JPH11500149A

JPH11500149A - プロテインキナーゼｃインヒビター

Info

Publication number: JPH11500149A
Application number: JP9519836A
Authority: JP
Inventors: エンジェル，ゲイリー・エル; ファリッド，ナギー・エイ; フォール，マーガレット・エム; ジローセク，マイケル・アール; リチャードソン，ロリ・エイ; ウィネロスキー，レナード・エル・ジュニア
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Eli Lilly and Co
Priority date: 1995-11-20
Filing date: 1996-11-18
Publication date: 1999-01-06
Anticipated expiration: 2016-11-18
Also published as: NO310196B1; HUP9903377A2; YU49315B; CA2237221A1; EG23871A; ATE172199T1; HUP9903377A3; US6015807A; MY118068A; IL124417A; CZ150298A3; CY2103B1; AU1054897A; NO982182D0; ES2122764T3; SI0776895T1; CN1093759C; DE69600784T2; AR004336A1; BR9611724A

Abstract

(57)【要約】本発明は、式（Ｉａ）：

Description

【発明の詳細な説明】プロテインキナーゼＣインヒビタープロテインキナーゼＣ（ＰＫＣ）はセリン／トレオニンキナーゼとして機能する密接に関連した酵素のファミリーからなる。プロテインキナーゼＣは、細胞− 細胞シグナリング、遺伝子発現、および細胞の分化と増殖の調節に重要な役割を演じる。現在、最新で少なくとも１０種類の、組織分布、酵素特異性および制御が異なるＰＫＣのアイソザイムが知られている(Nishizuka Y.、Annu.Rev.Bioche m.58:31-44(1989); Nishizuka Y.、Science 258:607-614(1992))。プロテインキナーゼＣアイソザイムは長さ５９２−７３７アミノ酸の範囲の一本鎖ポリペプチドである。該アイソザイムはリンカーペプチドによって連結した触媒ドメインと調節ドメインを含む。該調節および触媒ドメインはさらに定常領域と可変領域に小さく分けることができる。プロテインキナーゼＣの触媒ドメインは、他のプロテインキナーゼにみられるものと非常に似ているが、調節ドメインはＰＫＣアイソザイムに独特である。ＰＫＣアイソザイムはグループ間のアミノ酸レベルで４０〜８０％のホモロジーを示す。しかし、異なる種間の単一アイソザイムのホモロジーは一般に９７％より大きい。プロテインキナーゼＣは、ホスホリパーゼ活性に応じて解放されるジアシルグリセロールのようなある膜脂質、膜リン脂質およびカルシウムを含む多くの因子によってアロステリックに調節される膜関連酵素である(Bell,R.M.およびBurns, D.J.、J.Biol.Chem.266:4661-4664(1991)、Nishizuka,Y.、Science 258:607-614 (1992))。プロテインキナーゼＣアイソザイム、α、β−１、β−２およびγは、完全に活性化するために膜リン脂質、カルシウムおよびジアシルグリセロール／ホルボールエステルを必要とする。ＰＫＣのδ、ε、ηおよびθ型は、その活性化方法においてカルシウム非依存性である。ＰＫＣのζおよびλ型はカルシウムおよびジアシルグリセロールのいずれにも非依存性であり、その活性化には膜リン脂質しか必要としないと考えられている。プロテインキナーゼＣアイソザイムの１または２種のみが該疾病の状態に関与しているかも知れない。例えば、糖尿病にみられる血糖レベルの上昇は、血管組織のβ−２アイソザイムのアイソザイム特異的上昇をもたらす(Inoguchiら、Pro c.Natl.Acad.Sci.USA 89:11059-11065(1992))。ヒト血小板中のβアイソザイムの糖尿病に関連する上昇は、そのアゴニストに対する反応の変化と関連している (Bastyr III,E.J.およびLu,J.、Diabetes 42:(Suppl.1)97A(1993))。ヒトビタミンＤレセプターは、プロテインキナーゼＣβにより選択的にリン酸化されることが示されている。このリン酸化は、該レセプターの機能の変化と関連している(H siehら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:9315-9319(1991)，Hsiehら、J.Biol.Chem. 268:15118-15126(1993))。さらに、最近の研究により、β−２アイソザイムは赤白血病細胞の増殖に関与するが、αアイソザイムは同細胞の巨核球への分化に関与することが示された(Murrayら、J.Biol.Chem.268:15847-15853(1993))。プロテインキナーゼＣアイソザイムのユビキチン的性質および生理学における重要な役割は、高度に選択的なＰＫＣインヒビターを産生するための動機をもたらす。その証拠が、あるアイソザイムの、病気の状態との関連を示すとすれば、他のＰＫＣアイソザイムおよび他のプロテインキナーゼに比べて１または２種のプロテインキナーゼＣアイソザイムに選択的な阻害化合物が優れた治療物質であると仮定することは妥当である。そのような化合物は、その特異性によってより大きい効能とより低い毒性を示す。Ｎ，Ｎ’−架橋ビスインドリルマレイミドのクラスは、Heathら、EP0657458(U .S.S.N.08/413,735)（ＥＰ0657458として1995年６月14日に公開）に開示されている。この一連のＮ，Ｎ’−架橋化合物の好ましいものには、式Ｉ：で示される化合物が含まれる。本発明は、式Ｉの化合物の新規で有力な塩型を提供する。最も予期しないことには、本発明の塩型は溶解性を改善し、患者に対する生体利用能（バイオアベイラビリティ）を劇的に改善した。さらに、該塩は容易に製造され、結晶型として精製される。すなわち、本発明の塩はより医薬的に優れており、かなり改良された医薬物質である。本発明の塩は糖尿病およびその合併症、虚血、炎症、中枢神経系障害、循環器病、皮膚病および癌に関連する病状を治療（処置）するのに有用である。本発明は、式Ｉの化合物のメシラート塩を提供する。すなわち、本発明は、式Ｉａ：で示される化合物およびその溶媒和物を提供する。さらに、本発明のある局面は、プロテインキナーゼＣの阻害方法であって、そのような治療を必要とする哺乳動物に対して式Ｉａの化合物の医薬的有効量を投与することを含む方法である。さらに、本発明は、虚血、炎症、中枢神経障害、循環器病、皮膚病および癌のようなプロテインキナーゼＣが病状に役割を持つことがわかっている異常を治療する方法であって、式Ｉａの化合物の医薬的有効量を、治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。本発明は、特に医薬として有用であり、特に微小血管性糖尿病合併症、特に糖尿病性網膜症、腎症およびニューロパシーの治療に有用である。