JPH1121295A - ハイドロキシプロリン誘導体 - Google Patents
ハイドロキシプロリン誘導体Info
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- JPH1121295A JPH1121295A JP10087960A JP8796098A JPH1121295A JP H1121295 A JPH1121295 A JP H1121295A JP 10087960 A JP10087960 A JP 10087960A JP 8796098 A JP8796098 A JP 8796098A JP H1121295 A JPH1121295 A JP H1121295A
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- JP
- Japan
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- group
- compound
- organ
- present
- cell
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 細胞増殖活性を有するハイドロキシプロリン
誘導体を提供する。 【解決手段】 本発明は、下記の一般式で示されるハイ
ドロキシプロリン誘導体及びそれを含有する臓器・組織
障害治療剤である。 （式中、Ｒは水素原子又は置換基を有することのあるア
ルキル基を示す）
誘導体を提供する。 【解決手段】 本発明は、下記の一般式で示されるハイ
ドロキシプロリン誘導体及びそれを含有する臓器・組織
障害治療剤である。 （式中、Ｒは水素原子又は置換基を有することのあるア
ルキル基を示す）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はハイドロキシプロリ
ン誘導体又はその塩及び当該化合物を有効成分として含
有する臓器・組織障害治療剤に関する。
ン誘導体又はその塩及び当該化合物を有効成分として含
有する臓器・組織障害治療剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、ヒト胎盤及びその水解物には種々
の生理活性物質が含まれていることが知られている。例
えば、フィラトフ法(Filatov's method)はヒト胎盤水解
物を用いた組織治療法で、血管壁の弾力線維及び筋線維
を再生招来させるといわれており、喘息、リウマチ、肝
炎などの慢性難治性疾患の治療又は老化防止などに用い
られている。
の生理活性物質が含まれていることが知られている。例
えば、フィラトフ法(Filatov's method)はヒト胎盤水解
物を用いた組織治療法で、血管壁の弾力線維及び筋線維
を再生招来させるといわれており、喘息、リウマチ、肝
炎などの慢性難治性疾患の治療又は老化防止などに用い
られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】上述のように、ヒト胎
盤水解物には生理活性物質が含まれていると推察される
が、その本態は不明である。このような問題から、本発
明者等は、ヒト胎盤水解物中の生理活性物質を同定する
ために、ヒト胎盤水解物を分離・精製したところ、細胞
増殖作用、細胞保護作用などを有するハイドロキシプロ
リン誘導体を見出した。本発明はかかる知見に基づいて
なされたもので、本発明は細胞増殖を促進する作用を有
する新規なハイドロキシプロリン誘導体及びそれを含有
する臓器・組織障害治療剤を提供することを目的とす
る。
盤水解物には生理活性物質が含まれていると推察される
が、その本態は不明である。このような問題から、本発
明者等は、ヒト胎盤水解物中の生理活性物質を同定する
ために、ヒト胎盤水解物を分離・精製したところ、細胞
増殖作用、細胞保護作用などを有するハイドロキシプロ
リン誘導体を見出した。本発明はかかる知見に基づいて
なされたもので、本発明は細胞増殖を促進する作用を有
する新規なハイドロキシプロリン誘導体及びそれを含有
する臓器・組織障害治療剤を提供することを目的とす
る。
【０００４】
【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
めになされた本発明の要旨は、 下記一般式（１）、（２）又は（３）
めになされた本発明の要旨は、 下記一般式（１）、（２）又は（３）
【化２】
【０００５】（式中、Ｒは水素原子又はアルキル基を示
し、当該アルキル基は水酸基、アミノ基、カルボキシル
基、アミノカルボニル基、グアニジノ基、複素環式基、
メルカプト基、アルキルチオ基又は水酸基を有すること
のあるフェニル基で置換されていてもよい）で表される
ハイドロキシプロリン誘導体又はその塩； Ｒがハイドロキシメチル基である上記記載の化合
物； 上記又は記載の化合物を有効成分として含有する
臓器・組織障害治療剤； 肝障害治療剤である上記記載の臓器・組織障害治療
剤； である。
し、当該アルキル基は水酸基、アミノ基、カルボキシル
基、アミノカルボニル基、グアニジノ基、複素環式基、
メルカプト基、アルキルチオ基又は水酸基を有すること
のあるフェニル基で置換されていてもよい）で表される
ハイドロキシプロリン誘導体又はその塩； Ｒがハイドロキシメチル基である上記記載の化合
物； 上記又は記載の化合物を有効成分として含有する
臓器・組織障害治療剤； 肝障害治療剤である上記記載の臓器・組織障害治療
剤； である。
【０００６】上記の一般式（１）、（２）及び（３）で
表される化合物において、Ｒは水素原子又はアルキル基
である。当該アルキル基としては炭素数１〜７の低級ア
ルキル基が好ましく、直鎖型、分岐型のいずれでもよ
い。具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、iso−
プロピル、ｎ−ブチル、iso−ブチル、tert−ブチル、
ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、１，２，２−トリメチル
プロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルプロ
ピル等が例示される。
表される化合物において、Ｒは水素原子又はアルキル基
である。当該アルキル基としては炭素数１〜７の低級ア
ルキル基が好ましく、直鎖型、分岐型のいずれでもよ
い。具体的にはメチル、エチル、ｎ−プロピル、iso−
プロピル、ｎ−ブチル、iso−ブチル、tert−ブチル、
ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、１，２，２−トリメチル
プロピル、２−メチルプロピル、１，１−ジメチルプロ
ピル等が例示される。
【０００７】かかるアルキル基は置換基として、水酸
基、アミノ基、カルボキシル基、アミノカルボニル基、
グアニジノ基、複素環式基、メルカプト基、アルキルチ
オ基又は水酸基を有することのあるフェニル基を有して
いてもよく、複素環式基としては例えばイミダゾリル、
インドリルなどが例示され、アルキルチオ基としては例
えばメチルチオ、エチルチオなどが例示され、水酸基を
有することのあるフェニル基としてはフェニル、４−ハ
イドロキシフェニルなどが例示される。
基、アミノ基、カルボキシル基、アミノカルボニル基、
グアニジノ基、複素環式基、メルカプト基、アルキルチ
オ基又は水酸基を有することのあるフェニル基を有して
いてもよく、複素環式基としては例えばイミダゾリル、
インドリルなどが例示され、アルキルチオ基としては例
えばメチルチオ、エチルチオなどが例示され、水酸基を
有することのあるフェニル基としてはフェニル、４−ハ
イドロキシフェニルなどが例示される。
【０００８】一般式（１）、（２）及び（３）で表され
る化合物の塩としては、薬理学的に許容され得る無毒性
のものであれば特に制限されず、例えば、酸付加塩とし
ては、無機酸との塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸
塩、硫酸塩等）、有機酸との塩（酢酸塩、コハク酸塩、
マレイン酸塩、フマール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩
等）などが挙げられ、塩基付加塩としては、無機塩基と
の塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム
塩、アンモニウム塩等）、有機塩基との塩（例えば、ト
リエチルアミン塩、アルギニンとの塩等）が挙げられ
る。一般式（１）、（２）及び（３）で表される化合物
は分子内に不斉炭素及び環構造を有しており、当該不斉
炭素及び環構造に基づく光学異性体、幾何異性体、それ
らの混合物の全てを本発明の化合物は包含するものとす
る。
る化合物の塩としては、薬理学的に許容され得る無毒性
のものであれば特に制限されず、例えば、酸付加塩とし
ては、無機酸との塩（塩酸塩、臭化水素酸塩、リン酸
塩、硫酸塩等）、有機酸との塩（酢酸塩、コハク酸塩、
マレイン酸塩、フマール酸塩、リンゴ酸塩、酒石酸塩
等）などが挙げられ、塩基付加塩としては、無機塩基と
の塩（例えば、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム
塩、アンモニウム塩等）、有機塩基との塩（例えば、ト
リエチルアミン塩、アルギニンとの塩等）が挙げられ
る。一般式（１）、（２）及び（３）で表される化合物
は分子内に不斉炭素及び環構造を有しており、当該不斉
炭素及び環構造に基づく光学異性体、幾何異性体、それ
らの混合物の全てを本発明の化合物は包含するものとす
る。
【０００９】一般式（１）、（２）及び（３）で表され
る化合物は、後述の方法によりヒト胎盤水解物から得る
こともできるが、一般的には化学的合成法により調製さ
れる。かかる調製法としては種々の方法により合成する
ことができ、例えば、下記式に示される方法により得る
ことができる。
る化合物は、後述の方法によりヒト胎盤水解物から得る
こともできるが、一般的には化学的合成法により調製さ
れる。かかる調製法としては種々の方法により合成する
ことができ、例えば、下記式に示される方法により得る
ことができる。
【００１０】
【００１１】 （反応工程式−１及び２において、Ｒは前記と同じ、Ｘ
は水酸基の保護基、Ｙはカルボキシル基の保護基、Ｚは
アミノ基の保護基を示す）
は水酸基の保護基、Ｙはカルボキシル基の保護基、Ｚは
アミノ基の保護基を示す）
【００１２】上記の反応工程式−１において、一般式
（６）で表される化合物は、水酸基及びカルボキシル基
をそれぞれ慣用の保護基で保護したハイドロキシプロリ
ン（４）と慣用の保護基でアミノ基を保護したα−アミ
ノ酸化合物（５）とを縮合することにより得ることがで
きる。かかる縮合は、ジシクロヘキシルカルボジイミド
等の縮合剤を用いる方法、活性エステル化法などの慣用
のアミド化法に準じて行うことができる。また、保護基
を有する化合物（４）及び（５）も常法に準じて調製す
ることができる。なお、上記のα−アミノ酸化合物とし
ては、例えば、セリン、アラニン、アルギニン、アスパ
ラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、
システイン、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、イソロ
イシン、リシン、メチオニン、バリン、オルニチン、ト
レオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファ
ンなどが例示される。
（６）で表される化合物は、水酸基及びカルボキシル基
をそれぞれ慣用の保護基で保護したハイドロキシプロリ
ン（４）と慣用の保護基でアミノ基を保護したα−アミ
ノ酸化合物（５）とを縮合することにより得ることがで
きる。かかる縮合は、ジシクロヘキシルカルボジイミド
等の縮合剤を用いる方法、活性エステル化法などの慣用
のアミド化法に準じて行うことができる。また、保護基
を有する化合物（４）及び（５）も常法に準じて調製す
ることができる。なお、上記のα−アミノ酸化合物とし
ては、例えば、セリン、アラニン、アルギニン、アスパ
ラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、
システイン、グリシン、ヒスチジン、ロイシン、イソロ
イシン、リシン、メチオニン、バリン、オルニチン、ト
レオニン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファ
ンなどが例示される。
【００１３】かくして得られた一般式（６）で表される
化合物は、常法に準じて保護基の脱離反応に付すことに
より一般式（１）で表される本発明の化合物が得られ
る。また、一般式（６）で表される化合物を、まずカル
ボキシル基の保護基及びアミノ基の保護基の脱離反応に
付し、次いで上記のアミド化法に準じて環化し、さらに
水酸基の保護基の脱離反応に付すことにより一般式
（３）で表される本発明の化合物が得られる。
化合物は、常法に準じて保護基の脱離反応に付すことに
より一般式（１）で表される本発明の化合物が得られ
る。また、一般式（６）で表される化合物を、まずカル
ボキシル基の保護基及びアミノ基の保護基の脱離反応に
付し、次いで上記のアミド化法に準じて環化し、さらに
水酸基の保護基の脱離反応に付すことにより一般式
（３）で表される本発明の化合物が得られる。
【００１４】一般式（２）及び（３）で表される化合物
は、反応工程式−２の方法により、一般式（７）で表さ
れる化合物と一般式（８）で表される化合物から一般式
（９）で表される化合物を得、この化合物を反抗工程式
−１と同様にして処理することにより得ることができ
る。この反応工程式のアミド化反応、環化反応などは反
応工程式−１と同様にして行うことができる。なお、反
応工程式−１及び２において、使用するアミド化反応、
環化反応の方法によっては、水酸基を保護することなく
反応を行うこともできる。
は、反応工程式−２の方法により、一般式（７）で表さ
れる化合物と一般式（８）で表される化合物から一般式
（９）で表される化合物を得、この化合物を反抗工程式
−１と同様にして処理することにより得ることができ
る。この反応工程式のアミド化反応、環化反応などは反
応工程式−１と同様にして行うことができる。なお、反
応工程式−１及び２において、使用するアミド化反応、
環化反応の方法によっては、水酸基を保護することなく
反応を行うこともできる。
【００１５】本発明の一般式（１）、（２）及び（３）
で表される化合物は後記の実施例に示されるように細胞
増殖活性及び細胞保護作用を有し、障害を受けた臓器や
組織の修復、再生に有用であり、特に肝臓（肝細胞）に
対して顕著な効果を奏する。具体的に本発明の化合物が
奏し、期待される効果を例示すると、例えば、 肝からの逸脱酵素（例えば、ＧＯＴ、ＧＰＴ、γ−Ｇ
ＴＰ、ＡＬＰ、ＬＡＰ、ＬＤＨ等）の抑制、 ビリルビンの肝取り込み促進、 肝の保護（肝実質細胞の変性・壊死の防止及び抑
制）、 肝線維化の防止、肝線維組織増殖抑制、増殖した肝線
維組織・間質結合織の吸収促進、 抗脂肝作用（肝への脂肪沈着の減少、肝細胞の脂質変
性の改善）、 組織呼吸賦活作用（肝のコハク酸脱水素酵素の活性の
賦活、組織呼吸の促進、肝細胞の新陳代謝の活性化）、 肝細胞膜の安定化作用、などが挙げられる。
で表される化合物は後記の実施例に示されるように細胞
増殖活性及び細胞保護作用を有し、障害を受けた臓器や
組織の修復、再生に有用であり、特に肝臓（肝細胞）に
対して顕著な効果を奏する。具体的に本発明の化合物が
奏し、期待される効果を例示すると、例えば、 肝からの逸脱酵素（例えば、ＧＯＴ、ＧＰＴ、γ−Ｇ
ＴＰ、ＡＬＰ、ＬＡＰ、ＬＤＨ等）の抑制、 ビリルビンの肝取り込み促進、 肝の保護（肝実質細胞の変性・壊死の防止及び抑
制）、 肝線維化の防止、肝線維組織増殖抑制、増殖した肝線
維組織・間質結合織の吸収促進、 抗脂肝作用（肝への脂肪沈着の減少、肝細胞の脂質変
性の改善）、 組織呼吸賦活作用（肝のコハク酸脱水素酵素の活性の
賦活、組織呼吸の促進、肝細胞の新陳代謝の活性化）、 肝細胞膜の安定化作用、などが挙げられる。
【００１６】本発明の臓器・組織障害治療剤は、上述の
作用・効果に基づくもので、一般式（１）、（２）及び
（３）で表される化合物又はそれらの塩を有効成分とし
て含有するものである。特に、肝障害に基づく疾患に好
適に利用される。より具体的には、肝炎から肝硬変（甲
型及び乙型肝硬変）への進行の抑制、肝硬変から肝癌へ
の進行の抑制、肝線維形成の抑制、脂肪肝の抑制などが
例示される。
作用・効果に基づくもので、一般式（１）、（２）及び
（３）で表される化合物又はそれらの塩を有効成分とし
て含有するものである。特に、肝障害に基づく疾患に好
適に利用される。より具体的には、肝炎から肝硬変（甲
型及び乙型肝硬変）への進行の抑制、肝硬変から肝癌へ
の進行の抑制、肝線維形成の抑制、脂肪肝の抑制などが
例示される。
【００１７】本発明の治療剤は、一般式（１）、（２）
若しくは（３）で表される化合物又はそれらの塩を、適
宜の薬理的に許容される添加剤（例えば、担体、賦形
剤、希釈剤等）などの製薬上必要な成分と混合し、粉
末、顆粒、錠剤、カプセル剤、注射剤、軟膏などの態様
の医薬製剤に調製され、当該製剤は経口的又は非経口的
に投与される。上記製剤中に、一般式（１）、（２）若
しくは（３）で表される化合物又はそれらの塩はその有
効量が配合される。投与量は投与ルート、症状、患者の
体重あるいは年令などによって適宜調整される。
若しくは（３）で表される化合物又はそれらの塩を、適
宜の薬理的に許容される添加剤（例えば、担体、賦形
剤、希釈剤等）などの製薬上必要な成分と混合し、粉
末、顆粒、錠剤、カプセル剤、注射剤、軟膏などの態様
の医薬製剤に調製され、当該製剤は経口的又は非経口的
に投与される。上記製剤中に、一般式（１）、（２）若
しくは（３）で表される化合物又はそれらの塩はその有
効量が配合される。投与量は投与ルート、症状、患者の
体重あるいは年令などによって適宜調整される。
【００１８】
【発明の効果】本発明の化合物は細胞増殖活性、細胞保
護作用などを有し、障害を受けた臓器や組織の修復、再
生などに有用である。本発明の臓器・組織障害治療剤
は、上記の特性を有する本発明の化合物を有効成分とす
