浄液、標
識活性測定試薬等が含まれていてもよい。
便益のために、更に適当な反応液、希釈液、洗浄液、標
識活性測定試薬等が含まれていてもよい。
【００４０】
【実施例】以下、本発明の内容を以下の実施例を用いて
具体的に説明する。ただし、本発明はこれらに何ら限定
されるものではない。
具体的に説明する。ただし、本発明はこれらに何ら限定
されるものではない。
【００４１】実施例１ 公知測定法［CalypteTM HIV-1 Urine EIA：Arch. Patho
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995)； Clinical lnfec
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)］による尿中Ｈ
ＩＶ抗体の測定において偽陽性の結果を与えた尿検体を
用いて、該測定系で非特異反応を与える成分が何である
かを突きとめるべく検討を行った。
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995)； Clinical lnfec
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)］による尿中Ｈ
ＩＶ抗体の測定において偽陽性の結果を与えた尿検体を
用いて、該測定系で非特異反応を与える成分が何である
かを突きとめるべく検討を行った。
【００４２】（１）上記該当する尿検体を１Ｍリン酸緩
衝液（pH 7.7）にてｐＨ７．４に調整後、５．０、０．
８及び０．２μｍのカットフィルターで順次濾過し、そ
の２０ｍｌを限外濾過（10 kdカットのメンブラン）に
て２ｍｌにまで濃縮した。濃縮した尿検体をゲル濾過
（Sephacryl S-300, Pharmacia）に付し、得られた各分
画について、ＨＩＶ抗原への反応性を試験した。
衝液（pH 7.7）にてｐＨ７．４に調整後、５．０、０．
８及び０．２μｍのカットフィルターで順次濾過し、そ
の２０ｍｌを限外濾過（10 kdカットのメンブラン）に
て２ｍｌにまで濃縮した。濃縮した尿検体をゲル濾過
（Sephacryl S-300, Pharmacia）に付し、得られた各分
画について、ＨＩＶ抗原への反応性を試験した。
【００４３】尚、ＨＩＶ抗原への反応性は、各分画をＨ
ＩＶ抗原を固定化したＨＩＶ抗原固相化プレートと反応
させた後、結合成分（抗原抗体結合物）をＡＬＰ標識ヤ
ギ抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体（Jackson ImmunoRese
arch Labs.社製）にて検出することにより確認した。
ＩＶ抗原を固定化したＨＩＶ抗原固相化プレートと反応
させた後、結合成分（抗原抗体結合物）をＡＬＰ標識ヤ
ギ抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体（Jackson ImmunoRese
arch Labs.社製）にて検出することにより確認した。
【００４４】この試験の結果、フラクション４６〜４８
をピークとする非特異反応成分の存在が確認された。
をピークとする非特異反応成分の存在が確認された。
【００４５】同様に、この抗原固相化プレートに結合し
た成分を、ＡＬＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）
抗体又はＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）
抗体（いずれもJackson ImmunoResearch Labs.社製）を
用いて、検出した。
た成分を、ＡＬＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）
抗体又はＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）
抗体（いずれもJackson ImmunoResearch Labs.社製）を
用いて、検出した。
【００４６】結果を図１に示す。
【００４７】図１において、縦軸は吸光度（O.D.）を、
横軸はゲル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実
線は２８０ｎｍにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上
記抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体による検出結果を、白
三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体による検
出結果を、黒三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異
的）抗体による検出結果をそれぞれ示す。
横軸はゲル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実
