JPH11146793A - 腫瘍壊死関連受容体ｔｒ１およびｔｒ２に関するアゴニストおよびアンタゴニストの同定方法 - Google Patents
腫瘍壊死関連受容体ｔｒ１およびｔｒ２に関するアゴニストおよびアンタゴニストの同定方法Info
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- JPH11146793A JPH11146793A JP10217113A JP21711398A JPH11146793A JP H11146793 A JPH11146793 A JP H11146793A JP 10217113 A JP10217113 A JP 10217113A JP 21711398 A JP21711398 A JP 21711398A JP H11146793 A JPH11146793 A JP H11146793A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 本発明は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−
Ｒ）関連ポリペプチド（蛋白）およびそれらのリガンド
（以下、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４という）
に関する。また本発明は、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およ
びＴＬ４のアゴニストおよびアンタゴニストの同定方法
にも関する。 【解決手段】 ＴＲ１またはＴＲ２に対するアゴニスト
またはアンタゴニストを同定する方法であって、（ａ）
標識または未標識のリガンドＴＬ２またはＴＬ４それぞ
れの存在下で候補化合物をＴＲ１またはＴＲ２と接触さ
せ；次いで（ｂ）該候補化合物がＴＬ２またはＴＬ４と
競争してそれぞれＴＲ１またはＴＲ２に結合する能力を
評価することを含む方法。
Ｒ）関連ポリペプチド（蛋白）およびそれらのリガンド
（以下、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４という）
に関する。また本発明は、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およ
びＴＬ４のアゴニストおよびアンタゴニストの同定方法
にも関する。 【解決手段】 ＴＲ１またはＴＲ２に対するアゴニスト
またはアンタゴニストを同定する方法であって、（ａ）
標識または未標識のリガンドＴＬ２またはＴＬ４それぞ
れの存在下で候補化合物をＴＲ１またはＴＲ２と接触さ
せ；次いで（ｂ）該候補化合物がＴＬ２またはＴＬ４と
競争してそれぞれＴＲ１またはＴＲ２に結合する能力を
評価することを含む方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、腫瘍壊死因子受容
体（ＴＮＦ−Ｒ）関連ポリペプチド（蛋白）およびそれ
らのリガンド（以下、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴ
Ｌ４という）に関する。また本発明は、本明細書記載の
スクリーニング方法によるアゴニストまたはアンタゴニ
ストを用いる、かかるポリペプチドの作用の阻害または
活性化にも関する。
体（ＴＮＦ−Ｒ）関連ポリペプチド（蛋白）およびそれ
らのリガンド（以下、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴ
Ｌ４という）に関する。また本発明は、本明細書記載の
スクリーニング方法によるアゴニストまたはアンタゴニ
ストを用いる、かかるポリペプチドの作用の阻害または
活性化にも関する。
【０００２】
【従来の技術】多くの生物学的作用は特定の刺激および
天然の生物学的プロセスに対する応答であり、サイトカ
インのごとき因子により制御されている。これらのサイ
トカインは、受容体を用いて細胞内応答を引き起こすこ
とにより、標的細胞受容体を介して作用する。例えば、
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファおよびベータは、ＴＮ
Ｆ受容体を介して作用して多くの生物学的プロセス（感
染に対する防御およびショックや炎症性疾病の誘起を包
含）を調節するサイトカインである。ＴＮＦ分子は「Ｔ
ＨＦ−リガンド」スーパーファミリーに属し、それらの
受容体または逆リガンド「ＴＮＦ−受容体」スーパーフ
ァミリーと一緒になって作用する。今までのところ、Ｔ
ＮＦリガンドスーパーファミリーの１０種のメンバーが
同定されており、ＴＨＦ−受容体スーパーファミリーの
１３種のメンバーが特徴づけられている。ＴＮＦ−ａ、
リンホトキシン−ａ（ＬＴ−ａ、ＴＮＦ−ｂとしても知
られる）、ＬＴ−ｂ（複合体ヘテロダイマーＬＴ−ａ２
−ｂ中に見いだされる）、ＦａｓＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ
２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌおよび
ＴＲＡＩＬがリガンドに包含される（Wiley et al. Imm
unity 3:673-682 (1995)）。１種（ＬＴａ）を除いてこ
れらはすべてタイプＩＩの膜蛋白として発現される。Ｔ
ＮＦ受容体のスーパーファミリーは、ｐ５５ＴＮＦ受容
体、ｐ７５ＴＮＦ受容体、ＴＮＦ受容体−関連蛋白、Ｆ
ＡＳ抗原またはＡＰＯ−１、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ
３０、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、低親和性ｐ７５、ＮＧＦ
−受容体を包含する（Meager, A., Biologicals, 22:29
1-295 (1994)）。ＴＮＦ−リガンドスーパーファミリー
の多くのメンバーは活性化Ｔ細胞により発現され、その
ことは、それらが細胞個体発生および機能に関連してい
る他の細胞タイプとＴ細胞との相互作用に必要であるこ
とを意味する（Maeger, A.,上記文献）。ＴＮＦ受容体
ファミリーのいくつかのメンバーの必須機能についての
相当数の考察が、これらの蛋白の発現を停止させる変異
体の同定および作成により得られている。例えば、ＦＡ
Ｓ抗原およびそのリガンドにおける自然発生的変異はリ
ンパ増殖性疾病を引き起こし（Watanabe-Fukunaga, R.,
et al., Nature 356:314(1992)）、おそらく、このこ
とはプログラムされた細胞死の欠陥を反映しているので
あろう。ＣＤ４０リガンドの変異は、血漿中の高レベル
の免疫グロブリンＭおよび低レベルの免疫グロブリンＧ
により特徴づけられるＸ−リンクした免疫不全状態を引
き起こし、そのことはＴ細胞依存性Ｂ細胞活性化の欠陥
を示すものである（Allen, R. C. et al., Science 25
9:990 (1993)）。低親和性神経増殖因子受容体の標的と
なる変異は、末梢構造の感覚イノベーションの欠陥によ
り特徴づけられる疾病を引き起こす（Lee, K. F. et a
l., Cell 69:737 (1992)）。ＴＮＦおよびＬＴ−ａは２
種のＴＮＦ受容体（５５−および７５−ｋｄ ＴＮＦ受
容体）に結合しうる。受容体に作用するＴＮＦおよびＬ
Ｔ−ａにより誘発される生物学的効果の大部分は、移植
腫瘍の出血性壊死、細胞毒性、エンドトキシンショック
における役割、炎症、免疫調節、増殖および抗−ウイル
ス応答、ならびにイオン化照射の有害な効果に対する防
御を包含する。ＴＮＦおよびＬＴ−ａは、エンドトキシ
ンショック、脳マラリア、腫瘍、自己免疫疾患、ＡＩＤ
Ｓおよび移植片−宿主拒絶反応を包含する広範な疾病の
発病に関与している（Beutler,B. and Von Huffel, C.,
Science 264:67-668 (1994)）。ｐ５５受容体における
変異は微生物感染に対する感受性上昇を引き起こす。そ
のうえ、ＴＮＦＲ１（ｐ２５）およびＦａｓのＣ末端付
近の約８０個のアミノ酸のドメインは、「デスドメイン
（death domain）」として報告されており、プログラム
された細胞死に関するシグナルのトランスダクションに
関与している（Tartaglia et al., Cell 74:845 (199
3)）。ＴＮＦ受容体細胞内ドメインの他の領域は、ＮＦ
−ｋＢを介する転写活性化に関与している（Cheng and
Baltimore Genes and Development 10:963-973 (199
6)）。より最近の証拠は、受容体は「逆シグナリング」
として知られるプロセスにおいて膜結合ＴＮＦファミリ
ーのリガンドを発現する細胞におけるシグナルを誘導し
うることを示唆している（Wiley et al., J. Immunol.
17557:3635-3639）。
天然の生物学的プロセスに対する応答であり、サイトカ
インのごとき因子により制御されている。これらのサイ
トカインは、受容体を用いて細胞内応答を引き起こすこ
とにより、標的細胞受容体を介して作用する。例えば、
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アルファおよびベータは、ＴＮ
Ｆ受容体を介して作用して多くの生物学的プロセス（感
染に対する防御およびショックや炎症性疾病の誘起を包
含）を調節するサイトカインである。ＴＮＦ分子は「Ｔ
ＨＦ−リガンド」スーパーファミリーに属し、それらの
受容体または逆リガンド「ＴＮＦ−受容体」スーパーフ
ァミリーと一緒になって作用する。今までのところ、Ｔ
ＮＦリガンドスーパーファミリーの１０種のメンバーが
同定されており、ＴＨＦ−受容体スーパーファミリーの
１３種のメンバーが特徴づけられている。ＴＮＦ−ａ、
リンホトキシン−ａ（ＬＴ−ａ、ＴＮＦ−ｂとしても知
られる）、ＬＴ−ｂ（複合体ヘテロダイマーＬＴ−ａ２
−ｂ中に見いだされる）、ＦａｓＬ、ＣＤ４０Ｌ、ＣＤ
２７Ｌ、ＣＤ３０Ｌ、４−１ＢＢＬ、ＯＸ４０Ｌおよび
ＴＲＡＩＬがリガンドに包含される（Wiley et al. Imm
unity 3:673-682 (1995)）。１種（ＬＴａ）を除いてこ
れらはすべてタイプＩＩの膜蛋白として発現される。Ｔ
ＮＦ受容体のスーパーファミリーは、ｐ５５ＴＮＦ受容
体、ｐ７５ＴＮＦ受容体、ＴＮＦ受容体−関連蛋白、Ｆ
ＡＳ抗原またはＡＰＯ−１、ＣＤ４０、ＣＤ２７、ＣＤ
３０、４−１ＢＢ、ＯＸ４０、低親和性ｐ７５、ＮＧＦ
−受容体を包含する（Meager, A., Biologicals, 22:29
1-295 (1994)）。ＴＮＦ−リガンドスーパーファミリー
の多くのメンバーは活性化Ｔ細胞により発現され、その
ことは、それらが細胞個体発生および機能に関連してい
る他の細胞タイプとＴ細胞との相互作用に必要であるこ
とを意味する（Maeger, A.,上記文献）。ＴＮＦ受容体
ファミリーのいくつかのメンバーの必須機能についての
相当数の考察が、これらの蛋白の発現を停止させる変異
体の同定および作成により得られている。例えば、ＦＡ
Ｓ抗原およびそのリガンドにおける自然発生的変異はリ
ンパ増殖性疾病を引き起こし（Watanabe-Fukunaga, R.,
et al., Nature 356:314(1992)）、おそらく、このこ
とはプログラムされた細胞死の欠陥を反映しているので
あろう。ＣＤ４０リガンドの変異は、血漿中の高レベル
の免疫グロブリンＭおよび低レベルの免疫グロブリンＧ
により特徴づけられるＸ−リンクした免疫不全状態を引
き起こし、そのことはＴ細胞依存性Ｂ細胞活性化の欠陥
を示すものである（Allen, R. C. et al., Science 25
9:990 (1993)）。低親和性神経増殖因子受容体の標的と
なる変異は、末梢構造の感覚イノベーションの欠陥によ
り特徴づけられる疾病を引き起こす（Lee, K. F. et a
l., Cell 69:737 (1992)）。ＴＮＦおよびＬＴ−ａは２
種のＴＮＦ受容体（５５−および７５−ｋｄ ＴＮＦ受
容体）に結合しうる。受容体に作用するＴＮＦおよびＬ
Ｔ−ａにより誘発される生物学的効果の大部分は、移植
腫瘍の出血性壊死、細胞毒性、エンドトキシンショック
における役割、炎症、免疫調節、増殖および抗−ウイル
ス応答、ならびにイオン化照射の有害な効果に対する防
御を包含する。ＴＮＦおよびＬＴ−ａは、エンドトキシ
ンショック、脳マラリア、腫瘍、自己免疫疾患、ＡＩＤ
Ｓおよび移植片−宿主拒絶反応を包含する広範な疾病の
発病に関与している（Beutler,B. and Von Huffel, C.,
Science 264:67-668 (1994)）。ｐ５５受容体における
変異は微生物感染に対する感受性上昇を引き起こす。そ
のうえ、ＴＮＦＲ１（ｐ２５）およびＦａｓのＣ末端付
近の約８０個のアミノ酸のドメインは、「デスドメイン
（death domain）」として報告されており、プログラム
された細胞死に関するシグナルのトランスダクションに
関与している（Tartaglia et al., Cell 74:845 (199
3)）。ＴＮＦ受容体細胞内ドメインの他の領域は、ＮＦ
−ｋＢを介する転写活性化に関与している（Cheng and
Baltimore Genes and Development 10:963-973 (199
6)）。より最近の証拠は、受容体は「逆シグナリング」
として知られるプロセスにおいて膜結合ＴＮＦファミリ
ーのリガンドを発現する細胞におけるシグナルを誘導し
うることを示唆している（Wiley et al., J. Immunol.
