JPH11243949A - Ｐｑｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造方法 - Google Patents
Ｐｑｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造方法Info
- Publication number
- JPH11243949A JPH11243949A JP10050817A JP5081798A JPH11243949A JP H11243949 A JPH11243949 A JP H11243949A JP 10050817 A JP10050817 A JP 10050817A JP 5081798 A JP5081798 A JP 5081798A JP H11243949 A JPH11243949 A JP H11243949A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- pqq
- glucose dehydrogenase
- prosthetic group
- protein
- amino acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 108010050375 Glucose 1-Dehydrogenase Proteins 0.000 title claims abstract description 155
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 24
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 100
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 69
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 47
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 45
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 35
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 35
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 30
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 claims abstract description 8
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 claims abstract description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 19
- 241000588624 Acinetobacter calcoaceticus Species 0.000 claims description 20
- 241000588626 Acinetobacter baumannii Species 0.000 claims description 17
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 claims description 14
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 claims description 14
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 13
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 12
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 12
- 239000006173 Good's buffer Substances 0.000 claims description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 9
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 8
- 241000589776 Pseudomonas putida Species 0.000 claims description 8
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 8
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims description 7
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 7
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000007993 MOPS buffer Substances 0.000 claims description 5
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 claims description 5
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical group OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 241001515939 male-killing Rickettsia from Adalia bipunctata Species 0.000 claims 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 22
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 22
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 10
- 239000008280 blood Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 abstract description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 abstract description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 abstract description 2
- MMXZSJMASHPLLR-UHFFFAOYSA-N pyrroloquinoline quinone Chemical compound C12=C(C(O)=O)C=C(C(O)=O)N=C2C(=O)C(=O)C2=C1NC(C(=O)O)=C2 MMXZSJMASHPLLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 154
- 108010000445 Glycerate dehydrogenase Proteins 0.000 description 64
- 108010029645 galactitol 2-dehydrogenase Proteins 0.000 description 64
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 58
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 33
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 32
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 25
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 21
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 20
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 20
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 17
- 229940023064 escherichia coli Drugs 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 13
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 12
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 12
- 101150019455 gdh gene Proteins 0.000 description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010011667 Ala-Phe-Ala Proteins 0.000 description 8
- YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N N-L-alpha-glutamyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCC(O)=O YBAFDPFAUTYYRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- NJGMALCNYAMYCB-JRQIVUDYSA-N Thr-Tyr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O NJGMALCNYAMYCB-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N Ala-Thr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O WNHNMKOFKCHKKD-BFHQHQDPSA-N 0.000 description 7
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 7
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 6
- KMSGYZQRXPUKGI-BYPYZUCNSA-N Gly-Gly-Asn Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O KMSGYZQRXPUKGI-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N Leu-Pro-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RRVCZCNFXIFGRA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 5
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 5
- IJVNLNRVDUTWDD-MEYUZBJRSA-N Thr-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O IJVNLNRVDUTWDD-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 5
- 239000000370 acceptor Substances 0.000 description 5
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 5
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 5
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 5
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- XQJAFSDFQZPYCU-UWJYBYFXSA-N Ala-Asn-Tyr Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N XQJAFSDFQZPYCU-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 4
- NHLAEBFGWPXFGI-WHFBIAKZSA-N Ala-Gly-Asn Chemical compound C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N NHLAEBFGWPXFGI-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N Ala-Gly-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)N PCIFXPRIFWKWLK-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- OKIKVSXTXVVFDV-MMWGEVLESA-N Ala-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N OKIKVSXTXVVFDV-MMWGEVLESA-N 0.000 description 4
- XHNLCGXYBXNRIS-BJDJZHNGSA-N Ala-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O XHNLCGXYBXNRIS-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- XRUJOVRWNMBAAA-NHCYSSNCSA-N Ala-Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C)CC1=CC=CC=C1 XRUJOVRWNMBAAA-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 4
- GHNDBBVSWOWYII-LPEHRKFASA-N Arg-Asn-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O GHNDBBVSWOWYII-LPEHRKFASA-N 0.000 description 4
- NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N Arg-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O NKNILFJYKKHBKE-WPRPVWTQSA-N 0.000 description 4
- UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N Arg-Leu-Asn Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N UHFUZWSZQKMDSX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- PSUXEQYPYZLNER-QXEWZRGKSA-N Arg-Val-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O PSUXEQYPYZLNER-QXEWZRGKSA-N 0.000 description 4
- OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N Asn-Gly-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N OLVIPTLKNSAYRJ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- OOWSBIOUKIUWLO-RCOVLWMOSA-N Asn-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O OOWSBIOUKIUWLO-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 4
- GIQCDTKOIPUDSG-GARJFASQSA-N Asn-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)C(=O)O GIQCDTKOIPUDSG-GARJFASQSA-N 0.000 description 4
- GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N Asn-Pro-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O GKKUBLFXKRDMFC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- SUIJFTJDTJKSRK-IHRRRGAJSA-N Asn-Pro-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SUIJFTJDTJKSRK-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- CBWCQCANJSGUOH-ZKWXMUAHSA-N Asn-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CBWCQCANJSGUOH-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- WCFCYFDBMNFSPA-ACZMJKKPSA-N Asp-Asp-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O WCFCYFDBMNFSPA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 4
- FANQWNCPNFEPGZ-WHFBIAKZSA-N Asp-Asp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O FANQWNCPNFEPGZ-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- QXHVOUSPVAWEMX-ZLUOBGJFSA-N Asp-Asp-Ser Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O QXHVOUSPVAWEMX-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N Asp-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N 0.000 description 4
- VSMYBNPOHYAXSD-GUBZILKMSA-N Asp-Lys-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VSMYBNPOHYAXSD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- GXHDGYOXPNQCKM-XVSYOHENSA-N Asp-Thr-Phe Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)O GXHDGYOXPNQCKM-XVSYOHENSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XFKUFUJECJUQTQ-CIUDSAMLSA-N Gln-Gln-Glu Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O XFKUFUJECJUQTQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- IKFZXRLDMYWNBU-YUMQZZPRSA-N Gln-Gly-Arg Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IKFZXRLDMYWNBU-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- HYPVLWGNBIYTNA-GUBZILKMSA-N Gln-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HYPVLWGNBIYTNA-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- LURQDGKYBFWWJA-MNXVOIDGSA-N Gln-Lys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N LURQDGKYBFWWJA-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 4
- JNVGVECJCOZHCN-DRZSPHRISA-N Gln-Phe-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JNVGVECJCOZHCN-DRZSPHRISA-N 0.000 description 4
- OSCLNNWLKKIQJM-WDSKDSINSA-N Gln-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O OSCLNNWLKKIQJM-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- UEILCTONAMOGBR-RWRJDSDZSA-N Gln-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O UEILCTONAMOGBR-RWRJDSDZSA-N 0.000 description 4
- VYOILACOFPPNQH-UMNHJUIQSA-N Gln-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N VYOILACOFPPNQH-UMNHJUIQSA-N 0.000 description 4
- VAZZOGXDUQSVQF-NUMRIWBASA-N Glu-Asn-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O VAZZOGXDUQSVQF-NUMRIWBASA-N 0.000 description 4
- INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N Glu-Ile-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O INGJLBQKTRJLFO-UKJIMTQDSA-N 0.000 description 4
- FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N Glu-Lys-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)C(=O)O FMBWLLMUPXTXFC-SDDRHHMPSA-N 0.000 description 4
- SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N Glu-Trp-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N)O SFKMXFWWDUGXRT-NWLDYVSISA-N 0.000 description 4
- 241000589232 Gluconobacter oxydans Species 0.000 description 4
- PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N Gly-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN PYTZFYUXZZHOAD-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- BULIVUZUDBHKKZ-WDSKDSINSA-N Gly-Gln-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BULIVUZUDBHKKZ-WDSKDSINSA-N 0.000 description 4
- QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N Gly-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CN QITBQGJOXQYMOA-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 4
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- BXICSAQLIHFDDL-YUMQZZPRSA-N Gly-Lys-Asn Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O BXICSAQLIHFDDL-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- WDXLKVQATNEAJQ-BQBZGAKWSA-N Gly-Pro-Asp Chemical compound NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WDXLKVQATNEAJQ-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 4
- PASHZZBXZYEXFE-LSDHHAIUSA-N Gly-Trp-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)NC(=O)CN)C(=O)O PASHZZBXZYEXFE-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 4
- UIQGJYUEQDOODF-KWQFWETISA-N Gly-Tyr-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 UIQGJYUEQDOODF-KWQFWETISA-N 0.000 description 4
- PNUFMLXHOLFRLD-KBPBESRZSA-N Gly-Tyr-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=C(O)C=C1 PNUFMLXHOLFRLD-KBPBESRZSA-N 0.000 description 4
- VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N His-Ala-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VSLXGYMEHVAJBH-DLOVCJGASA-N 0.000 description 4
- YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N His-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 YAALVYQFVJNXIV-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- HLYBGMZJVDHJEO-CYDGBPFRSA-N Ile-Arg-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N HLYBGMZJVDHJEO-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 4
- XENGULNPUDGALZ-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asn-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N XENGULNPUDGALZ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 4
- RGSOCXHDOPQREB-ZPFDUUQYSA-N Ile-Asp-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N RGSOCXHDOPQREB-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 4
- KFVUBLZRFSVDGO-BYULHYEWSA-N Ile-Gly-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O KFVUBLZRFSVDGO-BYULHYEWSA-N 0.000 description 4
- RTSQPLLOYSGMKM-DSYPUSFNSA-N Ile-Trp-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)N RTSQPLLOYSGMKM-DSYPUSFNSA-N 0.000 description 4
- REXAUQBGSGDEJY-IGISWZIWSA-N Ile-Tyr-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)N REXAUQBGSGDEJY-IGISWZIWSA-N 0.000 description 4
- NGKPIPCGMLWHBX-WZLNRYEVSA-N Ile-Tyr-Thr Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)O)N NGKPIPCGMLWHBX-WZLNRYEVSA-N 0.000 description 4
- SUPVSFFZWVOEOI-UHFFFAOYSA-N Leu-Ala-Tyr Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(C)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 SUPVSFFZWVOEOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N Leu-Asp-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DLFAACQHIRSQGG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N Leu-Asp-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O ULXYQAJWJGLCNR-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 4
- VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N Leu-Gly-His Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N VBZOAGIPCULURB-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N Leu-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O JNDYEOUZBLOVOF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 4
- YWKNKRAKOCLOLH-OEAJRASXSA-N Leu-Phe-Thr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 YWKNKRAKOCLOLH-OEAJRASXSA-N 0.000 description 4
- KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N Leu-Thr-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O KLSUAWUZBMAZCL-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 4
- HOMFINRJHIIZNJ-HOCLYGCPSA-N Leu-Trp-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)NCC(O)=O HOMFINRJHIIZNJ-HOCLYGCPSA-N 0.000 description 4
- FDBTVENULFNTAL-XQQFMLRXSA-N Leu-Val-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N FDBTVENULFNTAL-XQQFMLRXSA-N 0.000 description 4
- NFLFJGGKOHYZJF-BJDJZHNGSA-N Lys-Ala-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN NFLFJGGKOHYZJF-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N Lys-Ala-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O WSXTWLJHTLRFLW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- KPJJOZUXFOLGMQ-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Asn Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N KPJJOZUXFOLGMQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- IBQMEXQYZMVIFU-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N IBQMEXQYZMVIFU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N Lys-Asp-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IWWMPCPLFXFBAF-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N Lys-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 4
- UDXSLGLHFUBRRM-OEAJRASXSA-N Lys-Phe-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)O UDXSLGLHFUBRRM-OEAJRASXSA-N 0.000 description 4
- MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N Lys-Ser-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN MIFFFXHMAHFACR-KATARQTJSA-N 0.000 description 4
- CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N Lys-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O CAVRAQIDHUPECU-UVOCVTCTSA-N 0.000 description 4
- RPWQJSBMXJSCPD-XUXIUFHCSA-N Lys-Val-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCCCN)C(C)C)C(O)=O RPWQJSBMXJSCPD-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 4
- DRXODWRPPUFIAY-DCAQKATOSA-N Met-Asn-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN DRXODWRPPUFIAY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- NLDXSXDCNZIQCN-ULQDDVLXSA-N Met-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CCSC)CC1=CC=CC=C1 NLDXSXDCNZIQCN-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 4
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- QMMRHASQEVCJGR-UBHSHLNASA-N Phe-Ala-Pro Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 QMMRHASQEVCJGR-UBHSHLNASA-N 0.000 description 4
- WIVCOAKLPICYGY-KKUMJFAQSA-N Phe-Asp-Lys Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N WIVCOAKLPICYGY-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- BVHFFNYBKRTSIU-MEYUZBJRSA-N Phe-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BVHFFNYBKRTSIU-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 4
- RMKGXGPQIPLTFC-KKUMJFAQSA-N Phe-Lys-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O RMKGXGPQIPLTFC-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 4
- ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N Phe-Lys-His Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N ZIQQNOXKEFDPBE-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 4
- VIIRRNQMMIHYHQ-XHSDSOJGSA-N Phe-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)N VIIRRNQMMIHYHQ-XHSDSOJGSA-N 0.000 description 4
- FUVBEZJCRMHWEM-FXQIFTODSA-N Pro-Asn-Ser Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O FUVBEZJCRMHWEM-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- CJZTUKSFZUSNCC-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 CJZTUKSFZUSNCC-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- FFSLAIOXRMOFIZ-GJZGRUSLSA-N Pro-Gly-Trp Chemical compound N([C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)O)C(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 FFSLAIOXRMOFIZ-GJZGRUSLSA-N 0.000 description 4
- MRYUJHGPZQNOAD-IHRRRGAJSA-N Pro-Leu-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MRYUJHGPZQNOAD-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- QKDIHFHGHBYTKB-IHRRRGAJSA-N Pro-Ser-Phe Chemical compound N([C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 QKDIHFHGHBYTKB-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- 108010079005 RDV peptide Proteins 0.000 description 4
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- WTUJZHKANPDPIN-CIUDSAMLSA-N Ser-Ala-Lys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N WTUJZHKANPDPIN-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- OOKCGAYXSNJBGQ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O OOKCGAYXSNJBGQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N Ser-Asn-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO FIDMVVBUOCMMJG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- YPUSXTWURJANKF-KBIXCLLPSA-N Ser-Gln-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O YPUSXTWURJANKF-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 4
