JPH11148936A - イムノアッセイ及びそれを行うキット - Google Patents
イムノアッセイ及びそれを行うキットInfo
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- JPH11148936A JPH11148936A JP10258444A JP25844498A JPH11148936A JP H11148936 A JPH11148936 A JP H11148936A JP 10258444 A JP10258444 A JP 10258444A JP 25844498 A JP25844498 A JP 25844498A JP H11148936 A JPH11148936 A JP H11148936A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 イムノアッセイ及びそれを行うキットを提供
する。 【解決手段】 抗体を含んでいると疑われるサンプル
を、感染原因物質の固定抗原及び感染原因物質の遊離型
標識抗原と一緒にインキュベートすること；固定成分と
非固定成分とを分離すること；前記固定成分を感染原因
物質の追加の遊離型標識抗原と一緒にインキュベート
し、そして固定成分と非固定成分とを分離すること；そ
してサンプルに存在する前記抗体量を表示する、固定さ
れた標識抗原の量を測定することを含んでなる感染原因
物質に対する抗体のイムノアッセイ。上記イムノアッセ
イの使用及び上記イムノアッセイを実施するキット。
する。 【解決手段】 抗体を含んでいると疑われるサンプル
を、感染原因物質の固定抗原及び感染原因物質の遊離型
標識抗原と一緒にインキュベートすること；固定成分と
非固定成分とを分離すること；前記固定成分を感染原因
物質の追加の遊離型標識抗原と一緒にインキュベート
し、そして固定成分と非固定成分とを分離すること；そ
してサンプルに存在する前記抗体量を表示する、固定さ
れた標識抗原の量を測定することを含んでなる感染原因
物質に対する抗体のイムノアッセイ。上記イムノアッセ
イの使用及び上記イムノアッセイを実施するキット。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はイムノアッセイに関
する。また、本発明はイムノアッセイの使用及び本発明
のイムノアッセイを行うキットに関する。
する。また、本発明はイムノアッセイの使用及び本発明
のイムノアッセイを行うキットに関する。
【０００２】
【従来の技術】イムノアッセイは検体の検査用分析試薬
として抗体を用いる。感染原因物質もしくは感染原因物
質に対して感染した宿主よって生じる抗体のいずれかを
検定することによって、感染原因物質の存在を検査する
ためにイムノアッセイを用いる。本発明は感染源員物質
に対する抗体を検査するイムノアッセイに関する。
として抗体を用いる。感染原因物質もしくは感染原因物
質に対して感染した宿主よって生じる抗体のいずれかを
検定することによって、感染原因物質の存在を検査する
ためにイムノアッセイを用いる。本発明は感染源員物質
に対する抗体を検査するイムノアッセイに関する。
【０００３】抗体検査のためのイムノアッセイは二つの
インキュベーション工程を有することができる。第一イ
ンキュベーションでは、試験するサンプルを、表面（例
えば、マイクロウェルの表面）に固定されている感染原
因物質の抗原と一緒にインキュベートする。感染原因物
質に対するサンプル中のいずれの抗体も当該表面上の抗
原と結びつくようになる。洗浄工程の後、検出可能な物
質で標識した原因物質の抗原を用いて第二インキュベー
ションを行う。追加洗浄工程の後、表面に結合した標識
の量を測定する。信号が高いと感染原因物質の抗体が存
在することを示す。図１は、従来技術のイムノアッセイ
を表した図式である。
インキュベーション工程を有することができる。第一イ
ンキュベーションでは、試験するサンプルを、表面（例
えば、マイクロウェルの表面）に固定されている感染原
因物質の抗原と一緒にインキュベートする。感染原因物
質に対するサンプル中のいずれの抗体も当該表面上の抗
原と結びつくようになる。洗浄工程の後、検出可能な物
質で標識した原因物質の抗原を用いて第二インキュベー
ションを行う。追加洗浄工程の後、表面に結合した標識
の量を測定する。信号が高いと感染原因物質の抗体が存
在することを示す。図１は、従来技術のイムノアッセイ
を表した図式である。
【０００４】市販されいている従来技術のイムノアッセ
イの例は、ORTHO TM HIV-1/HIV-2 Ab-キャプチャELISA
試験システムである。HIV 及び他の感染の正確な検出
は、無視できないほど重要である。HIV 感染の初期の診
断は、内科療法の開始及びビールスの伝播を制限するた