線は２８０ｎｍにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上
記抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体による検出結果を、白
三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体による検
出結果を、黒三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異
的）抗体による検出結果をそれぞれ示す。
【００４８】図１より、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）
抗体での検出においては、抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗
体における場合と同様の反応様式（非特異反応成分との
反応性）を示し、一方、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗
体を用いた場合には反応性を示さないことが明らかとな
った。このことより、非特異反応を与える成分は、抗ヒ
トＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体との反応性を保持したヒ
トＩｇＧの断片化物又は同変性物であると考えられた。
抗体での検出においては、抗ヒト（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗
体における場合と同様の反応様式（非特異反応成分との
反応性）を示し、一方、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗
体を用いた場合には反応性を示さないことが明らかとな
った。このことより、非特異反応を与える成分は、抗ヒ
トＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体との反応性を保持したヒ
トＩｇＧの断片化物又は同変性物であると考えられた。
【００４９】（２）上記の各分画をヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｈ＋Ｌ）抗体（Jackson ImmunoResearch Labs.社製）
と反応させ、結合成分をＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）抗体、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ａｂ特異的）抗体又はＨＲＰ標識ラット抗ヒトＩｇＭ抗
体（いずれもJackson ImmunoResearch Labs.社製）と反
応させることにより、各グロブリン量を測定した。
（Ｈ＋Ｌ）抗体（Jackson ImmunoResearch Labs.社製）
と反応させ、結合成分をＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）抗体、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆ
ａｂ特異的）抗体又はＨＲＰ標識ラット抗ヒトＩｇＭ抗
体（いずれもJackson ImmunoResearch Labs.社製）と反
応させることにより、各グロブリン量を測定した。
【００５０】その結果、ＩｇＧ（Ｆｃ）濃度は、フラク
ション３８をピークとしてフラクション５０付近で検出
感度以下となったのに対し、ＩｇＧ（Ｆａｂ）濃度で
は、フラクション４６まではＩｇＧ（Ｆｃ）と同等の濃
度を示し、その以降は穏やかな減少傾向を示すに留まっ
た。特にフラクション４７以降はその差が顕著であっ
た。 このことは、フラクション４６までは、両者の測
定値は完全な形のＩｇＧに対する濃度を反映しているの
に対して、フラクション４７以降のＩｇＧ（Ｆａｂ）濃
度は、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体との反応性を
保持したＩｇＧ断片化物若しくは同変性物の濃度を反映
しているものと考えられる。
ション３８をピークとしてフラクション５０付近で検出
感度以下となったのに対し、ＩｇＧ（Ｆａｂ）濃度で
は、フラクション４６まではＩｇＧ（Ｆｃ）と同等の濃
度を示し、その以降は穏やかな減少傾向を示すに留まっ
た。特にフラクション４７以降はその差が顕著であっ
た。 このことは、フラクション４６までは、両者の測
定値は完全な形のＩｇＧに対する濃度を反映しているの
に対して、フラクション４７以降のＩｇＧ（Ｆａｂ）濃
度は、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体との反応性を
保持したＩｇＧ断片化物若しくは同変性物の濃度を反映
しているものと考えられる。
【００５１】なお、ＩｇＭは、測定を行ったいずれの分
画においても検出されなかった。
画においても検出されなかった。
【００５２】（３）上記により、完全型ＩｇＧが豊富で
あると思われるフラクション３８及び非特異反応成分が
