JPH11193295A

JPH11193295A - β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物

Info

Publication number: JPH11193295A
Application number: JP36688097A
Authority: JP
Inventors: Mani Katorin; マニカトリン; Habsmark Brigitta; ハブスマークブリジッタ; Person Susanna; ペルソンスザンナ; Yuji Kaneda; 祐司金田; Hisao Yamamoto; 久夫山本; Katsukiyo Sakurai; 勝清桜井; Tomoko Ashikari; 智子芦刈; Hiroko Hanebuchi; 弘子羽渕; Akira Suzuki; 旺鈴木; Hiroharu Kimata; 弘治木全
Original assignee: Seikagaku Corp
Current assignee: Seikagaku Corp
Priority date: 1997-12-26
Filing date: 1997-12-26
Publication date: 1999-07-21

Abstract

(57)【要約】（修正有）【課題】ヘパラン硫酸／ヘパリン伸長活性を持ち、ま
た癌化細胞や形質転換細胞に特異的に増殖阻害活性を有
する医薬品として有用な新規なキシロピラノシド系化合
物を提供する。【解決手段】下記一般式（１）で示されるヒドロキシナ
フチル−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なβ-Ｄ-キシロ
ピラノシド系化合物に関するものであり、詳しくは、異
常増殖する癌化細胞などに対し強い細胞増殖阻害作用を
示すヒドロキシナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシド系化
合物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】プロテオグリカンは、コア蛋白質にグリ
コサミノグリカン鎖が結合した生体内高分子物質であ
り、生体内においては、細胞内顆粒、細胞膜表面、ある
いは結合組織や基底膜などの細胞外マトリックスなどに
広く分布している。グリコサミノグリカンはその糖鎖骨
格からコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸系と、ヘパ
ラン硫酸／ヘパリン系に分けられ、それぞれの生理的役
割は大きく異なると考えられている。

【０００３】そして、両系のグリコサミノグリカンの糖
鎖微細構造は、生物種、細胞の型、年齢、解剖学的部位
によって大きく変化し、それぞれが細胞接着、細胞増
殖、細胞分化、細胞相互認識能、腎などの基底膜の蛋白
選別能、血液抗凝固作用などの重要な生理作用に不可欠
な制御因子として働いていると考えられている。しか
し、グリコサミノグリカンのコア蛋白質との結合領域は
全てのプロテオグリカンで共通であり、コア蛋白質のセ
リン残基にβ−結合したＤ−キシロースを還元末端にも
つ４糖（キシロース→ガラクトース→ガラクトース→グ
ルクロン酸）から成っている。

【０００４】また、ヘパリンが血管平滑筋細胞の増殖を
抑制したり、ある種のヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸
がある種の正常線維芽細胞の増殖を抑制することも知ら
れている（J.Cell Physiol.147,523-530,1991）。しか
し、増殖阻害効果を発現する為にはこれらのグリコサミ
ノグリカンを外から多量に添加することが必要とされて
いる。

【０００５】従来、アグリコンとしてp-ニトロフェニル
基等を有するβ-Ｄ-キシロピラノシド系化合物が、コア
蛋白質を介しないグリコサミノグリカン鎖の伸長開始剤
として働き、内在性プロテオグリカンの生合成量を変化
させ、ある種の細胞膜表面の性質を大きく変化させるこ
とが知られている（例えば、J.Biochem.,74,1069-1073,
1973）。このようなことから、フェニル基やアルキル基
等の疎水性アグリコンを持つ各種の両親媒性配糖体を設
計し、これを細胞や生体に投与しプロテオグリカン生合
成を攪乱しようとするアイデアが提案されている（特公
昭63-61308、特公平1-36833、特公平4-25254）。更に、
有機合成的にアグリコン部分を変えた数多くのキシロー
ス誘導体が合成され、グリコサミノグリカンの合成開始
剤として、あるいはプロテオグリカンの生合成攪乱剤と
して使用されている（例えば、Biochem.J.,24,1,591-60
1,1987、特公昭63-60748）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
のアグリコンを有するキシロース誘導体を用いて伸長さ
せたグリコサミノグリカン鎖は、コンドロイチン硫酸や
デルマタン硫酸のみであり、鎖糖骨格が異なるヘパラン
硫酸やヘパリンは全く合成されてこなかった。近年、ア
グリコンをエストラジオールあるいは２−ナフトールの
ような縮合環化合物に置換したβ−Ｄ−キシロピラノシ
ドが、ヘパラン硫酸に対して明らかに合成開始活性を示
すことが見出された（J,Biol.Chem.,266,6674-6677,199
1；Glycobiology,2,492,1992；J,Biol.Chem.,269,300-3
07,1994；WO94/05678）。

