JPH111686A

JPH111686A - 抗酸化剤

Info

Publication number: JPH111686A
Application number: JP10135931A
Authority: JP
Inventors: Yoshihide Hagiwara; 義秀萩原; Hideaki Hagiwara; 秀昭萩原
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1990-05-14
Filing date: 1998-05-01
Publication date: 1999-01-06

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】食品、医薬品等の分野において有用な酸化防
止剤を提供すること。【解決手段】麦類植物の緑葉成分で、化１と推定され
る、２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシンよりなる抗
酸化剤。【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は麦類植物の緑葉、殊に大麦の若い
緑葉に由来する強力な酸化防止活性を有する抗酸化成分
に関する。

【０００２】従来、天然源由来又は化学合成された、主
として食品、医薬品等の分野で使用されている抗酸化剤
としては、例えば、α‐トコフェロール、アスコルビン
酸等の天然抗酸化剤やブチルヒドロキシアニリール（Ｂ
ＨＡ）、ジブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）等のフ
ェノール系合成抗酸化剤等が知られている。

【０００３】一方、本発明者らは、抗腫瘍作用、抗高脂
血症作用、血糖低下作用、抗ウイルス作用等の数多くの
生理作用を有する成分を含むことが明らかにされている
麦類植物の緑葉に着目し、抗酸化性という立場からその
成分の検討を行なった。

【０００４】その結果、今回、麦類植物の緑葉成分中
に、α‐トコフェロールと同等ないしそれ以上に強力な
酸化防止活性を有する成分が含まれていることを見い出
し、本発明を完成するに至った。

【０００５】しかして、本発明の１つの態様によれば、
麦類植物の緑葉成分であって、ｎ‐ヘキサンに実質的に
不溶性で且つ含水率が０〜８０％の含水エタノールに可
溶性である成分よりなる抗酸化活性物質が提供される。

【０００６】また、本発明のもう１つの態様によれば、
麦類植物の緑葉成分であって、ｎ‐ヘキサンに実質的に
不溶性で且つ含水率が０〜８０％の含水エタノールに可
溶性であり、さらに含水率が０〜８０％の含水メタノー
ルに可溶性である成分よりなる抗酸化活性物質が提供さ
れる。

【０００７】以下、本発明の抗酸化活性物質についてさ
らに詳細に説明する。なお、本明細書における含水アル
コールの含水率％はv／v％による。

【０００８】原料となる緑色植物としては、麦類植物が
好適であるが、それ以外に、クローバー、アルフアルフ
ア、ケール、ホウレン草、レタス、パセリ、セロリ、キ
ヤベツ、白菜、水葉、ピーマン、ニンジン緑葉、大根緑
葉、ササ、アシタバなどの、牧草類、野菜類、山野草類
植物；さらにスピルリナ、クロレラ、ワカメ、青ノリな
どの淡水産もしくは海水産緑色藻類、等もまた使用する
ことができる。

【０００９】本発明において好適に使用される麦類植物
としては、大麦が最も適しているが、その他に、小麦、
裸麦、エン麦、ハト麦、トウモロコシ、キビ、イタリア
ンダイグラスなどもまた使用することができる。

【００１０】本発明では、これら緑色植物、殊に麦類植
物の中でも成熟期前に収穫した若い植物の新鮮な茎及び
／又は葉の部分（本明細書ではこれらを総称して「緑
葉」という）が特に適している。

【００１１】緑色植物、例えば麦類植物の緑葉はまず、
ミキサー、ジューサー、等の機械的破砕手段によって搾
汁し、必要に応じて、篩別、濾過等の手段によって粗固
形分を除去することにより搾汁液（以下、これを「青
汁」という）を調製する。

【００１２】次いで、この青汁をそのままで、或いはそ
れを凍結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥する
ことにより得られる青汁粉末を充分量の水又はｎ‐ヘキ
サンで抽出処理する。この抽出処理は通常室温で行なう
ことができ、場合によっては２回又はそれ以上繰り返し
行なってもよく、それによつて、水可溶性成分又はｎ‐
ヘキサンに実質的に不溶性の成分を分離回収する。回収
された抽出成分はこの段階で前記と同様にして乾燥し固
形化することができる。

