JPH11193295A - β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 （修正有） 【課題】 ヘパラン硫酸／ヘパリン伸長活性を持ち、ま
た癌化細胞や形質転換細胞に特異的に増殖阻害活性を有
する医薬品として有用な新規なキシロピラノシド系化合
物を提供する。 【解決手段】下記一般式（１）で示されるヒドロキシナ
フチル−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は新規なβ-Ｄ-キシロ
ピラノシド系化合物に関するものであり、詳しくは、異
常増殖する癌化細胞などに対し強い細胞増殖阻害作用を
示すヒドロキシナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシド系化
合物に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】プロテオグリカンは、コア蛋白質にグリ
コサミノグリカン鎖が結合した生体内高分子物質であ
り、生体内においては、細胞内顆粒、細胞膜表面、ある
いは結合組織や基底膜などの細胞外マトリックスなどに
広く分布している。グリコサミノグリカンはその糖鎖骨
格からコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸系と、ヘパ
ラン硫酸／ヘパリン系に分けられ、それぞれの生理的役
割は大きく異なると考えられている。

【０００３】そして、両系のグリコサミノグリカンの糖
鎖微細構造は、生物種、細胞の型、年齢、解剖学的部位
によって大きく変化し、それぞれが細胞接着、細胞増
殖、細胞分化、細胞相互認識能、腎などの基底膜の蛋白
選別能、血液抗凝固作用などの重要な生理作用に不可欠
な制御因子として働いていると考えられている。しか
し、グリコサミノグリカンのコア蛋白質との結合領域は
全てのプロテオグリカンで共通であり、コア蛋白質のセ
リン残基にβ−結合したＤ−キシロースを還元末端にも
つ４糖（キシロース→ガラクトース→ガラクトース→グ
ルクロン酸）から成っている。

【０００４】また、ヘパリンが血管平滑筋細胞の増殖を
抑制したり、ある種のヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸
がある種の正常線維芽細胞の増殖を抑制することも知ら
れている（J.Cell Physiol.147,523-530,1991）。しか
し、増殖阻害効果を発現する為にはこれらのグリコサミ
ノグリカンを外から多量に添加することが必要とされて
いる。

【０００５】従来、アグリコンとしてp-ニトロフェニル
基等を有するβ-Ｄ-キシロピラノシド系化合物が、コア
蛋白質を介しないグリコサミノグリカン鎖の伸長開始剤
として働き、内在性プロテオグリカンの生合成量を変化
させ、ある種の細胞膜表面の性質を大きく変化させるこ
とが知られている（例えば、J.Biochem.,74,1069-1073,
1973）。このようなことから、フェニル基やアルキル基
等の疎水性アグリコンを持つ各種の両親媒性配糖体を設
計し、これを細胞や生体に投与しプロテオグリカン生合
成を攪乱しようとするアイデアが提案されている（特公
昭63-61308、特公平1-36833、特公平4-25254）。更に、
有機合成的にアグリコン部分を変えた数多くのキシロー
ス誘導体が合成され、グリコサミノグリカンの合成開始
剤として、あるいはプロテオグリカンの生合成攪乱剤と
して使用されている（例えば、Biochem.J.,24,1,591-60
1,1987、特公昭63-60748）。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
のアグリコンを有するキシロース誘導体を用いて伸長さ
せたグリコサミノグリカン鎖は、コンドロイチン硫酸や
デルマタン硫酸のみであり、鎖糖骨格が異なるヘパラン
硫酸やヘパリンは全く合成されてこなかった。近年、ア
グリコンをエストラジオールあるいは２−ナフトールの
ような縮合環化合物に置換したβ−Ｄ−キシロピラノシ
ドが、ヘパラン硫酸に対して明らかに合成開始活性を示
すことが見出された（J,Biol.Chem.,266,6674-6677,199
1；Glycobiology,2,492,1992；J,Biol.Chem.,269,300-3
07,1994；WO94/05678）。

