JPH11501302A

JPH11501302A - アルツハイマー病を治療するための特異的ＧＡＢＡ−▲下Ａ▼α▲下５▼受容体リガンドの製造法及び使用

Info

Publication number: JPH11501302A
Application number: JP8525484A
Authority: JP
Inventors: ドーソン，ジエラード・ラフエイエル
Original assignee: メルクシヤープエンドドームリミテツド
Priority date: 1995-02-23
Filing date: 1996-02-20
Publication date: 1999-02-02
Also published as: DE69628912D1; US6323198B1; EP0810879A1; AU706515B2; EP0810879B1; DE69628912T2; WO1996025948A1; ATE244018T1; CA2212058C; AU4725796A; ES2201169T3; GB9503601D0; CA2212058A1; US6426343B1

Abstract

(57)【要約】本発明は、特異的ＧＡＢＡ_Aα₅受容体リガンドを用いた、例えばアルツハイマー病の治療において認知を強化するための治療法又は認知を強化するための薬剤の製造法を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】アルツハイマー病を治療するための特異的ＧＡＢＡ−_Aα₅受容体リガンドの製造法及び使用本発明は、（例えば、アルツハイマー病のような痴呆病の治療における）認知（cognition）を高めるための治療法、そのような方法に有用な組成物及びそのための薬剤の製造法に関する。アルツハイマー病のような多くの痴呆病は、病人の認知の進行的低下を特徴とする。そのような治療が望ましい患者、例えば、痴呆病にかかっている患者の認知を強化することが望ましいことは明らかである。ＭｃＮａｍａｒａ及びＳｋｅｌｔｏｎによる、Ｐｓｙｃｈｏｂｉｏｌｏｇｙ，２１：１０１−１０８に、ベンゾジアゼピン受容体逆（inverse）アゴニスト、 β−ＣＣＭがＭｏｒｒｉｓの水迷路（water maze）において空間学習を促進したと報告されている。しかし、β−ＣＣＭ及び他の慣用のベンゾジアゼピン受容体逆アゴニストは痙攣誘起性（proconvulsant）であり、そのために、該アゴニストはヒトの認知強化剤として用い得ないことは明らかである。しかし、本発明者は、認知強化作用は有していても、ベンゾジアゼピン受容体逆アゴニストに関して既に記載されている痙攣誘起作用は有していない薬剤が得られ得ることを見出した。ベンゾジアゼピン受容体部位は、一般にペンタマーであると認識されている構造体、ＧＡＢＡ_A受容体であり、その内在塩素イオンチャンネルは、５つのサブユニットそれぞれの第２トランスメンブランドメインによって形成されている。最新の分子クローニング法を用い、哺乳動物の脳で、１４のＧＡＢＡ_A受容体サブユニット、即ち、α₁、α₂、α₃、α₄、α₅、α₆、β₁、β₂、β₃、γ₁、γ₂ 、γ₃、δ及びφサブユニットからなるファミリーが同定された。１４の可能なレパートリーから５つのサブユニットを選択することにより、多くの可能な組み合わせが得られるが、生成されるサブタイプの数及びＧＡＢＡ_A受容体の不均質性の程度は未だ解明されていない。以下にα₁、α₂、α₃、α₅又はα₆受容体というとき、それらは勿論、ＧＡＢＡ_Aα₁、ＧＡＢＡ_Aα₂、ＧＡＢＡ_Aα₃、ＧＡＢＡ_Aα₅及びＧＡＢＡ_Aα₆を指している。 α₁及び／又はα₂及び／又はα₃受容体結合部位では比較的特定の活性がない α₅受容体逆アゴニストを用いて、認知は強化するが痙攣誘起性ではない薬剤が得られ得ることが見出された。従って、本発明は、痙攣を起こさせずに認知を強化する方法を提供し、該方法は、そのような治療を要する患者に、α₁及び／又はα₂及び／又はα₃受容体では受容体ゴニストでも受容体逆アゴニストでもない、α₅受容体逆アゴニストである化合物を、痙攣を起こさせずに認知作用を強化するのに十分有効な量投与することを含む。該方法は、哺乳動物、最も適当にはヒト、好ましくはアルツハイマー病のような痴呆病に罹患しているヒトに適用する。