したがって、さらに本発明は糖尿病およびその合併症を治療する方法であって、式Ｉａの化合物の医薬的有効量を、そのような治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む方法を提供する。本発明の最終局面は、式Ｉａの化合物を、１またはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤、担体または希釈剤と共に含む医薬製剤である。本明細書に開示し、クレームしている本明細書の目的に関して、以下の用語と略語は以下のごとく定義される。本明細書で用いている用語「医薬的有効量」は、哺乳動物におけるＰＫＣ活性を阻害することができる化合物の量を表す。本発明に従って投与される化合物の特定用量は、もちろん、投与される化合物、投与経路、治療される特定の状態および同様な考慮すべき事柄を含むその症例を取り巻く特定の環境によって決定されよう。該化合物は経口、直腸、経皮、皮下、局所、静脈内、筋肉内または鼻内経路を含む種々の経路により投与することができる。好ましくは、該化合物は経口的に投与される。すべての適応において、典型的な１日用量は本発明の活性化合物を約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ含むであろう。好ましい１日用量は、約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１ｍｇ／ｋｇ以下、最も好ましくは約０．０５〜約０．５ｍｇ／ｋｇであろう。本明細書で使用している用語「治療」は、該疾患、病状または障害と戦う目的で患者を維持および管理することを表し、症状または合併症の発現を予防するか、症状または合併症を軽減するか、または該疾患、病状または障害を排除するために本発明の化合物を投与することが含まれる。本明細書で用いている用語「総関連物質」は、最終産物中の不純物の相対的量を表す。不純物には、制限されるものではないが、最終産物中の望ましくない反応の副産物または上流反応中間体が含まれる。総関連物質は純度の尺度である。上記のように、本発明はプロテインキナーゼＣを選択的に阻害する式Ｉａ：で示される化合物およびその溶媒和物を提供する。式Ｉａの化合物は、水（水和物）、メタノール、エタノール、ジメチルホルムアミド、酢酸エチルなどを用いるような溶媒和物として存在し得る。そのような水和物と溶媒和物の混合物も製造することができる。そのような水和物および／または溶媒和物の供給源は、結晶化の溶媒由来であるか、製造または結晶化の溶媒に固有であるかまたはそのような溶媒に付随的であり得る。そのような水和物または溶媒和物は本発明の範囲内である。好ましくは、式Ｉａの化合物は１水和物または３水和物として製造される。式Ｉａの化合物の種々の立体異性体型が存在してよいと認識される。好ましい本発明の化合物は式Ｉｂおよび式Ｉｃ：の化合物である。しかし、ラセメートおよび個々のエナンチオマーおよびその混合物は本発明一部を形成する。式Ｉの遊離塩基の製造方法は、Heathら、EP0657458（EP0657458として1995年６月14日に公開）に記載されている（この内容は本明細書の一部を構成する）。好ましくは、該化合物は以下のごとく製造される：Ｒ₁はＯメシルまたはＢｒである。Ｐ₁はヒドロキシ保護基、好ましくはｔｅｒｔ −ブチルジフェニルシリルオキシ(TBDPS)、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルオキシ(TBDMS)、トリフェニルメチル（トリチル）、モノ−またはジ−メトキシトリチル、またはアルキルもしくはアリールエステルである。Ｌは、クロロ、ブロモ、ヨード、メシル、トシルなどのような適した脱離基である。好ましくは、ＬはＯ−メシルまたはＢｒである。化合物ＩＶを形成するための反応は、Ｎ−置換インドールを製造するための既知の方法のいずれかにより達成される。該反応には、通常、試薬IIおよびIIIのほぼ等モル量が必要であるが、他の比、特に、アルキル化試薬が過剰であるものが機能的に作用する。該反応は、アルカリ金属塩を用いて極性非プロトン性溶媒中でか、または当該分野において認められている他のそのようなアルキル化条件で最も良好に実施される。反応条件には以下のものが含まれる。テトラヒドロフランまたはジメチルホルムアミド中のヘキサメチルジシルアジドカリウム、ジメチルホルムアミド中のナトリウム水素化物。好ましくは、該反応は、アセトニトリルまたはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中の炭酸セシウムを用い、緩徐な逆添加条件(slow reverse addition)下で実施される。反応温度は好ましくはほぼ周囲温度〜反応混合物のほぼ還流温度である。化合物IVは、ヒドロキシを保護するための当該分野で認められた技術により化合物Ｖに変換される。化合物Ｖは、窒素下でＴＨＦまたは塩化メチレン中のメタンスルホン酸無水物およびピリジンと化合物Ｖを反応させるか、または塩化メチレン、ＴＨＦ、アセトニトリルまたは他の適切な溶媒中のピリミジン、および亜リン酸トリフェニルまたはトリフェニルホスフィンの存在下の臭素とアルコールを反応させることにより化合物ＶＩに好都合に変換される。化合物ＶＩは、ＤＭＦ、ＴＨＦ／水、ジメチルアセタミドのような極性溶媒中、または当該分野で認められている他の条件で、化合物ＶＩをジメチルアミンと反応させることにより化合物Ｉのジメチルアミンに変換される。本発明のメシラート塩は式Ｉの化合物を、非反応性有機溶媒、好ましくは有機／水混合物、最も好ましくは水−アセトン中のメタンスルホン酸と反応させることにより製造される。メタノール、アセトン、酢酸エチル、およびその混合物のような他の溶媒が機能的に作用しうる。水に対する溶媒の比は重要ではなく、一般的には試薬の溶解性により決定される。好ましい水に対する溶媒の比は、一般的には、容量で溶媒対水０．１：１〜１００：１である。好ましくは、該比は、１：１〜２０：１、最も好ましくは５：１〜１０：１である。最適比は選ばれる溶媒に依存し、溶媒対水比９：１でアセトンが好ましい。該反応には、通常、ほぼ等モル量の２種類の試薬が必要であるが、他の比、特にメタンスルホン酸が過剰である比が機能的に作用する。反応に関して、メタンスルホン酸の添加速度は重要ではなく、急速に加えても（＜５分）、６時間またはそれ以上にわたり徐々に加えてもよい。反応は０℃〜還流温度の範囲の温度で行われる。Ｘ線粉末回折による測定により塩の形成が完結するまで反応物を撹拌し、５分から１２時間かかり得る。本発明の塩が好ましく、結晶型として容易に製造される。該塩の３水和物型を、相対湿度２０−６０％に曝すか、または乾燥により容易に１水和物に変換することができよう。塩は実質的に結晶であり、明確な融点、複屈折およびＸ線回折パターンを示す。一般的に、結晶は１０％以下が非晶質固形物であり、好ましくは非晶質固形物が５％以下、最も好ましくは１％以下である。メシラート塩は、当該分野で認められた濾過または他の分離技術により、５０％〜１００％の範囲の収率で反応混合物から直接単離される。所望により、さらに当該分野で知られた再結晶および他の精製法を用いて塩の精製を行ってよい。