豊富であると思われるフラクション４７について、ＨＲ
Ｐ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体又はＨＲＰ
標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体を用いたウ
エスタンブロット分析を行った。
あると思われるフラクション３８及び非特異反応成分が
豊富であると思われるフラクション４７について、ＨＲ
Ｐ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体又はＨＲＰ
標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体を用いたウ
エスタンブロット分析を行った。
【００５３】その結果、フラクション３８においては、
両標識抗体による分析結果はともにヒトＩｇＧ（対照）
の場合と酷似の反応様式を示した。フラクション４７
は、ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体での分析では、ヒト
ＩｇＧのメインスポットと４３ＫＤにわずかに反応する
スポットが認められ、この４３ＫＤスポットはその分子
量より断片化された重鎖（Ｈ鎖）であると思われた。ま
た、フラクション４７のヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗
体での分析では、ヒトＩｇＧでは検出されないスポット
が２０及び４０ＫＤ付近に認められ、非特異反応を与え
る成分がこれらのスポットに該当すると考えられた。
両標識抗体による分析結果はともにヒトＩｇＧ（対照）
の場合と酷似の反応様式を示した。フラクション４７
は、ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体での分析では、ヒト
ＩｇＧのメインスポットと４３ＫＤにわずかに反応する
スポットが認められ、この４３ＫＤスポットはその分子
量より断片化された重鎖（Ｈ鎖）であると思われた。ま
た、フラクション４７のヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗
体での分析では、ヒトＩｇＧでは検出されないスポット
が２０及び４０ＫＤ付近に認められ、非特異反応を与え
る成分がこれらのスポットに該当すると考えられた。
【００５４】以上より、尿中ＨＩＶ抗体の測定時に非特
異的反応を与える成分は、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異
的）抗体との反応性を保持したＩｇＧの断片化物若しく
は同変性物であると考えられ、また、その分子量から、
ＩｇＧ軽鎖（Ｌ鎖）及びその２量体などのＬ鎖に関与し
ている物質であると考えられた。
異的反応を与える成分は、抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異
的）抗体との反応性を保持したＩｇＧの断片化物若しく
は同変性物であると考えられ、また、その分子量から、
ＩｇＧ軽鎖（Ｌ鎖）及びその２量体などのＬ鎖に関与し
ている物質であると考えられた。
【００５５】従って、このような非特異反応を与える成
分との反応性を持たない、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）
抗体を抗体検出試薬として使用すれば、抗体検出におい
て非特異反応を防ぐことができ、しかして、偽陽性が減
少することにより特異性の高い高精度の抗体検出方法が
提供できることが明らかになった。
分との反応性を持たない、抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）
抗体を抗体検出試薬として使用すれば、抗体検出におい
て非特異反応を防ぐことができ、しかして、偽陽性が減
少することにより特異性の高い高精度の抗体検出方法が
提供できることが明らかになった。
【００５６】実施例２ 尿中ＨＩＶ抗体の測定 ＨＩＶ抗原プレート（CalypteTM HIV-1 Urine EIA, Cal
ypte Biomedical Corp.）の各ウエルに、第１緩衝液（C
alypteTM HIV-1 Urine EIAのサンプル緩衝液）を２５μ
ｌ及び尿サンプルを２００μｌ加え、１０秒間撹拌後、
３７℃で１時間放置した。該プレートを６回洗浄後（洗
浄液：D-PBS, 0.05% Tween 20）、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒ
トｌｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体（Peroxidase-conjugated
Affini Pure Goat anti-Human lgG、 Fc Fragment Speci
fic, Jackson ImmunoResearch Labs.社製）を第２緩衝
液（50mM Tris, 0.14M NaCl, 0.5% BSA, 5% Goat Seru
