JPH0253029B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0253029B2 JPH0253029B2 JP56011788A JP1178881A JPH0253029B2 JP H0253029 B2 JPH0253029 B2 JP H0253029B2 JP 56011788 A JP56011788 A JP 56011788A JP 1178881 A JP1178881 A JP 1178881A JP H0253029 B2 JPH0253029 B2 JP H0253029B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- culture medium
- enzyme
- bacterial cells
- hydrolysis
- activity
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2465—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on alpha-galactose-glycoside bonds, e.g. alpha-galactosidase (3.2.1.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/94—Saccharomyces
- Y10S435/942—Saccharomyces cerevisiae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
本発明は、サツカロミセス属の酵母を培養する
ことにより酵素α−ガラクトシダーゼ（E.
C.3.2.1.2.2）を製造する方法に係る。 砂糖大根中多量に存在するラフイノース（三
糖）はスクロースの結晶化を阻害し、その抽出率
を低下させる。この事実は製糖工業に関して経済
面での重要な問題であり、ラフイノースの加水分
解は必須の要件であつて、これにより、抽出した
砂糖の結晶化を質および効率の両面で改良でき
る。 各種文献には、アブシジア（AbSidia）、アス
ペルギルス（Aspergillus）、バシルス
（Bacillus）、シルシネラ（Circinella）、エスシエ
リチア（Escherichia）、ミクロコツカス
（Micrococcus）、モルチエレーラ
（Mortierella）、ペニシリウム（Penicillium）等
の多数の微生物から抽出される酵素を使用するラ
フイノースの加水分解法が記載されている。 しかしながら、多くの微生物については、これ
を培養する際、その菌体抽出物はα−ガラクトシ
ダーゼだけでなくインベルターゼをも含有し、し
たがつて砂糖大根からの糖みつの処理の際に、ラ
フイノースの加水分解とともに、望ましくないス
クロースの加水分解を生じてしまう。 本発明の顕著な利点は、本発明に係る微生物で
は、他のかびに比べて培養時間がかなり短いこと
とともに、α−ガラクトシダーゼ活性が高くかつ
インベルターゼ活性は全くないとの特性をもつこ
とである。 これらの微生物（イタリー国、ローマ市、モン
テロトンドのオリーブ油製造所の廃液から単離さ
れたもの）は、サツカロミセス・セレビシエ・バ
リエタス・オレアセオス（Saccharomyces
cerevisiae var.oleaceous）およびサツカロミセ
ス・セレビシエ・バリエタス・オレアジノスス
（Saccharomyces cerevisiae var.oleaginosus）
として分類されるものであり、これらの微生物は
Northern Regional Center（U.S.Department of
Agriculture、Peoria、Illinois）に寄託してあ
り、寄託番号はそれぞれNRRL Ｙ 12056およ
びNRRL Ｙ 12057（いずれもブダペスト条約に
基く寄託）である。 これら微生物の培養時の特性、形態的特徴およ
び生理学的性質について以下に述べる。 Ａ 培養時の特性 １ 固形培地（３日間）：マルツ寒天培地 コロニーはバター様のクリーム色であり、
光沢がある。 ２ 液体培地（３日間）：マルツ抽出物 沈殿物が形成される（サツカロミセス・セ
レビシエ・バリエタス・オレアセオスでは、
かすかなリングを観察される）。 Ｂ 形態的特徴 １ 栄養的特徴 菌体は楕円形、円筒形および時には細長い
形状である。 ２ 仮性菌糸体あるいは菌糸体の形成 嫌気的条件下では未発達の仮性菌糸体が存
在する。 Ｃ 生殖特性 栄養菌体は直接子嚢（１ないし４個の胞子を
含む）に変わる。 Ｄ 生理学的性質 １ 炭素源の利用
ことにより酵素α−ガラクトシダーゼ（E.