【００１３】かくして得られる水可溶性成分又はｎ‐ヘ
キサン不溶性成分を次いで含水率が０〜８０％、好まし
くは１０〜７０％、さらに好ましくは１５〜５０％の含
水エタノール、例えば含水率２０％の含水エタノールで
抽出処理を行ない、該含水エタノールに可溶性の成分を
分離回収する。

【００１４】この含水エタノールによる抽出処理は、前
記の如くして調製される青汁もしくはそれから水不溶性
成分を完全に除去した緑葉の水溶性成分又はそれらを凍
結乾燥、噴霧乾燥等の適当な乾燥手段で乾燥して得られ
る粉末に対して直接行なうこともできる。

【００１５】このようにして回収された含水エタノール
可溶性成分は、そのままで或いは濃縮又は溶媒を留去す
ることにより、本発明の抗酸化活性物質として使用する
ことができる。

【００１６】さらに、本発明によれば所望に応じて、上
記含水エタノール可溶成分を適当な吸着剤、例えばＳty
rene‐ＤＶＢ樹脂吸着剤（例えば、ローム・アンド・ハ
ース社製、アンバーライト^R吸着剤ＸＡＤ‐２）等で処
理し且つ含水率０〜８０％、好ましくは２０〜７０％、
さらに好ましくは３０〜６０％の含水メタノールで溶離
処理を行なうことによって、該含水メタノールに可溶性
の成分を回収することができる。これによってさらに酸
化防止活性に優れた画分を取得することができる。

【００１７】さらにまた、このようにして大麦から回収
される含水メタノール可溶性成分は、例えば含水率が３
０〜７０％、好ましくは４０〜６０％の含水メタノール
を用いて再結晶精製することにより、抗酸化活性物質の
本体を微黄色結晶として取得することができる。このよ
うにして単離された抗酸化活性物質の本体は、ＮＭＲ、
質量分析等の分析の結果、下記式

【００１８】

【化１】

【００１９】で示される構造を有する２’−Ｏ−グリコ
シル−イソビテキシンであることが同定された（後記実
施例１参照）。

【００２０】上記構造式又はこれに類する構造を有する
抗酸化活性物質が、麦類植物をはじめとする緑色植物の
緑葉中に含まれており、それが本発明の抗酸化活性物質
の有効成分をなしているものと推定される。

【００２１】本発明の抗酸化活性物質は後記実施例から
明らかなようにα‐トコフェロールと同等ないしそれ以
上の強力な酸化防止活性を有しており、例えば、食品、
医薬品等の分野における酸化防止剤として有用である。

【００２２】例えば、本発明の抗酸化活性物質は、原料
の緑葉中に通常含まれる各種金属元素や食品の変性を促
進する物質等が除去されており、抗酸化性が要求される
食品、医薬品等の分野における各種の無機又は有機（組
成）物に有利に配合することができる。例えば、本発明
の抗酸化活性物質は、必要により、シクロデキストリ
ン、クラウンエーテル等による包接を行なった後、果
糖、ブドウ糖、デキストリン、デンプン等の糖類；アミ
ノ酸類；クエン酸、リンゴ酸、酒石酸、コハク酸等の有
機酸；各種ビタミン類；着色料、香料、各種増粘剤等と
混合することができる。特に本発明の抗酸化活性物質
は、配合した組成物の水溶性、透明性に実質的に悪影響
を与えることがないので、水性の組成物にあつては、濾
過滅菌が可能である。

【００２３】また、本発明の抗酸化活性物質は、タル
ク、亜鉛華、炭酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、二酸
化チタン、カオリン、リン酸カルシウム等の医薬、塗
料、化粧品、発泡剤等の原料に混合しまたは噴霧乾燥、
真空乾燥等により粉末として配合することにより、新規
な工業製品の製造が可能となり、しかも製品の品質にも
変化を起こさせない等の利点を有する。しかも水溶性
で、更にアルコール可溶性を有する抗酸化活性物質は、
無機および有機組成物の安定化にも役立ち、きわめて優
れた新規製品、例えば、ポリマー製造用酸化防止剤；エ
マルジヨン塗料；香粧料；紙製品；食品；医薬品；医療
用材料等の製造を可能にするものである。