m, 0.05% Tween 20, 0.1% XL-II (pH 7.3)）で１１,０
００倍希釈したものを１００μ１加え、同様に３７℃で
の１時間放置とプレート洗浄（６回）を行った。
ypte Biomedical Corp.）の各ウエルに、第１緩衝液（C
alypteTM HIV-1 Urine EIAのサンプル緩衝液）を２５μ
ｌ及び尿サンプルを２００μｌ加え、１０秒間撹拌後、
３７℃で１時間放置した。該プレートを６回洗浄後（洗
浄液：D-PBS, 0.05% Tween 20）、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒ
トｌｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体（Peroxidase-conjugated
Affini Pure Goat anti-Human lgG、 Fc Fragment Speci
fic, Jackson ImmunoResearch Labs.社製）を第２緩衝
液（50mM Tris, 0.14M NaCl, 0.5% BSA, 5% Goat Seru
m, 0.05% Tween 20, 0.1% XL-II (pH 7.3)）で１１,０
００倍希釈したものを１００μ１加え、同様に３７℃で
の１時間放置とプレート洗浄（６回）を行った。
【００５７】次いで、発色液（50% TMB, 50mM Citrate-
Na2HPO4, 0.0075% H2O2）を１００μ１加え、室温で１
０分間反応後、反応停止液（50% TMB停止液, 50% 1N-H2
SO4）１００μｌを加えて吸光度（OD=450nm）を測定し
た。
Na2HPO4, 0.0075% H2O2）を１００μ１加え、室温で１
０分間反応後、反応停止液（50% TMB停止液, 50% 1N-H2
SO4）１００μｌを加えて吸光度（OD=450nm）を測定し
た。
【００５８】尚、比較対照実験として、ＡＬＰ標識ヤギ
抗ヒトイムノグロブリン抗体を第２抗体として使用する
公知測定法［CalypteTM HIV-1 Urine EIA：Arch. Patho
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995)； Clinical lnfec
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)］を用いて同一
の検体を測定した（対照方法）。また、該測定キットの
陰性コントロールと陽性コントロールを上記本発明の測
定方法に従い測定した結果、同キットにおける測定結果
と同等の吸光度が得られたことから、同キットのカット
オフ値の算出法に従い、本発明方法におけるカットオフ
値を、該陰性コントロールの平均吸光度に０．１８０を
加えた値とした。
抗ヒトイムノグロブリン抗体を第２抗体として使用する
公知測定法［CalypteTM HIV-1 Urine EIA：Arch. Patho
l. Lab. Med., 119, 139-141 (1995)； Clinical lnfec
tious Diseases, 19, 1100-1104 (1994)］を用いて同一
の検体を測定した（対照方法）。また、該測定キットの
陰性コントロールと陽性コントロールを上記本発明の測
定方法に従い測定した結果、同キットにおける測定結果
と同等の吸光度が得られたことから、同キットのカット
オフ値の算出法に従い、本発明方法におけるカットオフ
値を、該陰性コントロールの平均吸光度に０．１８０を
加えた値とした。
【００５９】血清ＨＩＶ抗体陽性者（２例）及び同抗体
陰性者（９８例）から得られた１００検体（尿）につい
て測定した結果を表１に示す。
陰性者（９８例）から得られた１００検体（尿）につい
て測定した結果を表１に示す。
【００６０】
【表１】
【００６１】表１より、本発明方法及び対照方法の感度
はともに１００％（２／２）であったが、特異性は対照
方法では７１．４％（７０／９８）であり、本発明方法
では９８％（９６／９８）であった。
はともに１００％（２／２）であったが、特異性は対照
方法では７１．４％（７０／９８）であり、本発明方法
では９８％（９６／９８）であった。
【００６２】このことから本発明方法による抗体測定方
法は、対照方法に比較して偽陽性が著しく減少し特異性
において極めて優れていることが判る。
法は、対照方法に比較して偽陽性が著しく減少し特異性
において極めて優れていることが判る。
【００６３】実施例３ 尿中ピロリ（H.pylori）抗体の
測定 （１）抗原プレートの調製 常法［J. Clin. Microbiol., 29: 2587-2589 (1991)］
に従って調製したピロリ菌（臨床分離培養株）の１００
ｍｇ／ｍｌ冷ダルベッコ−ＰＢＳ溶液に、スターラーで
撹拌しながら更に冷０．２％トリトン−Ｘ溶液を等量加
え、５分間撹拌後遠心した（3,000 rpm, 20 min.）。上
澄みを新しいチューブに移して抽出液とした（1〜1.5mg
/ml protein）。