【０００７】ところが、これらのβ−Ｄ−キシロピラノ
シドは、その合成開始活性が依然としてヘパラン硫酸よ
りもコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸に対してはる
かに強いものであり、また細胞毒性が強いことや水に対
する溶解性が低く投与濃度が限られるなどの不都合があ
った。更に、これらはある種の細胞株でしかヘパラン硫
酸伸長活性を示さないことも指摘されていた。そこで、
本発明者らはアグリコンの親水性に着目し、アグリコン
の親水性を適度に高くすれば、細胞に対するキシロピラ
ノシドの親和性が変化し、ヘパラン硫酸生合成部位（ゴ
ルジ体）に効率よく到達するとの考察に基づき、親水性
基を導入したアグリコンを用いた化合物について鋭意検
討を加え、水酸基を有する特定のアグリコンを用いたキ
シロピラノシドがヘパラン硫酸伸長活性を示すことを見
出し本発明に達した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、広くヘ
パラン硫酸／ヘパリン伸長活性を持つ医薬品として有用
な新規なβ−Ｄ−キシロピラノシド系化合物を提供する
ことにある。すなわち、本発明の要旨は、下記の一般式
（１）で示されるヒドロキシナフチル−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド系化合物に存する。尚、式中、ｎは１以上の
整数である。

【０００９】

【化１】

【００１０】

【発明の実施の態様】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明化合物は、上記一般式（１）で示されるヒ
ドロキシナフチル−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物
である。上記式中、Ｄ−キシロピラノースとグリコシド
結合しているヒドロキシナフチル基としては、通常、ナ
フタレン環の１位又は２位でグリコシド結合した１−ナ
フチル基または２−ナフチル基であり、そのナフタレン
環の１位〜８位の水素原子のうち少なくとも一つが水酸
基により置換された構造であるが、２−ナフチル基が好
ましい。ナフタレン環に有し得る水酸基の数ｎは１以
上、通常１〜３であるが、１が好ましい。水酸基は、ナ
フタレン環の２個の芳香族環のいずれの環に有していて
もよい。

【００１１】ヒドロキシナフチル基の具体例としては、
例えば６−ヒドロキシ−２−ナフチル、４−ヒドロキシ
−２−ナフチル、８−ヒドロキシ−２−ナフチル、３−
ヒドロキシ−１−ナフチル、５−ヒドロキシ−１−ナフ
チル、７−ヒドロキシ−１−ナフチル等のモノヒドロキ
シナフチル基；４，６−ジヒドロキシ−２−ナフチル、
４，８−ジヒドロキシ−２−ナフチル、６，８−ジヒド
ロキシ−２−ナフチル、３，５−ジヒドロキシ−１−ナ
フチル、３，７−ジヒドロキシ−１−ナフチル、５，７
−ジヒドロキシ−１−ナフチル等のジヒドロキシナフチ
ル基；４，６，８−トリヒドロキシ−２−ナフチル、
３，５，７−トリヒドロキシ−２−ナフチル等のトリヒ
ドロキシナフチル基等が挙げられる。これらのうち、モ
ノヒドロキシナフチル基、特に６−ヒドロキシ−２−ナ
フチル基が好ましい。

【００１２】具体的化合物としては、Ｏ（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシドＯ（４−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシドＯ（８−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシドＯ（３−ヒドロキシ−１−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシドＯ（５−ヒドロキシ−１−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシドＯ（７−ヒドロキシ−１−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド等が挙げられる。

