JPH11332579A - Ｔｓｃ５０１遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】特に薬物代謝促進剤として有用な新規な遺伝子
を提供。 【解決手段】例えば、配列番号：１で示されるアミノ酸
配列の蛋白質をコードする塩基配列を含む遺伝子。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、腎臓及び肝臓特異
的に発現し、薬物代謝に関連する遺伝子及び該遺伝子に
よりコードされる新規な蛋白質及びその特異抗体に関す
る。

【０００２】

【従来の技術】生体内で合成された蛋白質や生体に取り
込まれた薬物、毒物は、リン酸化、メチル化、アセチル
化等の種々の修飾反応を触媒する酵素によって、その活
性を調節されることが知られている。

【０００３】上記酵素のうちでも、アセチルトランスフ
ェレース（acetyltransferase）は、アセチル補酵素Ａ
（acetyl CoA）から蛋白質や薬物、毒物等にアセチル基
を転移させるアセチル化反応を触媒しており、生体内に
投与された各種薬物、生体に取り込まれた毒物、不要な
蛋白質等の代謝による活性の調節に関与しており、主と
して薬物代謝作用を有するとされている。しかるに、現
在その詳しい薬物代謝機構は解明されていない。

【０００４】かかるアセチルトランスフェレース等の薬
物代謝に関与する酵素等の生理的役割の解明とそれによ
り得られる情報は、薬物代謝機構の解明に重要であり、
基礎科学研究の分野はもとより、医薬品分野において
も、新薬開発等の面から望まれるところである。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、斯界で要望
される前記の情報を提供することを目的としており、特
にアセチルトランスフェレースに相同性を有し、生体内
における薬物代謝に関与する新規な蛋白質及びこれをコ
ードする遺伝子を提供することを目的とする。

【０００６】本発明者は、各種ヒト組織由来の遺伝子に
つき検索を重ねた結果、腎臓及び肝臓に特異的に発現し
ており、各種のアセチルトランスフェレースと一定の相
同性を有し、薬物代謝に関連する代謝を調節する酵素を
コードする新しい遺伝子の単離、同定に成功し、ここに
本発明を完成するに至った。

【０００７】

【課題を解決するための手段】即ち、本発明によれば、
以下の（ａ）及び（ｂ）のいずれかの蛋白質をコードす
る塩基配列を含むＴＳＣ５０１遺伝子、特に配列番号：
２で示される塩基配列を含む当該遺伝子、ヒト遺伝子で
ある之等の遺伝子が提供される。

【０００８】（ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配
列からなる蛋白質、 （ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において１
もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換又は付加されたア
ミノ酸配列からなり、且つアセチルトランスフェレース
活性を有する蛋白質。

【０００９】また、本発明によれば、以下の（ａ）及び
（ｂ）のいずれかのポリヌクレオチドからなるＴＳＣ５
０１遺伝子、特にヒト遺伝子である当該遺伝子が提供さ
れる。

【００１０】（ｉ）配列番号：３で示される塩基配列の
全部又は一部を含むポリヌクレオチド、 （ii）配列番号：３で示される塩基配列からなるＤＮＡ
とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリ
ヌクレオチド。

【００１１】更に、本発明によれば、ＴＳＣ５０１遺伝
子の検出用の特異プローブ又は特異プライマーとして使
用されるＤＮＡ断片である上記遺伝子が提供される。

【００１２】加えて、本発明によれば、上記（ａ）及び
（ｂ）のいずれかの蛋白質である組換えＴＳＣ５０１蛋
白質及びこれに結合性を有する抗体が提供される。

【００１３】以下、本明細書におけるアミノ酸、ペプチ
ド、塩基配列、核酸等の略号による表示は、ＩＵＰＡＣ
−ＩＵＢの規定〔IUPAC-IUB Communication on Biologi
calNomenclature, Eur. J. Biochem., 138: 9 (198
4)〕、「塩基配列又はアミノ酸配列を含む明細書等の作
成のためのガイドライン」（特許庁編）及び当該分野に
おける慣用記号に従うものとする。

【００１４】

【発明の実施の形態】本発明遺伝子の一具体例として
は、後述する実施例に示される「ＴＳＣ５０１ａ」と名
付けられたＰＣＲ産物のＤＮＡ配列から演繹されるもの
を挙げることができ、その塩基配列は配列番号：３に示
されるとおりである。

【００１５】該遺伝子は、配列番号：１に示される２２
７アミノ酸配列（推定分子量：約２５ＫＤａ）の新規
な、腎臓及び肝臓に特異的に発現している、薬物代謝を
調節する酵素をコードするオープンリーディングフレー
ムを含むヒトｃＤＮＡ（全長：約１．０ｋｂ）であり、
該酵素は、薬物代謝に重要な役割を演じていると考えら
れる。

【００１６】本発明遺伝子（以下「ＴＳＣ５０１遺伝
子」という）の発現産物である蛋白質（以下「ＴＳＣ５
０１蛋白質」という）の一例である上記蛋白（酵素）
は、ＦＡＳＴＡプログラム（Person W. R., et al., Pr
oc. Natl. Acad. Sci., USA., 85, 2444-2448 (1988)）
を利用したGenBank/EMBLデーターベースによるホモロジ
ー解析の結果、Ｃ末端側において、(1)ゲンタマイシン
３’−アセチルトランスフェレース（gentamicin 3'-ac
etyltransferase (AAC(3)-I); W. Wohlleben, et al.,
Mol. Gen. Genet., (1989), 217: 202-208）、(2)リボ
ソーム蛋白−アラニン アセチルトランスフェレース（r
ibosomal-protein-alanine acetyltransferase (Rim
I); A. Yoshikawa, et al., Mol. Gen. Genet. (1987),
209: 481-488）及び(3)ストレプトセリシン アセチル
トランスフェレース（streptothricin acetyltransfera
se (Sta T); S. Horinouchi, et al., J. Bacteriol.,
(1987),pp.1929-1937）と、それぞれ、２９％、２６％
及び２７％の相同性を示し、之等及びその他の各種アセ
チルトランスフェレースと有意な同一性が確認された。

【００１７】また、上記蛋白は、コンピューター解析に
よる蛋白質構造の解析によって、細胞膜貫通領域が１ヶ
所存在することが示唆され、このことより、本発明ＴＳ
Ｃ５０１蛋白質は、細胞膜蛋白質である可能性が高いこ
とが判明した。

【００１８】ノーザン解析の結果、本発明ＴＳＣ５０１
遺伝子は、正常腎臓及び肝臓に特異的に発現することが
解明された。しかして、上記腎臓及び肝臓は、薬物代謝
を主に行なっている臓器であり、本発明遺伝子はこれら
臓器に特異的に発現される点からも、薬物代謝に関連す
る遺伝子であることが判った。

【００１９】以上のように、本発明ＴＳＣ５０１遺伝子
及びその遺伝子産物の提供は、殊に生体の薬物代謝及び
その調節機構の解明に有用な情報を与え、このことか
ら、本発明遺伝子及びその発現産物は、特に、生体に投
与される各種薬物の代謝促進剤として好適に利用でき
る。

