JPH11221071A - 機能性組成物 - Google Patents
機能性組成物Info
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- JPH11221071A JPH11221071A JP10024892A JP2489298A JPH11221071A JP H11221071 A JPH11221071 A JP H11221071A JP 10024892 A JP10024892 A JP 10024892A JP 2489298 A JP2489298 A JP 2489298A JP H11221071 A JPH11221071 A JP H11221071A
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- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
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Abstract
成物及び該組成物を含む機能性食品の提供。 【解決手段】 ラクトバチルス・デルブルエキイ、ラク
トバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・プラン
タラム、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチ
ルス・カゼイ、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクト
コッカス・ラクティス及びストレプトコッカス・サーモ
フィラスからなる群から選ばれる少なくとも3種類の乳
酸菌とサッカロミセス・セレビシエとの混合微生物の培
養物又はその処理物を含む組成物、並びに該組成物を含
む機能性食品。
Description
混合微生物の培養物又はその処理物を含む組成物及び該
組成物を含む機能性食品に関する。
防や健康の増進効果を有するものとして期待が寄せられ
ている。かかる食品としては発酵乳(ヨーグルト)が代
表的なものであり、その他にも、乳酸菌飲料、酸乳等が
広く普及している。乳酸菌及び発酵食品の生理活性作用
については多数の報告がなされていることから、乳酸菌
や発酵食品は、健康食品としての利用価値が期待され
る。
はじめとする醸造食品のほとんどは、培養基中に数種の
微生物を混合して培養し、それらの微生物間の共生ある
いは拮抗作用等により独特の風味、成分を生み出してい
ることが知られている。しかしながら、乳酸菌又は乳酸
菌発酵食品には、いわゆる共棲培養の概念を用いてつく
られたものは少なく、その生理活性作用についても知ら
れていない。
母との混合微生物の培養物又はその処理物を含む組成物
及び該組成物を含む機能性食品を提供することを目的と
する。
解決するため鋭意研究を行った結果、乳酸菌と酵母との
混合微生物の培養物又はその処理物が種々の機能を発揮
することを見い出し、本発明を完成するに至った。
ルブルエキイ、ラクトバチルス・アシドフィラス、ラク
トバチルス・プランタラム、ラクトバチルス・ファーメ
ンタム、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトバチルス・ラ
ムノーサス、ラクトコッカス・ラクティス及びストレプ
トコッカス・サーモフィラスからなる群から選ばれる少
なくとも3種類の乳酸菌とサッカロミセス・セレビシエ
との混合微生物の培養物又はその処理物を含む組成物で
ある。混合微生物としては、ラクトバチルス・デルブル
エキイ、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトコッカス・ラ
クティス及びサッカロミセス・セレビシエを含む群、ラ
クトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ラム
ノーサス、ラクトコッカス・ラクティス及びサッカロミ
セス・セレビシエを含む群、ラクトバチルス・プランタ
ラム、ラクトバチルス・カゼイ、ストレプトコッカス・
サーモフィラス及びサッカロミセス・セレビシエを含む
群、並びにラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバ
チルス・ラムノーサス、ストレプトコッカス・サーモフ
ィラス及びサッカロミセス・セレビシエを含む群の4群
から選ばれる少なくとも1群が挙げられる。さらに、本
発明は、上記組成物を含む機能性食品である。以下、本
発明を詳細に説明する。