17557:3635-3639）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】ＴＮＦファミリーのリ
ガンドおよびＴＮＦファミリーの受容体の影響は様々で
あり、哺乳動物系の生物学的プロセスにおいて正常なら
びに異常な多くの機能に影響する。それゆえ、正常およ
び疾病状態両方の生物学的活性に影響を及ぼすかかる受
容体およびリガンドの同定および特徴づけに対する必要
性が明かに存在する。詳細には、ＴＮＦ受容体ファミリ
ーの新規メンバーを単離し、特徴づけすることが必要で
ある。このことは、これらの腫瘍壊死因子受容体（ＴＮ
Ｆ−Ｒ）が治療薬を目的とした確立され証明された歴史
を有することを示す。慢性および急性炎症、関節炎、敗
血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾癬）、
移植拒絶反応、対宿主移植片疾患、感染、卒中、虚血、
急性呼吸困難症候群、再狭窄、脳の傷害、ＡＩＤＳ、骨
の疾患、癌（例えば、リンパ増殖性疾患）、アテローム
性動脈硬化、およびアルツハイマー病（これらに限らな
い）を包含する機能不全または疾病の予防、改善または
修正において役割を果たしうる腫瘍壊死因子受容体（Ｔ
ＮＦ−Ｒ）ファミリーのさらなるメンバーの同定および
特徴づけに対する必要性が明かに存在する。
ガンドおよびＴＮＦファミリーの受容体の影響は様々で
あり、哺乳動物系の生物学的プロセスにおいて正常なら
びに異常な多くの機能に影響する。それゆえ、正常およ
び疾病状態両方の生物学的活性に影響を及ぼすかかる受
容体およびリガンドの同定および特徴づけに対する必要
性が明かに存在する。詳細には、ＴＮＦ受容体ファミリ
ーの新規メンバーを単離し、特徴づけすることが必要で
ある。このことは、これらの腫瘍壊死因子受容体（ＴＮ
Ｆ−Ｒ）が治療薬を目的とした確立され証明された歴史
を有することを示す。慢性および急性炎症、関節炎、敗
血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾癬）、
移植拒絶反応、対宿主移植片疾患、感染、卒中、虚血、
急性呼吸困難症候群、再狭窄、脳の傷害、ＡＩＤＳ、骨
の疾患、癌（例えば、リンパ増殖性疾患）、アテローム
性動脈硬化、およびアルツハイマー病（これらに限らな
い）を包含する機能不全または疾病の予防、改善または
修正において役割を果たしうる腫瘍壊死因子受容体（Ｔ
ＮＦ−Ｒ）ファミリーのさらなるメンバーの同定および
特徴づけに対する必要性が明かに存在する。
【０００４】
【課題を解決するための手段および発明の実施の形態】
本発明は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）関連ポリ
ペプチドならびにそれらのリガンド（以下、ＴＲ１、Ｔ
Ｒ２、ＴＬ２およびＴＬ４という）に関する。また本発
明は、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４のアゴニス
トおよびアンタゴニストの同定方法にも関する。かくし
て同定されたアゴニストおよびアンタゴニストを用い
て、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４のバランス不
良により引き起こされる、とりわけ慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸
疾患、乾癬）、移植拒絶反応、対宿主移植片疾患、感
染、卒中、虚血、急性呼吸困難症候群、再狭窄、脳の傷
害、ＡＩＤＳ、骨の疾患、癌（例えば、リンパ増殖性疾
患）、アテローム性動脈硬化、およびアルツハイマー病
を治療することができる。
本発明は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦ−Ｒ）関連ポリ
ペプチドならびにそれらのリガンド（以下、ＴＲ１、Ｔ
Ｒ２、ＴＬ２およびＴＬ４という）に関する。また本発
明は、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４のアゴニス
トおよびアンタゴニストの同定方法にも関する。かくし
て同定されたアゴニストおよびアンタゴニストを用い
て、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４のバランス不
良により引き起こされる、とりわけ慢性および急性炎
症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸
疾患、乾癬）、移植拒絶反応、対宿主移植片疾患、感
染、卒中、虚血、急性呼吸困難症候群、再狭窄、脳の傷
害、ＡＩＤＳ、骨の疾患、癌（例えば、リンパ増殖性疾
患）、アテローム性動脈硬化、およびアルツハイマー病
を治療することができる。
【０００５】「ＴＲ１またはＴＲ１ポリペプチドまたは
ＴＲ１蛋白」は、一般的には、とりわけ、配列番号：１
に示すアミノ酸配列を有するポリペプチドならびに配列
番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
全長にわたって配列番号：１のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポ
リペプチドをいう。さらにそのうえ、ＴＲ１は、配列番
号：１のフラグメントに対して７０％の同一性を有する
配列を含むポリペプチドもいう。また「ＴＲ１またはＴ
Ｒ１ポリペプチドまたはＴＲ１蛋白」は、上記ポリペプ
チドの融合蛋白のごとき誘導体もいい、これらの誘導体
のいくつかをさらに後で説明する。「ＴＲ２またはＴＲ
２ポリペプチドまたはＴＲ２蛋白」は、一般的には、と
りわけ、配列番号：２に示すアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドならびに配列番号：２のアミノ酸配列を含むポ
リペプチド；ならびに全長にわたって配列番号：２のア
ミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する
アミノ酸配列を含むポリペプチドをいう。さらにそのう
え、ＴＲ２は、配列番号：２のフラグメントに対して７
０％の同一性を有する配列を含むポリペプチドもいう。
また「ＴＲ２またはＴＲ２ポリペプチドまたはＴＲ２蛋
白」は、上記ポリペプチドの融合蛋白のごとき誘導体も
いい、これらの誘導体のいくつかをさらに後で説明す
る。「ＴＬ２またはＴＬ２ポリペプチドまたはＴＬ２蛋
白」は、一般的には、とりわけ、配列番号：３に示すア
ミノ酸配列を有するポリペプチドならびに配列番号：３
のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに全長にわ
たって配列番号：３のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチ
ドをいう。さらにそのうえ、ＴＬ２は、配列番号：３の
フラグメントに対して７０％の同一性を有する配列を含
むポリペプチドもいう。また「ＴＬ２またはＴＬ２ポリ
ペプチドまたはＴＬ２蛋白」は、上記ポリペプチドの融
合蛋白のごとき誘導体もいい、これらの誘導体のいくつ
かをさらに後で説明する。「ＴＬ４またはＴＬ４ポリペ
プチドまたはＴＬ４蛋白」は、一般的には、とりわけ、
配列番号：４に示すアミノ酸配列を有するポリペプチド
ならびに配列番号：４のアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド；ならびに全長にわたって配列番号：４のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列を含むポリペプチドをいう。さらにそのうえ、ＴＬ
４は、配列番号：４のフラグメントに対して７０％の同
一性を有する配列を含むポリペプチドもいう。また「Ｔ
Ｌ４またはＴＬ４ポリペプチドまたはＴＬ４蛋白」は、
上記ポリペプチドの融合蛋白のごとき誘導体もいい、こ
れらの誘導体のいくつかをさらに後で説明する。
ＴＲ１蛋白」は、一般的には、とりわけ、配列番号：１
に示すアミノ酸配列を有するポリペプチドならびに配列
番号：１のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに
全長にわたって配列番号：１のアミノ酸配列に対して少
なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポ
リペプチドをいう。さらにそのうえ、ＴＲ１は、配列番
号：１のフラグメントに対して７０％の同一性を有する
配列を含むポリペプチドもいう。また「ＴＲ１またはＴ
Ｒ１ポリペプチドまたはＴＲ１蛋白」は、上記ポリペプ
チドの融合蛋白のごとき誘導体もいい、これらの誘導体
のいくつかをさらに後で説明する。「ＴＲ２またはＴＲ
２ポリペプチドまたはＴＲ２蛋白」は、一般的には、と
りわけ、配列番号：２に示すアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドならびに配列番号：２のアミノ酸配列を含むポ
リペプチド；ならびに全長にわたって配列番号：２のア
ミノ酸配列に対して少なくとも７０％の同一性を有する
アミノ酸配列を含むポリペプチドをいう。さらにそのう
え、ＴＲ２は、配列番号：２のフラグメントに対して７
０％の同一性を有する配列を含むポリペプチドもいう。
また「ＴＲ２またはＴＲ２ポリペプチドまたはＴＲ２蛋
白」は、上記ポリペプチドの融合蛋白のごとき誘導体も
いい、これらの誘導体のいくつかをさらに後で説明す
る。「ＴＬ２またはＴＬ２ポリペプチドまたはＴＬ２蛋
白」は、一般的には、とりわけ、配列番号：３に示すア
ミノ酸配列を有するポリペプチドならびに配列番号：３
のアミノ酸配列を含むポリペプチド；ならびに全長にわ
たって配列番号：３のアミノ酸配列に対して少なくとも
７０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチ
ドをいう。さらにそのうえ、ＴＬ２は、配列番号：３の
フラグメントに対して７０％の同一性を有する配列を含
むポリペプチドもいう。また「ＴＬ２またはＴＬ２ポリ
ペプチドまたはＴＬ２蛋白」は、上記ポリペプチドの融
合蛋白のごとき誘導体もいい、これらの誘導体のいくつ
かをさらに後で説明する。「ＴＬ４またはＴＬ４ポリペ
プチドまたはＴＬ４蛋白」は、一般的には、とりわけ、
配列番号：４に示すアミノ酸配列を有するポリペプチド
ならびに配列番号：４のアミノ酸配列を含むポリペプチ
ド；ならびに全長にわたって配列番号：４のアミノ酸配
列に対して少なくとも７０％の同一性を有するアミノ酸
配列を含むポリペプチドをいう。さらにそのうえ、ＴＬ
４は、配列番号：４のフラグメントに対して７０％の同
一性を有する配列を含むポリペプチドもいう。また「Ｔ
Ｌ４またはＴＬ４ポリペプチドまたはＴＬ４蛋白」は、
上記ポリペプチドの融合蛋白のごとき誘導体もいい、こ
れらの誘導体のいくつかをさらに後で説明する。
【０００６】配列番号：４のポリペプチドをコードして
いるｃＤＮＡは配列番号：５に含まれる。
いるｃＤＮＡは配列番号：５に含まれる。
【０００７】「ポリペプチド」は、ペプチド結合または
修飾したペプチド結合（この場合、ペプチド同等物とな
る）により互いに結合している２個またはそれ以上のア
ミノ酸を含むペプチドまたは蛋白を意味する。「ポリペ
プチド」は、通常、例えばペプチド、オリゴペプチドお
よびオリゴマーとも称される短鎖のもの、および一般的
に蛋白と称される長鎖のものの両方を意味する。ポリペ
プチドは遺伝子によりコードされた２０種のアミノ酸と
は異なるアミノ酸を含有していてもよい。「ポリペプチ
ド」には、プロセッシングおよびその他の翻訳後修飾の
ような天然プロセスにより修飾されたものが含まれる
が、当業者に周知の化学修飾技術によっても修飾され
る。かかる修飾は基礎的な参考書およびさらに詳細な論
文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載されており、
これらは当業者に周知である。修飾は、ペプチド骨格、
アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端等の
ポリペプチドの任意の部位で起こりうる。同一の型の修
飾はポリペプチドのいくつかの部位で、同一または異な
る程度で存在し得ることが理解されよう。また、ポリペ
プチドは多くの型の修飾をも含み得る。ポリペプチド
は、ユビキチネーションの結果として分枝状となったも
のであってもよく、ポリペプチドは分枝ありまたはなし
の環状のものであってもよい。環状、分枝状および分枝
状かつ環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセスによ
り生じたものであってもよく、あるいは合成的方法によ
り製造されたものであってもよい。修飾には、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビ
ンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導
体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、
交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、
交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタメー
ト形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコ
シル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセッシ
ング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル
化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カ
ルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化、セレノ
イル化、硫酸化、アルギニル化のごときトランスファー
ＲＮＡにより媒介される蛋白へのアミノ酸の添加、なら
びにユビキチネーションなどがある。例えばProteins-S
tructure and Molecular Properties、第２版、T.E.Cre
ighton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（199
3）およびPosttranslational Covalent Modification o
f Proteins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、ニ
ューヨーク（1983）のWold,F.,Posttranslational Prot
ein Modifications ：Perspective and Prospects、1〜
12頁；Seifterら、Meth.Enzymol.182:626-646（1990）
およびRattanら、Protein Synthesis：Posttranslation
al Modificationsand Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48
-62（1992）を参照されたい。
修飾したペプチド結合（この場合、ペプチド同等物とな
る）により互いに結合している２個またはそれ以上のア
ミノ酸を含むペプチドまたは蛋白を意味する。「ポリペ
プチド」は、通常、例えばペプチド、オリゴペプチドお
よびオリゴマーとも称される短鎖のもの、および一般的
に蛋白と称される長鎖のものの両方を意味する。ポリペ
プチドは遺伝子によりコードされた２０種のアミノ酸と
は異なるアミノ酸を含有していてもよい。「ポリペプチ
ド」には、プロセッシングおよびその他の翻訳後修飾の
ような天然プロセスにより修飾されたものが含まれる
が、当業者に周知の化学修飾技術によっても修飾され
る。かかる修飾は基礎的な参考書およびさらに詳細な論
文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載されており、
これらは当業者に周知である。修飾は、ペプチド骨格、
アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端等の
ポリペプチドの任意の部位で起こりうる。同一の型の修
飾はポリペプチドのいくつかの部位で、同一または異な
る程度で存在し得ることが理解されよう。また、ポリペ
プチドは多くの型の修飾をも含み得る。ポリペプチド
は、ユビキチネーションの結果として分枝状となったも
のであってもよく、ポリペプチドは分枝ありまたはなし
の環状のものであってもよい。環状、分枝状および分枝
状かつ環状のポリペプチドは翻訳後の天然プロセスによ
り生じたものであってもよく、あるいは合成的方法によ
り製造されたものであってもよい。修飾には、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビ
ンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導
体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、
交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、
交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタメー
ト形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコ
シル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチ
ル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセッシ
ング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル
化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カ
ルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化、セレノ
イル化、硫酸化、アルギニル化のごときトランスファー
ＲＮＡにより媒介される蛋白へのアミノ酸の添加、なら
びにユビキチネーションなどがある。例えばProteins-S
tructure and Molecular Properties、第２版、T.E.Cre
ighton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（199
3）およびPosttranslational Covalent Modification o
f Proteins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、ニ
ューヨーク（1983）のWold,F.,Posttranslational Prot
ein Modifications ：Perspective and Prospects、1〜
12頁；Seifterら、Meth.Enzymol.182:626-646（1990）
およびRattanら、Protein Synthesis：Posttranslation
al Modificationsand Aging，Ann.N.Y.Acad.Sci.663:48
-62（1992）を参照されたい。
【０００８】「同一性」とは、ヌクレオチド配列または
アミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的には、最高
の合致が得られるように配列を並置する。「同一性」は
それ自体当該分野で認識されている意味を有し、公表さ
れた手法を用いて計算できる。例えば、Computational
Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・
ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988年；Bi
ocomputing：Informatics and Genome Projects，Smit
h,D.W.編、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1993
年；Computer Analysis of Sequence Data，パートＩ，
Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマン・プレ
ス、ニュージャージー、1994年；Sequence Analysis in
Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデミック・
プレス、1987年；およびSequence Analysis Primer，Gr
ibskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレ
ス、ニューヨーク、1991年参照。二つのポリヌクレオチ
ド配列またはポリペプチド配列の間の同一性を測定する
方法は多くあるが、用語「同一性」は当業者に周知であ
る（Carillo,H.およびLipman,D.，SIAM J.AppliedMat
h.，48:1073（1988））。二つの配列間の同一性または
類似性を測定するために通常用いられる方法は、Guide
to Huge Computers,Martin J.Bishop,ed.,Academic Pre
ss,San Diego,1994およびCarilo,H.,and Lipton,D.,SIA
M J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示されてい
るが、これらに限定するものではない。同一性および類
似性を決定する方法は、公に入手できるコンピューター
プログラムに集成されている。二つの配列間の同一性お
よび類似性を測定する好ましいコンピュータープログラ
ム法には、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.