【０００７】ところが、これらのβ−Ｄ−キシロピラノ
シドは、その合成開始活性が依然としてヘパラン硫酸よ
りもコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸に対してはる
かに強いものであり、また細胞毒性が強いことや水に対
する溶解性が低く投与濃度が限られるなどの不都合があ
った。更に、これらはある種の細胞株でしかヘパラン硫
酸伸長活性を示さないことも指摘されていた。そこで、
本発明者らはアグリコンの親水性に着目し、アグリコン
の親水性を適度に高くすれば、細胞に対するキシロピラ
ノシドの親和性が変化し、ヘパラン硫酸生合成部位（ゴ
ルジ体）に効率よく到達するとの考察に基づき、親水性
基を導入したアグリコンを用いた化合物について鋭意検
討を加え、水酸基を有する特定のアグリコンを用いたキ
シロピラノシドがヘパラン硫酸伸長活性を示すことを見
出し本発明に達した。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明の目的は、広くヘ
パラン硫酸／ヘパリン伸長活性を持つ医薬品として有用
な新規なβ−Ｄ−キシロピラノシド系化合物を提供する
ことにある。すなわち、本発明の要旨は、下記の一般式
（１）で示されるヒドロキシナフチル−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド系化合物に存する。尚、式中、ｎは１以上の
整数である。

【０００９】

【化１】

【００１０】

【発明の実施の態様】以下、本発明について詳細に説明
する。本発明化合物は、上記一般式（１）で示されるヒ
ドロキシナフチル−β−Ｄ−キシロピラノシド系化合物
である。上記式中、Ｄ−キシロピラノースとグリコシド
結合しているヒドロキシナフチル基としては、通常、ナ
フタレン環の１位又は２位でグリコシド結合した１−ナ
フチル基または２−ナフチル基であり、そのナフタレン
環の１位〜８位の水素原子のうち少なくとも一つが水酸
基により置換された構造であるが、２−ナフチル基が好
ましい。ナフタレン環に有し得る水酸基の数ｎは１以
上、通常１〜３であるが、１が好ましい。水酸基は、ナ
フタレン環の２個の芳香族環のいずれの環に有していて
もよい。

【００１１】ヒドロキシナフチル基の具体例としては、
例えば６−ヒドロキシ−２−ナフチル、４−ヒドロキシ
−２−ナフチル、８−ヒドロキシ−２−ナフチル、３−
ヒドロキシ−１−ナフチル、５−ヒドロキシ−１−ナフ
チル、７−ヒドロキシ−１−ナフチル等のモノヒドロキ
シナフチル基；４，６−ジヒドロキシ−２−ナフチル、
４，８−ジヒドロキシ−２−ナフチル、６，８−ジヒド
ロキシ−２−ナフチル、３，５−ジヒドロキシ−１−ナ
フチル、３，７−ジヒドロキシ−１−ナフチル、５，７
−ジヒドロキシ−１−ナフチル等のジヒドロキシナフチ
ル基；４，６，８−トリヒドロキシ−２−ナフチル、
３，５，７−トリヒドロキシ−２−ナフチル等のトリヒ
ドロキシナフチル基等が挙げられる。これらのうち、モ
ノヒドロキシナフチル基、特に６−ヒドロキシ−２−ナ
フチル基が好ましい。

【００１２】具体的化合物としては、 Ｏ（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド Ｏ（４−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド Ｏ（８−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド Ｏ（３−ヒドロキシ−１−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド Ｏ（５−ヒドロキシ−１−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド Ｏ（７−ヒドロキシ−１−ナフチル）−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド 等が挙げられる。

【００１３】本発明の一般式（１）で示されるキシロピ
ラノシド系化合物は、基本的にはそれ自体既知のグリコ
シル化反応方法により合成することができる。例えば、
Ｄ−キシロースの２位、３位および４位の水酸基を無水
酢酸、塩化ベンジル等によりアセチル基あるいはベンジ
ル基などの保護基で保護した後、１位を塩化アルミ、臭
化アルミ等のハロゲン化アルミ或いはフェニルイソシア
ネート等によりハロゲン化あるいはフェニルカルバモイ
ル化して活性化する。すなわち、ハロゲン、フェニルカ
ルバモイル等の脱離基を導入する。これに２個以上の水
酸基を有するナフタレンの１個の水酸基を除いた他の水
酸基がベンゾイル基等の保護基で保護されているナフタ
レンを反応させ、その後保護基を除去することにより目
的化合物を得ることができる。保護基の除去は常法に従
い二工程で行われ、例えばナフタレン環のベンゾイル基
をソディウムメトキシド（ＮａＯＭｅ）により、更にキ
シロピラノース環のベンジル基を接触水素添加により脱
離させることができる。グリコシル化反応は、キシロー
スの保護基あるいは脱離基の種類、ナフタレン環の水酸
基数、保護基の種類等による求核性の程度、更には反応
剤、溶媒等によって影響される場合があるので、使用す
るキシロース、およびヒドロキシ置換ナフトールの種類
に応じて、最適反応条件を適宜実験的に確認し、選定し
て行うのが好ましい。この様にして得られた反応生成物
は、メタノール等から結晶化させる再結晶法、或いはク
ロマトグラフィー法等の慣用的な精製法により精製する
ことができる。