めに予防措置を取ることを可能にする。HIV 感染の検出
における誤った陽性を避けることもまたかなり重要であ
る。
イの例は、ORTHO TM HIV-1/HIV-2 Ab-キャプチャELISA
試験システムである。HIV 及び他の感染の正確な検出
は、無視できないほど重要である。HIV 感染の初期の診
断は、内科療法の開始及びビールスの伝播を制限するた
めに予防措置を取ることを可能にする。HIV 感染の検出
における誤った陽性を避けることもまたかなり重要であ
る。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来技術のイムノアッ
セイは、限定された感度及び弱陽性と陰性とを識別する
困難性を含む、多くの制約を有する。従来技術のイムノ
アッセイの制約はＥＰ−Ａ−０１７４６５２号明細書で
議論されている。従って、感度及び特異性を高めたイム
ノアッセイのニーズが存在する。
セイは、限定された感度及び弱陽性と陰性とを識別する
困難性を含む、多くの制約を有する。従来技術のイムノ
アッセイの制約はＥＰ−Ａ−０１７４６５２号明細書で
議論されている。従って、感度及び特異性を高めたイム
ノアッセイのニーズが存在する。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明は、 i. 抗体を含んでいると疑われるサンプルを、感染原
因物質の固定抗原及び感染原因物質の遊離型標識抗原と
一緒にインキュベートすること； ii. 固定成分と非固定成分とを分離すること； iii. 前記固定成分を感染原因物質の追加の遊離型標識
抗原と一緒にインキュベートし、そして固定成分と非固
定成分とを分離すること；そして iv. サンプルに存在する前記抗体量を表示する、固定
された標識抗原の量を測定することを含んでなる感染原
因物質に対する抗体のイムノアッセイを提供する。
因物質の固定抗原及び感染原因物質の遊離型標識抗原と
一緒にインキュベートすること； ii. 固定成分と非固定成分とを分離すること； iii. 前記固定成分を感染原因物質の追加の遊離型標識
抗原と一緒にインキュベートし、そして固定成分と非固
定成分とを分離すること；そして iv. サンプルに存在する前記抗体量を表示する、固定
された標識抗原の量を測定することを含んでなる感染原
因物質に対する抗体のイムノアッセイを提供する。
【０００７】
【発明の実施の形態】イムノアッセイの第一インキュベ
ーションに遊離型標識抗原が存在すると、弱陽性信号が
高くなるが、陰性信号は変化しないままであることが判
った。第一インキュベーションに加えて、第二インキュ
ベーションでの遊離型標識抗原の存在は、特に、サンプ
ルが強陽性サンプルであるか強陽性サンプルの疑いのあ
る場合に必要とされる。強陽性サンプルは感染原因物質
に対する抗体量が、固定抗原及び遊離型標識抗原を飽和
させるほど十分に高いサンプルである。例えば、強陽性
サンプルは、１／５０００超で希釈してもなお陽性であ
るサンプルである。
ーションに遊離型標識抗原が存在すると、弱陽性信号が
高くなるが、陰性信号は変化しないままであることが判
った。第一インキュベーションに加えて、第二インキュ
ベーションでの遊離型標識抗原の存在は、特に、サンプ
ルが強陽性サンプルであるか強陽性サンプルの疑いのあ
る場合に必要とされる。強陽性サンプルは感染原因物質
に対する抗体量が、固定抗原及び遊離型標識抗原を飽和
させるほど十分に高いサンプルである。例えば、強陽性
サンプルは、１／５０００超で希釈してもなお陽性であ
るサンプルである。
【０００８】本明細書で用いる「感染原因物質」の用語
は、患者を感染することができる有機体もしくは小片を
意味する。感染原因物質には、バクテリア及びウイルス
が含まれる。好ましくは、本発明のイムノアッセイは、
HIV-1 、HIV-2 、Ｂ型肝炎ウイルス（HBV ）及びＣ型肝
炎ウイルス（HCV ）の一種以上に対する抗体を検出する
のに用いる。
は、患者を感染することができる有機体もしくは小片を
意味する。感染原因物質には、バクテリア及びウイルス
が含まれる。好ましくは、本発明のイムノアッセイは、
HIV-1 、HIV-2 、Ｂ型肝炎ウイルス（HBV ）及びＣ型肝
炎ウイルス（HCV ）の一種以上に対する抗体を検出する
のに用いる。
【０００９】本発明のイムノアッセイを、異なる感染原
因物質に対する抗体の存在を検出するのに用いることが
できる。従って、本発明のイムノアッセイを、一種以上
の感染原因物質の存在を検出するのに用いることができ
る。異なる感染原因物質に対する抗体の存在を検出する
のにイムノアッセイを用いる場合、イムノアッセイでそ
れぞれ異なった感染原因物質の抗原を用いなければなら
ないことは、当業者には明白であろう。
因物質に対する抗体の存在を検出するのに用いることが
できる。従って、本発明のイムノアッセイを、一種以上