【００１３】本発明の一般式（１）で示されるキシロピ
ラノシド系化合物は、基本的にはそれ自体既知のグリコ
シル化反応方法により合成することができる。例えば、
Ｄ−キシロースの２位、３位および４位の水酸基を無水
酢酸、塩化ベンジル等によりアセチル基あるいはベンジ
ル基などの保護基で保護した後、１位を塩化アルミ、臭
化アルミ等のハロゲン化アルミ或いはフェニルイソシア
ネート等によりハロゲン化あるいはフェニルカルバモイ
ル化して活性化する。すなわち、ハロゲン、フェニルカ
ルバモイル等の脱離基を導入する。これに２個以上の水
酸基を有するナフタレンの１個の水酸基を除いた他の水
酸基がベンゾイル基等の保護基で保護されているナフタ
レンを反応させ、その後保護基を除去することにより目
的化合物を得ることができる。保護基の除去は常法に従
い二工程で行われ、例えばナフタレン環のベンゾイル基
をソディウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）により、更にキ
シロピラノース環のベンジル基を接触水素添加により脱
離させることができる。グリコシル化反応は、キシロー
スの保護基あるいは脱離基の種類、ナフタレン環の水酸
基数、保護基の種類等による求核性の程度、更には反応
剤、溶媒等によって影響される場合があるので、使用す
るキシロース、およびヒドロキシ置換ナフトールの種類
に応じて、最適反応条件を適宜実験的に確認し、選定し
て行うのが好ましい。この様にして得られた反応生成物
は、メタノール等から結晶化させる再結晶法、或いはク
ロマトグラフィー法等の慣用的な精製法により精製する
ことができる。

【００１４】本発明の上記一般式（１）で示されるヒド
ロキシナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシド（以下、Xyl-N
apOHと略記することもある。）系化合物は、後記試験例
で示すように細胞増殖阻害作用を示し、特に形質転換細
胞や癌化細胞に対し顕著な効果を呈する。また、本発明
化合物Xyl-NapOHは、コンドロイチン硫酸／デルマタン
硫酸鎖の伸長ばかりでなく、広くヘパラン硫酸鎖の伸長
活性を示す。そして、その細胞増殖抑制作用とヘパラン
硫酸鎖伸長作用の最適濃度域は一致している。更に、コ
ンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖にしか伸長活性を
示さない公知のＯｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−キシ
ロピラノシド及び全くグリコサミノグリカン伸長活性を
示さないＯヒドロキシナフチル-β-Ｌ-キシロピラノシ
ドは細胞増殖に対し全く影響を及ぼさなかった。また、
公知のＯ２−ナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシドは、Ｃ
ＨＯ細胞ではヘパラン硫酸伸長活性をもつ（J.Biol.Che
m.,269,300-307,1994）が、これら形質転換細胞や癌化
細胞に対してはヘパラン硫酸伸長活性や細胞増殖抑制活
性は示さなかった。

【００１５】ヘパラン硫酸の機能として成長因子の安定
化およびその活性の調節が挙げられるが、これはヘパラ
ン硫酸生合成が巧みに細胞増殖を操作することを意味し
ている。形質転換細胞や癌化細胞が正常細胞に比べ、本
発明のXyl-NapOHに対し、より感受性が高く数倍も激し
く増殖阻害効果が現れた理由は、Xyl-NapOHが成長に必
須な内因性のヘパラン硫酸−プロテオグリカンの生合成
を抑制し、成長因子受容体からのシグナル伝達を妨害す
る作用を持つか、あるいはキシロシドから伸長したヘパ
ラン硫酸鎖が直接内因性ヘパラン硫酸−プロテオグリカ
ンの生合成に拮抗し、細胞増殖を抑制する作用をもつも
のと推察される。いずれにしても本発明のXyl-NapOHは
今まで考えられなかった機序で抗増殖作用を持つヘパラ
ン硫酸バリアントを生産すると考えられる。それがオー
トクライン機構で自己増殖する形質転換細胞や癌細胞に
対して特に顕著な増殖阻害効果を示すと思われる。