【００２０】本発明遺伝子は、具体的には、配列番号：
１で示されるアミノ酸配列からなる蛋白質をコードする
塩基配列を含む遺伝子又は配列番号：２で示される塩基
配列を含む遺伝子として例示されるが、特にこれらに限
定されることなく、例えば、上記アミノ酸配列中に一定
の改変を有する遺伝子や、上記塩基配列と一定の相同性
を有する遺伝子であることができる。

【００２１】即ち、本発明遺伝子には、配列番号：１に
示されるアミノ酸配列において、１もしくは複数のアミ
ノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸配列から
なり、アセチルトランスフェレース活性を有する蛋白質
をコードする塩基配列及びこれらを含む遺伝子もまた包
含される。ここで、「アミノ酸の欠失、置換もしくは付
加」の程度及びそれらの位置は、改変された蛋白質が、
配列番号：１で示されるアミノ酸配列からなる蛋白質と
同様の機能を有する同効物であれば特に制限されない。
上記複数個には、２以上、通常数個が包含される。

【００２２】尚、これらアミノ酸配列の改変（変異）
は、天然において、例えば突然変異や翻訳後の修飾等に
より生じることもあり、天然由来の遺伝子（例えば本発
明の具体例遺伝子）に基づいて人為的にこれを行わせる
こともできる。本発明遺伝子には、このような改変・変
異の原因及び手段を問わず、上記特性を有する全ての改
変遺伝子が包含される。

【００２３】上記の人為的手段としては、例えばサイト
スペシフィック・ミュータゲネシス〔Methods in Enzym
ology, 154: 350, 367-382 (1987)；同 100: 468 (198
3)；Nucleic Acids Res., 12: 9441 (1984)；続生化学
実験講座１「遺伝子研究法II」、日本生化学会編, p105
(1986)〕等の遺伝子工学的手法、リン酸トリエステル
法やリン酸アミダイト法等の化学合成手段〔J. Am. Che
m. Soc., 89: 4801 (1967)；同91: 3350 (1969)；Scien
ce, 150: 178 (1968)；Tetrahedron Lett., 22:1859 (1
981)；同24: 245 (1983)〕及びそれらの組合せが例示で
きる。

【００２４】本発明遺伝子のひとつの態様としては、配
列番号：３で示される塩基配列の全部或は一部を含むポ
リヌクレオチドからなる遺伝子を例示できる。この塩基
配列に含まれるオープンリーディングフレームは、上記
アミノ酸配列（配列番号：１）の各アミノ酸残基を示す
コドンの一つの組合せ例であり、本発明遺伝子はこの例
に限らず、各アミノ酸残基に対する任意のコドンを組合
せ選択した塩基配列を有することも勿論可能である。該
コドンの選択は、常法に従うことができ、例えば利用す
る宿主のコドン使用頻度等を考慮することができる〔Nc
leic Acids Res., 9: 43 (1981)〕。

【００２５】また、本発明遺伝子は、例えば配列番号：
３の具体例で示されるように、一本鎖ＤＮＡの塩基配列
として表示されるが、本発明はかかる塩基配列に相補的
な塩基配列からなるポリヌクレオオチドやこれらの両者
を含むコンポーネントも当然に包含し、また、ｃＤＮＡ
等のＤＮＡに限定されることもない。

【００２６】更に、本発明遺伝子は、前記のとおり、配
列番号：３に示される塩基配列の全部又は一部を含むポ
リヌクレオチドからなるものに限定されず、当該塩基配
列と一定の相同性を有する塩基配列からなるものも包含
する。かかる遺伝子としては、少なくとも、下記に掲げ
るようなストリンジェントな条件下で、配列番号：３で
示される塩基配列からなるＤＮＡとハイブリダイズし、
一定の条件下での洗浄によってもこれより脱離しないも
のが挙げられる。

【００２７】即ち、上記一定の相同性を有する塩基配列
には、配列番号：３の塩基配列を有するＤＮＡと、６×
ＳＳＣ中６５℃一夜の条件下或は５０％ホルムアミドを
含む４×ＳＳＣ中３７℃一夜の条件下においてハイブリ
ダイズし、２×ＳＳＣ中６５℃での３０分間の洗浄条件
下においても該ＤＮＡから脱離しない塩基配列が含まれ
る。ここで、ＳＳＣは、標準食塩−クエン酸緩衝液であ
る（standard salinecitrate; 1×SSC = 0.15M NaCl,
0.015M sodium citrate）。

【００２８】本発明遺伝子は、その具体例についての配
列情報に基づいて、一般的な遺伝子工学的手法により容
易に製造・取得することができる〔Molecular Cloning
2d Ed, Cold Spring Harbor Lab. Press (1989)；続生
化学実験講座「遺伝子研究法Ｉ、II、III」、日本生化
学会編（1986）等参照〕。

【００２９】具体的には、本発明遺伝子が発現される適
当な起源より、常法に従ってｃＤＮＡライブラリーを調
製し、該ライブラリーから、本発明遺伝子に特有の適当
なプローブや抗体を用いて所望クローンを選択すること
により、本発明遺伝子を得ることができる〔上記手法に
ついては、例えばProc. Natl. Acad. Sci., USA., 78:
6613 (1981)；Science, 222: 778 (1983)等参照〕。

【００３０】上記において、ｃＤＮＡの起源としては、
本発明遺伝子を発現する各種の細胞、組織やこれらに由
来する培養細胞等が例示される。これらからの全ＲＮＡ
の分離、ｍＲＮＡの分離や精製、ｃＤＮＡの取得とその
クローニング等は、いずれも常法に従い実施できる。
尚、ｃＤＮＡライブラリーは市販されてもおり、本発明
においてはそれら市販のｃＤＮＡライブラリー、例えば
クローンテック社（Clontech Lab. Inc.）より市販の各
種ｃＤＮＡライブラリー等を用いることもできる。

【００３１】本発明遺伝子をｃＤＮＡライブラリーから
スクリーニングする方法も、特に制限されず、通常の方
法に従うことができる。具体的方法としては、例えばｃ
ＤＮＡにより産生される蛋白質の特異抗体を使用した免
疫的スクリーニングにより、対応するｃＤＮＡクローン
を選択する方法、目的のＤＮＡ配列に選択的に結合する
プローブを用いたプラークハイブリダイゼーション法、
コロニーハイブリダイゼーション法等やこれらの組合せ
を例示できる。

【００３２】ここで用いられるプローブとしては、本発
明遺伝子の塩基配列に関する情報をもとにして化学合成
されたＤＮＡが一般的に例示できるが、勿論既に取得さ
れた本発明遺伝子そのものやその断片等も良好に利用で
きる。

【００３３】また、本発明遺伝子のスクリーニングは、
上記特異抗体に代えてＴＳＣ５０１蛋白質を利用した蛋
白質相互作用クローニング法（protein interaction cl
oning procedure）によることもでき、更に、本発明遺
伝子の塩基配列情報に基づき設定したセンス・プライマ
ー、アンチセンス・プライマーをスクリーニング用プロ
ーブとして用いる方法によることもできる。

