JPH11164A - 新規フィターゼ及びその製造法 - Google Patents
新規フィターゼ及びその製造法Info
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- JPH11164A JPH11164A JP9171223A JP17122397A JPH11164A JP H11164 A JPH11164 A JP H11164A JP 9171223 A JP9171223 A JP 9171223A JP 17122397 A JP17122397 A JP 17122397A JP H11164 A JPH11164 A JP H11164A
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- phytase
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- producing
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Abstract
(57)【要約】
【課題】飼料または食品に添加してこれに含まれるフィ
チンを分解し、遊離したリン酸の有効利用、ミネラル吸
収阻害防止、並びに排泄物中のリン低減化による環境汚
染防止等の効果を有する新規フィターゼ及びその製造方
法を提供する。 【解決手段】ペニシリウムに属するフィターゼ生産能の
高い新規な微生物を培養することにより、培養物中に中
性から酸性域で安定滑良好に作用する新規フィターゼを
生成蓄積せしめ、これを採取するフィターゼの製造法。 【効果】飼料や食品中に含まれるフィチンを効率的に分
解することにより、リン酸の低減による環境汚染を防止
できる。
チンを分解し、遊離したリン酸の有効利用、ミネラル吸
収阻害防止、並びに排泄物中のリン低減化による環境汚
染防止等の効果を有する新規フィターゼ及びその製造方
法を提供する。 【解決手段】ペニシリウムに属するフィターゼ生産能の
高い新規な微生物を培養することにより、培養物中に中
性から酸性域で安定滑良好に作用する新規フィターゼを
生成蓄積せしめ、これを採取するフィターゼの製造法。 【効果】飼料や食品中に含まれるフィチンを効率的に分
解することにより、リン酸の低減による環境汚染を防止
できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規フィターゼ、
これを生産する微生物及び該フィターゼの製造法に関す
る。更に詳細にはペニシリウム（Penicillium）属由来
の新規フィターゼに関し、飼料や食品の品質改善及び環
境汚染防止に利用することができ、飼料工業、食品工業
分野において有用である。
これを生産する微生物及び該フィターゼの製造法に関す
る。更に詳細にはペニシリウム（Penicillium）属由来
の新規フィターゼに関し、飼料や食品の品質改善及び環
境汚染防止に利用することができ、飼料工業、食品工業
分野において有用である。
【０００２】
【従来の技術】リンは全ての生物の生育に必須の元素で
あるが、穀類、豆類等の植物種子に含有されているリン
の大部分はフィチン態で存在する。単胃動物であるヒト
や、豚、鶏等の家畜は、フィチンを分解できないため、
植物種子由来の食品や飼料（穀類、豆類）を摂取して
も、フィチン態リンを全く利用できない。そのため、単
胃家畜を良好に生育させるために、不足分のリン酸分と
してリン酸カルシウム等の無機リン酸を飼料中に添加す
ることが一般的に行われている。また、食品や飼料中の
フィチン態リンは、栄養源として利用されないだけでな
く、そのまま排泄物中に排出されるため、環境汚染（リ
ン公害）を引き起こし、問題となっている。さらに、フ
ィチン酸は、タンパク質と結合し、消化酵素の働きを阻
害させたり、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、鉄等の
ミネラルをキレートし、栄養的に重要なミネラルの吸収
を妨げることから、栄養学的な面からフィチン酸の除去
方法が望まれている。
あるが、穀類、豆類等の植物種子に含有されているリン
の大部分はフィチン態で存在する。単胃動物であるヒト
や、豚、鶏等の家畜は、フィチンを分解できないため、
植物種子由来の食品や飼料（穀類、豆類）を摂取して
も、フィチン態リンを全く利用できない。そのため、単
胃家畜を良好に生育させるために、不足分のリン酸分と
してリン酸カルシウム等の無機リン酸を飼料中に添加す