以下の実施例および製造例は、単に、本発明をさらに例示するためだけに示される。本発明の範囲は以下の実施例のみからなると解釈すべきではない。以下の実施例および製造例において、融点、核磁気共鳴スペクトル、マススペクトル、シリカゲル高圧液体クロマトグラフィー、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、木炭上パラジウム、テトラヒドロフラン、および酢酸エチルは、それぞれ、M.Pt.、N MR、MS、HPLC、DMF、Pd/C、THFおよびEtOAcと略す。用語「NMR」および「MS」は、スペクトルが所望の構造と一致したことを示す。製造例１ 3-(2-[(メチルスルホニル)オキシ]エトキシ]-4-(トリフェニルメトキシ)-1-ブタノールメタンスルホネート塩化トリチル（175.2ｇ、0.616mol）をN₂下で、CH₂Cl₂500mLに溶解した。トリエチルアミン（71.9ｇ、100mL、0.710mol）を加え、次いでR,S-グリシドール(50 .0ｇ、0.648mol)を加え、反応溶液を４時間、穏和な還流温度（42℃）に加熱した。反応物を室温に冷却し、塩化アンモニウムの飽和水溶液250mLで２回、次いで塩水250mLで抽出した。水性層をCH₂Cl₂100mLで逆抽出し、有機層を乾燥し(MgS O₄)、減圧下で蒸発させて油状のトリチル−グリシドールを得、エタノールから再結晶して固形のトリチル−グリシドール104.4ｇ（54％）を得た。ビニル臭化マグネシウムの１Ｍ THF溶液（50mL、50mmol、2.0当量）をN₂下で- 20℃に冷却し、ヨウ化銅の触媒量を加えた（0.24ｇ、1.26mmol、0.05当量）。得られる混合物を-20℃で５分間撹拌し、次いで乾燥ＴＨＦ 40mL中のトリチル−グリシドール（7.91ｇ、25.0mmol）の溶液を-20℃で15分間かけて滴加した。反応混合物を-20℃で３時間撹拌し、次いで室温に温め、15分間撹拌した。反応混合物を-30℃に冷却して反応を止め、塩化アンモニウムの飽和水溶液125mLを徐々に加えた。得られる混合物を酢酸エチル200mLで抽出した。次に、有機層を、脱イオン水125mL中のエチレンジアミン４酢酸、２ナトリウム塩２水和物(EDTA)0.93 ｇ（2.50mmol、0.1当量）の水性溶液で抽出し、あらゆる金属を除去した。水性層を酢酸エチル50mLで逆抽出し、混合有機層を塩水100mLで洗浄し、乾燥し（MgS O₄）、減圧下で蒸発させて油状物を得、これを３／１ヘキサン／酢酸エチル1.2L を用いてシリカ（76ｇ）で濾過した。濾液を減圧下で蒸発させて、淡黄色油状物として1-0-(トリフェニルメチル)-2-ヒドロキシ-ペンタノール9.07ｇ（100％）を得た。鉱物油中の水素化ナトリウムの60％懸濁液（6.13ｇ、0.153mol、1.5当量）を室温で加えた乾燥ＴＨＦ 175mLに懸濁させた。得られた混合物を室温で1.5時間撹拌し、次いで新たに蒸留した臭化アリル17.7mL（0.204mmol、2.0当量）をシリンジで加えた。反応物を１時間45℃に加熱した。反応はＴＬＣまたはＨＰＬＣによりモニターすることができる。反応混合物を０℃に冷却し、塩化アンモニウムの水性飽和溶液400mLを徐々に加えて過剰の塩基を減衰させた。得られる混合物を酢酸エチル800mLで抽出し、有機層を水500mLで洗浄した。水性層を酢酸エチル 100mLで逆抽出し、混合有機層を塩水200mLで洗浄し、乾燥し(MgSO₄)、減圧下で蒸発させて、黄色油状の1,1',1''-[[[2-(2-プロペニルオキシ)-4-ペンテニル]オキシ]メチリジン]トリス[ベンゼン]41.5ｇ（＞100％）を得た。 1,1',1''-[[[2-(2-プロペニルオキシ)-4-ペンテニル]オキシ]メチリジン]トリス[ベンゼン]（39.3ｇ、0.102mol）を無水メチルアルコール390mLおよびCH₂Cl₂6 0mLの溶液に溶解し、粘性反応溶液をN₂でバブリングしながら、-50℃〜-40℃に冷却した。次に、反応物の色が淡青色になるまで、-50℃〜-40℃で80分間反応混合物をオゾンでバブリングした。得られた反応混合物をN₂下０℃に温め、次いでエタノール85mL／水85mL中の水素化ホウ素ナトリウム（23.15ｇ、0.612mol、６当量）の溶液を徐々に加え、反応温度を10℃以下に保ちながら、反応を止めた。反応物を氷浴中で30分間撹拌し、次いで室温に温め一夜撹拌した。温めながら温度を31℃に上昇させた。反応混合物を塩化アンモニウムの飽和水溶液400mLで希釈し、酢酸エチル800mLで抽出した。有機層を水400mLで洗浄し、水性層を酢酸エチル150mLで逆抽出した。混合有機層を塩水200mLで洗浄し、乾燥し(MgSO₄)、減圧下で蒸発させて濁った油状物を得た。この油状物を２／１ヘキサン／酢酸エチルから再結晶し、３回の再結晶から合計3-(2-ヒドロキシエトキシ)-4-(トリフェニルメトキシ)-1-ブタノール28.9ｇ（72％）を得た。 3-(2-ヒドロキシエトキシ)-4-(トリフェニルメトキシ)-1-ブタノール（14.0ｇ、35.7mmol）をCH₂Cl₂140mLに溶解し、N₂下で０℃に冷却し、トリエチルアミン（10.8ｇ、14.9mL、0.107mol、3.0当量）を加えた。次に、塩化メタンスルホニル（11.0ｇ、7.46mL、96.4mmol、2.7当量）を＜５℃で滴加した。得られた反応混合物をさらにCH₂Cl₂（300mL）で希釈し、水200mLおよび塩化アンモニウムの飽和水性溶液200mLで洗浄した。水性層をCH₂Cl₂50mLで逆抽出し、混合有機層を塩水100mLで洗浄し、乾燥し（MgSO₄）、減圧下で蒸発させて、白色固形物として3- (2-[(メチルスルホニル)オキシ]エトキシ]-4-(トリフェニルメトキシ)-1-ブタノールメタンスルホネート18.4ｇ（94％）を得た。製造例２ (Ｓ)−トリチルグリシドール塩化トリチル（2866ｇ、10.3mol）をＮ₂下でCH₂Cl₂７Ｌに溶解した。トリエチルアミン（1189ｇ、1638mL、11.8mol）を加え、次いで、リンス剤としてCH₂Cl₂ １Lを用いて(Ｒ)-(＋)-グリシドール（795.0ｇ、10.6mol）を加えた。反応溶液を３〜４時間穏和な還流温度（42℃）に加熱した。反応物を室温に冷却し、次いで塩水３Ｌを加えた。有機層を乾燥し（600ｇ Na₂SO₄）、減圧下で蒸発させて油状の標記化合物を得、これをエタノールから再結晶して固形の標記化合物2354ｇ（70％）を得た。製造例３ (Ｓ)-3-[2-[(メチルスルホニル)オキシ]エトキシ]-4-(トリフェニルメトキシ)-1 -ブタノールメタンスルホネートビニル臭化マグネシウム（5.76L、5.76mol、1.96当量）の１ＭＴＨＦ溶液をＮ₂下で-20℃に冷却し、触媒量のヨウ化銅を加えた（28.2ｇ、0.148mol、0.05当量）。得られた混合溶液を-20℃で５分間撹拌し、次いで乾燥ＴＨＦ 3.2L中の( Ｓ)-トリチルーグリシドール（929.0ｇ、2.94mol）の溶液を-20℃で1.5時間かけて滴加した。反応混合物を-20℃で１時間撹拌した。反応混合物を-30℃に冷却して反応を止め、塩化アンモニウムの飽和水溶液５Ｌを徐々に加えた。