【００３４】本発明では、またディファレンシャルデイ
スプレイ法（differential displaymethod; Liand P.,
et al., Science, 257, 967-971 (1992)）によって、異
なる条件下の細胞もしくは複数の異なる細胞群間のｍＲ
ＮＡの発現を直接比較、検討することができる。

【００３５】本発明遺伝子の取得に際しては、ＰＣＲ法
〔Science, 230: 1350 (1985)〕によるＤＮＡ／ＲＮＡ
増幅法も好適に利用できる。殊に、ライブラリーから全
長のｃＤＮＡが得られ難いような場合には、レース法
（ＲＡＣＥ：Rapid amplification of cDNA ends；実験
医学、12(6): 35 (1994))、殊に５’−レース（５’−
ＲＡＣＥ）法〔Proc. Natl. Acad. Sci., USA., 8: 899
8 (1988)〕等の採用が好適である。かかるＰＣＲ法の採
用に際して使用されるプライマーは、既に本発明によっ
て明らかにされた本発明遺伝子の配列情報に基づいて適
宜設定でき、これは常法に従い合成できる。

【００３６】尚、増幅させたＤＮＡ／ＲＮＡ断片の単離
精製は、前記の通り常法に従うことができ、例えばゲル
電気泳動法等によればよい。

【００３７】上記で得られる本発明遺伝子或は各種ＤＮ
Ａ断片は、常法、例えばジデオキシ法〔Proc. Natl. Ac
ad. Sci., USA., 74: 5463 (1977)〕やマキサム−ギル
バート法〔Method in Enzymology, 65: 499 (1980)〕等
に従って、また簡便には市販のシークエンスキット等を
用いて、その塩基配列を決定することができる。

【００３８】本発明遺伝子の利用によれば、一般の遺伝
子工学的手法を用いることにより、その遺伝子産物（蛋
白質乃至酵素）を容易に大量に安定して製造することが
できる。従って、本発明は、本発明にかかるＴＳＣ５０
１遺伝子を含有するベクター（発現ベクター）及び該ベ
クターによって形質転換された宿主細胞並びに該宿主細
胞を培養することによりＴＳＣ５０１蛋白質を製造する
方法をも提供するものである。

【００３９】該蛋白質の製造は、通常の遺伝子組換え技
術〔Science, 224: 1431 (1984); Biochem. Biophys. R
es. Comm., 130: 692 (1985); Proc. Natl. Acad. Sc
i., USA., 80: 5990 (1983)及び前記引用文献等参照〕
に従って実施できる。

【００４０】上記宿主細胞としては、原核生物及び真核
生物のいずれも用いることができ、例えば原核生物の宿
主としては、大腸菌や枯草菌といった一般的に用いられ
るものが広く挙げられ、好適には大腸菌、とりわけエシ
ェリヒア・コリ（Escherichia coli）Ｋ１２株に含まれ
るものを例示できる。また、真核生物の宿主細胞には、
脊椎動物、酵母等の細胞が含まれ、前者としては、例え
ばサルの細胞であるＣＯＳ細胞〔Cell, 23: 175 (198
1)〕やチャイニーズ・ハムスター卵巣細胞及びそのジヒ
ドロ葉酸レダクターゼ欠損株〔Proc. Natl. Acad. Sc
i., USA., 77: 4216(1980)〕等が、後者としては、サッ
カロミセス属酵母細胞等が好適に用いることができる。
勿論、これらに限定される訳ではない。

【００４１】原核生物細胞を宿主とする場合は、該宿主
細胞中で複製可能なベクターを用いて、このベクター中
に本発明遺伝子が発現できるように該遺伝子の上流にプ
ロモーター及びＳＤ（シャイン・アンド・ダルガーノ）
塩基配列、更に蛋白合成開始に必要な開始コドン（例え
ばＡＴＧ）を付与した発現プラスミドを好適に利用でき
る。上記ベクターとしては、一般に大腸菌由来のプラス
ミド、例えばｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３２５、ｐＵＣ１
２、ｐＵＣ１３等がよく用いられるが、これらに限定さ
れず既知の各種のベクターを利用することができる。大
腸菌を利用した発現系に利用される上記ベクターの市販
品としては、例えばｐＧＥＸ−４Ｔ（Amersham Pharmac
ia Biotech社）、ｐＭＡＬ−Ｃ２，ｐＭＡｌ−Ｐ２（Ne
w EnglandBiolabs社）、ｐＥＴ２１，ｐＥＴ２１／ｌａ
ｃｑ（Invitrogen社）、ｐＢＡＤ／Ｈｉｓ（Invitrogen
社）等を例示できる。

【００４２】脊椎動物細胞を宿主とする場合の発現ベク
ターとしては、通常、発現しようとする本発明遺伝子の
上流に位置するプロモーター、ＲＮＡのスプライス部
位、ポリアデニル化部位及び転写終了配列等を保有する
ものが挙げられ、これは更に必要により複製起点を有し
ていてもよい。該発現ベクターの例としては、具体的に
は、例えばＳＶ４０の初期プロモーターを保有するｐＳ
Ｖ２dhfr〔Mol. Cell. Biol., 1: 854 (1981)〕等が例
示できる。上記以外にも既知の各種の市販ベクターを用
いることができる。動物細胞を利用した発現系に利用さ
れるかかるベクターの市販品としては、例えばｐＥＧＦ
Ｐ−Ｎ，ｐＥＧＦＰ−Ｃ（Clontrech社）、ｐＩＮＤ（I
nvitrogen社）、ｐｃＤＮＡ３．１／Ｈｉｓ（Invitroge
n社）等の動物細胞用ベクターや、ｐＦａｓｔＢａｃ Ｈ
Ｔ（ＧｉｂｃｉＢＲＬ社）、ｐＡｃＧＨＬＴ（PharMing
en社）、ｐＡｃ５／Ｖ５−Ｈｉｓ，ｐＭＴ／Ｖ５−Ｈｉ
ｓ，ｐＭＴ／Ｂｉｐ／Ｖ５−ｈｉｓ（以上Invitrogen
社）等の昆虫細胞用ベクター等が挙げられる。

【００４３】また、酵母細胞を宿主とする場合の発現ベ
クターの具体例としては、例えば酸性ホスフアターゼ遺
伝子に対するプロモーターを有するｐＡＭ８２〔Proc.
Natl. Acad. Sci., USA., 80: 1 (1983)〕等が例示でき
る。市販の酵母細胞用発現ベクターには、例えばｐＰＩ
ＣＺ（Invitrogen社）、ｐＰＩＣＺα（Invitrogen社）
等が包含される。

【００４４】プロモーターとしても特に限定なく、エッ
シェリヒア属菌を宿主とする場合は、例えばトリプトフ
ァン(trp)プロモーター、lppプロモーター、lacプロモ
ーター、recAプロモーター、PL/PRプロモーター等を好
ましく利用できる。宿主がバチルス属菌である場合は、
SP01プロモーター、SP02プロモーター、penPプロモータ
ー等が好ましい。酵母を宿主とする場合のプロモーター
としては、例えばpH05プロモーター、PGKプロモータ
ー、GAPプロモーター、ADHプロモーター等を好適に利用
できる。また、動物細胞を宿主とする場合の好ましいプ
ロモーターとしては、ＳＶ４０由来のプロモーター、レ
トロウイルスのプロモーター、メタロチオネインプロモ
ーター、ヒートショックプロモーター、サイトメガロウ
イルスプロモーター、ＳＲαプロモーター等を例示でき
る。