ることが一般的に行われている。また、食品や飼料中の
フィチン態リンは、栄養源として利用されないだけでな
く、そのまま排泄物中に排出されるため、環境汚染（リ
ン公害）を引き起こし、問題となっている。さらに、フ
ィチン酸は、タンパク質と結合し、消化酵素の働きを阻
害させたり、カルシウム、亜鉛、マグネシウム、鉄等の
ミネラルをキレートし、栄養的に重要なミネラルの吸収
を妨げることから、栄養学的な面からフィチン酸の除去
方法が望まれている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】これらの問題を解決す
るため、微生物由来のフィターゼの利用、すなわち、食
品や飼料にフィターゼを添加することによりフィチン酸
を分解せしめ、ミネラルの吸収阻害を防止し、また排泄
されるフィチン態リンの量を低減させ、環境汚染を防止
することが報告されている（J.Nutrition,101,1289(197
1)等）。
るため、微生物由来のフィターゼの利用、すなわち、食
品や飼料にフィターゼを添加することによりフィチン酸
を分解せしめ、ミネラルの吸収阻害を防止し、また排泄
されるフィチン態リンの量を低減させ、環境汚染を防止
することが報告されている（J.Nutrition,101,1289(197
1)等）。
【０００４】フィターゼ生産菌としてはアスペルギルス
（Aspergillus）属、ノイロスポラ（Neurospora）属等
のかび、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces
cerevisiae）等の酵母、バチラス（Bacillus）属、シュ
ウドモナス（Pseudomonas）属等の細菌が知られてい
る。しかしながら、これまで知られた微生物の多くはフ
ィターゼ生産能が非常に低く、酵素製造コストが高くな
るため応用はほとんど進んでいない。また、フィターゼ
生産能が比較的高いものとして、ノイロスポラ（Neuros
pora）属（特開平7-59562）やペニシリウム・カゼイコ
ラム（Penicillium caseicolumn）（特開平7-67635）が
報告されているが、飼料や食品にフィターゼを直接添加
し消化器系で作用させるためには、中性から酸性領域で
安定であり且つ作用することが必要であるのに対し、前
者は酸性域での安定性に、後者は弱酸性〜中性域での安
定性に問題がある。本発明は、実用的に使用可能なフィ
ターゼ生産能の高い微生物により、中性から酸性域で安
定且つ良好に作用する新規なフィターゼを製造する方法
を提供しようとするものである。
（Aspergillus）属、ノイロスポラ（Neurospora）属等
のかび、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces
cerevisiae）等の酵母、バチラス（Bacillus）属、シュ
ウドモナス（Pseudomonas）属等の細菌が知られてい
る。しかしながら、これまで知られた微生物の多くはフ
ィターゼ生産能が非常に低く、酵素製造コストが高くな
るため応用はほとんど進んでいない。また、フィターゼ
生産能が比較的高いものとして、ノイロスポラ（Neuros
pora）属（特開平7-59562）やペニシリウム・カゼイコ
ラム（Penicillium caseicolumn）（特開平7-67635）が
報告されているが、飼料や食品にフィターゼを直接添加
し消化器系で作用させるためには、中性から酸性領域で
安定であり且つ作用することが必要であるのに対し、前
者は酸性域での安定性に、後者は弱酸性〜中性域での安
定性に問題がある。本発明は、実用的に使用可能なフィ
ターゼ生産能の高い微生物により、中性から酸性域で安
定且つ良好に作用する新規なフィターゼを製造する方法
を提供しようとするものである。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記のよ
うな性質を有するフィターゼ生産能の高い微生物を広く
自然界より探索した結果、土壌より分離したペニシリウ
ム（Penicillium）属に属する微生物が顕著に高いフィ
ターゼ生産能を有し、本菌の生産するフィターゼがかか
る用件を満たすことを見い出した。さらに、鋭意検討の
結果、本菌を用いてフィターゼを著量製造する方法を確
立すると共に、ペニシリウム属の菌株において、中性か
ら酸性域で安定且つ良好に作用するフィターゼ生産菌株
は本菌株が初めてであることを知ることによって本発明
を完成するに到った。すなわち本発明はペニシリウム属
