JPH11253165A - ブタインターロイキン−２受容体α鎖のゲノム遺伝子配列 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 (ａ)配列番号１記載の塩基配列、又は
（ｂ）配列番号１記載の塩基配列において、１若しくは
複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配列
により表されるプロモーター活性を有するＤＮＡであ
る。さらに、ブタＩＬ−2受容体α鎖ゲノムＤＮＡであ
る。 【効果】 プロモーター活性を有する新規ＤＮＡが提供
される。さらに、ブタＩＬ−2受容体α鎖ゲノムＤＮＡ
が提供される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、プロモーター活性
を有するＤＮＡ、並びにそれを利用した発現ベクター及
び形質転換体に関する。さらに、本発明は、ブタＩＬ−
２受容体α鎖ゲノムＤＮＡに関する。

【０００２】

【従来の技術】インターロイキン−２（以下、「ＩＬ−
２」という）は、哺乳動物の抗原特異的免疫の中枢であ
るＴ細胞の増殖因子として発見された（K.A.Smith, Sci
ence,240, 1169-1176, 1988）。このＩＬ−２の結合タ
ンパク質であるＩＬ−２受容体はα鎖、β鎖およびγ鎖
と呼ばれる３種類のタンパク質から構成されることがヒ
ト及びマウスで知られている（T.Hara及びA.Miyajima,
EMBO J., 11, 1875-1184, 1992）。

【０００３】これら３種類の構成タンパク質のうち、最
小の分子量を有するα鎖は、別名p50若しくはp55タンパ
ク質、又はCD25分子若しくはTac（T cell activation m
arker）分子等とも呼ばれる。このα鎖は他の構成タン
パク質とは異なり、おもにＴ細胞の前駆細胞である未分
化の胸腺細胞や末梢の成熟Ｔ細胞が抗原刺激等により脱
分化、増殖する際に、その細胞表面上に発現されること
が知られている（T.A.Waldmanら., Annu. Rev. Immuno
l., 58, 875-911, 1989）。α鎖はその発現に伴い、恒
常的に発現されている上記β鎖及びγ鎖と会合して高親
和性の受容体を構成してＩＬ−２に対する応答性を高め
る作用を有している（H.M.Wangら., J. Exp. Med., 16
6, 1055-1069, 1987）。

【０００４】ヒト（DDBJ/EMBL/GenBank公開データX0105
7）、マウス（DDBJ/EMBL/GenBank公開データM30859）、
ヒツジ（DDBJ/EMBL/GenBank公開データZ11560）、ネコ
（DDBJ/EMBL/GenBank公開データD16143）及びブタ（DDB
J/EMBL/GenBank公開データU78317）のＩＬ−２受容体α
鎖をコードするｃＤＮＡの塩基配列は既に知られている
が、ＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの塩基配列は、い
ずれの動物種においても知られていない。その理由とし
ては、ＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡ中に存在する非
常に長い介在配列、いわゆるイントロンが従来の手法に
よる遺伝子の単離やPCR法による増幅を困難にしている
こと等が挙げられる。

【０００５】ＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡが単離・
同定されれば、プロモーター活性を有する新たなＤＮＡ
が提供されるとともに、ＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮ
Ａを用いた免疫担当細胞の機能検索が可能になると考え
られる。さらに、上記プロモーター活性を有するＤＮＡ
が提供されれば、組織特異的発現ベクターの構築が可能
となるとともに、相同組換え手法等を用いた細胞又は個
体レベルでの遺伝形質の改変が可能となると考えられ
る。そこで、ＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの単離・
同定が切望されている。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、プロモータ
ー活性を有する新規ＤＮＡ、及びブタＩＬ−２受容体α
鎖ゲノムＤＮＡを提供することを目的とする。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意研究した結果、標識したブタＩＬ
−２受容体α鎖ｃＤＮＡをプローブとして、ブタ肝臓由
来のゲノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングするこ
とにより、ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡを含む
ゲノムＤＮＡを単離することに成功した。そして、上記
プローブを用いたサザンブロット法により、単離したゲ
ノムＤＮＡからブタＩＬ−２受容体α鎖をコードする領
域を決定し、その塩基配列を決定するとともに、ブタＩ
Ｌ−２受容体α鎖をコードする領域に隣接する転写調節
領域を決定し、その塩基配列を決定することにより、本
発明を完成するに至った。

【０００８】すなわち、本発明は、以下の（ａ）又は
（ｂ）の塩基配列により表され、かつプロモーター活性
を有するＤＮＡである。 （ａ）配列番号１記載の塩基配列。 （ｂ）配列番号１記載の塩基配列において、１若しくは
複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配
列。 また、本発明は、上記ＤＮＡを含む発現ベクターであ
る。さらに、本発明は、上記発現ベクターによって形質
転換された形質転換体である。さらに、本発明は、５'
末端側に配列番号２記載の塩基配列により表されるＤＮ
Ａを含み、かつ３'末端側に配列番号３記載の塩基配列
より表されるＤＮＡを含んでなる、ブタ由来のゲノムＤ
ＮＡである。

【０００９】

【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。 １．本発明の第一は、以下の（ａ）又は（ｂ）の塩基配
列により表され、かつプロモーター活性を有するＤＮＡ
である。 （ａ）配列番号１記載の塩基配列。 （ｂ）配列番号１記載の塩基配列において、１若しくは
複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配
列。

【００１０】ここで、「１若しくは複数個の塩基」と
は、本願の出願時に常用される技術により欠失、置換も
しくは付加することができ、かつプロモーター活性を喪
失させない限り、その個数は特に限定されないが、通常
は、部位特異的変異誘発法（Zollerら., Nucleic Acids
Res. 10, 6487-6500, 1982）等により欠失、置換若し
くは付加することができる個数、即ち１若しくは数個を
意味する。本発明のＤＮＡは、例えば、以下の工程によ
り得ることができる。 （１）ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの単離・同
定 （２）プロモーター領域の特定 （３）プロモーター活性を有するＤＮＡの単離

【００１１】以下、各工程を説明する。 （１）ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの単離・同
定 ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの単離は、例え
ば、次のように行なうことができる。 ブタゲノムＤＮＡライブラリーの作製 成熟ブタの実質臓器を採取し、公知の方法（村松正実編
ラボマニュアル遺伝子工学、増刷版、61-62、1990お
よびJ.Sambrookら, Molecular Cloning,第２版., Cold
Spring Harbour Laboratory Press, pp.9.14-9.19, 198
9など）に従ってゲノムＤＮＡを得る。この際使用する
ブタの性別、品種等は特に限定されない。

【００１２】得られらたブタゲノムＤＮＡを、公知の方
法（J.Sambrookら, Molecular Cloning,第２版., Cold
Spring Harbour Laboratory Press, pp.9.24-9.30, 198
9など）に従い市販の制限酵素で限定分解する。この
際、制限酵素としては、例えばSau3AI、MboI等を使用す
ることができる。

【００１３】限定分解したＤＮＡ断片を市販のKlenow酵
素を用いて末端処理してからベクターに挿入する。この
際、ベクターとしては、ゲノムＤＮＡライブラリーを作
製し得るものであれば特に限定されず、いかなるベクタ
ーをも使用することができるが、特にファージベクター
を使用するのが好ましい。ファージベクターとしては、
例えば、λFIXII、λDASH、λEMBL３、λEMBL４等を使
用することができる。ベクターへのＤＮＡ断片の挿入
は、常法に従って行なうことができる。例えば、ファー
ジベクターとしてλFIXIIを使用する場合には、λFIXII
のＤＮＡをXhoIで切断した後にKlenow酵素で末端処理す
ることにより得られるλFIXII断片をブタゲノムＤＮＡ
断片とＤＮＡリガーゼにより結合させ、in vitroパッケ
ージング法（J.Sambrookら, Molecular Cloning,第２
版., Cold Spring Harbour Laboratory Press, pp. 2.
95-2.107, 1989）によりλFIXIIを試験管内再構成させ
ることによって、ブタゲノムＤＮＡを含むファージベク
ターλFIXIIを得ることができる。

【００１４】ブタゲノムＤＮＡを含むベクターを微生物
に導入し得られる形質転換体を培養することにより、ブ
タゲノムＤＮＡライブラリーを得ることができる。この
際、微生物としては、例えば、大腸菌を使用することが
できる。より具体的には、例えば、大腸菌XL-1Blue MRA
P2株（Stratagene社製）を使用することができる。ま
た、形質転換体の培養は、常法に従って行なうことがで
きる。培地としては、例えばNZY培地（NZアミン 10g、
イースト抽出物 5g、NaCl 5g、及びMgSO₄・7H₂O2gに蒸留
水を加えて１Ｌとしたもの（pH 7.5））を使用すること
ができ、培養温度は、例えば37℃とすることができ、培
養時間は例えば8〜13時間することができる。

【００１５】プローブの作製 ブタＩＬ−２受容体α鎖ｃＤＮＡ（DDBJ/EMBL/GenBank
公開データU78317）を単離、精製し、その全部又は一部
をアイソトープ等によって標識することにより、ブタゲ
ノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングするためのプ
ローブを作製することができる。ブタＩＬ−２受容体α
鎖ｃＤＮＡは、例えば、本発明者らの方法（T. Kokuho,
A.Uchimura及びS. Inumaru, Immunology and Cell Bio
l., 75,515-518, 1997）によって得ることができる。ま
た、ブタＩＬ−２受容体α鎖ｃＤＮＡは、市販のキット
（Megaprime DNA labelling system、Amersham社製な
ど）を用いて市販のアイソトープ（³²P-α-deoxyCTPな
ど）で標識することができる。

【００１６】クローンの選択 ブタゲノムＤＮＡライブラリーを、公知の方法（J.Samb
rookら, Molecular Cloning,第２版., Cold Spring Har
bour Laboratory Press, pp. 2.108-2.117、1989）に
従って、上記プローブを使用したプラークハイブリダイ
ゼーション法によりスクリーニングすることにより、陽
性クローンを得ることができる。この操作を必要に応じ
て２〜３回繰り返すことにより目的のブタＩＬ−２受容
体α鎖ゲノムＤＮＡを含むクローンを単離することがで
きる。

【００１７】ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの
サブクローニング 陽性クローンの中から適当なものを選択し、公知の方法
（例えば、J.Sambrookら, Molecular Cloning,第2版.,
Cold Spring Harbour Laboratory Press, pp.2.60-2.8
0、1989）によってＤＮＡを抽出、精製する。抽出、精
製されたＤＮＡを制限酵素（例えば、EcoRI、BamHI等）
で切断し、それらの電気泳動像から制限酵素地図を作製
するとともに、上記プローブを用いたサザンブロット法
に供し、陽性を示すＤＮＡ断片を同定する。

【００１８】陽性を示す個々のＤＮＡ断片を、公知の方
法（例えば、中山広樹、西方敬人バイオ実験イラストレ
イテッド２、p63-68、1995）によって精製した後、塩基
配列解析用のベクターに挿入する。塩基配列の解析に適
したベクターとしては、例えばプラスミドベクターが挙
げられる。このようなプラスミドベクターとしては、例
えば、pBluescriptII（Stratagene社製）又はpT7（Invi
trogen社製）ベクターを使用することができる。