- YQQKYAZABFEYAF-FXQIFTODSA-N Ser-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O YQQKYAZABFEYAF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 4
- SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N Ser-Gly-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CO SFTZWNJFZYOLBD-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 4
- HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N Ser-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O HEUVHBXOVZONPU-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 4
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N Ser-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BSXKBOUZDAZXHE-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 4
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 4
- VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N Ser-Thr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VLMIUSLQONKLDV-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 4
- SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N Ser-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SIEBDTCABMZCLF-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- JTEICXDKGWKRRV-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O JTEICXDKGWKRRV-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N Thr-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O XDARBNMYXKUFOJ-GSSVUCPTSA-N 0.000 description 4
- FHDLKMFZKRUQCE-HJGDQZAQSA-N Thr-Glu-Arg Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O FHDLKMFZKRUQCE-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 4
- CQNFRKAKGDSJFR-NUMRIWBASA-N Thr-Glu-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N)O CQNFRKAKGDSJFR-NUMRIWBASA-N 0.000 description 4
- VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N Thr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VTVVYQOXJCZVEB-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 4
- MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O MEJHFIOYJHTWMK-VOAKCMCISA-N 0.000 description 4
- SPIFGZFZMVLPHN-UNQGMJICSA-N Thr-Val-Phe Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O SPIFGZFZMVLPHN-UNQGMJICSA-N 0.000 description 4
- IKUMWSDCGQVGHC-UMPQAUOISA-N Trp-Pro-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N)O IKUMWSDCGQVGHC-UMPQAUOISA-N 0.000 description 4
- MICSYKFECRFCTJ-IHRRRGAJSA-N Tyr-Arg-Asp Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N)O MICSYKFECRFCTJ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- OEVJGIHPQOXYFE-SRVKXCTJSA-N Tyr-Asn-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OEVJGIHPQOXYFE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 4
- GFHYISDTIWZUSU-QWRGUYRKSA-N Tyr-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O GFHYISDTIWZUSU-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 4
- JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N Tyr-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)N JJNXZIPLIXIGBX-HJPIBITLSA-N 0.000 description 4
- WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N Tyr-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WDGDKHLSDIOXQC-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 4
- KSGKJSFPWSMJHK-JNPHEJMOSA-N Tyr-Tyr-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KSGKJSFPWSMJHK-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 4
- YKBUNNNRNZZUID-UFYCRDLUSA-N Tyr-Val-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O YKBUNNNRNZZUID-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 4
- ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N Val-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N ZLFHAAGHGQBQQN-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 4
- ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N Val-Ala-Pro Natural products CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZLFHAAGHGQBQQN-GUBZILKMSA-N 0.000 description 4
- YCMXFKWYJFZFKS-LAEOZQHASA-N Val-Gln-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N YCMXFKWYJFZFKS-LAEOZQHASA-N 0.000 description 4
- ZEVNVXYRZRIRCH-GVXVVHGQSA-N Val-Gln-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N ZEVNVXYRZRIRCH-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 4
- CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N Val-Ile-Ala Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CPGJELLYDQEDRK-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 4
- AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N Val-Leu-Lys Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O AEMPCGRFEZTWIF-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 4
- UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N Val-Ser-Gly Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O UGFMVXRXULGLNO-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 4
- KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N Val-Ser-His Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)N KRAHMIJVUPUOTQ-DCAQKATOSA-N 0.000 description 4
- 108010044940 alanylglutamine Proteins 0.000 description 4
- 108010047495 alanylglycine Proteins 0.000 description 4
- 108010070783 alanyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 108010047857 aspartylglycine Proteins 0.000 description 4
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 4
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 4
- 108010078144 glutaminyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 108010082286 glycyl-seryl-alanine Proteins 0.000 description 4
- 108010048994 glycyl-tyrosyl-alanine Proteins 0.000 description 4
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 4
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 4
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 4
- 108010051673 leucyl-glycyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 4
- 108010057821 leucylproline Proteins 0.000 description 4
- 108010003700 lysyl aspartic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010017391 lysylvaline Proteins 0.000 description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 4
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 4
- 108010074082 phenylalanyl-alanyl-lysine Proteins 0.000 description 4
- 108010012581 phenylalanylglutamate Proteins 0.000 description 4
- 108010070643 prolylglutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 4
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 4
- 108010015385 valyl-prolyl-proline Proteins 0.000 description 4
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RVMXMLSYBTXCAV-VEVYYDQMSA-N Asp-Pro-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RVMXMLSYBTXCAV-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 3
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 3
- NNQHEEQNPQYPGL-FXQIFTODSA-N Gln-Ala-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O NNQHEEQNPQYPGL-FXQIFTODSA-N 0.000 description 3
- ZPDVKYLJTOFQJV-WDSKDSINSA-N Gln-Asn-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)NCC(O)=O ZPDVKYLJTOFQJV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 3
- FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N Gly-Asn-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)CN FMNHBTKMRFVGRO-FOHZUACHSA-N 0.000 description 3
- NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N Gly-Glu-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)CN NTOWAXLMQFKJPT-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 3
- UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N Gly-Leu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CN UHPAZODVFFYEEL-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 3
- WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N Gly-Phe-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 WMGHDYWNHNLGBV-ONGXEEELSA-N 0.000 description 3
- UPJODPVSKKWGDQ-KLHWPWHYSA-N His-Thr-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O UPJODPVSKKWGDQ-KLHWPWHYSA-N 0.000 description 3
- DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N His-Thr-Tyr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)N)O DEMIXZCKUXVEBO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 3
- YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N Ile-Lys-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O YSGBJIQXTIVBHZ-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 3
- UDBPXJNOEWDBDF-XUXIUFHCSA-N Ile-Lys-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N UDBPXJNOEWDBDF-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 3
- UYNXBNHVWFNVIN-HJWJTTGWSA-N Ile-Phe-Arg Chemical compound NC(N)=NCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)CC)CC1=CC=CC=C1 UYNXBNHVWFNVIN-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 3
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 3
- VQHUBNVKFFLWRP-ULQDDVLXSA-N Leu-Tyr-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 VQHUBNVKFFLWRP-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 3
- NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N Lys-Asp-Tyr Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTBFKPBULZGXQL-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 3
- 239000007987 MES buffer Substances 0.000 description 3
- JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N Met-Gly-Lys Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN JACAKCWAOHKQBV-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 3
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 3
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 3
- 101500006448 Mycobacterium bovis (strain ATCC BAA-935 / AF2122/97) Endonuclease PI-MboI Proteins 0.000 description 3
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 3
- BEEVXUYVEHXWRQ-YESZJQIVSA-N Phe-His-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CN=CN2)NC(=O)[C@H](CC3=CC=CC=C3)N)C(=O)O BEEVXUYVEHXWRQ-YESZJQIVSA-N 0.000 description 3
- MDAWMJUZHBQTBO-XGEHTFHBSA-N Pro-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)O MDAWMJUZHBQTBO-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N Thr-Lys-Glu Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O SCSVNSNWUTYSFO-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- QSPOLEBZTMESFY-SRVKXCTJSA-N Val-Pro-Val Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QSPOLEBZTMESFY-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 3
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 3
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 3
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 3
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 3
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 3
- 102220201851 rs143406017 Human genes 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000401503 Acinetobacter baumannii JCM 6841 Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PHOQVHQSTUBQQK-SQOUGZDYSA-N D-glucono-1,5-lactone Chemical compound OC[C@H]1OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O PHOQVHQSTUBQQK-SQOUGZDYSA-N 0.000 description 2
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 2
- 241000589565 Flavobacterium Species 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N Leu-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O KZZCOWMDDXDKSS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N Pyruvic acid Chemical compound CC(=O)C(O)=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 2
- MOINZPRHJGTCHZ-MMWGEVLESA-N Ser-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N MOINZPRHJGTCHZ-MMWGEVLESA-N 0.000 description 2
- ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N Ser-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N ANOQEBQWIAYIMV-AEJSXWLSSA-N 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 2
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 229960003681 gluconolactone Drugs 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 108091035539 telomere Proteins 0.000 description 2
- 102000055501 telomere Human genes 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUPXYSSGJWIURR-UHFFFAOYSA-N 3-octoxypropane-1,2-diol Chemical compound CCCCCCCCOCC(O)CO GUPXYSSGJWIURR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589220 Acetobacter Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- OQCPATDFWYYDDX-HGNGGELXSA-N Ala-Gln-His Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(O)=O OQCPATDFWYYDDX-HGNGGELXSA-N 0.000 description 1
- HYIDEIQUCBKIPL-CQDKDKBSSA-N Ala-Phe-His Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O)N HYIDEIQUCBKIPL-CQDKDKBSSA-N 0.000 description 1
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- PBSQFBAJKPLRJY-BYULHYEWSA-N Asn-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PBSQFBAJKPLRJY-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 241000305071 Enterobacterales Species 0.000 description 1
- 101000925662 Enterobacteria phage PRD1 Endolysin Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241001131785 Escherichia coli HB101 Species 0.000 description 1
- 241001302584 Escherichia coli str. K-12 substr. W3110 Species 0.000 description 1
- ZQYZDDXTNQXUJH-CIUDSAMLSA-N Glu-Met-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N ZQYZDDXTNQXUJH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 241000589236 Gluconobacter Species 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N Leu-Gly-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 KEVYYIMVELOXCT-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- VEGLGAOVLFODGC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VEGLGAOVLFODGC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N Lys-Leu-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O MUXNCRWTWBMNHX-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- VWPJQIHBBOJWDN-DCAQKATOSA-N Lys-Val-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O VWPJQIHBBOJWDN-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000589323 Methylobacterium Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- LGBVMDMZZFYSFW-HJWJTTGWSA-N Phe-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N LGBVMDMZZFYSFW-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- INXAPZFIOVGHSV-CIUDSAMLSA-N Pro-Asn-Gln Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 INXAPZFIOVGHSV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VVAWNPIOYXAMAL-KJEVXHAQSA-N Pro-Thr-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VVAWNPIOYXAMAL-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N Pro-Val-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 YDTUEBLEAVANFH-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- 241000589774 Pseudomonas sp. Species 0.000 description 1
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 1
- PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N Ser-Lys-Asp Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O PPNPDKGQRFSCAC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- LYGKYFKSZTUXGZ-ZDLURKLDSA-N Thr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O LYGKYFKSZTUXGZ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N Thr-Gly-Val Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O JKGGPMOUIAAJAA-YEPSODPASA-N 0.000 description 1
- GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N Thr-Pro-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O GVMXJJAJLIEASL-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- CVXURBLRELTJKO-BWAGICSOSA-N Tyr-His-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N)O CVXURBLRELTJKO-BWAGICSOSA-N 0.000 description 1
- UBKKNELWDCBNCF-STQMWFEESA-N Tyr-Met-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 UBKKNELWDCBNCF-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003463 adsorbent Substances 0.000 description 1
- 238000005377 adsorption chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 108010048916 alcohol dehydrogenase (acceptor) Proteins 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005515 coenzyme Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 108010006664 gamma-glutamyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000010297 mechanical methods and process Methods 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N para-benzoquinone Natural products O=C1C=CC(=O)C=C1 AZQWKYJCGOJGHM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 229940107700 pyruvic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- -1 quinone compound Chemical class 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 239000006152 selective media Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M sodium lauroyl sarcosinate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC([O-])=O KSAVQLQVUXSOCR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000002525 ultrasonication Methods 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 遺伝子組換え技術により、低コストでしかも
多量のＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼを提供する。 【解決手段】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を
組み込んでなる組換えベクターによりＰＱＱ生産能を有
する微生物を形質転換することによって得られた形質転
換体を培養し、該培養物から採取されるＰＱＱを補欠分
子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造
方法。
多量のＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼを提供する。 【解決手段】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を
組み込んでなる組換えベクターによりＰＱＱ生産能を有
する微生物を形質転換することによって得られた形質転
換体を培養し、該培養物から採取されるＰＱＱを補欠分
子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造
方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＰＱＱを補欠分子
族とする新規なグルコースデヒドロゲナーゼ（以下、Ｇ
ＤＨとも言う）、該ＧＤＨをコードする遺伝子、該ＧＤ
Ｈをコードする遺伝子断片を組み込んでなる組換えベク
ター、該組換えベクターでＰＱＱ生産能を有する微生物
が形質転換された形質転換体、該形質転換体を培養する
ことによるＧＤＨの製造方法、ＧＤＨの安定化方法なら
びに該安定化方法により安定化されたＧＤＨ組成物に関
する。
族とする新規なグルコースデヒドロゲナーゼ（以下、Ｇ
ＤＨとも言う）、該ＧＤＨをコードする遺伝子、該ＧＤ
Ｈをコードする遺伝子断片を組み込んでなる組換えベク
ター、該組換えベクターでＰＱＱ生産能を有する微生物
が形質転換された形質転換体、該形質転換体を培養する
ことによるＧＤＨの製造方法、ＧＤＨの安定化方法なら
びに該安定化方法により安定化されたＧＤＨ組成物に関
する。
【０００２】
【従来の技術】ＧＤＨは、１９５９年にノルウェーのJ.
G.Hauge によって未知のキノン化合物を有する酵素とし
て発見された。一方、ＰＱＱ（Pyrrolo Quinoline Quin
one ）は脱水素酵素の第三の補酵素として、１９７９年
にその化学構造が決定されており、メタノール資化性菌
のメタノール脱水素酵素や酢酸菌のアルコール脱水素酵
素やグルコース脱水素酵素を中心に、多くの生物におい
て、主として脱水素酵素でその存在が確認されている。
G.Hauge によって未知のキノン化合物を有する酵素とし
て発見された。一方、ＰＱＱ（Pyrrolo Quinoline Quin
one ）は脱水素酵素の第三の補酵素として、１９７９年
にその化学構造が決定されており、メタノール資化性菌
のメタノール脱水素酵素や酢酸菌のアルコール脱水素酵
素やグルコース脱水素酵素を中心に、多くの生物におい
て、主として脱水素酵素でその存在が確認されている。
【０００３】これらの脱水素酵素は人工電子受容体を還
元できるので、ニトロブルーテトラゾリウムのような色
素を用いると可視光で、しかも感度よく検出できるこ
と、およびＮＡＤ依存性脱水素酵素のように平衡反応で
はなく一方向への反応であるので、微量の化合物の定量
に極めて有用であるとされている（飴山実、Methods in
Enzymol. 第８９巻，２０（１９８２））。
元できるので、ニトロブルーテトラゾリウムのような色
素を用いると可視光で、しかも感度よく検出できるこ
と、およびＮＡＤ依存性脱水素酵素のように平衡反応で
はなく一方向への反応であるので、微量の化合物の定量
に極めて有用であるとされている（飴山実、Methods in
Enzymol. 第８９巻，２０（１９８２））。
【０００４】ＰＱＱを補欠分子族とする酵素の中で最も
有用性が高いのは、ＰＱＱ依存性ＧＤＨであり、血糖の
測定に用いることができる。実際の使用に関しては、通
常の生化学試薬としての使用はもちろん、膜に固定した
ドライ試薬の呈色反応やチップに固定したセンサー用途
等幅広く応用することが可能である。グルコースに同様
に作用するグルコースオキシダーゼやＮＡＤ（Ｐ）依存
性ＧＤＨと比較し、溶存酸素の影響を受けないことや、
反応がシンプルなためデバイスを簡単に、しかも安価に
できることが特徴である。
有用性が高いのは、ＰＱＱ依存性ＧＤＨであり、血糖の
測定に用いることができる。実際の使用に関しては、通
常の生化学試薬としての使用はもちろん、膜に固定した
ドライ試薬の呈色反応やチップに固定したセンサー用途
等幅広く応用することが可能である。グルコースに同様
に作用するグルコースオキシダーゼやＮＡＤ（Ｐ）依存
性ＧＤＨと比較し、溶存酸素の影響を受けないことや、
反応がシンプルなためデバイスを簡単に、しかも安価に
できることが特徴である。
【０００５】上記ＰＱＱを補欠分子族とするＧＤＨのク
ローニングはアシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus ）LMD79.41（A.-M.Cle
ton-Jansenら，J.Bacteriol.，１７０，２１２１（１９
８８）およびMol.Gen.Genet.，２１７，４３０（１９８
９））、エシェリヒア・コリ（Escherichiacoli ）（A.
-M.Cleton-Jansenら，J.Bacteriol.，１７２，６３０８
（１９９０））、グルコノバクター・オキシダンス（Gl
uconobacter oxydans ）（Mol.Gen.Genet.，２２９，２
０６（１９９１））等で報告されており、大腸菌での発
現も確認されている。
ローニングはアシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus ）LMD79.41（A.-M.Cle
ton-Jansenら，J.Bacteriol.，１７０，２１２１（１９
８８）およびMol.Gen.Genet.，２１７，４３０（１９８
９））、エシェリヒア・コリ（Escherichiacoli ）（A.
