JPH1114626A - Ｃａ１２５の測定方法 - Google Patents
Ｃａ１２５の測定方法Info
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- JPH1114626A JPH1114626A JP17053497A JP17053497A JPH1114626A JP H1114626 A JPH1114626 A JP H1114626A JP 17053497 A JP17053497 A JP 17053497A JP 17053497 A JP17053497 A JP 17053497A JP H1114626 A JPH1114626 A JP H1114626A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 測定試料中に存在する干渉物質による干渉を
効率よく減少させ、正確かつ簡便にCA125の測定を行な
う方法を提供する。 【解決手段】 CA125と特異的に反応する免疫グロブリ
ンの一価の抗体と二価の抗体を固相に固定化して使用す
ることを特徴とするCA125の測定方法。
効率よく減少させ、正確かつ簡便にCA125の測定を行な
う方法を提供する。 【解決手段】 CA125と特異的に反応する免疫グロブリ
ンの一価の抗体と二価の抗体を固相に固定化して使用す
ることを特徴とするCA125の測定方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はCA125の測定におい
て、非特異反応を抑制して感度よく測定を行なう方法に
関する。
て、非特異反応を抑制して感度よく測定を行なう方法に
関する。
【０００２】
【従来の技術】CA125は、モノクローナル抗体OC125によ
り認識される抗原で分子量約11万の糖蛋白であり、卵巣
癌の腫瘍マーカーとして重要な検査項目である。特に卵
巣癌の漿液性嚢胞腺癌で高値である。また、その他の疾
患としては、子宮癌、膵癌、胆のう胆管癌で高値となる
ことから、CA125は婦人科系の癌と消化器癌のマーカー
として診断と予後判定の指標として有用である。
り認識される抗原で分子量約11万の糖蛋白であり、卵巣
癌の腫瘍マーカーとして重要な検査項目である。特に卵
巣癌の漿液性嚢胞腺癌で高値である。また、その他の疾
患としては、子宮癌、膵癌、胆のう胆管癌で高値となる
ことから、CA125は婦人科系の癌と消化器癌のマーカー
として診断と予後判定の指標として有用である。
【０００３】CA125の測定方法としては、固相にOC125抗
体を固定化して試料中のCA125と反応させ、さらに標識
されたOC125抗体を反応させた後にB/F分離を行ない、固
相に捕捉された標識量を測定する方法がある（特開平2-
280061号）。
体を固定化して試料中のCA125と反応させ、さらに標識
されたOC125抗体を反応させた後にB/F分離を行ない、固
相に捕捉された標識量を測定する方法がある（特開平2-
280061号）。
【０００４】ところが、測定試料中にOC125抗体とよく
反応する物質が存在する場合、例えば測定試料中に抗マ
ウスγ−グロブリン（HAMA）が存在する場合、それがOC
125抗体と結合して、本来目的としているCA125との反応
を阻害してしまい、正確な測定ができなくなってしま
う。そこで、OC125抗体とは異なるCA125上のエピトープ
を認識するモノクローナル抗体M11等を標識抗体に用い
て対策を行なっている。また、一般的には、測定試料に
マウスγ−グロブリンを添加することによる前処理を行
うことで対策している場合もある。
反応する物質が存在する場合、例えば測定試料中に抗マ
ウスγ−グロブリン（HAMA）が存在する場合、それがOC
125抗体と結合して、本来目的としているCA125との反応
を阻害してしまい、正確な測定ができなくなってしま
う。そこで、OC125抗体とは異なるCA125上のエピトープ
を認識するモノクローナル抗体M11等を標識抗体に用い
て対策を行なっている。また、一般的には、測定試料に
マウスγ−グロブリンを添加することによる前処理を行
うことで対策している場合もある。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
ような方法を取ったとしても、抗マウスγ−グロブリン
（HAMA）による干渉がなくなるわけではなく、対策方法
としては不十分である。
ような方法を取ったとしても、抗マウスγ−グロブリン
（HAMA）による干渉がなくなるわけではなく、対策方法
としては不十分である。