【００１９】陽性を示すＤＮＡ断片を挿入したベクター
を微生物に導入し得られる形質転換体を培養し、公知の
方法（例えば、J.Sambrookら, Molecular Cloning,第2
版.,Cold Spring Harbour Laboratory Press, pp. 1.2
1-1.38、1989）により形質転換体からＤＮＡを抽出、精
製することにより塩基配列解析用試料を得ることができ
る。

【００２０】ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの
塩基配列決定 塩基配列解析用試料をサンガー法、マクサム・ギルバー
ト法等の塩基配列決定法に供し、個々のサブクローンに
挿入されているＤＮＡ断片の塩基配列の全部又は一部を
決定する。その結果を上記で作製した制限酵素地図に当
てはめ、サブクローンに挿入されているブタＩＬ−２受
容体α鎖ゲノムＤＮＡ由来のＤＮＡ断片の位置関係およ
びその向きを決定する。次に、ブタＩＬ−２受容体α鎖
をコードすると考えられる領域の適当な位置、具体的に
は、配列番号３の101番目から118番目の塩基配列および
8455番目から8480番目の塩基配列に相補的なPCR用プラ
イマーを設計し、市販のキット（例えばTakara社製LA-P
CR Kit Ver.2）を用いてPCRを行う。これにより、ブタ
ＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡの増幅産物を得ること
ができる。これを上記と同様の方法に従って精製した
後、塩基配列解析用のベクター（例えば、pT7（Invitro
gen社製））に挿入し、サンガー法、マクサム・ギルバ
ート法等に供して配列配列を決定する。

【００２１】（２）プロモーター領域の特定 プロモーター領域の特定は、公知の方法に従って行なう
ことができる。例えば、ＤＮＡ−ｍＲＮＡのヘテロデュ
プレックスを電子顕微鏡で観察する方法、Ｓ1マッピン
グを行なう方法、ｍＲＮＡを鋳型とするプライマー伸長
法、ｃＤＮＡライブラリーから得られた遺伝子の塩基配
列とゲノムＤＮＡライブラリーから得られた遺伝子の塩
基配列とを比較する方法等を用いて、プロモーター領域
を特定することができる。また、ブタＩＬ−２受容体α
鎖ゲノムＤＮＡの塩基配列から開始コドンを特定し、開
始コドンの上流をプロモーター領域として特定すること
もできる。

【００２２】（３）プロモーター活性を有するＤＮＡの
単離 プロモーター活性を有するＤＮＡの単離は、適当な制限
酵素を用いることによって行なうことができる。例え
ば、制限酵素BamHI、EcoRI、SalI等を用いることによっ
てプロモーター活性を有するＤＮＡを単離することがで
きる。以上の（１）〜（３）の工程により、本発明のＤ
ＮＡを得ることができる。また、コーディング領域の制
限酵素部位からエキソヌクレアーゼによってプロモータ
ーの方向にブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡを削っ
ていき、適当なところまで削れた断片を探すことによっ
て、本発明のＤＮＡを得ることもできる。

【００２３】さらに、本発明のＤＮＡは、例えば、フォ
スファイト・トリエステル法等の公知の方法に従って化
学合成することにより得ることもできる。さらに、本発
明のＤＮＡは、ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡを
鋳型とし、本発明のＤＮＡの両端に相補的なプライマー
を用いてＰＣＲを行なうことにより得ることもできる。
なお、本発明のＤＮＡを含んでなるＤＮＡ（配列番号２
記載の塩基配列により表されるＤＮＡ）を組み込んだプ
ラスミドU21-1を導入した大腸菌pIL2R-ex1は、工業技術
院生命工学工業技術研究所にFERM P-16636として寄託さ
れている（寄託日：平成10年2月13日）。

【００２４】本発明の発現ベクターは、本発明のＤＮＡ
を含む。本発明の発現ベクター中には、本発明のＤＮＡ
の下流に目的の遺伝子を配置しておく。ここで、目的の
遺伝子とは、それにコードされている遺伝子産物（例え
ば、タンパク質、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ等）の
発現を目的をする遺伝子を意味する。本発明の発現ベク
ターにより形質転換された形質転換体の検出を容易にす
るために、本発明のＤＮＡの下流にマーカー遺伝子及び
／又はレポーター遺伝子を挿入しておくのが好ましい。
このようなマーカー遺伝子としては、特に限定されず、
公知のいかなるマーカー遺伝子及びレポーター遺伝子を
も使用することができる。例えば、マーカー遺伝子とし
ては、ハイグロマイシンＢホスホトランスフェラーゼ遺
伝子、ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子、
ゼオシン耐性遺伝子、等を使用することができ、またレ
ポーター遺伝子としては、クロラムフェニコールアセチ
ルトランスフェラーゼ遺伝子、β−グルクロニルダーゼ
遺伝子、ホタルルシフェラーゼ遺伝子、等を使用するこ
とができる。

【００２５】本発明の発現ベクターの構築は、公知の方
法に従って行なうことができる。本発明の発現ベクター
の構築に使用することができるベクターとしては、特に
限定されず、公知のいかなるベクターをも使用すること
ができる。このようなベクターとしては、例えば、pc
D、pGV，pUC等を使用することができる。本発明の発現
ベクターは、適当な宿主中で目的の遺伝子を発現させる
ために使用することができる。本発明の発現ベクター
は、特に組織特異的発現ベクターとして有用である。本
発明の形質転換体は、本発明の発現ベクターにより形質
転換された細胞である。

【００２６】本発明の形質転換体は、本発明の発現ベク
ターを宿主細胞に導入し、発現ベクター中に組み込まれ
た目的の遺伝子を発現させることによって得ることがで
きる。この際使用する宿主細胞としては、特に限定され
ない。このような宿主細胞としては、例えば大腸菌、哺
乳動物細胞等を使用することができる。本発明の発現ベ
クターの宿主細胞への導入は、公知の方法に従って行な
うことができる。例えば、プロトプラスト法、、リチウ
ム法、DEAE-dextran法、リポフェクション法、エレクト
ロポレーション法、又はこれらの変法を使用して本発明
の発現ベクターを宿主細胞に導入することができる。

【００２７】２．本発明の第二は、５'末端側に配列番
号２記載の塩基配列により表されるＤＮＡを含み、かつ
３'末端側に配列番号３記載の塩基配列により表される
ＤＮＡを含んでなる、ブタ由来のゲノムＤＮＡである。
本発明のゲノムＤＮＡは、転写調節領域を含むととも
に、ブタＩＬ−２受容体α鎖をコードする領域を含む。
本発明のゲノムＤＮＡは、例えば、ブタＩＬ−２受容体
α鎖をコードするｃＤＮＡ、配列番号２記載の塩基配列
により表されるＤＮＡ、又は配列番号３記載の塩基配列
により表されるＤＮＡをプローブとして用いて、ブタゲ
ノムＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによ
り得ることができる。

【００２８】なお、配列番号２記載の塩基配列により表
されるＤＮＡを組み込んだプラスミドU21-1を導入した
大腸菌pIL2R-ex1は、工業技術院生命工学工業技術研究
所にFERM-16636として寄託されている（寄託日：平成10
年2月13日）。また、配列番号3記載の塩基配列により表
されるＤＮＡを組み込んだプラスミドpT7IL2R-ex2/8を
導入した大腸菌pIL2R-ex2/8は、工業技術院生命工学工
業技術研究所にFERM-16637として寄託されている（寄託
日：平成10年2月13日）。本発明のゲノムＤＮＡは、ブ
タの免疫担当細胞の機能検索やin vitro及びin vivoに
おけるゲノムＤＮＡの構造改変に利用することができ
る。

【００２９】

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。 〔実施例１〕ブタ肝臓からのゲノムＤＮＡの精製 ７カ月令雌ブタの肝臓から組織の一部を採取し、液体窒
素で凍結したのち、公知の方法（村松正実編 ラボマニ
ュアル遺伝子工学、増刷版、61-62、1990およびJ.Sambr
ookら, Molecular Cloning,第２版, Cold Spring Harbo
ur LaboratoryPress, pp.9.14-9.19, 1989）によりゲノ
ムＤＮＡを調製した。方法の概略は以下の通りである。

【００３０】秤量したブタの肝組織を液体窒素で凍結
後、最終濃度100μg/mlのプロテイナーゼＫを含む20倍
量の抽出液中で55℃で１時間および37℃で一昼夜処理し
た。この溶液を中性飽和フェノールで２回、さらにフェ
ノール：クロロホルムで２回抽出したのち、エタノール
沈殿を実施した。次に、最終濃度10μg/mlのRNaseAでＲ
ＮＡを消化したのち、再び同様のフェノール抽出及びエ
タノール沈殿を実施し、精製ゲノムＤＮＡを得た。

【００３１】〔実施例２〕ゲノムＤＮＡライブラリーの
作製 上記ゲノムＤＮＡ 100μgを制限酵素Sau3AI（TOYOBO社
製）で限定分解した。これをKlenow酵素による末端処理
（いわゆるパーシャルフィルイン反応）したのち、同様
に制限酵素XhoI（TOYOBO社製）で切断し末端処理を行っ
たλFIXIIファージベクターに挿入した。これを市販の
キット（GigpackII XL、Stratagene社製）を用いてin v
itroパッケージングし、平均鎖長約13キロ塩基対の挿入
ＤＮＡを有する、独立クローン約1.8×10⁶からなるバク
テリオファージライブラリーを得た。

【００３２】〔実施例３〕スクリーニング用プローブの
作製 本発明者らにより報告されている方法（T. Kokuho, A.U
chimura及びS. Inumaru, Immunology and Cell Biol.,
75, 515-518, 1997）により単離された、ブタＩＬ−２
受容体α鎖のｃＤＮＡクローンのプラスミドＤＮＡを市
販の制限酵素BssHIIで切断、精製することにより、ブタ
ＩＬ−２受容体α鎖をコードするｃＤＮＡ断片を得た。
このｃＤＮＡ断片をアイソトープ（³²Ｐ-α-deoxyCTP、
NEN社製）で市販のキット（Megaprime DNA labelling s
ystem、Amersham社製）を用いて標識し、スクリーニン
グ用プローブとした。 〔実施例４〕ブタゲノムＤＮＡライブラリーからのブタ
ＩＬ−2受容体α鎖ゲノムＤＮＡの単離 実施例３で作製したスクリーニング用プローブを用い
て、実施例２で作製したブタゲノムDNAライブラリーを
スクリーニングした。