との混合微生物を培養(共棲培養)して得られる培養物
又はその処理物を含むものである。乳酸菌としてはラク
トバチルス属、ラクトコッカス属又はストレプトコッカ
ス属に属するもの、例えばラクトバチルス・デルブルエ
キイ(Lactobacillus delbrueckii)、ラクトバチルス・
アシドフィラス(Lactobacillus acidophilus)、ラクト
バチルス・プランタラム(Lactobacillus plantarum)、
ラクトバチルス・ファーメンタム(Lactobacillus ferme
ntum)、ラクトバチルス・カゼイ(Lactobacillus case
i)、ラクトバチルス・ラムノーサス(Lactobacillus rha
mnosus)、ラクトコッカス・ラクティス(Lactococcus l
actis)及びストレプトコッカス・サーモフィラス(Stre
ptococcus thermophilus)が挙げられる。酵母として
は、サッカロミセス・セレビシエ(Saccharomyces cerev
isiae)が挙げられる。
を用いることができるが、これらの微生物の共棲培養物
又はその処理物が機能性食品として利用することができ
る限り、当該微生物の特定の株に限定されるものではな
い。例えば、ラクトバチルス属に属する乳酸菌としては
ラクトバチルス・デルブルエキイALAL007株、ラクトバ
チルス・アシドフィラスALAL005株、ラクトバチルス・
プランタラムALAL006株、ラクトバチルス・ファーメン
タムALAL001株、JCM1173株、ラクトバチルス・カゼイAL
AL002株、ALAL003株、JCM1053株、ラクトバチルス・ラ
ムノーサスALAL004株、ALAL010株、JCM1136株等が挙げ
られ、ラクトコッカス属に属する乳酸菌としてはラクト
コッカス・ラクティス subsp. hordniae ALAL008株、AL
AL009株等が挙げられ、ストレプトコッカス属に属する
乳酸菌としてはストレプトコッカス・サーモフィラスAL
AL011株、ALAL012株等が挙げられ、酵母菌としては例え
ばサッカロミセス・セレビシエJCM1499株、ALAY001株、
ALAY002株、ALAY003株、ALAY004株が挙げられる。
1(Saccharomyces cerevisiae ALAY001)株、ラクトバ
チルス・ファーメンタムALAL001(Lactobacillus ferme
ntumALAL001)株、ラクトバチルス・カゼイALAL003(La
ctobacillus casei ALAL003)株及びラクトバチルス・
ラムノーサスALAL004(Lactobacillus rhamnosusALAL00
4)株は、工業技術院生命工学工業技術研究所に、平成9
年11月28日に、Saccharomyces cerevisiae ALAY001株に
ついてはFERM P-16535、Lactobacillus fermentum ALAL
001株についてはFERM P-16536、Lactobacillus casei A
LAL003株についてはFERM P-16537、及びLactobacillus
rhamnosus ALAL004 株についてはFERM P-16538としてそ
れぞれ寄託されている。
を任意に選択し、これと酵母1種類とを混合して混合微
生物とする。混合微生物の組み合わせとして、例えば表
1のAからD群に記載のものを用いることができる。
(微生物4株)として用いてもよく、2群以上を任意に
組み合わせて用いてもよい。但し、2群以上を組み合わ
せた場合に同種の微生物が重複するとき(例えばA群と
C群とを組み合わせたときのL.caseiやS.cerevisiaeが
重複するとき)は、それぞれ別の株を使用するものとす
る。本発明の組成物は、乳酸菌と酵母との混合微生物
を、大豆の熱水抽出液を含む培地で培養発酵させること
により得ることができる。
て、乳酸菌1種につき105〜106個/ml、酵母1種につき
104〜106個/mlをそれぞれ混合したのち上記培地に接種
し、20〜37℃で4〜10日培養する。複数の微生物群を組
み合わせる場合は、各群ごとに上記培養条件で培養した
後にそれぞれの群を混合し、上記培養条件で培養する方
法が採用される。培養終了後、煮沸殺菌(80℃)して培養
物を回収する。
のを凍結乾燥又は噴霧乾燥することにより得ることがで
きる。また、ろ過又は遠心分離等の処理を施すことによ
り培養上清と菌体とを分離してもよい。この場合も、培
養上清及び菌体については凍結乾燥又は噴霧乾燥するこ
とにより、いずれも本発明の組成物として調製すること