-M.Cleton-Jansenら，J.Bacteriol.，１７２，６３０８
（１９９０））、グルコノバクター・オキシダンス（Gl
uconobacter oxydans ）（Mol.Gen.Genet.，２２９，２
０６（１９９１））等で報告されており、大腸菌での発
現も確認されている。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】遺伝的によく解析され
ており、かつ形質転換する宿主として最適化されている
大腸菌をはじめとする腸内細菌はＰＱＱを産生しないこ
とが知られており、もしＰＱＱを補欠分子族とするＧＤ
Ｈをコードする遺伝子断片を組み込んでなるベクターで
大腸菌を形質転換し、該大腸菌を培養しても活性のない
アポ型ＧＤＨしか得られないことが知られている。これ
らのアポ型ＧＤＨは外からＰＱＱを加えることにより活
性のあるホロ型ＧＤＨに変換可能であるが、必要とする
ＰＱＱは試薬として非常に高価である。また、工業的ス
ケールでは全てのアポ型がホロ型に変換されないことが
確認されている。
ており、かつ形質転換する宿主として最適化されている
大腸菌をはじめとする腸内細菌はＰＱＱを産生しないこ
とが知られており、もしＰＱＱを補欠分子族とするＧＤ
Ｈをコードする遺伝子断片を組み込んでなるベクターで
大腸菌を形質転換し、該大腸菌を培養しても活性のない
アポ型ＧＤＨしか得られないことが知られている。これ
らのアポ型ＧＤＨは外からＰＱＱを加えることにより活
性のあるホロ型ＧＤＨに変換可能であるが、必要とする
ＰＱＱは試薬として非常に高価である。また、工業的ス
ケールでは全てのアポ型がホロ型に変換されないことが
確認されている。
【０００７】また、Biotechnol.Lett.，１６，１２，１
２６５（１９９４）には形質転換大腸菌を培養する際、
培地にＰＱＱを加えて活性のあるホロ型ＧＤＨを生産す
ることが報告されているが、この場合も高価なＰＱＱを
多量に用いる必要がある。さらに、Mol.Gen.Genet.，２
２９，２０６（１９９１）には、グルコノバクター・オ
キシダンスのＧＤＨをコードする遺伝子断片をグルコノ
バクター・オキシダンス自身の染色体に組み込んで発現
させているが、この場合は染色体上に存在し、多コピー
ではないため発現量は小さい。
２６５（１９９４）には形質転換大腸菌を培養する際、
培地にＰＱＱを加えて活性のあるホロ型ＧＤＨを生産す
ることが報告されているが、この場合も高価なＰＱＱを
多量に用いる必要がある。さらに、Mol.Gen.Genet.，２
２９，２０６（１９９１）には、グルコノバクター・オ
キシダンスのＧＤＨをコードする遺伝子断片をグルコノ
バクター・オキシダンス自身の染色体に組み込んで発現
させているが、この場合は染色体上に存在し、多コピー
ではないため発現量は小さい。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記目的を
達成するために種々検討した結果、ＰＱＱを補欠分子族
とするＧＤＨをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を組
込んでなる組換えベクターによりＰＱＱ生産能を有する
微生物を形質転換することによって得られた形質転換微
生物を培養し、該培養物からＰＱＱを補欠分子族とする
ＧＤＨを採取することによって、安価にＧＤＨを大量生
産できることを見出し、本発明に到達した。
達成するために種々検討した結果、ＰＱＱを補欠分子族
とするＧＤＨをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を組
込んでなる組換えベクターによりＰＱＱ生産能を有する
微生物を形質転換することによって得られた形質転換微
生物を培養し、該培養物からＰＱＱを補欠分子族とする
ＧＤＨを採取することによって、安価にＧＤＨを大量生
産できることを見出し、本発明に到達した。
【０００９】すなわち、本発明は、ＰＱＱを補欠分子族
とするＧＤＨをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を組
込んでなる組換えベクターでＰＱＱ生産能を有する微生
物を形質転換することによって得られることを特徴とす
る形質転換微生物を、培養して培養物からＰＱＱを補欠
分子族とするＧＤＨを採取すること特徴とするＧＤＨの
製造方法である。
とするＧＤＨをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片を組
込んでなる組換えベクターでＰＱＱ生産能を有する微生
物を形質転換することによって得られることを特徴とす
る形質転換微生物を、培養して培養物からＰＱＱを補欠
分子族とするＧＤＨを採取すること特徴とするＧＤＨの
製造方法である。
【００１０】本発明は、以下の（ａ）または（ｂ）のタ
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼである。 （ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号１に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼである。
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼである。 （ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号１に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼである。
【００１１】本発明は、以下の（ｅ）または（ｆ）のタ
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼである。 （ｅ）配列表・配列番号３に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号３に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼである。
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼである。 （ｅ）配列表・配列番号３に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号３に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼである。
【００１２】本発明は、以下の（ａ）または（ｂ）のタ
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号１に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子であ
る。
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号１に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子であ
る。
【００１３】本発明は、以下の（ｃ）または（ｄ）のタ
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ｃ）配列表・配列番号２に記載された塩基配列からな
るＤＮＡ （ｄ）上記（ｃ）の配列において、１もしくは数個の塩
基が欠失、置換もしくは付加されており、かつグルコー
スデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードす
るＤＮＡ 本発明は、配列表・配列番号２に記載される塩基配列か
らなるＤＮＡを有するＰＱＱを補欠分子族とするグルコ
ースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ｃ）配列表・配列番号２に記載された塩基配列からな
るＤＮＡ （ｄ）上記（ｃ）の配列において、１もしくは数個の塩
基が欠失、置換もしくは付加されており、かつグルコー
スデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードす
るＤＮＡ 本発明は、配列表・配列番号２に記載される塩基配列か
らなるＤＮＡを有するＰＱＱを補欠分子族とするグルコ
ースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。
【００１４】本発明は、以下の（ｅ）または（ｆ）のタ
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ｅ）配列表・配列番号３に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号３に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子であ
る。
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ｅ）配列表・配列番号３に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 本発明は、配列表・配列番号３に記載されるアミノ酸配
列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子であ
る。
【００１５】本発明は、以下の（ｇ）または（ｈ）のタ
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ｇ）配列表・配列番号４に記載された塩基配列からな
るＤＮＡ （ｈ）上記（ｇ）の配列において、１もしくは数個の塩
基が欠失、置換もしくは付加されており、かつグルコー
スデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードし
ているＤＮＡ 本発明は、配列表・配列番号４に記載される塩基配列か
らなるＤＮＡを有するＰＱＱを補欠分子族とするグルコ
ースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。
ンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。 （ｇ）配列表・配列番号４に記載された塩基配列からな
るＤＮＡ （ｈ）上記（ｇ）の配列において、１もしくは数個の塩
基が欠失、置換もしくは付加されており、かつグルコー
スデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードし
ているＤＮＡ 本発明は、配列表・配列番号４に記載される塩基配列か
らなるＤＮＡを有するＰＱＱを補欠分子族とするグルコ
ースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子である。
【００１６】本発明は、上記ＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含有
する組換えベクターである。本発明は、ＰＱＱを補欠分
子族とするグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺
伝子を含むＤＮＡ断片が組み込まれ、かつＰＱＱ生産能
を有する微生物において複製できることを特徴とする上
記組換えベクターである。
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含有
する組換えベクターである。本発明は、ＰＱＱを補欠分
子族とするグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺
伝子を含むＤＮＡ断片が組み込まれ、かつＰＱＱ生産能
を有する微生物において複製できることを特徴とする上
記組換えベクターである。
【００１７】本発明は、上記の組換えベクターでＰＱＱ
生産能を有する微生物を形質転換した形質転換体であ
る。本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼがアシネトバクター・カルコアセティカ
ス（Acinetobacter calcoaceticus ）もしくはアシネト
バクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）由
来である上記形質転換体である。本発明は、ＰＱＱ生産
能を有する微生物がシュードモナス（Pseudomonas ）属
またはアシネトバクター（Acinetobacter ）属に属する
微生物である上記形質転換体である。
生産能を有する微生物を形質転換した形質転換体であ
る。本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデ
ヒドロゲナーゼがアシネトバクター・カルコアセティカ
ス（Acinetobacter calcoaceticus ）もしくはアシネト
バクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）由
来である上記形質転換体である。本発明は、ＰＱＱ生産
能を有する微生物がシュードモナス（Pseudomonas ）属
またはアシネトバクター（Acinetobacter ）属に属する
微生物である上記形質転換体である。
【００１８】本発明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物が
シュードモナス・エルギノサ（Pseudomonas aeruginos
a）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas
fluorescens ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomon
as putida）、アシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus ）、アシネトバクター
・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）からなる群
より選ばれた微生物である上記形質転換体である。本発
明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュードモナス・
プチダ（Pseudomonas putida）である上記形質転換体で
ある。本発明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物がアシネ
トバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calc
oaceticus ）もしくはアシネトバクター・バウマンニ
（Acinetobacter baumannii ）である上記の形質転換体
である。本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグルコー
スデヒドロゲナーゼが可溶性である上記形質転換体であ
る。
シュードモナス・エルギノサ（Pseudomonas aeruginos
a）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas
fluorescens ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomon
as putida）、アシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus ）、アシネトバクター
・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）からなる群
より選ばれた微生物である上記形質転換体である。本発
明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュードモナス・
プチダ（Pseudomonas putida）である上記形質転換体で
ある。本発明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物がアシネ
トバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calc
oaceticus ）もしくはアシネトバクター・バウマンニ
（Acinetobacter baumannii ）である上記の形質転換体
である。本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグルコー
スデヒドロゲナーゼが可溶性である上記形質転換体であ
る。
【００１９】本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグル
コースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含むＤＮ
Ａ断片を組込んでなる組換えベクターでＰＱＱ生産能を
有する微生物が形質転換された形質転換微生物を培養し
て、該培養物からＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼを採取するグルコースデヒドロゲナー
ゼの製造方法である。
コースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含むＤＮ
Ａ断片を組込んでなる組換えベクターでＰＱＱ生産能を
有する微生物が形質転換された形質転換微生物を培養し
て、該培養物からＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼを採取するグルコースデヒドロゲナー
ゼの製造方法である。
【００２０】本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグル
コースデヒドロゲナーゼがアシネトバクター・カルコア
セティカス（Acinetobacter calcoaceticus ）もしくは
アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter bauman
nii ）由来の微生物である上記のグルコースデヒドロゲ
ナーゼの製造方法である。本発明は、ＰＱＱ生産能を有
する微生物がシュードモナス（Pseudomonas ）属または
アシネトバクター（Acinetobacter ）属に属する微生物
である上記グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法であ
る。
コースデヒドロゲナーゼがアシネトバクター・カルコア
セティカス（Acinetobacter calcoaceticus ）もしくは
アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacter bauman
nii ）由来の微生物である上記のグルコースデヒドロゲ
ナーゼの製造方法である。本発明は、ＰＱＱ生産能を有
する微生物がシュードモナス（Pseudomonas ）属または
アシネトバクター（Acinetobacter ）属に属する微生物
である上記グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法であ
る。
【００２１】本発明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物が
シュードモナス・エルギノサ（Pseudomonas aeruginos
a）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas
fluorescens ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomon
as putida）、アシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus ）、アシネトバクター
・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）からなる群
より選ばれた微生物である上記グルコースデヒドロゲナ
ーゼの製造方法である。本発明は、ＰＱＱ生産能を有す
る微生物がシュードモナス・プチダ（Pseudomonas puti
da）である上記グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法
である。本発明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物がアシ
ネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter ca
lcoaceticus ）もしくはアシネトバクター・バウマンニ
（Acinetobacter baumannii ）である上記グルコースデ
ヒドロゲナーゼの製造方法である。本発明は、ＰＱＱを
補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼが可溶性
である上記グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法であ
る。
シュードモナス・エルギノサ（Pseudomonas aeruginos
a）、シュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas
fluorescens ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomon
as putida）、アシネトバクター・カルコアセティカス
（Acinetobacter calcoaceticus ）、アシネトバクター
・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）からなる群
より選ばれた微生物である上記グルコースデヒドロゲナ
ーゼの製造方法である。本発明は、ＰＱＱ生産能を有す
る微生物がシュードモナス・プチダ（Pseudomonas puti
da）である上記グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法
である。本発明は、ＰＱＱ生産能を有する微生物がアシ
ネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter ca
lcoaceticus ）もしくはアシネトバクター・バウマンニ
（Acinetobacter baumannii ）である上記グルコースデ
ヒドロゲナーゼの製造方法である。本発明は、ＰＱＱを
補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼが可溶性
である上記グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法であ
る。
【００２２】本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグル
コースデヒドロゲナーゼをＧＯＯＤの緩衝液の存在下に
凍結乾燥して保持することを特徴とするグルコースデヒ
ドロゲナーゼの安定化方法である。本発明は、カルシウ
ムが共存する上記グルコースデヒドロゲナーゼの安定化
方法である。本発明は、ＧＯＯＤの緩衝液がＰＩＰＥ
Ｓ、ＭＥＳ、ＭＯＰＳからなる群より選ばれた緩衝液で
ある上記グルコースデヒドロゲナーゼの安定化方法であ
る。
コースデヒドロゲナーゼをＧＯＯＤの緩衝液の存在下に
凍結乾燥して保持することを特徴とするグルコースデヒ
ドロゲナーゼの安定化方法である。本発明は、カルシウ
ムが共存する上記グルコースデヒドロゲナーゼの安定化
方法である。本発明は、ＧＯＯＤの緩衝液がＰＩＰＥ
Ｓ、ＭＥＳ、ＭＯＰＳからなる群より選ばれた緩衝液で
ある上記グルコースデヒドロゲナーゼの安定化方法であ
る。
【００２３】本発明は、ＰＱＱを補欠分子族とするグル
コースデヒドロゲナーゼをＧＯＯＤの緩衝液の存在下に
凍結乾燥して保持されたものであることを特徴とする安
定化されたグルコースデヒドロゲナーゼ組成物である。
本発明は、カルシウムが共存する上記のグルコースデヒ
ドロゲナーゼ組成物である。本発明は、ＧＯＯＤの緩衝
液がＰＩＰＥＳ、ＭＥＳ、ＭＯＰＳからなる群より選ば
れた緩衝液である上記のグルコースデヒドロゲナーゼ組
成物である。
コースデヒドロゲナーゼをＧＯＯＤの緩衝液の存在下に
凍結乾燥して保持されたものであることを特徴とする安
定化されたグルコースデヒドロゲナーゼ組成物である。
本発明は、カルシウムが共存する上記のグルコースデヒ
ドロゲナーゼ組成物である。本発明は、ＧＯＯＤの緩衝
液がＰＩＰＥＳ、ＭＥＳ、ＭＯＰＳからなる群より選ば
れた緩衝液である上記のグルコースデヒドロゲナーゼ組
成物である。
【００２４】
【発明の実施の形態】本発明のＰＱＱを補欠分子族とす
るＧＤＨをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片は、ＧＤ
Ｈ生産菌より得ることができる。該ＧＤＨ生産菌とし
て、具体的には、例えばアシネトバクター・カルコアセ
ティカス、アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobac
ter baumannii ）、シュードモナス・エルギノサ（Pseu
domonasaeruginosa）、シュードモナス・プチダ（Pseud
omonas putida）、シュードモナス・フルオレッセンス
（Pseudomonas fluorescens ）、グルコノバクター・オ
キシダンス等の酸化細菌やアグロバクテリウム・ラジオ
バクター（Agrobacteriumradiobacter ）、エシェリヒ
ア・コリ、クレブシーラ・エーロジーンズ（Klebsiella
aerogenes）等の腸内細菌を挙げることができる。なか
でも、アシネトバクター・カルコアセティカスもしくは
アシネトバクター・バウマンニの可溶性ＧＤＨが好まし