【００３３】スクリーニングは公知のプラークハイブリ
ダイゼーション法（J.Sambrookら,Molecular Cloning,
第2版.,Cold Spring Harbour Laboratory Press, pp.
2.108-2.117、1989）に記載の方法で実施した。すなわ
ち、約８万個のバクテリオファージクローンを平板培養
し、プラークをナイロンフィルター（Hybond-N+、Amers
ham社製）に移し、紫外線照射によって固定した後、乾
燥した。ハイブリダイゼーション前に、説明書に従って
市販の反応液（Rapid Hybridization Buffer、Amersham
社製）中で65℃で２時間インキュベートした。その後、
同溶液に³²Ｐ標識プローブを添加し、さらに2.5時間イ
ンキュベートした。次いで、フィルターを2x SSC（3M N
aCl、0.03Mクエン酸ナトリウム）、0.1%SDS（ドデシル
硫酸ナトリウム）中で室温で15分、２度洗浄した後、0.
2x SSC、0.1%SDS中で65℃で30分、２度洗浄を行った。
オートラジオグラム上の放射能スポットに対応するプレ
ートの領域から120個のクローンを採取し、さらに上記
の方法を繰り返すことによりプローブにハイブリダイズ
する陽性クローン８個を得た。

【００３４】〔実施例５〕ブタＩＬ−２受容体α鎖ゲノ
ムの塩基配列の決定 実施例４で得られたクローンを、J.Sambrookら, Molecu
lar Cloning,第２版.,Cold Spring Harbour Laboratory
Press, pp. 2.70-2.71, 1989に記載の方法に従い大腸
菌XL1-Blue MRA P2株（Stratagene社製）を用いて増幅
し、さらにJ.Sambrookら, Molecular Cloning,第2版.,
Cold Spring Harbour Laboratory Press,pp. 2.73-2.76
および 2.80-2.81, 1989に記載の方法に従って、個々の
λFIXIIファージクローンのＤＮＡを精製した。

【００３５】これらのＤＮＡを市販の制限酵素、たとえ
ばNotI、EcoRI、BamHI、HindIII（いずれもTOYOBO社
製）などで切断し、その反応液をJ.Sambrookら, Molecu
lar Cloning,第2版., Cold Spring Harbour Laboratory
Press, pp. 6.9-6.13, 1989に記載の方法に従って、ア
ガロースゲル電気泳動に供し、その電気泳動像から各々
の制限酵素地図を作製した。

【００３６】さらに、J.Sambrookら, Molecular Clonin
g,第2版., Cold Spring Harbour Laboratory Press, p
p. 9.32-9.58, 1989に記載の方法に従って、実施例４と
同一の条件にてスクリーニング用プローブを用いたハイ
ブリダイゼーション及び洗浄操作を実施し、陽性シグナ
ルを与える複数のＤＮＡ断片を同定した。次いで、これ
らの断片を作製した際に用いたのと同じ制限酵素で処理
したプラスミドベクターpBluescriptII SK(-)（Stratag
ene社製）にこれらのＤＮＡ断片を挿入し、自動シーケ
ンサー（A.L.F. Express、Pharmacia社製）を用いてサ
ンガー法により配列番号２および配列番号３の塩基配列
の一部又は全部を含む複数のサブクローンの塩基配列を
確認した。

【００３７】得られた塩基配列の結果及び上述の制限酵
素地図を参考にして、ＰＣＲプライマーを作製した。具
体的には配列番号３の101番目から118番目の塩基配列お
よび8455番目から8480番目の塩基配列に相補的なＰＣＲ
プライマー合成した。ＰＣＲプライマーの塩基配列は以
下の通りである。 5'-GGGCTTGCGTTCAGCAGC-3' 5'-CCGCAGCGTTAATTCTGTGGGTTCAT-3' これらのプライマー及び市販のキット（LA-PCR Kit Ve
r.2 TOYOBO社製）を用いて、実施例４で得られたλFIXI
IファージクローンのＤＮＡを鋳型とするＰＣＣＲを実
施したところ、約8.5キロ塩基対の二本鎖ＤＮＡが増幅
された。ここで行ったＰＣＲの条件は以下の通りであ
る。

【００３８】すなわち、λFIXII DNA 1 ng、上記の合成
プライマー各10 pmole、ＤＮＡ合成基質dNTP溶液8μl、
耐熱性ＤＮＡ合成酵素0.5μl及び同酵素に添付された緩
衝液5μlに蒸留水を加えて50μlとし、94℃で４分の１
サイクルを１回、98℃で20秒、58℃で１分、及び72℃で
20分の１サイクルを14回、98℃で20秒、58℃で１分、及
び72℃で20分（１サイクル毎に15秒ずつ延長）の１サイ
クルを16回、72℃で10分の１サイクルを１回の条件でＰ
ＣＲ反応を行った。ＰＣＲ装置はOmnigene社製サーマル
サイクラーを使用した。反応液中のＰＣＲ産物を市販の
精製キット（QIAquick PCR Purification Kit、QIAGEN
社製）を用いて精製した後、Invitrogen社製のプラスミ
ドベクターpT7-Tに挿入し、自動シーケンサー（A.L.F.
Express、Pharmacia社製）を用いてサンガー法により全
塩基配列を決定した（配列番号３）。

【００３９】

【発明の効果】本発明により、プロモーター活性を有す
る新規ＤＮＡが提供される。本発明のＤＮＡを含む発現
ベクターは、組織特異的発現ベクターとして利用するこ
とができる。また、本発明により、ブタＩＬ−２受容体
α鎖ゲノムＤＮＡが提供される。本発明のブタＩＬ−２
受容体α鎖ゲノムＤＮＡは、転写調節領域及びブタＩＬ
−２受容体α鎖をコードする領域を含むので、適当な宿
主に組み込むことにより、ブタＩＬ−２受容体α鎖を効
率よく生産することができる。また、本発明のブタＩＬ
−２受容体α鎖ゲノムＤＮＡは、ブタの免疫担当細胞の
機能検索やin vitro及びin vivoにおけるゲノムＤＮＡ
の構造改変に利用することができる。

【００４０】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：1245 配列の型：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源： 生物名：Sus scrofa 配列の特徴： ブタIL-2受容体α鎖ゲノムＤＮＡのプロモーター領域 配列 GAATTCTGAG TATGGATCAG TTTGCTGCTT CCTTTTCAAT GACCTGAATA TTGGAGACCC 60 CATCCTGACG CCCACTAGAC TTTGAAAAAA TGTTATTGAA ATTTAGTTCA TCTACAATGT 120 TGTGTTAATT TCTGCTATAT AGCAAAGTGA TTTGAATACA TACACACACA CACATATGTA 180 TATAATGGAA AAGGCTATGA AAGAAAAGAC TATATAGATA GTCATATGTA AGACTGTGAA 240 AGAGAAGATA TATATATATA ACATGGAAAA CACAAGGAAA AGTATATACG TATATATTCT 300 TTTTCATAGT CCTTCTCCGT CATGGTTTAT CACGATACTG AACATAGCTC CCTGTGCTCT 360 ACAGTAGGAC CTGGGCATTT ATCCATCTAT ATGCACTAGT TTGCATCTGC TAATCCCAAA 420 CTCCCGATCC ATCCCTCCCC TCCCCTCTCC CCCTCGGCAA CCCCAAGTCT GTTCTCTAGG 480 TCTGCAAGTC CGTGTCTGTT TCCTCGATAA GTTCATTTGT GTCATATTTT AGATTCCACG 540 CGGAAGTGGT ATCACATGGT ATGTGTCCTT CTCTGACGGA CTTCGCTTAG TGTGGTCATC 600 TCCAGGTCCC TCCAGATTGC TGCACATTTT TTAAAGAGAT CCAGGCAGAC AGCTTTAGGA 660 AATTCCCATT TCTGGCCAAG ACTGCTCTTC CACACTTTTG GCATGGCCTT GTCCCCATGT 720 CCTGCTGACT CCTCTGGGAG CTGCAAGTCT GGGGAAGGAC CTCAGCAGTT TCACGGTGAC 780 ATCAGTCTGT GAAACCCTAG ATGAGCCCAC TGCCAAGAAG TGCTTGCTCA CCCTCCTTCA 840 ACGGCAGAGG GAATCTCCCT CTCCTTTTTT GGGGGGAAGC TGAAGAAAGG ATTCATAAAT 900 GAACCCCAGT GCTCCTCACC AACCTCAGCC CACACCTCCC AGCAACTGAA CTTGAAAAAA 960 ACCTGGTTAA AACCACTTCC TATATTTGAA ACTAGAGAAG AGAGTGCTAT AGGCACTATT 1020 TCCTGGCTGA ACCGACCAGG CTGTTACTTA GACGCAGAGC CAGTGCAGAC AGCCCCAGAG 1080 CCTGGACGGA CGGGCGAGGA TGACAGCCTG AGCGGAGGGA GCCCTCATCC CCGTCCTCTC 1140 GGCGAGATGC TAACCAGAGG CTGACAGGGC CCGGCATCCG ACGGAGAAAC TCCCCTCCTC 1200 CTGGCCCCAC GTCGTAGCTG GCAGCTGATC CCAAGGACCA GGAGG

【００４１】配列番号：２ 配列の長さ：1425 配列の型：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源： 生物名：Sus scrofa 配列の特徴： ブタIL-2受容体α鎖ゲノムＤＮＡの５'末端側の一部
（エクソン１を含む配列） 配列 GAATTCTGAG TATGGATCAG TTTGCTGCTT CCTTTTCAAT GACCTGAATA TTGGAGACCC 60 CATCCTGACG CCCACTAGAC TTTGAAAAAA TGTTATTGAA ATTTAGTTCA TCTACAATGT 120 TGTGTTAATT TCTGCTATAT AGCAAAGTGA TTTGAATACA TACACACACA CACATATGTA 180 TATAATGGAA AAGGCTATGA AAGAAAAGAC TATATAGATA GTCATATGTA AGACTGTGAA 240 AGAGAAGATA TATATATATA ACATGGAAAA CACAAGGAAA AGTATATACG TATATATTCT 300 TTTTCATAGT CCTTCTCCGT CATGGTTTAT CACGATACTG AACATAGCTC CCTGTGCTCT 360 ACAGTAGGAC CTGGGCATTT ATCCATCTAT ATGCACTAGT TTGCATCTGC TAATCCCAAA 420 CTCCCGATCC ATCCCTCCCC TCCCCTCTCC CCCTCGGCAA CCCCAAGTCT GTTCTCTAGG 480 TCTGCAAGTC CGTGTCTGTT TCCTCGATAA GTTCATTTGT GTCATATTTT AGATTCCACG 540 CGGAAGTGGT ATCACATGGT ATGTGTCCTT CTCTGACGGA CTTCGCTTAG TGTGGTCATC 600 TCCAGGTCCC TCCAGATTGC TGCACATTTT TTAAAGAGAT CCAGGCAGAC AGCTTTAGGA 660 AATTCCCATT TCTGGCCAAG ACTGCTCTTC CACACTTTTG GCATGGCCTT GTCCCCATGT 720 CCTGCTGACT CCTCTGGGAG CTGCAAGTCT GGGGAAGGAC CTCAGCAGTT TCACGGTGAC 780 ATCAGTCTGT GAAACCCTAG ATGAGCCCAC TGCCAAGAAG TGCTTGCTCA CCCTCCTTCA 840 ACGGCAGAGG GAATCTCCCT CTCCTTTTTT GGGGGGAAGC TGAAGAAAGG ATTCATAAAT 900 GAACCCCAGT GCTCCTCACC AACCTCAGCC CACACCTCCC AGCAACTGAA CTTGAAAAAA 960 ACCTGGTTAA AACCACTTCC TATATTTGAA ACTAGAGAAG AGAGTGCTAT AGGCACTATT 1020 TCCTGGCTGA ACCGACCAGG CTGTTACTTA GACGCAGAGC CAGTGCAGAC AGCCCCAGAG 1080 CCTGGACGGA CGGGCGAGGA TGACAGCCTG AGCGGAGGGA GCCCTCATCC CCGTCCTCTC 1140 GGCGAGATGC TAACCAGAGG CTGACAGGGC CCGGCATCCG ACGGAGAAAC TCCCCTCCTC 1200 CTGGCCCCAC GTCGTAGCTG GCAGCTGATC CCAAGGACCA GGAGG ATG GAG CCG AGC 1257 Met Glu Pro Ser 1 TTG CTG ATG TGG GGA TTC TTC ACA TTC ACC ATG ATA CCC GGC TGC ATG 1305 Leu Leu Met Trp Gly Phe Phe Thr Phe Thr Met Ile Pro Gly Cys Met 5 10 15 20 GCA G GTAAGGGGTC ACAGGGGCCC TTGGAGTCTT GTGGGGGGGC TAAGGATGTC 1359 Ala Gly GACTCTCCCG GGCACAGAAT CAGAGAGGGC ACCTGAGTAG ACAGCAGAGG GAAGGGGGTT 1419 GGATCC 1425

