JPH11287802A - 表面保護剤 - Google Patents
表面保護剤Info
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- JPH11287802A JPH11287802A JP10091153A JP9115398A JPH11287802A JP H11287802 A JPH11287802 A JP H11287802A JP 10091153 A JP10091153 A JP 10091153A JP 9115398 A JP9115398 A JP 9115398A JP H11287802 A JPH11287802 A JP H11287802A
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- polyethylene glycol
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- surface protective
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Abstract
(57)【要約】
【課題】免疫反応を用いた測定の際、固相表面の保護に
天然蛋白質を用いると非特異的反応をおこす場合があ
り、また従来の界面活性剤を用いると抗原あるいは抗体
の蛋白質を変性させる場合がある。したがって、固相表
面に良く吸着し、免疫反応を妨害することなく固相表面
を保護する材料が望まれている。 【解決手段】疎水性と親水性を合わせ持つ化合物とし
て、ポリエチレングリコール鎖を側鎖に持ち、疎水性の
固相表面に吸着させるための疎水性の官能基を主鎖に持
ち、且つ共重合体としては水溶性となる表面保護剤を見
出し本発明を完成した。
天然蛋白質を用いると非特異的反応をおこす場合があ
り、また従来の界面活性剤を用いると抗原あるいは抗体
の蛋白質を変性させる場合がある。したがって、固相表
面に良く吸着し、免疫反応を妨害することなく固相表面
を保護する材料が望まれている。 【解決手段】疎水性と親水性を合わせ持つ化合物とし
て、ポリエチレングリコール鎖を側鎖に持ち、疎水性の
固相表面に吸着させるための疎水性の官能基を主鎖に持
ち、且つ共重合体としては水溶性となる表面保護剤を見
出し本発明を完成した。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫測定の際の固
相の表面の保護（ブロッキング）に用いる表面保護剤に
関する。
相の表面の保護（ブロッキング）に用いる表面保護剤に
関する。
【０００２】
【従来の技術】抗原抗体反応を利用した免疫測定ではポ
リスチレンを初めとするプラスチック類からなるプレー
ト、ビーズ、ラテックス等の微粒子あるいは被覆磁性粒
子等に抗原あるいは抗体をつけた固相化抗原あるいは固
相化抗体が用いられている。しかしながら、抗原あるい
は抗体がついていない固相表面は測定の際、試料中の蛋
白質を非特異的に吸着してしまうため、正確に抗原抗体
反応を反映した免疫測定ができない。そのため固相表面
のブロッキング剤として牛血清アルブミン（ＢＳＡ）や
ゼラチン、カゼイン等の天然蛋白質が用いられている。
リスチレンを初めとするプラスチック類からなるプレー
ト、ビーズ、ラテックス等の微粒子あるいは被覆磁性粒
子等に抗原あるいは抗体をつけた固相化抗原あるいは固
相化抗体が用いられている。しかしながら、抗原あるい
は抗体がついていない固相表面は測定の際、試料中の蛋
白質を非特異的に吸着してしまうため、正確に抗原抗体
反応を反映した免疫測定ができない。そのため固相表面
のブロッキング剤として牛血清アルブミン（ＢＳＡ）や
ゼラチン、カゼイン等の天然蛋白質が用いられている。
【０００３】本発明に用いられる側鎖にポリエチレング
リコールを持つ水溶性共重合体、特に分子内にポリエチ
レングリコール鎖を持つビニルモノマーと該モノマーと
共重合可能な水不溶性モノマーとの共重合で得られる水
溶性共重合体は従来から増粘剤、分散剤、接着剤あるい
は生理活性ペプチドの安定剤等として知られたものであ
るが、本発明に関わる固相表面への吸着保護・ブロッキ
ングの可能性を示唆するものでは無い。
リコールを持つ水溶性共重合体、特に分子内にポリエチ
レングリコール鎖を持つビニルモノマーと該モノマーと