C.3.2.1.2.2）を製造する方法に係る。 砂糖大根中多量に存在するラフイノース（三
糖）はスクロースの結晶化を阻害し、その抽出率
を低下させる。この事実は製糖工業に関して経済
面での重要な問題であり、ラフイノースの加水分
解は必須の要件であつて、これにより、抽出した
砂糖の結晶化を質および効率の両面で改良でき
る。 各種文献には、アブシジア（AbSidia）、アス
ペルギルス（Aspergillus）、バシルス
（Bacillus）、シルシネラ（Circinella）、エスシエ
リチア（Escherichia）、ミクロコツカス
（Micrococcus）、モルチエレーラ
（Mortierella）、ペニシリウム（Penicillium）等
の多数の微生物から抽出される酵素を使用するラ
フイノースの加水分解法が記載されている。 しかしながら、多くの微生物については、これ
を培養する際、その菌体抽出物はα−ガラクトシ
ダーゼだけでなくインベルターゼをも含有し、し
たがつて砂糖大根からの糖みつの処理の際に、ラ
フイノースの加水分解とともに、望ましくないス
クロースの加水分解を生じてしまう。 本発明の顕著な利点は、本発明に係る微生物で
は、他のかびに比べて培養時間がかなり短いこと
とともに、α−ガラクトシダーゼ活性が高くかつ
インベルターゼ活性は全くないとの特性をもつこ
とである。 これらの微生物（イタリー国、ローマ市、モン
テロトンドのオリーブ油製造所の廃液から単離さ
れたもの）は、サツカロミセス・セレビシエ・バ
リエタス・オレアセオス（Saccharomyces
cerevisiae var.oleaceous）およびサツカロミセ
ス・セレビシエ・バリエタス・オレアジノスス
（Saccharomyces cerevisiae var.oleaginosus）
として分類されるものであり、これらの微生物は
Northern Regional Center（U.S.Department of
Agriculture、Peoria、Illinois）に寄託してあ
り、寄託番号はそれぞれNRRL Ｙ 12056およ
びNRRL Ｙ 12057（いずれもブダペスト条約に
基く寄託）である。 これら微生物の培養時の特性、形態的特徴およ
び生理学的性質について以下に述べる。 Ａ 培養時の特性 １ 固形培地（３日間）：マルツ寒天培地 コロニーはバター様のクリーム色であり、
光沢がある。 ２ 液体培地（３日間）：マルツ抽出物 沈殿物が形成される（サツカロミセス・セ
レビシエ・バリエタス・オレアセオスでは、
かすかなリングを観察される）。 Ｂ 形態的特徴 １ 栄養的特徴 菌体は楕円形、円筒形および時には細長い
形状である。 ２ 仮性菌糸体あるいは菌糸体の形成 嫌気的条件下では未発達の仮性菌糸体が存
在する。 Ｃ 生殖特性 栄養菌体は直接子嚢（１ないし４個の胞子を
含む）に変わる。 Ｄ 生理学的性質 １ 炭素源の利用
【表】
【表】
マルトース − ＋
トレハロース ± ±
メリビオース ＋ ＋
ラフイノース ± ±
D〓マンニトール ± −
D〓グルシトール ± −
エタノール ± ±
グリセリン ± ±
DL〓乳酸 ± −
他の炭素化合物は資化されない。 ２ 窒素化合物の資化 硝酸カリウム：− ３ 37℃での生育：＋ 分類には、J.P.Van der Waltによる要網（「酵
母（The Yeasts）」第２版J.Lodder発行）を参
照した。 本発明に係る菌株の培養は、好気的条件下にお
いて、公知の各種方法により、たとえば固形培地
の表面で培養する方法、あるいは撹拌発酵機を使
用する深部培養法により実施できる。 培養基（固状または液状のいずれでもよい）
は、資化しうる炭素源、窒素源および無機塩を含
有する。 炭素源としては、グルコース、メリビオース、
ラフイノースおよび他の糖、グリセリンおよび酢
酸ナトリウムが使用できる。 窒素源としては、、無機または有機性の窒素化
合物、たとえば肉エキス、酵母エキス、ペプト
ン、トリプトン、アミノ酸、カゼイン加水分解
質、大豆末およびアンモニウム塩が使用できる。 本発明に係る微生物の使用による他の利点は、
この微生物をグルコースで培養する際に酵素が生
産されることである（この酵素は重要である）。 好適な培養基としては、たとえば以下の組成の
ものである。 組 成 酵母エキス ５〜20ｇ／ グルコース 10ｇ／ NaH2PO4 微量 MgSO4，（NH4）2SO2 １ｇ／ 培養の際のPHは４ないし７、好ましくは5.0な
いし5.5であり、温度は20℃ないし40℃、好まし
くは25℃ないし28℃である。 酵素の生産は少量のメリビオース（公知の如
く、この物質はラフイノースの部分加水分解によ
る二糖である）を添加することにより増長され
る。このメリビオースは、接種前に、あるいは対
数期後に直接培養基に添加できる。誘導時間は16
時間ないし72時間であり、好ましくは40時間ない
し48時間である。 培養中に、あるいは培養終了後に集められた菌
体はそのままで、あるいは乾燥粉末状で使用でき
る。あるいは菌体の粗製または精製抽出物として
使用してもよい。 この目的のために、菌体を公知の各種の方法に
よつて破壊し、酵素を含有する粗製または精製抽
出物として使用する。 最後に、酵素を高分子化合物と結合すること、
マトリツクスとの間で化合結合を形成させるこ
と、またはイオン結合させることによつて酵素を
不動化して、あるいは酵素または菌体を物理的に
不動化して使用することにより、さらに技術的お
よび経済的な面での改良が可能になる。 このようにして得られた菌体を、そのままであ
るいは不動化したのち、糖みつを含有する反応混
合物に、PH４ないし７、温度30℃ないし60℃にお
いて添加する。糖みつ中に含まれるラフイノース
は、これにより加水分解されてガラクトースおよ
びスクロースとなり、このようにして後者の収率
は改善される。 以下の実施例は本発明の他の操作上の利点を説
明するものであつて、本発明の範囲を限定するも