い。
るＧＤＨをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片は、ＧＤ
Ｈ生産菌より得ることができる。該ＧＤＨ生産菌とし
て、具体的には、例えばアシネトバクター・カルコアセ
ティカス、アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobac
ter baumannii ）、シュードモナス・エルギノサ（Pseu
domonasaeruginosa）、シュードモナス・プチダ（Pseud
omonas putida）、シュードモナス・フルオレッセンス
（Pseudomonas fluorescens ）、グルコノバクター・オ
キシダンス等の酸化細菌やアグロバクテリウム・ラジオ
バクター（Agrobacteriumradiobacter ）、エシェリヒ
ア・コリ、クレブシーラ・エーロジーンズ（Klebsiella
aerogenes）等の腸内細菌を挙げることができる。なか
でも、アシネトバクター・カルコアセティカスもしくは
アシネトバクター・バウマンニの可溶性ＧＤＨが好まし
い。
【００２５】該ＧＤＨをコードする遺伝子はこれらの菌
株より抽出してもよく、また化学的に合成することもで
きる。さらに、ＰＣＲ法の利用により、ＰＱＱを補欠分
子族とするグルコースデヒドロゲナーゼ遺伝子を含むＤ
ＮＡ断片を得ることも可能である。
株より抽出してもよく、また化学的に合成することもで
きる。さらに、ＰＣＲ法の利用により、ＰＱＱを補欠分
子族とするグルコースデヒドロゲナーゼ遺伝子を含むＤ
ＮＡ断片を得ることも可能である。
【００２６】上記ＧＤＨをコードする遺伝子としては、
例えば（ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸
配列からなるタンパク質をコードする遺伝子、または
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグル
コースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子が挙げられ
る。
例えば（ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸
配列からなるタンパク質をコードする遺伝子、または
（ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族とするグル
コースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子が挙げられ
る。
【００２７】また、（ｅ）配列表・配列番号３に記載さ
れたアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝
子、または（ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もし
くは数個のアミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加され
たアミノ酸配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナ
ーゼ活性を有するタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族
とするグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子
も挙げることができる。
れたアミノ酸配列からなるタンパク質をコードする遺伝
子、または（ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もし
くは数個のアミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加され
たアミノ酸配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナ
ーゼ活性を有するタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族
とするグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子
も挙げることができる。
【００２８】さらに、（ｃ）配列表・配列番号２に記載
された塩基配列からなるＤＮＡ、または（ｄ）上記
（ｃ）の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、
置換もしくは付加されており、かつグルコースデヒドロ
ゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードしているＤＮ
Ａがある。
された塩基配列からなるＤＮＡ、または（ｄ）上記
（ｃ）の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、
置換もしくは付加されており、かつグルコースデヒドロ
ゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードしているＤＮ
Ａがある。
【００２９】さらに、（ｇ）配列表・配列番号４に記載
された塩基配列からなるＤＮＡ、または（ｈ）上記
（ｇ）の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、
置換もしくは付加されており、かつグルコースデヒドロ
ゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードしているＤＮ
Ａがある。
された塩基配列からなるＤＮＡ、または（ｈ）上記
（ｇ）の配列において、１もしくは数個の塩基が欠失、
置換もしくは付加されており、かつグルコースデヒドロ
ゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードしているＤＮ
Ａがある。
【００３０】本発明において、ＧＤＨをコードする遺伝
子を得る方法としては、次のような方法が挙げられる。
例えばアシネトバクター・カルコアセティカスNCIB1151
7 の染色体を分離、精製した後、超音波処理、制限酵素
処理等を用いてＤＮＡを切断したものと、リニアーな発
現ベクターと両ＤＮＡの平滑末端または付着末端におい
てＤＮＡリガーゼなどにより結合閉鎖させて組換えベク
ターを構築する。該組換えベクターを複製可能な宿主微
生物に移入した後、ベクターのマーカーと酵素活性の発
現を指標としてスクリーニングして、ＰＱＱを補欠分子
族とするＧＤＨをコードする遺伝子を含有する組換えベ
クターを保持する微生物を得る。
子を得る方法としては、次のような方法が挙げられる。
例えばアシネトバクター・カルコアセティカスNCIB1151
7 の染色体を分離、精製した後、超音波処理、制限酵素
処理等を用いてＤＮＡを切断したものと、リニアーな発
現ベクターと両ＤＮＡの平滑末端または付着末端におい
てＤＮＡリガーゼなどにより結合閉鎖させて組換えベク
ターを構築する。該組換えベクターを複製可能な宿主微
生物に移入した後、ベクターのマーカーと酵素活性の発
現を指標としてスクリーニングして、ＰＱＱを補欠分子
族とするＧＤＨをコードする遺伝子を含有する組換えベ
クターを保持する微生物を得る。
【００３１】次いで、上記組換えベクターを保持する微
生物を培養して、該培養微生物の菌体から該組換えベク
ターを分離、精製し、該発現ベクターからＧＤＨをコー
ドする遺伝子を採取することができる。例えば、遺伝子
供与体であるアシネトバクター・カルコアセティカスNC
IB11517 の染色体ＤＮＡは、具体的には以下のようにし
て採取される。
生物を培養して、該培養微生物の菌体から該組換えベク
ターを分離、精製し、該発現ベクターからＧＤＨをコー
ドする遺伝子を採取することができる。例えば、遺伝子
供与体であるアシネトバクター・カルコアセティカスNC
IB11517 の染色体ＤＮＡは、具体的には以下のようにし
て採取される。
【００３２】該遺伝子供与微生物を例えば１〜３日間攪
拌培養して得られた培養液を遠心分離により集菌し、次
いで、これを溶菌させることによりＰＱＱを補欠分子族
とするＧＤＨ遺伝子の含有溶菌物を調製することができ
る。溶菌の方法としては、例えばリゾチーム等の溶菌酵
素により処理が施され、必要に応じてプロテアーゼや他
の酵素やラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）等の界面活
性剤が併用される。さらに、凍結融解やフレンチプレス
処理のような物理的破砕方法と組み合わせてもよい。
拌培養して得られた培養液を遠心分離により集菌し、次
いで、これを溶菌させることによりＰＱＱを補欠分子族
とするＧＤＨ遺伝子の含有溶菌物を調製することができ
る。溶菌の方法としては、例えばリゾチーム等の溶菌酵
素により処理が施され、必要に応じてプロテアーゼや他
の酵素やラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）等の界面活
性剤が併用される。さらに、凍結融解やフレンチプレス
処理のような物理的破砕方法と組み合わせてもよい。
【００３３】上記のようにして得られた溶菌物からＤＮ
Ａを分離精製するには、常法に従って、例えばフェノー
ル処理やプロテアーゼ処理による除蛋白処理や、リボヌ
クレアーゼ処理、アルコール沈殿処理などの方法を適宜
組み合わせることにより行うことができる。
Ａを分離精製するには、常法に従って、例えばフェノー
ル処理やプロテアーゼ処理による除蛋白処理や、リボヌ
クレアーゼ処理、アルコール沈殿処理などの方法を適宜
組み合わせることにより行うことができる。
【００３４】微生物から分離、精製されたＤＮＡを切断
する方法は、例えば超音波処理、制限酵素処理などによ
り行うことができる。好ましくは特定のヌクレオチド配
列に作用するII型制限酵素が適している。
する方法は、例えば超音波処理、制限酵素処理などによ
り行うことができる。好ましくは特定のヌクレオチド配
列に作用するII型制限酵素が適している。
【００３５】クローニングする際のベクターとしては、
宿主微生物内で自律的に増殖し得るファージまたはプラ
スミドから遺伝子組換え用として構築されたものが適し
ている。ファージとしては、例えばエシェリヒア・コリ
を宿主微生物とする場合にはLambda gt10 、Lambda gt1
1 などが例示される。また、プラスミドとしては、例え
ば、エシェリヒア・コリを宿主微生物とする場合には、
pBR322、pUC19 、pBluescript などが例示される。
宿主微生物内で自律的に増殖し得るファージまたはプラ
スミドから遺伝子組換え用として構築されたものが適し
ている。ファージとしては、例えばエシェリヒア・コリ
を宿主微生物とする場合にはLambda gt10 、Lambda gt1
1 などが例示される。また、プラスミドとしては、例え
ば、エシェリヒア・コリを宿主微生物とする場合には、
pBR322、pUC19 、pBluescript などが例示される。
【００３６】クローニングの際、上記のようなベクター
を、上述したＧＤＨをコードする遺伝子供与体である微
生物ＤＮＡの切断に使用した制限酵素で切断してベクタ
ー断片を得ることができるが、必ずしも該微生物ＤＮＡ
の切断に使用した制限酵素と同一の制限酵素を用いる必
要はない。微生物ＤＮＡ断片とベクターＤＮＡ断片とを
結合させる方法は、公知のＤＮＡリガーゼを用いる方法
であればよく、例えば微生物ＤＮＡ断片の付着末端とベ
クター断片の付着末端とのアニーリングの後、適当なＤ
ＮＡリガーゼの使用により微生物ＤＮＡ断片とベクター
ＤＮＡ断片との組換えベクターを作成する。必要に応じ
て、アニーリングの後、宿主微生物に移入して生体内の
ＤＮＡリガーゼを利用し組換えベクターを作製すること
もできる。
を、上述したＧＤＨをコードする遺伝子供与体である微
生物ＤＮＡの切断に使用した制限酵素で切断してベクタ
ー断片を得ることができるが、必ずしも該微生物ＤＮＡ
の切断に使用した制限酵素と同一の制限酵素を用いる必
要はない。微生物ＤＮＡ断片とベクターＤＮＡ断片とを
結合させる方法は、公知のＤＮＡリガーゼを用いる方法
であればよく、例えば微生物ＤＮＡ断片の付着末端とベ
クター断片の付着末端とのアニーリングの後、適当なＤ
ＮＡリガーゼの使用により微生物ＤＮＡ断片とベクター
ＤＮＡ断片との組換えベクターを作成する。必要に応じ
て、アニーリングの後、宿主微生物に移入して生体内の
ＤＮＡリガーゼを利用し組換えベクターを作製すること
もできる。
【００３７】クローニングに使用する宿主微生物として
は、組換えベクターが安定であり、かつ自律増殖可能で
外来性遺伝子の形質発現できるものであれば特に制限さ
れない。一般的には、エシェリヒア・コリW3110 、エシ
ェリヒア・コリC600、エシェリヒア・コリHB101 、エシ
ェリヒア・コリJM109 、エシェリヒア・コリDH5 αなど
を用いることができる。
は、組換えベクターが安定であり、かつ自律増殖可能で
外来性遺伝子の形質発現できるものであれば特に制限さ
れない。一般的には、エシェリヒア・コリW3110 、エシ
ェリヒア・コリC600、エシェリヒア・コリHB101 、エシ
ェリヒア・コリJM109 、エシェリヒア・コリDH5 αなど
を用いることができる。
【００３８】宿主微生物に組換えベクターを移入する方
法としては、例えば宿主微生物がエシェリヒア・コリの
場合には、カルシウム処理によるコンピテントセル法や
エレクトロポーレーション法などを用いることができ
る。
法としては、例えば宿主微生物がエシェリヒア・コリの
場合には、カルシウム処理によるコンピテントセル法や
エレクトロポーレーション法などを用いることができ
る。
【００３９】上記のように得られた形質転換体である微
生物は、栄養培地で培養されることにより、多量のＧＤ
Ｈを安定に生産し得る。宿主微生物への目的組換えベク
ターの移入の有無についての選択は、目的とするＤＮＡ
を保持するベクターの薬剤耐性マーカーとＰＱＱの添加
によりＧＤＨ活性を同時に発現する微生物を検索すれば
よい。例えば、薬剤耐性マーカーに基づく選択培地で生
育し、かつＧＤＨを生成する微生物を選択すればよい。
生物は、栄養培地で培養されることにより、多量のＧＤ
Ｈを安定に生産し得る。宿主微生物への目的組換えベク
ターの移入の有無についての選択は、目的とするＤＮＡ
を保持するベクターの薬剤耐性マーカーとＰＱＱの添加
によりＧＤＨ活性を同時に発現する微生物を検索すれば
よい。例えば、薬剤耐性マーカーに基づく選択培地で生
育し、かつＧＤＨを生成する微生物を選択すればよい。
【００４０】上記の方法により得られたＰＱＱを補欠分
子族とするＧＤＨ遺伝子の塩基配列は、Science ，第２
１４巻，１２０５（１９８１）に記載されたジデオキシ
法により解読した。また、ＧＤＨのアミノ酸配列は上記
のように決定された塩基配列より推定した。
子族とするＧＤＨ遺伝子の塩基配列は、Science ，第２
１４巻，１２０５（１９８１）に記載されたジデオキシ
法により解読した。また、ＧＤＨのアミノ酸配列は上記
のように決定された塩基配列より推定した。
【００４１】上記のようにして、一度選択されたＰＱＱ
を補欠分子族とするＧＤＨ遺伝子を保有する組換えベク
ターより、ＰＱＱ生産能を有する微生物にて複製できる
組換えベクターへの移入は、ＧＤＨ遺伝子を保持する組
換えベクターから制限酵素やＰＣＲ法によりＧＤＨ遺伝
子であるＤＮＡを回収し、他のベクター断片と結合させ
ることにより容易に実施できる。また、これらのベクタ
ーによるＰＱＱ生産能を有する微生物の形質転換は、カ
ルシウム処理によるコンピテントセル法やエレクトロポ
ーレーション法などを用いることができる。
を補欠分子族とするＧＤＨ遺伝子を保有する組換えベク
ターより、ＰＱＱ生産能を有する微生物にて複製できる
組換えベクターへの移入は、ＧＤＨ遺伝子を保持する組
換えベクターから制限酵素やＰＣＲ法によりＧＤＨ遺伝
子であるＤＮＡを回収し、他のベクター断片と結合させ
ることにより容易に実施できる。また、これらのベクタ
ーによるＰＱＱ生産能を有する微生物の形質転換は、カ
ルシウム処理によるコンピテントセル法やエレクトロポ
ーレーション法などを用いることができる。
【００４２】ＰＱＱ生産能を有する微生物としては、メ
チロバクテリウム（Methylobacterium）属等のメタノー
ル資化性細菌、アセトバクター（Acetobacter ）属やグ
ルコノバクター（Gluconobacter ）属の酢酸菌、フラボ
バクテリウム（Flavobacterium）属、シュードモナス
属、アシネトバクター属等の細菌を挙げることができ
る。なかでも、シュードモナス属細菌とアシネトバクタ
ー属細菌が利用できる宿主−ベクター系が確立されてお
り利用しやすいので好ましい。
チロバクテリウム（Methylobacterium）属等のメタノー
ル資化性細菌、アセトバクター（Acetobacter ）属やグ
ルコノバクター（Gluconobacter ）属の酢酸菌、フラボ
バクテリウム（Flavobacterium）属、シュードモナス
属、アシネトバクター属等の細菌を挙げることができ
る。なかでも、シュードモナス属細菌とアシネトバクタ
ー属細菌が利用できる宿主−ベクター系が確立されてお
り利用しやすいので好ましい。
【００４３】シュードモナス属細菌では、シュードモナ
ス・エルギノサ、シュードモナス・フルオレッセンス、
シュードモナス・プチダなどを用いることができる。ま
た、アシネトバクター属細菌ではアシネトバクター・カ
ルコアセティカス、アシネトバクター・バウマンニ等を
用いることができる。
ス・エルギノサ、シュードモナス・フルオレッセンス、
シュードモナス・プチダなどを用いることができる。ま
た、アシネトバクター属細菌ではアシネトバクター・カ
ルコアセティカス、アシネトバクター・バウマンニ等を
用いることができる。
【００４４】上記微生物にて複製できる組換えベクター
としては、RSF1010 由来のベクターもしくはとその類似
のレプリコンを有するベクターがシュードモナス属細菌
に利用可能である。例えば、pKT240、pMMB24等（M.M.Ba
gdasarian ら，Gene，２６，２７３（１９８３））、pC
N40 、pCN60 等（C.C.Nieto ら，Gene，８７，１４５
（１９９０））やpTS1137 等を挙げることができる。ま
た、pME290等（Y.Itohら、Gene，３６，２７（１９８
５））、pNI111、pNI20C（N.Itohら，J.Biochem.，１１
０，６１４（１９９１））も利用できる。
としては、RSF1010 由来のベクターもしくはとその類似
のレプリコンを有するベクターがシュードモナス属細菌
に利用可能である。例えば、pKT240、pMMB24等（M.M.Ba
gdasarian ら，Gene，２６，２７３（１９８３））、pC
N40 、pCN60 等（C.C.Nieto ら，Gene，８７，１４５
（１９９０））やpTS1137 等を挙げることができる。ま
た、pME290等（Y.Itohら、Gene，３６，２７（１９８
５））、pNI111、pNI20C（N.Itohら，J.Biochem.，１１
０，６１４（１９９１））も利用できる。
【００４５】アシネトバクター属細菌では、pWM43 等
（W.Minas ら，Appl.Environ.Microbiol. ，５９，２８
０７（１９９３））、pKT230、pWH1266 等（M.Hunger
ら，Gene，８７，４５（１９９０））がベクターとして
利用可能である。
（W.Minas ら，Appl.Environ.Microbiol. ，５９，２８
０７（１９９３））、pKT230、pWH1266 等（M.Hunger
ら，Gene，８７，４５（１９９０））がベクターとして
利用可能である。
【００４６】形質転換体である宿主微生物の培養形態
は、宿主の栄養生理的性質を考慮して培養条件を選択す
ればよく、多くの場合は液体培養で行う。工業的には通
気攪拌培養を行うのが有利である。
は、宿主の栄養生理的性質を考慮して培養条件を選択す
ればよく、多くの場合は液体培養で行う。工業的には通
気攪拌培養を行うのが有利である。
【００４７】培地の栄養源としては，微生物の培養に通
常用いられるものが広く使用され得る。炭素源としては
資化可能な炭素化合物であればよく、例えば、グルコー
ス、シュークロース、ラクトース、マルトース、ラクト
ース、糖蜜、ピルビン酸などが使用される。また、窒素
源としては利用可能な窒素化合物であればよく、例え
ば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分
解物、大豆粕アルカリ抽出物などが使用される。その
他、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、マグネシウム、カルシ
ウム、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛などの塩類、特定
のアミノ酸、特定のビタミンなどが必要に応じて使用さ
れる。
常用いられるものが広く使用され得る。炭素源としては
資化可能な炭素化合物であればよく、例えば、グルコー
ス、シュークロース、ラクトース、マルトース、ラクト
ース、糖蜜、ピルビン酸などが使用される。また、窒素
源としては利用可能な窒素化合物であればよく、例え
ば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、カゼイン加水分
解物、大豆粕アルカリ抽出物などが使用される。その
他、リン酸塩、炭酸塩、硫酸塩、マグネシウム、カルシ
ウム、カリウム、鉄、マンガン、亜鉛などの塩類、特定
のアミノ酸、特定のビタミンなどが必要に応じて使用さ
れる。
【００４８】培養温度は菌が成育し、ＧＤＨを生産する
範囲で適宜変更し得るが、上記のようなＰＱＱ生産能を
有する微生物の場合、好ましくは２０〜４２℃程度であ
る。培養時間は条件によって多少異なるが、ＧＤＨが最
高収量に達する時期を見計らって適当時期に培養を完了
すればよく、通常は１２〜７２時間程度である。培地の
ｐＨは菌が発育し、ＧＤＨを生産する範囲で適宜変更し
得るが、好ましくはｐＨ６．０〜９．０程度の範囲であ
る。
範囲で適宜変更し得るが、上記のようなＰＱＱ生産能を
有する微生物の場合、好ましくは２０〜４２℃程度であ
る。培養時間は条件によって多少異なるが、ＧＤＨが最
高収量に達する時期を見計らって適当時期に培養を完了
すればよく、通常は１２〜７２時間程度である。培地の
ｐＨは菌が発育し、ＧＤＨを生産する範囲で適宜変更し
得るが、好ましくはｐＨ６．０〜９．０程度の範囲であ
る。
【００４９】培養物中のＧＤＨを生産する菌体を含む培
養液をそのまま採取し、利用することもできるが、一般
には、常法に従って、ＧＤＨが培養液中に存在する場合
はろ過、遠心分離などにより、ＧＤＨ含有溶液と微生物
菌体とを分離した後に利用される。ＧＤＨが菌体内に存
在する場合には、得られた培養物からろ過または遠心分
離などの手段により菌体を採取し、次いで、この菌体を
機械的方法またはリゾチームなどの酵素的方法で破壊
し、また、必要に応じて、ＥＤＴＡ等のキレート剤及び
界面活性剤を添加してＧＤＨを可溶化し、水溶液として
分離採取する。
養液をそのまま採取し、利用することもできるが、一般
には、常法に従って、ＧＤＨが培養液中に存在する場合
はろ過、遠心分離などにより、ＧＤＨ含有溶液と微生物
菌体とを分離した後に利用される。ＧＤＨが菌体内に存
在する場合には、得られた培養物からろ過または遠心分
離などの手段により菌体を採取し、次いで、この菌体を
機械的方法またはリゾチームなどの酵素的方法で破壊
し、また、必要に応じて、ＥＤＴＡ等のキレート剤及び
界面活性剤を添加してＧＤＨを可溶化し、水溶液として
分離採取する。
【００５０】上記のようにして得られたＧＤＨ含有溶液
を、例えば減圧濃縮、膜濃縮、さらに硫酸アンモニウ
ム、硫酸ナトリウムなどの塩析処理、あるいは親水性有
機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトンなど
による分別沈殿法により沈殿せしめればよい。また、加
熱処理や等電点処理も有効な精製手段である。その後、
吸着剤あるいはゲルろ過剤などによるゲルろ過、吸着ク
ロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ア
フィニティクロマトグラフィーを行うことにより、精製
されたＧＤＨを得ることができる。
を、例えば減圧濃縮、膜濃縮、さらに硫酸アンモニウ
ム、硫酸ナトリウムなどの塩析処理、あるいは親水性有
機溶媒、例えばメタノール、エタノール、アセトンなど
による分別沈殿法により沈殿せしめればよい。また、加
熱処理や等電点処理も有効な精製手段である。その後、
吸着剤あるいはゲルろ過剤などによるゲルろ過、吸着ク
ロマトグラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、ア
フィニティクロマトグラフィーを行うことにより、精製
されたＧＤＨを得ることができる。
【００５１】例えば、セファデックス（Sephadex）ゲル
（ファルマシアバイオテク）などによるゲルろ過、ＤＥ
ＡＥセファロースCL-6B （ファルマシアバイオテク）、
オクチルセファロースCL-6B （ファルマシアバイオテ
ク）等のカラムクロマトグラフィーにより分離、精製
し、精製酵素標品を得ることができる。該精製酵素標品
は、電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）的に単一のバンドを
示す程度に純化されていることが好ましい。
（ファルマシアバイオテク）などによるゲルろ過、ＤＥ
ＡＥセファロースCL-6B （ファルマシアバイオテク）、
オクチルセファロースCL-6B （ファルマシアバイオテ
ク）等のカラムクロマトグラフィーにより分離、精製
し、精製酵素標品を得ることができる。該精製酵素標品