【００４５】尚、本発明遺伝子の発現ベクターとして
は、通常の融合蛋白発現ベクターも好ましく利用でき
る。該ベクターの具体例としては、グルタチオン−Ｓ−
トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）との融合蛋白として発現
させるためのｐＧＥＸ（Promega社）等を例示できる。

【００４６】所望の組換えＤＮＡ（発現ベクター）の宿
主細胞への導入法・形質転換法としても特に制限はな
く、一般的な各種方法を採用できる。得られる形質転換
体も、常法に従いこれを培養することができ、該培養に
より本発明遺伝子によりコードされる目的のＴＳＣ５０
１蛋白質が発現・産生され、形質転換体の細胞内、細胞
外若しくは細胞膜上に蓄積もしくは分泌される。

【００４７】上記培養に用いられる培地としては、採用
した宿主細胞に応じて慣用される各種のものを適宜選択
利用でき、その培養も宿主細胞の生育に適した条件下で
実施できる。

【００４８】かくして得られる組換え蛋白質（ＴＳＣ５
０１蛋白質）の有するアセチルトランスフェレース活性
の測定は、例えば〔¹⁴Ｃ〕−アセチルＣｏＡとＴＳＣ５
０１蛋白質とをゲンタマイシン、ストレプトマイシン等
の抗生物質（薬物）の存在下で反応させ、生成した〔¹⁴
Ｃ〕−薬物を有機層であるシンチレーターに拡散させ
て、その生成量を液体シンチレーションカウンターで測
定することにより実施できる〔Sambrook,J. Fritsch,E.
F. & Maniatis,T., Molecular Cloning, A Laboratory
Mannual, Second Edition (Cold Spring Harbor, New Y
ork, Cold SpringHarbor Laboratory Press), 1989, 1
6.30-16.55/16.56-16.67; Ausubel,F.M.,et al., Curen
t Protocols in Molecular Biology (New York, John W
iley andSons, 1990, 9.0-9.5/9.6.1-9.6.9〕。

【００４９】上記形質転換体の培養は、より詳しくは、
前記した発現ベクター中に所望のＴＳＣ５０１遺伝子を
組込んで形質転換させた形質転換体を含む培養細胞又は
培養細胞の細胞抽出精製物を用いて、例えば以下の如く
して実施できる。即ち、まず１０ｍｌのＰＢＳで前記細
胞を洗浄後、ラバーポスマンを用いて細胞を１０ｍｌＰ
ＢＳに懸濁させ、２０００rpm、４℃、５分間遠心分離
した後、沈殿物（細胞）を回収する。次いで、回収した
細胞を１００μｌの０．２５Ｍトリス−塩酸（ｐＨ７．
５）に、１〜２ｍｇ／ｍｌとなるように懸濁させた後、
液体窒素を用いた凍結操作（又は−８０℃超低温冷蔵庫
に５分間放置による）と融解操作とを４回繰り返した
後、１５０００rpm、４℃、１０分間遠心分離し、上清
を回収する。

【００５０】かくして回収した上清は、これを直ちに測
定に供しない場合は、−８０℃で保存しておくことがで
き、また例えばその一部をバイオ−ラッド・プロテイン
・アッセイ等に供して蛋白質を定量することもできる。

【００５１】上記上清の２０〜２００μｇ蛋白質を０．
２５Ｍとリス−塩酸（ｐＨ７．５）を用いて２５μｌに
メスアップし、該蛋白質溶解溶液に５０μｌの０．１μ
Ｃｉ〔¹⁴Ｃ〕クロラムフェニコール（Amersham社等）を
含む０．２５Ｍトリス−塩酸（ｐＨ７．５）と１０μｌ
の１０ｍＭアセチルＣｏＡ（和光純薬社、シグマ社等）
を加えて、３７℃で１時間インキュベートする。これに
３００μｌ酢酸エチルを加え、ボルテックスミキサーを
用いて撹拌し、１５０００rpm、４℃、１０分間遠心分
離し、上清２５０μｌを別の１．５ｍｌチューブに取
り、更に２５０μｌ酢酸エチルを加える。次いでボルテ
ックスミキサーを用いて撹拌し、上記と同様に遠心分離
後、上清２５０μｌを前記の１．５ｍｌチューブに加え
る。合計５００μｌ酢酸エチルを濃縮遠心機を用いて蒸
発乾固して、抽出物を２０μｌ酢酸エチルに溶かし、シ
リカゲル薄層プレートに１ｃｍ間隔にディスポーザルマ
イクロピペットを用いるか又はピペットマンを用いて
０．５μｌずつスポットする。

【００５２】予めチャンバー内をクロロホルム−メタノ
ール（９５：５）で飽和させておき、２０〜３０分間分
離を行い、数分後、室温で乾燥し、一晩オートラジオグ
ラフィーを行い、アセチル化体及び非アセチル化体のそ
れぞれのカウントを別々にイメージ・アナライザー（Fu
ji社製 :BSA2000等）又は液体シンチレーションカウン
ター（ベックマン社製等）にて測定することによって、
ＴＳＣ５０１蛋白質のアセチルトランスフェレース活性
の測定を行うことができる。

【００５３】組換え蛋白質（ＴＳＣ５０１蛋白質）は、
所望により、その物理的性質、化学的性質等を利用した
各種の分離操作に従って分離、精製することができる
〔「生化学データブックII」、1175-1259頁、第１版第
１刷、1980年 6月23日株式会社東京化学同人発行；Bioc
hemistry, 25(25): 8274 (1986); Eur. J. Biochem., 1
63: 313 (1987) 等参照〕。

【００５４】該方法としては、具体的には例えば通常の
再構成処理、蛋白沈澱剤による処理（塩析法）、遠心分
離、浸透圧ショック法、超音波破砕、限外濾過、分子篩
クロマトグラフィー（ゲル濾過）、吸着クロマトグラフ
ィー、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティク
ロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰ
ＬＣ）等の各種液体クロマトグラフィー、透析法、これ
らの組合せ等が挙げられ、特に好ましい上記方法として
は、本発明蛋白質に対する特異抗体を結合させたカラム
を利用するアフィニティクロマトグラフィーを例示でき
る。

【００５５】しかして、本発明は、例えば上記の如くし
て得られる、新規なＴＳＣ５０１蛋白質自体をも提供す
るものである。該蛋白質は、アセチルトランスフェレー
スと相同性を有し、その有するアセチル化反応促進作用
（アセチルトランスフェレース活性）乃至薬物代謝作用
を有することにより特徴付けられ、前記のとおり医薬分
野において有用である。