従って、用いられる化合物は、α₁受容体との有意なアゴニスト又は逆アゴニスト結合が起こらない濃度で逆アゴニストとしてα₅受容体に結合する。該化合物は、α₁及びα₂受容体との有意なアゴニスト又は逆アゴニスト結合が起こらない濃度で逆アゴニストとしてα₅受容体に結合するのがより適当である。該化合物は、α₁、α₂及びα₃受容体との有意なアゴニスト又は逆アゴニスト結合が起こらない濃度で逆アゴニストとしてα₅受容体に結合するのが最も適当である。 α₅での逆アゴニスト結合は部分的であってもよい〔即ち、該化合物は半（par tial）アゴニストであってもよい〕が、α₅では完全逆アゴニストであるのが好ましい。また、該化合物は、他の受容体では完全アゴニストでも半アゴニストでも逆アゴニストであってもいけない。用いられる化合物は、所望なら、α₁、α₂、α₃及びα₆でアンタゴニスト結合を有してもよい。というのは、そのような結合は本発明の方法の実施に悪影響を与えないからである。種々の受容体に対する相対結に関しては、考慮されるのは逆アゴニスト又はアゴニスト結合のみである。一般に、そのような化合物は、α₁受容体の１０倍以上α₅受容体に結合する。即ち、該化合物は、α₅含有受容体に対して、α₁含有受容体の１０倍以上選択的である。本発明に用いる化合物は、α₅含有受容体に対してα₁及びα₂含有受容体の１０倍以上選択的であるのが適当であり、α₅含有受容体に対してα₁、α₂及びα₃ 含有受容体の１０倍以上選択であればより適当であり、α₅含有受容体に対して α₁、α₂、α₃及びα₆含有受容体の１０倍以上選択的であるのが最も適当である。本発明に用いる化合物は、α₅含有受容体に対してα₁含有受容体の２５倍以上選択的であり、例えば、α₅含有受容体に対してα₁及びα₂含有受容体の２５倍以上選択的であるのが都合がよく、α₅含有受容体に対してα₁、α₂及びα₃含有受容体の２５倍以上選択的であるのがより適当であり、α₅含有受容体に対して α₁、α₂、α₃及びα₆含有受容体の２５倍以上選択的であるのが最も適当である。本発明に用いる化合物は、α₅含有受容体に対してα₁含有受容体、例えば、α₁ 及びα₂含有受容体の５０倍以上選択的であるのが好ましく、α₅含有受容体に対してα₁、α₂及びα₃含有受容体の５０倍以上選択的であるのがより適当であり、α₅含有受容体に対してα₁、α₂、α₃及びα₆含有受容体の５０倍以上選択的であるのが最も適当である。本発明に用いる化合物は、α₅含有受容体に対してα₁受容体の１００倍以上選択的であるのが有利である。本発明の好ましい方法は、望ましくない不安生成（anxiogenic）作用を誘起させることなく認知を強化し得るというさらなる利点を有している。 α₅結合の決定に好ましい受容体はα₅β₃γ₂受容体である。α₁結合の決定に好ましい受容体はα₁β₃γ₂受容体である。α₂結合の決定に好ましい受容体はα₂ β₃γ₂受容体である。α₃結合の決定に好ましい受容体はα₃β₃γ₂受容体である。α₆結合の決定に好ましい受容体はα₆β₃γ₂受容体である。受容体は、国際特許出願ＷＯ９２／２２６５２号及び同ＷＯ９４／１３７９９号に記載されている。本発明に用いる化合物は、当業界において公知の方法を用い、上記受容体に対してスクリーニングすることにより同定し得る。好ましい方法には、Ｇｏｅｄｅｒｓらに記載のもの（以下参照）が含まれる。本発明の化合物が受容体アゴニスト、受容体半アゴニスト又は受容体逆アゴニストであるかどうかの決定も、当業界において公知の方法を用いて行うことができる。都合のよい方法には、Ｗａｆｆｏｒｄらに記載のもの（以下参照）が含まれる。本発明に用いるのに特に適した化合物は、α₅β₃γ₂受容体に対するＫｉ値（ｎＭ）が、５以下、より適当には２以下、最も適当なのは１以下、例えば約０．５である。本発明に用いるのに特に適した化合物は、α₁β₃γ₂受容体に対するＫｉ値（ｎＭ）が、１０以下、より適当には２０以下、最も適当なのは４０以下、例えば約５０である。本発明に用いるのに特に適した化合物は、α₂β₃γ₂受容体に対するＫｉ値（ｎＭ）が、５以上、より適当には１０以上、最も適当なのは２０以上、例えば約２５である。本発明に用いるのに特に適した化合物は、α₃β₃γ₂受容体に対するＫｉ値（ｎＭ）が、５以上、より適当には１０以上、最も適当なのは２０以上、例えば約２５である。本発明に用いるのに特に適した化合物は、α₁β₃γ₂受容体に対するＫｉ値（ｎＭ）が、１０以上、より適当には２０以上、最も適当なのは４０以上、例えば約８０である。