ができる。本発明の組成物の形態は任意に設定すること
ができ、液体、固体、顆粒等に加工することができる
が、顆粒状のものが取扱上便利である点で好ましい。顆
粒状に加工する場合は、サイクロデキストリン等の多糖
体との包摂物とする。
は、種々の作用を有することから機能性を有する健康食
品(機能性食品)として利用することができる。その作
用として、例えば肝及び腎機能改善作用、抗変異原性作
用、腫瘍細胞増殖抑制作用並びに腸内細菌叢改善作用等
が挙げられる。本発明の組成物は通常顆粒状に加工され
るので、機能性食品として利用する場合は、そのまま食
してもよく、適量を食品に添加してもよい。
ー等の菓子類、ジュース、紅茶、栄養ドリンク剤等の飲
料、米飯等が挙げられるが、これらに限定されるもので
はない。また、本発明の組成物の食品への混合量及び混
合割合は、食品当たり0.1 〜1重量%であるが、好みに
応じて適宜調整することができる。
説明する。但し、本発明はこれら実施例にその技術的範
囲を限定するものではない。 〔実施例1〕組成物の調製 表2に記載の通り、乳酸菌8種12株及び酵母1種4株の微
生物(計16株)を、乳酸菌3株と酵母1株との組合せを一
つの群としてA〜D群の4群に分けた。
株を含む各前培養液を接種(乳酸菌1株あたり105〜106/
ml 、酵母104〜105/ml)し、20〜37℃で5日〜10日間培
養した。その後、新たな培養培地中に各群ごとの培養液
を混合し、20〜37℃でさらに2〜5日培養した。培養後
加熱殺菌し、凍結乾燥により1リットルあたり90グラム
の乾燥物を得た。また、培養液をろ過することによって
上清を得、凍結乾燥により1リットル当たり40グラムの
乾燥物を得た。このようにして得られた組成物のうち、
培養物そのものから得たものをRS-II、培養上清から得
たものをRS-Iとした。
負荷肝障害ラットに対する影響) デオキシコール酸(以下DCA)はコール酸から腸内細菌
によって排泄される代表的な2次胆汁酸であり、毒性が
強く、実験動物において胆汁うっ滞性の肝障害を惹起す
る事が知られているほか、急性膵炎、大腸癌の原因とな
ることも報告されている。血中および胆汁中の胆汁酸量
とその組成は食生活や生理的状態により変化し、例えば
糖尿病患者や実験的糖尿病モデル動物では胆汁中のDCA
量の顕著に増加することが知られており、生体に与える
影響は重要である。
明の組成物の肝障害に対する影響について調べた。 (1) 方法 Wistar雄5週令のラットをチャールズリバーより購入
し、空調の整った飼育室(室温23±1℃、湿度50±5
%、照明時間午前8時〜午後8時)で1週間予備飼育し
た。6週令時に体重の平均とばらつきがほぼ等しくなる
ように1群を6匹として2群に分け、一群を本発明の組
成物投与群、他の一群を対照群とした。投与群には、0.
5%DCAと5%RS-Iとを混ぜたMF粉末飼料(オリエンタル
酵母工業社)を、対照群には0.5%DCAのみを混ぜたMF粉
末飼料のみを与え、6週間水道水とともに自由に摂取さ
せた。
より血液を採取し、血清を分離してGOT、GPT、BUN、U
A、CHL値を測定した。また、投与5週目には代謝ケージ
を用いて尿量を測定するとともに、尿中電解質濃度を測
定した。投与終了後、屠殺解剖し臓器重量を測定し、採
取した血液より血清を分離し、血清生化学的性状を分析
した。
急速に上昇し、対照群は2週目で1366±467(Karme
n)、4週目で5122±1848(Karmen)まで上昇した(図
1A)。これに対して、RS-I投与群では2週目で406±8
8(Karmen)であり、有意に(p<0.05)GOT活性の上昇が
抑制された。また、4週目でも1636±630(Karmen)で
あり、GOT活性の上昇が抑制される傾向が認められた
(図1A)。一方、血清GPT活性についても、GOT活性と
同様に上昇の抑制作用が認められた(図1B)。
その4および6週目において、対照群と比較して有意に
(p<0.01) 低い値を示した(図2)。なお、UAおよびCH
L値にRS-I投与の影響は認めらなかった。5週目におけ
る尿排泄量はRS-I投与群で多い傾向がみられ(図3
A)、摂水量に対する排泄の割合も大きい傾向がみられ
た(図3B)。
間に差はなかったが、尿量が投与群で多い傾向にあった
ことから、電解質排泄量は投与群で多い傾向にあった
(図4)。また、DCA の投与終了後における血清の生化
学分析ではTP、ALP 、γ-GTP、LAP 、GLU 、T-CHL 、LP
O 、β-LP 、ビリルビン値にRS-I投与の影響と思われる
変化は認められなかったが、血清総胆汁酸濃度は対照群