【００５６】また、このＴＳＣ５０１蛋白質は、該蛋白
質の特異抗体を作成するための免疫抗原としても利用で
きる。ここで抗原として用いられるコンポーネントは、
例えば上記遺伝子工学的手法に従って大量に産生された
蛋白質或はそのフラグメントであることができ、これら
抗原を利用することにより、所望の抗血清（ポリクロー
ナル抗体）及びモノクローナル抗体を収得することがで
きる。

【００５７】該抗体の製造方法自体は、当業者によく理
解されているところであり、本発明においてもこれら常
法に従うことができる〔続生化学実験講座「免疫生化学
研究法」、日本生化学会編（1986）等参照〕。

【００５８】上記抗血清の取得に際して利用される免疫
動物としては、例えばウサギ、モルモット、ラット、マ
ウスやニワトリ等の通常動物を任意に選択でき、上記抗
原を使用する免疫方法や採血等もまた常法に従い実施で
きる。

【００５９】モノクローナル抗体の取得も、常法に従
い、上記免疫抗原で免疫した動物の形質細胞（免疫細
胞）と形質細胞腫細胞との融合細胞を作成し、これより
所望抗体を産生するクローンを選択し、該クローンの培
養により実施することができる。免疫動物は、一般に細
胞融合に使用する形質細胞腫細胞との適合性を考慮して
選択され、通常マウスやラット等が有利に用い得る。免
疫化は、上記抗血清の場合と同様にして実施でき、また
所望により免疫抗原を通常のアジュバント等と併用して
用いることもできる。

【００６０】尚、融合に使用される形質細胞腫細胞とし
ても、特に限定なく、例えばｐ３（p3/x63-Ag8）〔Natu
re, 256: 495-497 (1975)〕、ｐ３−Ｕ１〔Current Top
icsin Microbiology and Immunology, 81: 1-7 (197
8)〕、ＮＳ−１〔Eur. J. Immunol., 6: 511-519 (197
6)〕、ＭＰＣ−１１〔Cell, 8: 405-415 (1976)〕、Ｓ
Ｐ２／０〔Nature, 276: 269-271 (1978)〕等、ラット
におけるＲ２１０〔Nature,277: 131-133 (1979)〕等及
びそれらに由来する細胞等の各種の骨髄腫細胞をいずれ
も使用できる。

【００６１】上記免疫細胞と形質細胞腫細胞との融合
は、通常の融合促進剤、例えばポリエチレングリコール
（ＰＥＧ）やセンダイウイルス（ＨＶＪ）等の存在下に
公知の方法に準じて行なうことができ、所望のハイブリ
ドーマの分離もまた同様に行ない得る〔Meth. in Enzym
ol., 73: 3 (1981)；上記続生化学実験講座等〕。

【００６２】また、目的とする抗体産生株の検索及び単
一クローン化も常法により実施され、例えば抗体産生株
の検索は、上記の免疫抗原を利用したＥＬＩＳＡ法〔Me
th.in Enzymol., 70: 419-439 (1980)〕、プラーク法、
スポット法、凝集反応法、オクテロニー（Ouchterlon
y）法、ラジオイムノアッセイ等の一般に抗体の検出に
用いられている種々の方法に従い実施することができ
る。

【００６３】かくして得られるハイブリドーマからの所
望抗体の採取は、該ハイブリドーマを常法により培養し
てその培養上清として得る方法やハイブリドーマをこれ
と適合性のある哺乳動物に投与して増殖させその腹水と
して得る方法等により実施できる。前者の方法は、高純
度の抗体を得るのに適しており、後者の方法は、抗体の
大量生産に適している。このようにして得られる抗体
は、更に塩析、ゲル濾過、アフィニティクロマトグラフ
イー等の通常の手段により精製することができる。

【００６４】かくして得られる抗体は、本発明のＴＳＣ
５０１蛋白質に結合性を有することによって特徴付けら
れ、これは、ＴＳＣ５０１蛋白質の精製、その免疫学的
手法による測定乃至識別等に有利に利用できる。本発明
は、かかる新規な抗体をも提供するものである。

【００６５】また、本発明によって明らかにされた本発
明遺伝子の配列情報を基にすれば、例えば該遺伝子の一
部又は全部の塩基配列を利用することにより、個体もし
くは各種組織における本発明遺伝子の発現の検出を行な
うことができる。

【００６６】かかる検出は常法に従って行うことがで
き、例えばＲＴ−ＰＣＲ〔Reverse transcribed-Polyme
rase chain reaction; E.S. Kawasaki, et al., Amplif
ication of RNA. In PCR Protocol, A Guide to method
s and applications, AcademicPress, Inc., SanDiego,
21-27 (1991)〕によるＲＮＡ増幅や、ノーザンブロッ
ト解析〔Molecular Cloning, Cold Spring Harbor Lab.
(1989)〕や、in situＲＴ−ＰＣＲ〔Nucl. Acids Re
s., 21: 3159-3166 (1993)〕、in situ ハイブリダイゼ
ーション等の細胞レベルでのそれら測定や、ＮＡＳＢＡ
法〔Nucleic acidsequence-based amplification, Natu
re, 350: 91-92 (1991)〕及びその他の各種方法によ
り、良好に実施し得る。

【００６７】尚、ＲＴ−ＰＣＲ法を採用する場合におい
て、用いられるプライマーは、本発明遺伝子のみを特異
的に増幅できる該遺伝子に特有のものである限り何等限
定されず、本発明の遺伝情報に基いてその配列を適宜設
定することができる。通常、これは２０〜３０ヌクレオ
チド程度の部分配列を有するものとすることができる。

【００６８】このように、本発明は、本発明に係るＴＳ
Ｃ５０１遺伝子検出用の特異プライマー及び／又は特異
プローブとして使用されるＤＮＡ断片をも提供するもの
である。

【００６９】

【発明の効果】本発明によれば、アセチルトランスフェ
レース活性乃至薬物代謝作用を有する、新規なＴＳＣ５
０１蛋白質、これをコードする遺伝子が提供され、これ
らの利用によれば、生体における薬物代謝機構の解明
や、新薬の開発等に有用な技術が提供される。

【００７０】

【実施例】以下、本発明を更に詳しく説明するため、実
施例を挙げる。

【００７１】

【実施例１】(1-1) 〔γ-³³Ｐ〕ＡＴＰで標識した表出
方法 組織特異的な手法において発現したヒト遺伝子を確認す
るために〔γ-³³Ｐ〕ＡＴＰで標識した表出方法を用い
た。該方法の手順は本質的に以下に示すリアングの方法
(Liang P., et al., Science, 257, 967-971 (1992))に
よって行った。