本発明に用いる化合物を静脈内投与する必要なしにそれらの活性を示すためには、該化合物が、経口投与された後で血液脳関門を通過し得るのが最も好ましい。上記に概説した望ましい特性を有することの有用性を示す化合物はＦＧ８０９４である。本発明はさらに、痙攣を起こさせずに認知を強化するのに用いる医薬組成物を提供し、該組成物は、α₁及び／又はα₂及び／又はα₃受容体においては受容体アゴニストでも受容体逆アゴニストでもないα₅受容体逆アゴニストである化合物並びに医薬上許容し得る担体を含む。該組成物は、ヒトに経口投与するように適合されているのが最も適当であるが、例えば、静脈内、筋肉内若しくは皮下投与又は局所的若しくは直腸内投与による非経口投与形態であってもよい。認知強化剤を経口使用する場合に選択される化合物は、標準的な医薬慣行に従って、例えば、医薬上許容し得る担体又は稀釈剤を含み、場合によって、みょうばんのような公知アジュバントを加えた医薬組成物として、錠剤の形態で投与し得る。該化合物は、経口的に、静脈内、筋肉内、腹腔内若しくは皮下投与を含めて非経口的に、又は局所的に投与することができる。経口使用する場合、認知強化剤は、例えば、錠剤若しくはカプセル剤の形態で、又は水性溶剤若しくは懸濁剤として投与し得る。経口使用するための錠剤の場合、一般に用いられる担体にはラクトース及びコーンスターチが含まれ、通常、ステアリン酸マグネシウムのような滑沢剤が加えられる。カプセル形態で経口投与する場合に有用な稀釈剤にはラクトース及びコーンスターチ粉末が含まれる。経口使用するために水性懸濁剤が必要な場合、有効成分を乳化剤及び懸濁化剤と組み合わせる。所望なら、特定の甘味剤及び／又は着香剤を加えてもよい。筋肉内、腹腔内、皮下及び静脈内使用の場合、通常、有効成分の滅菌溶液を作製するが、該溶液のｐＨは適当に調整・緩衝しなければならない。静脈内使用の場合、製剤を等張とするためにには、溶質の全濃度を調節する必要がある。局所投与の場合、認知強化剤は、例えば、水、水と水溶性溶媒（例えば、低級アルカノール、植物油、ポリアルキレングリーコールなど）との混合物のような医薬上許容し得る担体を用い、例えば、懸濁剤、ローション、クリーム又は軟膏として調剤し得る。医薬製剤は、乳化剤、保存剤、湿潤剤、賦形剤など、例えば、ポリエチレングリコール２００、３００、４００及び６００、カーボワックス１，０００、１，５００、４，０００、６，０００及び１０，０００のような無毒性の助剤、第４級アンモニウム化合物、冷間滅菌特性を有することが知られており且つ使用しても損傷を与えないフェニル水銀塩、チメロサール、メチル及びプロピルパラベン、ベンジルアルコール、フェニルエタノールのような抗菌成分、塩化ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、グルコネート緩衝剤のような緩衝成分、並びにソルビタンモノラウレート、トリエタノールアミン、オレエート、ポリオキシエチレンソルビタンモノパルミチレート、ジオクチルナトリウムスルホスクシネート、モノチオグリセロール、チオソルビトール、エチレンジアミン四酢酸などのような他の慣用成分を含み得る。ヒト患者に認知強化剤を用いる場合、１日用量は、通常、担当医師により決められるが、該用量は一般に、個々の患者の年令、体重及び応答、並びに患者の症状の重篤度に応じて異なる。しかし大抵の場合、有効な１日用量は、体重１ｋｇ当たり、約０．００５ｍｇ〜約１００ｍｇ、好ましくは、０．０５ｍｇ〜約５０ｍｇ、例えば、約０．５ｍｇ約２０ｍｇの範囲であり、１日１回で又は分割して投与する。しかし、これらの限度を超える用量を用いる場合もあり得る。一般に、経口投与用の単位剤形は、１〜８００ｍｇ、より一般的には２．５〜２５０ｍｇ、好ましくは５〜１００ｍｇ、例えば１０、２０又は５０ｍｇを含む。本発明に用いるのに好ましい認知強化剤は、９Ｈ−イミダゾ［１，５−ａ］ピロロ［２，１−Ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１−カルボン酸，１１，１２，１３ａ−テトラヒドロ−７−メトキシ−９−オキソ−，エチルエステル，（Ｓ）−（９ＣＩ）である。該化合物の製造法は、カナダ国ＣＡ１２６６６７１Ａ２９００３１３号(カナダ国特許出願第５０３３２９号の分割)に記載されている。