共重合可能な水不溶性モノマーとの共重合で得られる水
溶性共重合体は従来から増粘剤、分散剤、接着剤あるい
は生理活性ペプチドの安定剤等として知られたものであ
るが、本発明に関わる固相表面への吸着保護・ブロッキ
ングの可能性を示唆するものでは無い。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】免疫測定の際の固相表
面の保護にＢＳＡ等の天然蛋白質を用いると、被検試料
によってはその保護層と反応する場合があり、本来の免
疫反応以外の反応によるシグナルを検出してしまう。そ
の結果陰性となるべき試料が陽性となり、判定・診断を
誤らせることがある。固相表面保護に蛋白質以外の疎水
性と親水性を合わせ持つ従来の界面活性剤を用いた場合
には、固相化した抗原あるいは抗体の蛋白質を変性ある
いは脱離してしまうため、使用量が限定され完全に固相
表面を保護するまでの量を使用できない。したがって、
固相表面に良く吸着し、免疫反応を妨害することなく固
相表面を保護する材料が望まれている。
面の保護にＢＳＡ等の天然蛋白質を用いると、被検試料
によってはその保護層と反応する場合があり、本来の免
疫反応以外の反応によるシグナルを検出してしまう。そ
の結果陰性となるべき試料が陽性となり、判定・診断を
誤らせることがある。固相表面保護に蛋白質以外の疎水
性と親水性を合わせ持つ従来の界面活性剤を用いた場合
には、固相化した抗原あるいは抗体の蛋白質を変性ある
いは脱離してしまうため、使用量が限定され完全に固相
表面を保護するまでの量を使用できない。したがって、
固相表面に良く吸着し、免疫反応を妨害することなく固
相表面を保護する材料が望まれている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者は、これら課題
を解決するため、疎水性と親水性を合わせ持つ化合物と
してポリエチレングリコール鎖を側鎖に持ち、疎水性固
相の表面に吸着させるための疎水性の官能基を主鎖に持
ち、且つ水溶性の共重合体からなる表面保護剤を見出
し、本発明を完成した。
を解決するため、疎水性と親水性を合わせ持つ化合物と
してポリエチレングリコール鎖を側鎖に持ち、疎水性固
相の表面に吸着させるための疎水性の官能基を主鎖に持
ち、且つ水溶性の共重合体からなる表面保護剤を見出
し、本発明を完成した。
【０００６】即ち本発明は （１）側鎖にポリエチレングリコール鎖を有する水溶性
共重合体からなる免疫反応に使用する固相の表面保護剤 （２）分子内にポリエチレングリコール鎖を持つビニル
モノマーと該モノマーと共重合可能な水不溶性モノマー
との共重合体であって、分子量が１，０００〜１，００
０，０００の範囲にある水溶性共重合体からなる（１）
記載の表面保護剤
共重合体からなる免疫反応に使用する固相の表面保護剤 （２）分子内にポリエチレングリコール鎖を持つビニル
モノマーと該モノマーと共重合可能な水不溶性モノマー
との共重合体であって、分子量が１，０００〜１，００
０，０００の範囲にある水溶性共重合体からなる（１）
記載の表面保護剤
【０００７】（３）分子内にポリエチレングリコール鎖
を持つビニルモノマーがアルコキシポリエチレングリコ
ール（メタ）アクリレートである（１）又は（２）記載
の表面保護剤 （４）分子内にポリエチレングリコール鎖を持つビニル
モノマーのポリエチレングリコール鎖の分子量が１００
〜１０，０００である（１）、（２）あるいは（３）記
載の表面保護剤 （５）（１）から（４）いずれかに記載の表面保護剤を
用いて表面処理を行った表面を用いた免疫測定方法 である。
を持つビニルモノマーがアルコキシポリエチレングリコ
ール（メタ）アクリレートである（１）又は（２）記載
の表面保護剤 （４）分子内にポリエチレングリコール鎖を持つビニル
モノマーのポリエチレングリコール鎖の分子量が１００
〜１０，０００である（１）、（２）あるいは（３）記
載の表面保護剤 （５）（１）から（４）いずれかに記載の表面保護剤を
用いて表面処理を行った表面を用いた免疫測定方法 である。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明において側鎖にポリエチレ
ングリコール鎖を有する水溶性共重合体は特に限定され
ず、免疫測定に使用する固相の表面を保護する能力を有
するものはいずれも使用できるが、上記（２）のものが