【００１６】この様に本発明のXyl-NapOHはヒトを含む
多くの動物細胞に対しヘパラン硫酸鎖伸長作用を有す
る。そして、正常細胞に対してはあまり強い細胞増殖抑
制作用は示さずに、異常増殖する癌化細胞などに選択的
な強い細胞増殖阻害作用を示すことが明らかになった。
このことは異常部位にのみ作用する安全性の高い医薬品
となる可能性が期待されることを示唆している。従っ
て、例えば、癌抑制剤、あるいは細胞の異常増殖に起因
する疾患、例えば血管平滑筋細胞の増殖によって起こる
動脈硬化、血管閉塞、あるいは関節滑膜細胞や免疫細胞
の異常増殖によって引き起こされる慢性滑膜リウマチや
白血病の憎悪、肉腫の増殖などを抑制する薬剤としての
効果が期待されるのである。

【００１７】

【発明の効果】本発明化合物の上記一般式（１）で示さ
れるヒドロキシナフチル基を有するβ−Ｄ−キシロピラ
ノシドは、既知のＯ２−ナフチル−β−Ｄ−キシロピ
ラノシドがヘパラン硫酸生合成開始活性を持たない細胞
種に対してもヘパラン硫酸を伸長させ得る活性を有す
る。しかも、本発明化合物は癌化細胞および形質転換さ
せた細胞に選択的に増殖阻害活性を持ち、正常細胞には
増殖に影響を与えない特性を有するので、この特性に基
づく医薬としての有用性が期待されるのである。

【００１８】

【実施例】以下、実施例及び試験例を示して、本発明を
更に詳しく説明するが、本発明はその要旨を越えない限
り、これらに限定されるものではない。

【００１９】実施例１キシロピラノシド類の合成 (1) O (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-D-キシロヒ゜ラノシト゛（D-Xyl-Na
p(6)OH）の合成 2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-D-キシロヒ゜ラノースとフェニルイソシアネートから得ら
れる2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-1-O-フェニルカルハ゛モイル-β-D-キシロヒ゜ラノ
ース（2.3ｇ；4.3mmol）と2,6-シ゛ヒト゛ロキシナフタレンモノヘ゛ンソ゛エート
（1.15ｇ；4.36mmol）をモレキュラーシーフ゛ス゛4A（3ｇ）が入っ
たシ゛クロロメタン中に添加した。室温で１時間撹拌後、これに
窒素雰囲気下０℃でトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（0.85m
l，1.03eq.）を滴下した。そのまま1.5時間撹拌した
後、その混液を濾過し、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム
水溶液及び水で洗浄し、MgSO₄で脱水した。溶媒を減圧
留去後、エタノールから再結晶し、O (6-O-ヘ゛ンソ゛イル-2-ナ
フチル)-2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-β-D-キシロヒ゜ラノシト゛(1.27ｇ；収
率４５％)を得た。常法により２工程で保護基の脱離を
行い、目的のO (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-D-キシロヒ゜ラノシト゛（3
80mg；収率６３％）を得た。核磁気共鳴スペクトル：¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)でδ_H(pp
m)＝7.53-6.92(m,6H,aromatic-H),4.83(d,1HJ_1.2＝7.3H
z,H-1),3.85(dd,1HJ_5eq,4=4.9Hz,J_5eq,5ax=11.2Hz,H-5e
q),3.52-3.27(m,4H). 旋光度：-25.8°（ｃ＝0.1；CH₃OH）,融点：２４０℃
（分解点）。

【００２０】(2) O (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-L-キシロヒ゜ラノシ
ト゛（L-Xyl-Nap(6)OH）の合成 2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-L-キシロヒ゜ラノースとフェニルイソシアネートから得ら
れる2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-1-O-フェニルカルハ゛モイル-β-L-キシロヒ゜ラノ
ース（2.04ｇ；3.78mmol）と2,6-シ゛ヒト゛ロキシナフタレンモノヘ゛ンソ゛エー
ト（1.0ｇ；3.78mmol）をモレキュラーシーフ゛ス゛4A（3ｇ）が入っ
たシ゛クロロメタン中に添加した。室温で２時間撹拌後、窒素雰
囲気下-78℃に冷却し、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（0.75
ml，1.0eq.）を滴下した。そのまま１８時間-78℃で撹
拌した後、室温に戻しその混液を濾過し、濾液を飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄し、MgSO₄で脱水
した。溶媒を減圧留去後、メタノールから再結晶し、O
(6-O-ヘ゛ンソ゛イル-2-ナフチル)-2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-β-L-キシロヒ゜ラ
ノシト゛(1.42ｇ；収率５６％)を得た。常法により２工程で
保護基の脱離を行い、目的のO (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-L
-キシロヒ゜ラノシト゛（522mg；収率７８％）を得た。核磁気共鳴スペクトル：¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)でδ_H(pp
m)＝7.53-6.93(m,6H,aromatic-H),4.84(d,1HJ_1.2＝7.3H
z,H-1),3.86(dd,1HJ_5eq,4=4.9Hz,J_5eq,5ax=11.2Hz,H-5e
q),3.51-3.25(m,4H). 旋光度：+25.7°（ｃ＝0.1；CD₃OD）,融点：２４０℃
（分解点）。