の感染原因物質の存在を検出するのに用いることができ
る。異なる感染原因物質に対する抗体の存在を検出する
のにイムノアッセイを用いる場合、イムノアッセイでそ
れぞれ異なった感染原因物質の抗原を用いなければなら
ないことは、当業者には明白であろう。
【００１０】本発明のイムノアッセイは、一種類の抗原
を用い、好ましくは検出する各感染原因物質のために二
種以上の抗原を用いなければならない。好ましい抗原
は、確認が容易で抗体によって強固に結合されるエピト
ープを有するものである。安定でかつ変異を受けにく
く、それによって感染原因物質の変異体を検出しないリ
スクが少ないエピトープを有する抗原がさらに好まし
い。
を用い、好ましくは検出する各感染原因物質のために二
種以上の抗原を用いなければならない。好ましい抗原
は、確認が容易で抗体によって強固に結合されるエピト
ープを有するものである。安定でかつ変異を受けにく
く、それによって感染原因物質の変異体を検出しないリ
スクが少ないエピトープを有する抗原がさらに好まし
い。
【００１１】好ましくは、感染原因物質がHIV である場
合、抗原は、gp120 、p24 、gp41、gp160 、Env10 、及
びEnv13 A/L から選ばれる。好ましくは、感染原因物質
がHBV である場合、抗原は、HBs （Ｂ型肝炎表面抗原）
及びHBc （Ｃ型肝炎コア抗原）から選ばれる。
合、抗原は、gp120 、p24 、gp41、gp160 、Env10 、及
びEnv13 A/L から選ばれる。好ましくは、感染原因物質
がHBV である場合、抗原は、HBs （Ｂ型肝炎表面抗原）
及びHBc （Ｃ型肝炎コア抗原）から選ばれる。
【００１２】本発明のイムノアッセイでは、抗原は好ま
しくは表面に固定されている。この表面は、マイクロタ
イタの壁、又はサンプル及び／もしくは遊離型標識抗原
を受ける別のレセプタクル、ディップスティック又はビ
ーズとなることができる。抗原を固定するのに適した表
面は、「イムノアッセイ(Immunoassays)」（Diamandis,
E.P. and Christopoulos T.K. Eds., Academic Press,
London (1996)）に、特に、205-216 頁に記載されてい
る。
しくは表面に固定されている。この表面は、マイクロタ
イタの壁、又はサンプル及び／もしくは遊離型標識抗原
を受ける別のレセプタクル、ディップスティック又はビ
ーズとなることができる。抗原を固定するのに適した表
面は、「イムノアッセイ(Immunoassays)」（Diamandis,
E.P. and Christopoulos T.K. Eds., Academic Press,
London (1996)）に、特に、205-216 頁に記載されてい
る。
【００１３】抗原は、当該技術分野で公知の多くの標準
的な技法で固定することができる。例えば、抗原それ自
体又はキャリア蛋白もしくはマイクロ分子と結合した抗
原の物理吸着による技法である（「イムノアッセイ」
（Diamandis, E.P. and Christopoulos T.K. Eds., Aca
demic Press, London (1996)）の、特に、216-222 頁を
参照されたい）。
的な技法で固定することができる。例えば、抗原それ自
体又はキャリア蛋白もしくはマイクロ分子と結合した抗
原の物理吸着による技法である（「イムノアッセイ」
（Diamandis, E.P. and Christopoulos T.K. Eds., Aca
demic Press, London (1996)）の、特に、216-222 頁を
参照されたい）。
【００１４】抗体抗原結合を実質的に妨げない標識を提
供するいずれのタイプの検出可能な標識を用いて、遊離
型標識抗原を標識化することができる。好適な標識に
は、エンザイム（例えば、ホースラディッシュペルオキ
シダーゼ（HRP ）及びクロラムフェニコールアセチルト
ランスフェラーゼ（CAT ））；ジゴキシゲニン（DIG
）；フルオレッセイン；及びラジオアイソトープ（例
えば、125 Ｉ、3H、及び14Ｃ）が含まれる。好ましく
は、抗体をHRP で標識する。
供するいずれのタイプの検出可能な標識を用いて、遊離
型標識抗原を標識化することができる。好適な標識に
は、エンザイム（例えば、ホースラディッシュペルオキ
シダーゼ（HRP ）及びクロラムフェニコールアセチルト
ランスフェラーゼ（CAT ））；ジゴキシゲニン（DIG
）；フルオレッセイン；及びラジオアイソトープ（例
えば、125 Ｉ、3H、及び14Ｃ）が含まれる。好ましく
は、抗体をHRP で標識する。
【００１５】使用する標識によって、当業者に公知の標
準方法を用いて固定標識抗原の量を決める。例えば、標
識がHRP の場合、エンザイムによるルミノールの低下及