好ましく、より好ましくは上記（３）に記載のものであ
り、特に好ましくは上記（４）に記載のものである。本
発明に用いられるポリエチレングリコール鎖を持つビニ
ルモノマーは得られた共重合体を水溶性にし、イオン強
度あるいはｐＨの変化に対して安定にするモノマーであ
る。ポリエチレングリコールの分子量が１００〜１０，
０００のアクリレートあるいはメタクリレートが好まし
く、更に好ましくはポリエチレングリコールの分子量が
２００〜２，０００のアクリレートあるいはメタクリレ
ートであり、末端水酸基の水素がメチル基あるいはエチ
ル基等の低級アルキル基等で置換されていても良い。
ングリコール鎖を有する水溶性共重合体は特に限定され
ず、免疫測定に使用する固相の表面を保護する能力を有
するものはいずれも使用できるが、上記（２）のものが
好ましく、より好ましくは上記（３）に記載のものであ
り、特に好ましくは上記（４）に記載のものである。本
発明に用いられるポリエチレングリコール鎖を持つビニ
ルモノマーは得られた共重合体を水溶性にし、イオン強
度あるいはｐＨの変化に対して安定にするモノマーであ
る。ポリエチレングリコールの分子量が１００〜１０，
０００のアクリレートあるいはメタクリレートが好まし
く、更に好ましくはポリエチレングリコールの分子量が
２００〜２，０００のアクリレートあるいはメタクリレ
ートであり、末端水酸基の水素がメチル基あるいはエチ
ル基等の低級アルキル基等で置換されていても良い。
【０００９】水不溶性のモノマーは、疎水性表面に吸着
させるためのモノマーである。疎水性表面に吸着させる
ためには疎水性の高い官能基を持つモノマーが好まし
い。上記ポリエチレングリコール鎖を持つモノマーと共
重合可能ならば何でも良く、具体的には、アクリル酸又
はメタクリル酸のメチル、エチル、ブチル又はベンジル
エステルを初めとする各種アクリレートあるいはメタク
リレート、スチレン、酢酸ビニル、アクリロニトリル等
があり、好ましくはメチル（メタ）アクリレート、エチ
ル（メタ）アクリレート、ベンジル（メタ）アクリレー
ト、スチレン、酢酸ビニルが好ましい。また、これら疎
水性モノマーを組み合わせて使用することもできる。
させるためのモノマーである。疎水性表面に吸着させる
ためには疎水性の高い官能基を持つモノマーが好まし
い。上記ポリエチレングリコール鎖を持つモノマーと共
重合可能ならば何でも良く、具体的には、アクリル酸又
はメタクリル酸のメチル、エチル、ブチル又はベンジル
エステルを初めとする各種アクリレートあるいはメタク
リレート、スチレン、酢酸ビニル、アクリロニトリル等
があり、好ましくはメチル（メタ）アクリレート、エチ
ル（メタ）アクリレート、ベンジル（メタ）アクリレー
ト、スチレン、酢酸ビニルが好ましい。また、これら疎
水性モノマーを組み合わせて使用することもできる。
【００１０】分子内にポリエチレングリコール鎖を持つ
ビニルモノマーと水不溶性モノマーとの共重合割合は特
に限定されず、得られる水溶性共重合体が、免疫測定に
使用する固相の表面を保護する能力を有するものとなる
ような割合で用いれば何れの割合であっても良いが、分
子内にポリエチレングリコール鎖を持つビニルモノマー
と水不溶性モノマーとを３０〜９９．５：０．５〜７０
の重量比となるように共重合するのが好ましく、特に５
０〜９９：１〜５０の重量比となるように共重合するの
が好ましい。
ビニルモノマーと水不溶性モノマーとの共重合割合は特
に限定されず、得られる水溶性共重合体が、免疫測定に
使用する固相の表面を保護する能力を有するものとなる
ような割合で用いれば何れの割合であっても良いが、分
子内にポリエチレングリコール鎖を持つビニルモノマー
と水不溶性モノマーとを３０〜９９．５：０．５〜７０
の重量比となるように共重合するのが好ましく、特に５
０〜９９：１〜５０の重量比となるように共重合するの
が好ましい。
【００１１】これらモノマーを共重合し本発明の表面保
護剤を製造するには、一般的なラジカル重合を採用する
ことで達成できる。即ち、攪拌可能な反応装置にモノマ
ーと溶媒、開始剤を加え、窒素置換の後加熱することで
重合が開始し、一定時間その温度を保つことで重合は完
結する。その後溶剤をエバポレートし、共重合体は水溶
液あるいはエタノール等の溶液として得られる。得られ
た水溶性共重合体を精製するには、共重合体不溶の溶媒
で再沈殿を行うかあるいは共重合体水溶液を透析する等