【００４２】配列番号：３ 配列の長さ：8480 配列の型：核酸 鎖の数：２本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源： 生物名：Sus scrofa 配列の特徴： ブタIL-2受容体α鎖ゲノムＤＮＡの３'末端側の一部
（エクソン２〜８を含む配列） 配列 ＡＡＴＧＴＧＧＣＡＴ ＴＡＧＡＴＣＡＧＴＴ ＡＧＡＴＣＴＴＧＧＣ ＡＴＧ
ＧＣＴＧＡＴＣ ＡＴＡＴＧＴＧＣＣＡ ＧＴＧＴＴＴＧＧＡＡ ６０ ＧＣＴＣＣＴＧＡＡＣ ＣＣＣＣＡＡＧＡＴＧ ＧＴＴＴＴＴＴＴＣＣ ＧＴＣ
ＴＴＡＡＣＡＧ ＧＧ ＧＣＴ ＴＧＣ ＧＴＴ ＣＡＧ １１４
Ａｌａ Ｃｙｓ Ｖａｌ Ｇｌｎ
１ ＣＡＧ ＣＣＧ ＣＣＧ ＡＧＣ ＣＴＣ ＡＧＡ ＡＡＴ ＧＣＣ ＡＣＧ
ＴＴＣ ＡＡＧ ＡＴＣ ＣＴＣ ＧＧＧ ＴＡＣ ＡＡＧ １６２ Ｇｌｎ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ａｓｎ Ａｌａ Ｔｈｒ
Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｙｓ ５ １０
１５ ２０ ＧＴＧ ＧＧＣ ＡＣＣ ＡＣＡ ＴＴＡ ＡＡＣ ＴＧＴ ＧＡＣ ＴＧＣ
ＣＡＧ ＡＧＡ ＧＧＴ ＴＴＣ ＣＧＣ ＡＧＡ ＧＡＣ ２１０ Ｖａｌ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ａｓｐ Ｃｙｓ
Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｓｐ ２５
３０ ３５ ＣＣＣ ＡＧＣ ＡＧＣ ＧＧＧ ＣＣＣ ＴＡＣ ＡＴＧ ＡＴＣ ＴＧＣ
ＡＧＧ ＧＧＡ ＡＡＣ ＴＣＣ ＡＧＣ ＣＡＣ ＴＣＣ ２５８ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｍｅｔ Ｉｌｅ Ｃｙｓ
Ａｒｇ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｈｉｓ Ｓｅｒ ４０ ４５
５０ ＴＴＣ ＴＧＧ ＧＡＡ ＡＡＣ ＡＡＧ ＴＧＣ ＣＡＧ ＴＧＣ ＡＴＧ
ＣＣＣ ＡＣＣ Ｔ ＧＴＡＡＧＴＧＣＣＧ ３０２ Ｐｈｅ Ｔｒｐ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｇｌｎ Ｃｙｓ Ｍｅｔ
Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｓｅｒ ５５ ６０ ＣＧＴＴＴＡＴＡＡＣ ＴＧＣＣＣＣＣＣＧＣ ＣＴＧＡＧＧＧＡＡＡ ＧＡＡ
ＡＡＡＣＴＧＣ ＡＧＣＡＡＡＧＡＧＧ ＧＡＧＡＧＧＧＧＧＴ ３６２ ＴＴＣＡＧＣＴＴＴＴ ＡＣＴＣＡＣＴＣＡＧ ＣＣＣＴＧＣＡＧＡＣ ＡＡＡ
ＡＧＴＣＴＧＣ ＣＡＧＣＣＣＣＡＣＣ ＴＡＣＡＣＧＡＴＡＡ ４２２ ＣＡＡＡＴＧＣＣＴＧ ＴＧＧＴＴＣＡＣＴＡ ＡＧＣＡＡＡＴＡＴＴ ＣＡＡ
ＣＣＡＧＣＧＴ ＣＴＣＣＴＡＧＴＴＣ ＴＧＡＧＧＡＣＴＧＴ ４８２ ＴＣＴＡＧＡＣＡＣＴ ＧＧＧＧＡＣＴＣＡＧ ＣＣＣＴＣＡＡＧＧＡ ＡＣＣ
ＴＡＧＧＣＴＣ ＣＡＧＧＧＧＧＡＡＧ ＧＡＣＡＧＡＴＡＴＣ ５４２ ＡＣＡＣＣＡＧＴＡＡ ＡＴＡＣＣＡＡＡＣＡ ＧＧＡＧＴＴＣＣＣＡ ＴＴＧ
ＧＧＧＣＴＣＡ ＧＧＧＧＡＣＡＡＴＧ ＡＡＴＣＴＧＡＣＴＡ ６０２ ＣＴＡＴＣＣＡＴＧＡ ＧＧＡＴＧＣＡＧＧＴ ＴＣＧＡＴＣＣＣＴＧ ＧＣＣ
ＴＣＧＣＴＣＡ ＧＴＧＧＧＧＴＴＡＡ ＧＧＡＴＣＴＧＧＡＧ ６６２ ＴＴＧＣＣＧＴＧＡＧ ＣＴＧＴＧＧＧＴＡＴ ＡＧＧＴＣＡＣＡＧＡ ＣＡＡ
ＧＧＣＴＴＧＧ ＡＴＣＴＧＧＴＧＴＴ ＧＣＴＧＴＧＧＣＴＧ ７２２ ＴＧＧＴＧＴＡＧＡＣ ＣＧＧＧＣＡＧＣＴＧ ＡＧＧＣＴＣＴＧＡＴ ＴＣＡ
ＡＣＣＣＣＣＡ ＧＣＣＴＧＧＧＡＡＣ ＣＴＣＣＡＴＡＴＧＣ ７８２ ＴＡＴＧＧＧＴＧＣＡ ＧＣＣＣＴＡＡＡＡＡ ＧＧＣＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡ
ＡＡＡＡＧＡＧ ＧＧＴＡＡＴＡＴＧＧ ＴＡＡＡＡＡＴＴＡＴ ８４２ ＧＴＴＡＴＧＴＡＴＡ ＴＴＴＴＡＧＣＡＣＡ ＡＴＴＴＴＴＡＡＴＴ ＧＡＡ
ＣＴＡＴＡＧＴ ＴＧＡＴＴＡＡＣＡＡ ＴＧＴＴＡＴＴＴＧＴ ９０２ ＴＧＣＡＧＧＴＧＴＡ ＧＡＡＡＡＡＡＴＴＧ ＡＴＴＣＴＧＡＴＴＡ ＴＡＴ
ＡＴＡＴＡＴＡ ＴＡＴＡＣＡＧＡＣＡ ＴＡＴＧＡＴＧＴＧＴ ９６２ ＧＴＡＴＡＴＡＴＡＣ ＴＴＴＴＣＴＡＧＡＣ ＴＣＴＴＣＴＣＣＡＣ ＴＡＴ
ＡＧＧＴＡＡＴ ＴＡＣＡＡＧＡＴＡＴ ＴＧＡＡＴＡＴＡＧＴ １０２２ ＴＣＣＣＴＧＧＧＣＴ ＡＣＡＣＡＧＴＡＧＧ ＡＣＴＴＴＧＴＴＧＴ ＴＣＡ
ＴＴＴＴＡＴＡ ＴＡＣＡＧＴＡＧＴＡ ＴＡＴＡＴＣＴＧＴＴ １０８２ ＡＡＴＴＣＣＡＡＡＣ ＴＣＣＴＡＡＴＴＴＧ ＴＣＣＣＴＣＣＣＣＴ ＡＴＴ
ＴＴＧＣＣＣＴ ＴＴＧＡＣＡＡＣＣＡ ＴＡＡＧＴＴＴＧＴＴ １１４２ ＣＴＣＴＧＴＣＴＧＴ ＧＡＧＴＣＴＧＴＴＴ ＡＴＧＴＴＴＴＡＴＡ ＡＡＧ
ＴＴＣＡＴＴＴ ＧＴＡＴＴＡＴＴＴＴ ＴＴＡＧＡＴＴＣＣＡ １２０２ ＣＡＴＡＴＡＡＧＴＧ ＡＴＡＣＡＴＴＴＧＴ ＣＴＴＴＡＴＣＴＧＡ ＣＴＴ
ＴＣＴＴＣＡＣ ＴＴＡＧＴＡＴＧＡＴ ＡＡＴＣＴＣＴＣＡＧ １２６２ ＴＣＣＡＴＣＣＡＴＧ ＴＴＧＴＴＧＣＧＡＡ ＴＧＧＣＡＴＴＡＴＴ ＴＴＧ
ＴＴＣＴＴＴＴ ＴＴＡＴＧＧＣＴＧＡ ＧＴＡＡＴＡＧＴＣＣ １３２２ ＡＴＴＧＴＡＴＡＴＡ ＴＧＴＡＣＣＡＴＧＴ ＣＴＴＣＴＴＴＡＴＴ ＣＡＴ
ＣＴＧＴＴＧＡ ＴＧＧＡＣＡＣＴＴＡ ＧＧＴＴＧＣＴＴＣＣ １３８２ ＡＴＧＴＣＴＴＧＧＣ ＴＡＴＴＧＣＧＡＡＴ ＧＧＴＴＣＴＧＣＴＡ ＣＡＡ
ＡＣＡＣＴＣＧ ＧＧＴＧＣＡＣＡＴＡ ＴＣＴＴＴＣＣＡＡＡ １４４２ ＴＴＡＧＧＧＴＴＴＴ ＣＡＴＣＴＴＴＴＣＴ ＧＧＡＴＡＧＡＴＧＣ ＣＣＡ
ＧＧＡＧＴＧＧ ＧＧＴＴＧＣＴＡＧＧ ＴＣＡＣＡＴＧＧＣＡ １５０２ ＧＴＴＣＴＡＴＴＴＴ ＴＴＧＴＴＴＴＴＴＡ ＡＧＧＣＧＣＣＴＣＣ ＡＴＣ
ＣＴＧＴＴＣＴ ＣＣＡＴＡＧＴＧＧＣ ＡＧＣＡＣＣＡＣＴＧ １５６２ ＴＣＧＣＴＧＣＴＴＴ ＡＡＧＡＡＧＧＣＴＴ ＴＧＣＴＣＴＧＡＣＴ ＴＴＴ