のではない。 実施例 １ 以下の組成をもつ培養基を調製した。 組 成 （NH4）2SO4 ５ｇ／ MgSO4・7H2O ５ｇ／ Na2HPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 ３ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10ｇ／ メリビオース 10ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、塩酸
によつてPH3.5に調整した。 このようにして調整した培養基を広口のエーレ
ンマイヤーフラスコ（容積500ml）に分配した
（各フラスク当り100ml、116℃で30分間殺菌）。各
フラスコに、同じ組成の培地50mlを収容するフラ
スコ（250ml）中で培養したサツカロミセス・セ
レビシエ・バリエタス・オレアセオスの培養物１
mlを接種し、撹拌しながら（180rpm）25℃で16
時間生育を促進した。 ついて培養フラスコを撹拌しながら（180rpm）
培養を行なつた。 接種から40時間後、培養中の菌体を遠心分離に
より集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH5.6）で洗
浄した。培養基100mlから乾燥菌体0.55ｇが得ら
れた。 培養基100mlから集めた湿つた菌体をリン酸塩
緩衝液（0.1M、PH5.6）100ml中に再びスラリー
化し、酵素活性を検定た。乾燥菌体１ｇは約１×
107酵素単位を含有していた。酵素活性について
は以下の手続により測定した。 菌体の緩衝液スラリー１mlに、リン酸塩緩衝液
（0.1M、PH5.6）４mlおよび菌体壁を破壊するた
めにトルエン数滴を添加する。撹拌しながら０℃
で15分間培養したのち、スラリーに、メリビオー
スの１％（重量／容量〕リン酸塩緩衝液（0.1M、
PH5.6）溶液10mlを加える。 撹拌水浴中で40℃において２時間反応を行な
い、つづいて反応混合物から取出したサンプルを
15分間沸謄させることにより反応を停止する。 反応中にメリビオースの加水分解により生成し
たグルコースの濃度を、Boehringer Mannheim
GmbHによりGOD−Perid比色定量法に従つて測
定する。 呈色したサンプルの光学密度を、Perkin−
Elmer Coleman55分光光度計（光路＝0.1dｍ）
により、室温において、波長436ｍμで測定する。 上記の検定条件下において２時間の間にグルコ
ース1μｇを生成する酵素の量を１単位とすれば、
乾燥菌体１ｇ当りの酵素の単位（Ｕ）は次式によ
り計算できる。 Ｕ／乾燥菌体のｇ数＝（E2h−E0h）×18.2×15×100／
Ｅ標準・Ｃ 式中、 E2h＝２時間後に抽出したサンプルの光学密度 E0h＝０時間におけるサンプルの光学密度 Ｅ標準＝１ml当りグルコース18.2ｇを含有する標
準グルコース溶液の光学密度 Ｃ＝培養基100ml中の乾燥菌体のｇ数 一方、本発明に係る酵母のインベルターゼ活性
の有無、炭素源資化テストによる常法に従い、単
離した菌体を下記の組成を有する培養基（培養基
のPH＝5.5）において培養を行なつて確認した。 酵母エキス 10ｇ／ NaH2PO4 微量 MgSO4・7H2O 1.0ｇ／ （NH4）2SO4 1.0ｇ／ 水 11 スクロース 10ｇ／ 接種したフラスコを25℃において４週間緩やかに
（180rpm）撹拌した。 ２日毎に、フラスコ内における酵母の成育を監
視し、上記のものと同じ培養基（ただし、スクロ
ースを含有しない）におけるブランクと比較し
た。 ４週間が経過した後、スクロース含有フラスコ
と同様にブランクのフラスコにおいても酵母の成
育は観察されなかつた。 かかる事実は、接種した菌株がスクロースを資
化しえず、従つて該菌株がインベルターゼ生産菌
でないことを明確に表している。 実施例 ２ 以下の組成をもつ培養基を調整した。 組 成 （NH4）2SO4 ５ｇ／ MgSO4・7H2O 0.5ｇ／ Na2HPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 ３ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10ｇ／ グルコール 10ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、つい
でPHを塩酸で5.3に調整した。 前記実施例１の如く調製したサツカロミセス・
セレビシエ・バリエタス・オレアセオスの培養基
を撹拌しながら（180rpm）27℃で培養した。 接種から39時間後に、培養基中の菌体を遠心分
離して集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH5.6）で
洗浄した。 培養基100mlから乾燥菌体0.546ｇが得られた。
培養基100mlから集めた菌体をリン酸塩緩衝液
（0.1M、PH5.6）100ml中に再びスラリー化し、酵
素活性の検定を行なつた。乾燥菌体１ｇは9.4×
106酵素単位を含有していた。 実施例 ３ 以下の組成をもつ培養基を調整した。 組 成 （NH4）2SO4 5.00ｇ／ MgSO4・7H2O 0.5ｇ／ Na2HPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 3.00ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10ｇ／ グルコース 10ｇ／ メリビオース １ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、つい
でPHを塩酸で5.3に調整した。 前記実施例１の如くして調整したサツカロミセ
ス・セレビシエ・バリエタス・オレアセオスの培
養基を撹拌しながら（180rpm）27℃で培養した。
接種から43時間後に、培養基から菌体を遠心分離