の一般的な方法で可能である。この重合の際に連鎖移動
剤を併用し分子量をコントロールすることも可能であ
る。共重合の際に用いられる溶剤としては、メタノール
やエタノールやイソプロピルアルコール等のアルコール
類、酢酸エチル、トルエン、ベンゼン、メチルエチルケ
トン等の有機溶剤、あるいは水が用いられ、これらを混
合して用いることもできる。
護剤を製造するには、一般的なラジカル重合を採用する
ことで達成できる。即ち、攪拌可能な反応装置にモノマ
ーと溶媒、開始剤を加え、窒素置換の後加熱することで
重合が開始し、一定時間その温度を保つことで重合は完
結する。その後溶剤をエバポレートし、共重合体は水溶
液あるいはエタノール等の溶液として得られる。得られ
た水溶性共重合体を精製するには、共重合体不溶の溶媒
で再沈殿を行うかあるいは共重合体水溶液を透析する等
の一般的な方法で可能である。この重合の際に連鎖移動
剤を併用し分子量をコントロールすることも可能であ
る。共重合の際に用いられる溶剤としては、メタノール
やエタノールやイソプロピルアルコール等のアルコール
類、酢酸エチル、トルエン、ベンゼン、メチルエチルケ
トン等の有機溶剤、あるいは水が用いられ、これらを混
合して用いることもできる。
【００１２】重合開始剤としては、一般的にラジカル重
合で用いられる過酸化物系、アゾ系のラジカル開始剤が
用いられる。過酸化物系ラジカル開始剤としては例えば
過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過酸化水素等の
無機系過酸化物、ベンゾイルパーオキサイド、ｔ−ブチ
ルハイドロパーオキサイド、クメンパーオキサイド等の
有機系過酸化物が、アゾ系ラジカル開始剤としては例え
ば２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、２，２’−
アゾビス（２−アミジノプロパン）ジハイドロクロライ
ド、ジメチル２，２’−アゾビスブチレート、ジメチル
２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオネート）等が
用いられる。また、過酸化物系の開始剤に還元剤を組み
合わせたレドックス開始剤も使用できる。
合で用いられる過酸化物系、アゾ系のラジカル開始剤が
用いられる。過酸化物系ラジカル開始剤としては例えば
過硫酸カリウム、過硫酸アンモニウム、過酸化水素等の
無機系過酸化物、ベンゾイルパーオキサイド、ｔ−ブチ
ルハイドロパーオキサイド、クメンパーオキサイド等の
有機系過酸化物が、アゾ系ラジカル開始剤としては例え
ば２，２’−アゾビスイソブチロニトリル、２，２’−
アゾビス（２−アミジノプロパン）ジハイドロクロライ
ド、ジメチル２，２’−アゾビスブチレート、ジメチル
２，２’−アゾビス（２−メチルプロピオネート）等が
用いられる。また、過酸化物系の開始剤に還元剤を組み
合わせたレドックス開始剤も使用できる。
【００１３】重合する際の温度は、溶剤の種類、開始剤
の種類によって異なるが、開始剤の１０時間半減期温度
付近を使用するのが好ましい。重合の際に分子量を制御
するため用いられる連鎖移動剤としては、ドデシルメル
カプタン、チオリンゴ酸、チオグリコール酸等の高沸点
のチオール化合物、イソプロピルアルコール、亜リン
酸、次亜リン酸等を用いることができる。得られた共重
合体を精製するための再沈殿溶媒には、水溶性共重合体
の溶解性が低いヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素
類が用いられ、他の溶剤と混合して用いても良い。水溶
性共重合体の分子量（ポリスチレンを標準としたＧＰＣ
よる重量平均分子量）は１，０００〜１，０００，００
０であることが好ましく、特に１０，０００〜２００，
０００であることが好ましい。
の種類によって異なるが、開始剤の１０時間半減期温度
付近を使用するのが好ましい。重合の際に分子量を制御
するため用いられる連鎖移動剤としては、ドデシルメル
カプタン、チオリンゴ酸、チオグリコール酸等の高沸点
のチオール化合物、イソプロピルアルコール、亜リン
酸、次亜リン酸等を用いることができる。得られた共重
合体を精製するための再沈殿溶媒には、水溶性共重合体
の溶解性が低いヘキサン、ヘプタン等の脂肪族炭化水素
類が用いられ、他の溶剤と混合して用いても良い。水溶
性共重合体の分子量（ポリスチレンを標準としたＧＰＣ