び化学ルミネッセンスの随伴発光を測定することができ
る。しかし、放射能標識を用いる場合は、放出される放
射線を検出することによって標識の存在を測定する。
準方法を用いて固定標識抗原の量を決める。例えば、標
識がHRP の場合、エンザイムによるルミノールの低下及
び化学ルミネッセンスの随伴発光を測定することができ
る。しかし、放射能標識を用いる場合は、放出される放
射線を検出することによって標識の存在を測定する。
【００１６】異なる感染原因物質に対する抗体が検出さ
れている場合、各感染原因物質に対する抗原同士を区別
することができるように、異なる感染原因物質それぞれ
の遊離型標識抗原を別個に標識化してもよい。サンプル
は、抗体を含有する流体もしくは組織、例えば、血液、
血清、骨髄、唾液もしくは尿となることができる。しか
し、サンプルが組織サンプルの場合、適当な溶液、例え
ば、食塩水中でこの組織を解体して、抗体が溶液中に存
在するようにする必要がある。
れている場合、各感染原因物質に対する抗原同士を区別
することができるように、異なる感染原因物質それぞれ
の遊離型標識抗原を別個に標識化してもよい。サンプル
は、抗体を含有する流体もしくは組織、例えば、血液、
血清、骨髄、唾液もしくは尿となることができる。しか
し、サンプルが組織サンプルの場合、適当な溶液、例え
ば、食塩水中でこの組織を解体して、抗体が溶液中に存
在するようにする必要がある。
【００１７】サンプルは血液が好ましい。ある状況で
は、血液サンプルから、赤血球及び白血球等の一定成分
を、サンプルを用いる前に取り除く必要がある場合があ
る。サンプルが血漿であるのが最も好ましい。好ましく
は、本発明のイムノアッセイは、イムノアッセイを実施
するのに適した生物学的環境を提供するために、アッセ
イ緩衝剤をさらに含む。好適なアッセイ緩衝剤は、当業
者に公知であって、リン酸塩緩衝剤を含み、イオン強度
を高めるＮａＣｌ並びに非特異的結合及び干渉を減らす
タンパク様物質を含むことができる。
は、血液サンプルから、赤血球及び白血球等の一定成分
を、サンプルを用いる前に取り除く必要がある場合があ
る。サンプルが血漿であるのが最も好ましい。好ましく
は、本発明のイムノアッセイは、イムノアッセイを実施
するのに適した生物学的環境を提供するために、アッセ
イ緩衝剤をさらに含む。好適なアッセイ緩衝剤は、当業
者に公知であって、リン酸塩緩衝剤を含み、イオン強度
を高めるＮａＣｌ並びに非特異的結合及び干渉を減らす
タンパク様物質を含むことができる。
【００１８】また、本発明は感染原因物質の存在の診断
に本発明のイムノアッセイの使用を提供する。好ましく
は、感染原因物質はHIV-1 もしくはHIV-2 である。
に本発明のイムノアッセイの使用を提供する。好ましく
は、感染原因物質はHIV-1 もしくはHIV-2 である。
【００１９】本発明は、さらに、 i ） 感染原因物質の抗原が固定されている表面、もし
くは感染原因物質の抗原を固定する手段と組み合わさっ
て、感染原因物質の抗原を固定できる表面； ii） 遊離型標識抗原； iii ）標識抗原の存在を検出するための信号試薬及び／
もしくは装置；並びに iv） サンプル及び／もしくは遊離型標識抗原と一緒に
前記表面をインキュベートするためのレセプタクルであ
って、必要に応じて前記表面を有することができるレセ
プタクルを含んでなる、本発明のイムノアッセイを行う
のに適合するキットであって、（ａ）遊離型標識抗原を
前記サンプル及び前記固定抗原と一緒にインキュベート
する；（ｂ）固定成分と非固定成分とを分離する；そし
て（ｃ）追加の遊離型標識抗原を前記固定抗原と一緒に
インキュベートするように適合されたキットを提供す
る。
くは感染原因物質の抗原を固定する手段と組み合わさっ
て、感染原因物質の抗原を固定できる表面； ii） 遊離型標識抗原； iii ）標識抗原の存在を検出するための信号試薬及び／
もしくは装置；並びに iv） サンプル及び／もしくは遊離型標識抗原と一緒に
前記表面をインキュベートするためのレセプタクルであ
って、必要に応じて前記表面を有することができるレセ
プタクルを含んでなる、本発明のイムノアッセイを行う
のに適合するキットであって、（ａ）遊離型標識抗原を
前記サンプル及び前記固定抗原と一緒にインキュベート
する；（ｂ）固定成分と非固定成分とを分離する；そし
て（ｃ）追加の遊離型標識抗原を前記固定抗原と一緒に
インキュベートするように適合されたキットを提供す
る。
【００２０】抗原が固定されている表面は、マイクロタ
イタ壁、又はサンプル及び／もしくは遊離型標識抗原を
受ける別のレセプタクル、ディップスティック又はビー
ズとなることができる。抗原を固定するのに適した表面
は、「イムノアッセイ(Immunoassays)」（Diamandis,