は、電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）的に単一のバンドを
示す程度に純化されていることが好ましい。
【００５２】上記のようにして得られた精製酵素を、例
えば凍結乾燥、真空乾燥やスプレードライなどにより粉
末化して流通させることが可能である。その際、精製酵
素はリン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液やＧＯＯＤの緩衝
液に溶解しているものを用いることができる。好適なも
のはＧＯＯＤの緩衝液であり、なかでも、ＰＩＰＥＳ、
ＭＥＳもしくはＭＯＰＳ緩衝液が特に好ましい。また、
カルシウムイオンまたはその塩、およびグルタミン酸、
グルタミン、リジン等のアミノ酸類、さらに血清アルブ
ミン等を添加することによりＧＤＨをより安定化するこ
とができる。
えば凍結乾燥、真空乾燥やスプレードライなどにより粉
末化して流通させることが可能である。その際、精製酵
素はリン酸緩衝液、トリス塩酸緩衝液やＧＯＯＤの緩衝
液に溶解しているものを用いることができる。好適なも
のはＧＯＯＤの緩衝液であり、なかでも、ＰＩＰＥＳ、
ＭＥＳもしくはＭＯＰＳ緩衝液が特に好ましい。また、
カルシウムイオンまたはその塩、およびグルタミン酸、
グルタミン、リジン等のアミノ酸類、さらに血清アルブ
ミン等を添加することによりＧＤＨをより安定化するこ
とができる。
【００５３】本発明のＰＱＱを補欠分子とするＧＤＨの
一例は、以下に示すような理化学的性質を有する。 作用：Ｄーグルコース ＋ 人工電子受容体 → δ−
グルコノラクトン＋還元型電子受容体 熱安定性：約５０℃以下（ｐＨ７．５、３０分間処理） ｐＨ安定性：３．５〜８．５（２５℃、１６時間処理） 至適温度：約４０℃ 至適ｐＨ：７．０ 分子量：５００００
一例は、以下に示すような理化学的性質を有する。 作用：Ｄーグルコース ＋ 人工電子受容体 → δ−
グルコノラクトン＋還元型電子受容体 熱安定性：約５０℃以下（ｐＨ７．５、３０分間処理） ｐＨ安定性：３．５〜８．５（２５℃、１６時間処理） 至適温度：約４０℃ 至適ｐＨ：７．０ 分子量：５００００
【００５４】本発明において、補欠分子族とするＧＤＨ
活性の測定は以下の条件で行う。
活性の測定は以下の条件で行う。
【００５５】＜試薬＞ ５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液（ｐＨ６．５） ０．２ｍＭ ＰＭＳ ０．２ｍＭ ＮＴＢ ３０．６ｍＭ グルコース ０．１９％ トリトンＸ−１００
【００５６】＜測定条件＞上記試薬混液３ｍｌを３７℃
で約５分予備加温後、０．１ｍｌの酵素溶液を加え、緩
やかに混和後、水を対照に３７℃に制御された分光光度
計で５分間記録し、その直線部分から１分間あたりの吸
光度変化を測定する。盲検は酵素溶液の代わりに蒸留水
を試薬混液に加えて、以下同様に吸光度変化を測定す
る。上記条件で１分間に１／２μｍｏｌのジホルマザン
を生成する酵素量を１単位（Ｕ）とする。
で約５分予備加温後、０．１ｍｌの酵素溶液を加え、緩
やかに混和後、水を対照に３７℃に制御された分光光度
計で５分間記録し、その直線部分から１分間あたりの吸
光度変化を測定する。盲検は酵素溶液の代わりに蒸留水
を試薬混液に加えて、以下同様に吸光度変化を測定す
る。上記条件で１分間に１／２μｍｏｌのジホルマザン
を生成する酵素量を１単位（Ｕ）とする。
【００５７】
【実施例】以下、実施例により、本発明を具体的に説明
する。 実施例１：染色体ＤＮＡの分離 アシネトバクター・カルコアセティカスNCIB11517 の染
色体ＤＮＡを次の方法で分離した。同菌株を１００ｍｌ
のＬＢ培地で３０℃、一晩振とう培養した後、遠心分離
（８０００ｒｐｍ、１０分間）により集菌した。２０％
シュークロース、５０ｍＭトリス／塩酸緩衝液（ｐＨ
７．６）、１ｍＭ ＥＤＴＡを含んだ溶液５ｍｌに懸濁
し、１ｍｌのプロティナーゼＫ溶液（１００ｍｇ／ｍ
ｌ）を加えて３７℃、３０分間保温し、次いで、１ｍｌ
の１０％ラウロイルサルコシンナトリウム溶液を加え
た。
する。 実施例１：染色体ＤＮＡの分離 アシネトバクター・カルコアセティカスNCIB11517 の染
色体ＤＮＡを次の方法で分離した。同菌株を１００ｍｌ
のＬＢ培地で３０℃、一晩振とう培養した後、遠心分離
（８０００ｒｐｍ、１０分間）により集菌した。２０％
シュークロース、５０ｍＭトリス／塩酸緩衝液（ｐＨ
７．６）、１ｍＭ ＥＤＴＡを含んだ溶液５ｍｌに懸濁
し、１ｍｌのプロティナーゼＫ溶液（１００ｍｇ／ｍ
ｌ）を加えて３７℃、３０分間保温し、次いで、１ｍｌ
の１０％ラウロイルサルコシンナトリウム溶液を加え
た。
【００５８】上記溶液に等量のクロロホルム・フェノー
ル溶液（１：１）を加え、攪拌混合し、１００００ｒｐ
ｍ、３分間の遠心で水層と溶媒層に分け、水層を分取し
た。該水層に２倍量のエタノールを静かに重層し、ガラ
ス棒でゆっくり攪拌しながらＤＮＡをガラス棒に巻き付
かせて分離した。これを１ｍＭ ＥＤＴＡを含んだトリ
ス／塩酸緩衝液（ｐＨ８．０；以下、ＴＥと略記する）
で溶解した。これを等量のクロロホルム・フェノール溶
液で処理後、遠心分離により水層を分取し、２倍量のエ
タノールを加えて、上記方法で再度ＤＮＡを分離し、２
ｍｌのＴＥで溶解した。
ル溶液（１：１）を加え、攪拌混合し、１００００ｒｐ
ｍ、３分間の遠心で水層と溶媒層に分け、水層を分取し
た。該水層に２倍量のエタノールを静かに重層し、ガラ
ス棒でゆっくり攪拌しながらＤＮＡをガラス棒に巻き付
かせて分離した。これを１ｍＭ ＥＤＴＡを含んだトリ
ス／塩酸緩衝液（ｐＨ８．０；以下、ＴＥと略記する）
で溶解した。これを等量のクロロホルム・フェノール溶
液で処理後、遠心分離により水層を分取し、２倍量のエ
タノールを加えて、上記方法で再度ＤＮＡを分離し、２
ｍｌのＴＥで溶解した。
【００５９】実施例２：ＰＱＱを補欠分子族とする可溶
性ＧＤＨをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ断片及び
該ＤＮＡ断片を有する組換えベクターの調製 実施例１で得たＤＮＡ５μｇを制限酵素Sau3AI（東洋紡
績製）で部分分解し、２ｋｂｐ以上の断片にした後、Ba
mHI （東洋紡績製）で切断したpBluescript KS(+) １μ
ｇとＴ４ ＤＮＡリガーゼ（東洋紡績製）１単位で１６
℃、１６時間反応させ、ＤＮＡを連結した。連結したＤ
ＮＡはエシェリヒアJM109 のコンピテントセル（東洋紡
績製）を用いて形質転換した。使用したＤＮＡ１μｇ当
たり約１０5 個の形質転換体のコロニーが得られた。
性ＧＤＨをコードする遺伝子を含有するＤＮＡ断片及び
該ＤＮＡ断片を有する組換えベクターの調製 実施例１で得たＤＮＡ５μｇを制限酵素Sau3AI（東洋紡
績製）で部分分解し、２ｋｂｐ以上の断片にした後、Ba
mHI （東洋紡績製）で切断したpBluescript KS(+) １μ
ｇとＴ４ ＤＮＡリガーゼ（東洋紡績製）１単位で１６
℃、１６時間反応させ、ＤＮＡを連結した。連結したＤ
ＮＡはエシェリヒアJM109 のコンピテントセル（東洋紡
績製）を用いて形質転換した。使用したＤＮＡ１μｇ当
たり約１０5 個の形質転換体のコロニーが得られた。
【００６０】次いで、得られたコロニーは５０μｇ／ｍ
ｌアンピシリンを含んだＬＢ培地で３０℃、２４時間培
養し、リゾチーム破砕後、ＰＱＱを添加し、該粗酵素液
の可溶性ＧＤＨ活性を測定した。その結果、１株のＰＱ
Ｑを補欠分子族とするＧＤＨ生産株を見出した。該菌株
の保有するプラスミドには約８ｋｂｐの挿入ＤＮＡが存
在しており、該プラスミドをpPGH1 とした。
ｌアンピシリンを含んだＬＢ培地で３０℃、２４時間培
養し、リゾチーム破砕後、ＰＱＱを添加し、該粗酵素液
の可溶性ＧＤＨ活性を測定した。その結果、１株のＰＱ
Ｑを補欠分子族とするＧＤＨ生産株を見出した。該菌株
の保有するプラスミドには約８ｋｂｐの挿入ＤＮＡが存
在しており、該プラスミドをpPGH1 とした。
【００６１】該プラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素MboI
I （東洋紡績製）で切断してアガロースゲル電気泳動を
行ない、可溶性ＧＤＨ遺伝子を含む長さ約１．９ｋｂの
断片を切り出した。単離したＤＮＡとEcoRV （東洋紡績
製）で切断したpBluescriptKS(+) １μｇとをＴ４ Ｄ
ＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１６時間反応させ、ＤＮ
Ａを連結した。連結したＤＮＡはエシェリヒア・コリJM
109 のコンピテントセルを用いて形質転換を行った。得
られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子を有するプラスミドを
有するコロニーを見出し、該プラスミドをpPGH2 と命名
した。
I （東洋紡績製）で切断してアガロースゲル電気泳動を
行ない、可溶性ＧＤＨ遺伝子を含む長さ約１．９ｋｂの
断片を切り出した。単離したＤＮＡとEcoRV （東洋紡績
製）で切断したpBluescriptKS(+) １μｇとをＴ４ Ｄ
ＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１６時間反応させ、ＤＮ
Ａを連結した。連結したＤＮＡはエシェリヒア・コリJM
109 のコンピテントセルを用いて形質転換を行った。得
られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子を有するプラスミドを
有するコロニーを見出し、該プラスミドをpPGH2 と命名
した。
【００６２】実施例３：塩基配列の決定 pPGH2 の挿入ＤＮＡ断片について常法に従い、デリーシ
ョンミュータントを調製した。種々のサブクローンは常
法に従い、シーケンシング・キット（Radioactive Sequ
encing Kit）（東洋紡績製）を用いて塩基配列を決定し
た。決定した塩基配列およびアミノ酸配列は配列番号１
および２に示す通りである。アミノ酸配列から求められ
る蛋白質の分子量は約５２８００であり、アシネトバク
ター・カルコアセティカスNCIB11517 のＧＤＨの分子量
とほぼ一致した。
ョンミュータントを調製した。種々のサブクローンは常
法に従い、シーケンシング・キット（Radioactive Sequ
encing Kit）（東洋紡績製）を用いて塩基配列を決定し
た。決定した塩基配列およびアミノ酸配列は配列番号１
および２に示す通りである。アミノ酸配列から求められ
る蛋白質の分子量は約５２８００であり、アシネトバク
ター・カルコアセティカスNCIB11517 のＧＤＨの分子量
とほぼ一致した。
【００６３】実施例４：アシネトバクター・バウマンニ
JCM6841 の可溶性ＧＤＨの塩基配列の決定 アシネトバクター・バウマンニJCM6841 の染色体ＤＮＡ
を実施例１と同様の方法で分離し、ＰＱＱを補欠分子族
とする可溶性ＧＤＨをコードする遺伝子を含有するＤＮ
Ａ断片及び該ＤＮＡ断片を有する組換えベクターの調製
を実施例２と同様に実施し、約７Ｋｂｐの挿入断片を有
するpPGH6 を取得した。該プラスミドよりＧＤＨをコー
ドする遺伝子を含有するＤＮＡ断片を含む４ｋｂのＤＮ
Ａ断片を常法により、サブクローニングしてpPGH7 を構
築した。
JCM6841 の可溶性ＧＤＨの塩基配列の決定 アシネトバクター・バウマンニJCM6841 の染色体ＤＮＡ
を実施例１と同様の方法で分離し、ＰＱＱを補欠分子族
とする可溶性ＧＤＨをコードする遺伝子を含有するＤＮ
Ａ断片及び該ＤＮＡ断片を有する組換えベクターの調製
を実施例２と同様に実施し、約７Ｋｂｐの挿入断片を有
するpPGH6 を取得した。該プラスミドよりＧＤＨをコー
ドする遺伝子を含有するＤＮＡ断片を含む４ｋｂのＤＮ
Ａ断片を常法により、サブクローニングしてpPGH7 を構
築した。
【００６４】次に、pPGH7 の挿入ＤＮＡ断片について常
法に従いデリーションミュータントを調製した。種々の
サブクローンは常法に従い、シーケンシング・キット
（Radioactive Sequencing Kit）（東洋紡績製）を用い
て塩基配列を決定した。決定した塩基配列およびアミノ
酸配列は配列番号３および４に示す通りである。アミノ
酸配列から求められる蛋白質の分子量は約５３０００で
あり、アシネトバクター・バウマンニJCM6841 のＧＤＨ
の分子量とほぼ一致した。
法に従いデリーションミュータントを調製した。種々の
サブクローンは常法に従い、シーケンシング・キット
（Radioactive Sequencing Kit）（東洋紡績製）を用い
て塩基配列を決定した。決定した塩基配列およびアミノ
酸配列は配列番号３および４に示す通りである。アミノ
酸配列から求められる蛋白質の分子量は約５３０００で
あり、アシネトバクター・バウマンニJCM6841 のＧＤＨ
の分子量とほぼ一致した。
【００６５】実施例５：シュードモナス属細菌で複製で
きる発現ベクターの構築 実施例３で得たプラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素BamH
I およびXhoI（東洋紡績製）で切断して、ＧＤＨ遺伝子
を含む長さ１．９Ｋｂの断片を含むＤＮＡを単離した。
単離したＤＮＡとBamHI およびXhoIで切断したpTS1137
を１μｇとをＴ４ ＤＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１
６時間反応させ、ＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡは
エシェリヒア・コリDH5 αのコンピテントセルを用いて
形質転換を行った。得られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子
を有するプラスミドを有するコロニーを見出し、該プラ
スミドをpGLD3 と命名した。
きる発現ベクターの構築 実施例３で得たプラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素BamH
I およびXhoI（東洋紡績製）で切断して、ＧＤＨ遺伝子
を含む長さ１．９Ｋｂの断片を含むＤＮＡを単離した。
単離したＤＮＡとBamHI およびXhoIで切断したpTS1137
を１μｇとをＴ４ ＤＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１
６時間反応させ、ＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡは
エシェリヒア・コリDH5 αのコンピテントセルを用いて
形質転換を行った。得られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子
を有するプラスミドを有するコロニーを見出し、該プラ
スミドをpGLD3 と命名した。
【００６６】実施例６：アシネトバクター属細菌で複製
できる発現ベクターの構築 実施例３で得たプラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素MboI
I （東洋紡績製）で切断して、ＧＤＨ遺伝子を含む長さ
１．９Ｋｂの断片を含むＤＮＡを単離した。単離したＤ
ＮＡとMscI（東洋紡績製）で切断したpWH1266 を１μｇ
とをＴ４ ＤＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１６時間反
応させ、ＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡはエシェリ
ヒア・コリDH5 αのコンピテントセルを用いて形質転換
を行った。得られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子を有する
プラスミドを有するコロニーを見出し、該プラスミドを
pGLD4 と命名した。
できる発現ベクターの構築 実施例３で得たプラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素MboI
I （東洋紡績製）で切断して、ＧＤＨ遺伝子を含む長さ
１．９Ｋｂの断片を含むＤＮＡを単離した。単離したＤ
ＮＡとMscI（東洋紡績製）で切断したpWH1266 を１μｇ
とをＴ４ ＤＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１６時間反
応させ、ＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡはエシェリ
ヒア・コリDH5 αのコンピテントセルを用いて形質転換
を行った。得られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子を有する
プラスミドを有するコロニーを見出し、該プラスミドを
pGLD4 と命名した。
【００６７】比較例１：エシェリヒア・コリ宿主用発現
ベクターの構築 実施例３で得たプラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素MboI
I （東洋紡績製）で切断して、ＧＤＨ遺伝子を含む長さ
１．８Ｋｂの断片を含むＤＮＡを単離した。単離したＤ
ＮＡとEcoRV で切断したpBluescript KS(+) １μｇとを
Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１６時間反応さ
せ、ＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡはエシェリヒア
・コリJM109 のコンピテントセルを用いて形質転換を行
った。得られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子を有するプラ
スミドを有するコロニーを見出し、該プラスミドをpGLD
5 と命名した。
ベクターの構築 実施例３で得たプラスミドＤＮＡ５μｇを制限酵素MboI
I （東洋紡績製）で切断して、ＧＤＨ遺伝子を含む長さ
１．８Ｋｂの断片を含むＤＮＡを単離した。単離したＤ
ＮＡとEcoRV で切断したpBluescript KS(+) １μｇとを
Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ１単位で１６℃、１６時間反応さ
せ、ＤＮＡを連結した。連結したＤＮＡはエシェリヒア
・コリJM109 のコンピテントセルを用いて形質転換を行
った。得られたコロニー中にＧＤＨ遺伝子を有するプラ
スミドを有するコロニーを見出し、該プラスミドをpGLD
5 と命名した。
【００６８】比較例２：エシェリヒア・コリJM109 ／pG
LD5 からのＰＱＱを補欠分子族とするＧＤＨの製造 Terrific broth５００ｍｌを２Ｌフラスコに分注し、１
２１℃、１５分間オートクレーブを行い、放冷後、別途
無菌ろ過した５０ｍｇ／ｍｌアンピシリン０．５ｍｌを
添加した。該培地にＬＢ培地で予め、３０℃、２４時間
振とう培養したエシェリヒア・コリJM109 ／pPGLD5の培
養液５ｍｌを接種し、３７℃で２４時間通気攪拌培養し
た。培養終了時のＧＤＨ活性は約０．３４Ｕ／ｍｌであ
った。一方、活性測定試薬に１０μｍｏｌのＰＱＱを添
加後、活性測定すると１２０Ｕ／ｍｌであった。
LD5 からのＰＱＱを補欠分子族とするＧＤＨの製造 Terrific broth５００ｍｌを２Ｌフラスコに分注し、１
２１℃、１５分間オートクレーブを行い、放冷後、別途
無菌ろ過した５０ｍｇ／ｍｌアンピシリン０．５ｍｌを
添加した。該培地にＬＢ培地で予め、３０℃、２４時間
振とう培養したエシェリヒア・コリJM109 ／pPGLD5の培
養液５ｍｌを接種し、３７℃で２４時間通気攪拌培養し
た。培養終了時のＧＤＨ活性は約０．３４Ｕ／ｍｌであ
った。一方、活性測定試薬に１０μｍｏｌのＰＱＱを添
加後、活性測定すると１２０Ｕ／ｍｌであった。
【００６９】実施例７：ＰＱＱ生産能を有する微生物の
形質転換体の作製 シュードモナス・プチダTE3493（微工研寄１２２９８
号）をＬＢＧ培地（ＬＢ培地＋０．３％グリセロール）
で３０℃、１６時間培養し、遠心分離（１２０００ｒｐ
ｍ、１０分間）により菌体を回収し、この菌体に氷冷し
た３００ｍＭシュークロースを含む５ｍＭ Ｋ−リン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）８ｍｌを加え、菌体を懸濁した。
再度遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間）により菌
体を回収し、この菌体に氷冷した３００ｍＭシュークロ
ースを含む５ｍＭ Ｋ−リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
０．４ｍｌを加え、菌体を懸濁した。
形質転換体の作製 シュードモナス・プチダTE3493（微工研寄１２２９８
号）をＬＢＧ培地（ＬＢ培地＋０．３％グリセロール）
で３０℃、１６時間培養し、遠心分離（１２０００ｒｐ
ｍ、１０分間）により菌体を回収し、この菌体に氷冷し
た３００ｍＭシュークロースを含む５ｍＭ Ｋ−リン酸
緩衝液（ｐＨ７．０）８ｍｌを加え、菌体を懸濁した。
再度遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間）により菌
体を回収し、この菌体に氷冷した３００ｍＭシュークロ
ースを含む５ｍＭ Ｋ−リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）
０．４ｍｌを加え、菌体を懸濁した。
【００７０】該懸濁液に実施例５で得たプラスミドＤＮ
Ａ（pGLD3 ）０．５μｇを加え、エレクトロポーレーシ
ョン法により形質転換した。５０μｇ／ｍｌストレプト
マイシンを含んだＬＢ培地に生育したコロニーより、Ｐ
ＱＱを補欠分子族とする可溶性ＧＤＨ活性を有するクロ
ーンを得た。
Ａ（pGLD3 ）０．５μｇを加え、エレクトロポーレーシ
ョン法により形質転換した。５０μｇ／ｍｌストレプト
マイシンを含んだＬＢ培地に生育したコロニーより、Ｐ
ＱＱを補欠分子族とする可溶性ＧＤＨ活性を有するクロ
ーンを得た。
【００７１】同様に、上記pGLD3 を用いて、シュードモ
ナス・プチダTN1126株、シュードモナス・エルギノサPA
O1162 株、シュードモナス・フルオレッセンスIFO12568
株より形質転換体を取得した。
ナス・プチダTN1126株、シュードモナス・エルギノサPA
O1162 株、シュードモナス・フルオレッセンスIFO12568
株より形質転換体を取得した。
【００７２】また、アシネトバクター・カルコアセティ
カスNCIB11517 をＬＢ培地で３０℃、１６時間培養し、
遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間）により菌体を
回収し、この菌体に氷冷した滅菌水８ｍｌを加え、菌体
を懸濁した。再度遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分
間）により菌体を回収し、該菌体に１０％グリセロール
０．４ｍｌを加え、菌体を懸濁した。
カスNCIB11517 をＬＢ培地で３０℃、１６時間培養し、
遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分間）により菌体を
回収し、この菌体に氷冷した滅菌水８ｍｌを加え、菌体
を懸濁した。再度遠心分離（１２０００ｒｐｍ、１０分
間）により菌体を回収し、該菌体に１０％グリセロール
０．４ｍｌを加え、菌体を懸濁した。
【００７３】該懸濁液５０μｌに実施例６で得たプラス
ミドＤＮＡ（pGLD4 ）０．５μｇを加え、エレクトロポ
ーレーション法により形質転換した。テトラサイクリン
５０μｇ／ｍｌを含んだＬＢ培地に生育したコロニーよ
り、ＰＱＱを補欠分子族とする可溶性ＧＤＨ活性を有す
るクローンを得た。
ミドＤＮＡ（pGLD4 ）０．５μｇを加え、エレクトロポ
ーレーション法により形質転換した。テトラサイクリン
５０μｇ／ｍｌを含んだＬＢ培地に生育したコロニーよ
り、ＰＱＱを補欠分子族とする可溶性ＧＤＨ活性を有す
るクローンを得た。
【００７４】実施例８：得られた形質転換体によるＧＤ
Ｈ活性発現量の比較 実施例７で得られた５種の形質転換体、比較例２で得ら
れた形質転換体および対照としてアシネトバクター・カ
ルコアセティカスNCIB11517 をTerrific broth５０ｍｌ
（１．２％ポリペプトン、２．４％酵母エキス、０．４
％ＮａＣｌ、１７ｍＭＫＨ2 ＰＯ4 、７２ｍＭ Ｋ2 Ｈ
ＰＯ4 、ｐＨ７．０）で３０℃、２４時間培養し、遠心
分離（１２０００ｒｐｍ、３分間）により菌体を回収し
た。該菌体を１ｍＭのＣａＣｌ2 を含んだ５０ｍＭトリ
ス／塩酸緩衝液、ｐＨ７．５に懸濁後、超音波により菌
体を破砕した。遠心分離（１２０００ｒｐｍ、５分間）
によって菌体残さを除去した、粗酵素液を調製後、ＧＤ
Ｈ活性を測定した。その結果を表１に示す。
Ｈ活性発現量の比較 実施例７で得られた５種の形質転換体、比較例２で得ら
れた形質転換体および対照としてアシネトバクター・カ
ルコアセティカスNCIB11517 をTerrific broth５０ｍｌ
（１．２％ポリペプトン、２．４％酵母エキス、０．４
％ＮａＣｌ、１７ｍＭＫＨ2 ＰＯ4 、７２ｍＭ Ｋ2 Ｈ
ＰＯ4 、ｐＨ７．０）で３０℃、２４時間培養し、遠心
分離（１２０００ｒｐｍ、３分間）により菌体を回収し
た。該菌体を１ｍＭのＣａＣｌ2 を含んだ５０ｍＭトリ
ス／塩酸緩衝液、ｐＨ７．５に懸濁後、超音波により菌
体を破砕した。遠心分離（１２０００ｒｐｍ、５分間）
によって菌体残さを除去した、粗酵素液を調製後、ＧＤ
Ｈ活性を測定した。その結果を表１に示す。
【００７５】実施例９：シュードモナス・プチダTE3493
／pGLD3 からのＰＱＱを補欠分子族とするＧＤＨの製造 Terrific broth５００ｍｌを２Ｌフラスコに分注し、１
２１℃、１５分間オートクレーブを行い、放冷後、別途