よる重量平均分子量）は１，０００〜１，０００，００
０であることが好ましく、特に１０，０００〜２００，
０００であることが好ましい。
【００１４】得られた表面保護剤を一般的な放射免疫測
定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）等の抗原抗
体反応を利用した免疫測定に利用するには、ポリスチレ
ン等からなるプラスチックの疎水性表面を前もって抗体
あるいは抗原で処理し、その後生理食塩液あるいは緩衝
液に溶解した表面保護剤を用いると良い。その濃度は水
溶性共重合体の種類や固相の材質又は免疫測定の種類や
それに用いられる試薬等によって異なるが、通常、０．
０１〜１０％程度の濃度で、好ましくは０．１〜２％の
濃度が用いられる。その場合一般的に用いられている４
℃で１晩あるいは３７℃で１時間でブロッキングするこ
とができ、その際の緩衝液は抗原あるいは抗体を変性さ
せないｐＨ条件のものが用いられる。その後必要に応じ
て緩衝液の交換を行い、目的とする免疫反応に供するこ
とができる。この際、緩衝液中に表面保護剤を含ませて
も良く、ＢＳＡ等の蛋白質を共存させても良い。
定法（ＲＩＡ）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）等の抗原抗
体反応を利用した免疫測定に利用するには、ポリスチレ
ン等からなるプラスチックの疎水性表面を前もって抗体
あるいは抗原で処理し、その後生理食塩液あるいは緩衝
液に溶解した表面保護剤を用いると良い。その濃度は水
溶性共重合体の種類や固相の材質又は免疫測定の種類や
それに用いられる試薬等によって異なるが、通常、０．
０１〜１０％程度の濃度で、好ましくは０．１〜２％の
濃度が用いられる。その場合一般的に用いられている４
℃で１晩あるいは３７℃で１時間でブロッキングするこ
とができ、その際の緩衝液は抗原あるいは抗体を変性さ
せないｐＨ条件のものが用いられる。その後必要に応じ
て緩衝液の交換を行い、目的とする免疫反応に供するこ
とができる。この際、緩衝液中に表面保護剤を含ませて
も良く、ＢＳＡ等の蛋白質を共存させても良い。
【００１５】また、ラテックス等の微粒子の表面に抗原
あるいは抗体を付け、試料中の抗体あるいは抗原を凝集
反応で測定する一般的免疫測定法においても同様にして
感作ラテックスのブロッキングに使うことができる。本
発明の表面保護剤を用いて表面を保護する固相として
は、免疫測定に使用する抗原あるいは抗体を結合あるい
は吸着させた固相ならいずれも使用でき、例えばポリス
チレンあるいはその共重合体、ポリアクロレイン、ポリ
カーボネート、アクリル系樹脂等のプラスチック類から
なるプレート、ビーズ、ラテックス等が挙げられる。ま
た，反応セルの表面保護にも用いられる。
あるいは抗体を付け、試料中の抗体あるいは抗原を凝集
反応で測定する一般的免疫測定法においても同様にして
感作ラテックスのブロッキングに使うことができる。本
発明の表面保護剤を用いて表面を保護する固相として
は、免疫測定に使用する抗原あるいは抗体を結合あるい
は吸着させた固相ならいずれも使用でき、例えばポリス
チレンあるいはその共重合体、ポリアクロレイン、ポリ
カーボネート、アクリル系樹脂等のプラスチック類から
なるプレート、ビーズ、ラテックス等が挙げられる。ま
た，反応セルの表面保護にも用いられる。
【００１６】本発明の表面保護剤を免疫測定の際の固相
表面のブロッキングに用いた場合、保護剤による免疫反
応が抑制され、偽陽性となる非特異反応の出現率が低下
する。即ち、天然蛋白質を保護剤に用いた場合に希に出
現する非特異反応による診断誤差を軽減することができ
る。
表面のブロッキングに用いた場合、保護剤による免疫反
応が抑制され、偽陽性となる非特異反応の出現率が低下
する。即ち、天然蛋白質を保護剤に用いた場合に希に出
現する非特異反応による診断誤差を軽減することができ
る。
【００１７】
【実施例】以下、実施例及び比較例により本発明を具体
的に説明する。 実施例１ 攪拌器、冷却器、窒素送入口を備えた５００ｍｌ反応容
器にイソプロピルアルコール２５０ｍｌ、メトキシポリ
エチレングリコール（ＭＷ＝４００）メタクリレート９
５ｇ、エチルメタクリレート５ｇを計量し、さらに２，
２’−アゾビスイソブチロニトリル１００ｍｇを添加
し、窒素気流中で７０℃にて６時間、８０℃に上げて２