ＴＴＴＴＴＴＴ ＴＴＴＴＴＴＴＴＴＴ ＧＡＣＣＴＴＴＴＴＴ １６２２ ＴＧＣＴＡＴＴＴＣＴ ＴＧＧＧＣＴＧＣＴＣ ＣＣＧＴＧＧＣＡＴＡ ＴＧＧ
ＡＧＧＴＴＣＣ ＣＡＧＧＣＴＡＧＧＧ ＧＴＴＧＡＡＴＣＡＧ １６８２ ＡＧＣＴＧＣＡＧＣＣ ＡＣＣＧＧＣＣＴＡＣ ＧＣＣＡＧＡＧＣＣＡ ＣＡＧ
ＣＡＡＣＧＣＧ ＧＧＡＴＣＣＧＡＧＣ ＣＧＣＡＴＣＴＧＣＡ １７４２ ＡＣＣＴＡＣＡＣＣＡ ＣＡＧＣＴＣＡＣＧＧ ＣＡＡＣＧＣＴＧＧＡ ＴＣＧ
ＴＴＡＡＣＣＣ ＡＣＴＧＡＧＣＡＡＧ ＧＧＣＡＧＧＧＡＣＣ １８０２ ＧＡＡＣＣＣＧＣＡＡ ＣＣＴＣＡＴＧＧＴＴ ＣＣＴＡＧＴＣＧＧＡ ＴＴＣ
ＧＴＴＡＡＣＣ ＡＣＴＧＣＧＣＣＡＣ ＧＡＣＧＧＧＡＡＣＴ １８６２ ＣＣＴＧＣＴＣＣＧＡ ＣＴＴＴＴＡＡＡＴＧ ＡＡＴＴＧＣＣＴＴＣ ＣＧＧ
ＡＣＡＣＡＡＡ ＧＡＡＧＴＧＧＣＧＧ ＧＣＴＧＣＣＧＡＧＣ １９２２ ＴＧＡＣＧＧＧＧＣＴ ＣＡＴＣＡＴＴＣＡＴ ＧＧＴＣＧＣＡＣＴＣ ＣＴＧ
ＣＣＡＴＧＴＧ ＴＧＡＴＧＣＣＡＴＣ ＡＧＧＣＧＧＡＣＧＧ １９８２ ＣＣＡＧＡＡＴＧＧＡ ＧＴＣＣＣＴＣＴＧＧ ＧＧＧＡＧＡＣＴＡＡ ＴＡＣ
ＡＣＡＡＡＴＴ ＣＣＡＴＣＡＧＡＡＡ ＡＴＣＴＣＡＧＴＴＧ ２０４２ ＡＧＡＡＡＴＡＣＡＴ ＣＡＧＡＧＧＣＣＡＴ ＧＧＴＣＧＴＣＴＧＧ ＡＣＡ
ＧＧＡＡＧＣＣ ＣＧＡＣＴＧＡＣＡＧ ＧＣＴＧＧＣＧＣＴＧ ２１０２ ＧＧＣＴＧＡＣＣＡＴ ＧＡＡＣＡＧＧＣＡＣ ＡＡＣＣＡＡＧＡＧＣ ＣＣＣ
ＣＣＣＡＡＧＴ ＧＣＴＴＡＴＣＴＴＴ ＡＴＧＡＣＣＣＣＡＧ ２１６２ ＴＡＣＣＣＣＡＡＴＡ ＴＴＧＧＣＴＧＧＣＡ ＧＧＴＣＧＴＧＧＧＣ ＴＣＴ
ＡＡＡＡＡＣＡ ＣＣＴＴＣＴＴＴＴＴ ＧＡＡＴＧＡＡＴＡＣ ２２２２ ＡＣＧＡＡＧＧＧＣＡ ＴＴＴＴＣＴＣＴＴＧ ＴＡＣＡＣＡＴＴＴＧ ＴＧＡ
ＡＧＴＴＡＴＴ ＴＴＣＴＴＣＡＴＴＴ ＣＡＣＣＣＣＴＡＣＴ ２２８２ ＣＣＣＴＡＧ ＣＣ ＴＣＣ ＣＣＧ ＡＧＧ ＡＴＣ ＣＣＣ ＧＴＡ Ａ
ＡＡ ＣＡＡ ＧＴＴ ＡＣＴ ＣＣＴ ＡＧＡ ＣＣＴ ＧＡＡ２３３２ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｐｒｏ Ｇｌｕ ６５ ７０
７５ ＧＡＡ ＣＡＧ ＡＡＧ ＧＡＡ ＣＧＡ ＡＡＡ ＡＣＣ ＡＣＡ ＧＡＡ
ＡＣＴ ＣＡＧ ＧＧＣ ＣＡＧ ＡＴＧ ＣＡＧ ＣＣＣ ２３８０ Ｇｌｕ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｕ
Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｐｒｏ ８０ ８５
９０ ＣＣＧ ＡＡＣ ＣＡＡ ＧＣＴ ＡＡＴ ＣＴＴ ＣＣＡ Ｇ ＧＴＡＡ
ＧＡＧＧＣＡ ＡＡＣＣＡＴＣＣＣＣ ＣＴＧＣＡＧＧＴＡＧ ２４３２ Ｐｒｏ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ａｌａ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｙ ９５ １００ ＡＧＧＡＧＡＴＧＣＴ ＧＣＣＣＴＣＡＧＧＡ ＧＧＣＧＴＣＴＧＴＣ ＣＴＣ
ＴＴＴＣＣＴＡ ＡＧＧＡＴＧＣＣＧＴ ＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡ ２４９２ ＡＧＣＧＧＧＴＴＴＧ ＣＡＧＧＣＴＧＧＴＣ ＡＣＴＣＡＧＣＡＣＡ ＴＣＡ
ＡＧＣＣＡＣＴ ＣＴＧＡＣＡＧＣＡＧ ＣＣＡＡＣＣＴＧＧＧ ２５５２ ＴＴＣＡＧＧＧＣＴＴ ＣＣＴＣＴＧＧＧＴＴ ＴＧＧＧＡＡＣＣＡＧ ＣＣＡ
ＡＡＣＧＧＡＡ ＴＴＣＡＡＣＴＣＣＡ ＴＴＣＡＡＴＣＣＡＡ ２６１２ ＣＴＣＡＡＣＴＣＡＣ ＴＴＣＡＣＴＴＣＡＣ ＣＡＡＧＣＡＣＡＴＣ ＴＧＧ
ＧＧＡＣＴＡＣ ＣＴＧＣＧＧＣＣＡＧ ＧＡＧＡＴＧＣＡＧＧ ２６７２ ＣＣＴＧＡＣＣＡＧＡ ＣＡＧＴＧＧＴＣＣＣ ＣＧＴＣＣＴＣＡＡＧ ＧＡＧ
ＡＧＡＣＴＣＴ ＧＴＧＣＴＧＴＣＴＣ ＣＴＴＡＣＡＴＡＣＡ ２７３２ ＡＧＡＣＡＣＴＧＡＡ ＣＴＧＣＡＡＧＣＡＧ ＡＧＣＡＡＴＴＴＣＣ ＴＴＣ
ＣＡＧＡＴＧＴ ＴＴＣＴＴＡＣＡＧＧ ＡＣＡＧＧＧＴＴＧＧ ２７９２ ＧＣＧＡＧＡＣＴＴＧ ＡＡＧＣＴＧＣＡＧＡ ＣＡＡＡＡＣＡＴＣＴ ＣＣＧ
ＡＧＣＴＡＡＧ ＧＧＧＣＴＧＴＧＧＧ ＣＡＡＧＡＣＡＧＧＧ ２８５２ ＣＣＧＴＧＴＴＡＣＣ ＣＡＧＣＴＧＣＴＧＣ ＣＣＴＡＡＡＴＴＣＣ ＣＡＡ
ＣＡＴＡＡＡＴ ＡＡＣＧＣＴＧＡＡＡ ＴＣＡＡＧＣＣＡＣＡ ２９１２ ＡＴＧＴＣＡＧＧＧＡ ＧＡＡＡＴＡＧＡＧＧ ＣＴＧＴＴＧＧＧＡＡ ＡＣＣ
ＴＧＡＧＣＴＴ ＴＧＧＧＧＧＧＡＣＣ ＣＧＣＴＧＡＣＣＴＴ ２９７２ ＡＣＡＡＧＡＣＣＣＴ ＣＴＧＧＴＣＣＴＡＴ ＧＣＴＡＡＴＴＴＴＡ ＣＡＣ
ＣＴＴＡＧＡＧ ＡＧＡＧＣＴＴＴＡＣ ＡＡＴＧＴＴＡＴＡＡ ３０３２ ＣＣＴＣＣＴＴＧＧＡ ＡＴＣＴＣＡＣＡＡＣ ＣＣＡＧＡＧＡＧＴＣ ＡＧＧ
ＧＡＧＣＡＧＧ ＡＣＴＴＣＡＡＴＴＴ ＡＣＴＧＡＡＧＡＡＡ ３０９２ ＴＧＧＡＧＡＣＡＴＴ ＴＡＡＡＧＡＣＴＴＧ ＧＣＴＡＡＡＧＡＣＣ ＴＣＡ
ＧＧＴＣＴＣＣ ＴＧＡＡＴＧＡＧＡＣ ＧＡＧＧＧＡＴＣＴＴ ３１５２ ＧＣＴＧＡＴＡＡＴＴ ＧＡＡＡＣＣＡＧＴＴ ＣＧＡＡＴＴＴＡＴＧ ＴＴＣ
ＴＴＣＴＡＴＴ ＡＡＴＴＡＴＡＡＧＡ ＡＣＡＡＡＡＣＡＣＡ ３２１２ ＡＣＡＣＴＧＴＧＡＣ ＴＣＡＴＣＣＡＧＧＧ ＡＣＴＡＴＧＧＴＧＣ ＡＡＣ
ＡＴＧＣＴＧＣ ＴＴＣＣＡＧＣＣＣＴ ＴＴＴＣＡＣＴＣＣＡ ３２７２ ＡＣＴＴＣＧＴＧＣＣ ＡＧＡＡＣＧＡＧＧＴ ＴＴＣＡＡＡＡＣＣＣ ＡＣＴ
ＴＡＡＴＴＡＴ ＴＴＧＴＴＴＴＴＣＴ ＣＴＧＣＴＴＣＴＴＧ ３３３２ ＣＣＴＣＣＡＣＡＡＴ ＴＡＴＴＡＡＡＡＧＴ ＴＴＴＣＴＣＡＴＧＧ ＧＧＴ
ＣＧＧＴＧＴＴ ＴＧＣＴＧＴＣＣＴＴ ＡＣＣＣＡＡＧＡＧＡ ３３９２ ＴＧＧＣＣＡＧＣＡＧ ＧＣＴＣＴＧＧＣＧＡ ＡＧＧＧＡＴＧＣＴＴ ＣＡＣ
ＡＧＡＴＴＧＴ ＴＴＴＡＡＴＡＴＧＧ ＡＧＧＴＴＴＴＣＡＣ ３４５２ ＴＣＣＡＣＧＧＡＡＧ ＣＡＡＡＧＣＴＧＡＡ ＴＴＣＡＡＧＣＡＧＧ ＴＴＣ
ＡＧＡＴＧＧＴ ＧＡＴＧＡＡＴＴＴＧ ＡＣＴＧＣＣＴＧＴＡ ３５１２ ＡＡＧＡＣＡＣＴＧＣ ＧＴＡＧＡＧＣＡＧＡ ＧＣＣＣＴＣＡＧＣＴ ＴＣＣ