次に、有機層をエチレンジアミン四酢酸、２ナトリウム塩２水和物（ＥＤＴＡ）の10％wt. ／容量溶液１Ｌで２回抽出してあらゆる金属を除去した。有機層を塩水２Ｌで洗浄し、乾燥し（MgSO₄）、減圧下で蒸発させて油状の(Ｓ)-1-0-トリフェニルメチル -4-ヒドロキシペンタノール1061ｇ（96％）を得た。鉱物油中の60％水素化ナトリウム懸濁液（268.9ｇ、6.72mol、1.5当量）を、Ｎ₂下で乾燥ＴＨＦ 2.8Lに懸濁させ、乾燥ＴＨＦ 5.6L中の(Ｓ)-1-0-トリフェニルメチル-4-ヒドロキシペンタノール(1543ｇ、4.48mol)の溶液を室温で加えた。得られる混合物を室温で1.5時間撹拌し、次いで新たに蒸留した臭化アリル770mL （8.89mol、2.0当量）を20分間かけて加えた。反応物を１−２時間45℃に加熱した。反応混合物を15℃〜20℃に冷却し、塩化アンモニウムの飽和水溶液２Ｌを徐々に加え、過剰の塩基を減衰させた。得られた混合物を酢酸エチル１Ｌおよび水１Ｌで希釈し、有機層を単離した。水性層を酢酸エチル500mLで逆抽出し、混合有機層を乾燥し(MgSO₄)、減圧下で蒸発させて黄色油状の(Ｓ)-1,1',1''-[[[2-(2 -プロペニルオキシ)-4-ペンテニル]オキシ]メチリジン]トリス[ベンゼン]1867ｇ（98％）を得た。 (Ｓ)-1,1',1''-[[[2-(2-プロペニルオキシ)-4-ペンテニル]オキシ]メチリジン ]トリス[ベンゼン]（1281ｇ、3.33mol）を無水メチルアルコール４ＬおよびCH₂C l₂3.6Lの溶液に溶解し、粘性反応溶液をＮ₂でバブリングしながら-50℃〜-40℃ に冷却した。ズダンIII指示薬を反応液に加え、反応物が桃色から淡緑／黄色に変わるまで、-50℃〜-35℃で13時間反応混合物をオゾンでバブリングした。得られる反応混合物をＮ₂下で０℃に温め、次いで、反応温度を30℃以下に保ちながらエタノール2.5Ｌ／水2.5Ｌ中の水素化ホウ素ナトリウム（754ｇ、19.9mol、６当量）の溶液に40分間かけて徐々に加えた。次に、反応物を室温で一夜撹拌した。反応はHPLCによりモニターすることができる。反応混合物を10℃〜15℃に冷却し、＜20℃で塩化アンモニウムの飽和水溶液４Ｌに加えた。次に、減衰させた反応混合物を濾過し、固形物をCH₂Cl₂３Ｌで洗浄した。有機層を単離して塩化アンモニウムの飽和水溶液３Ｌで洗浄し、水性層をCH₂Cl₂１Ｌで逆抽出した。混合有機層を乾燥し（MgSO₄）、減圧下で蒸発させて油状の(Ｓ)-3-(2-ヒドロキシエトキシ)-4-(トリペニルメトキシ)-1-ブタノール1361ｇ（＞100％）を得た。 (Ｓ)-3-(2-ヒドロキシエトキシ)-4-(トリペニルメトキシ)-1-ブタノール（500 ｇ、1.27mol）をCH₂Cl₂4.8Ｌに溶解し、Ｎ₂下で０℃に冷却し、トリエチルアミン（386.4ｇ、532mL、3.81mol、3.0当量）を加えた。次に、塩化メタンスルホニル（396.3ｇ、268mL、3.46mol、2.7当量）を＜５℃で30分間かけて滴加した。得られた反応混合物を０℃〜５℃で１〜２時間撹拌し、HPLCによりモニターした。反応混合物をさらにCH₂Cl₂で希釈し、水２Ｌおよび塩化アンモニウムの飽和水溶液２Ｌで２回洗浄した。水性層をCH₂Cl₂１Ｌで逆抽出し、混合有機層を乾燥し（ MgSO₄）、減圧下で蒸発させて粗固形物を得、これを１／１ヘプタン／酢酸エチルから再結晶し、３回の再結晶から固形の(Ｓ)-3-[2-[(メチルスルホニル)オキシ]エトキシ]-4-(トリフェニルメトキシ)-1-ブタノールメタンスルホネート615 ｇ（88％）を得た。NMR。MS。製造例４ 3-[2-ヨードエトキシ]-4-(トリペニルメトキシ)-1-ヨードブタン試薬グレードのアセトン500mL中の3-(2-[(メチルスルホニル)オキシ]エトキシ ]-4-トリフェニルメトキシ)-1-ブタノールメタンスルホネート(5.0ｇ、9.10mmol )の溶液を、重炭酸ナトリウム（0.0770ｇ、0910mmol、0.1当量）およびヨウ化ナトリウム（34.2ｇ、0.228mol、25当量）で処理した。得られた混合物を、Ｎ₂下、50℃で約16時間撹拌した。この反応はHPLCによりモニターすることができる。減圧下で反応混合物からアセトンを除去し、得られた固形物を酢酸エチル300mL ／水200mL混合物中で抽出した。有機層をさらに水200mLで洗浄し、混合水性層をさらに酢酸エチル100mLで逆抽出した。混合有機層を亜硫酸ナトリウムの10％水溶液200mL（この洗浄により黄色が除去された）、塩水100mLで洗浄し、乾燥し（ MgSO₄）、減圧下で蒸発させて透明油状の3-[2-ヨードエトキシ]-4-(トリペニルメトキシヨードブトン5.45ｇ（98％）を得た。MS。NMR。製造例５ (Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[メタンスルホニルオキシ(メチル)]-4,9:16 ,21-ジメテノ-1H、13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H],[3,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3-ジオン 3,4-(ビス)-(1H-インドール-3-イル)-N-メチルマレミド(10.04ｇ、29.4mmol) および(Ｓ)-3-(2-ヨードエトキシ)-4-(tert-ブチルジフェニルシリルオキシ)-1- ヨードブタン（17.9ｇ、29.4mmol）を混合し、無水ＤＭＦ(80mL)に溶解させた。Ｎ₂下、50℃で無水ＤＭＦ(1.7L)中の炭酸セシウム(38.3ｇ、118mmol)の懸濁液に、シリンジポンプで72時間かけて溶液を加えた。ＤＭＦを減圧下で除去した。残留物をCHCl₃／1N HCl間に分配した。酸性層をクロロホルムと酢酸エチルで逆抽出した。混合有機層を1N HCl（１ｘ）、水（２ｘ）、塩水（２ｘ）で洗浄し、Na₂ SO₄で乾燥させ、還元して紫紅色の固形物を得た。粗反応混合物をさらに精製することなく使用した。粗反応混合物をエタノール（700mL）に懸濁させ、５ＮＫＯＨ（800mL）で処理した。反応温度を80℃に上昇させた。72時間後、エタノールを減圧下で除去し、水性懸濁液を０℃に冷却し、５ＮＨＣｌで酸性化した。紫色の沈殿物を回収し、シリカプラグに通し、酢酸エチルで溶出した。溶出液を濃縮し、紫紅色固形の部分的にシリル化したマレイミド8.7ｇを得、これをさらに精製することなく次の反応に用いた。上記無水物（8.7ｇ、19.7mmol）のＤＭＦ(１Ｌ)溶液に、窒素下、周囲温度で1 ,1,1,3,3,3-ヘキサメチルジシラザン(41.6mL、197mmol)およびメタノール（４mL 、98.5mmol）を加えた。40時間後、反応物を減圧下で濃縮し、２：１(v/v)ＭｅＣＮ／１ＮＨＣｌ溶液（100mL）を加えた。残留物を１時間撹拌した。有機溶媒を除去し、水性懸濁液を酢酸エチルで抽出した。溶媒を除去し、マレイミド8.9 ｇを得、これをさらに精製することなく用いた。窒素下、周囲温度で上記マレイミド（8.9ｇ、20mmol）のCH₂Cl₂（800mL）懸濁液に、ピリジン（4.85mL、60mmol）およびわずかに過剰のメタンスルホン酸無水物（4.21ｇ、24mmol）を加えた。