るもので、各種臓器・組織の障害、特に肝障害の治療に
有用である。
護作用などを有し、障害を受けた臓器や組織の修復、再
生などに有用である。本発明の臓器・組織障害治療剤
は、上記の特性を有する本発明の化合物を有効成分とす
るもので、各種臓器・組織の障害、特に肝障害の治療に
有用である。
【００１９】
【実施例】以下、実施例及び試験例に基づいて本発明を
より詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定され
るものではない。なお、以下の実験に使用した材料、装
置は以下のとおりである。 ヒト胎盤水解物 ヒト胎盤水解物は、ラエンネック（商品名、日本生物製
剤社製）を使用した。なお、ラエンネックはヒト胎盤を
アセトンで脱脂し、塩酸で加水分解して調製した製剤で
ある。 高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析条件 ＨＰＬＣによる分析条件は以下のとおりである。 カラム：COSMOSIL 5C18-AR (4.6 I.D. x 150 mm) 検出波長：２１０，２６０ｎｍ 流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 温度：室温（２６℃） 三次元クロマト：Waters 991J フォトダイオードアレイ
検出器
より詳細に説明するが、本発明はこれらの例に限定され
るものではない。なお、以下の実験に使用した材料、装
置は以下のとおりである。 ヒト胎盤水解物 ヒト胎盤水解物は、ラエンネック（商品名、日本生物製
剤社製）を使用した。なお、ラエンネックはヒト胎盤を
アセトンで脱脂し、塩酸で加水分解して調製した製剤で
ある。 高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）分析条件 ＨＰＬＣによる分析条件は以下のとおりである。 カラム：COSMOSIL 5C18-AR (4.6 I.D. x 150 mm) 検出波長：２１０，２６０ｎｍ 流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ 温度：室温（２６℃） 三次元クロマト：Waters 991J フォトダイオードアレイ
検出器
【００２０】分析機器1 Ｈ，13Ｃ−ＮＭＲ：JEOL Lamdba 500 旋光度：JASCO DIP-140 ＦＡＢ−ＭＳ：JEOL HX-110, マトリックス(グリセロー
ル) ＨＲ−ＦＡＢ−ＭＳ：JEOL HX-110, マトリックス(トリ
エチレングリコール） ペプチドシーケンサー：Model 470-A(アプライド バイ
オシステム社製) アミノ酸分析器：８３５型 細胞増殖活性の測定法 試料の細胞増殖活性は、常法に準じて、ＢＨＫ(baby ha
mster kidney)−２１細胞に対する増殖活性を測定する
ことにより行った(Planta Med. 62, 115-118,1996など
参照)。より詳細には、ＢＨＫ−２１細胞（１×１０
4個）を５％ウシ胎児血清と２ｍＭグルタミンを含むイ
ーグル最小限培地(Eagle's minimum essential medium)
に、試料（μｇ／ｍｌ培地）とともに３７℃、ｐＨ７．
２、５％ＣＯ2／空気で３日間培養し、それをトリプシ
ンと0.02％ＥＤＴＡで処理して細胞を取り出して、その
細胞の一定量を０．４％トリパンブルーで染色後、生細
胞数をカウントし、対照(medium control)の細胞数を１
００％としてそれぞれの活性について比較検討した。
ル) ＨＲ−ＦＡＢ−ＭＳ：JEOL HX-110, マトリックス(トリ
エチレングリコール） ペプチドシーケンサー：Model 470-A(アプライド バイ
オシステム社製) アミノ酸分析器：８３５型 細胞増殖活性の測定法 試料の細胞増殖活性は、常法に準じて、ＢＨＫ(baby ha
mster kidney)−２１細胞に対する増殖活性を測定する
ことにより行った(Planta Med. 62, 115-118,1996など
参照)。より詳細には、ＢＨＫ−２１細胞（１×１０
4個）を５％ウシ胎児血清と２ｍＭグルタミンを含むイ
ーグル最小限培地(Eagle's minimum essential medium)
に、試料（μｇ／ｍｌ培地）とともに３７℃、ｐＨ７．
２、５％ＣＯ2／空気で３日間培養し、それをトリプシ
ンと0.02％ＥＤＴＡで処理して細胞を取り出して、その
細胞の一定量を０．４％トリパンブルーで染色後、生細
胞数をカウントし、対照(medium control)の細胞数を１
００％としてそれぞれの活性について比較検討した。
【００２１】実施例１ヒト胎盤水解物からの本発明の化合物の単離・精製 ラエンネックの水溶液をＨＰＬＣにより３種の溶離液を
用いて３つの画分（Ｆｒ．１〜３）に分離した。その結
果を図１Ａに示す。得られたＦｒ．１〜３について、Ｂ
ＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖活性を測定した。その
結果を図１Ｂに示す。図１Ｂに示されるように、Ｆｒ．
１に増殖活性が認められた。
用いて３つの画分（Ｆｒ．１〜３）に分離した。その結
果を図１Ａに示す。得られたＦｒ．１〜３について、Ｂ
ＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖活性を測定した。その
結果を図１Ｂに示す。図１Ｂに示されるように、Ｆｒ．
１に増殖活性が認められた。
【００２２】上記でＦｒ．１に活性が認められたので、
当該画分を再度ＨＰＬＣに付し、水を溶離液に用いて溶
出順に１０の画分（Ｆｒ．１〜１０）に分離した。その
結果を図２Ａに示す。得られたＦｒ．１〜１０につい
て、ＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖活性を測定し
た。その結果を図２Ｂに示す。図２Ｂに示されるよう
に、Ｆｒ．１〜３に低濃度(Dose:6.25, 12.5, 25μg)で
増殖活性が認められた。
当該画分を再度ＨＰＬＣに付し、水を溶離液に用いて溶