【０００６】また、粒子凝集法により測定を行なう場
合、たとえOC125とM11の二つの抗体を粒子上に感作して
使用したとしても、粒子はOC125−CA125−M11という結
合だけで凝集するのではなく、OC125−CA125−OC125と
いった結合によっても粒子が凝集を起こす。そういった
場合、上述の場合と同じ問題が発生し、正確な測定がで
きなくなる。
合、たとえOC125とM11の二つの抗体を粒子上に感作して
使用したとしても、粒子はOC125−CA125−M11という結
合だけで凝集するのではなく、OC125−CA125−OC125と
いった結合によっても粒子が凝集を起こす。そういった
場合、上述の場合と同じ問題が発生し、正確な測定がで
きなくなる。
【０００７】そこで本発明は、より正確にCA125の測定
を行なう方法を提供することを目的とする。
を行なう方法を提供することを目的とする。
【０００８】また、粒子凝集法を用いて、CA125の測定
を行う方法を提供することを目的とする。
を行う方法を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明のCA125の測定方
法は、CA125と特異的に反応する免疫グロブリンの一価
の抗体と二価の抗体を固相に固定化して使用することを
特徴とする。
法は、CA125と特異的に反応する免疫グロブリンの一価
の抗体と二価の抗体を固相に固定化して使用することを
特徴とする。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明で使用するCA125と特異的
に反応する免疫グロブリンには、モノクローナル抗体OC
125とM11を含む。しかし、CA125と特異的に反応するも
のであれば、ポリクローナル抗体であってもよく、その
由来は特に問わない。抗体の作製にあたっては、常法
（例えば、新生化学実験講座、タンパク質Ｉ、p.389-39
7, 1992参照）に従い、CA125を動物に免疫し、生体内に
産生される抗体を採取することにより得ることができ
る。本発明では、１種類の抗体を用いるよりも、互いに
異なるエピトープを認識する複数の抗体を組み合わせて
用いる方が測定の特異性及び感度上昇の点から好まし
い。
に反応する免疫グロブリンには、モノクローナル抗体OC
125とM11を含む。しかし、CA125と特異的に反応するも
のであれば、ポリクローナル抗体であってもよく、その
由来は特に問わない。抗体の作製にあたっては、常法
（例えば、新生化学実験講座、タンパク質Ｉ、p.389-39
7, 1992参照）に従い、CA125を動物に免疫し、生体内に
産生される抗体を採取することにより得ることができ
る。本発明では、１種類の抗体を用いるよりも、互いに
異なるエピトープを認識する複数の抗体を組み合わせて
用いる方が測定の特異性及び感度上昇の点から好まし
い。
【００１１】本発明で使用するCA125と特異的に反応す
る免疫グロブリンの二価の抗体とは、分子内に抗原結合
部位を２個もつ抗体をいい、例えばモノクローナル抗体
OC125やM11等のモノクローナル抗体、またはポリクロー
ナ抗体等の抗体そのもの、さらにはこれらの抗体に酵素
処理等を施して得られるフラグメントであっても構わな
い。このようなフラグメントには、例えば抗体をペプシ
ンで消化して得られるF(ab')2を含む。
る免疫グロブリンの二価の抗体とは、分子内に抗原結合
部位を２個もつ抗体をいい、例えばモノクローナル抗体
OC125やM11等のモノクローナル抗体、またはポリクロー
ナ抗体等の抗体そのもの、さらにはこれらの抗体に酵素
処理等を施して得られるフラグメントであっても構わな
い。このようなフラグメントには、例えば抗体をペプシ
ンで消化して得られるF(ab')2を含む。
【００１２】CA125と特異的に反応する免疫グロブリン
の一価の抗体とは、分子内に抗原結合部位を１個もつ抗
体をいい、免疫グロブリンを還元したもの、あるいはそ
れらに酵素処理等を施したもの、例えばFabやFab'を含
む。一価の抗体は上述の二価の抗体を還元してS-S結合
を切断することによって得られる。抗体の還元方法は、
従来より知られている方法を使用すればよく、例えば、
1〜100mMの2-メルカプトエタノールや2-メルカプトエチ
ルアミン等中で1〜5時間インキュベーションすることに
より一価の抗体を回収することができる。
の一価の抗体とは、分子内に抗原結合部位を１個もつ抗
体をいい、免疫グロブリンを還元したもの、あるいはそ
れらに酵素処理等を施したもの、例えばFabやFab'を含