ら、Nucleic Acids Research 12(1):387（1984）、BLAS
TP、BLASTN、およびFASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.B
iol（1990） 215:403））等があるが、これらに限定す
るものではない。一例として、配列番号：２の対照アミ
ノ酸配列に対して少なくとも例えば７０％の同一性を有
するアミノ酸配列を有するポリペプチドを例に挙げる
と、そのポリペプチド配列が配列番号：２の対照アミノ
酸配列のアミノ酸１００個ごとに３０個までのアミノ酸
の変化を含みうることを除き、そのポリペプチドのアミ
ノ酸配列は対照配列と同一である。言い換えると、対照
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドを得るためには、対照配
列中のアミノ酸の３０％までが欠失または他のアミノ酸
と置換していてもよく、あるいは対照配列中の全アミノ
酸のうち３０％までの数のアミノ酸が対照配列中に挿入
されたものであってもよい。対照配列におけるこれらの
変化は、対照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末
端位置に存在してもよく、あるいはそれらの末端間のい
ずれかの位置に存在してもよく、対照配列中に散在して
いてもよく、あるいは対照配列内で１個またはそれ以上
の一連の群をなしていてもよい。
アミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的には、最高
の合致が得られるように配列を並置する。「同一性」は
それ自体当該分野で認識されている意味を有し、公表さ
れた手法を用いて計算できる。例えば、Computational
Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・
ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988年；Bi
ocomputing：Informatics and Genome Projects，Smit
h,D.W.編、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1993
年；Computer Analysis of Sequence Data，パートＩ，
Griffin,A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマン・プレ
ス、ニュージャージー、1994年；Sequence Analysis in
Molecular Biology，von Heinje,G.、アカデミック・
プレス、1987年；およびSequence Analysis Primer，Gr
ibskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレ
ス、ニューヨーク、1991年参照。二つのポリヌクレオチ
ド配列またはポリペプチド配列の間の同一性を測定する
方法は多くあるが、用語「同一性」は当業者に周知であ
る（Carillo,H.およびLipman,D.，SIAM J.AppliedMat
h.，48:1073（1988））。二つの配列間の同一性または
類似性を測定するために通常用いられる方法は、Guide
to Huge Computers,Martin J.Bishop,ed.,Academic Pre
ss,San Diego,1994およびCarilo,H.,and Lipton,D.,SIA
M J.Applied Math.，48:1073（1988）等に開示されてい
るが、これらに限定するものではない。同一性および類
似性を決定する方法は、公に入手できるコンピューター
プログラムに集成されている。二つの配列間の同一性お
よび類似性を測定する好ましいコンピュータープログラ
ム法には、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.
ら、Nucleic Acids Research 12(1):387（1984）、BLAS
TP、BLASTN、およびFASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.B
iol（1990） 215:403））等があるが、これらに限定す
るものではない。一例として、配列番号：２の対照アミ
ノ酸配列に対して少なくとも例えば７０％の同一性を有
するアミノ酸配列を有するポリペプチドを例に挙げる
と、そのポリペプチド配列が配列番号：２の対照アミノ
酸配列のアミノ酸１００個ごとに３０個までのアミノ酸
の変化を含みうることを除き、そのポリペプチドのアミ
ノ酸配列は対照配列と同一である。言い換えると、対照
アミノ酸配列に対して少なくとも７０％同一であるアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドを得るためには、対照配
列中のアミノ酸の３０％までが欠失または他のアミノ酸
と置換していてもよく、あるいは対照配列中の全アミノ
酸のうち３０％までの数のアミノ酸が対照配列中に挿入
されたものであってもよい。対照配列におけるこれらの
変化は、対照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末
端位置に存在してもよく、あるいはそれらの末端間のい
ずれかの位置に存在してもよく、対照配列中に散在して
いてもよく、あるいは対照配列内で１個またはそれ以上
の一連の群をなしていてもよい。
【０００９】今回我々は、配列番号：３のＴＬ２（ＴＲ
ＡＩＬまたはＡｐｏ−２Ｌとしても知られる（Wiley S
R, et al., Immunity (6):673-682 (1995); Pitt et a
l., J.Biol. Chem. 271:12687-12690 (1996)））が配列
番号：１のＴＲ１（オステオプロテグリン（ＯＰＧ）と
しても知られる（W. S. Simonet, et al., Cell, Vol8
9, pp 309-319, 1997））のリガンドであることを見い
だした。さらに、我々は、配列番号：４のＴＬ４が配列
番号：２のＴＲ２（R. I. Montgomery et al.,Cell, Vo
l 87, pp427-436, 1996; Kwon et al., J. Biol. Chem.
272:14272-14276 (1997); Hsu et al., J. Biol. Che
m. 272:13471-13474 (1997)niyori説明されている）の
リガンドであることも見いだした。よって、本発明ＴＲ
１およびＴＲ２ポリペプチドならびにそれらのそれぞれ
のリガンドＴＬ２およびＴＬ４を、受容体、またはそれ
らのリガンドに結合して、本発明ＴＲ１およびＴＲ２受
容体ポリペプチド、またはそれらのそれぞれのリガンド
ＴＬ２およびＴＬ４を活性化する化合物（アゴニス
ト）、あるいはそれらの活性化を阻害する化合物（アン
タゴニスト）のスクリーニングプロセスにおいて用いる
ことができる。よって、本発明ポリペプチドを用いて、
細胞、無細胞調合物、化学ライブラリー、および天然産
物の混合物中における小型分子基質、受容体およびリガ
ンドの結合を評価することができる。これらの基質、受
容体およびリガンドは天然基質およびリガンドであって
もよく、また、構造または機能の模倣物であってもよ
い。Coliganet al., Current Protocols in Immunology
1(2):Chapter 5 (1991)参照。
ＡＩＬまたはＡｐｏ−２Ｌとしても知られる（Wiley S
R, et al., Immunity (6):673-682 (1995); Pitt et a
l., J.Biol. Chem. 271:12687-12690 (1996)））が配列
番号：１のＴＲ１（オステオプロテグリン（ＯＰＧ）と
しても知られる（W. S. Simonet, et al., Cell, Vol8
9, pp 309-319, 1997））のリガンドであることを見い
だした。さらに、我々は、配列番号：４のＴＬ４が配列
番号：２のＴＲ２（R. I. Montgomery et al.,Cell, Vo
l 87, pp427-436, 1996; Kwon et al., J. Biol. Chem.
272:14272-14276 (1997); Hsu et al., J. Biol. Che
m. 272:13471-13474 (1997)niyori説明されている）の
リガンドであることも見いだした。よって、本発明ＴＲ
１およびＴＲ２ポリペプチドならびにそれらのそれぞれ
のリガンドＴＬ２およびＴＬ４を、受容体、またはそれ
らのリガンドに結合して、本発明ＴＲ１およびＴＲ２受
容体ポリペプチド、またはそれらのそれぞれのリガンド
ＴＬ２およびＴＬ４を活性化する化合物（アゴニス
ト）、あるいはそれらの活性化を阻害する化合物（アン
タゴニスト）のスクリーニングプロセスにおいて用いる
ことができる。よって、本発明ポリペプチドを用いて、
細胞、無細胞調合物、化学ライブラリー、および天然産
物の混合物中における小型分子基質、受容体およびリガ
ンドの結合を評価することができる。これらの基質、受
容体およびリガンドは天然基質およびリガンドであって
もよく、また、構造または機能の模倣物であってもよ
い。Coliganet al., Current Protocols in Immunology
1(2):Chapter 5 (1991)参照。
【００１０】ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４ポリ
ペプチドは多くの病理を包含する多くの生物学的機能に
関与している。したがって、一方では、ＴＲ１、ＴＲ
２、ＴＬ２またはＴＬ４を刺激し、他方では、ＴＲ１、
ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４の機能を阻害し、あるいは
ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４発現細胞を除去し
うる化合物および薬剤を見いだすことが望ましい。ＴＲ
１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４に対するアンタゴニス
ト（ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４発現細胞を除
去する作用剤を包含）を、慢性および急性炎症、関節
炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾
癬）、移植拒絶反応、対宿主移植片疾患、感染、卒中、
虚血、急性呼吸困難症候群、再狭窄、脳の傷害、ＡＩＤ
Ｓ、骨の疾患、癌（例えば、リンパ増殖性疾患）、アテ
ローム性動脈硬化、およびアルツハイマー病のごとき症
状の種々の治療および予防目的に用いてもよい。アゴニ
ストを、Ｔ細胞および免疫系の他の成分の活性化に応答
する症状、例えば癌およびＡＩＤＳの治療について治療
および予防目的で用いることができる。しかしながら、
免疫活性の下方転調を導くＴ細胞および免疫系の他の成
分の不適当な刺激にアゴニストを使用して、慢性および
急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎
症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶反応、対宿主移植片疾
患、感染、卒中、虚血、急性呼吸困難症候群、再狭窄、
脳の傷害、ＡＩＤＳ、骨の疾患、癌（例えば、リンパ増
殖性疾患）、アテローム性動脈硬化、およびアルツハイ
マー病のごとき症状についての治療的または予防的適用
としてもよい。
ペプチドは多くの病理を包含する多くの生物学的機能に
関与している。したがって、一方では、ＴＲ１、ＴＲ
２、ＴＬ２またはＴＬ４を刺激し、他方では、ＴＲ１、
ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４の機能を阻害し、あるいは
ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４発現細胞を除去し
うる化合物および薬剤を見いだすことが望ましい。ＴＲ
１、ＴＲ２、ＴＬ２およびＴＬ４に対するアンタゴニス
ト（ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４発現細胞を除
去する作用剤を包含）を、慢性および急性炎症、関節
炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎症性腸疾患、乾
癬）、移植拒絶反応、対宿主移植片疾患、感染、卒中、
虚血、急性呼吸困難症候群、再狭窄、脳の傷害、ＡＩＤ
Ｓ、骨の疾患、癌（例えば、リンパ増殖性疾患）、アテ
ローム性動脈硬化、およびアルツハイマー病のごとき症
状の種々の治療および予防目的に用いてもよい。アゴニ
ストを、Ｔ細胞および免疫系の他の成分の活性化に応答
する症状、例えば癌およびＡＩＤＳの治療について治療
および予防目的で用いることができる。しかしながら、
免疫活性の下方転調を導くＴ細胞および免疫系の他の成
分の不適当な刺激にアゴニストを使用して、慢性および
急性炎症、関節炎、敗血症、自己免疫疾患（例えば、炎
症性腸疾患、乾癬）、移植拒絶反応、対宿主移植片疾
患、感染、卒中、虚血、急性呼吸困難症候群、再狭窄、
脳の傷害、ＡＩＤＳ、骨の疾患、癌（例えば、リンパ増
殖性疾患）、アテローム性動脈硬化、およびアルツハイ
マー病のごとき症状についての治療的または予防的適用
としてもよい。
【００１１】無細胞アッセイまたは細胞を用いるアッセ
イのいずれかにおいて、ＴＲ１に対するＴＬ２の結合
（またはＴＲ２に対するＴＬ４の結合）を阻害する化合
物を検出するためのアッセイを用いてアンタゴニストを
同定してもよい。例えば、精製ＴＲ１（またはＴＲ
２）、あるいはＴＲ１（またはＴＲ２）の細胞外ドメイ
ンを含む融合蛋白のごときＴＲ１（またはＴＲ２）の精
製誘導体を安定な表面に直接または間接的に固定化して
（例えば、抗体を介してＴＲ１（またはＴＲ２）あるい
は融合エピトープまたは蛋白ドメインに結合する）、次
いで、ＴＲ１に対するＴＬ２の精製可溶性細胞外ドメイ
ンの結合（またはＴＲ２に対するＴＬ４の可溶性細胞外
ドメインの結合）をブロックする能力により候補化合物
を同定する、ＥＬＩＳＡフォーマットを用いてもよい。
ＴＲ１に対するＴＬ２の結合（またはＴＲ２に対するＴ
Ｌ４の結合）を、ＴＬ２（またはＴＬ４）に直接または
間接的に結合した標識を用いることにより検出すること
ができる。適当な検出系は、ストレプトアビジンセイヨ
ウワサビペルオキシダーゼ抱合体、またはタグ、例えば
フルオレセインによる直接抱合体化を包含する。逆に、
精製可溶性ＴＬ２（またはＴＬ４）を適当な表面上に固
定化し、次いで、ＴＬ２に対する精製ＴＲ１の結合（ま
たはＴＬ４に対するＴＲ２の結合）をブロックする能力
により候補化合物を同定してもよい。ＴＬ２に対するＴ
Ｒ１の結合（またはＴＬ４に対するＴＲ２の結合）を、
ＴＲ１（またはＴＲ２）に直接または間接的に結合した
標識を用いることにより検出することができる。ＴＲ１
（またはＴＲ２）蛋白およびそのリガンドを用いる他の
多くのアッセイフォーマットが可能である。
イのいずれかにおいて、ＴＲ１に対するＴＬ２の結合
（またはＴＲ２に対するＴＬ４の結合）を阻害する化合
物を検出するためのアッセイを用いてアンタゴニストを
同定してもよい。例えば、精製ＴＲ１（またはＴＲ
２）、あるいはＴＲ１（またはＴＲ２）の細胞外ドメイ
ンを含む融合蛋白のごときＴＲ１（またはＴＲ２）の精
製誘導体を安定な表面に直接または間接的に固定化して
（例えば、抗体を介してＴＲ１（またはＴＲ２）あるい
は融合エピトープまたは蛋白ドメインに結合する）、次
いで、ＴＲ１に対するＴＬ２の精製可溶性細胞外ドメイ
ンの結合（またはＴＲ２に対するＴＬ４の可溶性細胞外
ドメインの結合）をブロックする能力により候補化合物
を同定する、ＥＬＩＳＡフォーマットを用いてもよい。
ＴＲ１に対するＴＬ２の結合（またはＴＲ２に対するＴ
Ｌ４の結合）を、ＴＬ２（またはＴＬ４）に直接または
間接的に結合した標識を用いることにより検出すること
ができる。適当な検出系は、ストレプトアビジンセイヨ