【００１４】本発明の上記一般式（１）で示されるヒド
ロキシナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシド（以下、Xyl-N
apOHと略記することもある。）系化合物は、後記試験例
で示すように細胞増殖阻害作用を示し、特に形質転換細
胞や癌化細胞に対し顕著な効果を呈する。また、本発明
化合物Xyl-NapOHは、コンドロイチン硫酸／デルマタン
硫酸鎖の伸長ばかりでなく、広くヘパラン硫酸鎖の伸長
活性を示す。そして、その細胞増殖抑制作用とヘパラン
硫酸鎖伸長作用の最適濃度域は一致している。更に、コ
ンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖にしか伸長活性を
示さない公知のＯ ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−キシ
ロピラノシド及び全くグリコサミノグリカン伸長活性を
示さないＯ ヒドロキシナフチル-β-Ｌ-キシロピラノシ
ドは細胞増殖に対し全く影響を及ぼさなかった。また、
公知のＯ ２−ナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシドは、Ｃ
ＨＯ細胞ではヘパラン硫酸伸長活性をもつ（J.Biol.Che
m.,269,300-307,1994）が、これら形質転換細胞や癌化
細胞に対してはヘパラン硫酸伸長活性や細胞増殖抑制活
性は示さなかった。

【００１５】ヘパラン硫酸の機能として成長因子の安定
化およびその活性の調節が挙げられるが、これはヘパラ
ン硫酸生合成が巧みに細胞増殖を操作することを意味し
ている。形質転換細胞や癌化細胞が正常細胞に比べ、本
発明のXyl-NapOHに対し、より感受性が高く数倍も激し
く増殖阻害効果が現れた理由は、Xyl-NapOHが成長に必
須な内因性のヘパラン硫酸−プロテオグリカンの生合成
を抑制し、成長因子受容体からのシグナル伝達を妨害す
る作用を持つか、あるいはキシロシドから伸長したヘパ
ラン硫酸鎖が直接内因性ヘパラン硫酸−プロテオグリカ
ンの生合成に拮抗し、細胞増殖を抑制する作用をもつも
のと推察される。いずれにしても本発明のXyl-NapOHは
今まで考えられなかった機序で抗増殖作用を持つヘパラ
ン硫酸バリアントを生産すると考えられる。それがオー
トクライン機構で自己増殖する形質転換細胞や癌細胞に
対して特に顕著な増殖阻害効果を示すと思われる。

【００１６】この様に本発明のXyl-NapOHはヒトを含む
多くの動物細胞に対しヘパラン硫酸鎖伸長作用を有す
る。そして、正常細胞に対してはあまり強い細胞増殖抑
制作用は示さずに、異常増殖する癌化細胞などに選択的
な強い細胞増殖阻害作用を示すことが明らかになった。
このことは異常部位にのみ作用する安全性の高い医薬品
となる可能性が期待されることを示唆している。従っ
て、例えば、癌抑制剤、あるいは細胞の異常増殖に起因
する疾患、例えば血管平滑筋細胞の増殖によって起こる
動脈硬化、血管閉塞、あるいは関節滑膜細胞や免疫細胞
の異常増殖によって引き起こされる慢性滑膜リウマチや
白血病の憎悪、肉腫の増殖などを抑制する薬剤としての
効果が期待されるのである。

【００１７】

【発明の効果】本発明化合物の上記一般式（１）で示さ
れるヒドロキシナフチル基を有するβ−Ｄ−キシロピラ
ノシドは、既知のＯ ２−ナフチル−β−Ｄ−キシロピ
ラノシドがヘパラン硫酸生合成開始活性を持たない細胞
種に対してもヘパラン硫酸を伸長させ得る活性を有す
る。しかも、本発明化合物は癌化細胞および形質転換さ
せた細胞に選択的に増殖阻害活性を持ち、正常細胞には
増殖に影響を与えない特性を有するので、この特性に基
づく医薬としての有用性が期待されるのである。