16時間後、反応混合物を0.1N HCl、塩水で洗浄し、有機層を濃縮した。残留物をシリカプラグに通し、CH₂Cl₂中の０−１０％ＭｅＣＮの緩い勾配で溶出した。所望のメシラートを含む溶出液分画を濃縮し、紫紅色固形の標記化合物2.8ｇを得た。２ヨウ化物からの全収率は18％である。MS 。製造例６ (Ｓ)-13-[(ジメチルアミノ)メチル]-10,11,14,15-テトラヒドロ-4,9:16-21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン 2,3-ビス-(1H-インドール-3-イル)-N-メチルマレイミド(114.7ｇ、0.336mol) および(Ｓ)-3-[2-[(メチルスルホニル)オキシ]エトキシ]-4-(トリフェニルメトキシ)-1-ブタノールメタンスルホネート（220.0ｇ、0.401mol、1.2当量）をＤＭＦ 4.3Ｌに溶解させた。次に、この試薬の溶液を、ＤＭＦ７Ｌ中の炭酸セシウム（437.8ｇ、1.34mol、4.0当量）の50℃スラリーに70時間かけて徐々に加えた（約１mL／分で）。70〜72時間後、反応物を冷却して濾過し、ＤＭＦを減圧下で除去して残留物を得、これをCH₂Cl₂4.6Ｌに溶解した。有機層を水性１ＮＨＣｌ 1.15Ｌ、次いで塩水4.6Ｌで抽出した。混合水性層をCH₂Cl₂1.1Ｌで逆抽出した。混合有機層を乾燥し（Na₂SO₄）、濾過した。減圧下でほとんどの溶媒を除去し、得られた溶液を、さらにCH₂Cl₂４−５ガロンを用いてシリカゲル２ｋｇで濾過してベースライン物質を除去した。減圧下で溶媒を除去し、得られた紫色の固形物をアセトニトリル７容量でトリチュレートし（粗(Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-2-メチル-13-[(トリフェニルメトキシ)メチル]-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13 H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2 H)-ジオンの重量を基準にして）、乾燥した後に(Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ -2-メチル-13-[(トリフェニルメトキシ)メチル]-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)- ジオン150.2ｇ(57％)(標準品に対しHPLCにより純度89％)を得た。 (Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-2-メチル-13-[(トリフェニルメトキシ)メチル]-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン（32.7ｇ、46.9mmol）をエタノール1.6 Ｌおよび水性10ＮＫＯＨ 1.6Ｌに懸濁させた。得られた混合物を19時間穏和な還流温度（78℃）に加熱した。還流温度に達したらほとんどの固形物は溶解した。反応溶液を10℃〜15℃に冷却し、水性10ＮＨＣｌ（1.2Ｌ）を＜15℃で徐々に加え、酸性度をｐＨ＝１に調整した。酸性化すると赤色スラリーが生じた。反応混合物をCH₂Cl₂500mLで希釈し、20分間撹拌し、濾過してほとんどの塩を取り出した。塩をさらにCH₂Cl₂（1.5Ｌ）で洗浄し、濾液を水１Ｌで２回抽出した。混合水性層をCH₂Cl₂１Ｌで逆抽出し、有機層を乾燥した(MgSO₄)。減圧下で溶媒を除去し、紫色固形の(Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[(トリフェニルメトキシ) メチル]-4,9:16,21-ジメテノ-13H-ジベンゾ[E,K]フロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3-ジオン36.0ｇ(＞100％)(HPLC面積により純度80％) を得た。 (Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[(トリフェニルメトキシ)メチル]-4,9:16 ,21-ジメテノ-13H-ジベンゾ[E,K]フロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3-ジオン（36.0ｇ、推定46.9mmol）をＮ₂下で乾燥ＤＭＦ 320mLに溶解し、1,1,1,3,3,3-ヘキサメチルジシラザン（99mL、75.7ｇ、0.469mol、10当量）とメタノール（9.5mL、7.51ｇ、0.235mol、５当量）のあらかじめ混合した溶液で処理した。得られた溶液を45℃で７時間加熱した。反応はHPLCでモニターすることができる。減圧下でほとんどのＤＭＦを除去し、得られた残留物を酢酸エチル200mL中で抽出し、水200mL、および水性５％LiCl溶液100mLで２回洗浄した。水性層を酢酸エチル100mLで逆抽出した。混合有機層を塩化アンモニウムの飽和水溶液200mLで洗浄した。混合有機層を乾燥し(MgSO₄)、減圧下で蒸発させて、紫色固形の粗(Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[(トリフェニルメトキシ)メチル]-4,9:16-21-ジメテノ-1H;13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン35.9ｇ（＞100％）を得た。 (Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[(トリフェニルメトキシ)メチル]-4,9:16 ,21-ジメテノ-1H;13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン（34.0、推定46.8mmol）をCH₂Cl₂350mLに溶解し、Ｎ₂下で-25℃に冷却した。反応溶液中に無水ＨＣｌガスを＜０℃で約１−２分間バブリングさせた。得られたスラリーを室温に温め、１時間撹拌した。反応はHP LCによりモニターすることができる。スラリーを濾過し、固形物をCH₂Cl₂200mL で洗浄した。固形物を減圧オーブン中で50℃にて乾燥させ、(Ｓ)-10,11,14, 15-テトラヒドロ-13-(ヒドロキシメチル)-4,9:16-21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ [E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン1 8.9ｇ(90％)を得た(HPLC面積により純度93％)。ＴＨＦ 900mL中の(Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-(ヒドロキシメチル)-4, 9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン(18.2ｇ、41.2mmol)を、ピリジン（9.78ｇ、1 0.0mL、0.124mmol、３当量）およびメタンスルホン酸無水物（14.3ｇ、80.4mmol 、２当量）で処理し、次いでＮ₂下で16時間還流温度（67℃）に加熱した。