ウワサビペルオキシダーゼ抱合体、またはタグ、例えば
フルオレセインによる直接抱合体化を包含する。逆に、
精製可溶性ＴＬ２（またはＴＬ４）を適当な表面上に固
定化し、次いで、ＴＬ２に対する精製ＴＲ１の結合（ま
たはＴＬ４に対するＴＲ２の結合）をブロックする能力
により候補化合物を同定してもよい。ＴＬ２に対するＴ
Ｒ１の結合（またはＴＬ４に対するＴＲ２の結合）を、
ＴＲ１（またはＴＲ２）に直接または間接的に結合した
標識を用いることにより検出することができる。ＴＲ１
（またはＴＲ２）蛋白およびそのリガンドを用いる他の
多くのアッセイフォーマットが可能である。
【００１２】細胞を用いる適当なアッセイ当業者により
容易に決定されうる。一般的には、かかるスクリーニン
グ法は、本発明受容体ポリペプチド（またはそのリガン
ド）を表面に発現する適当な細胞を得ることを包含す
る。かかる細胞は、哺乳動物、酵母、ショウジョウバエ
または大腸菌由来の細胞を包含する。次いで、ＴＲ１ま
たはＴＲ２のごとき受容体を発現する細胞（または発現
受容体を含む細胞膜）をＴＬ２またはＴＬ４のごときリ
ガンドあるいは試験化合物と接触させて、結合、または
機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。アッセイ
は、単に候補化合物の結合を試験するものであってもよ
く、その場合、候補化合物に直接または間接的に結合し
た標識を用いることにより、あるいはリガンドＴＬ２ま
たはＴＬ４のごとき標識競争物質との競争を含むアッセ
イにおいて、受容体を有する細胞への付着を検出する。
別法として、ＴＬ２またはＴＬ４のごときリガンドを発
現する細胞（または発現リガンドを含む細胞膜）をＴＲ
１またはＴＲ２のごとき受容体あるいは試験化合物と接
触させて、結合、または機能的応答の刺激もしくは阻害
を観察してもよい。同様に、アッセイは、単に候補化合
物の結合を試験するものであってもよく、その場合、リ
ガンドを有する細胞への付着を、候補化合物に直接また
は間接的に結合した標識を用いることにより、あるいは
受容体ＴＲ１およびＴＲ２のごとき標識競争物質との競
争を包含するアッセイにおいて検出する。さらに、これ
らのアッセイは、受容体（例えばＴＲ１またはＴＲ２）
あるいはそのそれぞれのリガンド（例えばＴＬ２または
ＴＬ４）の活性化により発生するシグナルを候補化合物
が生じさせるかどうかを、受容体またはそのリガンドお
よびその融合蛋白を表面上に有する細胞に適した検出系
を用いて試験するものであってもよい。典型的な融合パ
ートナーは、受容体またはリガンドの細胞外ドメインを
第２の受容体の細胞内チロシンキナーゼドメインに融合
させたものを包含する。一般的には、活性化の阻害剤
は、ＴＲ１およびＴＲ２受容体または受容体融合物をそ
れぞれ発現する細胞についてはリガンドＴＬ２またはＴ
Ｌ４のごときアゴニストの存在下で、あるいはＴＬ２お
よびＴＬ４リガンドならびにリガンド融合物を発現する
細胞については受容体ＴＲ１およびＴＲ２の存在下でア
ッセイされ、候補化合物の存在による、アゴニストによ
る活性化に対する影響を観察する。かかるスクリーニン
グアッセイを行うための標準的方法は当業者によく理解
されている。
容易に決定されうる。一般的には、かかるスクリーニン
グ法は、本発明受容体ポリペプチド（またはそのリガン
ド）を表面に発現する適当な細胞を得ることを包含す
る。かかる細胞は、哺乳動物、酵母、ショウジョウバエ
または大腸菌由来の細胞を包含する。次いで、ＴＲ１ま
たはＴＲ２のごとき受容体を発現する細胞（または発現
受容体を含む細胞膜）をＴＬ２またはＴＬ４のごときリ
ガンドあるいは試験化合物と接触させて、結合、または
機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。アッセイ
は、単に候補化合物の結合を試験するものであってもよ
く、その場合、候補化合物に直接または間接的に結合し
た標識を用いることにより、あるいはリガンドＴＬ２ま
たはＴＬ４のごとき標識競争物質との競争を含むアッセ
イにおいて、受容体を有する細胞への付着を検出する。
別法として、ＴＬ２またはＴＬ４のごときリガンドを発
現する細胞（または発現リガンドを含む細胞膜）をＴＲ
１またはＴＲ２のごとき受容体あるいは試験化合物と接
触させて、結合、または機能的応答の刺激もしくは阻害
を観察してもよい。同様に、アッセイは、単に候補化合
物の結合を試験するものであってもよく、その場合、リ
ガンドを有する細胞への付着を、候補化合物に直接また
は間接的に結合した標識を用いることにより、あるいは
受容体ＴＲ１およびＴＲ２のごとき標識競争物質との競
争を包含するアッセイにおいて検出する。さらに、これ
らのアッセイは、受容体（例えばＴＲ１またはＴＲ２）
あるいはそのそれぞれのリガンド（例えばＴＬ２または
ＴＬ４）の活性化により発生するシグナルを候補化合物
が生じさせるかどうかを、受容体またはそのリガンドお
よびその融合蛋白を表面上に有する細胞に適した検出系
を用いて試験するものであってもよい。典型的な融合パ
ートナーは、受容体またはリガンドの細胞外ドメインを
第２の受容体の細胞内チロシンキナーゼドメインに融合
させたものを包含する。一般的には、活性化の阻害剤
は、ＴＲ１およびＴＲ２受容体または受容体融合物をそ
れぞれ発現する細胞についてはリガンドＴＬ２またはＴ
Ｌ４のごときアゴニストの存在下で、あるいはＴＬ２お
よびＴＬ４リガンドならびにリガンド融合物を発現する
細胞については受容体ＴＲ１およびＴＲ２の存在下でア
ッセイされ、候補化合物の存在による、アゴニストによ
る活性化に対する影響を観察する。かかるスクリーニン
グアッセイを行うための標準的方法は当業者によく理解
されている。
【００１３】潜在的なＴＲ１またはＴＲ２アンタゴニス
トの例は抗体を包含し、あるいはいくつかの場合にはＴ
Ｒ１またはＴＲ２のリガンドに密接に関連した蛋白、例
えばそれぞれのリガンドＴＬ２またはＲＬ４のフラグメ
ント、あるいは受容体またはそのリガンドに結合するが
応答を誘導せず、その結果受容体の活性が妨害されるこ
ととなる小型分子を包含する。潜在的なＴＲ１またはＴ
Ｒ２アゴニストの例は、ＴＲ１またはＴＲ２に結合する
抗体、ＴＬ２またはＴＬ４のごときそのそれぞれの受容
体、またはそれらの誘導体、およびＴＲ１またはＴＲ２
に結合する小型分子を包含する。これらのアゴニスト
は、本来のリガンドとの接触により誘導される応答のす
べてまたは一部を模倣する応答を誘導するであろう。
トの例は抗体を包含し、あるいはいくつかの場合にはＴ
Ｒ１またはＴＲ２のリガンドに密接に関連した蛋白、例
えばそれぞれのリガンドＴＬ２またはＲＬ４のフラグメ
ント、あるいは受容体またはそのリガンドに結合するが
応答を誘導せず、その結果受容体の活性が妨害されるこ
ととなる小型分子を包含する。潜在的なＴＲ１またはＴ
Ｒ２アゴニストの例は、ＴＲ１またはＴＲ２に結合する
抗体、ＴＬ２またはＴＬ４のごときそのそれぞれの受容
体、またはそれらの誘導体、およびＴＲ１またはＴＲ２
に結合する小型分子を包含する。これらのアゴニスト
は、本来のリガンドとの接触により誘導される応答のす
べてまたは一部を模倣する応答を誘導するであろう。
【００１４】受容体は、膜ＴＬ２およびＴＬ４を発現す
る細胞においてシグナルを発生させうるので、これらの
スクリーニングにより、膜ＴＬ２に関してＴＲ１のアゴ
ニスト活性、および膜ＴＬ４に関してＴＲ２のアゴニス
ト活性を模倣するアゴニストを得ることができる。潜在
的なＴＬ２またはＴＬ４アゴニストの例は、ＴＬ２また
はＴＬ４に結合する抗体、ＴＲ１またはＴＲ２のごとき
そのそれぞれの受容体、それらの誘導体、およびＴＬ２
またはＴＬ４に結合する小型分子を包含する。これらの
アゴニストは、本来のリガンドとの接触により誘導され
る応答のすべてまたは一部を模倣する応答を誘導するで
あろう。別法として、ＴＲ１またはＴＲ２を、検出試薬
が利用できる便利なパートナーペプチドとＴＲ１または
ＴＲ２の全体または一部分との融合バージョン（例え
ば、ＴＲ１−ＩｇＧまたはＴＲ２−ＩｇＧ融合物）を包
含する可溶性蛋白として発現させてもよく、固体状態ま
たは溶液相の結合アッセイに使用してもよい。例えば、
可溶性ＴＲ１またはＴＲ２を用いて、実験的に検出可能
な変化（例えば、表面プラズモン共鳴、核磁気共鳴スペ
クトル法、沈降法、カロリメトリー）により直接的にア
ゴニストまたはアンタゴニストの結合を検出することが
できる。可溶性ＴＲ１またはＴＲ２を用いて、ＴＬ２ま
たはＴＬ４のごときリガンド（それらの結合は検出可能
なものである）と候補アゴニストまたはアンタゴニスト
との競争を探索することにより間接的にアゴニストまた
はアンタゴニストの結合を検出することができる。リガ
ンド検出法は、抗体認識、放射性標識によるリガンド修
飾、化学修飾（例えばビオチン化）、エピトープタグと
の融合を包含する。方法は、ＥＬＩＳＡを用いるアッセ
イ、免疫沈降およびシンチレーション近接法を包含す
る。可溶性または膜結合ＴＲ１またはＴＲ２を用いる、
上記アッセイと同様のアッセイを用いてＴＲ１またはＴ
Ｒ２のさらなる天然リガンドを同定し精製してもよい。
これらのリガンドは受容体のアゴニストまたはアンタゴ
ニストであってもよい。
る細胞においてシグナルを発生させうるので、これらの
スクリーニングにより、膜ＴＬ２に関してＴＲ１のアゴ
ニスト活性、および膜ＴＬ４に関してＴＲ２のアゴニス
ト活性を模倣するアゴニストを得ることができる。潜在
的なＴＬ２またはＴＬ４アゴニストの例は、ＴＬ２また
はＴＬ４に結合する抗体、ＴＲ１またはＴＲ２のごとき
そのそれぞれの受容体、それらの誘導体、およびＴＬ２
またはＴＬ４に結合する小型分子を包含する。これらの
アゴニストは、本来のリガンドとの接触により誘導され
る応答のすべてまたは一部を模倣する応答を誘導するで
あろう。別法として、ＴＲ１またはＴＲ２を、検出試薬
が利用できる便利なパートナーペプチドとＴＲ１または
ＴＲ２の全体または一部分との融合バージョン（例え
ば、ＴＲ１−ＩｇＧまたはＴＲ２−ＩｇＧ融合物）を包
含する可溶性蛋白として発現させてもよく、固体状態ま
たは溶液相の結合アッセイに使用してもよい。例えば、
可溶性ＴＲ１またはＴＲ２を用いて、実験的に検出可能
な変化（例えば、表面プラズモン共鳴、核磁気共鳴スペ
クトル法、沈降法、カロリメトリー）により直接的にア
ゴニストまたはアンタゴニストの結合を検出することが
できる。可溶性ＴＲ１またはＴＲ２を用いて、ＴＬ２ま
たはＴＬ４のごときリガンド（それらの結合は検出可能
なものである）と候補アゴニストまたはアンタゴニスト
との競争を探索することにより間接的にアゴニストまた
はアンタゴニストの結合を検出することができる。リガ
ンド検出法は、抗体認識、放射性標識によるリガンド修
飾、化学修飾（例えばビオチン化）、エピトープタグと
の融合を包含する。方法は、ＥＬＩＳＡを用いるアッセ
イ、免疫沈降およびシンチレーション近接法を包含す
る。可溶性または膜結合ＴＲ１またはＴＲ２を用いる、
上記アッセイと同様のアッセイを用いてＴＲ１またはＴ
Ｒ２のさらなる天然リガンドを同定し精製してもよい。
これらのリガンドは受容体のアゴニストまたはアンタゴ
ニストであってもよい。
【００１５】よって、本発明は、 Ｉ． ＴＲ１またはＴＲ２に対するアゴニストまたはア
ンタゴニストを同定する方法であって、（ａ）標識また
は未標識のリガンドＴＬ２またはＴＬ４の存在下で候補
化合物をＴＲ１またはＴＲ２それぞれと接触させ；次い
で（ｂ）該候補化合物がＴＬ２またはＴＬ４と競争して
ＴＲ１またはＴＲ２それぞれに結合する能力を評価する
ことを含む方法。
ンタゴニストを同定する方法であって、（ａ）標識また
は未標識のリガンドＴＬ２またはＴＬ４の存在下で候補
化合物をＴＲ１またはＴＲ２それぞれと接触させ；次い
で（ｂ）該候補化合物がＴＬ２またはＴＬ４と競争して
ＴＲ１またはＴＲ２それぞれに結合する能力を評価する
ことを含む方法。
【００１６】ＩＩ． ＴＲ１またはＴＲ２が宿主細胞表
面上、細胞膜上または固体支持体上にあるＩの方法。
面上、細胞膜上または固体支持体上にあるＩの方法。
【００１７】ＩＩＩ． アゴニストを同定するためのＩ
Ｉの方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＲ
１またはＴＲ２ポリペプチドにより発生したシグナルに
影響するかどうかを決定することをさらに含み、該シグ
ナルの発生を増加させる候補化合物がアゴニストである
と同定される方法。
Ｉの方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＲ
１またはＴＲ２ポリペプチドにより発生したシグナルに
影響するかどうかを決定することをさらに含み、該シグ
ナルの発生を増加させる候補化合物がアゴニストである
と同定される方法。
【００１８】ＩＶ． Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの方法によ
り同定されるアゴニスト。
り同定されるアゴニスト。
【００１９】Ｖ． アンタゴニストを同定するためのＩ
Ｉの方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＲ
１またはＴＲ２ポリペプチドにより発生したシグナルに
影響するかどうかを決定することをさらに含み、該シグ
ナルの発生を減少させる候補化合物がアゴニストである
と同定される方法。
Ｉの方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＲ
１またはＴＲ２ポリペプチドにより発生したシグナルに
影響するかどうかを決定することをさらに含み、該シグ
ナルの発生を減少させる候補化合物がアゴニストである
と同定される方法。
【００２０】ＶＩ． Ｉ、ＩＩまたはＶの方法により同
定されるアンタゴニスト。
定されるアンタゴニスト。
【００２１】ＶＩＩ． ＴＬ２またはＴＬ４に対するア
ゴニストまたはアンタゴニストを同定する方法であっ
て、（ａ）標識または未標識のＴＲ１またはＴＲ２の存
在下で候補化合物をＴＬ２またはＴＬ４それぞれと接触
させ；次いで（ｂ）該候補化合物がＴＲ１またはＴＲ２
と競争してＴＬ２またはＴＬ４それぞれに結合する能力
を評価することを含む方法。
ゴニストまたはアンタゴニストを同定する方法であっ
て、（ａ）標識または未標識のＴＲ１またはＴＲ２の存
在下で候補化合物をＴＬ２またはＴＬ４それぞれと接触
させ；次いで（ｂ）該候補化合物がＴＲ１またはＴＲ２
と競争してＴＬ２またはＴＬ４それぞれに結合する能力
を評価することを含む方法。
【００２２】ＶＩＩＩ． ＴＬ２またはＴＬ４が宿主細
胞表面上、細胞膜上または固体支持体上にある請求項Ｖ
ＩＩの方法。
胞表面上、細胞膜上または固体支持体上にある請求項Ｖ
ＩＩの方法。
【００２３】ＩＸ アゴニストを同定するための請求項
ＶＩＩＩの方法であって、候補化合物が細胞表面におい
てＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチドにより発生したシグ
ナルに影響するかどうかを決定することをさらに含み、
該シグナルの発生を増加させる候補化合物がアゴニスト
であると同定される方法。
ＶＩＩＩの方法であって、候補化合物が細胞表面におい
てＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチドにより発生したシグ
ナルに影響するかどうかを決定することをさらに含み、
該シグナルの発生を増加させる候補化合物がアゴニスト
であると同定される方法。
【００２４】Ｘ． 請求項ＩＸの方法により同定される
アゴニスト。
アゴニスト。
【００２５】ＸＩ アンタゴニストを同定するための請
求項ＶＩＩＩの方法であって、候補化合物が細胞表面に
おいてＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチドにより発生した
シグナルに影響するかどうかを決定することをさらに含
み、該シグナルの発生を減少させる候補化合物がアゴニ
ストであると同定される方法。
求項ＶＩＩＩの方法であって、候補化合物が細胞表面に
おいてＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチドにより発生した
シグナルに影響するかどうかを決定することをさらに含
み、該シグナルの発生を減少させる候補化合物がアゴニ
ストであると同定される方法。
【００２６】ＸＩＩ 請求項ＸＩの方法により同定され
るアンタゴニスト。
るアンタゴニスト。