に属する新規な微生物を培養することにより、その培養
液中に中性から酸性域で安定且つ良好に作用する特定の
新規フィターゼを生成蓄積せしめ、培養物から該フィタ
ーゼを採取することを可能にするものである。
うな性質を有するフィターゼ生産能の高い微生物を広く
自然界より探索した結果、土壌より分離したペニシリウ
ム（Penicillium）属に属する微生物が顕著に高いフィ
ターゼ生産能を有し、本菌の生産するフィターゼがかか
る用件を満たすことを見い出した。さらに、鋭意検討の
結果、本菌を用いてフィターゼを著量製造する方法を確
立すると共に、ペニシリウム属の菌株において、中性か
ら酸性域で安定且つ良好に作用するフィターゼ生産菌株
は本菌株が初めてであることを知ることによって本発明
を完成するに到った。すなわち本発明はペニシリウム属
に属する新規な微生物を培養することにより、その培養
液中に中性から酸性域で安定且つ良好に作用する特定の
新規フィターゼを生成蓄積せしめ、培養物から該フィタ
ーゼを採取することを可能にするものである。
【０００６】−生産菌− 本発明のフィターゼの生産に使用する微生物は、ペニシ
リウム属に属し、上記の理化学的性質を有するフィター
ゼを生産することができるものであれば、いかなるもの
でも良いが、具体的には本発明者らが土壌より分離した
ペニシリウムＡ−１３４６株が挙げられる。本菌株は、
以下に示すような菌学的性質を有する。 （ａ）形態 分生子柄は単生で、滑面であり、長さ10〜58μｍ、幅は
約２μｍである。フィアライドは矛先型で、長さ10〜18
μｍ、幅２〜３μｍであり、１分生子柄当たり１〜３個
形成する。分生子は卵形〜楕円形で長さ４〜５μｍ、幅
２〜３μｍであり、フィアライド先端部に連鎖状に形成
する。 （ｂ）生育 ツァペックイーストエキス寒天培地で培養した場合は、
37℃、７日間で直径27〜32ｍｍ、25℃、７日間で直径26
〜28ｍｍの菌叢に生育する。集落表面の組織は薄いビロ
ード状であり、集落表面の色調は白色〜黄色がかった白
色、集落裏面の色調は灰色がかった黄色である。生育ｐ
Ｈ範囲は３〜７で最適ｐＨは５〜６、生育温度範囲は15
〜40℃で最適温度は２８〜３０℃である。上記の菌学的
性質に基づき文献〔Compendium of Soil Fungi, volume
１(1993)等〕を参考に検討した結果、この菌株はペニシ
リウム（Penicillium）属に属することが判明した。ま
た本菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託番
号ＦＥＲＭ Ｐ−１５７４４として寄託されている。
リウム属に属し、上記の理化学的性質を有するフィター
ゼを生産することができるものであれば、いかなるもの
でも良いが、具体的には本発明者らが土壌より分離した
ペニシリウムＡ−１３４６株が挙げられる。本菌株は、
以下に示すような菌学的性質を有する。 （ａ）形態 分生子柄は単生で、滑面であり、長さ10〜58μｍ、幅は
約２μｍである。フィアライドは矛先型で、長さ10〜18
μｍ、幅２〜３μｍであり、１分生子柄当たり１〜３個
形成する。分生子は卵形〜楕円形で長さ４〜５μｍ、幅
２〜３μｍであり、フィアライド先端部に連鎖状に形成
する。 （ｂ）生育 ツァペックイーストエキス寒天培地で培養した場合は、
37℃、７日間で直径27〜32ｍｍ、25℃、７日間で直径26
〜28ｍｍの菌叢に生育する。集落表面の組織は薄いビロ
ード状であり、集落表面の色調は白色〜黄色がかった白
色、集落裏面の色調は灰色がかった黄色である。生育ｐ
Ｈ範囲は３〜７で最適ｐＨは５〜６、生育温度範囲は15
〜40℃で最適温度は２８〜３０℃である。上記の菌学的
性質に基づき文献〔Compendium of Soil Fungi, volume
１(1993)等〕を参考に検討した結果、この菌株はペニシ
リウム（Penicillium）属に属することが判明した。ま
た本菌株は工業技術院生命工学工業技術研究所に寄託番
号ＦＥＲＭ Ｐ−１５７４４として寄託されている。
【０００７】
【発明の実施の形態】本発明のフィターゼを製造するに
あたっては、上記菌株を培養し、その培養物より採取す
ればよい。培地の栄養源としては、本菌が円滑に生育す
る限り特に限定されるものではなく、炭素源としては、
資化しうる炭素化合物、例えばグルコース、フラクトー
ス、マルトース、サッカロース、油脂、穀類などを使用
することができ、窒素源としては資化しうる窒素化合
物、またはこれを含有するものであればよく、例えば硫
酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、各種ペプトン、酵母
エキス、肉エキス、大豆粉、コーンスティープリカーな
どを用いることができる。また、マグネシウム、カルシ
ウム、ナトリウム、カリウム等の無機塩や、無機、有機
微量栄養源を培地中に添加することができる。
あたっては、上記菌株を培養し、その培養物より採取す
ればよい。培地の栄養源としては、本菌が円滑に生育す
る限り特に限定されるものではなく、炭素源としては、
資化しうる炭素化合物、例えばグルコース、フラクトー
ス、マルトース、サッカロース、油脂、穀類などを使用
することができ、窒素源としては資化しうる窒素化合
物、またはこれを含有するものであればよく、例えば硫
酸アンモニウム、硝酸ナトリウム、各種ペプトン、酵母
エキス、肉エキス、大豆粉、コーンスティープリカーな
どを用いることができる。また、マグネシウム、カルシ
ウム、ナトリウム、カリウム等の無機塩や、無機、有機
微量栄養源を培地中に添加することができる。
【０００８】培養の形態は、液体、固体培養いずれでも
良い。液体培養における培養条件は培地組成により多少
異なるが、培地の初発ｐＨを３〜７の範囲、好ましくは
５〜６の範囲に調整し、培養温度15〜40℃、好ましくは
28〜30℃で好気的に３〜７日間程度培養を行い、フィタ
ーゼ生産量が最大に達したときに培養を終了すれば良
い。この様な培養により目的とするフィターゼは主とし
て菌体外に得られる。
良い。液体培養における培養条件は培地組成により多少
異なるが、培地の初発ｐＨを３〜７の範囲、好ましくは
５〜６の範囲に調整し、培養温度15〜40℃、好ましくは
28〜30℃で好気的に３〜７日間程度培養を行い、フィタ
ーゼ生産量が最大に達したときに培養を終了すれば良
い。この様な培養により目的とするフィターゼは主とし
て菌体外に得られる。
【０００９】こうして得られた培養液から、目的物であ
るフィターゼを回収並びに精製するには、一般的に行わ
れる酵素の採取法ないし精製方法に準じて行えばよい。
すなわち、得られた培養液は、遠心分離や濾過等によっ
て菌体を除去した後、その上澄液を粗酵素液として回収
する。この粗酵素液はそのまま使用することもできる
が、必要に応じて硫安等の塩類による塩析法、あるいは
エタノール、アセトン等の有機溶剤による沈澱法等によ
って活性画分を回収し、限外濾過膜法等の常法により濃
縮後、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過等の精
製手段を適宜組み合わせてフィターゼを分別精製するこ
とができる。また、所望により適宜な乾燥法により、粉
末状に回収することもできる。
るフィターゼを回収並びに精製するには、一般的に行わ
れる酵素の採取法ないし精製方法に準じて行えばよい。
すなわち、得られた培養液は、遠心分離や濾過等によっ
て菌体を除去した後、その上澄液を粗酵素液として回収
する。この粗酵素液はそのまま使用することもできる
が、必要に応じて硫安等の塩類による塩析法、あるいは
エタノール、アセトン等の有機溶剤による沈澱法等によ
って活性画分を回収し、限外濾過膜法等の常法により濃
縮後、イオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過等の精
製手段を適宜組み合わせてフィターゼを分別精製するこ
とができる。また、所望により適宜な乾燥法により、粉
末状に回収することもできる。
【００１０】−酵素活性測定法− 本発明において使用したフィターゼ活性の測定方法は以
下に示すとおりである。即ち、4mMフィチン酸ナトリウ
ムを含む 0.2M酢酸緩衝液（pH 5.5）0.5ml、蒸留水 0.4
ml及び酵素液 0.1mlからなる反応液を 37℃で 30分間反
応させ、10％ＴＣＡ 1.0mlを加えて反応を停止させる。
この反応液中の無機リン酸量をFiske-Subbarow法により
定量し、活性を求めた。活性の単位は、１分間に１マイ
クロモルの無機リン酸を遊離させる酵素量を１単位
（Ｕ）とした。
下に示すとおりである。即ち、4mMフィチン酸ナトリウ
ムを含む 0.2M酢酸緩衝液（pH 5.5）0.5ml、蒸留水 0.4
ml及び酵素液 0.1mlからなる反応液を 37℃で 30分間反
応させ、10％ＴＣＡ 1.0mlを加えて反応を停止させる。
この反応液中の無機リン酸量をFiske-Subbarow法により
定量し、活性を求めた。活性の単位は、１分間に１マイ
クロモルの無機リン酸を遊離させる酵素量を１単位