無菌ろ過した５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン０．５
ｍｌを添加した。該培地にＬＢ培地で予め、３０℃、２
４時間振とう培養した実施例７で得られたシュードモナ
ス・プチダTE3493／pGLD3 の培養液５ｍｌを接種し、３
７℃で４８時間通気攪拌培養した。培養終了時のＧＤＨ
活性は約４５Ｕ／ｍｌであった。
／pGLD3 からのＰＱＱを補欠分子族とするＧＤＨの製造 Terrific broth５００ｍｌを２Ｌフラスコに分注し、１
２１℃、１５分間オートクレーブを行い、放冷後、別途
無菌ろ過した５０ｍｇ／ｍｌストレプトマイシン０．５
ｍｌを添加した。該培地にＬＢ培地で予め、３０℃、２
４時間振とう培養した実施例７で得られたシュードモナ
ス・プチダTE3493／pGLD3 の培養液５ｍｌを接種し、３
７℃で４８時間通気攪拌培養した。培養終了時のＧＤＨ
活性は約４５Ｕ／ｍｌであった。
【００７６】上記菌体を遠心分離にて集菌し、２０ｍＭ
リン酸緩衝液、ｐＨ７．０に懸濁した。該菌体懸濁液を
フレンチプレスで破砕後、遠心分離を行い、上清液を粗
酵素液として得た。該粗酵素液をポリエチレンイミンに
よる除核酸処理および硫安分画処理を行った後、セファ
デックスＧ−２５（ファルマシアバイオテク）によるゲ
ルろ過により脱塩し、ＣＭセファロース（ファルマシア
バイオテク）、フェニルセファロース（ファルマシアバ
イオテク）カラムクロマトグラフィーにより分離、精製
して、精製酵素標品を得た。
リン酸緩衝液、ｐＨ７．０に懸濁した。該菌体懸濁液を
フレンチプレスで破砕後、遠心分離を行い、上清液を粗
酵素液として得た。該粗酵素液をポリエチレンイミンに
よる除核酸処理および硫安分画処理を行った後、セファ
デックスＧ−２５（ファルマシアバイオテク）によるゲ
ルろ過により脱塩し、ＣＭセファロース（ファルマシア
バイオテク）、フェニルセファロース（ファルマシアバ
イオテク）カラムクロマトグラフィーにより分離、精製
して、精製酵素標品を得た。
【００７７】上記の方法により得られたＧＤＨ標品は電
気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）的にほぼ単一のバンドを示
し、この際の比活性は約２１００Ｕ／ｍｇ−タンパク質
であった。
気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）的にほぼ単一のバンドを示
し、この際の比活性は約２１００Ｕ／ｍｇ−タンパク質
であった。
【００７８】以下に、上記方法により得られたＰＱＱを
補欠分子族とするＧＤＨの性質を示す。 作用：Ｄーグルコース ＋ 人工電子受容体 → δ−
グルコノラクトン＋還元型電子受容体 熱安定性：約５０℃以下（ｐＨ７．５，３０分間処理） ｐＨ安定性：３．５〜８．５（２５℃，１６時間処理） 至適温度：約４０℃ 至適ｐＨ：７．０ 分子量：５００００
補欠分子族とするＧＤＨの性質を示す。 作用：Ｄーグルコース ＋ 人工電子受容体 → δ−
グルコノラクトン＋還元型電子受容体 熱安定性：約５０℃以下（ｐＨ７．５，３０分間処理） ｐＨ安定性：３．５〜８．５（２５℃，１６時間処理） 至適温度：約４０℃ 至適ｐＨ：７．０ 分子量：５００００
【００７９】上記菌体を遠心分離にて集菌し、２０ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。該菌体懸濁液
をフレンチプレスで破砕後、遠心分離を行い、上清液を
粗酵素液として得た。該粗酵素液をポリエチレンイミン
による除核酸処理および硫安分画処理を行った後、セフ
ァデックスＧ−２５（ファルマシアバイオテク）による
ゲルろ過により脱塩し、ＣＭセファロース（ファルマシ
アバイオテク）、フェニルセファロース（ファルマシア
バイオテク）カラムクロマトグラフィーにより分離、精
製し、精製酵素標品を得た。
リン酸緩衝液（ｐＨ７．０）に懸濁した。該菌体懸濁液
をフレンチプレスで破砕後、遠心分離を行い、上清液を
粗酵素液として得た。該粗酵素液をポリエチレンイミン
による除核酸処理および硫安分画処理を行った後、セフ
ァデックスＧ−２５（ファルマシアバイオテク）による
ゲルろ過により脱塩し、ＣＭセファロース（ファルマシ
アバイオテク）、フェニルセファロース（ファルマシア
バイオテク）カラムクロマトグラフィーにより分離、精
製し、精製酵素標品を得た。
【００８０】本方法により得られたＧＤＨ標品は電気泳
動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）的にほぼ単一のバンドを示し、
この際の比活性は約８５Ｕ／ｍｇ−タンパク質であっ
た。この酵素を１ｍＭのＣａＣｌ2 および１０μｍｏｌ
のＰＱＱ存在下、３７℃、１時間インキュベートした
後、比活性を測定したが、約４６０Ｕ／ｍｇ−タンパク
質に過ぎなかった。
動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）的にほぼ単一のバンドを示し、
この際の比活性は約８５Ｕ／ｍｇ−タンパク質であっ
た。この酵素を１ｍＭのＣａＣｌ2 および１０μｍｏｌ
のＰＱＱ存在下、３７℃、１時間インキュベートした
後、比活性を測定したが、約４６０Ｕ／ｍｇ−タンパク
質に過ぎなかった。
【００８１】実施例１０：ＧＤＨの粉末化 １ｍＭのＣａＣｌ2 およびＢＳＡ（ＧＤＨ１．０重量部
に対して１．０重量部）を含む各種緩衝液中に溶解した
実施例９のＧＤＨを凍結乾燥した後、３７℃におけるＧ
ＤＨ活性の残存性を測定した。その結果を表２に示す。
に対して１．０重量部）を含む各種緩衝液中に溶解した
実施例９のＧＤＨを凍結乾燥した後、３７℃におけるＧ
ＤＨ活性の残存性を測定した。その結果を表２に示す。
【００８２】
【表１】
【００８３】
【表２】
【００８４】
【発明の効果】上述したように、本発明において、ＰＱ
Ｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼが単
離された。また、ＰＱＱ生産能を有する微生物を用いた
宿主−ベクター系を利用する遺伝子工学技術により、Ｐ
ＱＱを補欠分子族とするＧＤＨの製造方法が確立され
た。本発明の製造方法によれば、高純度なＰＱＱを補欠
分子族とするＧＤＨを安価に効率よく生産することが可
能である。
Ｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼが単
離された。また、ＰＱＱ生産能を有する微生物を用いた
宿主−ベクター系を利用する遺伝子工学技術により、Ｐ
ＱＱを補欠分子族とするＧＤＨの製造方法が確立され
た。本発明の製造方法によれば、高純度なＰＱＱを補欠
分子族とするＧＤＨを安価に効率よく生産することが可
能である。
【００８５】
配列番号：１ 配列の長さ：４８０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：アシネトバクター・カルコアセティカス（Acin
etobacter calcoaceticus ） 株名：ＮＣＩＢ１１５１７ 配列 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Pro Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Val Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480
etobacter calcoaceticus ） 株名：ＮＣＩＢ１１５１７ 配列 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Pro Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Val Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480
【００８６】配列番号：２ 配列の長さ：１４４３ 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：アシネトバクター・カルコアセティカス（Acin
etobacter calcoaceticus ） 株名：ＮＣＩＢ１１５１７ 配列 ATG AAT AAA CAT TTA TTA GCA AAA ATC ACT CTT TTA GGT GCT GCA CAA 48 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 CTA TTT ACG TTT CAT ACG GCA TTT GCA GAT ATA CCT CTG ACA CCT GCT 96 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 CAG TTC GCA AAA GCG AAA ACA GAA AAT TTT GAT AAA AAA GTG ATT CTG 144 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 TCC AAT TTA AAT AAA CCA CAT GCT TTG TTA TGG GGG CCA GAT AAT CAA 192 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 ATT TGG TTA ACC GAA CGT GCA ACT GGC AAA ATT TTA AGA GTA AAT CCT 240 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 GTA TCT GGT AGC GCG AAA ACA GTA TTT CAG GTT CCT GAA ATT GTG AGT 288 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 GAT GCT GAT GGG CAA AAT GGT TTG TTA GGT TTT GCT TTT CAT CCT GAC 336 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 TTT AAA CAT AAC CCT TAT ATC TAT ATT TCA GGC ACT TTT AAA AAT CCA 384 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 AAA TCT ACA GAT AAA GAG TTA CCT AAT CAG ACG ATT ATT CGT AGA TAT 432 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 ACC TAT AAT AAA ACT ACA GAT ACA TTT GAA AAG CCT ATT GAT TTG ATT 480 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 GCA GGT TTA CCG TCA TCA AAA GAT CAT CAG TCT GGT CGT CTC GTT ATT 528 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 GGT CCA GAC CAA AAA ATC TAC TAT ACG ATT GGT GAC CAA GGT CGT AAT 576 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 CAG TTA GCT TAT CTG TTC TTA CCG AAT CAG GCA CAG CAT ACT CCG ACT 624 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Pro Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 CAG CAA GAG CTC AAT AGT AAA GAC TAC CAT ACA TAT ATG GGT AAA GTA 672 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 TTA CGC TTA AAT CTG GAC GGC AGT GTA CCT AAA GAC AAC CCA AGC TTT 720 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Val Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 AAC GGC GTA GTG AGT CAT ATC TAC ACT TTA GGG CAC CGT AAT CCA CAA 768 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 GGT TTA GCA TTT GCC CCA AAT GGA AAG CTT TTA CAA TCT GAG CAA GGA 816 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 CCA AAT TCT GAT GAT GAA ATT AAC CTT GTA TTA AAA GGT GGT AAC TAT 864 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 GGC TGG CCA AAT GTA GCT GGT TAT AAA GAT GAC AGT GGT TAT GCC TAT 912 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 GCA AAC TAT TCG GCA GCA ACC AAT AAA TCA CAA ATT AAA GAT TTA GCT 960 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 CAA AAC GGG ATA AAA GTA GCA ACA GGT GTT CCT GTG ACT AAA GAG TCT 1008 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 GAA TGG ACT GGT AAA AAC TTT GTG CCG CCT TTG AAA ACT TTA TAT ACG 1056 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 GTA CAA GAT ACC TAT AAC TAT AAT GAC CCT ACT TGT GGT GAG ATG GCA 1104 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 TAT ATT TGC TGG CCA ACG GTT GCA CCG TCA TCA GCA TAT GTA TAT ACG 1152 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 GGA GGC AAA AAA GCG ATT CCA GGG TGG GAA AAT ACA TTA TTG GTC CCA 1200 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 TCT TTA AAA CGT GGG GTG ATT TTC CGT ATT AAA TTG GAC CCG ACA TAT 1248 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 AGC ACG ACT TTG GAT GAT GCT ATC CCA ATG TTT AAA AGC AAT AAC CGT 1296 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 TAT CGT GAT GTC ATC GCT AGT CCA GAA GGT AAT ACC TTA TAT GTG CTG 1344 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 ACT GAT ACA GCG GGG AAT GTA CAA AAA GAT GAT GGT TCT GTC ACT CAT 1392 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 ACT TTA GAG AAT CCC GGT TCT CTC ATT AAA TTT ACA TAT AAC GGT AAG 1440 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480 TAA 1443
etobacter calcoaceticus ） 株名：ＮＣＩＢ１１５１７ 配列 ATG AAT AAA CAT TTA TTA GCA AAA ATC ACT CTT TTA GGT GCT GCA CAA 48 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 CTA TTT ACG TTT CAT ACG GCA TTT GCA GAT ATA CCT CTG ACA CCT GCT 96 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 CAG TTC GCA AAA GCG AAA ACA GAA AAT TTT GAT AAA AAA GTG ATT CTG 144 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 TCC AAT TTA AAT AAA CCA CAT GCT TTG TTA TGG GGG CCA GAT AAT CAA 192 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 ATT TGG TTA ACC GAA CGT GCA ACT GGC AAA ATT TTA AGA GTA AAT CCT 240 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 GTA TCT GGT AGC GCG AAA ACA GTA TTT CAG GTT CCT GAA ATT GTG AGT 288 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 GAT GCT GAT GGG CAA AAT GGT TTG TTA GGT TTT GCT TTT CAT CCT GAC 336 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 TTT AAA CAT AAC CCT TAT ATC TAT ATT TCA GGC ACT TTT AAA AAT CCA 384 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 AAA TCT ACA GAT AAA GAG TTA CCT AAT CAG ACG ATT ATT CGT AGA TAT 432 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 ACC TAT AAT AAA ACT ACA GAT ACA TTT GAA AAG CCT ATT GAT TTG ATT 480 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 GCA GGT TTA CCG TCA TCA AAA GAT CAT CAG TCT GGT CGT CTC GTT ATT 528 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 GGT CCA GAC CAA AAA ATC TAC TAT ACG ATT GGT GAC CAA GGT CGT AAT 576 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 CAG TTA GCT TAT CTG TTC TTA CCG AAT CAG GCA CAG CAT ACT CCG ACT 624 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Pro Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 CAG CAA GAG CTC AAT AGT AAA GAC TAC CAT ACA TAT ATG GGT AAA GTA 672 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 TTA CGC TTA AAT CTG GAC GGC AGT GTA CCT AAA GAC AAC CCA AGC TTT 720 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Val Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 AAC GGC GTA GTG AGT CAT ATC TAC ACT TTA GGG CAC CGT AAT CCA CAA 768 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 GGT TTA GCA TTT GCC CCA AAT GGA AAG CTT TTA CAA TCT GAG CAA GGA 816 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 CCA AAT TCT GAT GAT GAA ATT AAC CTT GTA TTA AAA GGT GGT AAC TAT 864 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 GGC TGG CCA AAT GTA GCT GGT TAT AAA GAT GAC AGT GGT TAT GCC TAT 912 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 GCA AAC TAT TCG GCA GCA ACC AAT AAA TCA CAA ATT AAA GAT TTA GCT 960 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 CAA AAC GGG ATA AAA GTA GCA ACA GGT GTT CCT GTG ACT AAA GAG TCT 1008 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 GAA TGG ACT GGT AAA AAC TTT GTG CCG CCT TTG AAA ACT TTA TAT ACG 1056 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 GTA CAA GAT ACC TAT AAC TAT AAT GAC CCT ACT TGT GGT GAG ATG GCA 1104 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 TAT ATT TGC TGG CCA ACG GTT GCA CCG TCA TCA GCA TAT GTA TAT ACG 1152 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 GGA GGC AAA AAA GCG ATT CCA GGG TGG GAA AAT ACA TTA TTG GTC CCA 1200 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 TCT TTA AAA CGT GGG GTG ATT TTC CGT ATT AAA TTG GAC CCG ACA TAT 1248 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 AGC ACG ACT TTG GAT GAT GCT ATC CCA ATG TTT AAA AGC AAT AAC CGT 1296 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 TAT CGT GAT GTC ATC GCT AGT CCA GAA GGT AAT ACC TTA TAT GTG CTG 1344 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 ACT GAT ACA GCG GGG AAT GTA CAA AAA GAT GAT GGT TCT GTC ACT CAT 1392 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 ACT TTA GAG AAT CCC GGT TCT CTC ATT AAA TTT ACA TAT AAC GGT AAG 1440 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480 TAA 1443
【００８７】配列番号：３ 配列の長さ：４８０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：蛋白質 起源 生物名：アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacte
r baumannii ） 株名：ＪＣＭ６８４１ 配列 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Ser Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Ile Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480
r baumannii ） 株名：ＪＣＭ６８４１ 配列 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Ser Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Ile Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480
【００８８】配列番号：４ 配列の長さ：１４４３ 配列の型：核酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ゲノムＤＮＡ 起源 生物名：アシネトバクター・バウマンニ（Acinetobacte
r baumannii ） 株名：ＪＣＭ６８４１ 配列 ATG AAT AAA CAT TTA TTA GCA AAA ATC ACT CTT TTA GGT GCT GCA CAA 48 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 CTA TTT ACG TTT CAT ACG GCA TTT GCA GAT ATA CCT CTG ACA CCT GCT 96 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 CAG TTC GCA AAA GCG AAA ACA GAA AAT TTT GAT AAA AAA GTG ATT CTG 144 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 TCC AAT TTA AAT AAA CCA CAT GCT TTG TTA TGG GGG CCA GAT AAT CAA 192 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 ATT TGG TTA ACC GAA CGT GCA ACT GGC AAA ATT TTA AGA GTA AAT CCT 240 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 GTA TCT GGT AGC GCG AAA ACA GTA TTT CAG GTT CCT GAA ATT GTG AGT 288 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 GAT GCT GAT GGG CAA AAt GGT TTG TTA GGT TTT GCT TTT CAT CCT GAC 336 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 TTT AAA CAT AAC CCT TAT ATC TAT ATT TCA GGC ACT TTT AAA AAT CCA 384 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 AAA TCT ACA GAT AAA GAG TTA CCT AAT CAG ACA ATT ATT CGT AGA TAT 432 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 ACC TAT AAT AAA ACT ACA GAT ACA TTT GAA AAG CCT ATT GAT TTG ATT 480 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 GCA GGT TTA CCG TCA TCA AAA GAT CAT CAG TCT GGT CGT CTC GTT ATT 528 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 GGT CCA GAC CAA AAA ATC TAC TAT ACG ATT GGT GAC CAA GGT CGT AAT 576 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 CAG TTA GCT TAT CTA TTC TTA TCG AAT CAG GCA CAG CAT ACT CCG ACT 624 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Ser Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 CAG CAA GAG CTC AAT AGT AAA GAC TAC CAT ACA TAT ATG GGT AAA GTA 672 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 TTA CGC TTA AAT CTG GAC GGC AGT ATA CCT AAA GAC AAC CCA AGC TTT 720 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Ile Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 AAC GGC GTA GTG AGT CAT ATC TAC ACT TTA GGG CAC CGT AAT CCA CAA 768 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 GGT TTA GCA TTT GCC CCA AAT GGA AAG CTT TTA CAA TCT GAG CAA GGG 816 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 CCA AAT TCT GAT GAT GAA ATT AAC CTT GTA TTA AAA GGT GGT AAC TAT 864 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 GGC TGG CCA AAT GTA GCT GGT TAT AAA GAT GAC AGT GGT TAT GCC TAT 912 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 GCA AAC TAT TCG GCA GCA ACC AAT AAA TCA CAA ATT AAA GAT TTA GCT 960 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 CAA AAC GGG ATA AAA GTA GCA ACA GGT GTT CCT GTG ACT AAA GAG TCT 1008 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 GAA TGG ACT GGT AAA AAC TTT GTG CCA CCT TTG AAA ACT TTA TAT ACG 1056 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 GTA CAA GAT ACC TAT AAC TAT AAT GAC CCT ACT TGT GGT GAG ATG GCA 1104 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 TAT ATT TGC TGG CCA ACG GTT GCA CCG TCA TCG GCA TAT GTA TAT ACG 1152 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 GGA GGC AAA AAA GCG ATT CCA GGG TGG GAA AAT ACA TTA TTG GTC CCA 1200 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 TCT TTA AAA CGT GGG GTG ATT TTC CGT ATT AAA TTG GAC CCG ACA TAT 1248 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 AGC ACG ACT TTG GAT GAT GCT ATC CCA ATG TTT AAA AGC AAT AAC CGT 1296 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 TAT CGT GAT GTC ATC GCT AGT CCA GAA GGT AAT ACC TTA TAT GTG CTG 1344 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 ACT GAT ACA GCG GGA AAT GTA CAA AAA GAT GAT GGT TCA GTC ACT CAT 1392 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 ACT TTA GAG AAT CCC GGT TCT CTC ATT AAA TTT ACA TAT AAC GGT AAG 1440 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480 TAA 1443
r baumannii ） 株名：ＪＣＭ６８４１ 配列 ATG AAT AAA CAT TTA TTA GCA AAA ATC ACT CTT TTA GGT GCT GCA CAA 48 Met Asn Lys His Leu Leu Ala Lys Ile Thr Leu Leu Gly Ala Ala Gln 1 5 10 15 CTA TTT ACG TTT CAT ACG GCA TTT GCA GAT ATA CCT CTG ACA CCT GCT 96 Leu Phe Thr Phe His Thr Ala Phe Ala Asp Ile Pro Leu Thr Pro Ala 20 25 30 CAG TTC GCA AAA GCG AAA ACA GAA AAT TTT GAT AAA AAA GTG ATT CTG 144 Gln Phe Ala Lys Ala Lys Thr Glu Asn Phe Asp Lys Lys Val Ile Leu 35 40 45 TCC AAT TTA AAT AAA CCA CAT GCT TTG TTA TGG GGG CCA GAT AAT CAA 192 Ser Asn Leu Asn Lys Pro His Ala Leu Leu Trp Gly Pro Asp Asn Gln 50 55 60 ATT TGG TTA ACC GAA CGT GCA ACT GGC AAA ATT TTA AGA GTA AAT CCT 240 Ile Trp Leu Thr Glu Arg Ala Thr Gly Lys Ile Leu Arg Val Asn Pro 65 70 75 80 GTA TCT GGT AGC GCG AAA ACA GTA TTT CAG GTT CCT GAA ATT GTG AGT 288 Val Ser Gly Ser Ala Lys Thr Val Phe Gln Val Pro Glu Ile Val Ser 85 90 95 GAT GCT GAT GGG CAA AAt GGT TTG TTA GGT TTT GCT TTT CAT CCT GAC 336 Asp Ala Asp Gly Gln Asn Gly Leu Leu Gly Phe Ala Phe His Pro Asp 100 105 110 TTT AAA CAT AAC CCT TAT ATC TAT ATT TCA GGC ACT TTT AAA AAT CCA 384 Phe Lys His Asn Pro Tyr Ile Tyr Ile Ser Gly Thr Phe Lys Asn Pro 115 120 125 AAA TCT ACA GAT AAA GAG TTA CCT AAT CAG ACA ATT ATT CGT AGA TAT 432 Lys Ser Thr Asp Lys Glu Leu Pro Asn Gln Thr Ile Ile Arg Arg Tyr 130 135 140 ACC TAT AAT AAA ACT ACA GAT ACA TTT GAA AAG CCT ATT GAT TTG ATT 480 Thr Tyr Asn Lys Thr Thr Asp Thr Phe Glu Lys Pro Ile Asp Leu Ile 145 150 155 160 GCA GGT TTA CCG TCA TCA AAA GAT CAT CAG TCT GGT CGT CTC GTT ATT 528 Ala Gly Leu Pro Ser Ser Lys Asp His Gln Ser Gly Arg Leu Val Ile 165 170 175 GGT CCA GAC CAA AAA ATC TAC TAT ACG ATT GGT GAC CAA GGT CGT AAT 576 Gly Pro Asp Gln Lys Ile Tyr Tyr Thr Ile Gly Asp Gln Gly Arg Asn 180 185 190 CAG TTA GCT TAT CTA TTC TTA TCG AAT CAG GCA CAG CAT ACT CCG ACT 624 Gln Leu Ala Tyr Leu Phe Leu Ser Asn Gln Ala Gln His Thr Pro Thr 195 200 205 CAG CAA GAG CTC AAT AGT AAA GAC TAC CAT ACA TAT ATG GGT AAA GTA 672 Gln Gln Glu Leu Asn Ser Lys Asp Tyr His Thr Tyr Met Gly Lys Val 210 215 220 TTA CGC TTA AAT CTG GAC GGC AGT ATA CCT AAA GAC AAC CCA AGC TTT 720 Leu Arg Leu Asn Leu Asp Gly Ser Ile Pro Lys Asp Asn Pro Ser Phe 225 230 235 240 AAC GGC GTA GTG AGT CAT ATC TAC ACT TTA GGG CAC CGT AAT CCA CAA 768 Asn Gly Val Val Ser His Ile Tyr Thr Leu Gly His Arg Asn Pro Gln 245 250 255 GGT TTA GCA TTT GCC CCA AAT GGA AAG CTT TTA CAA TCT GAG CAA GGG 816 Gly Leu Ala Phe Ala Pro Asn Gly Lys Leu Leu Gln Ser Glu Gln Gly 260 265 270 CCA AAT TCT GAT GAT GAA ATT AAC CTT GTA TTA AAA GGT GGT AAC TAT 864 Pro Asn Ser Asp Asp Glu Ile Asn Leu Val Leu Lys Gly Gly Asn Tyr 275 280 285 GGC TGG CCA AAT GTA GCT GGT TAT AAA GAT GAC AGT GGT TAT GCC TAT 912 Gly Trp Pro Asn Val Ala Gly Tyr Lys Asp Asp Ser Gly Tyr Ala Tyr 290 295 300 GCA AAC TAT TCG GCA GCA ACC AAT AAA TCA CAA ATT AAA GAT TTA GCT 960 Ala Asn Tyr Ser Ala Ala Thr Asn Lys Ser Gln Ile Lys Asp Leu Ala 305 310 315 320 CAA AAC GGG ATA AAA GTA GCA ACA GGT GTT CCT GTG ACT AAA GAG TCT 1008 Gln Asn Gly Ile Lys Val Ala Thr Gly Val Pro Val Thr Lys Glu Ser 325 330 335 GAA TGG ACT GGT AAA AAC TTT GTG CCA CCT TTG AAA ACT TTA TAT ACG 1056 Glu Trp Thr Gly Lys Asn Phe Val Pro Pro Leu Lys Thr Leu Tyr Thr 340 345 350 GTA CAA GAT ACC TAT AAC TAT AAT GAC CCT ACT TGT GGT GAG ATG GCA 1104 Val Gln Asp Thr Tyr Asn Tyr Asn Asp Pro Thr Cys Gly Glu Met Ala 355 360 365 TAT ATT TGC TGG CCA ACG GTT GCA CCG TCA TCG GCA TAT GTA TAT ACG 1152 Tyr Ile Cys Trp Pro Thr Val Ala Pro Ser Ser Ala Tyr Val Tyr Thr 370 375 380 GGA GGC AAA AAA GCG ATT CCA GGG TGG GAA AAT ACA TTA TTG GTC CCA 1200 Gly Gly Lys Lys Ala Ile Pro Gly Trp Glu Asn Thr Leu Leu Val Pro 385 390 395 400 TCT TTA AAA CGT GGG GTG ATT TTC CGT ATT AAA TTG GAC CCG ACA TAT 1248 Ser Leu Lys Arg Gly Val Ile Phe Arg Ile Lys Leu Asp Pro Thr Tyr 405 410 415 AGC ACG ACT TTG GAT GAT GCT ATC CCA ATG TTT AAA AGC AAT AAC CGT 1296 Ser Thr Thr Leu Asp Asp Ala Ile Pro Met Phe Lys Ser Asn Asn Arg 420 425 430 TAT CGT GAT GTC ATC GCT AGT CCA GAA GGT AAT ACC TTA TAT GTG CTG 1344 Tyr Arg Asp Val Ile Ala Ser Pro Glu Gly Asn Thr Leu Tyr Val Leu 435 440 445 ACT GAT ACA GCG GGA AAT GTA CAA AAA GAT GAT GGT TCA GTC ACT CAT 1392 Thr Asp Thr Ala Gly Asn Val Gln Lys Asp Asp Gly Ser Val Thr His 450 455 460 ACT TTA GAG AAT CCC GGT TCT CTC ATT AAA TTT ACA TAT AAC GGT AAG 1440 Thr Leu Glu Asn Pro Gly Ser Leu Ile Lys Phe Thr Tyr Asn Gly Lys 465 470 475 480 TAA 1443
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:01） (72)発明者 足立 収生 山口県山口市芝崎町２番２−204 (72)発明者 松下 一信 山口県山口市吉敷2645−27
Claims (34)
- 【請求項１】 以下の（ａ）または（ｂ）のタンパク質
であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼ。 （ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 - 【請求項２】 配列表・配列番号１に記載されるアミノ
酸配列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族と
するグルコースデヒドロゲナーゼ。 - 【請求項３】 以下の（ｅ）または（ｆ）のタンパク質
であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼ。 （ｅ）配列表・配列番号３に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 - 【請求項４】 配列表・配列番号３に記載されるアミノ
酸配列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族と
するグルコースデヒドロゲナーゼ。 - 【請求項５】 以下の（ａ）または（ｂ）のタンパク質
であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼをコードする遺伝子。 （ａ）配列表・配列番号１に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｂ）アミノ酸配列（ａ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 - 【請求項６】 配列表・配列番号１に記載されるアミノ
酸配列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族と
するグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子。 - 【請求項７】 以下の（ｃ）または（ｄ）のタンパク質
であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼをコードする遺伝子。 （ｃ）配列表・配列番号２に記載された塩基配列からな
るＤＮＡ （ｄ）上記（ｃ）の配列において、１もしくは数個の塩
基が欠失、置換もしくは付加されており、かつグルコー
スデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードす
るＤＮＡ - 【請求項８】 配列表・配列番号２に記載される塩基配
列からなるＤＮＡを有するＰＱＱを補欠分子族とするグ
ルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子。 - 【請求項９】 以下の（ｅ）または（ｆ）のタンパク質
であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼをコードする遺伝子。 （ｅ）配列表・配列番号３に記載されたアミノ酸配列か
らなるタンパク質 （ｆ）アミノ酸配列（ｅ）において、１もしくは数個の
アミノ酸配列が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列からなり、かつグルコースデヒドロゲナーゼ活性を
有するタンパク質 - 【請求項１０】 配列表・配列番号３に記載されるアミ
ノ酸配列からなるタンパク質であるＰＱＱを補欠分子族
とするグルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝
子。 - 【請求項１１】 以下の（ｇ）または（ｈ）のタンパク
質であるＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロ
ゲナーゼをコードする遺伝子。 （ｇ）配列表・配列番号４に記載された塩基配列からな
るＤＮＡ （ｈ）上記（ｇ）の配列において、１もしくは数個の塩
基が欠失、置換もしくは付加されており、かつグルコー
スデヒドロゲナーゼ活性を有するタンパク質をコードし
ているＤＮＡ - 【請求項１２】 配列表・配列番号４に記載される塩基
配列からなるＤＮＡを有するＰＱＱを補欠分子族とする
グルコースデヒドロゲナーゼをコードする遺伝子。 - 【請求項１３】 請求項５〜１２のいずれかに記載のＰ
ＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼを
コードする遺伝子を含有する組換えベクター。 - 【請求項１４】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片
が組み込まれ、かつＰＱＱ生産能を有する微生物におい
て複製できることを特徴とする請求項１３記載の組換え
ベクター。 - 【請求項１５】 請求項１３または１４に記載の組換え
ベクターでＰＱＱ生産能を有する微生物を形質転換した
形質転換体。 - 【請求項１６】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼがアシネトバクター・カルコアセティ
カス（Acinetobacter calcoaceticus ）もしくはアシネ
トバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）
由来である請求項１５記載の形質転換体。 - 【請求項１７】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュー
ドモナス（Pseudomonas ）属またはアシネトバクター
（Acinetobacter ）属に属する微生物である請求項１５
記載の形質転換体。 - 【請求項１８】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュー
ドモナス・エルギノサ（Pseudomonas aeruginosa）、シ
ュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluore
scens ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas puti
da）、アシネトバクター・カルコアセティカス（Acinet
