JPH1144673A - 脂質染色方法 - Google Patents
脂質染色方法Info
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- JPH1144673A JPH1144673A JP9202823A JP20282397A JPH1144673A JP H1144673 A JPH1144673 A JP H1144673A JP 9202823 A JP9202823 A JP 9202823A JP 20282397 A JP20282397 A JP 20282397A JP H1144673 A JPH1144673 A JP H1144673A
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Abstract
(57)【要約】
【解決手段】 電気泳動前又は後に検体中の脂質成分を
脂溶性色素で染色する方法において、脂溶性色素の溶媒
にカルボン酸水溶液を使用することを特徴とする脂質染
色方法。 【効果】 脂質成分が良好に染色され、感度よく検出し
得る。
脂溶性色素で染色する方法において、脂溶性色素の溶媒
にカルボン酸水溶液を使用することを特徴とする脂質染
色方法。 【効果】 脂質成分が良好に染色され、感度よく検出し
得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、電気泳動前又はそ
の後に分離された支持体中の脂質成分の安全、簡便かつ
高感度な染色方法に関する。
の後に分離された支持体中の脂質成分の安全、簡便かつ
高感度な染色方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】血中のリポ蛋白などの脂質成分を分離分
析する手段として、アガロースやポリアクリルアミドゲ
ルを支持体とする電気泳動が多用され、その分離パター
ンは、病態との関連性の研究などに広く利用されてい
る。
析する手段として、アガロースやポリアクリルアミドゲ
ルを支持体とする電気泳動が多用され、その分離パター
ンは、病態との関連性の研究などに広く利用されてい
る。
【０００３】電気泳動によって分離された脂質成分の検
出方法としては、電気泳動前に検体と脂溶性色素溶液を
混合して脂質成分を着色するプレ染色法や、電気泳動後
に脂溶性色素溶液に支持体を浸して脂質成分を染色する
後染色法などが一般的に利用されている。
出方法としては、電気泳動前に検体と脂溶性色素溶液を
混合して脂質成分を着色するプレ染色法や、電気泳動後
に脂溶性色素溶液に支持体を浸して脂質成分を染色する
後染色法などが一般的に利用されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】ここで、脂質成分の染
色に用いられる脂溶性色素は、水にほとんど溶けないた
め、アルコール等の水溶性有機溶媒又はこの高濃度水溶
液に溶解した脂溶性色素溶液として用いる必要があっ
た。
色に用いられる脂溶性色素は、水にほとんど溶けないた
め、アルコール等の水溶性有機溶媒又はこの高濃度水溶
液に溶解した脂溶性色素溶液として用いる必要があっ
た。
【０００５】しかし、このような脂溶性色素溶液として
も、溶解している色素量は少なく、これを少しでも上げ
るために、過剰量の色素を溶媒に加えて溶解した後、未
溶解の色素を濾去したり、溶解時に溶媒を加熱する等の
煩雑かつ危険な方法を採らざるを得なかった。
も、溶解している色素量は少なく、これを少しでも上げ
るために、過剰量の色素を溶媒に加えて溶解した後、未
溶解の色素を濾去したり、溶解時に溶媒を加熱する等の
煩雑かつ危険な方法を採らざるを得なかった。
【０００６】また、上記染色法のうち、プレ染色法によ
れば、電気泳動終了後、すぐに分離パターンを観察でき
るので便利である。しかし、プレ染色法では、電気泳動
に供する試料の添加量が限られるため、従来の色素濃度
の低い染色液では試料成分を十分着色することが難し
く、検出感度が低くなるという問題があった。特に、一
度に多数の試料を同時に泳動、比較できる平板型ゲル電
気泳動では、大量の試料添加が難しく十分な検出感度が
得られないため、プレ染色法を適用することが困難であ
り、一部のポリアクリルアミドディスクゲル電気泳動で
の脂質成分分析に利用されるにとどまっていた。
れば、電気泳動終了後、すぐに分離パターンを観察でき
るので便利である。しかし、プレ染色法では、電気泳動
に供する試料の添加量が限られるため、従来の色素濃度
の低い染色液では試料成分を十分着色することが難し
く、検出感度が低くなるという問題があった。特に、一
度に多数の試料を同時に泳動、比較できる平板型ゲル電
気泳動では、大量の試料添加が難しく十分な検出感度が
得られないため、プレ染色法を適用することが困難であ