時間重合した。得られた共重合表面保護剤の溶液を１，
０００ｍｌのｎ−ヘキサン中に注ぎ、再沈澱を２回繰り
返し精製した。この表面保護剤を減圧乾燥し、１０％の
濃度で水に溶解し、ｐＨを７．０に調製した。また、乾
燥した表面保護剤をテトラヒドロフランに溶解しポリス
チレンを標準としてＧＰＣにて分子量を測定したとこ
ろ、数平均分子量：２０，１４４、重量平均分子量：２
５，１１４であった。
的に説明する。 実施例１ 攪拌器、冷却器、窒素送入口を備えた５００ｍｌ反応容
器にイソプロピルアルコール２５０ｍｌ、メトキシポリ
エチレングリコール（ＭＷ＝４００）メタクリレート９
５ｇ、エチルメタクリレート５ｇを計量し、さらに２，
２’−アゾビスイソブチロニトリル１００ｍｇを添加
し、窒素気流中で７０℃にて６時間、８０℃に上げて２
時間重合した。得られた共重合表面保護剤の溶液を１，
０００ｍｌのｎ−ヘキサン中に注ぎ、再沈澱を２回繰り
返し精製した。この表面保護剤を減圧乾燥し、１０％の
濃度で水に溶解し、ｐＨを７．０に調製した。また、乾
燥した表面保護剤をテトラヒドロフランに溶解しポリス
チレンを標準としてＧＰＣにて分子量を測定したとこ
ろ、数平均分子量：２０，１４４、重量平均分子量：２
５，１１４であった。
【００１８】実施例２ 実施例１と同様にして、メトキシポリエチレングリコー
ル（ＭＷ＝１，０００）メタクリレート９５ｇとベンジ
ルメタクリレート５ｇを重合し、共重合体の１０％水溶
液を得た。 実施例３ 実施例１と同様にして、メトキシポリエチレングリコー
ル（ＭＷ＝１，０００）メタクリレート９０ｇとスチレ
ン１０ｇを重合し、共重合体の１０％水溶液を得た。
ル（ＭＷ＝１，０００）メタクリレート９５ｇとベンジ
ルメタクリレート５ｇを重合し、共重合体の１０％水溶
液を得た。 実施例３ 実施例１と同様にして、メトキシポリエチレングリコー
ル（ＭＷ＝１，０００）メタクリレート９０ｇとスチレ
ン１０ｇを重合し、共重合体の１０％水溶液を得た。
【００１９】実施例４ １０重量％の濃度の１．３μｍの平均粒子径を持つ赤色
ポリアクロレインラテックス（日本化薬（株）製）の水
懸濁液に、トレポネーマ・パリダム（ニコルス株）を１
％オクチルグルコシド水溶液にて可溶化した梅毒検査抗
原液（蛋白質濃度５０μｇ／ｍｌ）を２倍量添加し、ゆ
っくり攪拌しながら４℃にて１６時間感作した。続い
て、１，０００ｒｐｍにて遠心分離し、沈渣をリン酸緩
衝生理食塩液（ｐＨ７．２）に懸濁し、実施例１で得ら
れた１０％濃度の表面保護剤水溶液（ｐＨ７．０）をリ
ン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．２）で１％濃度に希釈し
た液を等量添加混合し、４℃にて１６時間ゆっくり攪拌
し、ポリアクロレインラテックスの疎水性表面のブロッ
キングを行った。更に、遠心分離により、１％濃度の表
面保護剤を含有するリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．
２）にて２回洗浄後、０．２５％の濃度になるように同
緩衝生理食塩液に懸濁した。
ポリアクロレインラテックス（日本化薬（株）製）の水
懸濁液に、トレポネーマ・パリダム（ニコルス株）を１
％オクチルグルコシド水溶液にて可溶化した梅毒検査抗
原液（蛋白質濃度５０μｇ／ｍｌ）を２倍量添加し、ゆ
っくり攪拌しながら４℃にて１６時間感作した。続い
て、１，０００ｒｐｍにて遠心分離し、沈渣をリン酸緩
衝生理食塩液（ｐＨ７．２）に懸濁し、実施例１で得ら
れた１０％濃度の表面保護剤水溶液（ｐＨ７．０）をリ
ン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．２）で１％濃度に希釈し
た液を等量添加混合し、４℃にて１６時間ゆっくり攪拌
し、ポリアクロレインラテックスの疎水性表面のブロッ
キングを行った。更に、遠心分離により、１％濃度の表
面保護剤を含有するリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．
２）にて２回洗浄後、０．２５％の濃度になるように同
緩衝生理食塩液に懸濁した。
【００２０】比較のため、同様にして１％の本発明のポ
リマー溶液の代わりに１％牛血清アルブミンを含有する
リン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．２）を用いた条件で感