して集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH5.6）で洗
浄した。。培養基100mlから乾燥菌体0.594ｇが得
られた。 培養基100mlから集めた菌体をリン酸塩緩衝液
（0.1M、PH5.6）100ml中に再びスラリー化し、酵
素活性について検定したところ、乾燥菌体１ｇは
1.6×107酵素単位を含有していた。 実施例 ４ 以下の組成をもつ培養基を調整した。 組 成 （NH4）2SO4 5.00ｇ／ MgSO4・7H2O 0.05ｇ／ NaHPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 3.0ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10.0ｇ／ グルコース 5.0ｇ／ メリビオース 5.0ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、塩酸
でPHを5.3に調整した。 前記実施例１の如く調製したサツカロミセス・
セレビシエ・バリエタス・オレアセオスの培養基
を撹拌しながら（180rpm）29℃で培養した。培
養基への菌株の接種から48時間後に、菌体を遠心
分離により集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH
5.6）で洗浄した。培養基100mlから乾燥菌体
0.365ｇが得られた。 培養基６mlを、総固形物に対してラフイノース
1.6％（重量）を含有する35゜Brix糖みつ50mlに添
加し、H2SO4でPH5.2に調整した。撹拌しながら
40℃において16時間処理した。ガラクトース（ラ
フイノースの加水分解生成物）の濃度を、
Boehringer Mannheim GmbHによりラクトー
ス／ガラクトースUVテスト法に従つて測定し
た。上記条件下において、ガラクトース153μモ
ル（存在するすべてのラフイノースの30％が加水
分解したことになる）が生成されていた。
トレハロース ± ±
メリビオース ＋ ＋
ラフイノース ± ±
D〓マンニトール ± −
D〓グルシトール ± −
エタノール ± ±
グリセリン ± ±
DL〓乳酸 ± −
他の炭素化合物は資化されない。 ２ 窒素化合物の資化 硝酸カリウム：− ３ 37℃での生育：＋ 分類には、J.P.Van der Waltによる要網（「酵
母（The Yeasts）」第２版J.Lodder発行）を参
照した。 本発明に係る菌株の培養は、好気的条件下にお
いて、公知の各種方法により、たとえば固形培地
の表面で培養する方法、あるいは撹拌発酵機を使
用する深部培養法により実施できる。 培養基（固状または液状のいずれでもよい）
は、資化しうる炭素源、窒素源および無機塩を含
有する。 炭素源としては、グルコース、メリビオース、
ラフイノースおよび他の糖、グリセリンおよび酢
酸ナトリウムが使用できる。 窒素源としては、、無機または有機性の窒素化
合物、たとえば肉エキス、酵母エキス、ペプト
ン、トリプトン、アミノ酸、カゼイン加水分解
質、大豆末およびアンモニウム塩が使用できる。 本発明に係る微生物の使用による他の利点は、
この微生物をグルコースで培養する際に酵素が生
産されることである（この酵素は重要である）。 好適な培養基としては、たとえば以下の組成の
ものである。 組 成 酵母エキス ５〜20ｇ／ グルコース 10ｇ／ NaH2PO4 微量 MgSO4，（NH4）2SO2 １ｇ／ 培養の際のPHは４ないし７、好ましくは5.0な
いし5.5であり、温度は20℃ないし40℃、好まし
くは25℃ないし28℃である。 酵素の生産は少量のメリビオース（公知の如
く、この物質はラフイノースの部分加水分解によ
る二糖である）を添加することにより増長され
る。このメリビオースは、接種前に、あるいは対
数期後に直接培養基に添加できる。誘導時間は16
時間ないし72時間であり、好ましくは40時間ない
し48時間である。 培養中に、あるいは培養終了後に集められた菌
体はそのままで、あるいは乾燥粉末状で使用でき
る。あるいは菌体の粗製または精製抽出物として
使用してもよい。 この目的のために、菌体を公知の各種の方法に
よつて破壊し、酵素を含有する粗製または精製抽
出物として使用する。 最後に、酵素を高分子化合物と結合すること、
マトリツクスとの間で化合結合を形成させるこ
と、またはイオン結合させることによつて酵素を
不動化して、あるいは酵素または菌体を物理的に
不動化して使用することにより、さらに技術的お
よび経済的な面での改良が可能になる。 このようにして得られた菌体を、そのままであ
るいは不動化したのち、糖みつを含有する反応混
合物に、PH４ないし７、温度30℃ないし60℃にお
いて添加する。糖みつ中に含まれるラフイノース
は、これにより加水分解されてガラクトースおよ
びスクロースとなり、このようにして後者の収率
は改善される。 以下の実施例は本発明の他の操作上の利点を説
明するものであつて、本発明の範囲を限定するも
のではない。 実施例 １ 以下の組成をもつ培養基を調製した。 組 成 （NH4）2SO4 ５ｇ／ MgSO4・7H2O ５ｇ／ Na2HPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 ３ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10ｇ／ メリビオース 10ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、塩酸
によつてPH3.5に調整した。 このようにして調整した培養基を広口のエーレ
ンマイヤーフラスコ（容積500ml）に分配した
（各フラスク当り100ml、116℃で30分間殺菌）。各
フラスコに、同じ組成の培地50mlを収容するフラ
スコ（250ml）中で培養したサツカロミセス・セ
レビシエ・バリエタス・オレアセオスの培養物１