（Ｕ）とした。
【００１１】−酵素学的性質− ペニシリウムＡ−１３４６株の生産するフィターゼの酵
素学的性質は、以下のとおりである。 （１）作用：フィチン酸を加水分解して、ミオイノシト
ール及び遊離のリン酸を生成する。 （２）基質特異性：種々の基質に対する活性を測定し、
フィチン酸ナトリウムに対する活性を１００として表１
に示した。本発明のフィターゼは種々の基質に作用し、
特にフィチン酸及びｐ−ニトロフェニルリン酸に対して
よく作用した。
素学的性質は、以下のとおりである。 （１）作用：フィチン酸を加水分解して、ミオイノシト
ール及び遊離のリン酸を生成する。 （２）基質特異性：種々の基質に対する活性を測定し、
フィチン酸ナトリウムに対する活性を１００として表１
に示した。本発明のフィターゼは種々の基質に作用し、
特にフィチン酸及びｐ−ニトロフェニルリン酸に対して
よく作用した。
【００１２】
【表１】
【００１３】（３）作用ｐＨ及び至適ｐＨ：フィチン酸
ナトリウムを基質とした際のｐＨの影響を図１に示し
た。本発明のフィターゼの作用ｐＨ範囲は２〜６であ
り、至適ｐＨは４〜５であった。 （４）ｐＨ安定性：各ｐＨ値において、３７℃にて１時
間処理した際のｐＨ安定性を図２に示した。本発明のフ
ィターゼは、ｐＨ２．５〜６．５の範囲で安定であっ
た。 （５）作用温度及び至適温度：フィチン酸ナトリウムを
基質とした際の、0.1M酢酸緩衝液（pH 5.5）中における
作用温度を図３に示した。本発明のフィターゼの作用温
度は３０〜６０℃であり、至適温度は５５℃であった。 （６）温度安定性：0.1M酢酸緩衝液（pH 5.5）中で、３
０分間処理した際の温度安定性を図４に示した。本発明
のフィターゼは５５℃まで安定であった。 （７）分子量：ゲル濾過法により得られた分子量は、約
130〜150kDaであった。 （８）等電点：ショ糖密度勾配等電点電気泳動法により
得られた等電点は、４．４であった。 （９）金属イオンの影響：活性測定時に１mMの各種金属
イオンを共存させた際の活性発現率を表２に示した。本
発明のフィターゼの活性は、Ｃｕ2+、Ｚｎ2+、Ｃｄ2+、
Ｈｇ2+、Ｓｎ2+、Ｐｂ2+、Ａｌ3+により阻害された。
ナトリウムを基質とした際のｐＨの影響を図１に示し
た。本発明のフィターゼの作用ｐＨ範囲は２〜６であ
り、至適ｐＨは４〜５であった。 （４）ｐＨ安定性：各ｐＨ値において、３７℃にて１時
間処理した際のｐＨ安定性を図２に示した。本発明のフ
ィターゼは、ｐＨ２．５〜６．５の範囲で安定であっ
た。 （５）作用温度及び至適温度：フィチン酸ナトリウムを
基質とした際の、0.1M酢酸緩衝液（pH 5.5）中における
作用温度を図３に示した。本発明のフィターゼの作用温
度は３０〜６０℃であり、至適温度は５５℃であった。 （６）温度安定性：0.1M酢酸緩衝液（pH 5.5）中で、３
０分間処理した際の温度安定性を図４に示した。本発明
のフィターゼは５５℃まで安定であった。 （７）分子量：ゲル濾過法により得られた分子量は、約
130〜150kDaであった。 （８）等電点：ショ糖密度勾配等電点電気泳動法により
得られた等電点は、４．４であった。 （９）金属イオンの影響：活性測定時に１mMの各種金属
イオンを共存させた際の活性発現率を表２に示した。本
発明のフィターゼの活性は、Ｃｕ2+、Ｚｎ2+、Ｃｄ2+、
Ｈｇ2+、Ｓｎ2+、Ｐｂ2+、Ａｌ3+により阻害された。
【００１４】
【表２】
【００１５】（１０）各種阻害剤の影響：活性測定時に
５mMの各種キレート剤、各種ＳＨ酵素阻害剤及びアジ化
ナトリウムを共存させた際の活性発現率を表３に示し
た。本発明のフィターゼの活性は、これらの阻害剤にほ
とんど影響されなかった。
５mMの各種キレート剤、各種ＳＨ酵素阻害剤及びアジ化
ナトリウムを共存させた際の活性発現率を表３に示し
た。本発明のフィターゼの活性は、これらの阻害剤にほ
とんど影響されなかった。
【００１６】
【表３】
【００１７】
【実施例】次に実施例により本発明を詳細に説明する
が、これによって本発明は限定を受けるものではない。
が、これによって本発明は限定を受けるものではない。
【００１８】−実施例１− フィターゼ生産に従来よく用いられているアスペルギル
ス属の菌株を用いて、本菌株との生産性の比較を行っ
た。米ぬか10％、塩化アンモニウム0.5％、硫酸マグネ
シウム0.05％、塩化カリウム0.05％を含む液体培地20ml
を100mlの三角フラスコに入れ、121℃で20分間滅菌した
後、各菌株の胞子懸濁液を接種し、30℃、210rpmで５日