該化合物はＦＧ８０９４としても知られている。本発明の組成物は、任意の適切な方法で、例えば、慣用の錠剤化又はカプセル充填法などにより製造し得る。本発明はさらに、痙攣を起こさせずに認知を強化するための薬剤の製造における上述の認知強化剤の使用を提供する。本発明はさらに、痙攣を起こさせずに認知を高め得る化合物を同定する方法を提供し、該方法は、α₅とα₁及び／又はα₂及び／又はα₃及び／又はα₆受容体を用いて、前記化合物がα₅ではリガンドであるが、α₁及び／又はα₂及び／又はα₃及び／又はα₆受容体ではリガンドではないかどうかを決定し、α₅受容体で結合するのが逆アゴニストであるかどうかを決定し、且つα₁及び／又はα₂及び／又はα₃及び／又は α₆受容体で結合するのがアゴニストなのか逆アゴニストなのかを決定するステップを含む。本発明は、痙攣を起こさせずに認知を強化し得る化合物を検出する方法を提供し、該方法は、ＧＡＢＡ_A結合受容体を用いて、前記化合物がα₅逆アゴニストであって、α₁及び／又はα₂及び／又はα₃ではアゴニストでも逆アゴニストでもないことを決定するステップを含む。本発明は、また、痙攣を起こさせずに認知を強化し得ることは知られていなかったが、本発明の検出法を用いることにより同定されたリガンドを提供する。本発明はさらに、本発明の方法により同定された化合物を含む医薬組成物を提供する。以下の参考文献は、有用なバックグラウンド情報を提供する：実施例１ＦＧ８０９４を０．５％カルボキシメチルセルロース溶液に懸濁して注射溶液を得る。実施例２以下の実施例により、本発明の医薬組成物を示す。１〜２５ｍｇのＦＧ８０９４を含む錠剤２６〜１００ｍｇのＦＧ８０９４を含む錠剤ＦＧ８０９４、セルロース、ラクトース及びコーンスターチの一部を混合し、１０％コーンスターチペーストと共に顆粒化する。得られた顆粒をふるいにかけ、乾燥し、残りのコーンスターチ及びステアリン酸マグネシウムとブレンドする。次いで、得られた顆粒を、錠剤１個当たり、１．０ｍｇ、２．０ｍｇ、２５．０ｍｇ、２６．０ｍｇ、５０．０ｍｇ及び１００ｍｇの活性化合物を含む錠剤に圧縮する。実施例３実施例のＦＧ８０９４（１．５ｍｇ）をヒドロキシプロピルメチルセルロース（５８．５ｍｇ）と合わせて小ペレットを形成する。該ペレットをラットに皮下移植する。得られたＦＧ８０９４の血液レベルは、６時間以上の間１００ｎｇ／ｍｌを超えるレベルであった。一般法１．放射性リガンド結合実験以下のサブユニット組み合わせ体：α１β３γ２、α２β３γ２、α３β３γ ２、α５β３γ２、α６β３γ２を用いて安定にトランスフェクトした細胞から調製した膜を用いて放射性リガンド結合実験を行った。１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）中０．５ｍｌの総容量中２０〜１００ｍｇの膜タンパク質を用い、室温で１時間インキュベーションを行った後、ＷｈａｔｍａｎＧＦ／Ｃフィルターを通して反応を停止し、次いで、３×３ｍｌの５ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で洗浄し、シンチレーション計数を行った。ＧＡＢＡ_A受容体を標識する放射性リガンドとして［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８を用いたが、但し、α６β３γ２を発現する細胞には、［³Ｈ］Ｒｏ１５−４５１３を用いた。というのは、この受容体型は［³Ｈ］Ｒｏ１５ −１７８８に対しては結合親和性が低いからである。１０μＭＲｏ１５−４５１３を用いて非特異的結合を決定したが、放射性リガンドは、各サブタイプに対する該リガンドのＫｄ値の２倍に相当する濃度で用いた。Ｋｉ値は、Ｃｈｅｎｇ −Ｐｒｕｓｓｏｆ方程式に従って計算した。２．マウス脳における［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８のｉｎｖｉｖｏ結合Ｇｏｅｄｅｒｓ及びＫｕｈａｒ（１９８５）により記載の方法に実質的に従って、マウス脳における［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８のｉｎｖｉｖｏ結合を行った。雄のＳｗｉｓｓ−Ｗｅｂｓｔｅｒマウスに、尾の静脈を介して、５０ｍＣｉ／ｋｇの［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８（体重１０ｇ当たり０．