出順に１０の画分（Ｆｒ．１〜１０）に分離した。その
結果を図２Ａに示す。得られたＦｒ．１〜１０につい
て、ＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖活性を測定し
た。その結果を図２Ｂに示す。図２Ｂに示されるよう
に、Ｆｒ．１〜３に低濃度(Dose:6.25, 12.5, 25μg)で
増殖活性が認められた。
【００２３】上記でＦｒ．１〜３に活性が認められたの
で、当該画分を更にＨＰＬＣに付し、１０-3Ｍ酢酸を溶
離液に用いて３つの画分（Ｆｒ１−３−１〜１−３−
３）に分離した。その結果を図３Ａに示す。得られた３
つの画分について、ＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖
活性を測定した。その結果を図３Ｂに示す。図３Ｂに示
されるように、Ｆｒ．１−３−３に低濃度(Dose:6.25,
12.5, 25μg)で増殖活性が認められた。
で、当該画分を更にＨＰＬＣに付し、１０-3Ｍ酢酸を溶
離液に用いて３つの画分（Ｆｒ１−３−１〜１−３−
３）に分離した。その結果を図３Ａに示す。得られた３
つの画分について、ＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖
活性を測定した。その結果を図３Ｂに示す。図３Ｂに示
されるように、Ｆｒ．１−３−３に低濃度(Dose:6.25,
12.5, 25μg)で増殖活性が認められた。
【００２４】以上の結果に基づき、ＨＰＬＣでモニタリ
ングしながら、細胞増殖活性の認められた保持時間３．
１〜３．３分の画分をラエンネック（凍結乾燥：６２．
７ｇ）からCosmosil 75C18-PREP（カラム：4.6 I.D. x
150 mm，水で溶出）を用いて分取し（９．４ｇ）、次い
でSephadex LH-20カラムクロマト（カラム：3 I.D. x85
mm，水で溶出）で分離し、化合物１（６．２ｍｇ）と
化合物２（７．６ｍｇ）が得られた。上記の化合物２に
ついて、ＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖活性を測定
した。その結果を図４に示す。図４に示されるように、
化合物２には細胞増殖活性が認められた。なお、上記の
化合物１は機器分析の結果、ウラシルであることが判明
した。
ングしながら、細胞増殖活性の認められた保持時間３．
１〜３．３分の画分をラエンネック（凍結乾燥：６２．
７ｇ）からCosmosil 75C18-PREP（カラム：4.6 I.D. x
150 mm，水で溶出）を用いて分取し（９．４ｇ）、次い
でSephadex LH-20カラムクロマト（カラム：3 I.D. x85
mm，水で溶出）で分離し、化合物１（６．２ｍｇ）と
化合物２（７．６ｍｇ）が得られた。上記の化合物２に
ついて、ＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増殖活性を測定
した。その結果を図４に示す。図４に示されるように、
化合物２には細胞増殖活性が認められた。なお、上記の
化合物１は機器分析の結果、ウラシルであることが判明
した。
【００２５】そこで、化合物２について分析したとこ
ろ、以下の結果が得られた。 ［α］D＝＋５８．４°（Ｃ＝０．２６，水）； ニンヒドリン反応陽性； アミノ酸分析からハイドロキシプロリンとセリン(1:
1)からなるペプチド； ペプチドシーケンサーによるアミノ酸配位の検討か
ら、Ｎ末端はブロックされていること； 酸加水分解物のChiral ＨＰＬＣ分析により、Ｌ−セ
リン及びトランス−ハイドロキシプロリンを同定。 これらの結果から、化合物２は下記の一般式（３−１）
で示される３’−ハイドロキシメチル−４−ハイドロキ
シピロリド［１，２−ｆ］２’，５’−ピペラジンジオ
ン(3'-Hydroxymethyl-4-hydroxypyrrolido[1,2-f]2',5'
-piperazinedione)であると推定された。
ろ、以下の結果が得られた。 ［α］D＝＋５８．４°（Ｃ＝０．２６，水）； ニンヒドリン反応陽性； アミノ酸分析からハイドロキシプロリンとセリン(1:
1)からなるペプチド； ペプチドシーケンサーによるアミノ酸配位の検討か
ら、Ｎ末端はブロックされていること； 酸加水分解物のChiral ＨＰＬＣ分析により、Ｌ−セ
リン及びトランス−ハイドロキシプロリンを同定。 これらの結果から、化合物２は下記の一般式（３−１）
で示される３’−ハイドロキシメチル−４−ハイドロキ
シピロリド［１，２−ｆ］２’，５’−ピペラジンジオ
ン(3'-Hydroxymethyl-4-hydroxypyrrolido[1,2-f]2',5'
-piperazinedione)であると推定された。
【００２６】
【００２７】更に、化合物２の機器分析の測定結果は以
下のとおりであり、これらの結果は何れも上記の構造式
を支持するものであった。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ２０１［Ｍ＋１］+ ＨＴ−ＦＡＢ−ＭＳ Ｃ8Ｈ12Ｎ2Ｏ4 実測値 201.08730 [M+1]+ 計算値 201.087481 Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ 1.86 (1H, dd, J
=12.5, 6.5), 2.05 (1H,dd, J=12.5, 5.0), 3.20 (1H,
dd, J=12.5), 3.56 (1H, dd, J=12.5, 4.0), 3.68 (1H,
dd, J=10.0, 5.2), 3.70 (1H, dd, J=10.5, 5.2), 4.0
7 (1H, t, J=4.0), 4.29 (1H, t, J=5.2), 4.36 (1H, d
d, J=5.0, 6.0)13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ 56.8 (C-2), 3
7.2 (C-3), 66.7 (C-4),53.7 (C-5), 56.7 (C-3'), 59.