E.P. and Christopoulos T.K. Eds., Academic Press,L
ondon (1996)）に、特に、205-216 頁に記載されてい
る。信号試薬及び／もしくは装置は、キットに使用する
標識に依存する。例えば、標識がHRP の場合、信号試薬
はルミノールを含んでなることができる。
イタ壁、又はサンプル及び／もしくは遊離型標識抗原を
受ける別のレセプタクル、ディップスティック又はビー
ズとなることができる。抗原を固定するのに適した表面
は、「イムノアッセイ(Immunoassays)」（Diamandis,
E.P. and Christopoulos T.K. Eds., Academic Press,L
ondon (1996)）に、特に、205-216 頁に記載されてい
る。信号試薬及び／もしくは装置は、キットに使用する
標識に依存する。例えば、標識がHRP の場合、信号試薬
はルミノールを含んでなることができる。
【００２１】好ましくは、本発明のキットは、当該イム
ノアッセイを実施するのに適した生物学的環境を提供す
るために、アッセイ緩衝剤も含む。本発明をさらに添付
図面を引用して、例だけの方法でここでさらに説明す
る。図１は、従来技術の概略図である。イムノアッセイ
の第一インキュベーションでは、抗体を含んだ患者のサ
ンプルを固定抗原に加える。洗浄工程で未結合の抗体を
洗い流す。そしてHRP に結合した抗原をイムノアッセイ
の第二インキュベーションに加え、結合した抗体の自由
結合部位に結合させる。結合したHRP そして結果として
結合した患者の抗体の量を信号試薬を添加して測定す
る。
ノアッセイを実施するのに適した生物学的環境を提供す
るために、アッセイ緩衝剤も含む。本発明をさらに添付
図面を引用して、例だけの方法でここでさらに説明す
る。図１は、従来技術の概略図である。イムノアッセイ
の第一インキュベーションでは、抗体を含んだ患者のサ
ンプルを固定抗原に加える。洗浄工程で未結合の抗体を
洗い流す。そしてHRP に結合した抗原をイムノアッセイ
の第二インキュベーションに加え、結合した抗体の自由
結合部位に結合させる。結合したHRP そして結果として
結合した患者の抗体の量を信号試薬を添加して測定す
る。
【００２２】図２は、本発明のイムノアッセイを示す概
略図である。イムノアッセイの第一インキュベーション
では、抗体を含んだ患者のサンプル及びHRP に結合した
抗原を固定抗原に加える。洗浄工程で未結合の成分を洗
い流す。そしてHRP に結合した抗原をイムノアッセイの
第二インキュベーションに加え、結合した抗体の自由結
合部位に結合させる。結合したHRP そして結果として結
合した患者の抗体の量を信号試薬を添加して測定する。
略図である。イムノアッセイの第一インキュベーション
では、抗体を含んだ患者のサンプル及びHRP に結合した
抗原を固定抗原に加える。洗浄工程で未結合の成分を洗
い流す。そしてHRP に結合した抗原をイムノアッセイの
第二インキュベーションに加え、結合した抗体の自由結
合部位に結合させる。結合したHRP そして結果として結
合した患者の抗体の量を信号試薬を添加して測定する。
【００２３】
【実施例】比較例 従来技術、二工程プロトコール（図１参照） ホウ酸塩緩衝剤（ｐＨ９．０、９０ｍＭ）に一晩中塗布
して、Env10 、Env13、Env A/L 及びp24 （Chironから
市販されている）を受動吸着することによって調製し
た、HIV 抗原塗布マイクロウェルに、サンプル８０μＬ
及びアッセイ緩衝液２０μＬを加える。２５分間インキ
ュベートする。洗浄緩衝液で洗浄する。HRP 標識抗原
（即ち、Chironから市販されている、HRP 標識Env10 、
Env13 、EnvA/L 及びp24 ）を１００μＬ加え、５分間
インキュベートする。洗浄緩衝液（Ortho Clinical Dia
gnostics (O.C.D), Amershamから市販されている）で洗
浄する。信号試薬２００μＬ（O.C.D, Amersham から市
販されている）を加え、強化化学ルミネッセンスを用い
てこの信号を検出する。
して、Env10 、Env13、Env A/L 及びp24 （Chironから
市販されている）を受動吸着することによって調製し
た、HIV 抗原塗布マイクロウェルに、サンプル８０μＬ
及びアッセイ緩衝液２０μＬを加える。２５分間インキ
ュベートする。洗浄緩衝液で洗浄する。HRP 標識抗原
（即ち、Chironから市販されている、HRP 標識Env10 、
Env13 、EnvA/L 及びp24 ）を１００μＬ加え、５分間
インキュベートする。洗浄緩衝液（Ortho Clinical Dia
gnostics (O.C.D), Amershamから市販されている）で洗
浄する。信号試薬２００μＬ（O.C.D, Amersham から市