０５ｍｌ）を含む０．９％ＮａＣｌ溶液を投与した。３分後に断頭して動物を殺したが、その時点では、脳中の［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８のピーク量は検出可能であった（データは示さず）。動物を殺す３０分前に、０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）中のＦＧ８０９４（０．３、１．０、３．０及び１０．０ｍｇ／ｋｇ）又はジアゼパム（非特異的結合を明確にするため、３０．０ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内投与した。次いで各マウスの脳を素早く取り出し、５に設定したウルトラチュラックス（ｕｌｔｒａ−ｔｕｒｒａｘ）ホモジナイサーを用い、４℃で１０秒間、５．０ｍｌの５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、５．０ｍＭＥＤＴＡ（ｐＨ７．４）中でホモジナイズした。別の実験系で、特定のＧＡＢＡサブタイプを優先的に発現させるために選択した種々の脳領域も調べた。小脳への[³Ｈ]Ｒｏ１５−１７８８の結合は殆ど全てα１様である（Ｑｕｉｒｋら，１９９４）のに対し、脊髄への結合は、α２又はα３サブタイプを含み、α１、α４及びα５が殆ど又は全く存在しない受容体である（Ｗｉｓｄｅｎら，１９９２）ことを示している。脳を素早く前脳と小脳に切り離し、脊髄も取り出した。各前脳は４．０ｍｌの緩衝液（約１４ｍｌ／ｇ湿量の組織）中で、各小脳は１．０ｍｌの緩衝液（約１４ｍｌ／ｇ湿量の組織）中で、各脊髄は１．０ｍｌの緩衝液（約２０．０ｍｇ／ｇ湿量の組織）中でホモジナイズした。容量（３× ２００ｍｌ）のホモジネートを素早くＧＦ／Ｂフィルターを通して濾過し、２× ５．０ｍｌ容量の氷冷緩衝液で洗浄し、残留放射能を液体シンチレーション分光検査法で計数した。３．電気生理学的実験−ＦＧ８０９４の機能的効果 α１β３γ２Ｓ、α２β３γ２Ｓ及びα５β３γ２Ｓを含むトランスフェクトした細胞に対する結合実験により、α５選択性を有する化合物を同定した。これらの化合物は、電気生理学的方法（Ｗａｆｆｏｒｄら，１９９３）を用いて調べ、Ｘｅｎｏｐｕｓ卵母細胞中で発現させた、α１β２γ２Ｓ、α２β２γ２Ｓ、 α３β２γ２Ｓ、α５β２γ２Ｓ及びα６β２γ２ＳＧＡＢＡ_A受容体に及ぼす該化合物の機能的効果を測定した。卵母細胞核を、合成した１０．０〜２０．０ｎｌの関連ｃＤＮＡ（６．０ｎｇ／μｌ）と共に発現ベクターｐＣＤＭ８に直接注入した。２４時間インキュベーションした後、卵母細胞を５０ｍｌの浴中に入れ、塩水を灌流させた。２電極電圧クランプ記録法（twoelectrode voltage-c lamp recording method）を用いることにより、ＧＡＢＡを含む溶液中に該細胞を浸してＧＡＢＡ活性化電流を測定することができた。先ず、誘発し得る最大ＧＡＢＡ応答の約２０％を与えるＧＡＢＡ濃度（ＥＣ₂₀）を用いて再現可能な電流応答を得た。テスト化合物とこのＥＣ₂₀濃度のＧＡＢＡとを同時適用して、ＢＺ結合部位での作用を介して応答を調節した。応答は、ＢＺ受容体ゴニストにより促進し、ＢＺ受容体逆アゴニストにより阻害することができた。４．発作及び認知実験薬剤Ｍｅｒｃｋ、ＳｈａｒｐａｎｄＤｏｈｍｅＮｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｒｅの医薬品化学グループにより合成されたＦＧ８０９４を０．５％ＣＭＣに懸濁した。ビヒタル又はＦＧ８０９４を１回目のトレーニング試験を始める３０分前にＩＰ投与した。痙攣誘発テスト（ｉ）急性治療被検体として、投薬を受けたことのない６０匹の雄ＳｐｒａｇｕｅＤａｗｌｅｙラット（２２５〜２６５ｇ）を４匹ずつのグループに分けて収容し、食料と水は自由に与えた。ラットを６つのグループに割り当て以下を与えた：ビヒクル若しくは０．５、１．０、２．０、４．０ｍｇ／ｋｇのＦＧ８０９４又は１０．０ｍｇ／ｋｇの非選択的受容体逆アゴニスト、ＣＧＳ８２１６（公知痙攣誘発剤）。ビヒクル、ＦＧ８０９４又はＣＧＳ８２１６をＩＰ投与し、３０分後に、痙攣薬であるペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ、４０ｍｇ／ｍｌ）を注入した。