り、一部のポリアクリルアミドディスクゲル電気泳動で
の脂質成分分析に利用されるにとどまっていた。
【０００７】一方、後染色法では、プレ染色法に比べて
低い色素濃度でも染色が可能だが、ポリアクリルアミド
ゲルを支持体とした場合、染色液中の高濃度有機溶媒に
よってゲルが収縮、白濁、変形するという問題があっ
た。そして、ゲルの網目構造の収縮やゲル表面の硬質化
によって、色素の脂質成分への吸着が妨害され、本来な
ら検出が可能な色素濃度でも脂質成分が染色されないこ
とがあった。このため、後染色用染色液はプレ染色用よ
りも有機溶媒濃度を下げなければならず、色素の溶解性
が更に低下して十分な色素濃度が得られなくなるため、
長時間染色してもバンドが濃くならずコントラストがは
っきりしない場合が多かった。一方、アガロースや寒天
を支持体とした場合では、染色時間が短いと脂質成分が
十分染色されず、逆に長時間染色を続けると支持体から
脂質成分が抜けてしまってバンドの着色が薄くなるた
め、染色時間のコントロールが難しいという問題もあっ
た。
低い色素濃度でも染色が可能だが、ポリアクリルアミド
ゲルを支持体とした場合、染色液中の高濃度有機溶媒に
よってゲルが収縮、白濁、変形するという問題があっ
た。そして、ゲルの網目構造の収縮やゲル表面の硬質化
によって、色素の脂質成分への吸着が妨害され、本来な
ら検出が可能な色素濃度でも脂質成分が染色されないこ
とがあった。このため、後染色用染色液はプレ染色用よ
りも有機溶媒濃度を下げなければならず、色素の溶解性
が更に低下して十分な色素濃度が得られなくなるため、
長時間染色してもバンドが濃くならずコントラストがは
っきりしない場合が多かった。一方、アガロースや寒天
を支持体とした場合では、染色時間が短いと脂質成分が
十分染色されず、逆に長時間染色を続けると支持体から
脂質成分が抜けてしまってバンドの着色が薄くなるた
め、染色時間のコントロールが難しいという問題もあっ
た。
【０００８】従って本発明の目的は、高濃度の脂溶性色
素溶液を安全かつ簡便に得ることを可能にし、脂質成分
を良好に染色することにより、電気泳動により、これを
高感度に検出することを可能にする脂質染色方法を提供
することにある。
素溶液を安全かつ簡便に得ることを可能にし、脂質成分
を良好に染色することにより、電気泳動により、これを
高感度に検出することを可能にする脂質染色方法を提供
することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】斯かる実状に鑑み本発明
者らは鋭意研究を行った結果、意外にもカルボン酸水溶
液が脂溶性色素を良好に溶解し、これを用いて脂質の染
色を行えば、脂質が十分に染色され、電気泳動により感
度よく脂質が検出できることを見出し、本発明を完成し
た。
者らは鋭意研究を行った結果、意外にもカルボン酸水溶
液が脂溶性色素を良好に溶解し、これを用いて脂質の染
色を行えば、脂質が十分に染色され、電気泳動により感
度よく脂質が検出できることを見出し、本発明を完成し
た。
【００１０】すなわち本発明は、電気泳動前又は後に検
体中の脂質成分を脂溶性色素で染色する方法において、
脂溶性色素の溶媒にカルボン酸水溶液を使用することを
特徴とする脂質染色方法を提供するものである。
体中の脂質成分を脂溶性色素で染色する方法において、
脂溶性色素の溶媒にカルボン酸水溶液を使用することを
特徴とする脂質染色方法を提供するものである。
【００１１】
【発明の実施の形態】本発明において、脂溶性色素の溶
媒に用いるカルボン酸としては、水に対する溶解度が高
いものが好ましく、具体的には、ギ酸、酢酸、プロピオ
ン酸、酪酸、吉草酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、マロ
ン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、アジピン
酸、ピルビン酸、カプロン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒
石酸、ニコチン酸、ピコリン酸、グルコン酸、無水トリ
メリット酸、チオグリコール酸、アクリル酸、メタクリ
ル酸、イミノジ酢酸、プリオキシル酸、クロトン酸、シ
トラコン酸、レブリン酸、クロロ酢酸、クロロプロピオ
ン酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、アスパラギン
酸、グルタミン酸、等が挙げられる。このうち特に炭素
数１〜４の脂肪酸が好ましい。
媒に用いるカルボン酸としては、水に対する溶解度が高
いものが好ましく、具体的には、ギ酸、酢酸、プロピオ
ン酸、酪酸、吉草酸、クエン酸、乳酸、シュウ酸、マロ
ン酸、コハク酸、グルタル酸、マレイン酸、アジピン