販されている）を加え、強化化学ルミネッセンスを用い
てこの信号を検出する。
【００２４】例１ 二重HRP 標識抗原インキュベーションプロトコール（図
２参照） 上記のように調製した、HIV 抗原塗布マイクロウェル
に、サンプル８０μＬ、アッセイ緩衝液２０μＬ、及び
HRP 標識抗原（上記定義のもの）２０μＬを加える。２
５分間インキュベートする。洗浄緩衝液で洗浄する。HR
P 標識抗原（上記定義のもの）を１００μＬ加え、５分
間インキュベートする。洗浄緩衝液（O.C.D, Amersham
から市販されている）で洗浄する。信号試薬２００μＬ
（O.C.D, Amersham から市販されている）を加え、強化
化学ルミネッセンスを用いてこの信号を検出する。
２参照） 上記のように調製した、HIV 抗原塗布マイクロウェル
に、サンプル８０μＬ、アッセイ緩衝液２０μＬ、及び
HRP 標識抗原（上記定義のもの）２０μＬを加える。２
５分間インキュベートする。洗浄緩衝液で洗浄する。HR
P 標識抗原（上記定義のもの）を１００μＬ加え、５分
間インキュベートする。洗浄緩衝液（O.C.D, Amersham
から市販されている）で洗浄する。信号試薬２００μＬ
（O.C.D, Amersham から市販されている）を加え、強化
化学ルミネッセンスを用いてこの信号を検出する。
【００２５】 試薬処方 アッセイ緩衝液 HRP 標識抗原試薬 脱イオン水 1000g 脱イオン水 580g オルトリン酸水素二ナトリウム0.31g オルトリン酸水素二ナトリウム0.63g オルトリン酸二水素カリウム 1.09g オルトリン酸二水素カリウム 0.20g 塩化ナトリウム 8.2g 塩化ナトリウム 4.83g Kathon 5.0g Kathon 10.0g ＥＤＴＡ 0.35g 子牛の血清 410g 消泡剤 0.01g フェリシアン化カリウム 0.34g ツイーン 0.5g HRP 標識HIV 抗原 17g 消泡剤 0.01g
【００２６】結果 本発明の二重HRP 標識抗原インキュベーションプロトコ
ールを用いると、陰性信号と弱陽性信号間の分化が増加
した（表Ｉを参照されたい）。この改善された分化を用
いて、適切にカットオフを置くことによってイムノアッ
セイの感度及び特異性の両方を高めることができる。本
発明のイムノアッセイを用いることによって、血清変換
パネル感度も改善される。表ＩＩの結果から、サンプル
ＡＢ２が、標準のアッセイフォーマットに対して陰性結
果を与えるが、HRP 標識抗原を当該イムノアッセイの第
一工程に加えるとはっきりとした陽性結果を与えること
が判る。サンプルＲ１も特別の標識抗原に対してより強
い陽性結果を与える。これらのサンプルは両方とも、大
多数の市販のイムノアッセイを用いて検出されないキー
となる血清変換サンプルである。
ールを用いると、陰性信号と弱陽性信号間の分化が増加
した（表Ｉを参照されたい）。この改善された分化を用
いて、適切にカットオフを置くことによってイムノアッ
セイの感度及び特異性の両方を高めることができる。本
発明のイムノアッセイを用いることによって、血清変換
パネル感度も改善される。表ＩＩの結果から、サンプル
ＡＢ２が、標準のアッセイフォーマットに対して陰性結
果を与えるが、HRP 標識抗原を当該イムノアッセイの第
一工程に加えるとはっきりとした陽性結果を与えること
が判る。サンプルＲ１も特別の標識抗原に対してより強
い陽性結果を与える。これらのサンプルは両方とも、大
多数の市販のイムノアッセイを用いて検出されないキー
となる血清変換サンプルである。
【００２７】 ［表Ｉ］ 二工程イムノアッセイの第一工程にHRP 標識抗原を 添加することによって信号に与えられる影響 信号（光単位量） 標識サンプル 標準アッセイ 二重HRP 抗原 弱陽性 キャリブレータ ０．６８ ４．０８ ＱＣＡ ０．１２ ４．７４ ＱＣＢ ４．５４ ２０．５６ ＱＣＣ ９．８０ ５０．３６ ＱＣＤ １３．２７ ３２．１３ 陰性 １ ０．０７ ０．１０ ２ ０．０２ ０．０２ ３ ０．０２ ０．０３ ４ ０．０２ ０．０２ ５ ０．０３ ０．０３ ６ ０．０２ ０．０３ 平均陰性結果 ０．０３ ０．０４
【００２８】陽性信号は３〜４０倍増加した。陰性結果
には大きな増加はない。
には大きな増加はない。
【００２９】 ［表ＩＩ］ 反応の第一工程にHRP 標識抗原を添加することによる 血清変換サンプルの改善された検出 正規化された結果（１を超えると陽性） 血清変換標識 サンプルアッセイ 標準アッセイ 二重HRP 抗原 Ｒ１ １．７０ ２．３２ Ｒ２ １４．８１ １５．４１ Ｅ８ ０．１３ ０．１２ Ｅ９ ７．３１ ７．８５ Ｅ１０ ５３．５０ ４０．９２ ＡＢ２ ０．８５ １．２８ ＡＢ３ ８９．０６ ７２．２５ Ｗ８ ０．１１ ０．０９ Ｗ９ ５．８６ ５．８３ Ｗ１０ ２６．１３ ２１．１７