間、回転振盪培養した。この培養液を遠心分離し、その
上澄のフィターゼ活性を測定した。その結果を表４に示
した。本菌株はアスペルギルス属の菌株に比べて顕著に
高い生産性を示した。
ス属の菌株を用いて、本菌株との生産性の比較を行っ
た。米ぬか10％、塩化アンモニウム0.5％、硫酸マグネ
シウム0.05％、塩化カリウム0.05％を含む液体培地20ml
を100mlの三角フラスコに入れ、121℃で20分間滅菌した
後、各菌株の胞子懸濁液を接種し、30℃、210rpmで５日
間、回転振盪培養した。この培養液を遠心分離し、その
上澄のフィターゼ活性を測定した。その結果を表４に示
した。本菌株はアスペルギルス属の菌株に比べて顕著に
高い生産性を示した。
【００１９】
【表４】
【００２０】−実施例２− 実施例１の液体培地2.5Ｌを５Ｌ容ジャーファーメンタ
ーに入れ、121℃で20分間滅菌した後、予め30℃、３日
間振盪培養したペニシリウムＡ−１３４６株の前培養液
を接種し、30℃、500rpm、１vvmで５日間通気撹拌培養
した。この培養液を遠心分離により菌体を除去して、上
澄液を回収し、フィターゼ活性を測定したところ4.8Ｕ
／mlであった。この上澄液に硫酸アンモニウムを0.8飽
和となるまで添加して、沈澱する酵素を回収した後、再
溶解して限外濾過膜（旭化成製 分画分子量6000）によ
り脱塩、濃縮を行った。さらに、凍結乾燥を行い、比活
性257Ｕ／ｇの粗酵素粉末を約25ｇ得た。
ーに入れ、121℃で20分間滅菌した後、予め30℃、３日
間振盪培養したペニシリウムＡ−１３４６株の前培養液
を接種し、30℃、500rpm、１vvmで５日間通気撹拌培養
した。この培養液を遠心分離により菌体を除去して、上
澄液を回収し、フィターゼ活性を測定したところ4.8Ｕ
／mlであった。この上澄液に硫酸アンモニウムを0.8飽
和となるまで添加して、沈澱する酵素を回収した後、再
溶解して限外濾過膜（旭化成製 分画分子量6000）によ
り脱塩、濃縮を行った。さらに、凍結乾燥を行い、比活
性257Ｕ／ｇの粗酵素粉末を約25ｇ得た。
【００２１】−実施例３− 各飼料成分（脱脂米糠、小麦ふすま、とうもろこし）１
ｇを水15mlに懸濁した後、本酵素を５Ｕ添加し、39℃で
60分間処理した（食道の条件）。次に、0.5％ペプシン
溶液（pH３）を５ml添加後、塩酸を用いてｐＨ３に調整
し、39℃で90分間処理した（胃の条件）。処理後の遊離
リン酸量を定量し、酵素無添加の条件での遊離リン酸量
を差し引くことにより、酵素反応による遊離リン酸量を
算出した。その結果を表５に示した。本酵素により各飼
料成分に含まれているフィチン酸が有効に分解されるこ
とが認められた。
ｇを水15mlに懸濁した後、本酵素を５Ｕ添加し、39℃で
60分間処理した（食道の条件）。次に、0.5％ペプシン
溶液（pH３）を５ml添加後、塩酸を用いてｐＨ３に調整
し、39℃で90分間処理した（胃の条件）。処理後の遊離
リン酸量を定量し、酵素無添加の条件での遊離リン酸量
を差し引くことにより、酵素反応による遊離リン酸量を
算出した。その結果を表５に示した。本酵素により各飼
料成分に含まれているフィチン酸が有効に分解されるこ
とが認められた。
【００２２】
【表５】
【００２３】
【発明の効果】ペニシリウム属のカビを用いることによ
り、大量のフィターゼを容易且つ安価に取得できる。ま
た、本発明のフィターゼは、中性から酸性域で安定且つ
良好に作用するため、飼料や食品にフィターゼを直接添
加することにより、消化器官内でフィチンを分解し、遊
離したリン酸の有効利用、ミネラル吸収阻害防止、並び
に排泄物中のリン低減化による環境汚染防止等の効果を
有する。
り、大量のフィターゼを容易且つ安価に取得できる。ま
た、本発明のフィターゼは、中性から酸性域で安定且つ
良好に作用するため、飼料や食品にフィターゼを直接添
加することにより、消化器官内でフィチンを分解し、遊
離したリン酸の有効利用、ミネラル吸収阻害防止、並び
に排泄物中のリン低減化による環境汚染防止等の効果を
有する。
【図面の簡単な説明】
【図１】 本発明の酵素の作用ｐＨ及び至適ｐＨの関係
を示す。縦軸の値は、pH4.5における活性を100％とした
相対活性である。
を示す。縦軸の値は、pH4.5における活性を100％とした
相対活性である。
【図２】 本発明の酵素のｐＨ安定性を示す。縦軸の値
は、37℃にて１時間処理した後の残存活性である。
は、37℃にて１時間処理した後の残存活性である。
【図３】 本発明の酵素の作用温度及び至適温度の関係