作ラテックス懸濁液を作成した。得られた各々の感作ラ
テックスを用いてマイクロタイター法にて血清試料を１
００検体比較した。以下に示す通り本発明の方が陽性判
定は少なく、ラナタイターＴＰ（日本化薬（株）製）に
よる確認のための検査結果と一致した。 実施例４ 比較 ラナタイターＴＰ ────────────────────────── 陽性 ２ ４ ２ 陰性 ９８ ９６ ９８ ────────────────────────── 従って、本発明による免疫測定法では、非特異反応によ
る偽陽性は０／１００であったが、同条件でＢＳＡを用
いた場合には２／１００の偽陽性があった。
リマー溶液の代わりに１％牛血清アルブミンを含有する
リン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．２）を用いた条件で感
作ラテックス懸濁液を作成した。得られた各々の感作ラ
テックスを用いてマイクロタイター法にて血清試料を１
００検体比較した。以下に示す通り本発明の方が陽性判
定は少なく、ラナタイターＴＰ（日本化薬（株）製）に
よる確認のための検査結果と一致した。 実施例４ 比較 ラナタイターＴＰ ────────────────────────── 陽性 ２ ４ ２ 陰性 ９８ ９６ ９８ ────────────────────────── 従って、本発明による免疫測定法では、非特異反応によ
る偽陽性は０／１００であったが、同条件でＢＳＡを用
いた場合には２／１００の偽陽性があった。
【００２１】実施例５ 次いでＥＩＡプレート法の例を示す。ＮＣＣ−ＳＴ４３
９マウスモノクローナル抗体（日本化薬（株）製）を
０．１％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍリン酸緩衝液に
溶解し、１００μｇ／ｍｌの濃度に調整した。この溶液
をポリスチレン製９６穴平底マイクロプレートの各ウェ
ル当たり１００μｌずつ加え、４℃にて２４時間静置し
た。その後、モノクローナル抗体溶液を除去し、各ウェ
ルを生理食塩液にて２回洗浄後、実施例２で得られた本
発明のポリマー溶液を１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩液
（ｐＨ７．０）で１０倍希釈した溶液を各ウェルに３０
０μｌずつ加え、４℃にて２４時間静置し保存した。
同時に比較のため本発明の表面保護剤溶液の代わりに１
％ＢＳＡ１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．０）
溶液を用い、同様の操作をして保存した。
９マウスモノクローナル抗体（日本化薬（株）製）を
０．１％アジ化ナトリウム含有０．１Ｍリン酸緩衝液に
溶解し、１００μｇ／ｍｌの濃度に調整した。この溶液
をポリスチレン製９６穴平底マイクロプレートの各ウェ
ル当たり１００μｌずつ加え、４℃にて２４時間静置し
た。その後、モノクローナル抗体溶液を除去し、各ウェ
ルを生理食塩液にて２回洗浄後、実施例２で得られた本
発明のポリマー溶液を１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩液
（ｐＨ７．０）で１０倍希釈した溶液を各ウェルに３０
０μｌずつ加え、４℃にて２４時間静置し保存した。
同時に比較のため本発明の表面保護剤溶液の代わりに１
％ＢＳＡ１０ｍＭリン酸緩衝生理食塩液（ｐＨ７．０）
溶液を用い、同様の操作をして保存した。
【００２２】ラナザイムＳＴ−４３９測定キット（日本
化薬（株）製）の標準液及び管理血清及びＮＣＣ−ＳＴ
−４３９陽性血清（１０検体）１０μｌをキット添付の
緩衝液にて１０倍希釈した溶液を１００μｌずつ抗体結
合マイクロプレートの各ウェルに分注し、３７℃で３０
分反応させた。次いで、生理食塩液にて４回洗浄し、キ
ット添付の標識抗体を添付の溶解液にて溶解した標識抗
体液を１００μｌずつ分注し、３７℃で１時間反応さ
せ、更に生理食塩液にて４回洗浄した。次に、キット添
付の発色剤を溶解液にて溶解した発色液を１００μｌず
つ分注し、３７℃で３０分反応させ、キット添付の停止
液にて発色反応を停止させ、マイクロプレートリーダー
にて４５０ｎｍの吸光度を測定した。標準液による検量
線により、管理血清及び検体の中のＳＴ−４３９抗原の
濃度を定量した。その結果は以下の通りであった。 以上の様に、抗体結合プレート製造の際のプラスチック