む。一価の抗体は上述の二価の抗体を還元してS-S結合
を切断することによって得られる。抗体の還元方法は、
従来より知られている方法を使用すればよく、例えば、
1〜100mMの2-メルカプトエタノールや2-メルカプトエチ
ルアミン等中で1〜5時間インキュベーションすることに
より一価の抗体を回収することができる。
【００１３】本発明においては、一価の抗体と二価の抗
体を固相に固定化して使用する。一価の抗体だけでは、
非特異反応が減少するだけでなく、特異性も低くなるの
で、二価の抗体を組み合わせて使用することにより、特
異性を維持したままHAMA等による非特異反応を抑制する
ことができる。本発明では、二価の抗体を非特異反応に
よる干渉が起きない程度に固相に感作して用いることが
できる。感作させる一価の抗体と、二価の抗体との好適
な割合は、1：9〜9：1、好ましくは1：1〜1：5であり、
リン酸緩衝溶液（PBS）等の緩衝液中に前記の割合で混
合した抗体溶液を、固相に感作して用いることができ
る。感作させるのに好適なpHは3〜8、より好適にはpH4
〜6である。
体を固相に固定化して使用する。一価の抗体だけでは、
非特異反応が減少するだけでなく、特異性も低くなるの
で、二価の抗体を組み合わせて使用することにより、特
異性を維持したままHAMA等による非特異反応を抑制する
ことができる。本発明では、二価の抗体を非特異反応に
よる干渉が起きない程度に固相に感作して用いることが
できる。感作させる一価の抗体と、二価の抗体との好適
な割合は、1：9〜9：1、好ましくは1：1〜1：5であり、
リン酸緩衝溶液（PBS）等の緩衝液中に前記の割合で混
合した抗体溶液を、固相に感作して用いることができ
る。感作させるのに好適なpHは3〜8、より好適にはpH4
〜6である。
【００１４】本発明では、上記のようにして調製された
一価の抗体と二価の抗体とを固相に固定化して使用する
が、固相としては、通常当分野で使用されているもので
あれば使用することができ、例えば赤血球、ゼラチン粒
子、ラテックス粒子、マイクロプレート、試験管等が使
用できる。
一価の抗体と二価の抗体とを固相に固定化して使用する
が、固相としては、通常当分野で使用されているもので
あれば使用することができ、例えば赤血球、ゼラチン粒
子、ラテックス粒子、マイクロプレート、試験管等が使
用できる。
【００１５】一価の抗体と二価の抗体とを固相に固定化
するには、従来より二価の抗体を固定化するときに使用
される方法をそのまま使用することができ、物理吸着
法、共有結合法等により行なうことができる。特に物理
吸着法は簡単な操作で行なうことができ、一般的な方法
としては、例えば上記で得られた抗体溶液を固相と接触
させ（固相が粒子の場合は粒子懸濁液と混合し）、4℃
で一晩または25℃で数時間反応させて行なうことができ
る。
するには、従来より二価の抗体を固定化するときに使用
される方法をそのまま使用することができ、物理吸着
法、共有結合法等により行なうことができる。特に物理
吸着法は簡単な操作で行なうことができ、一般的な方法
としては、例えば上記で得られた抗体溶液を固相と接触
させ（固相が粒子の場合は粒子懸濁液と混合し）、4℃
で一晩または25℃で数時間反応させて行なうことができ
る。
【００１６】本発明の方法により測定することのできる
生物学的試料には、血漿、血清等の血液成分を含む。
生物学的試料には、血漿、血清等の血液成分を含む。
【００１７】本発明によりCA125の測定を行なうには、
種々の態様のサンドイッチ法、ならびに競合法を含むど
のような型のイムノアッセイを用いてもよい。さらに
は、粒子表面を固相として用いて一価の抗体と二価の抗
体を感作し、粒子の凝集度を測定することによりCA125
の量を測定することもできる。
種々の態様のサンドイッチ法、ならびに競合法を含むど
のような型のイムノアッセイを用いてもよい。さらに
は、粒子表面を固相として用いて一価の抗体と二価の抗
体を感作し、粒子の凝集度を測定することによりCA125
の量を測定することもできる。
【００１８】例えばサンドイッチ法では、抗体を固定化
した反応容器にCA125を含む試料を入れ、所定温度で所
定時間インキュベートする。次に、標識された抗体溶液
を添加し、さらに所定温度で所定時間インキュベートし
て反応させる。抗体への標識方法は、通常抗体に対して
行なうのと同じ方法により行なうことができる。なお、
固相抗体として、OC125抗体及びOC125の一価の抗体を用
いる場合は、標識抗体としてはOC125抗体あるいはOC125
の一価の抗体を用いてもよいが、OC125とは異なるエピ