8 (-CH2OH)
下のとおりであり、これらの結果は何れも上記の構造式
を支持するものであった。 ＦＡＢ−ＭＳ ｍ／ｚ ２０１［Ｍ＋１］+ ＨＴ−ＦＡＢ−ＭＳ Ｃ8Ｈ12Ｎ2Ｏ4 実測値 201.08730 [M+1]+ 計算値 201.087481 Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ 1.86 (1H, dd, J
=12.5, 6.5), 2.05 (1H,dd, J=12.5, 5.0), 3.20 (1H,
dd, J=12.5), 3.56 (1H, dd, J=12.5, 4.0), 3.68 (1H,
dd, J=10.0, 5.2), 3.70 (1H, dd, J=10.5, 5.2), 4.0
7 (1H, t, J=4.0), 4.29 (1H, t, J=5.2), 4.36 (1H, d
d, J=5.0, 6.0)13 Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ 56.8 (C-2), 3
7.2 (C-3), 66.7 (C-4),53.7 (C-5), 56.7 (C-3'), 59.
8 (-CH2OH)
【００２８】一般式（１）又は（２）で表される化合物
において、Ｒがハイドロキシメチルの化合物を別途合成
し、これらの化合物のＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増
殖活性を測定したところ、何れの化合物にも細胞増殖活
性が認められた。
において、Ｒがハイドロキシメチルの化合物を別途合成
し、これらの化合物のＢＨＫ−２１細胞に対する細胞増
殖活性を測定したところ、何れの化合物にも細胞増殖活
性が認められた。
【００２９】試験例１ＡＮＩＴ処理ラット血清中肝逸脱酵素の測定 α-ナフチルイソチオシアネート(α-naphthylisothiocy
anate、ＡＮＩＴ)５０ｍｇ／ｋｇ(溶媒：オリーブ油)を
ラット腹腔内に投与する前０．５時間及び投与後８、２
４、３６、４６時間に、本発明のハイドロキシプロリン
誘導体１．３６又は６．２５ｍｇ／ｋｇ(溶媒：生理食
塩水)を陰茎静脈(０．２５ｍｌ、ｉｖ)より、６．２５
又は２５ｍｇ／ｋｇを経口(２．０ｍｌ、ｐｏ)より投与
した。ＡＮＩＴ処理後４７時間に腹大動脈より血液を採
集し、遠心(３５００ｒｐｍ、１５分)した後、採集され
た血清中の肝逸脱酵素ＧＰＴ(glutamic-pyruvic transa
minase)、ＡＬＰ(alkalinephosphatase)、ＬＡＰ(lacta
te dehydrogenase)及びγ−ＧＴＰ(γ-glutamyltranfer
ase)濃度並びにビリルビン(bilirubin、ＢＩＬ)濃度を
各測定キット(和光純薬社製)を用いて測定した。なお、
本発明のハイドロキシプロリン誘導体として、一般式
（３）においてＲがハイドロキシメチルの化合物(Hyp S
erという、以下同様）と一般式（２）においてＲがハイ
ドロキシメチルの化合物(Hyp Ser OHという、以下同様)
を用いた。測定結果を図５(ＧＰＴ）、図６(ＡＬＰ)、
図７(ＬＡＰ)、図８(γ−ＧＴＰ)及び図９(ＢＩＬ)に示
す。図中の測定値は一群３匹の平均値±標準誤差であ
る。有意差検定はstudent t-testにより行い、ＡＮＩＴ
に対して＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１を意味
する。図に示されるように、本発明のハイドロキシプロ
リン誘導体を投与することにより、血中肝逸脱酵素量が
低減し、本発明のハイドロキシプロリン誘導体は肝保護
作用を有することが判明した。
anate、ＡＮＩＴ)５０ｍｇ／ｋｇ(溶媒：オリーブ油)を
ラット腹腔内に投与する前０．５時間及び投与後８、２
４、３６、４６時間に、本発明のハイドロキシプロリン
誘導体１．３６又は６．２５ｍｇ／ｋｇ(溶媒：生理食
塩水)を陰茎静脈(０．２５ｍｌ、ｉｖ)より、６．２５
又は２５ｍｇ／ｋｇを経口(２．０ｍｌ、ｐｏ)より投与
した。ＡＮＩＴ処理後４７時間に腹大動脈より血液を採
集し、遠心(３５００ｒｐｍ、１５分)した後、採集され
た血清中の肝逸脱酵素ＧＰＴ(glutamic-pyruvic transa
minase)、ＡＬＰ(alkalinephosphatase)、ＬＡＰ(lacta
te dehydrogenase)及びγ−ＧＴＰ(γ-glutamyltranfer
ase)濃度並びにビリルビン(bilirubin、ＢＩＬ)濃度を
各測定キット(和光純薬社製)を用いて測定した。なお、
本発明のハイドロキシプロリン誘導体として、一般式
（３）においてＲがハイドロキシメチルの化合物(Hyp S
erという、以下同様）と一般式（２）においてＲがハイ
ドロキシメチルの化合物(Hyp Ser OHという、以下同様)
を用いた。測定結果を図５(ＧＰＴ）、図６(ＡＬＰ)、
図７(ＬＡＰ)、図８(γ−ＧＴＰ)及び図９(ＢＩＬ)に示
す。図中の測定値は一群３匹の平均値±標準誤差であ
る。有意差検定はstudent t-testにより行い、ＡＮＩＴ
に対して＊はｐ＜０．０５、＊＊はｐ＜０．０１を意味
する。図に示されるように、本発明のハイドロキシプロ
リン誘導体を投与することにより、血中肝逸脱酵素量が
低減し、本発明のハイドロキシプロリン誘導体は肝保護
作用を有することが判明した。
【００３０】試験例２四塩化炭素(ＣＣｌ4)処理した初代培養ラット肝細胞培
地における肝逸脱酵素の測定 中村らの方法(「初代培養肝細胞実験法」、学会出版セ