測定 （１）抗原プレートの調製 常法［J. Clin. Microbiol., 29: 2587-2589 (1991)］
に従って調製したピロリ菌（臨床分離培養株）の１００
ｍｇ／ｍｌ冷ダルベッコ−ＰＢＳ溶液に、スターラーで
撹拌しながら更に冷０．２％トリトン−Ｘ溶液を等量加
え、５分間撹拌後遠心した（3,000 rpm, 20 min.）。上
澄みを新しいチューブに移して抽出液とした（1〜1.5mg
/ml protein）。
【００６４】この抽出液を、Ｄ−ＰＢＳで希釈し（2.5
μg/ml）、９６ウエルプレートの各ウエルに１００μｌ
ずつ加え、２５℃で一夜インキュべートした。該ウエル
を洗浄後、ブロッキング液（D-PBS, 0.5% casein, 5% s
orbitol, 0.05% NaN3 (pH 7.4)）３００μｌを加え、２
５℃で一夜インキュベートした。次いでブロッキング液
を除去し、２５℃で一夜乾燥させ、これをアルミ袋に乾
燥剤とともに入れ密封して、使用時まで４℃で保存し
た。
μg/ml）、９６ウエルプレートの各ウエルに１００μｌ
ずつ加え、２５℃で一夜インキュべートした。該ウエル
を洗浄後、ブロッキング液（D-PBS, 0.5% casein, 5% s
orbitol, 0.05% NaN3 (pH 7.4)）３００μｌを加え、２
５℃で一夜インキュベートした。次いでブロッキング液
を除去し、２５℃で一夜乾燥させ、これをアルミ袋に乾
燥剤とともに入れ密封して、使用時まで４℃で保存し
た。
【００６５】（２）測定 上記で得られた固相化抗原（プレート）を用い、実施例
２と同様にして尿検体中のピロリ抗体を測定した。
２と同様にして尿検体中のピロリ抗体を測定した。
【００６６】即ち、各ウエルに、第１緩衝液（200mM Tr
is, 0.14M NaCl, 2% casein, 0.5%BSA, 0.05% Tween 2
0, 0.1% NaN3, 20μg/ml E. Coli抽出物 (pH 7.3)）２
５μｌ及び尿サンプル１００μｌ加え、１０秒間撹拌
後、３７℃で１時間放置した。該プレートを６回洗浄
後、実施例２と同様に、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）抗体の第２緩衝液溶液希釈物１００μｌ
を加えて３７℃で１時間放置することにより抗体を検出
した。
is, 0.14M NaCl, 2% casein, 0.5%BSA, 0.05% Tween 2
0, 0.1% NaN3, 20μg/ml E. Coli抽出物 (pH 7.3)）２
５μｌ及び尿サンプル１００μｌ加え、１０秒間撹拌
後、３７℃で１時間放置した。該プレートを６回洗浄
後、実施例２と同様に、ＨＲＰ標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ特異的）抗体の第２緩衝液溶液希釈物１００μｌ
を加えて３７℃で１時間放置することにより抗体を検出
した。
【００６７】得られた結果を図２及び表２に示す。
【００６８】
【表２】
【００６９】図２中、縦軸は吸光度（OD=450-650nm）
を、横軸は13Ｃ−ＵＢＴ試験［J.Gastroenterol.,33: 6
-13 (1998)］にて確認したピロリ感染陽性群（＋；n=5
6）及び同陰性群（−；n=44）を示す。
を、横軸は13Ｃ−ＵＢＴ試験［J.Gastroenterol.,33: 6
-13 (1998)］にて確認したピロリ感染陽性群（＋；n=5
6）及び同陰性群（−；n=44）を示す。
【００７０】表２において、感度は、13Ｃ−ＵＢＴ試験
における陽性者を陽性と検出した割合を、特異性は、13
Ｃ−ＵＢＴ試験における陰性者を陰性と検出した割合
を、正確性は、13Ｃ−ＵＢＴ試験における陽性者及び同
陰性者をそれぞれ陽性及び陰性と検出した割合をそれぞ
れ示し、カットオフ値として、平均（Ｍ）＋３ＳＤ又は
Ｍ＋５ＳＤを採用した場合について表した。また、対照
として、血清をサンプルとするピロリ抗体測定キット
［ＨＭ−ＣＡＰ：ＥＰｌ社／協和メデックス（株）］を
用いて同一検体を測定した結果を併記した（対照方
法）。
における陽性者を陽性と検出した割合を、特異性は、13
Ｃ−ＵＢＴ試験における陰性者を陰性と検出した割合
を、正確性は、13Ｃ−ＵＢＴ試験における陽性者及び同
陰性者をそれぞれ陽性及び陰性と検出した割合をそれぞ
れ示し、カットオフ値として、平均（Ｍ）＋３ＳＤ又は
Ｍ＋５ＳＤを採用した場合について表した。また、対照
として、血清をサンプルとするピロリ抗体測定キット
［ＨＭ−ＣＡＰ：ＥＰｌ社／協和メデックス（株）］を
用いて同一検体を測定した結果を併記した（対照方
法）。
【００７１】該結果より、本発明方法が、特に感度及び
正確性において、優れた結果を与えることが判明した。
正確性において、優れた結果を与えることが判明した。
【００７２】実施例４ 尿中風疹ウイルス（ルベラ）抗
体の測定 （１）ルベラ抗原プレートの調製 抗原として市販のルベラ抗原［ＢＩＯ−ＤＥＳIＧＮ
社］を用い、抗原濃度を１μｇ／ｍｌ及びブロッキング
液を（D-PBS, 1% BSA, 5% sorbitol, 0.05% NaN3(pH 7.