酸、ピルビン酸、カプロン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒
石酸、ニコチン酸、ピコリン酸、グルコン酸、無水トリ
メリット酸、チオグリコール酸、アクリル酸、メタクリ
ル酸、イミノジ酢酸、プリオキシル酸、クロトン酸、シ
トラコン酸、レブリン酸、クロロ酢酸、クロロプロピオ
ン酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、アスパラギン
酸、グルタミン酸、等が挙げられる。このうち特に炭素
数１〜４の脂肪酸が好ましい。
【００１２】なお、酢酸水溶液は、電気泳動後に試料成
分を支持体に固定する目的で使用することはあったが、
支持体が色素溶液に浸される前に除去されており、色素
溶液への混入はないか、あってもわずかであり、色素の
溶媒としては使用されていない。
分を支持体に固定する目的で使用することはあったが、
支持体が色素溶液に浸される前に除去されており、色素
溶液への混入はないか、あってもわずかであり、色素の
溶媒としては使用されていない。
【００１３】また、電気泳動には、トリス−グリシン、
トリス−ホウ酸、バルビタール、トリス−酢酸など種々
の緩衝液が用いられるが、これらは、分析対象成分の荷
電状態などを調製して分離を向上させるために選択され
るもので、色素の溶媒としては使用されていない。
トリス−ホウ酸、バルビタール、トリス−酢酸など種々
の緩衝液が用いられるが、これらは、分析対象成分の荷
電状態などを調製して分離を向上させるために選択され
るもので、色素の溶媒としては使用されていない。
【００１４】本発明に用いるカルボン酸は、単独でも２
種以上を混合して用いてもよく、色素溶液中のカルボン
酸の濃度は０．０１〜９８重量％が好ましく、特に０．
１〜９５重量％が好ましい。
種以上を混合して用いてもよく、色素溶液中のカルボン
酸の濃度は０．０１〜９８重量％が好ましく、特に０．
１〜９５重量％が好ましい。
【００１５】本発明で用いる脂溶性色素の溶媒には、カ
ルボン酸の他、必要に応じて水溶性有機溶媒を含有させ
てもよい。水溶性有機溶媒としては、例えばメタノー
ル、エタノール等の低級アルコール類やエチレングリコ
ールなどが挙げられる。これらの有機溶媒は単独で又は
２種以上を組合わせて用いることができる。これら水溶
性有機溶媒の色素溶液中の濃度は、ポリアクリルアミド
ゲルを染色する際のゲルの白濁及び変形防止、染色液の
可燃性抑制の点から、６０重量％以下が好ましい。
ルボン酸の他、必要に応じて水溶性有機溶媒を含有させ
てもよい。水溶性有機溶媒としては、例えばメタノー
ル、エタノール等の低級アルコール類やエチレングリコ
ールなどが挙げられる。これらの有機溶媒は単独で又は
２種以上を組合わせて用いることができる。これら水溶
性有機溶媒の色素溶液中の濃度は、ポリアクリルアミド
ゲルを染色する際のゲルの白濁及び変形防止、染色液の
可燃性抑制の点から、６０重量％以下が好ましい。
【００１６】本発明で用いる脂溶性色素としては、一般
的にゲルの脂質染色に用いられる、ズダンブラックＢ、
オイルレッド、ファットレッド、リピッドクリムゾンな
どを用いることができる。これら脂溶性色素の色素溶液
中の濃度は、プレ染色の場合は０．２〜２０重量％、後
染色の場合は０．０１〜５重量％の範囲が好ましい。
的にゲルの脂質染色に用いられる、ズダンブラックＢ、
オイルレッド、ファットレッド、リピッドクリムゾンな
どを用いることができる。これら脂溶性色素の色素溶液
中の濃度は、プレ染色の場合は０．２〜２０重量％、後
染色の場合は０．０１〜５重量％の範囲が好ましい。
【００１７】本発明で用いる脂溶性色素の溶媒には、必
要に応じて比重調整剤を含ませることができる。比重調
整剤の例としては、グリセリンやシュークロースなどが
挙げられる。
要に応じて比重調整剤を含ませることができる。比重調
整剤の例としては、グリセリンやシュークロースなどが
挙げられる。
【００１８】上記の如き脂溶性色素の溶媒を調製すれ
ば、脂溶性色素を高濃度で溶解せしめることができる。
ば、脂溶性色素を高濃度で溶解せしめることができる。
【００１９】脂溶性色素溶液の調製は、脂溶性色素を上
記カルボン酸に溶解した後、水もしくは水に上記有機溶
媒や上記比重調整剤を添加した水溶液で希釈するが、上
記カルボン酸水溶液を先に調製し、これに脂溶性色素を
溶解することによって、常温で容易に行うことができ
る。
記カルボン酸に溶解した後、水もしくは水に上記有機溶
媒や上記比重調整剤を添加した水溶液で希釈するが、上
記カルボン酸水溶液を先に調製し、これに脂溶性色素を
溶解することによって、常温で容易に行うことができ
る。
【００２０】本発明の方法による脂質成分の染色は、プ
レ染色法又は後染色法のいずれによっても行うことがで
きる。まず、プレ染色の場合は、上記脂溶性色素溶液と
試料を混合し、１分以上、好ましくは１０分〜一昼夜放