ンター発行、1987、pp.29)に準じ、in situ collagenas
e灌流法により、肝細胞を分離した。得られた遊離肝細
胞(生存率８８−９３％)を培地(ＷＥ培地、５％牛血清
を含む)で２．５×１０5細胞／ｍｌに希釈し、コーニン
グ社製２４穴培養プレートに０．５ｍｌを加え、３７℃
で２４時間培養を行った。その後無血清培地に交換し、
５ｍＭの四塩化炭素(最後濃度)を加え、各濃度のハイド
ロキシプロリン誘導体(Hyp Ser及びHyp Ser OH)を添加
し、さらに２４時間培養した。その後、培地を収集し、
培地中におけるＧＯＴ(glutamic-oxaloacetic transami
nase)及びＬＤＨ(lactic dehydrogenase)濃度を酵素測
定キット(和光純薬社製)を用い測定した。なお、比較例
として、肝細胞に対して増殖・保護作用をすることが知
られている肝実質細胞増殖因子、ＨＧＦ）を用い、同様
な試験を行った。試験結果を図１０（ＧＯＴ）及び図１
１（ＬＤＨ）に示す。図中の測定値は３サンプルの平均
値±標準誤差である。有意差検定はstudent t-testによ
り行い、コントロールに対して＊はｐ＜０．０５、＊＊
はｐ＜０．０１を意味する。図１０及び１１に示される
ように、本発明のハイドロキシプロリン誘導体を添加す
ることにより、肝逸脱酵素量が低減し、本発明のハイド
ロキシプロリン誘導体は肝細胞保護作用を有することが
判明した。
地における肝逸脱酵素の測定 中村らの方法(「初代培養肝細胞実験法」、学会出版セ
ンター発行、1987、pp.29)に準じ、in situ collagenas
e灌流法により、肝細胞を分離した。得られた遊離肝細
胞(生存率８８−９３％)を培地(ＷＥ培地、５％牛血清
を含む)で２．５×１０5細胞／ｍｌに希釈し、コーニン
グ社製２４穴培養プレートに０．５ｍｌを加え、３７℃
で２４時間培養を行った。その後無血清培地に交換し、
５ｍＭの四塩化炭素(最後濃度)を加え、各濃度のハイド
ロキシプロリン誘導体(Hyp Ser及びHyp Ser OH)を添加
し、さらに２４時間培養した。その後、培地を収集し、
培地中におけるＧＯＴ(glutamic-oxaloacetic transami
nase)及びＬＤＨ(lactic dehydrogenase)濃度を酵素測
定キット(和光純薬社製)を用い測定した。なお、比較例
として、肝細胞に対して増殖・保護作用をすることが知
られている肝実質細胞増殖因子、ＨＧＦ）を用い、同様
な試験を行った。試験結果を図１０（ＧＯＴ）及び図１
１（ＬＤＨ）に示す。図中の測定値は３サンプルの平均
値±標準誤差である。有意差検定はstudent t-testによ
り行い、コントロールに対して＊はｐ＜０．０５、＊＊
はｐ＜０．０１を意味する。図１０及び１１に示される
ように、本発明のハイドロキシプロリン誘導体を添加す
ることにより、肝逸脱酵素量が低減し、本発明のハイド
ロキシプロリン誘導体は肝細胞保護作用を有することが
判明した。
【図１】ヒト胎盤水解物（ラエンネック）をＨＰＬＣで
分画した結果（Ａ）及び各画分の細胞増殖活性（Ｂ）を
示す図である。
分画した結果（Ａ）及び各画分の細胞増殖活性（Ｂ）を
示す図である。
【図２】Ｆｒ．１をＨＰＬＣで分画した結果（Ａ）及び
各画分の細胞増殖活性（Ｂ）を示す図である。
各画分の細胞増殖活性（Ｂ）を示す図である。
【図３】Ｆｒ．１−３をＨＰＬＣで分画した結果（Ａ）
及び各画分の細胞増殖活性（Ｂ）を示す図である。
及び各画分の細胞増殖活性（Ｂ）を示す図である。
【図４】本発明の化合物のＢＨＫ−２１細胞に対する細
胞増殖活性を示す図である。
胞増殖活性を示す図である。
【図５】本発明の化合物を投与したＡＮＩＴ処理ラット
の血清中肝逸脱酵素(ＧＰＴ）の測定結果を示す図であ
る。
の血清中肝逸脱酵素(ＧＰＴ）の測定結果を示す図であ
る。
【図６】本発明の化合物を投与したＡＮＩＴ処理ラット
の血清中肝逸脱酵素(ＡＬＰ)の測定結果を示す図であ
る。
の血清中肝逸脱酵素(ＡＬＰ)の測定結果を示す図であ
る。
【図７】本発明の化合物を投与したＡＮＩＴ処理ラット
の血清中肝逸脱酵素(ＬＡＰ)の測定結果を示す図であ
る。
の血清中肝逸脱酵素(ＬＡＰ)の測定結果を示す図であ
る。
【図８】本発明の化合物を投与したＡＮＩＴ処理ラット
の血清中肝逸脱酵素(γ−ＧＴＰ)の測定結果を示す図で
ある。
の血清中肝逸脱酵素(γ−ＧＴＰ)の測定結果を示す図で
ある。
【図９】本発明の化合物を投与したＡＮＩＴ処理ラット
の血清中ビリルビン(ＢＩＬ)の測定結果を示す図であ
る。
の血清中ビリルビン(ＢＩＬ)の測定結果を示す図であ
る。
【図１０】四塩化炭素処理した初代培養ラット肝細胞培
地に本発明の化合物又はＨＧＦを添加したときの肝逸脱
酵素(ＧＯＴ)の測定結果を示す図である。
地に本発明の化合物又はＨＧＦを添加したときの肝逸脱
酵素(ＧＯＴ)の測定結果を示す図である。
【図１１】四塩化炭素処理した初代培養ラット肝細胞培
地に本発明の化合物又はＨＧＦを添加したときの肝逸脱
酵素(ＬＤＨ)の測定結果を示す図である。
地に本発明の化合物又はＨＧＦを添加したときの肝逸脱
酵素(ＬＤＨ)の測定結果を示す図である。
Claims (4)
- 【請求項１】 一般式 【化１】 （式中、Ｒは水素原子又はアルキル基を示し、当該アル
キル基は水酸基、アミノ基、カルボキシル基、アミノカ
ルボニル基、グアニジノ基、複素環式基、メルカプト
基、アルキルチオ基又は水酸基を有することのあるフェ
ニル基で置換されていてもよい）で表されるハイドロキ
シプロリン誘導体又はその塩。 - 【請求項２】 Ｒがハイドロキシメチル基である請求項