4)）とした以外は前記実施例３（１）と同様にして、ル
ベラ抗原プレートを調製した。
体の測定 （１）ルベラ抗原プレートの調製 抗原として市販のルベラ抗原［ＢＩＯ−ＤＥＳIＧＮ
社］を用い、抗原濃度を１μｇ／ｍｌ及びブロッキング
液を（D-PBS, 1% BSA, 5% sorbitol, 0.05% NaN3(pH 7.
4)）とした以外は前記実施例３（１）と同様にして、ル
ベラ抗原プレートを調製した。
【００７３】（２）測定 上記で得た抗原プレートを使用して、前記実施例３
（２）と同様にして尿サンプル中のルベラ抗体を測定し
た。
（２）と同様にして尿サンプル中のルベラ抗体を測定し
た。
【００７４】得られた結果を図３及び表３に示す。
【００７５】
【表３】
【００７６】図３中、縦軸は、吸光度（OD=450-650nm）
を、横軸は、市販キット（風疹ＩｇＧ（II）−ＥｌＡ
「生研」、デンカ生研（株））によって測定された血清
ルベラ抗体陽性群（n=76）及び同陰性群（n=23）をそれ
ぞれ示す。表３は、本発明方法と対照法としての上記血
清ルベラ抗体測定結果との一致性を示すものである。
を、横軸は、市販キット（風疹ＩｇＧ（II）−ＥｌＡ
「生研」、デンカ生研（株））によって測定された血清
ルベラ抗体陽性群（n=76）及び同陰性群（n=23）をそれ
ぞれ示す。表３は、本発明方法と対照法としての上記血
清ルベラ抗体測定結果との一致性を示すものである。
【００７７】該結果より、本発明方法と対照方法の一致
率は１００％（９９／９９）であり、本発明によれば、
検体として安全かつ簡便な尿を採用しても高感度かつ高
特異的な抗体検出が可能であり、臨床検査分野において
有用であることが判明した。
率は１００％（９９／９９）であり、本発明によれば、
検体として安全かつ簡便な尿を採用しても高感度かつ高
特異的な抗体検出が可能であり、臨床検査分野において
有用であることが判明した。
【図１】尿中ＨＩＶ抗体の測定において偽陽性の結果を
与える尿検体のゲル濾過と各分画の抗体反応性を示す図
である。なお図中縦軸は、吸光度（O.D.）を、横軸はゲ
ル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実線は２８
０ｎｍにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上記抗ヒト
（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体による検出結果を、白三角線は
上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体による検出結果
を、黒三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体
による検出結果をそれぞれ示す。
与える尿検体のゲル濾過と各分画の抗体反応性を示す図
である。なお図中縦軸は、吸光度（O.D.）を、横軸はゲ
ル濾過の画分（フラクション番号）を示す。実線は２８
０ｎｍにおける蛋白質の吸光度を、黒丸線は上記抗ヒト
（ＩｇＧ＋ＩｇＭ）抗体による検出結果を、白三角線は
上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆｃ特異的）抗体による検出結果
を、黒三角線は上記抗ヒトＩｇＧ（Ｆａｂ特異的）抗体
による検出結果をそれぞれ示す。
【図２】本発明方法に従う尿中ピロリ抗体の測定結果
（実施例３）を示す図である。
（実施例３）を示す図である。
【図３】本発明方法に従う尿中ルベラ抗体の測定結果
（実施例４）を示す図である。
（実施例４）を示す図である。
Claims (5)
- 【請求項１】体液中に存在する抗体をサンドイッチ法に
従って検出測定する免疫測定法であって、該抗体ＩｇＧ
のＦｃ領域に結合特異性を有する抗体検出試薬を用いる
ことを特徴とする抗体測定方法。 - 【請求項２】体液中に存在する測定対象の抗体と当該抗
体に対する抗原を固定化してなる固相化抗原との免疫反
応工程、及び当該固相化抗原に捕捉された測定対象抗体
と前記抗体検出試薬との反応工程を含む請求項１記載の
抗体測定方法。 - 【請求項３】抗体検出試薬がＦｃ特異的抗ＩｇＧ抗体で
ある請求項１又は２記載の抗体測定方法。 - 【請求項４】体液が尿である請求項１乃至３のいずれか
に記載の抗体測定方法。 - 【請求項５】測定対象の抗体が感染源に向けられた抗体
である請求項１乃至４のいずれかに記載の測定方法。
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1998
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