【００２１】(3) その他のキシロピラノシド系化合物
の合成 Fritzらの方法（J.Biol.Chem.,269，300-307,1994）に
準じて、Ｏ２−ナフチル−β−Ｄ−キシロピラノシド
（Xyl-Nap）、Ｏｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド（Xyl-PheNO₂）の合成を行った。

【００２２】試験例１キシロピラノシド系化合物による細胞増殖への影響ヒトを含む各種正常及び癌化培養細胞（ヒト肺線維芽細
胞、ヒト肺カルシノーマ細胞、マウス３Ｔ３線維芽細
胞、ＳＶ−４０形質転換３Ｔ３細胞、ヒト臍帯静脈内皮
細胞、及びヒト臍帯静脈形質転換内皮細胞）をトリプシ
ンで剥がして集め、インスリン（10ng/ml）とトランス
フェリン（25ng/ml）および10%ウシ胎児血清を含むF-12
培地（シグマ）中に懸濁した。その3000-5000細胞ずつ
を96-穴マイクロ培養皿に移植して、４時間培養後、血
清を枯渇させて２４時間培養した。その後、各種濃度の
上記実施例１で合成したＯ（６−ヒドロキシ−２−ナフ
チル）-β-Ｄ-キシロピラノシド（D-Xyl-Nap(6)OH）ま
たは他のキシロピラノシド化合物の存在下、10ng/mlの
上皮細胞成長因子（EGF；Genzyme，Cambridge，MA）を
添加して細胞を成長させた。ただし、ヒト臍帯静脈内皮
細胞は２０％ヒト血清を加えて成長させた。

【００２３】なお、コントロールとして成長因子無添加
の培養と、キシロピラノシドを溶解するのに使用した溶
媒（ジメチルスルホキシド：DMSO）を検体と同じ濃度で
添加した培養も行った。７２、９６、そして１２０時間
培養後、細胞をグルタールアルデヒドで固定し、細胞の
核をクリスタルバイオレット（Merck，Darmstadt,FRG）
で染色した。過剰の染料を洗い流した後、TritonＸ-100
（Rohm & Haas社）溶液で２４時間処理して、固定細胞
を溶解させ、細胞に結合した染料の量をマイクロプレー
トリーダ（Titertek multiscan）により600nmの吸光度
で測定することにより、細胞数を測定した。結果はDMSO
の影響を補正して算出した。

【００２４】それらの結果を図１〜図３に示す。多くの
細胞はD-Xyl-Nap(6)OHの存在下、用量依存的に増殖が抑
制された。しかし、形質転換した細胞や癌細胞は正常細
胞に比べキシロピラノシドに対する感受性が高く、より
強く阻害作用を受けた。例えば、９６時間の処理でのＥ
Ｄ₅₀値で比較すると、ヒト肺由来カルシノーマ細胞は正
常ヒト肺線維芽細胞に比べ３〜４倍感受性が高かった
（図１：１-ａおよび１-ｂ）。また、ＳＶ−４０形質転
換３Ｔ３細胞は、転換前の３Ｔ３細胞よりも６〜７倍感
受性が高かった（図２：１-ｃおよび１-ｄ）。臍帯静脈
由来内皮細胞は非常に低い濃度のキシロピラノシドにお
いて増殖率の減少がみられたが、高濃度になってもそれ
ほど増殖率の低下は起こらなかった（図３：１-ｅ）。
これに対し、形質転換した臍帯静脈内皮細胞では３倍も
感受性が高い結果であった（図３：１-ｆ）。全般的
に、９６時間0.15-0.2mMのD-Xyl-Nap(6)OHにさらした後
では、形質転換細胞は完全に増殖を阻害されたのに対
し、正常細胞は５０％或いはそれ以下の阻害作用を受け
ただけであった。