置して脂質成分に色素を吸着させた後、電気泳動を行え
ばよい。また、後染色の場合は、試料を電気泳動した支
持体を１分以上、好ましくは１０分〜一昼夜、上記脂溶
性色素溶液に浸しておけばよい。また、色素溶液を攪拌
又は振とうすることによって、染色に要する時間を短縮
することができる。更に、電気泳動後の支持体を色素溶
液に浸す前に、水もしくは水溶性有機溶媒水溶液で洗浄
することにより、染色中の脂溶性色素の沈殿析出を防止
することができる。また、染色終了後、水もしくは水溶
性有機溶媒水溶液で支持体を洗浄することにより、バッ
クグラウンドを脱色し、染色像のコントラストを向上さ
せることができる。
レ染色法又は後染色法のいずれによっても行うことがで
きる。まず、プレ染色の場合は、上記脂溶性色素溶液と
試料を混合し、１分以上、好ましくは１０分〜一昼夜放
置して脂質成分に色素を吸着させた後、電気泳動を行え
ばよい。また、後染色の場合は、試料を電気泳動した支
持体を１分以上、好ましくは１０分〜一昼夜、上記脂溶
性色素溶液に浸しておけばよい。また、色素溶液を攪拌
又は振とうすることによって、染色に要する時間を短縮
することができる。更に、電気泳動後の支持体を色素溶
液に浸す前に、水もしくは水溶性有機溶媒水溶液で洗浄
することにより、染色中の脂溶性色素の沈殿析出を防止
することができる。また、染色終了後、水もしくは水溶
性有機溶媒水溶液で支持体を洗浄することにより、バッ
クグラウンドを脱色し、染色像のコントラストを向上さ
せることができる。
【００２１】
【発明の効果】本発明方法により、染色を行えば、脂質
成分が良好に染色されるため、電気泳動により分離され
た脂質成分を高感度で検出することができる。また、本
発明方法に用いる色素溶液は、調製が容易であり、かつ
水溶液であるため、引火等の危険も少ない。
成分が良好に染色されるため、電気泳動により分離され
た脂質成分を高感度で検出することができる。また、本
発明方法に用いる色素溶液は、調製が容易であり、かつ
水溶液であるため、引火等の危険も少ない。
【００２２】
【実施例】次に実施例を挙げて本発明を詳細に説明する
が、本発明はこれに限定されるものではない。
が、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２３】実施例１ アガロースゲルのズダンブラッ
クＢによるプレ染色： 次の条件でアガロースゲル電気泳動を行い、脂質染色を
実施した。 １．プレ染色 （１）プレ染色液 ０．５重量％ズダンブラックＢ及び１０％シュークロー
スを含む、２０％酢酸水溶液を調製し、使用前Ｎｏ．２
濾紙で濾過した。色素の析出は見られなかった。 （２）試料 正常ヒト血清原液及びこれを精製水で２、４、８、１
６、３２倍希釈したものを調製した。 （３）プレ染色 試料２容とプレ染色液１容を混合し、室温で３０分間放
置して色素を脂質成分に吸着させた。
クＢによるプレ染色： 次の条件でアガロースゲル電気泳動を行い、脂質染色を
実施した。 １．プレ染色 （１）プレ染色液 ０．５重量％ズダンブラックＢ及び１０％シュークロー
スを含む、２０％酢酸水溶液を調製し、使用前Ｎｏ．２
濾紙で濾過した。色素の析出は見られなかった。 （２）試料 正常ヒト血清原液及びこれを精製水で２、４、８、１
６、３２倍希釈したものを調製した。 （３）プレ染色 試料２容とプレ染色液１容を混合し、室温で３０分間放
置して色素を脂質成分に吸着させた。
【００２４】２．電気泳動 （１）支持体 核酸分析用高純度アガロースゲルを下記泳動用緩衝液に
０．５重量％となるように添加して加熱溶解し、市販ミ
ューピッド２（アドバンス社製）ゲル作製用トレーにゲ
ル厚が２mmとなるように流し込んで冷却固化させた。 （２）泳動用緩衝液 ２mMエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む８９mM
トリス−９８mMホウ酸緩衝液（pH８．３）を調製した。 （３）泳動操作 支持体を市販ミューピッド２（アドバンス社製）電気泳
動槽にセットし、泳動用緩衝液を満たして、サンプルウ
ェルにプレ染色した試料を各々５μＬずつアプライし、
１００Ｖ定電圧で約４５分間電気泳動を行った。
０．５重量％となるように添加して加熱溶解し、市販ミ
ューピッド２（アドバンス社製）ゲル作製用トレーにゲ
ル厚が２mmとなるように流し込んで冷却固化させた。 （２）泳動用緩衝液 ２mMエチレンジアミン四酢酸二ナトリウムを含む８９mM
トリス−９８mMホウ酸緩衝液（pH８．３）を調製した。 （３）泳動操作 支持体を市販ミューピッド２（アドバンス社製）電気泳
動槽にセットし、泳動用緩衝液を満たして、サンプルウ
ェルにプレ染色した試料を各々５μＬずつアプライし、
１００Ｖ定電圧で約４５分間電気泳動を行った。
【００２５】その結果、α画分（ＨＤＬ）、β画分（Ｌ