ラットの尾の静脈に、１．０ｍｌ／分の比率でＰＴＺを注入した。間代性及び緊張性発作を起こすまでの潜伏時間（latency）を記録し、方程式：しきい値用量＝注入速度（ｍｌ／秒）×ＰＴＺ（ｍｇ／ｍｌ）×１０００／ラット体重）×潜伏時間を用い、それぞれのしきい値を計算した。（ii）慢性治療この実験に用いたラットは、ＭＷＭ実験の間、ＦＧ８０９４による長期治療を受けた。ラットは、（月曜から金曜まで）１日１回のＩＰ投与により、合計２４用量の投与を受けた。薬剤を投与する度にその後でラットをＭＷＭでテストし、最終用量の薬剤をラットに投与してから４８時間後に痙攣薬テストを行った。被験体を４つの治療グループ（ｎ＝８）に割り当て、ビヒクルか、０．１、０．３又は１．０ｍｇ／ｋｇのＦＧ８０９４を投与した。痙攣誘起剤テストの当日に、ラットを拘束し、ペンチレンテトラゾール（ＰＴＺ，４０．０ｍｇ／ｍｌ）を上記の方法で注入した。間代性痙攣及び緊張性（完全伸展）痙攣を起こすまでの潜伏時間を記録した。潜伏時間データを変換して、間代性及び緊張性発作の両しきい値に達するのに要するＰＴＺ用量を得た。認知実験動物体重約３００ｇの雄ＰＶＧズキン（hooded）ラット（Ｂａｎｔｉｎ＆Ｋｉｎｇｍａｎ，Ｈｕｌｌ，Ｕ．Ｋ．）を４匹ずつのグループに分けて収容し、食料と水は自由に与えた。動物を、朝７時に照明開始する、１２時間／１２時間の明暗サイクル下に維持した。装置Ｍｏｒｒｉｓの水迷路は、水と白色染料（Ｅ３０８，ＭｏｒｔｏｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）からなる不透明混合物を充填し２６〜２８℃に維持した直径２ｍの白い繊維ガラス製円形プールからなる。該プールを、壁の周りに、空間の「迷路外」手がかり（cue）として黒白のコントラストがはっきりした模様が描かれている、防音した部屋の中心に置いた。「北」を任意に決めて、プールを４つの等しい区（quadrant ）、「北東」、「南東」、「南西」及び「北西」に分けた。水面下２ｃｍに沈めた隠蔽プラットフォーム（１３ｃｍ×１３ｃｍ）を北東区の中央に置いた。広角レンズを備えた閉回路ビデオカメラをプールの中央に直接設置し、画像をデジタル化する画像分析機に接続した。デジタル情報を、ＰａｕｌＦｒａｙＬＴＤ（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＵＫ）から調達した、アルキメデスマイクロコンピューターで操作する「Ｗａｔｅｒｍａｚｅ」ソフトウエアパッケージにリレーした。該ソフトウエアパッケージにより、以下の測定値を得た：プラットフォームに到達するまでの潜伏時間、プラットフォームに至る経路の長さ、平均遊泳速度、標的区における移動時間及び合計移動距離。トレーニングラットを４つの治療グループ（ｎ＝８）：ビヒクル、０．１、０．３、１．０ｍｇ／ｋｇのＦＧ８０９４に割り当てた。該実験の習得期中、全てのグループに１日当たり４回の試験を課した。この期間には、隠蔽プラットフォームは水迷路の北東区に沈めておいた。ラットをホームケージから取り出し、準ランダムに決めた水迷路の４つの位置（「北」、「東」、「南」又は「西」）のいずれかに、ラットをプールの壁に向けて頭が壁にほぼ接触するように置いた。実験者がラットを解放したときを実験開始とし、ラットがプラットフォームに登ったときを実験終了とし、平均逃亡（escape）潜伏時間を記録した。最長試験時間は６０秒であった。この時間までにラットがプラットフォームに登っていなければ、試験は自動的に終了し、実験者はラットをプラットフォームにのせ、逃亡潜伏時間６０秒と記録する。ラットを３０秒間プラットフォーム上に留め、次いで、プールから取り出し、さらに３０秒間（試験と試験の間のインタバル，ＩＴＩ）、高い側面を有する不透明のプラスチックコンテナーに収容した。ＩＴＩ後、ラットを再びプールに戻したが、但し前とは異なる位置に置き、解放して、次の試験を開始した。４回の試験が完了するまでこの手順を繰り返した。学習及び記憶テストプローブ試験通常、トレーニングの数日後には逃亡潜伏時間は６０秒から約２０秒に減少する。「プローブ試験」は、隠蔽プラットフォームの位置についてのラットの空間記憶を評価するものである。この試験の間、プラットフォームは水迷路から取り出しておいたが、プールからラットを取り出す前の６０秒間ラットにプールを探索させた。