トープを認識するM11抗体あるいはM11の一価の抗体の方
が好ましい。その後、B/F分離を行なって、固相に捕捉
された標識物の量を測定する。そして、あらかじめ作成
された検量線から測定試料中のCA125の量を決定する。
した反応容器にCA125を含む試料を入れ、所定温度で所
定時間インキュベートする。次に、標識された抗体溶液
を添加し、さらに所定温度で所定時間インキュベートし
て反応させる。抗体への標識方法は、通常抗体に対して
行なうのと同じ方法により行なうことができる。なお、
固相抗体として、OC125抗体及びOC125の一価の抗体を用
いる場合は、標識抗体としてはOC125抗体あるいはOC125
の一価の抗体を用いてもよいが、OC125とは異なるエピ
トープを認識するM11抗体あるいはM11の一価の抗体の方
が好ましい。その後、B/F分離を行なって、固相に捕捉
された標識物の量を測定する。そして、あらかじめ作成
された検量線から測定試料中のCA125の量を決定する。
【００１９】粒子凝集法を用いて測定を行なう場合、一
価の抗体と二価の抗体を感作した粒子懸濁液とCA125を
含む試料とを混合し、30〜50℃、好ましくは37〜45℃の
範囲で、5〜30分、好ましくは10〜20分インキュベート
する。その後、目視あるいは粒子計数装置で凝集状態を
確認する。粒子計数装置（例えば、東亞医用電子株式会
社のPAMIAシリーズ）を用いて未凝集／凝集粒子を計数
する場合には、使用する粒子は粒径のそろったものが好
ましく、そういう点では、ラテックス粒子が最も好まし
い。粒子の大きさについては、通常使用されているもの
が使用でき、0.5〜1μmが好適に使用される。材質につ
いても、当分野で使用されているものならばとくに制限
されないが、ポリスチレンラテックスが最も好ましい。
価の抗体と二価の抗体を感作した粒子懸濁液とCA125を
含む試料とを混合し、30〜50℃、好ましくは37〜45℃の
範囲で、5〜30分、好ましくは10〜20分インキュベート
する。その後、目視あるいは粒子計数装置で凝集状態を
確認する。粒子計数装置（例えば、東亞医用電子株式会
社のPAMIAシリーズ）を用いて未凝集／凝集粒子を計数
する場合には、使用する粒子は粒径のそろったものが好
ましく、そういう点では、ラテックス粒子が最も好まし
い。粒子の大きさについては、通常使用されているもの
が使用でき、0.5〜1μmが好適に使用される。材質につ
いても、当分野で使用されているものならばとくに制限
されないが、ポリスチレンラテックスが最も好ましい。
【００２０】粒子に感作する抗体は一種類の抗体でもよ
いが、それとは別のエピトープを認識する抗体を混合し
て感作して使用すれば、特異性及び感度を高める上で有
利である。例えば、OC125の一価の抗体だけでなく、M11
の一価の抗体を感作して使用することができる。二つの
抗体の比は、1：9〜9：1が好適であり、さらには1：1が
好ましい。また、特異性を維持するために、HAMA等との
非特異反応による干渉を起こさない程度に、それぞれの
一価の抗体に対応する二価の抗体を感作して使用する。
一価の抗体と二価の抗体との好ましい割合は、上述の通
りである。例えば、OC125の一価の抗体及びOC125抗体
と、M11の一価の抗体及びM11抗体の四つの抗体を同じ粒
子上に感作して使用することができる。
いが、それとは別のエピトープを認識する抗体を混合し
て感作して使用すれば、特異性及び感度を高める上で有
利である。例えば、OC125の一価の抗体だけでなく、M11
の一価の抗体を感作して使用することができる。二つの
抗体の比は、1：9〜9：1が好適であり、さらには1：1が
好ましい。また、特異性を維持するために、HAMA等との
非特異反応による干渉を起こさない程度に、それぞれの
一価の抗体に対応する二価の抗体を感作して使用する。
一価の抗体と二価の抗体との好ましい割合は、上述の通
りである。例えば、OC125の一価の抗体及びOC125抗体
と、M11の一価の抗体及びM11抗体の四つの抗体を同じ粒
子上に感作して使用することができる。
【００２１】なお、粒子凝集法は、B/F分離を必要とし
ないので、簡便な操作で、短時間で測定を行なえるので
好ましい。
ないので、簡便な操作で、短時間で測定を行なえるので
好ましい。
【００２２】
実施例１：一価の抗体の調製 OC125抗体（セントコア社より入手）2.0mgを、10mM 2-
メルカプトエチルアミン塩酸塩及び0.5mM EDTA-4Naを含
む10mMPBS(pH7.0)水溶液2mlに溶解し、37℃で2時間イン
キュベーションした後、氷冷する。その後、0.1Mモノヨ