この反応はHPLCによりモニターすることができる。次に、反応物を冷却し、酢酸エチル600mLで希釈し、１ＮＨＣｌ 300mLで２回、水600mLで１回抽出した。水性層を酢酸エチル300mLで逆抽出し、有機層を乾燥した（MgSO₄）。減圧下で溶媒を除去し、(Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[(メチルスルホニル)オキシ]メチル] -4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン19.0を得、これを熱した（40℃）CH₂Cl₂1 90mL中でトリチュレートし、熱いうちに濾過し、紫色固形の(Ｓ)-10,11,14,15- テトラヒドロ-13-[(メチルスルホニル)オキシ]メチル]-4,9:16,21-ジメテノ-1H, 13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3 (2H)-ジオン17.3ｇ(81％)を得た（HPLC面積により純度96％）。 (Ｓ)-10,11,14,15-テトラヒドロ-13-[(メチルスルホニル)オキシ]メチル]-4,9 :16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン(9.50ｇ、18.3mmol)をＴＨＦ 475mL中に溶解し、ジメチルアミンの40％水性溶液172mL（0.173mol、75当量）を加え、得られた溶液を密封したリアクター（8-10psi.）中で19時間65℃に加熱した。反応物を冷却し、酢酸エチル900mLで希釈し、有機層を、水450mLで２回、塩水200mLで１回抽出した。水性層をさらに酢酸エチル250mLで逆抽出し、有機層を乾燥し（MgS O₄）、減圧下で溶媒を除去し、(Ｓ)-13-[(ジメチルアミノ)メチル]-10,11,14,15 -テトラヒドロ-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,1 3]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン7.82ｇ（91％）を得た。実施例１メシラート塩 (Ｓ)-13-[(ジメチルアミノ)メチル]-10,11,14,15-テトラヒドロ-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン(3.0ｇ、6.4mmol)を試薬グレードのアセトン90mLに懸濁した。メタンスルホン酸（0.62ｇ、１当量）を脱イオン水10mLに溶解し、塩基／アセトンスラリーに加えた。得られた赤橙色スラリーを撹拌し、リンス剤にアセトン25mLを用いて濾過し、乾燥した後にメシラート塩2.92ｇ(81％)を得た。リンスを含むすべての手順は室温で行った。実施例２モノ／塩酸塩 (Ｓ)-13-[(ジメチルアミノ)メチル]-10,11,14,15-テトラヒドロ-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオンの１塩酸塩を、メタノール120mL(１当量)中に塩基（3.0 ｇ、6.4mmol）を懸濁することにより製造した。水性１ＮＨＣｌを加えた。得られる混合物を約16時間撹拌し、リンス剤にメタノール25mLを用いて濾過した。得られた塩を50℃で一夜減圧下で乾燥し、ＨＣｌ塩2.65ｇ（82％）を得た。リンスを含むすべての手順は室温で行った。実施例３−８塩酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、酢酸塩およびリン酸塩塩酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、酢酸塩およびリン酸塩を、当該分野で認められている技術によりメタノール／水溶媒混合物を利用して製造した。各塩を、(Ｓ)-13-[(ジメチルアミノ)メチル]-10,11,14,15-テトラヒドロ-4,9:16,2 1-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオンのメタノール懸濁液に酸の水溶液を加えることにより製造した。最も予測し得ないことには、本発明の塩型では溶解性が改善され、最も重要なことは、患者のバイオアベイラビリティが劇的に改善された。該塩は容易に単一結晶型で製造され、不純物の大きな減少をもたらす。以下の実施例には、本発明の塩の予測できない、優れた特性を証明する比較試験を示す。実施例９収量（収率）、総関連物質および残留溶媒の比較総関連物質は最終産物中の不純物の相対量、すなわち、純度の尺度である。製造した塩について、最高収率、82％は硫酸塩の製造において観察され（表Ｉ）、最低収率、52％はコハク酸塩で得られた。総関連物質（ＴＲＳ）は、各塩の製造において減少したが、最大の減少率5.26％はメシラート塩の製造において観察された。塩酸塩は、減圧オーブン中で50℃で約16時間乾燥した後に残留メタノール（0.62重量％）を含む唯一の塩であった。コハク酸塩、酢酸塩およびリン酸塩は、水性ＴＨＦ中で行った合成における終わりから２番目の工程からの塩中に残っていると思われるＴＨＦを、ＧＣアッセイで0.18から1.32％含んでいた。実施例１０Ｘ線回折による比較塩は結晶度(複屈折)を測定するための偏光顕微鏡によっても比較された。粉末Ｘ線回折は、塩酸塩、メシラート塩、コハク酸塩および酢酸塩のみが結晶であり、独特なＸ線パターンを生じた。コハク酸塩および酢酸塩Ｘ線粉末パターンは、互いに非常に似ており、遊離塩基パターンとの関連を示した。硫酸塩、酒石酸塩およびリン酸塩は、結晶に乏しく、有意な非晶質特性を有していた。結晶塩は、精製およびその後の取り扱いが容易であるため好ましい。実施例１１溶解性の比較各塩の水溶性を、ＵＶ分析（表II）により測定し、比較した。最も予期しないことには、メシラート塩は最大の水溶性1.76mg/mLを有していた。メシラートの溶解性は他の塩より有意に高かった。表IIのデータは、本発明の塩は最も普通の医薬的に許容される塩、塩酸塩（0.268mg/mL）より６倍水に溶けやすいことを示している。その後の試験は、一貫して溶解性の２〜６倍の増大を示している。コハク酸塩および酢酸塩において観察された高いｐＨは、滴定されない遊離塩基の存在を示した。メシラート塩の水溶性は非常にｐＨ依存性であり、最適溶解性はpH4.0〜5.0、好ましくはpH4.5（2.25mg／mL）で認められた。溶解性はそれより高いかまたは低いpHでは顕著に低下する。溶解性のpH依存性に加えて、メシラート塩の水溶性は塩化ナトリウムの形のクロリドを加えてＨＣｌ塩を形成することにより顕著に低下する。実施例１２熱重量分析（ＴＧＡ）、示差走査熱量測定法（ＤＳＣ）、およびメトラー熱ステージ(hot stage)顕微鏡法の比較各塩をＴＧＡ、ＤＳＣおよびメトラー熱ステージ顕微鏡法により分析し、比較した（表III）。塩は20℃〜100℃に加熱すると0.73〜5.50％の重量低下を示した。硫酸塩、酒石酸塩およびリン酸塩は各々5.50％の最大の重量低下を示した。塩を100℃〜200℃に加熱したときにさらに重量低下を示す塩は、塩酸塩、コハク酸塩および酢酸塩のみであった。