81±36(nmol/ml )に対してRS-I投与群では46±34(nm
ol/ml )であり、RS-I投与群は対照群と比較して血清総
胆汁酸濃度が低い傾向がみられた。
がRS-I投与により抑制される傾向がみられたことから、
RS-Iは肝機能障害の改善に有用であることが示された。
また、RS-I投与により血清BUN 値が低下したこと、及び
尿の排泄量が増加したことから、RS-Iは、腎機能障害に
対しても改善作用を有することがわかった。
に対する影響 本実施例では、実施例1におけるDCA 誘発モデルとは異
なる作用機作による肝障害に対し、RS-I投与の影響につ
いて調べた。 (1) 方法 Wistar雄5週令のラットをチャールズリバーより購入
し、空調の整った飼育室(室温23±1℃、湿度50±5
%、照明時間午前8時〜午後8時)で1週間予備飼育し
た。6週令時に体重の平均とばらつきがほぼ等しくなる
ように1群を6匹として2群に分け、一群を本発明の組
成物投与群、他の一群を対照群とした。投与群について
は5%RS-Iを混ぜたMF粉末飼料を、対照群にはMF粉末飼
料のみを与え、3週間水道水とともに自由に摂取させ
た。
塩酸塩をラット体重1kg あたり500mg 投与となるように
調製した水溶液約1ml を腹腔内に注射した。ガラクトサ
ミン投与後1日目、2日目、3日目および6日目に尾静
脈より血液を採取し、血清GOT 、CHL 、GLU 、BUN 値を
測定した。
し、1日目の対照群の血清GOT 値は5148±1711(Karme
n)まで上昇した(図5)。これに対して、RS-I投与群
では、1日目の血清GOT 値は2244±1241(Karmen)であ
った。従って、RS-Iを摂取させることにより、ガラクト
サミン投与によるGOT 活性の上昇が有意に(p<0.05) 抑
えられた(図5)。なお、血清CHL 、GLU 、BUN 値につ
いてはRS-I投与による影響は認められなかった。
影響 本実施例では、ジメチルヒドラジン(DMH) 誘発大腸発癌
マウスを用いて本発明の組成物の発癌抑制効果について
以下の実験を行った。 (1) 方法 CF#1マウス(理化学研究所にて系統を維持)を交配し、
雄のみ60匹を飼育した。当該系統のマウスはDMH に高感
受性で、特異的に大腸ポリープが誘発される。飼育は温
度23±1℃、湿度50±5%、照明時間午前8時〜午後8時
の条件下で行い、飼育飼料として(株)オリエンタル酵
母工業社製の特殊系繁殖用飼料(CMF) を水道水と共に自
由に与えた。
なるように1群に各20匹のマウスを用い(図6)、表3
に記載の3群(RS-II 投与群、RS-I投与群及び対照群)
に分け、表3に示す投与量で摂食させるとともに、DMH
溶液をマウスの腹腔内に体重あたり20mgを週に1回、10
週にわたり投与した。なお、対照群についてはCMF のみ
を与えた。
週目(40週令)に大腸ポリープ発症の観察を行った。 (2) 結果 ポリープの発症率は、対照群で94%であったのに対し、
RS-II投与群では65%であり、投与群は対照群と比較し
て有意(P<0.05) に低かった(図7A)。しかし、RS-I
投与群ではポリープの発症率は94%であり、対照群との
差は見られなかった。
は、対照群で4.0 ±2.7(平均±標準偏差)個であるの
に対して RS-II投与群では1.4±1.5個であり、 RS-II投
与群は対照群と比較して有意 (P<0.01) に少ない個数
であった(図7B)。また、RS-I投与群でも2.7±1.9個
であり、対照群と比較して有意(P<0.05)に少なかった
(図7B)。腫瘍サイズについては、対照群が3.1±1.8
mmであったのに対し、RS-II 投与群が2.5 ±1.3mmであ
り、RS-II 投与群は対照群と比較して有意(P<0.05) に
小さい腫瘍サイズを示した(図7C)。以上の結果よ
り、本発明の組成物は発癌抑制効果を有することが認め
られた。
試験 変異原性を有する物質の多くは発癌性があることが知ら
れている。実施例4の結果より、本発明の組成物は大腸
癌の発生を抑制することが認められたことから、本発明
の組成物は変異原性についても抑制効果を有することが
示唆される。
の組成物の影響を調べた。 (1) 実験方法 (i) 変異原物質 4-ニトロキノリン-1- オキシド (4NQO: 0.25μg/plat
e)、N-メチル-N'-ニトロ-N-ニトロソグアニジン (MNNG:
0.5 μg/plate)、3-アミノ-1-メチル-5H-ピリド(4,3-
b) インドールアセテート(Trp-P-2: 5 μg/plate)を各
々DMSOに溶解した。なお、Trp-P-2 は魚の焼け焦げな
ど、タンパク質やアミノ酸を焦がしたときに生ずる物質