【００３０】従って、本発明は次の利点をイムノアッセ
イの実施に提供する。 １．血清変換感度の改善； ２．希釈感度の改善（即ち、より少量の抗体を検出する
能力の増加）；及び ３．特異性の改善。
イの実施に提供する。 １．血清変換感度の改善； ２．希釈感度の改善（即ち、より少量の抗体を検出する
能力の増加）；及び ３．特異性の改善。
【００３１】その他の態様は当業者に自明であろう。上
記例は明瞭にするためだけであって、単なる例に過ぎな
い。本発明の精神及び範囲は上記例によっては限定され
るものでなく、特許請求の範囲によって包含される。
記例は明瞭にするためだけであって、単なる例に過ぎな
い。本発明の精神及び範囲は上記例によっては限定され
るものでなく、特許請求の範囲によって包含される。
【図１】図１は従来技術のイムノアッセイを表す概略
図。
図。
【図２】図２は本発明ののイムノアッセイを表す概略
図。
図。
Claims (15)
- 【請求項１】 i. 抗体を含んでいると疑われるサン
プルを、感染原因物質の固定抗原及び感染原因物質の遊
離型標識抗原と一緒にインキュベートすること； ii. 固定成分と非固定成分とを分離すること； iii. 前記固定成分を感染原因物質の追加の遊離型標識
抗原と一緒にインキュベートし、そして固定成分と非固
定成分とを分離すること；そして iv. サンプルに存在する前記抗体量を表示する、固定
された標識抗原の量を測定することを含んでなる感染原
因物質に対する抗体のイムノアッセイ。 - 【請求項２】 前記抗体が二種類以上の異なる感染原因
物質に対するものである請求項１に記載のイムノアッセ
イ。 - 【請求項３】 各感染原因物質の二種類以上の抗原を用
いる請求項１もしくは２に記載のイムノアッセイ。 - 【請求項４】 前記感染原因物質が、HIV-1 、HIV-2 、
HBV もしくはHCV の一種類以上である請求項１〜３のい
ずれか１項に記載のイムノアッセイ。 - 【請求項５】 前記感染原因物質が、HIV-1 及び／もし
くはHIV-2 である請求項１〜４のいずれか１項に記載の
イムノアッセイ。 - 【請求項６】 前記抗原が、gp120 、p24 、gp41、gp16
0 、Env10 及びEnv13 A/L の一種類以上である請求項５
に記載のイムノアッセイ。 - 【請求項７】 前記感染原因物質が、HBV である請求項
１〜４のいずれか１項に記載のイムノアッセイ。 - 【請求項８】 前記抗原が、HBs 及びHBc の一種類以上
である請求項７に記載のイムノアッセイ。 - 【請求項９】 前記標識抗原が、ホースラディッシュペ
ルオキシダーゼで標識されている請求項１〜８のいずれ
か１項に記載のイムノアッセイ。 - 【請求項１０】 感染原因物質の診断おける請求項１〜
８のいずれか１項に記載のイムノアッセイの使用。 - 【請求項１１】 感染原因物質が、HIV-1 及び／もしく
はHIV-2 である請求項１０に記載の使用。 - 【請求項１２】 i ） 感染原因物質の抗原が固定され
ている表面、もしくは感染原因物質の抗原を固定する手
段と組み合わさって、感染原因物質の抗原を固定できる
表面； ii） 遊離型標識抗原； iii ）標識抗原の存在を検出するための手段；並びに iv） サンプル及び／もしくは遊離型標識抗原と一緒に
前記表面をインキュベートするためのレセプタクルであ
って、必要に応じて前記表面を有することができるレセ
プタクルを含んでなる、請求項１〜９のいずれか１項に
記載のイムノアッセイを行うのに適合するキットであっ
て、 （ａ）遊離型標識抗原を前記サンプル及び前記固定抗原
と一緒にインキュベートする； （ｂ）固定成分と非固定成分とを分離する；そして （ｃ）追加の遊離型標識抗原を前記固定抗原と一緒にイ
ンキュベートするように適合されたキット。 - 【請求項１３】 抗原が固定されている前記表面が前記
レセプタクルの表面である請求項１２に記載のキット。 - 【請求項１４】 抗原が固定されている前記表面がディ
ップスティックの表面である請求項１２に記載のキッ
ト。 - 【請求項１５】 前記イムノアッセイを行うのに好適な
生物学的環境を提供するために、前記キットがさらにア
ッセイ緩衝剤を含んでなる請求項１２〜１４のいずれか
１項に記載のキット。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GBGB9719357.7A GB9719357D0 (en) | 1997-09-11 | 1997-09-11 | Immunoassay Utilizing Two Incubations With Labelled Antigen |
| GB9719357:7 | 1997-09-11 | ||