ＴＧＣＴＧＣＡ ＴＧＧＧＧＴＴＧＴＣ ＡＧＧＧＴＡＣＴＧＧ ３５７２ ＧＧＧＡＧＡＴＴＡＣ ＡＴＴＧＧＧＴＣＣＣ ＴＧＧＧＧＣＴＧＴＧ ＧＡＡ
ＧＧＴＣＡＧＡ ＡＣＧＴＡＣＡＴＧＣ ＡＧＣＡＴＣＡＡＡＴ ３６３２ ＴＴＣＴＧＧＧＧＴＴ ＡＧＧＧＧＧＡＣＡＴ ＧＴＧＧＴＡＣＣＣＧ ＡＴＧ
ＡＧＧＧＧＴＧ ＧＡＧＧＴＧＧＴＴＣ ＴＧＧＡＴＴＣＡＡＡ ３６９２ ＴＣＡＧＡＧＣＡＧＡ ＡＡＡＴＧＡＴＣＴＣ ＴＧＧＧＧＴＴＡＡＡ ＧＧＴ
ＣＡＡＣＣＡＧ ＧＴＴＴＧＧＧＧＴＴ ＴＴＧＴＴＧＧＧＴＧ ３７５２ ＡＧＴＧＴＡＡＣＡＴ ＡＣＴＧＧＧＴＣＴＧ ＧＧＧＡＣＴＴＴＴＣ ＡＧＡ
ＧＧＴＣＴＴＡ ＡＡＡＧＧＧＣＴＴＧ ＴＣＴＡＧＡＴＣＣＣ ３８１２ ＡＣＴＴＣＡＧＧＣＡ ＴＧＧＣＴＴＧＡＴＣ ＡＧＧＧＴＧＣＡＧＧ ＣＴＣ
ＣＡＴＴＴＣＴ ＣＣＡＧＧＡＴＧＴＣ ＴＴＧＧＴＡＣＴＣＣ ３８７２ ＣＡＴＣＣＴＣＣＴＧ ＧＣＴＴＴＧＧＡＴＴ ＧＧＣＣＣＣＣＡＧＴ ＣＣＴ
ＴＣＣＧＣＣＡ ＴＧＡＧＣＣＣＡＧＧ ＡＴＧＡＣＣＡＣＣＡ ３９３２ ＣＣＴＧＣＡＡＣＴＣ ＧＡＧＧＡＴＧＴＡＣ ＣＴＣＣＴＣＡＣＴＴ ＧＧＴ
ＣＧＴＧＧＡＧ ＡＴＣＣＡＴＧＴＧＧ ＡＣＣＣＣＡＣＡＴＴ ３９９２ ＴＣＡＴＣＡＧＣＣＣ ＡＧＡＴＴＧＧＴＴＣ ＡＡＧＣＣＴＧＣＣＣ ＴＴＡ
ＧＣＣＣＴＣＡ ＧＧＧＧＡＧＡＣＴＡ ＧＴＴＴＴＴＣＣＡＣ ４０５２ ＡＣＴＣＧＴＣＣＴＣ ＴＴＡＴＣＡＡＡＧＣ ＣＣＣＧＣＡＣＣＡＴ ＣＴＴ
ＣＡＧＡＡＧＣ ＧＡＣＴＧＣＴＣＣＴ ＴＣＣＴＣＴＣＣＡＴ ４１１２ ＴＣＣＣＡＧＡＧＣＡ ＡＧＧＴＣＴＣＴＧＣ ＣＴＣＣＧＣＴＧＴＣ ＡＣＣ
ＣＴＣＡＣＧＧ ＴＧＴＴＣＴＧＣＣＴ ＧＣＡＴＧＴＧＣＴＴ ４１７２ ＣＣＧＴＡＣＣＣＡＧ ＴＡＧＣＣＴＣＡＧＣ ＧＣＣＴＴＧＣＧＧＧ ＧＧＧ
ＡＣＴＧＴＧＴ ＣＴＣＴＧＴＧＣＣＴ ＴＴＴＣＡＣＡＧＡＧ ４２３２ ＴＧＣＣＴＡＧＣＡＧ ＡＧＧＴＣＣＴＧＡＣ ＡＣＡＴＡＡＡＴＧＴ ＴＡＣ
ＣＡＡＣＡＣＴ ＴＡＴＴＧＧＣＴＧＣ ＡＡＧＧＡＡＧＧＡＧ ４２９２ ＧＧＧＡＧＧＣＡＧＧ ＧＡＧＧＡＣＡＡＡＧ ＧＡＡＡＧＡＧＴＡＡ ＧＡＡ
ＣＣＡＣＡＧＴ ＣＡＡＧＧＣＧＴＴＣ ＣＣＡＣＴＧＴＧＧＣ ４３５２ ＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡ ＣＡＡＡＣＣＣＣＡＣ ＴＡＧＴＡＡＣＣＡＴ ＧＡＧ
ＧＡＴＣＣＧＧ ＧＴＴＴＧＡＴＣＣＣ ＴＧＧＣＣＴＣＧＣＴ ４４１２ ＣＴＧＴＧＧＡＴＴＡ ＡＧＧＡＴＣＣＧＡＣ ＧＴＴＧＣＴＧＴＧＡ ＧＣＴ
ＧＴＧＧＴＧＴ ＡＧＧＴＣＡＣＡＧＡ ＣＡＴＧＡＣＧＣＡＧ ４４７２ ＡＧＣＴＧＧＣＡＴＴ ＧＣＣＧＴＧＧＣＴＧ ＴＧＧＴＧＡＡＧＧＣ ＣＡＧ
ＧＧＧＣＴＧＣ ＡＧＣＴＣＣＧＡＴＴ ＣＡＡＣＣＣＣＴＧＧ ４５３２ ＣＣＴＧＧＧＡＡＣＧ ＴＣＣＡＴＡＴＧＣＣ ＡＣＡＧＧＴＧＣＡＧ ＣＣＣ
ＴＧＡＴＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＧＡＡＡ ＧＡＡＡＧＡＡＡＡＡ ４５９２ ＧＡＡＡＡＡＡＡＣＣ ＡＣＡＡＡＧＡＡＣＣ ＡＡＧＧＴＣＡＡＧＴ ＣＴＣ
ＴＡＧＧＡＡＧ ＡＧＧＣＧＡＣＴＴＧ ＧＡＣＴＣＡＧＧＣＴ ４６５２ ＧＡＧＣＧＣＣＴＣＣ ＴＣＡＣＴＴＧＴＣＴ ＣＧＧＡＡＴＧＴＣＣ ＴＣＴ
ＣＣＴＴＣＣＧ ＣＡＧ ＧＴ ＣＡＣ ＴＧＣ ＡＡＧ ＧＡＧ４７０９
Ｈｉｓ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｕ
１０５ ＣＣＣ ＣＣＧ ＣＣＧ ＴＧＧ ＧＡＧ ＣＡＣ ＧＡＡ ＴＣＴ ＴＴＧ
ＡＡＧ ＣＧＡ ＧＴＴ ＴＡＣ ＣＡＣ ＴＴＣ ＡＴＧ ４７５７ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｐｒｏ Ｔｒｐ Ｇｌｕ Ｈｉｓ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ
Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｍｅｔ １１０ １１５
１２０ ＧＡＧ ＧＧＧ ＣＡＧ ＡＣＡ ＧＴＴ ＣＧＧ ＴＡＣ ＣＡＧ ＴＧＣ
ＣＴＣ ＣＣＧ ＧＧＧ ＴＴＣ ＡＧＧ ＧＡＴ ＧＧＧ ４８０５ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｇｌｎ Ｃｙｓ
Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｇｌｙ １２５ １３０
１３５ ＴＣＴ ＧＣＣ ＣＡＧ ＡＡＣ ＡＡＣ ＴＣＴ ＧＣＣ ＣＡＧ ＡＧＴ
ＧＴＣ ＴＧＣ ＡＡＡ ＡＡＧ ＣＡＧ ＧＡＧ ＧＡＣ ４８５３ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｓｅｒ
Ｖａｌ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ａｓｐ １４０ １４５
１５０ ＣＡＧ ＧＡＧ ＧＴＣ ＡＴＧ ＡＧＧ ＴＧＧ ＡＣＧ ＣＡＧ ＣＣＣ
ＡＡＧ ＣＴＣ ＡＡＧ ＴＧＣ ＡＡＧ ＡＧＴ ＧＡＡ ４９０１ Ｇｌｎ Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｍｅｔ Ａｒｇ Ｔｒｐ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｐｒｏ
Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｙｓ Ｃｙｓ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｇｌｕ １５５ １６０
１６５ １７０ ＡＡＧ ＧＡＧ ＡＡＣ ＧＧＣ ＴＣＣ ＴＴＣ ＣＣＡ Ｇ ＧＴＡＴ
ＧＣＡＧＣＧ ＣＣＣＧＣＣＴＧＧＣ ＴＣＡＣＣＴＧＧＣＴ ４９５３ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ｇｌｕ １７５ ＧＣＴＣＣＣＴＣＧＧ ＴＣＧＧＡＣＧＧＧＧ ＣＴＧＧＧＧＣＴＣＣ ＴＧＡ