【００２７】よって、もう１つの態様において、本発明
は、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチド
に関するアゴニスト、アンタゴニスト、リガンド、受容
体、基質、酵素等を同定するためのスクリーニングキッ
トであって、 （ａ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチド； （ｂ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチドを発現する組み換え細胞； （ｃ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチドを発現する細胞膜；または （ｄ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチドに対する抗体を含むキットに関する。かかるキッ
トにおいて（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が重要
成分を含んでいてもよいことが理解されよう。
は、ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチド
に関するアゴニスト、アンタゴニスト、リガンド、受容
体、基質、酵素等を同定するためのスクリーニングキッ
トであって、 （ａ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチド； （ｂ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチドを発現する組み換え細胞； （ｃ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチドを発現する細胞膜；または （ｄ）ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリペプチ
ド、好ましくは配列番号：１、２、３または４のポリペ
プチドに対する抗体を含むキットに関する。かかるキッ
トにおいて（ａ）、（ｂ）、（ｃ）または（ｄ）が重要
成分を含んでいてもよいことが理解されよう。
【００２８】予防および治療方法 本発明は、過剰または不十分な量のＴＲ１、ＴＲ２、Ｔ
Ｌ２またはＴＬ４ポリペプチド活性に関連する異常な状
態の治療方法を提供する。ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２また
はＴＬ４ポリペプチド活性が過剰な場合、いくつかの方
法を用いることができる。１の方法は、有効量の上記阻
害剤化合物（アンタゴニスト）を医薬上許容される担体
とともに対象に投与して、ＴＲ１またはＴＲ２ポリペプ
チドへのリガンドの結合をブロックすることあるいは第
２のシグナルを阻害することにより活性化を阻害し、そ
のことにより異常な状態を改善することを含む。もう１
つのアプローチにおいて、内在性ＴＲ１またはＴＲ２ポ
リペプチドと競争してリガンドに結合する能力をやはり
有している可溶性形態のＴＲ１またはＴＲ２ポリペプチ
ドを投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例
はＴＲ１またはＴＲ２ポリペプチドのフラグメントを含
む。ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４およびその活
性の発現不足に関連する異常な症状の治療には、いくつ
かの方法が用いられる。１のアプローチは、ＴＲ１、Ｔ
Ｒ２、ＴＬ２またはＴＬ４を活性化する治療上有効量の
化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬上許容される
担体とともに投与し、そのことにより異常な状態を改善
することを含む。
Ｌ２またはＴＬ４ポリペプチド活性に関連する異常な状
態の治療方法を提供する。ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２また
はＴＬ４ポリペプチド活性が過剰な場合、いくつかの方
法を用いることができる。１の方法は、有効量の上記阻
害剤化合物（アンタゴニスト）を医薬上許容される担体
とともに対象に投与して、ＴＲ１またはＴＲ２ポリペプ
チドへのリガンドの結合をブロックすることあるいは第
２のシグナルを阻害することにより活性化を阻害し、そ
のことにより異常な状態を改善することを含む。もう１
つのアプローチにおいて、内在性ＴＲ１またはＴＲ２ポ
リペプチドと競争してリガンドに結合する能力をやはり
有している可溶性形態のＴＲ１またはＴＲ２ポリペプチ
ドを投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例
はＴＲ１またはＴＲ２ポリペプチドのフラグメントを含
む。ＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４およびその活
性の発現不足に関連する異常な症状の治療には、いくつ
かの方法が用いられる。１のアプローチは、ＴＲ１、Ｔ
Ｒ２、ＴＬ２またはＴＬ４を活性化する治療上有効量の
化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬上許容される
担体とともに投与し、そのことにより異常な状態を改善
することを含む。
【００２９】処方および投与 可溶性形態のＴＲ１、ＴＲ２、ＴＬ２またはＴＬ４ポリ
ペプチドのごときペプチド、ならびにアゴニストおよび
アンタゴニストペプチドまたは小型分子を、適当な医薬
担体と組み合わせて処方してもよい。かかる処方は、治
療上有効量のポリペプチドまたは化合物、および医薬上
許容される担体または賦形剤を含む。かかる担体として
は、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、
水、グリセロール、エタノール、およびそれらの混合物
が挙げられるが、これらに限らない。処方は投与経路に
適したものとすべきであり、当業者によく知られてい
る。さらに本発明は、上記本発明成分の１種またはそれ
以上を充填した、１個またはそれ以上の容器を含む医薬
パックおよびキットにも関する。
ペプチドのごときペプチド、ならびにアゴニストおよび
アンタゴニストペプチドまたは小型分子を、適当な医薬
担体と組み合わせて処方してもよい。かかる処方は、治
療上有効量のポリペプチドまたは化合物、および医薬上
許容される担体または賦形剤を含む。かかる担体として
は、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、
水、グリセロール、エタノール、およびそれらの混合物
が挙げられるが、これらに限らない。処方は投与経路に
適したものとすべきであり、当業者によく知られてい
る。さらに本発明は、上記本発明成分の１種またはそれ
以上を充填した、１個またはそれ以上の容器を含む医薬
パックおよびキットにも関する。
【００３０】本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単
独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の
化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与
の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を
用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆
汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき
浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さら
に、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるな
らば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は
局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の
形態であってもよい。
独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の
化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与
の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含す
る。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を
用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆
汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき
浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さら
に、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるな
らば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は
局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の
形態であってもよい。
【００３１】必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、
処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断
による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇ
あたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしな
がら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざ
まな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと
思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用
量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知
られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれ
らの用量の変更を行うことができる。
処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断
による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇ
あたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしな
がら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざ
まな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと
思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用
量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知
られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれ
らの用量の変更を行うことができる。
【００３２】特記しないかぎり、当業者によく知られた
標準的方法を用いて下記実施例を行う。実施例は本発明
を例示説明するものであり、本発明を限定するものでは
ない。
標準的方法を用いて下記実施例を行う。実施例は本発明
を例示説明するものであり、本発明を限定するものでは
ない。
【００３３】
【実施例】ＴＬ２、ＴＬ４、ＴＲ１およびＴＲ２の発現
ならびにこれらに関する受容体リガント対合の測定を以
下に説明する。ＴＬ２はＴＲＡＩＬ（Wiley et al. Imm
unity 3:673-682 (1995)）またはＡｐｏ−２Ｌ（Pitti
et al., J. Biol. Chem. 271:12687-12690 (1996)）と
しても知られている。ＴＲ１はオステオプロテグリン
（Simonet et al., Cell 89:309-319 (1997)）としても
知られている。ＴＲ２はＨＶＥＭ（Montgomery et al.,
Cell 87:427-436 (1996)）としても知られている。
ならびにこれらに関する受容体リガント対合の測定を以
下に説明する。ＴＬ２はＴＲＡＩＬ（Wiley et al. Imm
unity 3:673-682 (1995)）またはＡｐｏ−２Ｌ（Pitti
et al., J. Biol. Chem. 271:12687-12690 (1996)）と
しても知られている。ＴＲ１はオステオプロテグリン
（Simonet et al., Cell 89:309-319 (1997)）としても
知られている。ＴＲ２はＨＶＥＭ（Montgomery et al.,
Cell 87:427-436 (1996)）としても知られている。
【００３４】発現 いずれかの受容体の細胞外ドメインがそのアミノ末端に
おいてヒトＩｇＧ１のヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域と融
合している融合蛋白としてＴＲ１およびＴＲ２を発現さ
せた。２つの蛋白ドメインのジャンクションを加工して
因子Ｘａにより蛋白分解されるアミノ酸配列を含むよう
にした。哺乳動物細胞においてこの形態で発現される場
合、ＴＲ融合蛋白（それぞれＴＲ１ＦｃおよびＴＲ２Ｆ
ｃ）は二量体蛋白として分泌され、これをプロテインＡ
セファロースにより精製した。ウシ因子Ｘａとのインキ
ュベーションによりＴＲ２またはＴＲ１Ｆｃ融合物から
未融合可溶性受容体を得て、プロテインＡセファロース
に通し、素通り画分をプールすることによりＦｃ部分か
ら精製した。ＴＬ２およびＴＬ４はともにタイプＩＩの
膜蛋白であり、そのＣ末端が細胞外にある。カルボキシ
末端領域の重要部分をコードしているＤＮＡであって成
熟ＴＮＦに対して相同的な残基のすべてを含んでいるＤ
ＮＡが分泌、検出および精製のためにアミノ末端エピト
ープタグ配列ならびにアミノ末端疎水性シグナル配列に
融合している発現ＤＮＡ構築物を加工することにより、
これらを分泌融合蛋白として発現させた。哺乳動物細胞
中にトランスフェクションする場合、これらのＤＮＡ構
築物は可溶性かつエピトープタグを付された融合蛋白
（それぞれｓＴＬ２、ｓＴＬ４）を生じた。各発現ベク
ターの構築物の個々の詳細を以下に述べる。
おいてヒトＩｇＧ１のヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域と融
合している融合蛋白としてＴＲ１およびＴＲ２を発現さ
せた。２つの蛋白ドメインのジャンクションを加工して
因子Ｘａにより蛋白分解されるアミノ酸配列を含むよう
にした。哺乳動物細胞においてこの形態で発現される場
合、ＴＲ融合蛋白（それぞれＴＲ１ＦｃおよびＴＲ２Ｆ
ｃ）は二量体蛋白として分泌され、これをプロテインＡ
セファロースにより精製した。ウシ因子Ｘａとのインキ
ュベーションによりＴＲ２またはＴＲ１Ｆｃ融合物から
未融合可溶性受容体を得て、プロテインＡセファロース
に通し、素通り画分をプールすることによりＦｃ部分か
ら精製した。ＴＬ２およびＴＬ４はともにタイプＩＩの
膜蛋白であり、そのＣ末端が細胞外にある。カルボキシ
末端領域の重要部分をコードしているＤＮＡであって成
熟ＴＮＦに対して相同的な残基のすべてを含んでいるＤ
ＮＡが分泌、検出および精製のためにアミノ末端エピト
ープタグ配列ならびにアミノ末端疎水性シグナル配列に
融合している発現ＤＮＡ構築物を加工することにより、
これらを分泌融合蛋白として発現させた。哺乳動物細胞
中にトランスフェクションする場合、これらのＤＮＡ構
築物は可溶性かつエピトープタグを付された融合蛋白
（それぞれｓＴＬ２、ｓＴＬ４）を生じた。各発現ベク