mlを接種し、撹拌しながら（180rpm）25℃で16
時間生育を促進した。 ついて培養フラスコを撹拌しながら（180rpm）
培養を行なつた。 接種から40時間後、培養中の菌体を遠心分離に
より集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH5.6）で洗
浄した。培養基100mlから乾燥菌体0.55ｇが得ら
れた。 培養基100mlから集めた湿つた菌体をリン酸塩
緩衝液（0.1M、PH5.6）100ml中に再びスラリー
化し、酵素活性を検定た。乾燥菌体１ｇは約１×
107酵素単位を含有していた。酵素活性について
は以下の手続により測定した。 菌体の緩衝液スラリー１mlに、リン酸塩緩衝液
（0.1M、PH5.6）４mlおよび菌体壁を破壊するた
めにトルエン数滴を添加する。撹拌しながら０℃
で15分間培養したのち、スラリーに、メリビオー
スの１％（重量／容量〕リン酸塩緩衝液（0.1M、
PH5.6）溶液10mlを加える。 撹拌水浴中で40℃において２時間反応を行な
い、つづいて反応混合物から取出したサンプルを
15分間沸謄させることにより反応を停止する。 反応中にメリビオースの加水分解により生成し
たグルコースの濃度を、Boehringer Mannheim
GmbHによりGOD−Perid比色定量法に従つて測
定する。 呈色したサンプルの光学密度を、Perkin−
Elmer Coleman55分光光度計（光路＝0.1dｍ）
により、室温において、波長436ｍμで測定する。 上記の検定条件下において２時間の間にグルコ
ース1μｇを生成する酵素の量を１単位とすれば、
乾燥菌体１ｇ当りの酵素の単位（Ｕ）は次式によ
り計算できる。 Ｕ／乾燥菌体のｇ数＝（E2h−E0h）×18.2×15×100／
Ｅ標準・Ｃ 式中、 E2h＝２時間後に抽出したサンプルの光学密度 E0h＝０時間におけるサンプルの光学密度 Ｅ標準＝１ml当りグルコース18.2ｇを含有する標
準グルコース溶液の光学密度 Ｃ＝培養基100ml中の乾燥菌体のｇ数 一方、本発明に係る酵母のインベルターゼ活性
の有無、炭素源資化テストによる常法に従い、単
離した菌体を下記の組成を有する培養基（培養基
のPH＝5.5）において培養を行なつて確認した。 酵母エキス 10ｇ／ NaH2PO4 微量 MgSO4・7H2O 1.0ｇ／ （NH4）2SO4 1.0ｇ／ 水 11 スクロース 10ｇ／ 接種したフラスコを25℃において４週間緩やかに
（180rpm）撹拌した。 ２日毎に、フラスコ内における酵母の成育を監
視し、上記のものと同じ培養基（ただし、スクロ
ースを含有しない）におけるブランクと比較し
た。 ４週間が経過した後、スクロース含有フラスコ
と同様にブランクのフラスコにおいても酵母の成
育は観察されなかつた。 かかる事実は、接種した菌株がスクロースを資
化しえず、従つて該菌株がインベルターゼ生産菌
でないことを明確に表している。 実施例 ２ 以下の組成をもつ培養基を調整した。 組 成 （NH4）2SO4 ５ｇ／ MgSO4・7H2O 0.5ｇ／ Na2HPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 ３ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10ｇ／ グルコール 10ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、つい
でPHを塩酸で5.3に調整した。 前記実施例１の如く調製したサツカロミセス・
セレビシエ・バリエタス・オレアセオスの培養基
を撹拌しながら（180rpm）27℃で培養した。 接種から39時間後に、培養基中の菌体を遠心分
離して集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH5.6）で
洗浄した。 培養基100mlから乾燥菌体0.546ｇが得られた。
培養基100mlから集めた菌体をリン酸塩緩衝液
（0.1M、PH5.6）100ml中に再びスラリー化し、酵
素活性の検定を行なつた。乾燥菌体１ｇは9.4×
106酵素単位を含有していた。 実施例 ３ 以下の組成をもつ培養基を調整した。 組 成 （NH4）2SO4 5.00ｇ／ MgSO4・7H2O 0.5ｇ／ Na2HPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 3.00ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10ｇ／ グルコース 10ｇ／ メリビオース １ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、つい
でPHを塩酸で5.3に調整した。 前記実施例１の如くして調整したサツカロミセ
ス・セレビシエ・バリエタス・オレアセオスの培
養基を撹拌しながら（180rpm）27℃で培養した。
接種から43時間後に、培養基から菌体を遠心分離
して集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH5.6）で洗
浄した。。培養基100mlから乾燥菌体0.594ｇが得
られた。 培養基100mlから集めた菌体をリン酸塩緩衝液
（0.1M、PH5.6）100ml中に再びスラリー化し、酵
素活性について検定したところ、乾燥菌体１ｇは
1.6×107酵素単位を含有していた。 実施例 ４ 以下の組成をもつ培養基を調整した。 組 成 （NH4）2SO4 5.00ｇ／ MgSO4・7H2O 0.05ｇ／ NaHPO4・12H2O 4.6ｇ／ KH2PO4 3.0ｇ／ NaCl 0.1ｇ／ CaCl2 0.05ｇ／ 酵母エキス 10.0ｇ／ グルコース 5.0ｇ／ メリビオース 5.0ｇ／ 上記化合物を脱イオン化した水に溶解し、塩酸
でPHを5.3に調整した。 前記実施例１の如く調製したサツカロミセス・
セレビシエ・バリエタス・オレアセオスの培養基