ＤＬ）、プレβ画分（ＶＬＤＬ）とも８倍希釈までバン
ドを確認することができた。
ＤＬ）、プレβ画分（ＶＬＤＬ）とも８倍希釈までバン
ドを確認することができた。
【００２６】実施例２ ポリアクリルアミドゲルのズダ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 市販されている電気泳動用ポリアクリルアミドグラジェ
ントゲル マルチゲル２／１５（第一化学薬品社製）を
使用した。 （２）試料処理液 ０．０２重量％ブロモフェノールブルー及び３０重量％
グリセロールを含む、０．１２５Ｍトリス−塩酸緩衝液
（pH６．８）を調製した。 （３）試料 正常ヒト血清原液及びこれを精製水で２、４、８、１
６、３２、６４、１２８倍希釈したもの２容と、試料処
理液１容を各々混合したものを調製した。 （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 支持体を電気泳動槽にセットし、泳動用緩衝液を満たし
て、サンプルウェルに試料を各々２０μＬずつアプライ
し、ゲル１枚当たり２０mA定電流で、約４時間電気泳動
を行った。
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 市販されている電気泳動用ポリアクリルアミドグラジェ
ントゲル マルチゲル２／１５（第一化学薬品社製）を
使用した。 （２）試料処理液 ０．０２重量％ブロモフェノールブルー及び３０重量％
グリセロールを含む、０．１２５Ｍトリス−塩酸緩衝液
（pH６．８）を調製した。 （３）試料 正常ヒト血清原液及びこれを精製水で２、４、８、１
６、３２、６４、１２８倍希釈したもの２容と、試料処
理液１容を各々混合したものを調製した。 （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 支持体を電気泳動槽にセットし、泳動用緩衝液を満たし
て、サンプルウェルに試料を各々２０μＬずつアプライ
し、ゲル１枚当たり２０mA定電流で、約４時間電気泳動
を行った。
【００２７】２．染色 （１）洗浄液 １０重量％エチレングリコールを含む４０重量％メタノ
ール水溶液を調製した。 （２）染色液 ０．０１重量％ズダンブラックＢを含む１０重量％酢酸
水溶液を調製し、使用前Ｎｏ．２濾紙で濾過した。色素
の析出は見られなかった。 （３）脱色液 １０重量％エチレングリコールを含む４０重量％メタノ
ール水溶液を調製した。 （４）染色操作 電気泳動を終了した支持体を、洗浄液に浸し３０分間振
とう洗浄した後、染色液に移して一夜振とう染色し、そ
の後脱色液に移して約１時間振とう脱色した。
ール水溶液を調製した。 （２）染色液 ０．０１重量％ズダンブラックＢを含む１０重量％酢酸
水溶液を調製し、使用前Ｎｏ．２濾紙で濾過した。色素
の析出は見られなかった。 （３）脱色液 １０重量％エチレングリコールを含む４０重量％メタノ
ール水溶液を調製した。 （４）染色操作 電気泳動を終了した支持体を、洗浄液に浸し３０分間振
とう洗浄した後、染色液に移して一夜振とう染色し、そ
の後脱色液に移して約１時間振とう脱色した。
【００２８】その結果、ＶＬＤＬ画分は１６倍希釈ま
で、ＬＤＬ画分は６４倍希釈まで、ＨＤＬ画分は８倍希
釈までバンドを明瞭に確認することができた。
で、ＬＤＬ画分は６４倍希釈まで、ＨＤＬ画分は８倍希
釈までバンドを明瞭に確認することができた。
【００２９】実施例３ ポリアクリルアミドゲルのズダ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
【００３０】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 ０．０１重量％ズダンブラックＢを含む１０重量％プロ
ピオン酸水溶液を調製し、使用前Ｎｏ．２濾紙で濾過し
た。色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
ピオン酸水溶液を調製し、使用前Ｎｏ．２濾紙で濾過し
た。色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
【００３１】その結果、ＶＬＤＬ画分は８倍希釈まで、
ＬＤＬ画分は３２倍希釈まで、ＨＤＬ画分は４倍希釈ま
でバンドを明瞭に確認することができた。
ＬＤＬ画分は３２倍希釈まで、ＨＤＬ画分は４倍希釈ま
でバンドを明瞭に確認することができた。
【００３２】実施例４ ポリアクリルアミドゲルのズダ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
【００３３】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 ０．０１重量％ズダンブラックＢ及び５重量％酢酸を含