ターの構築物の個々の詳細を以下に述べる。
【００３５】ＴＲ２ 無極性二重層貫通ヘリックスの同定のためのGoldmanら
（１）の方法を用いる疎水性度により、翻訳されたＴＲ
２配列の推定上の膜貫通ドメインを決定した。推定上の
リーダーペプチドおよび細胞外ドメインをコードしてい
るこの膜貫通ドメインの上流領域を、Ｆｃ融合蛋白の製
造のために選択した。ＢｇｌＩＩ部位、因子Ｘａプロテ
アーゼ開裂部位およびＡｓｐ７１８Ｉ部位を３’末端に
付加して有するＴＲ２ ｃＤＮＡ由来の対応コーディン
グ領域をＰＣＲ増幅するようにプライマーを設計した。
このプライマー対（順方向３５量体５’ｃａｇ ｇａａ
ｔｔｃ ｇｃａ ｇｃｃ ａｔｇ ｇａｇ ｃｃｔ ｃ
ｃｔ ｇｇａ ｇａｃｔｇ３’（配列番号：６）および
逆方向５３量体５’ｃｃａ ｔａｃ ｃｃａｇｇｔ ａ
ｃｃ ｃｃｔ ｔｃｃ ｃｔｃ ｇａｔ ａｇａ ｔｃ
ｔ ｔｇｃｃｔｔ ｃｇｔ ｃａｃ ｃａｇ ｃｃａ
ｇｃ３’）を用いるＰＣＲにより、予想サイズの１本の
バンドを得た。これをＣＯＳＦｃｌｉｎｋ中にクローン
化してＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋプラスミドを得た。ＰＣＲ生
成物をＥｃｏＲＩおよびＡｓｐ７１８Ｉで消化し、ＣＯ
ＳＦｃｌｉｎｋプラスミド（２、３）中に連結してＴＲ
２Ｆｃｌｉｎｋを得た。このベクターはＴＲ２のアミノ
酸１〜１９２、それに続く因子Ｘａ配列用アミノ酸ＲＳ
ＩＥＧＲＧＴ、さらにそれに続くヒトＩｇＧ１の残基２
２６〜４５８（これで最後）をコードしている。ＩｇＧ
１領域もＣｙｓ２３０からＡｌａへの変異を有している
（２）。ＣＯＳ細胞をＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋで一時的にト
ランスフェクションし、得られた上清をプロテインＡア
ガロースを用いて免疫沈降させた。ヤギ抗−ヒトＦｃ抗
体を用いる免疫沈降物のウェスタンブロット分析によ
り、糖鎖付加されたＴＲ２Ｆｃの予想サイズ（４７．５
ｋＤ以上）と矛盾しない強力なバンドは明かとなった。
ＣＨＯ細胞をＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋでトランスフェクショ
ンして安定な細胞系を得た。エクスパンジョン（expans
ion）に関するドットブロット分析により５系を選択
し、振盪フラスコに入れた。最高レベルのＴＲ２Ｆｃ蛋
白発現を有する細胞系をウェスタンブロット分析により
選択した。
（１）の方法を用いる疎水性度により、翻訳されたＴＲ
２配列の推定上の膜貫通ドメインを決定した。推定上の
リーダーペプチドおよび細胞外ドメインをコードしてい
るこの膜貫通ドメインの上流領域を、Ｆｃ融合蛋白の製
造のために選択した。ＢｇｌＩＩ部位、因子Ｘａプロテ
アーゼ開裂部位およびＡｓｐ７１８Ｉ部位を３’末端に
付加して有するＴＲ２ ｃＤＮＡ由来の対応コーディン
グ領域をＰＣＲ増幅するようにプライマーを設計した。
このプライマー対（順方向３５量体５’ｃａｇ ｇａａ
ｔｔｃ ｇｃａ ｇｃｃ ａｔｇ ｇａｇ ｃｃｔ ｃ
ｃｔ ｇｇａ ｇａｃｔｇ３’（配列番号：６）および
逆方向５３量体５’ｃｃａ ｔａｃ ｃｃａｇｇｔ ａ
ｃｃ ｃｃｔ ｔｃｃ ｃｔｃ ｇａｔ ａｇａ ｔｃ
ｔ ｔｇｃｃｔｔ ｃｇｔ ｃａｃ ｃａｇ ｃｃａ
ｇｃ３’）を用いるＰＣＲにより、予想サイズの１本の
バンドを得た。これをＣＯＳＦｃｌｉｎｋ中にクローン
化してＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋプラスミドを得た。ＰＣＲ生
成物をＥｃｏＲＩおよびＡｓｐ７１８Ｉで消化し、ＣＯ
ＳＦｃｌｉｎｋプラスミド（２、３）中に連結してＴＲ
２Ｆｃｌｉｎｋを得た。このベクターはＴＲ２のアミノ
酸１〜１９２、それに続く因子Ｘａ配列用アミノ酸ＲＳ
ＩＥＧＲＧＴ、さらにそれに続くヒトＩｇＧ１の残基２
２６〜４５８（これで最後）をコードしている。ＩｇＧ
１領域もＣｙｓ２３０からＡｌａへの変異を有している
（２）。ＣＯＳ細胞をＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋで一時的にト
ランスフェクションし、得られた上清をプロテインＡア
ガロースを用いて免疫沈降させた。ヤギ抗−ヒトＦｃ抗
体を用いる免疫沈降物のウェスタンブロット分析によ
り、糖鎖付加されたＴＲ２Ｆｃの予想サイズ（４７．５
ｋＤ以上）と矛盾しない強力なバンドは明かとなった。
ＣＨＯ細胞をＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋでトランスフェクショ
ンして安定な細胞系を得た。エクスパンジョン（expans
ion）に関するドットブロット分析により５系を選択
し、振盪フラスコに入れた。最高レベルのＴＲ２Ｆｃ蛋
白発現を有する細胞系をウェスタンブロット分析により
選択した。
【００３６】ＴＲ１ 疎水性度プロットによれば、ＴＲ１の配列は膜貫通領域
を示さなかった（Goldmanら、上記ＴＲ２参照）。それ
ゆえ、ＴＲ１の全コーディング領域からターミネーター
コドンを除いたものを用いてＦｃ融合構築物を製造し
た。ＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋ中のＴＲ２インサートを以下の
ようにしてＴＲ１で置換した。下記プライマーを用いて
ＴＲ１の３’末端をＴＲ１ ｃＤＮＡから増幅した。
５’ｃｇｃｃｃｃ ｔｔｇ ｃｃｃ ｔｇａ ｃｃａ
ｃｔａ３’（配列番号：８）（ＨｉｎｄＩＩＩ部位の上
流）および５’ｇｃｃ ａｔｔ ｔｃａ ｇａｔ ｃｔ
ｔａａｇ ｃａｇ ｃｔｔ ａｔｔ ｔｔｔ ａｃｔ
ｇａ３’（配列番号：９）（ＢｇｌＩＩ部位を伴うスト
ップコドンを置換）。ＰＣＲ生成物をｐＣＲ２（Invitr
ogen; ｐＣＲ２ＴＲ１）中にクローン化し、hairetu決
定した。ＴＲ２ＦｃｌｉｎｋをＥｃｏＲＩ、ＢｇｌＩＩ
および子ウシ腸ホスファターゼで消化し、次いで、ＴＲ
１ ｃＤＮＡのＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩフラグメン
トおよびｐＣＲ２ＴＲ１のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｇｌＩＩ
フラグメントと連結してＴＲ１Ｆｃｌｉｎｋを得た。一
時的にトランスフェクションされたＣＯＳ細胞における
ＴＲ１Ｆｃ発現が確認され、安定な細胞系がＴＲ２Ｆｃ
に関して確立された。
を示さなかった（Goldmanら、上記ＴＲ２参照）。それ
ゆえ、ＴＲ１の全コーディング領域からターミネーター
コドンを除いたものを用いてＦｃ融合構築物を製造し
た。ＴＲ２Ｆｃｌｉｎｋ中のＴＲ２インサートを以下の
ようにしてＴＲ１で置換した。下記プライマーを用いて
ＴＲ１の３’末端をＴＲ１ ｃＤＮＡから増幅した。
５’ｃｇｃｃｃｃ ｔｔｇ ｃｃｃ ｔｇａ ｃｃａ
ｃｔａ３’（配列番号：８）（ＨｉｎｄＩＩＩ部位の上
流）および５’ｇｃｃ ａｔｔ ｔｃａ ｇａｔ ｃｔ
ｔａａｇ ｃａｇ ｃｔｔ ａｔｔ ｔｔｔ ａｃｔ
ｇａ３’（配列番号：９）（ＢｇｌＩＩ部位を伴うスト
ップコドンを置換）。ＰＣＲ生成物をｐＣＲ２（Invitr
ogen; ｐＣＲ２ＴＲ１）中にクローン化し、hairetu決
定した。ＴＲ２ＦｃｌｉｎｋをＥｃｏＲＩ、ＢｇｌＩＩ
および子ウシ腸ホスファターゼで消化し、次いで、ＴＲ
１ ｃＤＮＡのＥｃｏＲＩ／ＨｉｎｄＩＩＩフラグメン
トおよびｐＣＲ２ＴＲ１のＨｉｎｄＩＩＩ／ＢｇｌＩＩ
フラグメントと連結してＴＲ１Ｆｃｌｉｎｋを得た。一
時的にトランスフェクションされたＣＯＳ細胞における
ＴＲ１Ｆｃ発現が確認され、安定な細胞系がＴＲ２Ｆｃ
に関して確立された。
【００３７】ＴＬ２ ＴＬ２の可溶性形態はすでに公表されているものと同じ
であった（Wiley et al., Immunity 3:673-682 (199
5)）。全長のＴＬ２（ＴＲＡＩＬ、Ａｐｏ−２Ｌとして
も知られる）の残基９５〜２８１をｔＰＡ（組織プラス
ミノーゲンアクチベーター）シグナル配列およびＦＬＡ
Ｇエピトープと融合させた。得られたＤＮＡ構築物をＣ
ＯＳおよびＣＨＯ細胞にトランスフェクションしたとこ
ろ、ＴＬ２が上清中に分泌された。市販のＭ２抗−ＦＬ
ＡＧエピトープ抗体を含むアフィニティーカラムに通す
ことにより蛋白（ｓＴＬ２）を精製した。
であった（Wiley et al., Immunity 3:673-682 (199
5)）。全長のＴＬ２（ＴＲＡＩＬ、Ａｐｏ−２Ｌとして
も知られる）の残基９５〜２８１をｔＰＡ（組織プラス
ミノーゲンアクチベーター）シグナル配列およびＦＬＡ
Ｇエピトープと融合させた。得られたＤＮＡ構築物をＣ
ＯＳおよびＣＨＯ細胞にトランスフェクションしたとこ
ろ、ＴＬ２が上清中に分泌された。市販のＭ２抗−ＦＬ
ＡＧエピトープ抗体を含むアフィニティーカラムに通す
ことにより蛋白（ｓＴＬ２）を精製した。
【００３８】ＴＬ４ ｔＰＡ（組織プラスミノーゲンアクチベーター）シグナ
ル配列、ＨＩＶ−１ｇｐ１２０糖蛋白由来の１１個のア
ミノ酸、６個のヒスチジン、ＴＬ４のコーディング領域
の残基８５〜２４０が後に続くエンテロキナーゼ蛋白分
解配列ＳＤＤＤＤＫを含む発現ベクターを構築した。こ
の構築物をＣＯＳおよびＣＨＯ細胞中にトランスフェク
ションし、ＴＬ４（ｓＴＬ４）の可溶性形態を分泌させ
た。融合蛋白のアミノ末端のポリヒスチジン配列に結合
するＮｉＮＴＡカラム（市販品）に通すことにより蛋白
を精製した。エンテロキナーゼによる融合蛋白の開裂に
より成熟ＴＬ４を得た。
ル配列、ＨＩＶ−１ｇｐ１２０糖蛋白由来の１１個のア
ミノ酸、６個のヒスチジン、ＴＬ４のコーディング領域
の残基８５〜２４０が後に続くエンテロキナーゼ蛋白分
解配列ＳＤＤＤＤＫを含む発現ベクターを構築した。こ
の構築物をＣＯＳおよびＣＨＯ細胞中にトランスフェク
ションし、ＴＬ４（ｓＴＬ４）の可溶性形態を分泌させ
た。融合蛋白のアミノ末端のポリヒスチジン配列に結合
するＮｉＮＴＡカラム（市販品）に通すことにより蛋白
を精製した。エンテロキナーゼによる融合蛋白の開裂に
より成熟ＴＬ４を得た。
【００３９】結合の研究 表面プラズモン共鳴。すでに記載されているアミンカッ
プリング法（４）を用いてプロテインＡを研究等級のカ
ルボキシメチルデキストラン片（ＣＭ５）に固定化し
た。フローセル１をＮＨＳ／ＥＤＣで５分間活性化し
た。ＮａＯＡｃバッファー（１０ｍＭ，ｐＨ５．０）中
１μｇ／ｍｌの濃度のプロテインＡを注入し、１０００
ＲＵｓの蛋白をカップリングさせた。残りの活性化基を
１Ｍエタノールアミンを７分間注入することによりブロ
ックした。プロテインＡを導入することなくフローセル
２中でカップリング手順を繰り返すことにより対照表面
を得た。次いで、ＢＩＡｃｏｒｅ２０００バイオセンサ
ー（BIAcore Inc. Uppsala, Sweden）中にＴＲ１Ｆｃま
たはＴＲ２Ｆｃを流速１００μｌ／分で注入し、次い
で、ＴＬ２またはＴＬ４を注入し、対照片と比較して表
面プラズモン共鳴の変化により受容体の結合をモニター
した。これらの実験において、ＴＲ１ＦｃはＴＬ２に結
合したがＴＬ４には結合せず、ＴＲ２ＦｃはＴＬ４に結
合したがＴＬ２には結合しなかった。
プリング法（４）を用いてプロテインＡを研究等級のカ
ルボキシメチルデキストラン片（ＣＭ５）に固定化し
た。フローセル１をＮＨＳ／ＥＤＣで５分間活性化し
た。ＮａＯＡｃバッファー（１０ｍＭ，ｐＨ５．０）中
１μｇ／ｍｌの濃度のプロテインＡを注入し、１０００
ＲＵｓの蛋白をカップリングさせた。残りの活性化基を
１Ｍエタノールアミンを７分間注入することによりブロ
ックした。プロテインＡを導入することなくフローセル
２中でカップリング手順を繰り返すことにより対照表面
を得た。次いで、ＢＩＡｃｏｒｅ２０００バイオセンサ
ー（BIAcore Inc. Uppsala, Sweden）中にＴＲ１Ｆｃま
たはＴＲ２Ｆｃを流速１００μｌ／分で注入し、次い
で、ＴＬ２またはＴＬ４を注入し、対照片と比較して表
面プラズモン共鳴の変化により受容体の結合をモニター
した。これらの実験において、ＴＲ１ＦｃはＴＬ２に結
合したがＴＬ４には結合せず、ＴＲ２ＦｃはＴＬ４に結
合したがＴＬ２には結合しなかった。
【００４０】受容体沈降 我々は、溶液中でＴＬ２またはＴＬ４を沈降させるＴＲ
１ＦｃおよびＴＲ２Ｆｃの能力を試験し、次いで、融合
エピトープタグ、リガンドまたはリガンド自身に対する
抗体を用いるウェスタンブロットにおいてリガンドの検
出を行った。典型的な実験において、２μｇのＴＲ１Ｆ
ｃまたはＴＲ２Ｆｃ受容体を、結合バッファー（ＲＰＭ
Ｉ１６４０中２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、０．１
％ ＢＳＡ、０．０１％ツイン）中で２５０ｎｇの精製
ＴＬ２またはＴＬ４それぞれとインキュベーションし
た。４時間結合後、受容体複合体をプロテインＡセファ
ロース上に捕捉し、遠心分離し、結合バッファーで洗浄
し、１５％ ＳＤＳ ＰＡＧＥで電気泳動し、次いで、ウ
ェスタンブロッティングに移した。エピトープタグに対
する抗体（ｇｐ１２０ペプチドエピトープならびにポリ
Ｈｉｓテイル双方に対するネズミノモクローナル抗体混
合物を１：５０００希釈）によりＴＬ４を検出し、ＴＬ
４はＴＲ２に結合するがＴＲ１Ｆｃまたは他のＴＮＦＲ
関連Ｆｃ融合蛋白には結合しないことを示した。E. col
iから発現され精製された１：５０００希釈のウサギポ
リクローナル抗体によりＴＬ２を検出し、ＴＬ２はＴＲ
１Ｆｃには結合するがＴＲ２Ｆｃまたは他のＴＮＦＲ関
連Ｆｃ融合蛋白には結合しないことがわかった。可溶性
の開裂されたＴＲ１またはＴＲ２が、それぞれＴＲ１Ｆ
ｃのＴＬ２への結合およびＴＲ２ＦｃのＴＬ４への結合
と競争する能力により結合特異性をさらに確認した。
１ＦｃおよびＴＲ２Ｆｃの能力を試験し、次いで、融合
エピトープタグ、リガンドまたはリガンド自身に対する
抗体を用いるウェスタンブロットにおいてリガンドの検
出を行った。典型的な実験において、２μｇのＴＲ１Ｆ
ｃまたはＴＲ２Ｆｃ受容体を、結合バッファー（ＲＰＭ
Ｉ１６４０中２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ ｐＨ７．２、０．１
％ ＢＳＡ、０．０１％ツイン）中で２５０ｎｇの精製
ＴＬ２またはＴＬ４それぞれとインキュベーションし
た。４時間結合後、受容体複合体をプロテインＡセファ
ロース上に捕捉し、遠心分離し、結合バッファーで洗浄
し、１５％ ＳＤＳ ＰＡＧＥで電気泳動し、次いで、ウ
ェスタンブロッティングに移した。エピトープタグに対
する抗体（ｇｐ１２０ペプチドエピトープならびにポリ
Ｈｉｓテイル双方に対するネズミノモクローナル抗体混
合物を１：５０００希釈）によりＴＬ４を検出し、ＴＬ
４はＴＲ２に結合するがＴＲ１Ｆｃまたは他のＴＮＦＲ
関連Ｆｃ融合蛋白には結合しないことを示した。E. col
iから発現され精製された１：５０００希釈のウサギポ
リクローナル抗体によりＴＬ２を検出し、ＴＬ２はＴＲ
１Ｆｃには結合するがＴＲ２Ｆｃまたは他のＴＮＦＲ関
連Ｆｃ融合蛋白には結合しないことがわかった。可溶性
の開裂されたＴＲ１またはＴＲ２が、それぞれＴＲ１Ｆ
ｃのＴＬ２への結合およびＴＲ２ＦｃのＴＬ４への結合
と競争する能力により結合特異性をさらに確認した。
【００４１】この実施例セクションにおいて引用した文
献は以下のものである。 １．Engelman-DM;Steitz-TA;Goldman-A. Identifying n
onpolar transbilayer helices in amino acid sequenc
es of membrane proteins. Annu-Rev-Biophys-Chem. 19
86;15:321-53. ２．Johanson-K;Appelbaum-E;Doyle-M;Hensley-P;Zhao-
B;Abdel-Meguid-SS;Young-P;Cook-R;Carr-SMatico-R;et
-al. Binding interactions of human interleukin 5 w
ith its receptor alpha subunit. Large scale produc
tion, structural, and functional studies of Drosop
hila-expressed recombinant proteins. J-Biol-Chem.