を撹拌しながら（180rpm）29℃で培養した。培
養基への菌株の接種から48時間後に、菌体を遠心
分離により集め、リン酸塩緩衝液（0.1M、PH
5.6）で洗浄した。培養基100mlから乾燥菌体
0.365ｇが得られた。 培養基６mlを、総固形物に対してラフイノース
1.6％（重量）を含有する35゜Brix糖みつ50mlに添
加し、H2SO4でPH5.2に調整した。撹拌しながら
40℃において16時間処理した。ガラクトース（ラ
フイノースの加水分解生成物）の濃度を、
Boehringer Mannheim GmbHによりラクトー
ス／ガラクトースUVテスト法に従つて測定し
た。上記条件下において、ガラクトース153μモ
ル（存在するすべてのラフイノースの30％が加水
分解したことになる）が生成されていた。
Claims (1)
- １ α−ガラクトシダーゼ生産性を有し、かつ、
インベルターゼを生産しないサツカロミセス・セ
レビシアエ属菌を、PH４ないし７、温度20ないし
40℃において培養し、該培養液からα−ガラクト
シダーゼを採取することを特徴とする、α−ガラ
クトシダーゼの製法。
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT19618/80A IT1130242B (it) | 1980-02-01 | 1980-02-01 | Procedimento per la produzione dell'enzima alfa-galattosidasi e per l'idrolisi del raffinosio mediante l'impiego dell'enzima stesso |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS56121485A JPS56121485A (en) | 1981-09-24 |
| JPH0253029B2 true JPH0253029B2 (ja) | 1990-11-15 |
Family
ID=11159686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP1178881A Granted JPS56121485A (en) | 1980-02-01 | 1981-01-30 | Production of alphaa galactosidase and use |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4376167A (ja) |
| JP (1) | JPS56121485A (ja) |
| BE (1) | BE887293A (ja) |
| BG (1) | BG42525A3 (ja) |
| CA (1) | CA1163939A (ja) |
| CS (1) | CS248014B2 (ja) |
| DD (1) | DD157564A5 (ja) |
| DE (1) | DE3049308C2 (ja) |
| DK (1) | DK153410C (ja) |
| FI (1) | FI70596C (ja) |
| FR (1) | FR2481315A1 (ja) |
| GB (1) | GB2068972B (ja) |
| HU (1) | HU183303B (ja) |
| IE (1) | IE51009B1 (ja) |
| IT (1) | IT1130242B (ja) |
| LU (1) | LU83094A1 (ja) |
| NL (1) | NL8100476A (ja) |
| NO (1) | NO162347C (ja) |
| PL (1) | PL127026B1 (ja) |
| RO (1) | RO80915A (ja) |
| SE (1) | SE453836B (ja) |
| SU (1) | SU1090262A3 (ja) |
| TR (1) | TR21577A (ja) |
| YU (1) | YU42232B (ja) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1140312B (it) * | 1981-12-03 | 1986-09-24 | Anic Spa | Procedimento per la produzione di alfa-galattosidasi e impieghi dell'enzima cosi' ottenuto |
| US4643901A (en) * | 1983-06-10 | 1987-02-17 | Universal Foods Corporation | Yeast strains, method of production and use in baking |
| JPS61231993A (ja) * | 1985-04-09 | 1986-10-16 | Oriental Yeast Co Ltd | 新規パン酵母 |
| US5055401A (en) * | 1987-04-10 | 1991-10-08 | Alko Ltd. | Construction of new α-galactosidase producing yeast strains and the industrial application of these strains |
| NZ233582A (en) | 1989-05-16 | 1992-05-26 | Akpharma Inc Formerly Aek Dev | Oral composition comprising alpha-galactosidase |
| JPH07102138B2 (ja) * | 1989-07-19 | 1995-11-08 | 日本甜菜製糖株式会社 | 新規組換えプラスミド |