治療によりプラットフォームの位置についてのラットの記憶が改善されるなら、該ラットはビヒクル治療を受けたラットよりプラットフォームがかつて隠されていた区（北西）の探索には長い時間を費やすであろう。手がかりによる想起（ｃｕｅｄｒｅｃａｌｌ）手がかりによる想起を用いて、（遊泳能力障害の原因となる視覚不良又は運動欠陥のような）薬剤により誘発された副作用によると思われる行動欠陥を評価した。この手順においても、プラットフォームは北東区に置いたが、但し水面より３ｃｍ高くし、ラットに見えるようにした。治療が可視プラットフォームに到達するまでの平均逃亡潜伏時間に対して効果がなければ、不可視プラットフォームに到達するまでの平均逃亡潜伏時間におけるグループ間の差は全て、認知プロセスに及ぼす効果に起因すると考えることができる。このトレーニングスケジュールは習得トレーニングに用いたトレーニングスケジュールと同じであり、グループ間で平均逃亡潜伏時間に有意な差がなくなるまで続けた。想起記憶プローブ試験後の６日間、ラットを水迷路に露出しないか又はＦＧ８０９４を投与せずにおき、その後で、習得プロトコルを用い、再び北東区に沈めたプラットフォームでラットを再びテストした。反転（reversal）学習反転トレーニングは実験の習得期と同一であったが、但し、プラットフォームは南西区の中央に沈めた。結果１．ＦＧ８０９４のα５β３γ２に対する選択性各細胞系における競合曲線は、ＦＧ８０９４がα５サブユニット含有受容体に対して選択的であることを示している（表１参照）。ＦＧ８０９４は、α５含有受容体に対して、α１の１０７倍、α２の６０倍、α３の５３倍、α６の１８４倍選択的であった。これは、新規な薬理学的プロフィールを表している。というのは、ゾルピデム（zolpidem）又はＣＬ２１８，８７２のような最も選択的なＢＺは、α５含有受容体よりα１含有受容体に対して親和性が高いからである（Ｐｒｉｔｃｈｅｔｔ及びＳｅｅｂｅｒｇ，１９９０）。ＦＧ８０９４は、今日まで報告されている他のいずれの化合物よりも、α１含有受容体よりα５含有受容体に対する選択性が高い。２．ｉｎｖｉｖｏＦＧ８０９４による全脳からの［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合の置換に基づくＧＡＢＡ_Aサブタイプの占有率マウスに［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８を静脈内投与してから３分後には、脳に有意なレベルの放射能が存在した。放射能の９５％以上がホモジネートの濾過後にも維持されていたので、［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８の９５％以上が膜と結合したと判断した（データは示さず）。ジアゼパム（３０．０ｍｇ／ｋｇ）は、脳において［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合の９０％を置換したが、これは、膜中に存在するリガンドがＧＡＢＡ_A受容体に結合したことを示している。３．０ｍｇ／ｋｇまでの用量で腹腔内投与した場合には、ＦＧ８０９４は特異的［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合を有意には置換しなかった（データは示さず）。これは、これらの用量で占有される他のどのＧＡＢＡ_A受容体サブタイプも数が少なく且つこのアッセイの検出限界以下の筈であることを意味している。ＦＧ８０９４はα５含有受容体に対して最も高い親和性を有しており（表１）且つ該受容体はＧＡＢＡ_A受容体集団全体の５％以下であるから、≦ ３．０ｍｇ／ｋｇの用量のＦＧ８０９４がこのサブタイプを占有していると考えられる。ＦＧ８０９４は、１０．０ｍｇ／ｋｇ用量では、［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合を有意に置換した（ｐ＜０．０５）。α１、α２及びα３サブユニットを含む受容体は、脳中で最も大きな３つのサブタイプを構成し、ＧＡＢＡ_A受容体の約９０％を占める（ＭｃＫｅｒｎａｎら，１９９１，Ｗｈｉｔｉｎｇら，１９９４）。この用量では、ＦＧ８０９４は主として（α１含有受容体より親和性が高い）α２及びα３含有受容体を占有していると考えられる。