む５重量％プロピオン酸水溶液を調製し、使用前にＮ
ｏ．２濾紙で濾過した。色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
む５重量％プロピオン酸水溶液を調製し、使用前にＮ
ｏ．２濾紙で濾過した。色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
【００３４】その結果、ＶＬＤＬ画分は１６倍希釈ま
で、ＬＤＬ画分は３２倍希釈まで、ＨＤＬ画分は８倍希
釈までバンドを明瞭に確認することができた。
で、ＬＤＬ画分は３２倍希釈まで、ＨＤＬ画分は８倍希
釈までバンドを明瞭に確認することができた。
【００３５】実施例５ ポリアクリルアミドゲルのズダ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
【００３６】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 ０．０１重量％ズダンブラックＢ、４０重量％メタノー
ル及び１０重量％エチレングリコールを含む１０重量％
酢酸水溶液を調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過し
た。色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
ル及び１０重量％エチレングリコールを含む１０重量％
酢酸水溶液を調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過し
た。色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
【００３７】その結果、ＶＬＤＬ画分は１６倍希釈ま
で、ＬＤＬ画分は３２倍希釈まで、ＨＤＬ画分は１６倍
希釈までバンドを明瞭に確認することができた。
で、ＬＤＬ画分は３２倍希釈まで、ＨＤＬ画分は１６倍
希釈までバンドを明瞭に確認することができた。
【００３８】実施例６ アガロースゲルのファットレッ
ド７Ｂによる後染色： 次の条件でアガロースゲル電気泳動を行い、脂質染色を
実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例１と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 正常ヒト血清原液及びこれを精製水で２、４、８、１
６、３２倍希釈したもの２容と、試料処理液１容を各々
混合したものを調製した。 （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 支持体を市販ミューピッド２（アドバンス社製）電気泳
動槽にセットし、泳動用緩衝液を満たして、サンプルウ
ェルに試料を各々５μＬずつアプライし、１００Ｖ定電
圧で約４５分間電気泳動を行った。
ド７Ｂによる後染色： 次の条件でアガロースゲル電気泳動を行い、脂質染色を
実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例１と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 正常ヒト血清原液及びこれを精製水で２、４、８、１
６、３２倍希釈したもの２容と、試料処理液１容を各々
混合したものを調製した。 （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 支持体を市販ミューピッド２（アドバンス社製）電気泳
動槽にセットし、泳動用緩衝液を満たして、サンプルウ
ェルに試料を各々５μＬずつアプライし、１００Ｖ定電
圧で約４５分間電気泳動を行った。
【００３９】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 ０．０５重量％ファットレッド７Ｂを含む７０重量％酢
酸水溶液を調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。
色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 電気泳動を終了した支持体を、洗浄液に浸し３０分間振
とう洗浄した後、染色液に移して３０分間振とう染色
し、その後脱色液に移して約１時間振とう脱色した。
酸水溶液を調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。
色素の析出は見られなかった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 電気泳動を終了した支持体を、洗浄液に浸し３０分間振
とう洗浄した後、染色液に移して３０分間振とう染色
し、その後脱色液に移して約１時間振とう脱色した。