を示す。縦軸の値は、55℃における活性を100％とした
相対活性である。
を示す。縦軸の値は、55℃における活性を100％とした
相対活性である。
【図４】 本発明の酵素の温度安定性を示す。縦軸の値
は、pH 5.5にて30分間処理した後の残存活性である。
は、pH 5.5にて30分間処理した後の残存活性である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:80）
Claims (3)
- 【請求項１】下記の理化学的性質を有する新規フィター
ゼ。 (1)作用；フィチン酸を加水分解して、ミオイノシトー
ル及び遊離のリン酸を生成する。 (2)基質特異性；フィチン酸に対して強く作用し、各種
リン酸エステルにも作用する。 (3)作用ｐＨ及び至適ｐＨ；２〜６の範囲で活性を示
し、至適ｐＨは４〜５である。 (4)ｐＨ安定性；３７℃で１時間保持した場合、ｐＨ
２．５〜６．５の範囲で安定である。 (5)作用温度及び至適温度；３０〜６０℃の範囲で活性
を示し、至適温度は５５℃である。 (6)温度安定性；ｐＨ５．５で３０分間保持した場合、
５５℃まで安定である。 (7)分子量；ゲル濾過法による分子量は約130〜150kDaで
ある。 (8)等電点；ショ糖密度勾配等電点電気泳動法による等
電点は、４．４である。 - 【請求項２】請求項１に記載のフィターゼを生産するペ
ニシリウム（Penicillium）属に属する微生物 - 【請求項３】請求項２に記載の新規微生物株、またはそ
の天然ないし人工変異株を培養し、培養物中に請求項１
に記載のフィターゼを生成蓄積せしめ、該培養物中から
これを採取することを特徴とするフィターゼの製造法
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17122397A JP3876046B2 (ja) | 1997-06-13 | 1997-06-13 | 新規フィターゼ及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP17122397A JP3876046B2 (ja) | 1997-06-13 | 1997-06-13 | 新規フィターゼ及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11164A true JPH11164A (ja) | 1999-01-06 |
| JP3876046B2 JP3876046B2 (ja) | 2007-01-31 |
Family
ID=15919336
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP17122397A Expired - Fee Related JP3876046B2 (ja) | 1997-06-13 | 1997-06-13 | 新規フィターゼ及びその製造法 |
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|---|---|
| JP (1) | JP3876046B2 (ja) |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4790995A (en) * | 1985-04-11 | 1988-12-13 | Scanflavour A/S | Process for sterilizng spices |
| JP2003507038A (ja) * | 1999-08-13 | 2003-02-25 | ザ・ヴィクトリア・ユニバーシティ・オブ・マンチェスター | フィターゼ酵素、フィターゼ酵素をコードする核酸及び上記を取り込んだベクター及び宿主細胞 |
| WO2003066847A2 (en) | 2002-02-08 | 2003-08-14 | Novozymes A/S | Phytase variants |
| KR100414530B1 (ko) * | 2000-09-30 | 2004-01-07 | 대한제당 주식회사 | 페니실리움 옥살리컴 및 그로부터 생산되는 신규한 파이타아제 |
| KR100470310B1 (ko) * | 2002-02-07 | 2005-02-05 | 대한제당 주식회사 | 파이타아제를 함유하는 항진균 조성물 |
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| WO2008017661A1 (en) | 2006-08-07 | 2008-02-14 | Novozymes A/S | Enzyme granules for animal feed |