| US5356804A (en) * | 1990-10-24 | 1994-10-18 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City Of New York | Cloning and expression of biologically active human α-galactosidase A |
| US5401650A (en) * | 1990-10-24 | 1995-03-28 | The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Cloning and expression of biologically active α-galactosidase A |
| US8889127B2 (en) * | 2004-07-01 | 2014-11-18 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Targeted protein replacement for the treatment of lysosomal storage disorders |
| LT2753346T (lt) | 2011-09-07 | 2020-08-10 | Mount Sinai School Of Medicine | Ceramidazė ir ląstelių diferenciacija |
| ES2897825T3 (es) | 2012-06-01 | 2022-03-02 | Icahn School Med Mount Sinai | Niveles de ceramida en el tratamiento y prevención de infecciones |
| PT2968479T (pt) | 2013-03-14 | 2019-08-07 | Icahn School Med Mount Sinai | Composições terapêuticas de ceramidase ácida e métodos de fabrico e utilização |
| JP7515848B2 (ja) * | 2020-02-05 | 2024-07-16 | 学校法人帝京大学 | スクリーニング用培地及びスクリーニング方法 |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1485502A (en) * | 1974-06-05 | 1977-09-14 | Aarhus Oliefabrik As | Process for removal of water-soluble carbohydrates in the production of plant protein products |
| CH627626A5 (fr) * | 1978-01-04 | 1982-01-29 | Nestle Sa | Procede d'elimination des sucres flatulents du soja. |
-
1980
- 1980-02-01 IT IT19618/80A patent/IT1130242B/it active
- 1980-12-05 US US06/213,657 patent/US4376167A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-12-29 DE DE3049308A patent/DE3049308C2/de not_active Expired
- 1980-12-30 IE IE2742/80A patent/IE51009B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-12-30 DK DK557080A patent/DK153410C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-12-31 CA CA000367758A patent/CA1163939A/en not_active Expired
- 1980-12-31 FI FI804090A patent/FI70596C/fi not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-01-08 BG BG050349A patent/BG42525A3/xx unknown
- 1981-01-08 PL PL1981229117A patent/PL127026B1/pl unknown
- 1981-01-13 YU YU58/81A patent/YU42232B/xx unknown
- 1981-01-20 TR TR21577A patent/TR21577A/xx unknown
- 1981-01-23 RO RO81103195A patent/RO80915A/ro unknown
- 1981-01-27 LU LU83094A patent/LU83094A1/fr unknown
- 1981-01-27 GB GB8102439A patent/GB2068972B/en not_active Expired
- 1981-01-28 FR FR8101643A patent/FR2481315A1/fr active Granted
- 1981-01-29 BE BE0/203642A patent/BE887293A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-01-29 NO NO810306A patent/NO162347C/no unknown
- 1981-01-30 CS CS81692A patent/CS248014B2/cs unknown