ＣＣＣＡＣＣＣ ＡＣＣＧＴＧＧＧＡＣ ＣＣＴＧＧＧＣＡＧＧ ５０１３ ＣＧＣＴＴＣＣＴＣＴ ＣＴＣＴＣＴＣＧＣＴ ＧＧＣＣＴＣＴＧＴＴ ＴＴＴ
ＣＴＣＡＴＴＣ ＴＡＧＡＡＡＧＴＡＧ ＡＣＣＡＧＡＴＡＴＡ ５０７３ ＣＴＣＣＡＡＧＧＴＣ ＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴ ＧＡＣＡＴＣＣＣＣＴ ＧＡＡ
ＣＣＣＴＧＡＡ ＡＧＧＧＧＡＣＡＡＡ ＣＡＧＣＡＧＧＡＧＡ ５１３３ ＧＡＧＡＴＧＡＧＧＧ ＡＧＡＡＡＧＧＣＴＴ ＣＣＣＡＡＧＧＡＧＣ ＣＧＧ
ＧＴＧＣＣＡＣ ＣＴＣＡＣＴＧＣＣＣ ＴＧＧＴＧＣＴＧＣＣ ５１９３ ＣＣＣＴＴＴＴＧＴＡ ＧＣＧＧＡＴＣＣＣＣ ＡＡＡＣＴＴＣＣＴＣ ＣＴＣ
ＧＡＡＡＧＣＴ ＣＣＣＡＡＧＡＣＴＴ ＣＣＴＣＣＴＴＣＡＣ ５２５３ ＡＡＧＧＧＡＡＡＧＣ ＣＣＡＣＴＧＧＣＴＧ ＴＣＡＣＡＧＡＧＣＧ ＴＧＡ
ＣＴＣＣＡＣＴ ＡＴＴＴＧＴＧＣＡＧ ＴＧＴＣＧＣＡＣＣＡ ５３１３ ＴＣＡＣＡＣＡＣＴＣ ＣＣＴＧＣＣＣＣＣＧ ＣＧＴＧＧＴＣＣＣＣ ＧＴＣ
ＴＧＡＧＣＴＴ ＣＧＡＣＡＧＡＧＣＧ ＣＡＧＴＧＴＧＣＡＧ ５３７３ ＧＧＡＣＧＧＧＡＣＴ ＴＴＴＣＡＧＧＣＡＣ ＡＡＡＣＡＣＡＣＡＣ ＡＣＡ
ＣＡＣＡＣＡＣ ＡＣＡＣＡＣＡＣＡＣ ＡＣＡＣＡＣＡＣＧＣ ５４３３ ＣＡＣＣＴＣＣＧＴＴ ＧＡＧＧＴＣＴＴＣＴ ＧＣＴＡＴＴＴＴＣＣ ＴＴＣ
ＴＧＡＡＧＴＧ ＧＴＡＣＴＧＣＴＧＴ ＴＴＡＴＣＧＣＴＡＣ ５４９３ ＡＡＧＣＡＡＡＡＧＴ ＣＣＣＴＴＣＴＧＴＴ ＴＧＡＣＣＣＴＣＡＧ ＣＧＴ
ＴＡＧＴＡＡＴ ＴＴＣＴＴＴＣＴＴＴ ＣＴＴＴＴＴＴＴＴＴ ５５５３ ＴＴＴＴＧＧＴＣＴＴ ＴＴＴＧＣＴＡＴＴＴ ＣＴＴＧＧＧＣＴＧＣ ＴＴＣ
ＴＧＣＧＧＣＡ ＣＡＴＧＧＡＧＧＴＴ ＣＣＣＡＧＧＣＣＡＧ ５６１３ ＧＧＴＣＣＡＡＴＣＧ ＧＡＧＣＣＧＴＡＧＣ ＣＡＣＣＧＧＣＣＴＡ ＣＧＣ
ＣＡＧＡＧＣＣ ＡＣＡＧＣＡＡＴＧＣ ＧＧＧＡＴＣＣＧＡＧ ５６７３ ＣＣＧＣＧＴＣＴＧＣ ＡＡＣＣＴＡＣＡＣＣ ＡＣＡＧＣＴＣＡＣＧ ＧＣＡ
ＡＣＧＣＣＧＧ ＡＴＣＧＴＴＡＡＣＣ ＣＡＣＴＧＡＧＣＡＡ ５７３３ ＧＧＧＣＣＧＧＧＡＣ ＣＧＡＡＣＣＣＡＣＡ ＡＣＣＴＣＧＴＧＧＴ ＴＣＣ
ＴＡＧＴＣＧＧ ＡＴＴＣＧＴＴＡＡＣ ＣＡＣＴＧＣＧＣＣＡ ５７９３ ＣＧＡＣＧＧＧＡＡＣ ＴＣＣＴＧＴＧＴＴＡ ＧＴＧＡＴＴＴＣＴＧ ＣＴＣ
ＣＣＣＡＣＡＣ ＣＣＡＧＣＣＣＣＧＴ ＴＴＣＣＣＡＧＡＣＣ ５８５３ ＣＣＡＣＧＴＣＴＣＣ ＣＴＣＣＴＧＧＡＴＣ ＣＴＣＴＧＧＧＧＡＴ ＧＣＴ
ＧＴＧＴＴＣＣ ＴＴＣＣＣＡＴＧＧＣ ＣＴＧＴＣＴＣＣＣＡ ５９１３ ＣＧＡＧＣＣＡＣＧＣ ＴＧＣＣＣＡＴＣＡＧ ＧＣＡＴＧＴＣＣＡＣ ＧＡＧ
ＣＣＧＴＧＧＧ ＧＧＡＣＣＣＡＴＣＡ ＧＡＧＡＡＡＡＧＣＴ ５９７３ ＡＴＧＣＴＴＴＴＧＣ ＡＣＡＴＴＴＣＣＡＴ ＴＴＣＡＴＣＴＧＡＴ ＧＧＴ
ＴＣＧＡＴＧＧ ＴＡＴＴＴＧＴＣＴＴ ＡＣＧＡＴＧＡＣＣＣ ６０３３ ＡＴＴＴＣＴＧＡＧＣ ＣＧＣＡＧＡＡＧＧＡ ＡＧＣＣＡＧＧＧＣＴ ＧＡＧ
ＴＡＧＧＡＡＧ ＣＣＴＧＧＧＡＧＡＧ ＡＧＣＴＧＣＴＣＧＧ ６０９３ ＡＧＣＴＧＣＡＴＧＧ ＡＧＡＧＣＴＧＧＧＡ ＴＣＡＧＧＧＴＣＡＣ ＡＧＴ
ＣＣＣＣＴＣＣ ＣＴＣＣＴＧＣＣＣＴ ＧＣＴＧＧＧＧＣＣＡ ６１５３ ＣＴＧＡＣＣＣＣＣＴ ＴＣＣＣＴＧＣＣＡＣ ＣＣＴＧＡＴＧＧＧＧ ＡＧＧ
ＧＧＴＧＴＧＧ ＧＴＡＴＧＴＡＧＣＧ ＧＣＣＣＣＡＧＡＣＧ ６２１３ ＣＡＣＡＣＣＴＣＡＧ ＣＴＡＧＴＧＣＡＣＣ ＴＧＧＧＧＴＣＡＧＴ ＧＧＧ
ＧＴＣＣＧＧＧ ＧＧＣＧＧＧＣＡＧＧ ＧＧＡＧＧＧＧＡＧＧ ６２７３ ＧＡＴＧＣＣＣＴＴＣ ＣＣＣＣＡＣＣＴＴＣ ＴＧＴＴＣＡＴＧＣＧ ＣＡＴ
ＣＣＴＴＡＴＴ ＣＴＣＴＣＴＴＣＣＡ ＴＧＴＧＡＴＧＡＡＧ ６３３３ ＡＧ ＣＣＴ ＣＡＧ ＡＴＧ ＡＧＣ ＡＣＴ ＧＣＴ ＧＣＴ ＣＣＴ Ｃ
ＣＣ ＡＣＧ ＡＣＴ ＡＡＡ ＡＣＴ ＴＣＣ ＴＴＡ ６３８０ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｍｅｔ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｐ
ｒｏ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ １８０ １８５
１９０ ＣＣＡ ＡＣＣ ＡＧＧ ＡＣＣ ＡＡＡ ＧＧＴ ＡＣＣ ＡＣＡ Ｇ
ＧＴＡＡＧＧＣＴＡＧ ＡＧＴＴＴＣＴＴＧＧ ６４２５ Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｓｐ １９５ ２００ ＡＡＧＡＴＡＡＡＡＧ ＣＴＴＧＧＣＧＧＣＴ ＧＡＡＣＣＡＴＧＡＴ ＧＣＡ
ＧＧＡＣＡＧＧ ＡＧＡＧＡＡＧＧＣＣ ＧＣＣＴＡＧＴＧＣＡ ６４８５ ＧＣＧＣＡＧＧＣＣＣ ＣＧＣＣＣＣＣＣＣＡ ＣＡＧＣＡＧＡＧＧＧ ＧＴＣ
ＡＧＧＧＴＴＧ ＣＣＣＧＴＧＧＧＴＧ ＴＴＡＧＡＧＡＧＧＡ ６５４５ ＣＣＧＣＡＣＧＴＣＴ ＧＣＡＴＣＣＡＡＣＣ ＴＣＣＣＣＡＴＣＣＴ ＣＡＡ
ＡＣＡＣＧＧＣ ＣＧＧＧＧＴＣＣＧＡ ＧＧＡＧＡＡＡＣＡＡ ６６０５ ＧＡＣＡＧＡＧＧＧＣ ＧＧＣＡＣＣＴＡＧＡ ＧＧＴＧＧＡＡＧＡＡ ＧＧＡ
ＡＡＣＧＣＴＴ ＧＣＣＣＡＧＧＧＣＣ ＡＣＣＣＣＣＴＣＴＣ ６６６５ ＣＣＣＡＣＣＧＣＣＣ ＣＡＴＣＴＣＴＣＣＣ ＡＧＣＴＧＴＣＣＣＡ ＴＣＣ
ＣＣＴＣＣＧＡ ＧＣＣＴＣＣＡＧＡＡ ＣＣＣＴＧＧＧＧＡＧ ６７２５ ＣＣＣＧＧＡＣＣＣＴ ＣＴＣＣＡＧＣＣＣＣ ＡＣＧＡＡＴＴＣＣＣ ＡＴＡ
ＡＣＣＧＧＣＡ ＴＧＡＡＣＣＡＧＣＡ ＴＣＴＴＴＣＣＣＴＣ ６７８５ ＴＣＴＴＴＴＧＣＧＣ ＡＧ ＡＴ ＴＣＣ ＣＡＡ ＡＡＣ ＣＴＣ ＡＣＧ
ＧＡＡ ＧＴＧ ＣＣＴ ＧＣＡ ＡＣＣ ＡＴＧ ＣＡＧ ６８３５ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｌｅｕ Ｔｈｒ
Ｇｌｕ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ｇｌｎ ２０５
２１０ ＣＣＡ ＡＴＣ ＡＴＡ ＴＴＴ ＡＣＡ ＡＣＡ ＣＡＧ ＴＡＴ ＣＡＧ