【００２４】次に実施例により本発明をさらに具体的に
説明する。

【００２５】

【実施例１】（活性成分の分画と調製法）成熟期前の大麦の青汁の凍結乾燥粉末２０ｇにｎ‐ヘキ
サン５００ｍｌを加え常温で約５分間よく撹拌した後、
不溶成分を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０ｍｉｎ）に
より分離し、さらに分離した不溶成分にｎ‐ヘキサン５
００ｍｌを加え、同様の操作を繰り返しｎ‐ヘキサン不
溶成分を得た。

【００２６】この不溶成分に、含水率２０ｖ／ｖ％のエ
チルアルコール５００ｍｌを加え常温で約５分間よく撹
拌した後、不溶分を濾別する。濾別した不溶分を再度含
水率２０ｖ／ｖ％のエチルアルコール５００ｍｌで同様
に処理し、得られる濾液を合わせて、減圧下に溶媒を留
去擦する。これによってエチルアルコール抽出物１３.
０ｇを得た。

【００２７】このエチルアルコール可溶分をアンバーラ
イトＸＡＤ‐２カラムに吸着させた後、蒸留水、含水率
がそれぞれ８０、６０、４０、２０及び０ｖ／ｖ％の含
水メタノール、ならびにアセトンで順次離溶させ、溶出
液を得た。

【００２８】各溶出液は減圧蒸留にて溶媒を留去し、そ
の結果、水抽出物４.７７ｇ、２０％メタノール抽出物
１８０ｍｇ、４０％メタノール抽出物１３１ｍｇ、６０
％メタノール抽出物１９９ｍｇ、８０％メタノール抽出
物３２ｍｇ、１００％メタノール抽出物１６５ｍｇ、ア
セトン抽出物０.８７ｍｇ、を得た（ここで、メタノー
ルの％は含水メタノール中のメタノール濃度ｖ／ｖ％で
ある）。

【００２９】上記の如くして得られた６０％メタノール
抽出物を、さらに６０％メタノールを用いて再結晶し、
１８０mgの微黄色の結晶を得た。この結晶の構造決定を
質量分析及びＮＭＲにより行った。

【００３０】質量分析はＦＡＢ−ＭＳ：ＶＧＺＡＢ−
２Ｆ、(Xenon Gun)(Jon Tech)型質量分析装置を用いて
行い、図１に示す結果が得られた。この質量スペクトル
からｍ／ｚ＝５９５に［Ｍ＋Ｈ⁺］のピークがみられ、
分子量は５９４であることが決定され、元素分析の結果
と併せて考慮するとき、本物質の分子式はＣ₂₇Ｈ₃₀Ｏ₁₅
であると判断される。

【００３１】本物質の紫外線吸収スペクトルをＨ₂Ｏ及
びメタノール中で測定したところ、それぞれ図２及び図
３に示すようになりフラボノイドグルコシドの吸収を示
した。

【００３２】赤外線吸収スペクトルをＪＡＳＣＯＦＴ
／ＩＲ−７０００ＳによりＫＢｒ法を適用して測定した
結果を図４に示す。３４２２cm^-1にＯＨ基の存在を示し
ている。