| US09/141,887 US6121006A (en) | 1997-09-11 | 1998-08-28 | Immunoassay utilizing two incubations with labeled antigen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11148936A true JPH11148936A (ja) | 1999-06-02 |
| JPH11148936A5 JPH11148936A5 (ja) | 2005-10-27 |
Family
ID=26312227
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10258444A Pending JPH11148936A (ja) | 1997-09-11 | 1998-09-11 | イムノアッセイ及びそれを行うキット |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6121006A (ja) |
| EP (1) | EP0902286B1 (ja) |
| JP (1) | JPH11148936A (ja) |
| AT (1) | ATE254286T1 (ja) |
| CA (1) | CA2246896C (ja) |
| DE (1) | DE69819643T2 (ja) |
| DK (1) | DK0902286T3 (ja) |
| ES (1) | ES2210678T3 (ja) |
| GB (1) | GB9719357D0 (ja) |
| PT (1) | PT902286E (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2009265109A (ja) * | 2001-11-28 | 2009-11-12 | Rsr Ltd | 膵島細胞抗原分子及び又はインスリンに反応する自己抗体の検出 |
| KR20180025830A (ko) * | 2016-08-31 | 2018-03-09 | 휴마시스 주식회사 | 면역학적 측정을 이용한 hiv 1형, 2형 및 o형 동시 진단용 키트 및 이를 이용한 동시 진단방법 |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6458528B1 (en) | 1998-05-15 | 2002-10-01 | Idexx Laboratories, Inc. | Diagnosis of feline immunodeficiency virus infection using ENV/GAG polypeptide markers |
| US7262019B2 (en) * | 2001-05-03 | 2007-08-28 | Immunetics, Inc. | System and methods for detection of Bacillus anthracis related analytes in biological fluids |
| CA2446246A1 (en) * | 2001-05-03 | 2002-11-14 | Immunetics, Inc. | Systems and methods for detection of analytes in biological fluids |
| US7514191B2 (en) * | 2006-04-26 | 2009-04-07 | Xerox Corporation | Imaging member |
| AU2011230619C1 (en) | 2010-03-25 | 2016-06-23 | Oregon Health & Science University | CMV glycoproteins and recombinant vectors |
| HUE037408T2 (hu) | 2011-06-10 | 2018-08-28 | Univ Oregon Health & Science | CMV glikoproteinek és rekombináns vektorok |
| CA2789539A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-12 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing hiv-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
| US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
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