である。また、MNNGは胃癌を発生させる物質である。
して、Salmonella typhmurium TA100(his+) 株を用い
た。TA100 株をNutrient Brothで一晩培養後、Na-Kバッ
ファーで洗浄し、菌浮遊液の最終濃度が2×109/ml程
度となるように調製した。RS-I乾燥物は各濃度で滅菌水
に溶解させた。試験管に各濃度のRS-I溶液、変異原物質
を100 μl 、S9ミックス又はNa-Kバッファーを0.5ml 、
供試菌液を0.5mlの順で加え、37℃30分間反応後、遠心
分離後上清を捨て、ヒスチジン(1μM)、ビオチン(1μM)
を含んだ軟寒天を加え、最小グルコース寒天培地に播い
た。これを37℃で培養し、2〜3日後にコロニー数を計
測した。
/plateで86%、Trp-P-2 は同0.5mg/plate で72%の突然
変異抑制率があった(図8)。DMN 、BP、DCAはそれぞ
れ20μg/plate 、20μg/plate 、0.5 μ g/plateの濃度
まで試験を行ったが、これらの物質によるTA100 株での
突然変異誘発は起こらず、RS-Iの抑制率に関しては検出
できなかった。以上の結果より、本発明の組成物は、4N
QO、MNNG及びTrp-P-2 に対し、抗変異原活性を有するこ
とが分かった。
腸内のビフィズス菌、乳酸菌などの有用菌の菌数を増加
させ、大腸菌等の有害菌の増殖を抑制することによって
ヒトの健康の増進に寄与する本発明の組成物の腸内菌叢
改善作用を試験したものである。
o)及びABCM培地(栄研)を含む培地を、嫌気性菌につ
いてはGAM 培地(日水製薬)またはヘミンーメナジオン
加GAM 培地及びABCM培地(栄研)を、小試験管にそれぞ
れ2mlずつ分注し、同じ培地に溶解したRS-Iを1%(w/
v )濃度になるように添加した。前培養した所定の菌
(表4)を含む菌液を終濃度105個/mlとなるように希釈し
て上記培地に添加し、37℃で18〜24時間培養した。濁度
は、マイクロプレートリーダー(Bio-Rad 社モデル355
0)を用いて655nm の吸光度を測定し、増殖の割合を対
照の濁度を100 としたときの相対値で表した。
フィズス菌、乳酸菌等の有用菌に対して増殖促進作用を
示した(表4上段)。その一方、大腸菌やバクテロイデス
等の有害菌に対しては増殖を抑制する作用が認められた
(表4下段)。本発明の組成物は、ヒトの腸内のビフィズ
ス菌、乳酸菌などの有用菌に対して増殖促進的に働き、
大腸菌などの有害菌に対しては増殖抑制効果が期待され
ることからヒトの健康の増進に貢献するところが多大で
ある。
生物の培養物又はその処理物を含む組成物及び該組成物
を含む機能性食品が提供される。
る。
る。
る。
る。
る。
る。
る。
工業技術研究所
工業技術研究所
工業技術研究所
工業技術研究所
工業技術研究所
工業技術研究所
工業技術研究所
工業技術研究所
Claims (3)
- 【請求項1】 ラクトバチルス・デルブルエキイ、ラク
トバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・プラン
タラム、ラクトバチルス・ファーメンタム、ラクトバチ
ルス・カゼイ、ラクトバチルス・ラムノーサス、ラクト
コッカス・ラクティス及びストレプトコッカス・サーモ
フィラスからなる群から選ばれる少なくとも3種類の乳
酸菌とサッカロミセス・セレビシエとの混合微生物の培
養物又はその処理物を含む組成物。 - 【請求項2】 混合微生物が、ラクトバチルス・デルブ
ルエキイ、ラクトバチルス・カゼイ、ラクトコッカス・
ラクティス及びサッカロミセス・セレビシエを含む群、
ラクトバチルス・アシドフィラス、ラクトバチルス・ラ
ムノーサス、ラクトコッカス・ラクティス及びサッカロ
ミセス・セレビシエを含む群、ラクトバチルス・プラン
タラム、ラクトバチルス・カゼイ、ストレプトコッカス
・サーモフィラス及びサッカロミセス・セレビシエを含
む群、並びにラクトバチルス・ファーメンタム、ラクト
バチルス・ラムノーサス、ストレプトコッカス・サーモ
フィラス及びサッカロミセス・セレビシエを含む群の4
群から選ばれる少なくとも1群である請求項1記載の組
成物。 - 【請求項3】 請求項1又は2記載の組成物を含む機能
性食品。
Priority Applications (7)
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|---|---|---|---|
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