【００３３】本物質は常法により塩酸−メタノールで加
水分解するときグルコースを１分子遊離して、イソビテ
キシンを生成した。

【００３４】さらに、本物質の¹³ＣＮＭＲスペクトル
（５００ＭＨｚ）を、精製抗酸化活性物質２５mgを用い
てＧＥＯＭＥＧＡ３００型核磁気共鳴スペクトル吸
収測定装置によりテトラメチルシラン［ＴＭＳ、（ＣＨ
₃)₄Ｓｉ］を内部標準として用いて測定し、図５に示す
結果を得た。図５においては、化学シフトをδで表示し
た。精製抗酸化活性物質はＭｅＯＨ−ｄ₄中で２７炭素
原子に対するシグナルを与え、イソビテキシンの¹³Ｃ−
ＮＭＲの標準値[Ramarathnam, N., Osawa, T.,Namiki,
M. and Kawakishi, S.: J.Agric. Food Chem., ３７，
３１６−３１９（１９８９）］を基礎として次の構造式
であることを推定した。

【００３５】

【化２】

【００３６】本発明は、この構造式より、２’−Ｏ−グ
ルコシル−イソビテキシンと命名する。

【００３７】

【実施例２】（活性成分の分画と調製法）成熟期前の小麦の青汁の凍結乾燥粉末２０ｇを、実施例
１と同様に処理して６０％メタノール抽出物１１８mgを
得た。さらに該抽出物を６０％メタノールにより再結晶
を繰り返して、１０６mgの白色の結晶を得た。本物質は
実施例１で得られたと同じ物質であつた。

【００３８】

【実施例３】（活性成分の分画と調製法）成熟期前のコンフリーの青汁の凍結乾燥粉末２０ｇを、
実施例１と同様に処理して６０％メタノール抽出物４０
mgを得た。さらに該抽出物を６０％メタノールにより再
結晶を繰り返して３７mgの白色の結晶を得た。本物質は
実施例１で得られたと同じ物質であつた。

【００３９】

【実施例４】（ＴＢＡ法による過酸化脂質の測定）リノール酸７.５ｍｇにα‐トコフェロール０.２２ｍｇ
又は実施例１で得られた各抽出物０.２２ｍｇを加え、
これに、フェントン試液（ＦｅＣl₂、Ｈ₂Ｏ₂）２００μ
ｌを加え、３７℃で１６時間インキュベートした（全量
５ｍｌ）。

【００４０】この液０.２mlに、８％ＳＤＳ¹⁾水溶液０.
２ml、酢酸緩衝液（ＰＨ３.５）１.５ml及び０.６７％
ＴＢＡ²⁾水溶液１.５mlを加え、沸騰水浴中（９５‐１
００℃）で１時間加熱した。

【００４１】冷後、ブチルアルコール５ｍｌを加え、激
しく振とうした後、遠心分離（２０００ｒｐｍ、１０ｍ
ｉｎ）にてブチルアルコール層を分取し、ブチルアルコ
ール層の５３５nmにおける吸光度を測定した。結果を図
６に示す。

【００４２】註１）ＳＤＳ＝ドデシル硫酸ナトリウム２）ＴＢＡ＝チオバルビツール酸

【００４３】

【実施例５】（脂質可酸化生成物、ＭＤ³⁾及び４ＮＨ
（４−ヒドロキシノネナール）のガスクロマトグラフィ
分析）ミクロソーム及びアラキドン酸７.５ｍｇにα‐トコフ
ェロール０.２２mg又は実施例１で得られた抗酸化活性
物質０.２２mgを加え、これにトリス塩酸緩衝液（０.０
５ＭＴrizma ＨＣl、ＰＨ７.４；０.１５ＭＫＣ
l；０.２％ＳＤＳ）５mlを加え、軽く振り混ぜて懸濁
し、さらにフェントン試液（ＦｅＣl₂、Ｈ₂Ｏ ₂）２００
μlを加え、３７℃にて１６時間反応させた。４％ＢＨ
Ｔ⁴⁾５０μlを加えて、反応を停止させた後、Ｎ‐メチ
ルヒドラジン４０μlを加えて室温にて１時間、Ｎ‐メ
チルヒドロアジン誘導体を生成させ、これに飽和食塩水
１５mlを加え、ジクロロメタン５mlで３時間抽出した。

【００４４】ジクロロメタン層を分取し、一定量のガス
クロマトグラフィ内部標準液（Ｉ．Ｓ．）を加え、さら
にジクロロメタンにて正確に１０mlとしてガスクロマト
グラフィ分析用試料とし、以下の条件下にクロマトグラ
フィーにかけた。