【００４０】その結果、α画分（ＨＤＬ）及びβ画分
（ＬＤＬ）は３２倍希釈まで、プレβ画分（ＶＬＤＬ）
は４倍希釈までバンドを確認することができた。
（ＬＤＬ）は３２倍希釈まで、プレβ画分（ＶＬＤＬ）
は４倍希釈までバンドを確認することができた。
【００４１】実施例７ ポリアクリルアミドゲルのファ
ットレッド７Ｂによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
ットレッド７Ｂによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
【００４２】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 実施例６と同じ （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
【００４３】その結果、ＶＬＤＬ画分は４倍希釈まで、
ＬＤＬ画分は１６倍希釈まで、ＨＤＬ画分は８倍希釈ま
でバンドを確認することができた。
ＬＤＬ画分は１６倍希釈まで、ＨＤＬ画分は８倍希釈ま
でバンドを確認することができた。
【００４４】比較例１ アガロースゲルのズダンブラッ
クＢによるプレ染色： 次の条件でアガロースゲル電気泳動を行い、脂質染色を
実施した。 １．プレ染色 （１）プレ染色液 ０．５重量％ズダンブラックＢのエチレングリコール溶
液を調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。濾紙上
には、溶解しないズダンブラックが残存していた。濾液
中のズダンブラックの濃度はおよそ０．０５重量％であ
った。 （２）試料 実施例１と同じ （３）プレ染色 実施例１と同じ
クＢによるプレ染色： 次の条件でアガロースゲル電気泳動を行い、脂質染色を
実施した。 １．プレ染色 （１）プレ染色液 ０．５重量％ズダンブラックＢのエチレングリコール溶
液を調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。濾紙上
には、溶解しないズダンブラックが残存していた。濾液
中のズダンブラックの濃度はおよそ０．０５重量％であ
った。 （２）試料 実施例１と同じ （３）プレ染色 実施例１と同じ
【００４５】２．電気泳動 （１）支持体 実施例１と同じ （２）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （３）泳動操作 実施例１と同じ
【００４６】その結果、α画分（ＨＤＬ）は４倍希釈ま
で、β画分（ＬＤＬ）は８倍希釈まで、プレβ画分（Ｖ
ＬＤＬ）は原液でバンドを確認することができた。しか
し、いずれの画分のバンドも実施例１に比べて着色が薄
く、特にα画分は不明瞭であった。
で、β画分（ＬＤＬ）は８倍希釈まで、プレβ画分（Ｖ
ＬＤＬ）は原液でバンドを確認することができた。しか
し、いずれの画分のバンドも実施例１に比べて着色が薄
く、特にα画分は不明瞭であった。
【００４７】比較例２ ポリアクリルアミドゲルのズダ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
ンブラックＢによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
【００４８】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 ０．０１重量％ズダンブラックＢ及び１０重量％エチレ
ングリコールを含む４０重量％メタノール水溶液を調製
し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。濾紙上にはズダ
ンブラックＢが残り、濾液中のズダンブラックＢの濃度
はおよび０．００２重量％であった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
ングリコールを含む４０重量％メタノール水溶液を調製
し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。濾紙上にはズダ
ンブラックＢが残り、濾液中のズダンブラックＢの濃度
はおよび０．００２重量％であった。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
【００４９】その結果、ＶＬＤＬ画分は２倍希釈、ＬＤ
Ｌ画分は３２倍希釈、ＨＤＬ画分は８倍希釈までバンド
を確認することができたが、バンドの着色は実施例２〜
５に比べて薄く明瞭さに欠けていた。
Ｌ画分は３２倍希釈、ＨＤＬ画分は８倍希釈までバンド
を確認することができたが、バンドの着色は実施例２〜
５に比べて薄く明瞭さに欠けていた。
【００５０】比較例３ ポリアクリルアミドゲルのファ