【００７２】即ち、１３のヒト組織（成人脳、胎児脳、
肺、肝臓、胃、膵臓、脾臓、乳腺、膀胱、胎盤、睾丸、
腎臓及び心臓：クローンテック社製）の各々から単離し
たポリＡ ＲＮＡ（０．２μｇ）を、ジエチルピロカー
ボネート処理された水の８μl中で３’-アンカード・オ
リゴｄＴプライマーＧ（Ｔ）１５ＭＡ（ＭはＧ、Ａ及び
Ｃの混合液である）の２５pmolと混合し、６５℃で５分
間加熱した。この溶液に４μｌの５×ファースト・スト
ランド緩衝液（ＢＲＬ社製）、２μｌの０．１Ｍ ＤＴ
Ｔ（ＢＲＬ社製）、１μlの２５０ｍＭ ｄＮＴＰｓ（Ｂ
ＲＬ社製）、１μｌのリボヌクレアーゼ・インヒビター
（４０単位；ＴＯＹＯＢＯ社製）及び１μｌのスーパー
スクリプトII逆転写酵素（２００単位；ＢＲＬ社製）を
加えた。各反応液の最終容量は２０μｌであった。各溶
液を３７℃で１時間培養した後、３０μｌの蒸留した水
の付加により２．５倍までに希釈し、使用時まで−２０
℃で貯蔵した。

【００７３】ｃＤＮＡは、〔γ-³³Ｐ〕ＡＴＰで標識し
た（アマシャム社製）３’−アンカード・プライマーの
存在下でＰＣＲによって増幅した。このｃＤＮＡのＰＣ
Ｒ増幅は、以下のとおり実施された。即ち、各２０μｌ
のＰＣＲ混合液は、２μｌのＲＴ反応混合液、２μｌの
１０×ＰＣＲ緩衝液（タカラ社製）、４μｌの２．５ｍ
Ｍ ｄＮＴＰｓ、０．２５μｌのＥx Ｔａｑ ＤＮＡポリ
メラーゼ（５単位／ｍｌ：タカラ社製）、〔γ-³³Ｐ〕
ＡＴＰで標識した２５pmolの３’−アンカード・オリゴ
−ｄＴプライマー及び２５pmolの５’−プライマー（N
o．２０、５’−ＧＡＴＣＴＧＡＣＡＣ−３’の任意配
列を有する１０−ｍｅｒデオキシオリゴヌクレオチド・
プライマー）を含んでいた。また、ＰＣＲ反応は以下の
条件で行なった。即ち、９５℃で３分間、４０℃で５分
間及び７２℃で５分間を１サイクルとして行ない、それ
から９５℃で０．５分間、４０℃で２分間及び７２℃で
１分間を４０サイクル行ない、最後に７２℃で５分間反
応させた。

【００７４】ＰＣＲ反応サンプルをエタノールで抽出
し、フォルムアミド・シークエンシング染料中に再懸濁
して、６％アクリルアミド７．５Ｍウレア・シークエン
シング・ゲル上で反応させた。ゲルは固定することなし
に乾燥させ、一晩オートラジオグラフィーを実施した。

【００７５】(1-2) 増幅されたｃＤＮＡ断片のサブ・
クローニング 予め乾燥ゲルを載せた３ＭＭ濾紙上にラジオアクティブ
インクで印を付けておき、これとオートラジオグラムを
あわせることにより、目的のｃＤＮＡを含むバンドが含
まれるゲルを、３ＭＭ濾紙ごと切り出した後、３００μ
ｌのｄＨ₂Ｏにて１時間撹袢した。ポリアクリルアミド
・ゲルと濾紙を取り除いた後、ｃＤＮＡを担体として１
μｌの１０ｍｇ／ｍｌグリコーゲンと０．３Ｍ ＮａＯ
Ａｃの存在下、エタノール沈澱によって再回収し、１０
μｌのｄＨ₂Ｏに再溶解した。再増幅のために、５μｌ
のこの溶液が用いられた。ＰＣＲの条件とプライマーは
最初のＰＣＲに対してと同じであった。適当な大きさの
再増幅産物を第一のＰＣＲ産物として再回収し、それか
らそのＰＣＲ産物をpUC118ベクター(タカラ社製)のHinc
II部位にクローンニングした。核酸配列はＡＢＩ３７
７自動シークエンサー（アプライド・バイオ・システム
ズ社製）によって決定した。

【００７６】上記方法にて、胎児脳（F. brain）、成人
脳（A. brain）、肺（Lung）、肝臓（Liver）、胃（Sto
mach）、膵臓（Pancreas）、睾丸（Testis）、前立腺
（Prostate）、脾臓（Spleen）、乳腺（Breast）、胎盤
（Placenta）、心臓（Heart）及び腎臓（Kidney）から
単離したｍＲＮＡを使用する、異なる表出パターンを比
較した結果を図１に示す。

【００７７】該図より、１つのプライマーの組合せでＰ
ＣＲ増幅を行い、腎臓及び肝臓に特異的に発現した一つ
のＰＣＲ産物を確認した。

【００７８】クローニングされ、配列決定されたこのＰ
ＣＲ産物をＴＳＣ５０１ａと命名した。この産物は、１
１６ヌクレオチドからなっていた。ＦＡＳＴＡプログラ
ム(Person W. R., et al., Proc. Natl. Acad. Sci., U
SA, 85, 2444-2448 (1988))を使用するＧｅｎＢａｎｃ
ｋ／ＥＭＢＬデータ・ベース中のＤＮＡ配列と、このヌ
クレオチド・データとの比較より、このＰＣＲ産物が他
の如何なる公知のＤＮＡ配列と相同性がないことが明ら
かとなった。

【００７９】(1-3) ｃＤＮＡのスクリーニング ヒト正常腎臓ｃＤＮＡライブラリーは、オリゴ（dT）−
プライムド・ヒト正常腎臓ｃＤＮＡとＵｎｉ-ＺＡＰ^TM
ＸＲ(ストラタジーン社製)を用いて、構築した。１×１
０⁶個のクローンの全体を上記方法によって単離し、
〔α−³²Ｐ〕−ｄＣＴＰにて標識されたｃＤＮＡ断片を
用いてそのスクリーニングを行なった。陽性クローンを
選択し、それらの挿入ｃＤＮＡ部をpBluescript II SK
(-)中のイン・ビボに切り出した。

【００８０】その結果、ＴＳＣ５０１ａに対して約５０
０のプラークが確認された。この結果より、全ＲＮＡ間
の転写量は、およそ０．０５％であると計算された。Ｔ
ＳＣ５０１に相同する集合したｃＤＮＡ配列（ＴＳＣ５
０１）は、２２７アミノ酸配列の蛋白質をコードする６
８１ヌクレオチドのオープン・リーディング・フレーム
を含む９６０ヌクレオチドを含んでいた。

【００８１】推定されたＴＳＣ５０１蛋白質のアミノ酸
配列は、そのＮ末端部分（Leu⁵⁵−Ala⁷⁸）にシグナルモ
チーフをもち、Ｃ末端部分（Gln¹⁹⁸−Pro²²⁰にトランス
メンブレンドメインを持っおり、このことから、本発明
遺伝子によりコードされる蛋白質は膜蛋白質であること
が明らかとなった。