1995 Apr 21;270(16):9459-71. ３．Kumar-S;Minnich-MD;Young-PR. ST2/T1 protein fu
nctionally binds to two secreted proteins from Bal
b/c 3T3 and human umbilical vein endothelialcells
but does not bind interleukin 1. J-Biol-Chem. 1995
Nov 17;270(46):27905-13. ４．Johnsson,B.,Lofas,S. and Lindquist,G. (1991).
Immobilization of proteins to a karboxymethyldextr
an-modified gold surface for biospecific interacti
on analysis in surface plasmon resonance sensors.
Anal. Biochem. 198:268-277.
献は以下のものである。 １．Engelman-DM;Steitz-TA;Goldman-A. Identifying n
onpolar transbilayer helices in amino acid sequenc
es of membrane proteins. Annu-Rev-Biophys-Chem. 19
86;15:321-53. ２．Johanson-K;Appelbaum-E;Doyle-M;Hensley-P;Zhao-
B;Abdel-Meguid-SS;Young-P;Cook-R;Carr-SMatico-R;et
-al. Binding interactions of human interleukin 5 w
ith its receptor alpha subunit. Large scale produc
tion, structural, and functional studies of Drosop
hila-expressed recombinant proteins. J-Biol-Chem.
1995 Apr 21;270(16):9459-71. ３．Kumar-S;Minnich-MD;Young-PR. ST2/T1 protein fu
nctionally binds to two secreted proteins from Bal
b/c 3T3 and human umbilical vein endothelialcells
but does not bind interleukin 1. J-Biol-Chem. 1995
Nov 17;270(46):27905-13. ４．Johnsson,B.,Lofas,S. and Lindquist,G. (1991).
Immobilization of proteins to a karboxymethyldextr
an-modified gold surface for biospecific interacti
on analysis in surface plasmon resonance sensors.
Anal. Biochem. 198:268-277.
【００４２】
【配列表】（１）一般的情報 （ｉｉ）発明の名称：腫瘍壊死関連受容体ＴＲ１および
ＴＲ２に関するアゴニストおよびアンタゴニストの同定
方法 （ｉｉｉ）配列の数：５ （ｖｉ）連絡先： （Ａ）宛て名：SmithKline Beecham Corporation （Ｂ）通り名：709 Swedeland Road （Ｃ）都市名：King of Prussia （Ｄ）州名：ペンシルベニア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：１９４０６ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）作動システム：ＤＯＳ （Ｄ）Windowsバージョン２．０用FastSEQ （ｖｉ）現在の出願データ： （Ａ）出願番号：不明 （Ｂ）出願日：これと同日 （Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号：６０／０５７５５０ （Ｂ）出願日：１９９７年８月２９日 （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：Ｈａｎ， Ｗｉｌｌｉａｍ Ｔ． （Ｂ）登録番号：３４３４４ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ５００３０ （ｘｉ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：（６１０）２７０−５２１９ （Ｂ）ファックス番号：（６１０）２７０−５０９０ （Ｃ）テレックス：
ＴＲ２に関するアゴニストおよびアンタゴニストの同定
方法 （ｉｉｉ）配列の数：５ （ｖｉ）連絡先： （Ａ）宛て名：SmithKline Beecham Corporation （Ｂ）通り名：709 Swedeland Road （Ｃ）都市名：King of Prussia （Ｄ）州名：ペンシルベニア （Ｅ）国名：アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：１９４０６ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）作動システム：ＤＯＳ （Ｄ）Windowsバージョン２．０用FastSEQ （ｖｉ）現在の出願データ： （Ａ）出願番号：不明 （Ｂ）出願日：これと同日 （Ｃ）分類： （ｖｉｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号：６０／０５７５５０ （Ｂ）出願日：１９９７年８月２９日 （ｖｉｉｉ）代理人等の情報： （Ａ）氏名：Ｈａｎ， Ｗｉｌｌｉａｍ Ｔ． （Ｂ）登録番号：３４３４４ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ５００３０ （ｘｉ）テレコミュニケーションの情報： （Ａ）電話番号：（６１０）２７０−５２１９ （Ｂ）ファックス番号：（６１０）２７０−５０９０ （Ｃ）テレックス：
【００４３】（２）配列番号：１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：４０１アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：１： Ｍｅｔ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｉｌｅ １ ５
１０ １５ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｐｒｏ
Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｃｙｓ
Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ３５ ４０
４５ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｌｙｓ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｐｒｏ ５０ ５５
６０ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ
Ｔｒｐ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｃｙｓ ６５ ７０
７５ ８０ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ ８５
９０ ９５ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｃｙｓ
Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｔｙｒ １００ １０５
１１０ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｈｉｓ
Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｐｈｅ １１５ １２０
１２５ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ
Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ １３０ １３５
１４０ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｕ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｃｙｓ １４５ １５０
１５５ １６０ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｌｙｓ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｃｙｓ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｈｒ １８０ １８５
１９０ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ
Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｒｇ １９５ ２００
２０５ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｒｏ
Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｖａｌ ２１０ ２１５
２２０ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｇｌｎ
Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ２４５
２５０ ２５５ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｐ
Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｎ ２６０ ２６５
２７０ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ
Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ａｌａ ２７５ ２８０
２８５ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ２９０ ２９５
３００ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｌｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ ３２５
３３０ ３３５ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｓｅｒ ３４０ ３４５
３５０ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ
Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ３５５ ３６０
３６５ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｍｅｔ
Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ３７０ ３７５
３８０ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｖａｌ
Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｃｙｓ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｉｌｅ １ ５
１０ １５ Ｌｙｓ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｐｒｏ
Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｐ ２０ ２５
３０ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｃｙｓ
Ａｓｐ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｈｒ ３５ ４０
４５ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｌｙｓ
Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ａｌａ Ｐｒｏ ５０ ５５
６０ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ
Ｔｒｐ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｕ Ｃｙｓ ６５ ７０
７５ ８０ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
Ｌｅｕ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ ８５
９０ ９５ Ｃｙｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｃｙｓ
Ｇｌｕ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｔｙｒ １００ １０５
１１０ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｐｈｅ Ｃｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｈｉｓ
Ａｒｇ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｐｈｅ １１５ １２０
１２５ Ｇｌｙ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｇｌｎ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ
Ａｒｇ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ａｒｇ １３０ １３５
１４０ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｕ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｃｙｓ １４５ １５０
１５５ １６０ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ
Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｌｙｓ １６５
１７０ １７５ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｃｙｓ
Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｔｈｒ １８０ １８５
１９０ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｙ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ
Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｒｇ １９５ ２００
２０５ Ｐｈｅ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｒｏ
Ａｓｎ Ｔｒｐ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｖａｌ ２１０ ２１５
２２０ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｓｎ
Ａｌａ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ ２２５ ２３０
２３５ ２４０ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｇｌｎ
Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ２４５
２５０ ２５５ Ｔｒｐ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｐ
Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｎ ２６０ ２６５
２７０ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ
Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｈｉｓ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ｈｉｓ Ａｌａ ２７５ ２８０
２８５ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ２９０ ２９５
３００ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｃｙｓ Ｌｙｓ ３０５ ３１０
３１５ ３２０ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｔｒｐ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ａｓｎ ３２５
３３０ ３３５ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｇｌｎ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｌｅｕ
Ｍｅｔ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｓｅｒ ３４０ ３４５
３５０ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｖａｌ
Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｔｈｒ ３５５ ３６０
３６５ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｈｉｓ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｍｅｔ
Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ３７０ ３７５
３８０ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｇｌｕ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｖａｌ
Ｇｌｎ Ｓｅｒ Ｖａｌ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｃｙｓ ３８５ ３９０
３９５ ４００ Ｌｅｕ