ットレッド７Ｂによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
ットレッド７Ｂによる後染色： 次の条件でポリアクリルアミドゲル電気泳動を行い、脂
質染色を実施した。 １．電気泳動 （１）支持体 実施例２と同じ （２）試料処理液 実施例２と同じ （３）試料 実施例２と同じ （４）泳動用緩衝液 実施例１と同じ （５）泳動操作 実施例２と同じ
【００５１】２．染色 （１）洗浄液 実施例２と同じ （２）染色液 ０．０５重量％ファットレッド７Ｂのメタノール溶液を
調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。その結果、
濾紙上にはファットレッド７Ｂが残り、濾液中のファッ
トレッド７Ｂの濃度はおよそ０．００５重量％であっ
た。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
調製し、使用前にＮｏ．２濾紙で濾過した。その結果、
濾紙上にはファットレッド７Ｂが残り、濾液中のファッ
トレッド７Ｂの濃度はおよそ０．００５重量％であっ
た。 （３）脱色液 実施例２と同じ （４）染色操作 実施例２と同じ
【００５２】その結果、ＬＤＬ画分は３２倍希釈までバ
ンドを確認することができたが、ＶＬＤＬ及びＨＤＬ画
分はほとんど確認できなかった。また、染色中にゲルは
全面白濁し、ウェル周辺部が変形した。
ンドを確認することができたが、ＶＬＤＬ及びＨＤＬ画
分はほとんど確認できなかった。また、染色中にゲルは
全面白濁し、ウェル周辺部が変形した。
Claims (1)
- 【請求項１】 電気泳動前又は後に検体中の脂質成分を
脂溶性色素で染色する方法において、脂溶性色素の溶媒
にカルボン酸水溶液を使用することを特徴とする脂質染
色方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9202823A JPH1144673A (ja) | 1997-07-29 | 1997-07-29 | 脂質染色方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9202823A JPH1144673A (ja) | 1997-07-29 | 1997-07-29 | 脂質染色方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH1144673A true JPH1144673A (ja) | 1999-02-16 |
Family
ID=16463791
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9202823A Pending JPH1144673A (ja) | 1997-07-29 | 1997-07-29 | 脂質染色方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH1144673A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002131312A (ja) * | 2000-07-21 | 2002-05-09 | Novel Science Internatl Gmbh | 人体又は動物体の試料の分析による特徴の検出のための方法及び装置 |
-
1997
- 1997-07-29 JP JP9202823A patent/JPH1144673A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002131312A (ja) * | 2000-07-21 | 2002-05-09 | Novel Science Internatl Gmbh | 人体又は動物体の試料の分析による特徴の検出のための方法及び装置 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20040413 |
|
| RD02 | Notification of acceptance of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7422 Effective date: 20040413 |
|
| A977 | Report on retrieval |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971007 Effective date: 20060301 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20060411 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20060801 |