ードアセトアミドを含む10mMPBS(pH6.0)水溶液を、使用
した 2-メルカプトエチルアミン塩酸塩と等モルになる
ように添加してブロックし、室温で2時間インキュベー
ションする。
メルカプトエチルアミン塩酸塩及び0.5mM EDTA-4Naを含
む10mMPBS(pH7.0)水溶液2mlに溶解し、37℃で2時間イン
キュベーションした後、氷冷する。その後、0.1Mモノヨ
ードアセトアミドを含む10mMPBS(pH6.0)水溶液を、使用
した 2-メルカプトエチルアミン塩酸塩と等モルになる
ように添加してブロックし、室温で2時間インキュベー
ションする。
【００２３】次に、Superdex 200pg（ファルマシア社）
を使用し、10mMPBS（pH6.0）でゲルろ過を行ない、一価
の抗体を回収する。
を使用し、10mMPBS（pH6.0）でゲルろ過を行ない、一価
の抗体を回収する。
【００２４】M11抗体（セントコア社より入手）につい
ても同様の操作を行ない、一価の抗体を回収する。
ても同様の操作を行ない、一価の抗体を回収する。
【００２５】実施例２：抗体感作ラテックスの調製 粒径0.8μｍのポリスチレンラテックスを0.1M PBS(pH6.
0)中に0.5%(w/v)の濃度に調製し、そこに以下に記載す
るような種々の組み合わせで二価の抗体及び／又は実施
例１で調製した一価の抗体をラテックス懸濁液1ml当た
りTotalで300μｇ（OC125抗体とその一価の抗体を合計
で150μg、M11抗体とその一価の抗体を合計で150μg）
添加し、4℃で24時間反応させた。その後遠心(12000rp
m,10min.)を行い、5%BSAを含む10mM PBS(pH6.0)溶液を
最初と同量添加し粒子を分散させた。もう１度遠心処理
を行い同じ溶液中に分散させて抗体感作ラテックスとし
た。下表に示す組み合わせの抗体で種々のラテックス試
薬を調製した。
0)中に0.5%(w/v)の濃度に調製し、そこに以下に記載す
るような種々の組み合わせで二価の抗体及び／又は実施
例１で調製した一価の抗体をラテックス懸濁液1ml当た
りTotalで300μｇ（OC125抗体とその一価の抗体を合計
で150μg、M11抗体とその一価の抗体を合計で150μg）
添加し、4℃で24時間反応させた。その後遠心(12000rp
m,10min.)を行い、5%BSAを含む10mM PBS(pH6.0)溶液を
最初と同量添加し粒子を分散させた。もう１度遠心処理
を行い同じ溶液中に分散させて抗体感作ラテックスとし
た。下表に示す組み合わせの抗体で種々のラテックス試
薬を調製した。
【００２６】
【表１】
【００２７】
【表２】
【００２８】実施例３：CA125の測定 検体（血清）10μｌに5%のBSAを含む10mMPBS(pH6.0) 80
μｌを添加し、実施例２で調製した各種の抗体感作ラテ
ックス粒子(0.5%)10μｌを加え45℃で15分間反応させた
後、ラテックス粒子の凝集率を測定した。この反応は東
亞医用電子株式会社の全自動免疫測定装置PAMIA-30を用
いた。
μｌを添加し、実施例２で調製した各種の抗体感作ラテ
ックス粒子(0.5%)10μｌを加え45℃で15分間反応させた
後、ラテックス粒子の凝集率を測定した。この反応は東
亞医用電子株式会社の全自動免疫測定装置PAMIA-30を用
いた。
【００２９】凝集率(P/T%)はトータルの粒子カウント
(T)に対する凝集した粒子のカウント(P)で示される。
(T)に対する凝集した粒子のカウント(P)で示される。
【００３０】０〜2665U/mlの既知濃度のCA125を含む試
料について、ラテックスの凝集率を測定し、以下の結果
を得て、それぞれ検量線を作成した。また、（0U/mlに
おけるラテックスの凝集率）＋0.2％の凝集率を示すCA1
25の濃度をそれぞれの検量線から求め、そのラテックス
試薬の感度とした。
料について、ラテックスの凝集率を測定し、以下の結果
を得て、それぞれ検量線を作成した。また、（0U/mlに
おけるラテックスの凝集率）＋0.2％の凝集率を示すCA1
25の濃度をそれぞれの検量線から求め、そのラテックス
試薬の感度とした。
【００３１】
【表３】
【００３２】この結果から明らかなように、一価の抗体
のみを感作した場合()と比べて、二価の抗体を組み合
わせる（〜）ことにより、感度が著しく向上した。
のみを感作した場合()と比べて、二価の抗体を組み合
わせる（〜）ことにより、感度が著しく向上した。
【００３３】非特異反応に対する効果 上記〜について、非特異反応を示す検体（粒子凝集
反応で非特異的凝集反応を起こす因子を含む検体）３検