【００２５】立体異性体であるＯ（６−ヒドロキシ−２
−ナフチル）-β-Ｌ-キシロシド（L-Xyl-Nap(6)OH）で
処理しても、ヒト肺線維芽細胞（図４：２-ａ）や肺カ
ルシノーマ細胞（図４：２-ｂ）共に全く増殖阻害効果
はなかった。また、水酸基がついていないＯナフチル-
β-Ｄ-キシロピラノシドの９６時間の暴露により、肺線
維芽細胞（図５：２-ｃ）、肺カルシノーマ細胞（図
５：２-ｄ）及び他の細胞（図示せず）に対しても成長
になんら影響を及ぼさなかった。また、公知のナフチル
チオキシロピラノシド（図示せず）やＯｐ−ニトロフ
ェニル-β-Ｄ-キシロピラノシドも同様な濃度範囲内で
全く増殖阻害は起こさなかった（図６：２-ｅ及び２-
ｆ）。

【００２６】試験例２キシロピラノシド系化合物によるヘパラン硫酸伸長活性試験例１で使用した各種細胞をラベル用培地（ＭｇＳＯ
₄をＭｇＣｌ₂に置き換えた低硫酸含有培地）に変え、１
時間前培養した後、５０μCi/mlの［³⁵Ｓ］硫酸と各種
濃度のキシロシド化合物を含んだ新鮮な培地に交換し
た。５時間から２４時間培養後、培養液を採取し、DEAE
セルロースのイオン交換クロマトグラフィーにより［³⁵
Ｓ］でラベルされたポリアニオニック高分子物質を分離
した。更にオクチル−セファロースの疎水結合クロマト
グラフィーにより遊離のグリコサミノグリカンとプロテ
オグリカンを分離した。

【００２７】細胞表面に結合しているキシロシドから伸
長したグリコサミノグリカンやプロテオグリカンは、ヘ
パリン含有リン酸緩衝液（100μgヘハ゜リン／ml）を１ｃｍ²
あたり0.2mlで処理して遊離させた。細胞内に残った物
質は４Ｍグアニジン塩酸および２％ TritonＸ−100で
抽出した。グリコサミノグリカンやプロテオグリカン鎖
は、コンドロイチナーゼＡＢＣ（生化学工業（株）製）
によるコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖の分解の
前後で、４Ｍグアニジン塩酸／50mM 酢酸ナトリウム:NaOAc
（pH5.8）／0.2% Triton-X-100中のSuperose 6HR 10/
30によるクロマトグラフィーを行った。コンドロイチナ
ーゼＡＢＣによる分解は、0.1Mトリス塩酸／10mM EDTA（p
H5.8）を緩衝液として、１mlあたり３ｍＵの酵素を使
い、３７℃で一晩作用させた。

【００２８】正常ヒト肺線維芽細胞がＯ（６−ヒドロ
キシ−２−ナフチル）-β-D-キシロピラノシド（D-Xyl-
Nap(6)OH）により伸長させ培地に分泌したグリコサミノ
グリカン鎖は、Superose 6HR 10/30のクロマトグラフ
ィーにより、高分子（ピークI）、中間サイズ（ピークI
I）、通常サイズ（ピークIII）に分けられた（図７：実
線）。ピークIIIの通常サイズのグリコサミノグリカン
はコンドロイチナーゼＡＢＣ消化で分解されることか
ら、コンドロイチン硫酸或いはデルマタン硫酸であるこ
とが判る。それに対し、ピークＩとピークIIの大部分は
コンドロイチナーゼＡＢＣ消化には抵抗性であり、ヘパ
リチナーゼにより分解されるのでヘパラン硫酸鎖である
（図７：破線）。