【００４４】（２）配列番号：２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２８３アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：２： Met Glu Pro Pro Gly Asp Trp Gly Pro Pro Pro Trp Arg Ser Thr Pro 1 5 10 15 Arg Thr Asp Val Leu Arg Leu Val Leu Tyr Leu Thr Phe Leu Gly Ala 20 25 30 Pro Cys Tyr Ala Pro Ala Leu Pro Phe Cys Lys Glu Asp Glu Tyr Pro 35 40 45 Val Gly Ser Glu Cys Cys Pro Lys Cys Ser Pro Gly Tyr Arg Val Lys 50 55 60 Glu Ala Cys Gly Glu Leu Thr Gly Thr Val Cys Glu Pro Cys Pro Pro 65 70 75 80 Gly Thr Tyr Ile Ala His Leu Asn Gly Leu Ser Lys Cys Leu Gln Cys 85 90 95 Gln Met Cys Asp Pro Ala Met Gly Leu Arg Ala Ser Arg Asn Cys Ser 100 105 110 Arg Thr Glu Asn Ala Val Cys Gly Cys Ser Pro Gly His Phe Cys Ile 115 120 125 Val Gln Asp Gly Asp His Cys Ala Ala Cys Arg Ala Tyr Ala Thr Ser 130 135 140 Ser Pro Gly Gln Arg Val Gln Lys Gly Gly Thr Glu Ser Gln Asp Thr 145 150 155 160 Leu Cys Gln Asn Cys Pro Pro Gly Thr Phe Ser Pro Asn Gly Thr Leu 165 170 175 Glu Glu Cys Gln His Gln Thr Lys Cys Ser Trp Leu Val Thr Lys Ala 180 185 190 Gly Ala Gly Thr Ser Ser Ser His Trp Val Trp Trp Phe Leu Ser Gly 195 200 205 Ser Leu Val Ile Val Ile Val Cys Ser Thr Val Gly Leu Ile Ile Cys 210 215 220 Val Lys Arg Arg Lys Pro Arg Gly Asp Val Val Lys Val Ile Val Ser 225 230 235 240 Val Gln Arg Lys Arg Gln Glu Ala Glu Gly Glu Ala Thr Val Ile Glu 245 250 255 Ala Leu Gln Ala Pro Pro Asp Val Thr Thr Val Ala Val Glu Glu Thr 260 265 270 Ile Pro Ser Phe Thr Gly Arg Ser Pro Asn His 275 280
【００４５】（２）配列番号：３に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２７９アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：３： Met Met Glu Val Gln Gly Gly Pro Ser Leu Gly Gln Thr Cys Val Leu 1 5 10 15 Ile Val Ile Phe Thr Val Leu Leu Gln Ser Leu Cys Val Ala Val Thr 20 25 30 Tyr Val Tyr Phe Thr Asn Glu Leu Lys Gln Met Gln Asp Lys Tyr Ser 35 40 45 Lys Ser Gly Ile Ala Cys Phe Leu Lys Glu Asp Asp Ser Tyr Trp Asp 50 55 60 Pro Asn Asp Glu Glu Ser Met Asn Ser Pro Cys Trp Gln Val Lys Trp 65 70 75 80 Gln Leu Arg Gln Leu Val Arg Lys Met Ile Leu Arg Thr Ser Glu Glu 85 90 95 Thr Ile Ser Thr Val Gln Glu Lys Gln Gln Asn Ile Ser Pro Leu Val 100 105 110 Arg Glu Arg Gly Pro Gln Arg Val Ala Ala His Ile Thr Gly Thr Arg 115 120 125 Gly Arg Ser Asn Thr Leu Ser Ser Pro Asn Ser Lys Asn Glu Lys Ala 130 135 140 Leu Gly Arg Lys Ile Asn Ser Trp Glu Ser Ser Arg Ser Gly His Ser 145 150 155 160 Phe Leu Ser Asn Leu His Leu Arg Asn Gly Glu Leu Val Ile His Glu 165 170 175 Lys Gly Phe Tyr Tyr Ile Tyr Ser Gln Thr Tyr Phe Arg Phe Gln Glu 180 185 190 Glu Ile Lys Glu Asn Thr Lys Asn Asp Lys Gln Met Val Gln Tyr Ile 195 200 205 Tyr Lys Tyr Thr Ser Tyr Pro Asp Pro Ile Leu Leu Met Lys Ser Ala 210 215 220 Arg Asn Ser Cys Trp Ser Lys Asp Ala Glu Tyr Gly Leu Tyr Ser Ile 225 230 235 240 Tyr Gln Gly Gly Ile Phe Glu Leu Lys Glu Asn Asp Arg Ile Phe Val 245 250 255 Ser Val Thr Asn Glu His Leu Ile Asp Met Asp His Glu Ala Ser Phe 260 265 270 Phe Gly Ala Phe Leu Val Gly 275
【００４６】（２）配列番号：４に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２４０アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：４： Met Glu Glu Ser Val Val Arg Pro Ser Val Phe Val Val Asp Gly Gln 1 5 10 15 Thr Asp Ile Pro Phe Thr Arg Leu Gly Arg Ser His Arg Arg Gln Ser 20 25 30 Cys Ser Val Ala Arg Val Gly Leu Gly Leu Leu Leu Leu Leu Met Gly 35 40 45 Ala Gly Leu Ala Val Gln Gly Trp Phe Leu Leu Gln Leu His Trp Arg 50 55 60 Leu Gly Glu Met Val Thr Arg Leu Pro Asp Gly Pro Ala Gly Ser Trp 65 70 75 80 Glu Gln Leu Ile Gln Glu Arg Arg Ser His Glu Val Asn Pro Ala Ala 85 90 95 His Leu Thr Gly Ala Asn Ser Ser Leu Thr Gly Ser Gly Gly Pro Leu 100 105 110 Leu Trp Glu Thr Gln Leu Gly Leu Ala Phe Leu Arg Gly Leu Ser Tyr 115 120 125 His Asp Gly Ala Leu Val Val Thr Lys Ala Gly Tyr Tyr Tyr Ile Tyr 130 135 140 Ser Lys Val Gln Leu Gly Gly Val Gly Cys Pro Leu Gly Leu Ala Ser 145 150 155 160 Thr Ile Thr His Gly Leu Tyr Lys Arg Thr Pro Arg Tyr Pro Glu Glu 165 170 175 Leu Glu Leu Leu Val Ser Gln Gln Ser Pro Cys Gly Arg Ala Thr Ser 180 185 190 Ser Ser Arg Val Trp Trp Asp Ser Ser Phe Leu Gly Gly Val Val His 195 200 205 Leu Glu Ala Gly Glu Lys Val Val Val Arg Val Leu Asp Glu Arg Leu 210 215 220 Val Arg Leu Arg Asp Gly Thr Arg Ser Tyr Phe Gly Ala Phe Met Val 225 230 235 240
【００４７】（２）配列番号：５に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：８１０塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：１本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｘｉ）配列の記載：配列番号：５： ＣＣＣＡＣＧＣＧＴＣ ＣＧＣＣＣＡＣＧＣＧ ＴＣＣＧＣＴＧＡＧＧ ＴＴＧ
ＡＡＧＧＡＣＣ ＣＡＧＧＣＧＴＧＴＣ ＡＧＣＣＣＴＧＣＴＣ ６０ ＣＡＧＡＣＡＣＣＴＴ ＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧ ＧＡＧＡＧＴＧＴＣＧ ＴＡＣ
ＧＧＣＣＣＴＣ ＡＧＴＧＴＴＴＧＴＧ ＧＴＧＧＡＴＧＧＡＣ １２０ ＡＧＡＣＣＧＡＣＡＴ ＣＣＣＡＴＴＣＡＣＧ ＡＧＧＣＴＧＧＧＡＣ ＧＡＡ
ＧＣＣＡＣＣＧ ＧＡＧＡＣＡＧＴＣＧ ＴＧＣＡＧＴＧＴＧＧ １８０ ＣＣＣＧＧＧＴＧＧＧ ＴＣＴＧＧＧＴＣＴＣ ＴＴＧＣＴＧＴＴＧＣ ＴＧＡ
ＴＧＧＧＧＧＣ ＴＧＧＧＣＴＧＧＣＣ ＧＴＣＣＡＡＧＧＣＴ ２４０ ＧＧＴＴＣＣＴＣＣＴ ＧＣＡＧＣＴＧＣＡＣ ＴＧＧＣＧＴＣＴＡＧ ＧＡＧ
ＡＧＡＴＧＧＴ ＣＡＣＣＣＧＣＣＴＧ ＣＣＴＧＡＣＧＧＡＣ ３００ ＣＴＧＣＡＧＧＣＴＣ ＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧ ＣＴＧＡＴＡＣＡＡＧ ＡＧＣ
ＧＡＡＧＧＴＣ ＴＣＡＣＧＡＧＧＴＣ ＡＡＣＣＣＡＧＣＡＧ ３６０ ＣＧＣＡＴＣＴＣＡＣ ＡＧＧＧＧＣＣＡＡＣ ＴＣＣＡＧＣＴＴＧＡ ＣＣＧ
ＧＣＡＧＣＧＧ ＧＧＧＧＣＣＧＣＴＧ ＴＴＡＴＧＧＧＡＧＡ ４２０ ＣＴＣＡＧＣＴＧＧＧ ＣＣＴＧＧＣＣＴＴＣ ＣＴＧＡＧＧＧＧＣＣ ＴＣＡ
ＧＣＴＡＣＣＡ ＣＧＡＴＧＧＧＧＣＣ ＣＴＴＧＴＧＧＴＣＡ ４８０ ＣＣＡＡＡＧＣＴＧＧ ＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣ ＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡ ＡＧＧ
ＴＧＣＡＧＣＴ ＧＧＧＣＧＧＴＧＴＧ ＧＧＣＴＧＣＣＣＧＣ ５４０ ＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣ ＣＡＧＣＡＣＣＡＴＣ ＡＣＣＣＡＣＧＧＣＣ ＴＣＴ
ＡＣＡＡＧＣＧ ＣＡＣＡＣＣＣＣＧＣ ＴＡＣＣＣＣＧＡＧＧ ６００ ＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴ ＧＴＴＧＧＴＣＡＧＣ ＣＡＧＣＡＧＴＣＡＣ ＣＣＴ
ＧＣＧＧＡＣＧ ＧＧＣＣＡＣＣＡＧＣ ＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧ ６６０ ＴＣＴＧＧＴＧＧＧＡ ＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣ ＣＴＧＧＧＴＧＧＴＧ ＴＧＧ
ＴＡＣＡＣＣＴ ＧＧＡＧＧＣＴＧＧＧ ＧＡＧＡＡＡＧＴＧＧ ７２０ ＴＣＧＴＣＣＧＴＧＴ ＧＣＴＧＧＡＴＧＡＡ ＣＧＣＣＴＧＧＴＴＣ ＧＡＣ
ＴＧＣＧＴＧＡ ＴＧＧＴＡＣＣＣＧＧ ＴＣＴＴＡＣＴＴＣＧ ７８０ ＧＧＧＣＴＴＴＣＡＴ ＧＧＴＧＴＧＡＡＧＧ ＡＡＧＧＡＧＣＧＴＧ
８１０
ＡＡＧＧＡＣＣ ＣＡＧＧＣＧＴＧＴＣ ＡＧＣＣＣＴＧＣＴＣ ６０ ＣＡＧＡＣＡＣＣＴＴ ＧＧＧＣＡＴＧＧＡＧ ＧＡＧＡＧＴＧＴＣＧ ＴＡＣ
ＧＧＣＣＣＴＣ ＡＧＴＧＴＴＴＧＴＧ ＧＴＧＧＡＴＧＧＡＣ １２０ ＡＧＡＣＣＧＡＣＡＴ ＣＣＣＡＴＴＣＡＣＧ ＡＧＧＣＴＧＧＧＡＣ ＧＡＡ
ＧＣＣＡＣＣＧ ＧＡＧＡＣＡＧＴＣＧ ＴＧＣＡＧＴＧＴＧＧ １８０ ＣＣＣＧＧＧＴＧＧＧ ＴＣＴＧＧＧＴＣＴＣ ＴＴＧＣＴＧＴＴＧＣ ＴＧＡ
ＴＧＧＧＧＧＣ ＴＧＧＧＣＴＧＧＣＣ ＧＴＣＣＡＡＧＧＣＴ ２４０ ＧＧＴＴＣＣＴＣＣＴ ＧＣＡＧＣＴＧＣＡＣ ＴＧＧＣＧＴＣＴＡＧ ＧＡＧ
ＡＧＡＴＧＧＴ ＣＡＣＣＣＧＣＣＴＧ ＣＣＴＧＡＣＧＧＡＣ ３００ ＣＴＧＣＡＧＧＣＴＣ ＣＴＧＧＧＡＧＣＡＧ ＣＴＧＡＴＡＣＡＡＧ ＡＧＣ
ＧＡＡＧＧＴＣ ＴＣＡＣＧＡＧＧＴＣ ＡＡＣＣＣＡＧＣＡＧ ３６０ ＣＧＣＡＴＣＴＣＡＣ ＡＧＧＧＧＣＣＡＡＣ ＴＣＣＡＧＣＴＴＧＡ ＣＣＧ
ＧＣＡＧＣＧＧ ＧＧＧＧＣＣＧＣＴＧ ＴＴＡＴＧＧＧＡＧＡ ４２０ ＣＴＣＡＧＣＴＧＧＧ ＣＣＴＧＧＣＣＴＴＣ ＣＴＧＡＧＧＧＧＣＣ ＴＣＡ
ＧＣＴＡＣＣＡ ＣＧＡＴＧＧＧＧＣＣ ＣＴＴＧＴＧＧＴＣＡ ４８０ ＣＣＡＡＡＧＣＴＧＧ ＣＴＡＣＴＡＣＴＡＣ ＡＴＣＴＡＣＴＣＣＡ ＡＧＧ
ＴＧＣＡＧＣＴ ＧＧＧＣＧＧＴＧＴＧ ＧＧＣＴＧＣＣＣＧＣ ５４０ ＴＧＧＧＣＣＴＧＧＣ ＣＡＧＣＡＣＣＡＴＣ ＡＣＣＣＡＣＧＧＣＣ ＴＣＴ
ＡＣＡＡＧＣＧ ＣＡＣＡＣＣＣＣＧＣ ＴＡＣＣＣＣＧＡＧＧ ６００ ＡＧＣＴＧＧＡＧＣＴ ＧＴＴＧＧＴＣＡＧＣ ＣＡＧＣＡＧＴＣＡＣ ＣＣＴ
ＧＣＧＧＡＣＧ ＧＧＣＣＡＣＣＡＧＣ ＡＧＣＴＣＣＣＧＧＧ ６６０ ＴＣＴＧＧＴＧＧＧＡ ＣＡＧＣＡＧＣＴＴＣ ＣＴＧＧＧＴＧＧＴＧ ＴＧＧ
ＴＡＣＡＣＣＴ ＧＧＡＧＧＣＴＧＧＧ ＧＡＧＡＡＡＧＴＧＧ ７２０ ＴＣＧＴＣＣＧＴＧＴ ＧＣＴＧＧＡＴＧＡＡ ＣＧＣＣＴＧＧＴＴＣ ＧＡＣ
ＴＧＣＧＴＧＡ ＴＧＧＴＡＣＣＣＧＧ ＴＣＴＴＡＣＴＴＣＧ ７８０ ＧＧＧＣＴＴＴＣＡＴ ＧＧＴＧＴＧＡＡＧＧ ＡＡＧＧＡＧＣＧＴＧ
８１０
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/566 33/566 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ピーター・アール・ヤング アメリカ合衆国08648ニュージャージー州 ローレンスビル、ヘンドリクソン・ロード 32番
Claims (12)
- 【請求項１】 ＴＲ１またはＴＲ２に対するアゴニスト
またはアンタゴニストを同定する方法であって、 （ａ）標識または未標識のリガンドＴＬ２またはＴＬ４
の存在下で候補化合物をＴＲ１またはＴＲ２それぞれと
接触させ；次いで（ｂ）該候補化合物がＴＬ２またはＴ
Ｌ４と競争してＴＲ１またはＴＲ２それぞれに結合する
能力を評価することを含む方法。 - 【請求項２】 ＴＲ１またはＴＲ２が宿主細胞表面上、
細胞膜上または固体支持体上にある請求項１の方法。 - 【請求項３】 アゴニストを同定するための請求項２の
方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＲ１ま
たはＴＲ２ポリペプチドにより発生したシグナルに影響
するかどうかを決定することをさらに含み、該シグナル
の発生を増加させる候補化合物がアゴニストであると同
定される方法。 - 【請求項４】 請求項１、２または３の方法により同定
されるアゴニスト。 - 【請求項５】 アンタゴニストを同定するための請求項
２の方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＲ
１またはＴＲ２ポリペプチドにより発生したシグナルに
影響するかどうかを決定することをさらに含み、該シグ
ナルの発生を減少させる候補化合物がアゴニストである
と同定される方法。 - 【請求項６】 請求項１、２または５の方法により同定
されるアンタゴニスト。 - 【請求項７】 ＴＬ２またはＴＬ４に対するアゴニスト
またはアンタゴニストを同定する方法であって、 （ａ）標識または未標識のＴＲ１またはＴＲ２の存在下
で候補化合物をＴＬ２またはＴＬ４それぞれと接触さ
せ；次いで（ｂ）該候補化合物がＴＲ１またはＴＲ２と
競争してＴＬ２またはＴＬ４それぞれに結合する能力を
評価することを含む方法。 - 【請求項８】 ＴＬ２またはＴＬ４が宿主細胞表面上、
細胞膜上または固体支持体上にある請求項７の方法。 - 【請求項９】 アゴニストを同定するための請求項８の
方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴＬ２ま
たはＴＬ４ポリペプチドにより発生したシグナルに影響
するかどうかを決定することをさらに含み、該シグナル
の発生を増加させる候補化合物がアゴニストであると同
定される方法。 - 【請求項１０】 請求項９の方法により同定されるアゴ
ニスト。 - 【請求項１１】 アンタゴニストを同定するための請求
項８の方法であって、候補化合物が細胞表面においてＴ
Ｌ２またはＴＬ４ポリペプチドにより発生したシグナル
に影響するかどうかを決定することをさらに含み、該シ
グナルの発生を減少させる候補化合物がアゴニストであ
ると同定される方法。 - 【請求項１２】 請求項１１の方法により同定されるア
ンタゴニスト。
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US5551397P | 1997-08-13 | 1997-08-13 | |
| US5698097P | 1997-08-26 | 1997-08-26 | |
| US5755097P | 1997-08-29 | 1997-08-29 | |
| US60/057550 | 1997-08-29 | ||
| US60/055513 | 1997-08-29 | ||
| US60/056980 | 1997-08-29 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11146793A true JPH11146793A (ja) | 1999-06-02 |
Family
ID=27368853
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10217113A Pending JPH11146793A (ja) | 1997-08-13 | 1998-07-31 | 腫瘍壊死関連受容体ｔｒ１およびｔｒ２に関するアゴニストおよびアンタゴニストの同定方法 |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6346388B1 (ja) |
| EP (1) | EP0897114A3 (ja) |
| JP (1) | JPH11146793A (ja) |
| CA (1) | CA2234415A1 (ja) |
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| US6635743B1 (en) | 1996-03-22 | 2003-10-21 | Human Genome Sciences, Inc. | Apoptosis inducing molecule II and methods of use |
| US6479254B2 (en) * | 1996-03-22 | 2002-11-12 | Human Genome Sciences, Inc. | Apoptosis inducing molecule II |
| US7964190B2 (en) | 1996-03-22 | 2011-06-21 | Human Genome Sciences, Inc. | Methods and compositions for decreasing T-cell activity |
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