【００４５】キャピラリーカラム：ＤＢ‐ＷＡＸ２５ｍ×０.２５ｍｍカラム温度：３５℃（保持１.０分）─１９０℃（保持２０分）昇温４０℃／分注入口温度：２５０℃ 検出器温度：３００℃ 検出器：ＮＰＤ（nitorogen‐phosphorus detector）キャリア‐ガス：ヘリウム結果を図７〜９に示す。これらのクロマトグラフチャー
トから、イソビテキシンにグルコース分子１個が結合し
た構造を有する本発明の抗酸化活性物質は、ＭＡの生成
のみならず、４ＨＮ（４−ヒドロキシノネナール）の生
成も著しく抑制し、α−トコフエロールよりも強い抗酸
化作用を示すことが明らかとなつた。

【００４６】註）３）ＭＡＤ＝マロンジアルデヒド４）ＢＨＴ−ブチルヒドロキシトルエン

【００４７】

【実施例６】実施例１で得た青汁粉末１００ｇにｎ−ヘ
キサン２.５リツトルを加えて、常温で約５分間撹拌
後、不溶成分を遠心分離（８０００ｒｐｍ、１０ｍｉ
ｎ．）により分離し、更に不溶成分にｎ−ヘキサン２.
５リツトルを加え、同様の操作を繰り返し、ｎ−ヘキサ
ン不溶成分を得た。

【００４８】この不溶成分に含水率２０ｖ／ｖ％のエタ
ノール２.５リツトルを加え、抽出を同様の操作により
繰り返し、得られる含水率２０ｖ／ｖ％のエタノールに
可溶性成分を減圧下にエタノールを留去して、含水率２
０ｖ／ｖ％のエタノールにより抽出される画分を７２ｇ
得た。

【００４９】本画分６０ｇをアンバーライトＸＡＤ−２
カラムに吸着させた後蒸留し、含水率８０、６０、４
０、２０及び０ｖ／ｖ％のメタノールおよびアセトンで
順次流出させた。

【００５０】溶出液を減圧蒸留して溶媒を留去して、水
抽出物２７ｇ、２０％メタノール抽出物１.１ｇ、４０
％メタノール抽出物６８０mg、６０％メタノール抽出物
１.５ｇ、８０％メタノール抽出物１７０mg、アセトン
抽出物５.３mgを得た。これとは別に同様の方法で調製
した６０％メタノール抽出物１.５ｇを再結晶して２’
−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン１.２ｇを得た。

【００５１】β−カロチンを含有する表１および表２に
示す組成のモデルジユースを調製して、ｐＨ３およびｐ
Ｈ５における６０％メタノール抽出物および２’−Ｏ−
グルコシル−イソビテキシンのβ−カロチンに対する抗
酸化活性を水およびビタミンＣを対照として測定した。