【００１８】

【実施例】以下、実施例及び試験例を示して、本発明を
更に詳しく説明するが、本発明はその要旨を越えない限
り、これらに限定されるものではない。

【００１９】実施例１ キシロピラノシド類の合成 (1) O (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-D-キシロヒ゜ラノシト゛（D-Xyl-Na
p(6)OH）の合成 2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-D-キシロヒ゜ラノースとフェニルイソシアネートから得ら
れる2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-1-O-フェニルカルハ゛モイル-β-D-キシロヒ゜ラノ
ース（2.3ｇ；4.3mmol）と2,6-シ゛ヒト゛ロキシナフタレンモノヘ゛ンソ゛エート
（1.15ｇ；4.36mmol）をモレキュラーシーフ゛ス゛4A（3ｇ）が入っ
たシ゛クロロメタン中に添加した。室温で１時間撹拌後、これに
窒素雰囲気下０℃でトリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（0.85m
l，1.03eq.）を滴下した。そのまま1.5時間撹拌した
後、その混液を濾過し、濾液を飽和炭酸水素ナトリウム
水溶液及び水で洗浄し、MgSO₄で脱水した。溶媒を減圧
留去後、エタノールから再結晶し、O (6-O-ヘ゛ンソ゛イル-2-ナ
フチル)-2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-β-D-キシロヒ゜ラノシト゛(1.27ｇ；収
率４５％)を得た。常法により２工程で保護基の脱離を
行い、目的のO (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-D-キシロヒ゜ラノシト゛（3
80mg；収率６３％）を得た。 核磁気共鳴スペクトル：¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)でδ_H(pp
m)＝7.53-6.92(m,6H,aromatic-H),4.83(d,1HJ_1.2＝7.3H
z,H-1),3.85(dd,1HJ_5eq,4=4.9Hz,J_5eq,5ax=11.2Hz,H-5e
q),3.52-3.27(m,4H). 旋光度：-25.8°（ｃ＝0.1；CH₃OH）,融点：２４０℃
（分解点）。

【００２０】(2) O (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-L-キシロヒ゜ラノシ
ト゛（L-Xyl-Nap(6)OH）の合成 2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-L-キシロヒ゜ラノースとフェニルイソシアネートから得ら
れる2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-1-O-フェニルカルハ゛モイル-β-L-キシロヒ゜ラノ
ース（2.04ｇ；3.78mmol）と2,6-シ゛ヒト゛ロキシナフタレンモノヘ゛ンソ゛エー
ト（1.0ｇ；3.78mmol）をモレキュラーシーフ゛ス゛4A（3ｇ）が入っ
たシ゛クロロメタン中に添加した。室温で２時間撹拌後、窒素雰
囲気下-78℃に冷却し、トリメチルシリルトリフルオロメタンスルホネート（0.75
ml，1.0eq.）を滴下した。そのまま１８時間-78℃で撹
拌した後、室温に戻しその混液を濾過し、濾液を飽和炭
酸水素ナトリウム水溶液及び水で洗浄し、MgSO₄で脱水
した。溶媒を減圧留去後、メタノールから再結晶し、O
(6-O-ヘ゛ンソ゛イル-2-ナフチル)-2,3,4-トリ-O-ヘ゛ンシ゛ル-β-L-キシロヒ゜ラ
ノシト゛(1.42ｇ；収率５６％)を得た。常法により２工程で
保護基の脱離を行い、目的のO (6-ヒト゛ロキシ-2-ナフチル)-β-L
-キシロヒ゜ラノシト゛（522mg；収率７８％）を得た。 核磁気共鳴スペクトル：¹H-NMR(400MHz,CD₃OD)でδ_H(pp
m)＝7.53-6.93(m,6H,aromatic-H),4.84(d,1HJ_1.2＝7.3H
z,H-1),3.86(dd,1HJ_5eq,4=4.9Hz,J_5eq,5ax=11.2Hz,H-5e
q),3.51-3.25(m,4H). 旋光度：+25.7°（ｃ＝0.1；CD₃OD）,融点：２４０℃
（分解点）。

【００２１】(3) その他のキシロピラノシド系化合物
の合成 Fritzらの方法（J.Biol.Chem.,269，300-307,1994）に
準じて、Ｏ ２−ナフチル−β−Ｄ−キシロピラノシド
（Xyl-Nap）、Ｏ ｐ−ニトロフェニル−β−Ｄ−キシロ
ピラノシド（Xyl-PheNO₂）の合成を行った。