| EP2143339A1 (en) | 2004-09-27 | 2010-01-13 | Novozymes A/S | Enzyme Granules |
| WO2015197871A1 (en) | 2014-06-27 | 2015-12-30 | Dsm Ip Assets B.V. | A method for improving the nutritional value of animal feed |
| EP3072399A1 (en) | 2006-08-07 | 2016-09-28 | Novozymes A/S | Enzyme granules for animal feed |
| WO2021229093A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Dsm Ip Assets B.V. | A method for improving the nutritional value of animal feed |
-
1997
- 1997-06-13 JP JP17122397A patent/JP3876046B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| JP4965780B2 (ja) * | 1999-08-13 | 2012-07-04 | ザ・ヴィクトリア・ユニバーシティ・オブ・マンチェスター | フィターゼ酵素、フィターゼ酵素をコードする核酸及び上記を取り込んだベクター及び宿主細胞 |
| KR100414530B1 (ko) * | 2000-09-30 | 2004-01-07 | 대한제당 주식회사 | 페니실리움 옥살리컴 및 그로부터 생산되는 신규한 파이타아제 |
| KR100470310B1 (ko) * | 2002-02-07 | 2005-02-05 | 대한제당 주식회사 | 파이타아제를 함유하는 항진균 조성물 |
| WO2003066847A2 (en) | 2002-02-08 | 2003-08-14 | Novozymes A/S | Phytase variants |
| DE202005021810U1 (de) | 2004-09-27 | 2010-04-22 | Novozymes A/S | Körnchen mit einem Kern und einer Beschichtung |
| EP2143339A1 (en) | 2004-09-27 | 2010-01-13 | Novozymes A/S | Enzyme Granules |
| EP2143338A1 (en) | 2004-09-27 | 2010-01-13 | Novozymes A/S | Enzyme Granules |
| JP2007300851A (ja) * | 2006-05-11 | 2007-11-22 | Ichibiki Kk | 醤油粕入り発酵飼料の製造方法 |
| WO2008017661A1 (en) | 2006-08-07 | 2008-02-14 | Novozymes A/S | Enzyme granules for animal feed |
| EP3072399A1 (en) | 2006-08-07 | 2016-09-28 | Novozymes A/S | Enzyme granules for animal feed |
| WO2015197871A1 (en) | 2014-06-27 | 2015-12-30 | Dsm Ip Assets B.V. | A method for improving the nutritional value of animal feed |
| WO2021229093A1 (en) | 2020-05-15 | 2021-11-18 | Dsm Ip Assets B.V. | A method for improving the nutritional value of animal feed |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3876046B2 (ja) | 2007-01-31 |
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