１記載の化合物。 - 【請求項３】 請求項１又は２記載の化合物を有効成分
として含有する臓器・組織障害治療剤。 - 【請求項４】 肝障害治療剤である請求項３記載の臓器
・組織障害治療剤。
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP08796098A JP3969831B2 (ja) | 1997-03-15 | 1998-03-16 | ハイドロキシプロリン誘導体 |
| EP98941736A EP1067138B1 (en) | 1998-03-16 | 1998-09-04 | Hydroxyproline derivatives |
| PCT/JP1998/003993 WO1999047546A1 (en) | 1998-03-16 | 1998-09-04 | Hydroxyproline derivatives |
| DE69838303T DE69838303T2 (de) | 1998-03-16 | 1998-09-04 | Derivate hydroxyprolin |
| US09/646,297 US6635620B1 (en) | 1998-03-16 | 1998-09-04 | Hydroxyproline derivatives |
| AU89984/98A AU775091B2 (en) | 1998-03-16 | 1998-09-04 | Hydroxyproline derivatives |
| CA002323808A CA2323808A1 (en) | 1998-03-16 | 1998-09-04 | Hydroxyproline derivatives |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8223497 | 1997-03-15 | ||
| JP9-82234 | 1997-03-15 | ||
| JP08796098A JP3969831B2 (ja) | 1997-03-15 | 1998-03-16 | ハイドロキシプロリン誘導体 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1121295A true JPH1121295A (ja) | 1999-01-26 |
| JPH1121295A5 JPH1121295A5 (ja) | 2005-08-11 |
| JP3969831B2 JP3969831B2 (ja) | 2007-09-05 |
Family
ID=26423246
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP08796098A Expired - Lifetime JP3969831B2 (ja) | 1997-03-15 | 1998-03-16 | ハイドロキシプロリン誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3969831B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001206897A (ja) * | 2000-01-26 | 2001-07-31 | Nippon Seibutsu Seizai:Kk | ハイドロキシプロリン誘導体 |
| JP2001288106A (ja) * | 2000-04-10 | 2001-10-16 | Nippon Seibutsu Seizai:Kk | 炎症性疾患治療剤 |
| WO2006064672A1 (ja) * | 2004-11-25 | 2006-06-22 | Japan Bioproducts Ind. Co. Ltd. | 眼疾患治療剤 |
| KR20150100603A (ko) * | 2012-07-09 | 2015-09-02 | 가부시끼가이샤니혼세이부쯔세이자이 | 안질환의 예방·치료약 |
-
1998
- 1998-03-16 JP JP08796098A patent/JP3969831B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001206897A (ja) * | 2000-01-26 | 2001-07-31 | Nippon Seibutsu Seizai:Kk | ハイドロキシプロリン誘導体 |
| JP2001288106A (ja) * | 2000-04-10 | 2001-10-16 | Nippon Seibutsu Seizai:Kk | 炎症性疾患治療剤 |
| WO2006064672A1 (ja) * | 2004-11-25 | 2006-06-22 | Japan Bioproducts Ind. Co. Ltd. | 眼疾患治療剤 |
| KR20150100603A (ko) * | 2012-07-09 | 2015-09-02 | 가부시끼가이샤니혼세이부쯔세이자이 | 안질환의 예방·치료약 |
| US9555028B2 (en) | 2012-07-09 | 2017-01-31 | Japan Bio Products Co., Ltd | Drug for preventing/treating ocular disease |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3969831B2 (ja) | 2007-09-05 |
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