【００２２】試験例１ キシロピラノシド系化合物による細胞増殖への影響 ヒトを含む各種正常及び癌化培養細胞（ヒト肺線維芽細
胞、ヒト肺カルシノーマ細胞、マウス３Ｔ３線維芽細
胞、ＳＶ−４０形質転換３Ｔ３細胞、ヒト臍帯静脈内皮
細胞、及びヒト臍帯静脈形質転換内皮細胞）をトリプシ
ンで剥がして集め、インスリン（10ng/ml）とトランス
フェリン（25ng/ml）および10%ウシ胎児血清を含むF-12
培地（シグマ）中に懸濁した。その3000-5000細胞ずつ
を96-穴マイクロ培養皿に移植して、４時間培養後、血
清を枯渇させて２４時間培養した。その後、各種濃度の
上記実施例１で合成したＯ（６−ヒドロキシ−２−ナフ
チル）-β-Ｄ-キシロピラノシド（D-Xyl-Nap(6)OH）ま
たは他のキシロピラノシド化合物の存在下、10ng/mlの
上皮細胞成長因子（EGF；Genzyme，Cambridge，MA）を
添加して細胞を成長させた。ただし、ヒト臍帯静脈内皮
細胞は２０％ヒト血清を加えて成長させた。

【００２３】なお、コントロールとして成長因子無添加
の培養と、キシロピラノシドを溶解するのに使用した溶
媒（ジメチルスルホキシド：DMSO）を検体と同じ濃度で
添加した培養も行った。７２、９６、そして１２０時間
培養後、細胞をグルタールアルデヒドで固定し、細胞の
核をクリスタルバイオレット（Merck，Darmstadt,FRG）
で染色した。過剰の染料を洗い流した後、TritonＸ-100
（Rohm & Haas社）溶液で２４時間処理して、固定細胞
を溶解させ、細胞に結合した染料の量をマイクロプレー
トリーダ（Titertek multiscan）により600nmの吸光度
で測定することにより、細胞数を測定した。結果はDMSO
の影響を補正して算出した。

【００２４】それらの結果を図１〜図３に示す。多くの
細胞はD-Xyl-Nap(6)OHの存在下、用量依存的に増殖が抑
制された。しかし、形質転換した細胞や癌細胞は正常細
胞に比べキシロピラノシドに対する感受性が高く、より
強く阻害作用を受けた。例えば、９６時間の処理でのＥ
Ｄ₅₀値で比較すると、ヒト肺由来カルシノーマ細胞は正
常ヒト肺線維芽細胞に比べ３〜４倍感受性が高かった
（図１：１-ａおよび１-ｂ）。また、ＳＶ−４０形質転
換３Ｔ３細胞は、転換前の３Ｔ３細胞よりも６〜７倍感
受性が高かった（図２：１-ｃおよび１-ｄ）。臍帯静脈
由来内皮細胞は非常に低い濃度のキシロピラノシドにお
いて増殖率の減少がみられたが、高濃度になってもそれ
ほど増殖率の低下は起こらなかった（図３：１-ｅ）。
これに対し、形質転換した臍帯静脈内皮細胞では３倍も
感受性が高い結果であった（図３：１-ｆ）。全般的
に、９６時間0.15-0.2mMのD-Xyl-Nap(6)OHにさらした後
では、形質転換細胞は完全に増殖を阻害されたのに対
し、正常細胞は５０％或いはそれ以下の阻害作用を受け
ただけであった。

【００２５】立体異性体であるＯ（６−ヒドロキシ−２
−ナフチル）-β-Ｌ-キシロシド（L-Xyl-Nap(6)OH）で
処理しても、ヒト肺線維芽細胞（図４：２-ａ）や肺カ
ルシノーマ細胞（図４：２-ｂ）共に全く増殖阻害効果
はなかった。また、水酸基がついていないＯ ナフチル-
β-Ｄ-キシロピラノシドの９６時間の暴露により、肺線
維芽細胞（図５：２-ｃ）、肺カルシノーマ細胞（図
５：２-ｄ）及び他の細胞（図示せず）に対しても成長
になんら影響を及ぼさなかった。また、公知のナフチル
チオキシロピラノシド（図示せず）やＯ ｐ−ニトロフ
ェニル-β-Ｄ-キシロピラノシドも同様な濃度範囲内で
全く増殖阻害は起こさなかった（図６：２-ｅ及び２-
ｆ）。