ＤＳＣ分析では、メシラート塩は261.6℃でシャープな吸熱(endotherm)融解ピークを生じることが示された。硫酸塩は267.4℃で幾分広い吸熱を示した。塩酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、酢酸塩およびリン酸塩はＤＳＣでは融解吸熱を示さなかった。コハク酸塩、酢酸塩およびリン酸塩は約 245℃でＤＳＣ発熱を示した。試料はメトラー熱ステージを用いる熱ステージ顕微鏡測定法によっても試験された。塩酸塩は300℃までの温度ではいかなる真の融解も示さなかった。試験した塩の残りは、215℃〜270℃の温度で液化の兆候を示した。実施例１３吸湿性の比較塩の吸湿性を相対湿度（ＲＨ）27％、35％、65％および80％で試験し、表ＩＶに示す。試料を最初に減圧し、ＲＨデータの基準点を設定した。各塩に含まれる水の量もKarl-Fisher(電量分析的に)により測定した。 80％ＲＨ曝露時の塩の重量を、減圧曝露時と比較すると、1.2〜8.4重量％の増加がみられた。リン酸塩が最も吸湿性であり、次いで酒石酸塩、メシラート、硫酸塩、酢酸塩、塩酸塩およびコハク酸塩であった。Karl-Fisherのデータは吸湿性のデータと全くよく一致し、酒石酸塩、硫酸塩、リン酸塩およびメシラート塩が最も水を含んでいた。実施例１４塩製造用の溶媒メシラート塩は、メタノール／水、100％アセトン、９：１アセトン/水、３：１アセトン／水および１：１アセトン／水中で製造された。これらの塩を製造するの用いた塩基は総関連物質を9.98%含んでいた。これら塩のそれぞれについて得られた収率と相関連物質を表Ｖに示す。比較のために、ＨＣｌ塩のデータを含める。表Ｖ中のＮ．Ａ．の表示はデータが得られなかったことを示す。５：１アセトン／水から製造したメシラート塩は総関連物質0.7％を有し、遊離塩基のＴＲＳから9.3％低下していたが、収率は39％と低かった。９：１アセトン水を用いたとき、収率は2.0%ＴＲＳで73％に増加した。塩酸塩のＴＲＳは4. 7％に低下したが（5.3％低下）、未知の関連物質2.4％が存在した。有意に不純物(ＴＲＳ)が低下した本発明の塩を製造できることにより、より効率的な製造がもたらされ、高価な下流での精製が避けられる。塩酸塩は最も普通の医薬的塩であり、Heathら、08/413735(EP0657458として19 95年６月14日に公開)(実施例５)に具体的に開示されているので、メシラートとＨＣｌ塩の生物学的比較を行った。最も予測しなかったことは、本発明のメシラート塩は、ＨＣｌ塩より有意にバイオアベイラビリティが高かった。塩型のバイオアベイラビリティは、雄のビーグル犬４頭において10％アカシア懸濁液中のＨＣｌおよび本発明のメシラート塩20mg/kgの単回用量を経口投与することにより測定された。投与間に1週間のウォッシュアウト期間を設けた。投与はクロスオーバーデザイン（２頭／塩／試験犬）で行った。活性化合物および活性代謝物の血漿中濃度をモニターした。ＨＣｌ塩より本発明のメシラート塩の等用量を経口投与した後の各イヌにおいて、より高い(Ｓ)-13-[ジメチルアミノ)メチル]-10,1 1,14,15-テトラヒドロ-4,9:16,21-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H ][1,4,13]オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオンおよびその代謝物の血漿中濃度が達成された。ＨＣｌ塩投与後の平均最高血漿中濃度（Ｃ_max±誤差）は400±142ng／mL（化合物）および862±255ng／mL（代謝物）であった。本発明のメシラート塩の投与後の平均最高血漿中濃度は（Ｃ_max±誤差）は896±243n g／mL（化合物）および2455±930ng／mL（代謝物）であった。これは該化合物および代謝物の血漿中濃度の約260％の増加を示す。本試験中の該化合物および代謝物の血漿中濃度を時間の関数としてもプロットした。濃度曲線下面積（AUC）比は、患者に対する該化合物のバイオアベイラビリティの尺度を表す。ＨＣｌ塩および本発明のメシラートに関するＡＵＣ比を計算し、表ＶＩに示す。最も予期しないことには、表ＶＩのデータは、メシラート塩がＨＣｌ塩より2. 58倍バイオアベイラビリティが高いことを示している。このバイオアベイラビリティの有意な増大により、患者に対しより低用量を投与しても同じ医薬的効果が得られる。すなわち、患者に対する曝露が最小限となる。さらに、より低い単位用量剤形により化合物のコストが下がり、製造に必要な化合物の量が減少する。したがって、本発明のメシラート塩の用量は0.5mg/kg/用量〜0.25mg/kg/用量、より好ましくは0.1〜0.2mg/kg/用量と予測される。この用量は、同じ血中レベルをもたらすＨＣｌ塩の用量より実質的に低い。７種類の塩についての物理的データのまとめは、メシラート塩により、Heath ら、EP0657458に開示され、試験された塩の物理特性が実質的に改善されたことを示している。最も意義のあることに、本発明の塩とＨＣｌ塩のバイオアベイラビリティの比較により本発明のメシラート塩は劇的に改善された治療薬であることが示されている。すなわち、本発明のメシラート塩の利点には、（１）高水溶性、（２）ＨＰＬＣ総関連物質の大きな減少、（３）ＧＣアッセイで残留溶媒なし、（４）Ｘ−線粉末回折および偏光顕微鏡による結晶、（５）ＤＳＣによる明確な融点、（６）ＨＣｌ塩のバイオアベイラビリティの2.5倍以上であることが含まれる。先に記したように、本発明の化合物は選択的プロテインキナーゼＣインヒビターとして活性である。化合物の活性は、Heathら、EP0657458（1995年６月14日公開）に開示されている。活性は、カルシウムカルモジュリン依存性プロテインキナーゼアッセイ、カゼインプロテインキナーゼIIアッセイ、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼ触媒サブユニットアッセイおよびプロテイン−チロシンキナーゼアッセイで測定された。メシラート塩は、これらのアッセイにおいてＩＣ₅₀値10 μＭ以下で活性であり、アイソザイム選択的であることがわかった。この薬理活性が証明された化合物は、その病状にプロテインキナーゼＣが役割を果たすことが示された異常（病気）を治療するのに有用である。当該分野で認められた異常には、糖尿病ならびにその合併症（網膜症、ニューロパシーおよび腎症を含む）、虚血、炎症、中枢神経系障害、循環器病、アルツハイマー病、皮膚病および癌が含まれる。本発明の化合物は投与する前に製剤化するのが好ましい。したがって、本発明のさらに別の態様は、式Ｉａの化合物と１またはそれ以上の医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤からなる医薬製剤である。本発明の医薬製剤はよく知られた容易に利用できる成分を用い、知られた方法により製造される。本発明の組成物を製造するには、活性成分は、通常、担体と混合されるか、担体で希釈されるか、またはカプセル、サシェー、紙もしくは他の容器の形であってよい担体内に封入されるであろう。