【００８２】更に、ＦＡＳＴＡプログラムを使用し、公
共のデータベースにおいて公知の蛋白との比較を行なっ
た。その結果を図２に示す。

【００８３】図２は、各蛋白のアミノ酸を一文字表記し
て、その配列を比較したものであり、図中、同一アミノ
酸は反転表示してある。

【００８４】該図より、ＴＳＣ５０１蛋白質は、(1)ゲ
ンタマイシン ３’−アセチルトランスフェレース（gen
tamicin 3'-acetyltransferase (AAC(3)-I); W. Wohlle
ben,et al., Mol. Gen. Genet., (1989), 217: 202-20
8、図中「ＡＡＣ（３）−Ｉ」と表示）、(2)リボソーム
蛋白−アラニン アセチルトランスフェレース（ribosom
al-protein-alanine acetyltransferase (Rim I); A. Y
oshikawa, et al., Mol. Gen. Genet. (1987), 209: 48
1-488、図中「ＲｉｍＩ」と表示）及び(3)ストレプトセ
リシン アセチルトランスフェレース（streptothricin
acetyltransferase (Sta T); S. Horinouchi, et al.,
J. Bacteriol., (1987), pp.1929-1937、図中「Ｓｔａ
Ｔ」と表示）とそれぞれ、２９％、２６％及び２７％同
一であり、有意な同一性が確認された。このことは、Ｔ
ＳＣ５０１蛋白質がアセチルトランスフェレースファミ
リーの新しいメンバーであることを示している。

【００８５】(2) 組織における発現 組織におけるＴＳＣ５０１の発現プロファイルを調べる
ため、各種のヒト組織を用いたノーザンブロット分析を
行った。

【００８６】ノーザン・ブロツト分析には、ヒトＭＴＮ
（Multiple-Tissue Northern）ブロットＩとII（クロー
ンテック社製）を使用した。ｃＤＮＡ断片は、Ｔ３とＴ
７プロモーター配列のプライマー・セットを用い、ＰＣ
Ｒによって〔α−³²Ｐ〕−ｄＣＴＰで標識した。増幅産
物を含むメンブランをプレハイブリダイズ（条件は製品
のプロトコールに従った）し、そしてそれから製品のプ
ロトコールに従い、ハイブリダイゼーションを行なっ
た。

【００８７】ハイブリダイゼーション後、洗浄した膜を
−８０℃で４８時間オートラジオグラフに露光した。

【００８８】ヒト組織として、心臓（Heart）、脳（Bra
in）、胎盤（Placenta）、肺（Lung）、肝臓（Live
r）、骨格筋（Sk. muscle）、腎臓（Kidney）、膵臓（P
ancreas）、脾臓（Spleen）、胸腺（Thymus）、前立腺
（Prostate）、睾丸（Testis）、卵巣（Ovary）、小腸
（Small int.）及び結腸（Colon）を用いて行った上記
試験の結果、ＴＳＣ５０１に相同する約１．０ｋｂ転写
体が腎臓及び肝臓において、特異的に観察された。この
結果は、異なる表出方法において見られる発現パターン
（図１参照）と一致していた。

【００８９】

【配列表】 (1) GENERAL INFORMATION: (i) APPLICANT: Ostuka Pharmaceutical Co., Ltd. (ii) TITLE OF INVENTION: ＴＳＣ５０１遺伝子 (iii) NUMBER OF SEQUENCES: 3 (iv) COMPUTER READABLE FORM: (A) MEDIUM TYPE: Floppy disk (B) COMPUTER: IBM PC compatible (C) OPERATING SYSTEM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: PatentIn Release #1.0, Version #1.30 (vi) CURRENT APPLICATION DATA: (A) APPLICATION NUMBER: (B) FILING REFERENCE: B48JP (C) FILING DATE: 26-MAY-1998

【００９０】 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO:1: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 227 amino acids (B) TYPE: amino acid (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: protein (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:1: Met Ala Pro Cys His Ile Arg Lys Tyr Gln Glu Ser Asp Arg Gln Trp 1 5 10 15 Val Val Gly Leu Leu Ser Arg Gly Met Ala Glu His Ala Pro Ala Thr 20 25 30 Phe Arg Gln Leu Leu Lys Leu Pro Arg Thr Leu Ile Leu Leu Leu Gly 35 40 45 Gly Pro Leu Ala Leu Leu Leu Val Ser Gly Ser Trp Leu Leu Ala Leu 50 55 60 Val Phe Ser Ile Ser Leu Phe Pro Ala Leu Trp Phe Leu Ala Lys Lys 65 70 75 80 Pro Trp Thr Glu Tyr Val Asp Met Thr Leu Cys Thr Asp Met Ser Asp 85 90 95 Ile Thr Lys Ser Tyr Leu Ser Glu Arg Gly Ser Cys Phe Trp Val Ala 100 105 110 Glu Ser Glu Glu Lys Val Val Gly Met Val Gly Ala Leu Pro Val Asp 115 120 125 Asp Pro Thr Leu Arg Glu Lys Arg Leu Gln Leu Phe His Leu Phe Val 130 135 140 Asp Ser Glu His Arg Arg Gln Gly Ile Ala Lys Ala Leu Val Arg Thr 145 150 155 160 Val Leu Gln Phe Ala Arg Asp Gln Gly Tyr Ser Glu Val Ile Leu Asp 165 170 175 Thr Gly Thr Ile Gln Leu Ser Ala Met Ala Leu Tyr Gln Ser Met Gly 180 185 190 Phe Lys Lys Thr Gly Gln Ser Phe Phe Cys Val Trp Ala Arg Leu Val 195 200 205 Ala Leu His Thr Val His Phe Ile Tyr His Leu Pro Ser Ser Lys Val 210 215 220 Gly Ser Leu 225

【００９１】 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO:2: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 684 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: DNA (genomic) (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:2: ATGGCTCCTT GTCACATCCG CAAATACCAG GAGAGCGACC GCCAGTGGGT TGTGGGCTTG 60 CTCTCCCGGG GGATGGCCGA GCATGCCCCA GCCACCTTCC GGCAATTGCT GAAGCTGCCT 120 CGAACCCTCA TACTCTTACT TGGGGGGCCC CTCGCCCTAC TCCTGGTCTC TGGATCCTGG 180 CTTCTAGCCC TCGTGTTCAG CATCAGCCTC TTCCCTGCCC TGTGGTTCCT TGCCAAAAAA 240 CCCTGGACGG AGTATGTGGA CATGACATTG TGCACAGACA TGTCTGACAT TACCAAATCC 300 TACCTGAGTG AGCGTGGCTC CTGCTTCTGG GTGGCTGAGT CTGAAGAGAA GGTGGTGGGC 360 ATGGTAGGAG CTCTGCCTGT TGATGATCCC ACCTTGAGGG AGAAGCGGTT GCAGCTGTTT 420 CATCTCTTTG TGGACAGTGA GCACCGTCGT CAGGGGATAG CAAAAGCCCT GGTCAGGACT 480 GTCCTCCAGT TTGCCCGGGA CCAGGGCTAC AGTGAAGTTA TCCTGGACAC CGGCACCATC 540 CAGCTCTCTG CTATGGCCCT CTACCAGAGC ATGGGCTTCA AGAAGACGGG CCAGTCCTTC 600 TTCTGTGTGT GGGCCAGGCT AGTGGCTCTT CATACAGTTC ATTTCATCTA CCACCTCCCT 660 TCTTCTAAGG TAGGGAGTCT G 681