【００２６】試験例２ キシロピラノシド系化合物によるヘパラン硫酸伸長活性 試験例１で使用した各種細胞をラベル用培地（ＭｇＳＯ
₄をＭｇＣｌ₂に置き換えた低硫酸含有培地）に変え、１
時間前培養した後、５０μCi/mlの［³⁵Ｓ］硫酸と各種
濃度のキシロシド化合物を含んだ新鮮な培地に交換し
た。５時間から２４時間培養後、培養液を採取し、DEAE
セルロースのイオン交換クロマトグラフィーにより［³⁵
Ｓ］でラベルされたポリアニオニック高分子物質を分離
した。更にオクチル−セファロースの疎水結合クロマト
グラフィーにより遊離のグリコサミノグリカンとプロテ
オグリカンを分離した。

【００２７】細胞表面に結合しているキシロシドから伸
長したグリコサミノグリカンやプロテオグリカンは、ヘ
パリン含有リン酸緩衝液（100μgヘハ゜リン／ml）を１ｃｍ²
あたり0.2mlで処理して遊離させた。細胞内に残った物
質は４Ｍグアニジン塩酸および２％ TritonＸ−100で
抽出した。グリコサミノグリカンやプロテオグリカン鎖
は、コンドロイチナーゼＡＢＣ（生化学工業（株）製）
によるコンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖の分解の
前後で、４Ｍグアニジン塩酸／50mM 酢酸ナトリウム:NaOAc
（pH5.8）／0.2% Triton-X-100中のSuperose 6HR 10/
30によるクロマトグラフィーを行った。コンドロイチナ
ーゼＡＢＣによる分解は、0.1Mトリス塩酸／10mM EDTA（p
H5.8）を緩衝液として、１mlあたり３ｍＵの酵素を使
い、３７℃で一晩作用させた。

【００２８】正常ヒト肺線維芽細胞がＯ （６−ヒドロ
キシ−２−ナフチル）-β-D-キシロピラノシド（D-Xyl-
Nap(6)OH）により伸長させ培地に分泌したグリコサミノ
グリカン鎖は、Superose 6HR 10/30のクロマトグラフ
ィーにより、高分子（ピークI）、中間サイズ（ピークI
I）、通常サイズ（ピークIII）に分けられた（図７：実
線）。ピークIIIの通常サイズのグリコサミノグリカン
はコンドロイチナーゼＡＢＣ消化で分解されることか
ら、コンドロイチン硫酸或いはデルマタン硫酸であるこ
とが判る。それに対し、ピークＩとピークIIの大部分は
コンドロイチナーゼＡＢＣ消化には抵抗性であり、ヘパ
リチナーゼにより分解されるのでヘパラン硫酸鎖である
（図７：破線）。

【００２９】D-Xyl-Nap(6)OHの立体異性体であるＯ
（６−ヒドロキシ−２−ナフチル）-β-Ｌ-キシロピラ
ノシド（L-Xyl-Nap(6)OH）は調べた限りの全ての細胞で
全くグリコサミノグリカン伸長活性は持たなかった。更
に、ヒドロキシル基を有しないＯ ２−ナフチル-β-Ｄ-
キシロピラノシド（Xyl-Nap）は、ＣＨＯ細胞（チャイ
ニーズハムスター卵母細胞）においては、コンドロイチ
ン硫酸／デルマタン硫酸鎖のみではなく、ヘパラン硫酸
鎖も伸長する（Fritz,T.A.et al.,J.Biol.Chem.269，30
0-307，1994）が、それにもかかわらず、ヒト肺線維芽
細胞はじめ今回調べた限りの正常及び癌化細胞に対して
は、コンドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖の伸長作用
はあっても、ヘパラン硫酸鎖の伸長作用はほとんど見ら
れなかった。Ｏ ｐ−ニトロフェニル-β-Ｄ-キシロピラ
ノシド（Xyl-PheNO₂）も通常言われているように、コン
ドロイチン硫酸／デルマタン硫酸鎖の伸長作用のみを示
した。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１中、１-ａはD-Xyl-Nap(6)OHの増殖に対
する影響をヒト肺線維芽細胞について調べたものであ
り、１-ｂはヒト肺カルシノーマ細胞で調べたものであ
る。図中、縦軸は細胞増殖率（％）を、横軸はD-Xyl-Na
p(6)OH濃度（ｍＭ）を表す。