担体を希釈剤として用いる場合は、担体は活性成分のビークル、賦形剤もしくは媒質として作用する固体、半固体または液体物質であってよい。すなわち、該組成物は、錠剤、丸剤、粉末剤、ローゼンジー剤、サシェー剤、カシェー剤、エリキシル剤、懸濁剤、エマルジョン剤、溶液剤、シロップ剤、エアロゾル剤（固体としてかまたは液体媒質中）、軟および硬ゼラチンカプセル剤、坐剤、無菌注射用溶液剤および無菌包装粉末剤の形であり得る。適切な担体、賦形剤および希釈剤の例には、乳糖、ブドウ糖、ショ糖、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギネート、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微晶質セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水シロップ、メチルセルロース、メチルおよびプロピルヒドロキシベンゾエート、タルク、ステアリン酸マグネシウム、および鉱物油が含まれる。さらに、該製剤は潤滑剤、湿潤剤、乳化剤および懸濁化剤、保存料、甘味料または香味料が含まれる。本発明の組成物は患者に投与した後に活性成分を急速にか、持続して、または遅れて放出するように製剤化することができよう。該組成物は、各用量に活性成分を約１〜約20mg、より通常は約２〜約10 mg含む単位投与剤形に製剤化するのが好ましい。しかし、投与される治療的用量は、治療される病状、投与される化合物の選択および選択した投与経路を含む関連する環境に照らして医師により決定されるであろうから、上記用量範囲は本発明の範囲を何ら限定するものではない。用語「単位用量剤形」は、各単位に、所望の治療効果を生じるように計算されたあらかじめ決定された量の活性物質と適切な医薬担体を一緒に含むヒト対象および他の哺乳動物のための単位用量として適切な物理的に分離した単位を表す。以下の製剤例は、単に例示であって、本発明の範囲を何ら限定するものではない。製剤例１以下の成分を用いて硬ゼラチンカプセル剤を製造する。量（mg/カプセル）活性成分５デンプン、乾燥８５ステアリン酸マグネシウム１０総量１００ｍｇ上記活性成分を混合し、１００ｍｇ量を硬ゼラチンカプセルに充填する。製剤例２以下の活性成分を用いて錠剤を製造する。量（mg/カプセル）活性成分７セルロース、微晶質７８二酸化シリコン、発煙１０ステアリン酸５総量１００ｍｇ化合物を混合し、圧縮して各重量１００ｍｇの錠剤を形成する。製剤例３活性成分１０ｍｇを含む錠剤を以下のごとく製造する。量（mg/カプセル）活性成分１０ｍｇデンプン４５ｍｇ微晶質セルロース３５ｍｇポリビニルピロリドン（１０％水溶液として）４ｍｇナトリウムカルボキシメチルデンプン４．５ｍｇステアリン酸マグネシウム０．５ｍｇタルク１ｍｇ総量１００ｍｇ活性成分、デンプンおよびセルロースをＮｏ．４５メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、完全に混合する。得られた粉末をポリビニルピロリドンの溶液と混合し、次いでこれをＮｏ．１４メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通す。そのようにして得られた顆粒を５０℃で乾燥し、Ｎｏ．１８メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通す。次に、あらかじめＮｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通したナトリウムカルボキシメチルデンプン、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを該顆粒に加えて混合した後、打錠器で圧縮して各重量１００ｍｇの錠剤を得る。製剤例４活性成分８ｍｇを含むカプセル剤を以下のごとく製造する。量（mg/カプセル）活性成分８ｍｇデンプン９５ｍｇ微晶質セルロース９５ｍｇステアリン酸マグネシウム２ｍｇ総量２００ｍｇ活性成分、セルロース、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムを混合し、ＮＯ．４５メッシュＵ．Ｓ．ふるいに通し、２００ｍｇ量を硬ゼラチンカプセルに充填する。本発明の原理、好ましい態様および操作方法は先の明細書に記載されている。しかしながら、開示された具体的な形は制限でなく例示とみなすべきものであるから、本明細書において保護しようとする発明は、開示された具体的な形に限定されるものと解釈すべきではない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ )，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者フォール，マーガレット・エムアメリカ合衆国46077インディアナ州ザイオンズビル、ガバナーズ・レイン240番 (72)発明者ジローセク，マイケル・アールアメリカ合衆国46236インディアナ州インディアナポリス、フォーン・リッジ・レイン10342番 (72)発明者リチャードソン，ロリ・エイアメリカ合衆国46237インディアナ州インディアナポリス、パインビュー・サークル4018番 (72)発明者ウィネロスキー，レナード・エル・ジュニアアメリカ合衆国46142インディアナ州グリーンウッド、カバード・ブリッジ・ロード557番

Claims

【特許請求の範囲】１．式：で示される塩およびその溶媒和物。２．式：で示される請求項１に記載の塩またはその溶媒和物。３．実質的に結晶である請求項１または２に記載の塩。４．(Ｓ)-13-[(ジメチルアミノ)メチル]-10,11,14,15-テトラヒドロ-4,9:16,2 1-ジメテノ-1H,13H-ジベンゾ[E,K]ピロロ[3,4-H][1,4,13]-オキサジアザシクロヘキサデシン-1,3(2H)-ジオン・メタンスルホネート１水和物である請求項３に記載の塩。５．総関連物質が約５％以下である請求項１〜４のいずれかに記載の塩。６．微小血管性の糖尿病合併症の治療を必要とする哺乳動物に対し、請求項１〜５のいずれかに記載の化合物の医薬的有効量を投与することを含む該合併症の治療方法。７．該医薬的有効量が0.05mg/kg/日〜0.25mg/kg/日である請求項６に記載の方法。８．請求項１〜５のいずれかに記載の塩を、１またはそれ以上の医薬的に許容される希釈剤、賦形剤または担体と共に含む医薬製剤。９．塩約１〜約２０ｍｇを含む請求項８に記載の医薬製剤。１０．医薬に用いる請求項１〜５のいずれかに記載の塩。１１．微小血管性の糖尿病合併症を治療するのに用いる請求項１〜５のいずれかに記載の塩。１２．式：に記載の化合物を、非反応性有機溶媒中のメタンスルホン酸と反応させることを含む請求項１〜５のいずれかに記載の塩の製造方法。１３．溶媒がアセトン−水である請求項１２に記載の方法。１４．溶媒が約５：１〜約１０：１（容量）アセトン／水である請求項１３に記載の方法。１５．溶媒が約９：１（容量）アセトン／水である請求項１４に記載の方法。１６．請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法によって製造される化合物。１７．先の実施例のいずれかに実質的に記載の化合物。