表面の保護にＢＳＡと同様に使用することができた。
化薬（株）製）の標準液及び管理血清及びＮＣＣ−ＳＴ
−４３９陽性血清（１０検体）１０μｌをキット添付の
緩衝液にて１０倍希釈した溶液を１００μｌずつ抗体結
合マイクロプレートの各ウェルに分注し、３７℃で３０
分反応させた。次いで、生理食塩液にて４回洗浄し、キ
ット添付の標識抗体を添付の溶解液にて溶解した標識抗
体液を１００μｌずつ分注し、３７℃で１時間反応さ
せ、更に生理食塩液にて４回洗浄した。次に、キット添
付の発色剤を溶解液にて溶解した発色液を１００μｌず
つ分注し、３７℃で３０分反応させ、キット添付の停止
液にて発色反応を停止させ、マイクロプレートリーダー
にて４５０ｎｍの吸光度を測定した。標準液による検量
線により、管理血清及び検体の中のＳＴ−４３９抗原の
濃度を定量した。その結果は以下の通りであった。 以上の様に、抗体結合プレート製造の際のプラスチック
表面の保護にＢＳＡと同様に使用することができた。
【００２３】
【発明の効果】本発明の表面保護剤は各種免疫測定に用
いられる固相の表面保護剤として使用することができ
る。
いられる固相の表面保護剤として使用することができ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 33/531 Ｇ０１Ｎ 33/531 Ｂ
Claims (5)
- 【請求項１】側鎖にポリエチレングリコール鎖を有する
水溶性共重合体からなる免疫反応に使用する固相の表面
保護剤。 - 【請求項２】分子内にポリエチレングリコール鎖を持つ
ビニルモノマーと該モノマーと共重合可能な水不溶性モ
ノマーとの共重合体であって、分子量が１，０００〜
１，０００，０００の範囲にある水溶性共重合体からな
る請求項１記載の表面保護剤。 - 【請求項３】分子内にポリエチレングリコール鎖を持つ
ビニルモノマーがアルコキシポリエチレングリコール
（メタ）アクリレートである請求項１又は請求項２記載
の表面保護剤。 - 【請求項４】分子内にポリエチレングリコール鎖を持つ
ビニルモノマーのポリエチレングリコール鎖の分子量が
１００〜１０，０００である請求項１、請求項２あるい
は請求項３記載の表面保護剤。 - 【請求項５】請求項１から４いずれかに記載の表面保護
剤を用いて表面処理を行った表面を用いた免疫測定方
法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10091153A JPH11287802A (ja) | 1998-04-03 | 1998-04-03 | 表面保護剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10091153A JPH11287802A (ja) | 1998-04-03 | 1998-04-03 | 表面保護剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11287802A true JPH11287802A (ja) | 1999-10-19 |
Family
ID=14018580
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10091153A Pending JPH11287802A (ja) | 1998-04-03 | 1998-04-03 | 表面保護剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11287802A (ja) |
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| WO2008068868A1 (ja) | 2006-12-07 | 2008-06-12 | Toyo Boseki Kabushiki Kaisha | （メタ）アクリレート共重合体及びその製造方法及び医療用具 |
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-
1998
- 1998-04-03 JP JP10091153A patent/JPH11287802A/ja active Pending
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