体を測定し、非特異反応に対する効果を調べた。対照と
しては、CA125IIIRMA （固相にOC125モノクローナル抗
体を使用し、標識抗体としてM11モノクローナル抗体に
放射線標識したものを使用するRIA法：株式会社テイ・
エフ・ビー製）を用い、さらに比較法としてのラテッ
クス試薬から一価の抗体を除いて感作したラテックス試
薬を調製して同様の操作を行って、CA125を測定した。
得られた結果を下表に示す。
反応で非特異的凝集反応を起こす因子を含む検体）３検
体を測定し、非特異反応に対する効果を調べた。対照と
しては、CA125IIIRMA （固相にOC125モノクローナル抗
体を使用し、標識抗体としてM11モノクローナル抗体に
放射線標識したものを使用するRIA法：株式会社テイ・
エフ・ビー製）を用い、さらに比較法としてのラテッ
クス試薬から一価の抗体を除いて感作したラテックス試
薬を調製して同様の操作を行って、CA125を測定した。
得られた結果を下表に示す。
【００３４】
【表４】
【００３５】表から明らかなように、比較法において
は、非特異反応により非特異凝集が起こるためデータが
高値となるが、一価の抗体と二価の抗体を組み合わせる
ことにより非特異反応が抑制される。
は、非特異反応により非特異凝集が起こるためデータが
高値となるが、一価の抗体と二価の抗体を組み合わせる
ことにより非特異反応が抑制される。
【００３６】従来法との相関 〜のラテックス試薬を用いて、患者血清41検体につ
いて測定を行ない、従来法であるCA125IIIRMA （RIA
法）との相関を求めた。回帰直線式と相関係数は以下の
通りであり、従来法と良好な相関が認められた。 ：Y=1.006X+2.035, r=0.965 ：Y=1.001X+3.166, r=0.974 ：Y=1.063X+2.225, r=0.965 ：Y=1.112X+4.872, r=0.960 ：Y=1.147X+5.475, r=0.961
いて測定を行ない、従来法であるCA125IIIRMA （RIA
法）との相関を求めた。回帰直線式と相関係数は以下の
通りであり、従来法と良好な相関が認められた。 ：Y=1.006X+2.035, r=0.965 ：Y=1.001X+3.166, r=0.974 ：Y=1.063X+2.225, r=0.965 ：Y=1.112X+4.872, r=0.960 ：Y=1.147X+5.475, r=0.961
【００３７】実施例４：二価の抗体のみを感作したラテ
ックス試薬と本発明のラテックス試薬との比較 OC125抗体150μgとM11抗体150μg（いずれもラテックス
懸濁液1ml当たり）を感作したラテックス試薬を上述の
方法により調製した。このラテックス試薬と本発明の実
施例３に記載するのラテックス試薬のそれぞれについ
てCA125IIIRMA（RIA法）との相関を求めた。非特異反応
を示す検体を含む524検体（CA125濃度が500U/mlまで）
について測定を行なった。
ックス試薬と本発明のラテックス試薬との比較 OC125抗体150μgとM11抗体150μg（いずれもラテックス
懸濁液1ml当たり）を感作したラテックス試薬を上述の
方法により調製した。このラテックス試薬と本発明の実
施例３に記載するのラテックス試薬のそれぞれについ
てCA125IIIRMA（RIA法）との相関を求めた。非特異反応
を示す検体を含む524検体（CA125濃度が500U/mlまで）
について測定を行なった。
【００３８】とくに140U/mlまでの検体（ｎ=503）の相
関では、二価の抗体のみのラテックス試薬では、相関係
数r=0.610だったのに対し、本発明ののラテックス試
薬では、相関係数ｒ=0.884となり、非特異反応が抑制さ
れ、RIA法との相関が極めて良くなった。
関では、二価の抗体のみのラテックス試薬では、相関係
数r=0.610だったのに対し、本発明ののラテックス試
薬では、相関係数ｒ=0.884となり、非特異反応が抑制さ
れ、RIA法との相関が極めて良くなった。
【００３９】
【発明の効果】本発明によれば、測定試料中に存在する
動物免疫グロブリンに対する抗体（例えばHAMA）等の干
渉物質による干渉を効率よく減少させ、かつ特異性を維
持できるので、より正確にCA125を測定することができ
る。
動物免疫グロブリンに対する抗体（例えばHAMA）等の干
渉物質による干渉を効率よく減少させ、かつ特異性を維
持できるので、より正確にCA125を測定することができ
る。
【００４０】また、粒子凝集法により測定を行うことに
よって、従来より簡単な操作で、短時間にCA125の測定