ＣＴＡ ＧＣＡ Ｇ ＧＴＧＧＧＴＧＧＴＧ ６８７９ Ｐｒｏ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｇｌｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｖａｌ ２１５ ２２０
２２５ ＡＣＡＡＡＡＣＡＣＡ ＣＡＣＡＧＡＧＧＧＧ ＣＡＣＡＴＣＴＧＣＴ ＴＧＧ
ＴＧＧＧＴＴＧ ＧＴＧＧＧＴＴＧＧＴ ＴＡＧＴＴＴＡＡＡＣ ６９３９ ＴＡＡＣＴＣＴＴＧＧ ＡＧＴＴＣＣＣＧＴＣ ＡＴＧＧＣＴＣＡＧＴ ＧＧＴ
ＴＡＡＣＧＡＡ ＴＴＣＧＡＣＴＡＧＧ ＡＡＣＣＡＴＧＡＧＧ ６９９９ ＴＴＧＴＧＧＧＴＴＣ ＧＡＴＣＣＣＴＧＡＣ ＣＴＣＧＣＴＣＡＧＴ ＧＡＧ
ＴＴＡＡＧＧＡ ＴＣＴＧＧＣＡＣＴＧ ＣＴＧＴＧＡＧＣＴＧ ７０５９ ＴＧＧＴＧＴＡＧＧＴ ＣＡＣＡＧＡＴＧＴＧ ＧＣＴＴＧＡＡＴＴＣ ＴＧＡ
ＧＴＴＧＣＴＧ ＴＧＴＣＴＧＴＧＴＧ ＧＴＧＴＡＧＧＣＣＡ ７１１９ ＧＣＡＧＴＴＡＣＡＧ ＣＴＣＴＧＡＴＴＧＧ ＡＣＣＣＣＴＡＧＣＣ ＴＧＧ
ＧＡＡＣＣＴＣ ＣＡＴＡＴＧＣＣＡＣ ＧＧＧＴＧＣＧＧＣＣ ７１７９ ＣＴＡＧＡＡＡＡＧＡ ＣＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡＡＡＡＡＡＡＡ ＡＡＡ
ＡＡＡＡＡＡＣ ＣＣＴＡＡＣＴＣＴＴ ＴＡＣＡＣＴＡＣＧＴ ７２３９ ＡＧＴＧＴＴＴＣＣＧ ＡＧＡＧＴＡＡＡＡＧ ＡＣＴＡＡＣＣＣＡＧ ＡＧＡ
ＣＣＡＡＣＡＴ ＡＡＣＴＣＴＣＡＡＴ ＣＧＣＡＧＧＧＡＴＣ ７２９９ ＡＧＣＴＣＣＡＧＡＧ ＡＧＣＴＣＴＧＡＧＴ ＧＡＧＣＴＣＴＣＡＡ ＡＣＣ
ＡＧＣＣＴＣＡ ＡＣＴＧＧＣＧＣＣＴ ＣＣＴＧＡＧＧＧＧＡ ７３５９ ＴＧＣＣＡＧＧＧＧＡ ＣＡＡＡＡＴＡＴＴＣ ＧＧＧＧＴＣＣＣＴＧ ＴＧＣ
ＧＧＡＧＧＧＧ ＣＡＡＧＧＣＣＡＧＧ ＧＧＧＡＡＧＧＡＣＡ ７４１９ ＣＧＧＴＡＴＣＡＣＣ ＡＧＧＧＡＡＧＧＡＧ ＡＧＡＧＡＡＡＣＣＣ ＣＣＣ
ＴＣＴＡＡＡＣ ＡＴＴＣＣＡＧＴＴＧ ＴＴＴＧＣＴＧＧＴＡ ７４７９ ＧＧＡＧＧＴＧＡＡＡ ＧＴＧＧＧＣＴＴＧＧ ＡＧＡＧＡＡＡＡＡＣ ＡＡＡ
ＣＴＣＡＧＣＣ ＣＡＴＡＡＡＡＣＡＧ ＧＴＣＡＣＣＡＧＧＧ ７５３９ ＧＣＴＧＧＧＧＣＴＧ ＧＧＧＣＣＧＧＧＧＣ ＣＡＡＡＴＧＣＧＡＡ ＧＡＴ
ＧＣＴＧＧＴＣ ＡＡＡＧＧＣＣＡＣＡ ＡＡＣＧＴＣＣＡＧＣ ７５９９ ＣＡＧＡＡＧＡＴＧＧ ＧＴＡＡＡＴＧＣＴＧ ＧＡＧＡＣＴＧＡＡＧ ＧＴＡ
ＡＡＧＴＧＴＧ ＧＴＧＡＴＴＣＧＣＧ ＴＴＡＡＣＧＡＣＧＧ ７６５９ ＣＧＣＡＣＴＧＣＡＧ ＡＣＴＣＧＡＡＡＧＴ ＧＧＣＴＣＡＧＡＧＡ ＧＴＡ
ＡＧＴＣＴＴＡ ＡＧＴＧＴＴＣＴＴＧ ＧＣＡＣＡＧＡＡＡＡ ７７１９ ＡＧＣＡＡＣＡＧＣＡ ＡＴＴＡＣＡＣＧＧＣ ＡＧＧＡＧＧＧＡＧＧ ＴＧＴ
ＴＧＧＡＴＣＴ ＧＣＡＣＣＡＴＡＣＡ ＡＧＴＧＴＧＴＣＡＣ ７７７９ ＴＴＧＡＡＡＣＴＴＡ ＣＡＣＡＡＣＣＴＴＣ ＣＡＧＧＣＣＡＡＴＴ ＣＴＡ
ＴＴＧＣＡＴＡ ＡＧＧＧＧＧＧＧＡＧ ＧＧＧＣＴＴＧＧＡＧ ７８３９ ＧＣＧＣＧＴＣＴＡＡ ＧＧＣＡＧＡＧＧＡＴ ＡＡＡＧＴＡＧＧＡＣ ＣＡＣ
ＡＡＧＡＡＡＡ ＧＣＡＧＣＡＴＣＴＧ ＧＧＡＡＡＣＡＧＧＡ ７８９９ ＡＣＣＣＴＴＴＧＧＧ ＧＡＧＡＴＧＣＣＡＡ ＧＴＧＴＴＴＡＴＣＡ ＴＴＴ
ＡＣＣＴＴＧＡ ＴＡＴＧＴＣＡＧＣＡ ＣＴＴＣＴＣＴＴＣＣ ７９５９ ＣＣＡＴＣＣＣＧＧＧ ＣＣＴＣＡＣＧＣＡＣ ＧＧＣＣＴＣＴＴＴＧ ＡＧＧ
ＣＣＴＧＧＴＣ ＴＣＴＧＡＧＣＣＴＴ ＴＣＴＡＡＡＧＡＧＧ ８０１９ ＧＧＧＣＣＣＡＴＣＡ ＧＣＴＧＣＴＣＣＣＣ ＣＣＧＡＡＡＧＣＧＴ ＧＧＡ
ＧＣＣＣＣＣＣ ＡＡＧＧＡＡＡＧＧＣ ＴＴＧＴＧＣＣＣＴＴ ８０７９ ＴＣＣＧＴＣＣＡＣＡ ＧＧＣＣＣＡＧＧＣＴ ＧＧＧＧＧＣＣＣＴＧ ＧＡＧ
ＣＣＴＣＣＧＧ ＧＡＡＧＣＣＣＣＧＣ ＧＧＧＧＣＧＧＧＡＧ ８１３９ ＣＡＡＣＡＣＧＣＴＧ ＣＡＴＡＧＧＧＧＣＧ ＧＧＧＧＧＣＧＧＧＧ ＧＴＧ
ＧＧＧＡＣＡＧ ＡＧＡＣＣＣＧＧＣＧ ＣＣＣＣＧＣＣＣＡＧ ８１９９ ＧＧＡＧＣＣＣＴＴＴ ＧＣＴＣＡＡＧＧＴＴ ＧＧＧＧＴＴＡＧＧＧ ＧＴＧ
ＧＧＣＴＴＴＣ ＴＣＡＧＣＣＣＧＧＧ ＧＣＧＣＣＴＣＣＣＣ ８２５９ ＴＧＡＣＣＴＴＣＣＴ ＣＣＣＧＴＣＧＡＣＡ Ｇ ＴＧ ＧＣＣ ＧＧＣ Ｔ
ＧＣ ＧＴＣ ＣＴＣ ＣＴＧ ＣＴＣ ＣＴＣ ＡＧＣ ＡＴＣ８３１２ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｃ
ｙｓ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｉｌｅ
２３０ ２３５ ＣＴＣ ＣＴＣ ＣＴＣ ＡＧＣ ＧＧＣ ＣＴＣ ＡＣＣ ＴＧＧ ＣＡＧ
ＣＧＧ ＡＧＡ ＣＧ ＧＴＧＡＧＴＣＣＣＣ ８３５７ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｌｅｕ Ｔｈｒ Ｔｒｐ Ｇｌｎ
Ａｒｇ Ａｒｇ Ａｒｇ ２４０ ２４５ ＧＧＴＧＴＴＧＡＡＧ ＧＡＡＧＣＣＣＣＧＣ ＣＣＡＴＧＧＴＧＧＧ ＧＧＧ
ＧＧＧＧＣＧＣ ＧＧＣＧＣＣＧＧＡＡ ＡＧＣＡＣＣＣＣＣＡ ８４１７ ＣＣＣＡＣＣＣＣＴＣ ＧＣＣＴＣＴＣＡＡＣ ＣＣＣＣＣＣＣＧＣＡ ＴＴＣ
ＣＣＡＧ Ａ ＴＧＡ ＡＣＣＣＡＣＡＧＡＡ ８４６８ ＴＴＡＡＣＧＣＴＧＣ ＧＧ
８４８０

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 以下の（ａ）又は（ｂ）の塩基配列によ
   り表され、かつプロモーター活性を有するＤＮＡ。 （ａ）配列番号１記載の塩基配列。 （ｂ）配列番号１記載の塩基配列において、１若しくは
   複数個の塩基が欠失、置換若しくは付加された塩基配
   列。
2. 【請求項２】 請求項１記載のＤＮＡを含む発現ベクタ
   ー。
3. 【請求項３】 請求項２記載の発現ベクターによって形
   質転換された形質転換体。
4. 【請求項４】 ５'末端側に配列番号２記載の塩基配列
   により表されるＤＮＡを含み、かつ３'末端側に配列番
   号３記載の塩基配列より表されるＤＮＡを含んでなる、
   ブタ由来のゲノムＤＮＡ。