- 1981-01-30 HU HU81220A patent/HU183303B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-01-30 NL NL8100476A patent/NL8100476A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 JP JP1178881A patent/JPS56121485A/ja active Granted
- 1981-01-30 SU SU813288200A patent/SU1090262A3/ru active
- 1981-01-30 SE SE8100741A patent/SE453836B/sv not_active Application Discontinuation
- 1981-02-02 DD DD81227378A patent/DD157564A5/de not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-11-05 US US06/439,378 patent/US4450238A/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| EUR.J.BIOCHEM=1977 * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0253029B2 (ja) | ||
| US3919049A (en) | Process for preparing {62 -galactosidase | |
| US4111749A (en) | Method of converting racemic hydantoins into optically active aminoacids | |
| US4226941A (en) | Process for the optical resolution of d,l-2-amino-4-methylphosphinobutyric acid | |
| DE3307607C2 (ja) | ||
| US4387163A (en) | Process for producing the enzyme cholesterol esterase and for hydrolyzing cholesterol esters of fatty acids by using the enzyme itself | |
| GB2031896A (en) | A process for the optical resolution of D,L-2-amino-4- methylphosphinobutyric acid | |
| US3957587A (en) | Production of xylose (dextrose) isomerase enzyme preparations | |
| Vanderhaeghe et al. | Specificity of penicillin acylase of Fusarium and of Penicillium chrysogenum | |
| US3980520A (en) | Process for the production of l-malic acid by microbiological fermentation and means suitable for carrying out the same | |
| HU181488B (en) | Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex | |
| LU87203A1 (fr) | Procede pour la preparation de tannase destinee a la production d'acide gallique,a l'aide d'une culture d'aspergillus,tannase ainsi obtenue et utilisation de celle-ci pour la production d'acide gallique | |
| US4011135A (en) | Production of L(+)-tartaric acid | |
| US4291123A (en) | Production of fructose and fructose-base syrups and means for carrying out such production | |
| JPS6362195B2 (ja) | ||
| KR910007849B1 (ko) | 신균주 스트렙토마이세스 sp.Y-183 및 이로부터 생산되는 히단토인에이즈의 생산방법 | |
| SU1151217A3 (ru) | Способ получени холестеринэстеразы | |
| DE3040951A1 (de) | Verfahren zur herstellung von 6-amino-penicillansaeure oder deren s-oxid | |
| JP3917723B2 (ja) | ラクトン加水分解酵素およびその製造法 | |
| CZ280145B6 (cs) | Způsob přípravy derivátů kyseliny 7-aminocefalosporanové a použití mikroorganismu Pseudomonas k hydrolýze těchto derivátů | |
| JPH0763364B2 (ja) | 生澱粉分解酵素の製造法 | |
| JPH04325096A (ja) | （Ｒ）−２−ハロプロピオン酸および（Ｒ）−２−ハロ−ｎ−酪酸の製造法 | |
| JPH0687775B2 (ja) | 生澱粉分解酵素生産菌 | |
| JPH04148692A (ja) | ホスホマイシンの製造方法 | |
| JPH037360B2 (ja) |