を行うことができる。
よって、従来より簡単な操作で、短時間にCA125の測定
を行うことができる。
Claims (5)
- 【請求項１】CA125と特異的に反応する免疫グロブリン
の一価の抗体と二価の抗体を固相に固定化して使用する
ことを特徴とするCA125の測定方法。 - 【請求項２】前記一価の抗体と前記二価の抗体の比が、
1：9〜9：1である請求項１記載のCA125の測定方法。 - 【請求項３】前記抗体として、互いに異なるエピトープ
を認識する抗体を複数用いる請求項1または2記載のCA12
5の測定方法。 - 【請求項４】CA125と特異的に反応する免疫グロブリン
が、モノクローナル抗体OC125及びM11から選択される請
求項1〜3のいずれかに記載のCA125の測定方法。 - 【請求項５】前記固相として粒子を用い、粒子凝集法に
より測定を行う請求項1〜4のいずれかに記載のCA125の
測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17053497A JP3779798B2 (ja) | 1997-06-26 | 1997-06-26 | Ｃａ１２５の測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17053497A JP3779798B2 (ja) | 1997-06-26 | 1997-06-26 | Ｃａ１２５の測定方法 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1114626A true JPH1114626A (ja) | 1999-01-22 |
| JPH1114626A5 JPH1114626A5 (ja) | 2005-04-14 |
| JP3779798B2 JP3779798B2 (ja) | 2006-05-31 |
Family
ID=15906708
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17053497A Expired - Fee Related JP3779798B2 (ja) | 1997-06-26 | 1997-06-26 | Ｃａ１２５の測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3779798B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2298806A1 (en) | 2002-10-16 | 2011-03-23 | Purdue Pharma L.P. | Antibodies that bind cell-associated CA 125/0722P and methods of use thereof |
| CN111721938A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-09-29 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 糖链抗原125胶乳免疫比浊试剂盒 |
-
1997
- 1997-06-26 JP JP17053497A patent/JP3779798B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2298806A1 (en) | 2002-10-16 | 2011-03-23 | Purdue Pharma L.P. | Antibodies that bind cell-associated CA 125/0722P and methods of use thereof |
| EP2891666A1 (en) | 2002-10-16 | 2015-07-08 | Purdue Pharma L.P. | Antibodies that bind cell-associated CA 125/O722P and methods of use thereof |
| CN111721938A (zh) * | 2019-03-29 | 2020-09-29 | 北京九强生物技术股份有限公司 | 糖链抗原125胶乳免疫比浊试剂盒 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3779798B2 (ja) | 2006-05-31 |
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