【００９２】 (2) INFORMATION FOR SEQ ID NO:3: (i) SEQUENCE CHARACTERISTICS: (A) LENGTH: 960 base pairs (B) TYPE: nucleic acid (C) STRANDEDNESS: single (D) TOPOLOGY: linear (ii) MOLECULE TYPE: DNA(cDNA) (ix) FEATURE: (A) NAME/KEY: CDS (B) LOCATION: 169..849 (xi) SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO:3: CTAGAATTCA GCGGCCGCTG AATTCTAGTC CTGGATGCCA GTGAGCGGCT GAGAGCTGAA 60 GCTCCCTGGA CACTCAAGGC TCTTGTGGTG ACAGTCTGAC GTAAAGGCGT GCAGGGAGGC 120 CTAGCTCTGT CTCCTGGACT TAGAGATTTC AGACACAGAA GTCTGTCC ATG GCT CCT 177 Met Ala Pro 1 TGT CAC ATC CGC AAA TAC CAG GAG AGC GAC CGC CAG TGG GTT GTG GGC 225 Cys His Ile Arg Lys Tyr Gln Glu Ser Asp Arg Gln Trp Val Val Gly 5 10 15 TTG CTC TCC CGG GGG ATG GCC GAG CAT GCC CCA GCC ACC TTC CGG CAA 273 Leu Leu Ser Arg Gly Met Ala Glu His Ala Pro Ala Thr Phe Arg Gln 20 25 30 35 TTG CTG AAG CTG CCT CGA ACC CTC ATA CTC TTA CTT GGG GGG CCC CTC 321 Leu Leu Lys Leu Pro Arg Thr Leu Ile Leu Leu Leu Gly Gly Pro Leu 40 45 50 GCC CTA CTC CTG GTC TCT GGA TCC TGG CTT CTA GCC CTC GTG TTC AGC 369 Ala Leu Leu Leu Val Ser Gly Ser Trp Leu Leu Ala Leu Val Phe Ser 55 60 65 ATC AGC CTC TTC CCT GCC CTG TGG TTC CTT GCC AAA AAA CCC TGG ACG 417 Ile Ser Leu Phe Pro Ala Leu Trp Phe Leu Ala Lys Lys Pro Trp Thr 70 75 80 GAG TAT GTG GAC ATG ACA TTG TGC ACA GAC ATG TCT GAC ATT ACC AAA 465 Glu Tyr Val Asp Met Thr Leu Cys Thr Asp Met Ser Asp Ile Thr Lys 85 90 95 TCC TAC CTG AGT GAG CGT GGC TCC TGC TTC TGG GTG GCT GAG TCT GAA 513 Ser Tyr Leu Ser Glu Arg Gly Ser Cys Phe Trp Val Ala Glu Ser Glu 100 105 110 115 GAG AAG GTG GTG GGC ATG GTA GGA GCT CTG CCT GTT GAT GAT CCC ACC 561 Glu Lys Val Val Gly Met Val Gly Ala Leu Pro Val Asp Asp Pro Thr 120 125 130 TTG AGG GAG AAG CGG TTG CAG CTG TTT CAT CTC TTT GTG GAC AGT GAG 609 Leu Arg Glu Lys Arg Leu Gln Leu Phe His Leu Phe Val Asp Ser Glu 135 140 145 CAC CGT CGT CAG GGG ATA GCA AAA GCC CTG GTC AGG ACT GTC CTC CAG 657 His Arg Arg Gln Gly Ile Ala Lys Ala Leu Val Arg Thr Val Leu Gln 150 155 160 TTT GCC CGG GAC CAG GGC TAC AGT GAA GTT ATC CTG GAC ACC GGC ACC 705 Phe Ala Arg Asp Gln Gly Tyr Ser Glu Val Ile Leu Asp Thr Gly Thr 165 170 175 ATC CAG CTC TCT GCT ATG GCC CTC TAC CAG AGC ATG GGC TTC AAG AAG 753 Ile Gln Leu Ser Ala Met Ala Leu Tyr Gln Ser Met Gly Phe Lys Lys 180 185 190 195 ACG GGC CAG TCC TTC TTC TGT GTG TGG GCC AGG CTA GTG GCT CTT CAT 801 Thr Gly Gln Ser Phe Phe Cys Val Trp Ala Arg Leu Val Ala Leu His 200 205 210 ACA GTT CAT TTC ATC TAC CAC CTC CCT TCT TCT AAG GTA GGG AGT CTG 849 Thr Val His Phe Ile Tyr His Leu Pro Ser Ser Lys Val Gly Ser Leu 215 220 225 TGA TCTCTTTCTG TGTGTATTGG TCAGAATAGA ATCCATTCAG CTGTAGCAGC 902 * AAGCAATCCC CAACCTTTCA CTGCAATGAC CTTTCAATGC AATAAAGCTT ATTGTCCA 960

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例１の(1-2)に従う増幅されたｃＤＮＡ断
片のサブ・クローニングにおける異なるｍＲＮＡ表出結
果を示す図面代用写真である。

【図２】本発明ＴＳＣ５０１遺伝子の発現蛋白と公知の
蛋白とのアミノ酸配列における相同性を比較した図であ
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｑ 1/68 Ｃ１２Ｐ 21/08 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ａ６１Ｋ 37/48 ＡＤＱ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91）

Claims (7)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】以下の（ａ）及び（ｂ）のいずれかの蛋白
   質をコードする塩基配列を含むＴＳＣ５０１遺伝子。 （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列からなる蛋
   白質 （ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において１
   もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され
   たアミノ酸配列からなり、且つアセチルトランスフェレ
   ース活性を有する蛋白質
2. 【請求項２】塩基配列が配列番号：２で示されるもので
   ある請求項１に記載のＴＳＣ５０１遺伝子。
3. 【請求項３】以下の（ａ）及び（ｂ）のいずれかのポリ
   ヌクレオチドからなるＴＳＣ５０１遺伝子： （ｉ）配列番号：３で示される塩基配列の全部又は一部
   を含むポリヌクレオチド （ii）配列番号：３で示される塩基配列からなるＤＮＡ
   とストリンジェントな条件下でハイブリダイズするポリ
   ヌクレオチド
4. 【請求項４】ヒト遺伝子である請求項１〜３のいずれか
   に記載の遺伝子。
5. 【請求項５】ＴＳＣ５０１遺伝子検出用の特異プローブ
   又は特異プライマーとして使用されるＤＮＡ断片である
   請求項３に記載の遺伝子。
6. 【請求項６】以下の（ａ）及び（ｂ）の組換えＴＳＣ５
   ０１蛋白質。 （ａ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列からなる蛋
   白質 （ｂ）配列番号：１で示されるアミノ酸配列において１
   もしくは複数のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され
   たアミノ酸配列からなり、且つアセチルトランスフェレ
   ース活性を有する蛋白質
7. 【請求項７】請求項６に記載のＴＳＣ５０１蛋白質に結
   合性を有する抗体。