【図２】 図２中、１-ｃはD-Xyl-Nap(6)OHの増殖に対
する影響をマウス３Ｔ３線維芽細胞で、１-ｄはＳＶ−
４０で形質転換したマウス３Ｔ３細胞で調べたものであ
る。図中、縦軸は細胞増殖率（％）を、横軸はD-Xyl-Na
p(6)OH濃度（ｍＭ）を表す。

【図３】 図３中、１-ｅはD-Xyl-Nap(6)OHの増殖に対
する影響をヒト臍帯静脈内皮細胞で、１-ｆはヒト臍帯
静脈形質転換内皮細胞で調べたものである。図中、縦軸
は細胞増殖率（％）を、横軸はD-Xyl-Nap(6)OH濃度（ｍ
Ｍ）を表す。

【図４】 図４中、２-ａと２-ｂはＯ（６−ヒドロキシ
−２−ナフチル）-β-Ｌ-キシロピラノシドの増殖に対
する影響をヒト肺線維芽細胞（a）及びヒト肺カルシノ
ーマ細胞（b）について調べたものである。図中、縦軸
は細胞増殖率（％）を、横軸はキシロピラノシド濃度
（ｍＭ）を表す。

【図５】 図５中、２-ｃと２-ｄはＯ ２−ナフチル-β
-Ｄ-キシロピラノシドの増殖に対する影響をヒト肺線維
芽細胞（c）及びヒト肺カルシノーマ細胞（d）について
調べたものである。図中、縦軸は細胞増殖率（％）を、
横軸はキシロピラノシド濃度（ｍＭ）を表す。

【図６】 図６中、２-ｅと２-ｆはＯ p-ニトロフェニ
ル-β-D-キシロピラノシドの増殖に対する影響をヒト肺
線維芽細胞（e）及びヒト肺カルシノーマ細胞（f）につ
いて調べたものである。図中、縦軸は細胞増殖率（％）
を、横軸はキシロピラノシド濃度（ｍＭ）を表す。

【図７】 図７は0.1mMのD-Xyl-Nap(6)OHで５時間処理
して得られたヒト肺線維芽細胞分泌培養液中の［³⁵Ｓ］
ラベルされたグリコサミノグリカンのSuperose6HRによ
るゲル濾過クロマトグラフィーである。図中、実線
（−）はコンドロイチナーゼＡＢＣの処理前、破線（・・
・）は処理後の［³⁵Ｓ］パターンである。また、横軸
は、分画番号を表し、縦軸は［³⁵Ｓ］の放射線活性（dm
p×10^-2）を表す。なお図中、Ｖoは排除体積を、Ｖtは
カラム体積を表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 金田 祐司 東京都多摩市関戸６−８−16 関戸マンシ ョン305号 (72)発明者 山本 久夫 東京都東大和市立野３丁目594−１−406 (72)発明者 桜井 勝清 東京都東大和市蔵敷２−527−６ (72)発明者 芦刈 智子 愛知県蒲郡市水竹町一反田９−101 (72)発明者 羽渕 弘子 愛知県名古屋市昭和区八事富士見703番地 (72)発明者 鈴木 旺 愛知県名古屋市名東区本郷２丁目167番地 シーアイマンション第２本郷 1004 (72)発明者 木全 弘治 愛知県名古屋市天白区植田山１丁目1404番 地 (72)発明者 アンデルス マルムストレーム スウェーデン国 ルンド ソルヴェガタン 39 ルンド ユニバーシティ (72)発明者 グニラ ウェステルグレン−ソールソン スウェーデン国 ルンド ソルヴェガタン 39 ルンド ユニバーシティ (72)発明者 ラルス−エーケ フランソン スウェーデン国 ルンド ソルヴェガタン 39 ルンド ユニバーシティ

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記一般式（１）で示されるヒドロキシ
   ナフチル-β-Ｄ-キシロピラノシド系化合物。 【化１】 （式中、ｎは１以上の整数である。）
2. 【請求項２】 一般式（１）において、ｎが１であるこ
   とを特徴とする請求項１記載の化合物。
3. 【請求項３】 一般式（１）で示される化合物が、Ｏ
   （６−ヒドロキシ−２−ナフチル）−β−Ｄ−キシロピ
   ラノシドであることを特徴とする請求項１記載の化合
   物。