【００２９】D-Xyl-Nap(6)OHの立体異性体であるＯ
（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）-β-Ｌ-キシロピラ
ノシド（L-Xyl-Nap(6)OH）は調べた限りの全ての細胞で
全くグリコサミノグリカン伸長活性は持たなかった。更
に、ヒドロキシル基を有しないＯ２−ナフチル-β-Ｄ-
キシロピラノシド（Xyl-Nap）は、ＣＨＯ細胞（チャイ
ニーズハムスター卵母細胞）においては、コンドロイチ
ン硫酸／デルマタン硫酸鎖のみではなく、ヘパラン硫酸
鎖も伸長する（Fritz,T.A.et al.,J.Biol.Chem.269，30
0-307，1994）が、それにもかかわらず、ヒト肺線維芽
細胞はじめ今回調べた限りの正常及び癌化細胞に対して
は、コンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖の伸長作用
はあっても、ヘパラン硫酸鎖の伸長作用はほとんど見ら
れなかった。Ｏｐ−ニトロフェニル-β-Ｄ-キシロピラ
ノシド（Xyl-PheNO₂）も通常言われているように、コン
ドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖の伸長作用のみを示
した。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１中、１-ａはD-Xyl-Nap(6)OHの増殖に対
する影響をヒト肺線維芽細胞について調べたものであ
り、１-ｂはヒト肺カルシノーマ細胞で調べたものであ
る。図中、縦軸は細胞増殖率（％）を、横軸はD-Xyl-Na
p(6)OH濃度（ｍＭ）を表す。

【図２】図２中、１-ｃはD-Xyl-Nap(6)OHの増殖に対
する影響をマウス３Ｔ３線維芽細胞で、１-ｄはＳＶ−
４０で形質転換したマウス３Ｔ３細胞で調べたものであ
る。図中、縦軸は細胞増殖率（％）を、横軸はD-Xyl-Na
p(6)OH濃度（ｍＭ）を表す。

【図３】図３中、１-ｅはD-Xyl-Nap(6)OHの増殖に対
する影響をヒト臍帯静脈内皮細胞で、１-ｆはヒト臍帯
静脈形質転換内皮細胞で調べたものである。図中、縦軸
は細胞増殖率（％）を、横軸はD-Xyl-Nap(6)OH濃度（ｍ
Ｍ）を表す。

【図４】図４中、２-ａと２-ｂはＯ（６−ヒドロキシ
−２−ナフチル）-β-Ｌ-キシロピラノシドの増殖に対
する影響をヒト肺線維芽細胞（a）及びヒト肺カルシノ
ーマ細胞（b）について調べたものである。図中、縦軸
は細胞増殖率（％）を、横軸はキシロピラノシド濃度
（ｍＭ）を表す。

【図５】図５中、２-ｃと２-ｄはＯ２−ナフチル-β
-Ｄ-キシロピラノシドの増殖に対する影響をヒト肺線維
芽細胞（c）及びヒト肺カルシノーマ細胞（d）について
調べたものである。図中、縦軸は細胞増殖率（％）を、
横軸はキシロピラノシド濃度（ｍＭ）を表す。

【図６】図６中、２-ｅと２-ｆはＯ p-ニトロフェニ
ル-β-D-キシロピラノシドの増殖に対する影響をヒト肺
線維芽細胞（e）及びヒト肺カルシノーマ細胞（f）につ
いて調べたものである。図中、縦軸は細胞増殖率（％）
を、横軸はキシロピラノシド濃度（ｍＭ）を表す。

【図７】図７は0.1mMのD-Xyl-Nap(6)OHで５時間処理
して得られたヒト肺線維芽細胞分泌培養液中の［³⁵Ｓ］
ラベルされたグリコサミノグリカンのSuperose6HRによ
るゲル濾過クロマトグラフィーである。図中、実線
（−）はコンドロイチナーゼＡＢＣの処理前、破線（・・
・）は処理後の［³⁵Ｓ］パターンである。また、横軸
は、分画番号を表し、縦軸は［³⁵Ｓ］の放射線活性（dm
p×10^-2）を表す。なお図中、Ｖoは排除体積を、Ｖtは
カラム体積を表す。

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Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記一般式（１）で示されるヒドロキシ
ナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシド系化合物。【化１】（式中、ｎは１以上の整数である。）
【請求項２】一般式（１）において、ｎが１であるこ
とを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項３】一般式（１）で示される化合物が、Ｏ
（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロピ
ラノシドであることを特徴とする請求項１記載の化合
物。