obacter calcoaceticus ）、アシネトバクター・バウマ
ンニ（Acinetobacter baumannii ）からなる群より選ば
れた微生物である請求項１５記載の形質転換体。 - 【請求項１９】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュー
ドモナス・プチダ（Pseudomonas putida）である請求項
１７記載の形質転換体。 - 【請求項２０】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がアシネ
トバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calc
oaceticus ）もしくはアシネトバクター・バウマンニ
（Acinetobacter baumannii ）である請求項１７記載の
形質転換体。 - 【請求項２１】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼが可溶性である請求項１９または２０
に記載の形質転換体。 - 【請求項２２】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼをコードする遺伝子を含むＤＮＡ断片
を組込んでなる組換えベクターでＰＱＱ生産能を有する
微生物が形質転換された形質転換微生物を培養して、該
培養物からＰＱＱを補欠分子族とするグルコースデヒド
ロゲナーゼを採取するグルコースデヒドロゲナーゼの製
造方法。 - 【請求項２３】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼがアシネトバクター・カルコアセティ
カス（Acinetobacter calcoaceticus ）もしくはアシネ
トバクター・バウマンニ（Acinetobacter baumannii ）
由来の微生物である請求項２２記載のグルコースデヒド
ロゲナーゼの製造方法。 - 【請求項２４】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュー
ドモナス（Pseudomonas ）属またはアシネトバクター
（Acinetobacter ）属に属する微生物である請求項２３
記載のグルコースデヒドロゲナーゼの製造方法。 - 【請求項２５】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュー
ドモナス・エルギノサ（Pseudomonas aeruginosa）、シ
ュードモナス・フルオレッセンス（Pseudomonas fluore
scens ）、シュードモナス・プチダ（Pseudomonas puti
da）、アシネトバクター・カルコアセティカス（Acinet
obacter calcoaceticus ）、アシネトバクター・バウマ
ンニ（Acinetobacter baumannii ）からなる群より選ば
れた微生物である請求項２３記載のグルコースデヒドロ
ゲナーゼの製造方法。 - 【請求項２６】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がシュー
ドモナス・プチダ（Pseudomonas putida）である請求項
２３記載のグルコースデヒドロゲナーゼの製造方法。 - 【請求項２７】 ＰＱＱ生産能を有する微生物がアシネ
トバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter calc
oaceticus ）もしくはアシネトバクター・バウマンニ
（Acinetobacter baumannii ）である請求項２３記載の
グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法。 - 【請求項２８】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼが可溶性である請求項２６または２７
に記載のグルコースデヒドロゲナーゼの製造方法。 - 【請求項２９】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼをＧＯＯＤの緩衝液の存在下に凍結乾
燥して保持することを特徴とするグルコースデヒドロゲ
ナーゼの安定化方法。 - 【請求項３０】 カルシウムが共存する請求項２９記載
のグルコースデヒドロゲナーゼの安定化方法。 - 【請求項３１】 ＧＯＯＤの緩衝液がＰＩＰＥＳ、ＭＥ
Ｓ、ＭＯＰＳからなる群より選ばれた緩衝液である請求
項３０または３１に記載のグルコースデヒドロゲナーゼ
の安定化方法。 - 【請求項３２】 ＰＱＱを補欠分子族とするグルコース
デヒドロゲナーゼをＧＯＯＤの緩衝液の存在下に凍結乾
燥して保持されたものであることを特徴とする安定化さ
れたグルコースデヒドロゲナーゼ組成物。 - 【請求項３３】 カルシウムが共存する請求項３２記載
ののグルコースデヒドロゲナーゼ組成物。 - 【請求項３４】 ＧＯＯＤの緩衝液がＰＩＰＥＳ、ＭＥ
Ｓ、ＭＯＰＳからなる群より選ばれた緩衝液である請求
項３２または３３に記載のグルコースデヒドロゲナーゼ
組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10050817A JPH11243949A (ja) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Ｐｑｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10050817A JPH11243949A (ja) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Ｐｑｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11243949A true JPH11243949A (ja) | 1999-09-14 |
Family
ID=12869326
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10050817A Pending JPH11243949A (ja) | 1998-03-03 | 1998-03-03 | Ｐｑｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11243949A (ja) |
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000061730A1 (en) * | 1999-04-08 | 2000-10-19 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase |
| EP1367120A3 (en) * | 2002-05-27 | 2004-06-02 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Modified pyrroloquinoline quinone (PQQ) dependent glucose dehydrogenase with superior substrate specificity and stability |
| EP1331272A4 (en) * | 2000-10-31 | 2004-08-18 | Koji Sode | NEW GLUCOSEDEHYDROGENASE AND METHOD FOR PRODUCING THE DEHYDROGENASE |
| WO2004099399A1 (de) * | 2003-05-07 | 2004-11-18 | Bayer Technology Services Gmbh | Glukose dehydrogenase und ihre herstellung |
| WO2005026340A1 (ja) | 2003-09-08 | 2005-03-24 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 基質特異性に優れたピロロキノリンキノン（ｐｑｑ）依存性グルコースデヒドロゲナーゼ改変体 |
| US7005048B1 (en) | 1999-10-05 | 2006-02-28 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Glucose sensor |
| JP2008506375A (ja) * | 2004-07-20 | 2008-03-06 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | アミノ酸挿入を含む遺伝子操作されたピロロキノリンキノン依存性グルコースデヒドロゲナーゼ |
| US7381540B2 (en) | 2005-08-11 | 2008-06-03 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Composition for measuring glucose having improved substrate specificity |
| US7781196B2 (en) | 2004-10-15 | 2010-08-24 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Thermostable mutants of pyrroloquinoline quinone dependent glucose dehydrogenase |
| US7867728B2 (en) | 2004-08-24 | 2011-01-11 | Bayer Healthcare Llc | Determining the concentration of analytes in sample by direct mediation of enzymes |
| EP2194116A4 (en) * | 2007-08-24 | 2013-02-20 | Cytopathfinder Inc | TRANSFECTION DEVICE WITH SERICIN |
| US8940528B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-01-27 | Molecular Machines & Industries Ag | Petri-dish for cell cultivation and microscopy |
| EP3246402A1 (en) | 2006-04-13 | 2017-11-22 | Roche Diabetes Care GmbH | Improved mutants of pyrroloquinoline quinone dependent soluble glucose dehydrogenase |
| US10752934B2 (en) | 2015-10-29 | 2020-08-25 | Leadway (Hk) Limited | PQQ-sGDH mutant, polynucleotide and glucose detection biosensor |
| CN114438000A (zh) * | 2020-11-05 | 2022-05-06 | 万华化学(四川)有限公司 | 一株铜绿假单胞菌及其构建方法与应用 |
-
1998
- 1998-03-03 JP JP10050817A patent/JPH11243949A/ja active Pending
Cited By (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2000061730A1 (en) * | 1999-04-08 | 2000-10-19 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase |
| US7067295B1 (en) | 1999-04-08 | 2006-06-27 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase |
| US7005048B1 (en) | 1999-10-05 | 2006-02-28 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Glucose sensor |
| US7867742B2 (en) | 2000-10-31 | 2011-01-11 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and method for producing the dehydrogenase |
| US8367385B2 (en) | 2000-10-31 | 2013-02-05 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and method for producing the dehydrogenase |
| EP1331272A4 (en) * | 2000-10-31 | 2004-08-18 | Koji Sode | NEW GLUCOSEDEHYDROGENASE AND METHOD FOR PRODUCING THE DEHYDROGENASE |
| US9187734B2 (en) | 2000-10-31 | 2015-11-17 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and glucose sensor with same |
| US7960156B2 (en) | 2000-10-31 | 2011-06-14 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and method for producing the dehydrogenase |
| US8715990B2 (en) | 2000-10-31 | 2014-05-06 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and method for producing the dehydrogenase |
| US7741090B2 (en) | 2000-10-31 | 2010-06-22 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and process for producing the dehydrogenase |
| US8715989B2 (en) | 2000-10-31 | 2014-05-06 | Koji Sode | Glucose dehydrogenase and method for producing the dehydrogenase |
| EP1367120A3 (en) * | 2002-05-27 | 2004-06-02 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Modified pyrroloquinoline quinone (PQQ) dependent glucose dehydrogenase with superior substrate specificity and stability |
| US7476525B2 (en) | 2002-05-27 | 2009-01-13 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Modified pyrroloquinoline quinone (PQQ) dependent glucose dehydrogenase with superior substrate specificity and stability |
| WO2004099399A1 (de) * | 2003-05-07 | 2004-11-18 | Bayer Technology Services Gmbh | Glukose dehydrogenase und ihre herstellung |
| JP2006525005A (ja) * | 2003-05-07 | 2006-11-09 | バイエル・テクノロジー・サービシーズ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング | グルコースデヒドロゲナーゼおよびその産生 |
| US7432096B2 (en) | 2003-05-07 | 2008-10-07 | Bayer Technology Services Gmbh | Glucose dehydrogenase and production thereof |
| WO2005026340A1 (ja) | 2003-09-08 | 2005-03-24 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | 基質特異性に優れたピロロキノリンキノン（ｐｑｑ）依存性グルコースデヒドロゲナーゼ改変体 |
| US7479383B2 (en) | 2003-09-08 | 2009-01-20 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Modified pyrroloquinoline quinone (PQQ) dependent glucose dehydrogenase excellent in substrate specificity |
| JP2008506375A (ja) * | 2004-07-20 | 2008-03-06 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | アミノ酸挿入を含む遺伝子操作されたピロロキノリンキノン依存性グルコースデヒドロゲナーゼ |
| JP4842938B2 (ja) * | 2004-07-20 | 2011-12-21 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | アミノ酸挿入を含む遺伝子操作されたピロロキノリンキノン依存性グルコースデヒドロゲナーゼ |
| US7547524B2 (en) | 2004-07-20 | 2009-06-16 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Genetically engineered pyrroloquinoline quinone dependent glucose dehydrogenase comprising an amino acid insertion |
| EP3521421A1 (en) | 2004-07-20 | 2019-08-07 | Roche Diabetes Care GmbH | Genetically engineered pyrroloquinoline quinone dependent glucose dehydrogenase comprising an amino acid insertion |
| US7867728B2 (en) | 2004-08-24 | 2011-01-11 | Bayer Healthcare Llc | Determining the concentration of analytes in sample by direct mediation of enzymes |
| EP2251420A1 (en) | 2004-10-15 | 2010-11-17 | Roche Diagnostics GmbH | Thermostable mutants of pyrroloquinoline quinone dependent glucose dehydrogenase |
| US7781196B2 (en) | 2004-10-15 | 2010-08-24 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Thermostable mutants of pyrroloquinoline quinone dependent glucose dehydrogenase |
| US7381540B2 (en) | 2005-08-11 | 2008-06-03 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | Composition for measuring glucose having improved substrate specificity |
| EP3246402A1 (en) | 2006-04-13 | 2017-11-22 | Roche Diabetes Care GmbH | Improved mutants of pyrroloquinoline quinone dependent soluble glucose dehydrogenase |
| EP2194116A4 (en) * | 2007-08-24 | 2013-02-20 | Cytopathfinder Inc | TRANSFECTION DEVICE WITH SERICIN |
| US8940528B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-01-27 | Molecular Machines & Industries Ag | Petri-dish for cell cultivation and microscopy |
| US10752934B2 (en) | 2015-10-29 | 2020-08-25 | Leadway (Hk) Limited | PQQ-sGDH mutant, polynucleotide and glucose detection biosensor |
| CN114438000A (zh) * | 2020-11-05 | 2022-05-06 | 万华化学(四川)有限公司 | 一株铜绿假单胞菌及其构建方法与应用 |
| CN114438000B (zh) * | 2020-11-05 | 2024-02-27 | 万华化学(四川)有限公司 | 一株铜绿假单胞菌及其构建方法与应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP4107386B2 (ja) | 新規グルコース脱水素酵素及び該脱水素酵素の製造方法 | |
| JPH11243949A (ja) | Ｐｑｑを補欠分子族とするグルコースデヒドロゲナーゼおよびその製造方法 | |
| JP4216719B2 (ja) | ハロゲン化合物耐性新規ギ酸脱水素酵素及びその製造方法 | |
| JP4332794B2 (ja) | 基質特異性または安定性に優れたピロロキノリンキノン（ｐｑｑ）依存性グルコースデヒドロゲナーゼ改変体 | |
| JP4022784B2 (ja) | 新規なヘキソキナーゼ | |
| JPH10248574A (ja) | 新規な乳酸酸化酵素 | |
| JP4352286B2 (ja) | 変異型グルコース−６−リン酸デヒドロゲナーゼおよびその製造法 | |
| JP4036667B2 (ja) | 新規グルコース脱水素酵素及びそれをコードする遺伝子 | |
| JP4239046B2 (ja) | 変異型ヘキソキナーゼおよびその製造法 | |
| JP3850557B2 (ja) | 新規遺伝子及びその遺伝子を保有する形質転換細胞 | |
| US20090087874A1 (en) | Glucose dehydrogenase and production thereof | |
| JP4415247B2 (ja) | 新規なグリセロールキナーゼ、該遺伝子及び該遺伝子を用いたグリセロールキナーゼの製造法 | |
| JP2729045B2 (ja) | サルコシンオキシダーゼおよびその製造法 | |
| JP3904098B2 (ja) | 改変ザルコシンオキシダーゼおよびその用途 | |
| JP3829950B2 (ja) | 新規なクレアチニンアミドヒドロラーゼ | |
| JP2001204473A (ja) | 新規プラスミド、それを含む形質転換体、及びそれを用いた酵素の製造法 | |
| JP4161232B2 (ja) | サルコシンオキシダーゼ活性を有する新規なタンパク質およびその製造方法 | |
| JP2706223B2 (ja) | ピルビン酸オキシダーゼの遺伝情報を有するｄｎａの用途 | |
| JP2004089052A (ja) | グルコース脱水素酵素の製造方法 | |
| JP2001120273A (ja) | タンパク質の改変方法および改変タンパク質 | |
| JP4066203B2 (ja) | 新規なクレアチニンアミドヒドロラーゼ | |
| JP4591074B2 (ja) | 加熱処理を施した脱水素酵素 | |
| JP2006081407A (ja) | Ｐｑｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼの製造方法 | |
| JP3112146B2 (ja) | 耐熱性マレートデヒドロゲナーゼ活性を有する蛋白質 | |
| JP2001275669A (ja) | 新規カタラーゼ遺伝子及び該遺伝子を用いた新規カタラーゼの製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20050929 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20051124 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060202 |