【００５２】β−カロチンの定量は、日本薬学会編：衛
生試験法・注解、ｐ３４７〜３４９（１９９０年、金原
出版株式会社）に準拠して行った。

【００５３】

【表１】

【００５４】Ｈ₂Ｏにて１００mlとする。ｐＨは３.０に
調製した。

【００５５】※カロチンベース：三栄化学（株）製

【００５６】

【表２】

【００５７】Ｈ₂Ｏにて１００mlとする。ｐＨは５.０５
に調製した。

【００５８】※カロチンベース：三栄化学（株）製表３および表４に各画分のβ−カロチンに対する抗酸化
活性を示す。反応温度１８℃であつた。

【００５９】

【表３】

【００６０】

【表４】

【００６１】

【実施例７】大麦若葉の緑葉を洗浄した後、搾汁して得
られた青汁を噴霧乾燥、凍結乾燥等の乾燥方法により粉
末化した青汁粉末１０kgをヘキサン２００１にて２回抽
出を繰り返し、ヘキサン不溶部分に水１００１を加えて
水可溶性成分を噴霧乾燥後、３.８kgの噴霧乾燥物を得
た。次いで、本乾燥粉末に含水率２０％の含水エタノー
ル１００１を加えて、含水率２０％の含水エタノール可
溶性成分２.７kgを得、エタノールを留去した。さら
に、これに含水率４０％の含水メタノールを７０リツト
ル加えて、含水率４０％の含水メタノール可溶性成分を
抽出後、メタノールを留去して含水率４０％の含水メタ
ノール可溶性成分２kgを得た。本成分をＡ物質として称
する。得られたＡ物質１００ｇにタルク４００ｇを加え
て懸濁液を調製して、吸気温度１８０℃、排気温度１２
０℃において噴霧乾燥を行い、４７０ｇの粉体原料を製
造した。

【００６２】

【実施例８】実施例７で得られたＡ物質１００ｇにデキ
ストリン４００ｇを添加した溶液を調製して、吸気温度
１９０℃、排気温度１２０℃において、噴霧乾燥して４
３０ｇの粉体原料を得た。

【００６３】

【実施例９】リンデツクス−Ｐ（三楽株式会社）１００
ｇに水３００mlに加えて混和してスラリーを形成させ、
実施例６におけるメタノール分画を段階的に正確に行
い、含水率４０％の含水メタノール画分である物質を分
取して、本物質を含水率４０％の含水タメノールにて再
結晶して得られる２’−Ｏ−グルコシル−イソビテキシ
ン４０ｇを加えて常温で９０分間撹拌後、濃度３０％と
して、吸気温度１７０℃、排気温度１１０℃として噴霧
乾燥を行い、１２７ｇのサイクロデキストリンによる包
接化合物の粉体原料を製造した。

【００６４】

【実施例１０】実施例７で得られたＡ物質１００ｇにカ
オリン２００ｇを混合して、３０％懸濁液を調製して、
吸気温度１７０℃、排気温度１１０℃において噴霧乾燥
して２７０ｇの粉体原料を製造した。

【００６５】

【実施例１１】ケイ酸ナトリウムの４％溶液１００mlの
脱塩後、１％水酸化カリウムでｐＨ９に調節し、その１
５mlを９５℃、１５分間加熱した。次いで、実施例８で
得られた２’−Ｏ−グルコシル−イソビテキシン１０ｇ
を残りのケイ酸ナトリウム溶液８５mlに添加して、逐次
添加を行い、９０℃で８時間濃縮を行い、抗酸化活性物
質を含有する球状シリカを製造した。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は実施例１で得られた２’−Ｏ−グリコシ
ル−イソビテキシンのＦＡＢ−ＭＳ法による測定チヤー
トを示す。

【図２】図２は２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
のＨ₂Ｏ系における紫外部吸収スペクトルである。

【図３】図３は２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
のＭｅＯＨ系における紫外部吸収スペクトルである。

【図４】図４は２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
の赤外線吸収スペクトルである。

【図５】図５は２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
の¹³Ｃ−ＮＭＲの測定結果を示す図である。

【図６】図６は２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
の¹³Ｃ−ＮＭＲの測定結果を示す図である。

【図７】図７は２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
の¹³Ｃ−ＮＭＲの測定結果を示す図である。

【図８】図８は実施例１で得られた各抽出物及びα−ト
コフエロールのＴＢＡ法による過酸化脂質の測定結果
（５３５nmにおける吸光度の測定結果)を示すグラフで
ある。

【図９】図９はフエントン試液を用いるアラキドン酸の
脂質過酸化生成物、ＭＡおよび４ＨＮのガスクロマトグ
ラフチヤートを示す。

【図１０】図１０はフエントン試液を用いるアラキドン
酸の脂質過酸化生成物、ＭＡおよび４ＨＮのガスクロマ
トグラフチヤートを示す。

【図１１】図１１はフエントン試液を用いるアラキドン
酸の脂質過酸化生成物、ＭＡおよび４ＨＮのガスクロマ
トグラフチヤートを示す。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】２’−Ｏ−グリコシル−イソビテキシン
よりなる抗酸化剤。