１０．０ｍｇ／ｋｇでは、ＦＧ８０９４で置換されなかった受容体は、脳の全ＧＡＢＡ_A受容体の４０〜５０％を含み且つＦＧ８０９４との親和性が最も低いα１サブユニットを含む受容体である可能性が最も高い。ＦＧ８０９４（１．０ｍｇ／ｋｇ）を投与してから３０分後のα２、α３及び α１含有受容体の占有率を、より直接的に、これらのサブタイプが豊富な脳領域での［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合の置換を評価して調べた。α１選択的組織として小脳を用い、α２／α３選択的組織として脊髄を用いた。ＧＡＢＡ_A受容体の殆どのサブタイプを含む前脳も含まれた。ＦＧ８０９４（１．０ｍｇ／ｋｇ）を投与してから３０分後の［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８のｉｎｖｉｖｏ結合の阻害を表２に示す。［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合のｉｎｖｉｖｏ阻害率が受容体占有率の尺度であると仮定すると、脳の受容体部位での濃度は、Ｃｌａｒｋｅの方程式（占有率＝［薬剤］／［薬剤］＋Ｋｉ）に従って計算することができる。α１及びα ２／α３含有受容体で測定した占有率を代入すると、ラット脳のＢＺ結合部位で利用し得るＦＧ８０９４の濃度は、それぞれ７．８ｎＭ及び１３．２ｎＭである。α５含有受容体での占有率は、該受容体の量が少ないために直接測定することはできないが、Ｃｌａｒｋｅの方程式を用い、薬剤濃度と結合親和性を用いて計算し得る。ＦＧ８０９４（１ｍｇ／ｋｇ）を投与してから３０分後のα５含有受容体の占有率は９５〜９７％であると予測される。３．電気生理学的実験−ＦＧ８０９４の機能的効果検討した全ての受容体サブタイプについてほぼ最大であると思われる１μＭ用量のＦＧ８０９４並びにα１β２γ２Ｓに関する結合実験において最大であると思われる濃度の２種の標準化合物、フルニトラゼパム（１μＭ、完全受容体アゴニスト）及びＤＭＣＭ（１μＭ、完全受容体逆アゴニスト）のＧＡＢＡＥＣ₂₀ に及ぼす調節効果を図１に示す。該図は、ＦＧ８０９４がα５β２γ２では完全受容体逆アゴニストであることを示している。図２は、他のαサブユニット含有受容体に及ぼすＦＧ８０９４の効果を比較したものであり、該化合物が他のαサブユニットの組み合わせ体においてははるかに低い効力しか有していないことを示している。ＦＧ８０９４がα１β２γ２では固有の作用を有していないということは、該化合物が低親和性アンタゴニストであり、α２β２γ２受容体及びα ３β２γ２受容体においては半受容体逆アゴニストであることを示唆している。標準濃度の薬剤を用いてα１β２γ２Ｓにおける効力を比較すると、ＦＧ８０９４が機能的にα５含有受容体選択的であり、その作用を主としてこのサブタイプを介して及ぼすことが示された。発作及び認知実験（Ｉ）急性治療 − 間代性及び緊張性発作に対する平均しきい値用量の分散の一元（one-way）分析により、主たる効果は緊張性発作［Ｆ（５，４９）＝３．７０；ｐ＝０．０７］にあり、間代性発作［Ｆ（５，４８）＝２．０１；ｐ＝０．０９］ではないことが判明した。事後テストにより、ＣＧＳ８２１６のみが緊張性発作に対するしきい値用量を有意に低下させたことが明らかとなるが、これは、該化合物が痙攣誘起作用を有していたことを示している。（Ｉ）慢性治療 − 分散の分析により、間代性発作［Ｆ（３，２５）＝０．２３；ｐ＝０．８７］に対しても緊張性発作［Ｆ（３，２５）＝０．０６；ｐ＝０．９８］に対してもしきい値用量のＰＴＺには有意な治療効果がないことが判明した。これらの結果は、この実験に用いた慢性治療プロトコルでは痙攣誘起剤ＰＴＺに対する感受性が増強されないことを示している。習得試験図３ａは、９日間のトレーニング期間中の平均逃亡潜伏時間を示している。隠蔽プラットフォームに到達するまでの逃亡中の平均遊泳速度の分散を分析すると、有意な用量効果もなく［Ｆ（３，２８）＝０．８７］、有意な日数効果もなく［Ｆ（８，２１６）＝１．４４，ｐ＞０．１］、且つ用量と日数の相互作用もない［Ｆ（２４，２１６）＝１．０４，ｐ＞０．４］ことが判明した。治療及び日数ファクターにより平均逃亡潜伏時間の分散を分析すると、主たる治療効果［Ｆ（８，２８）＝３．０１，ｐ＜０．０５］、有意な日数効果［Ｆ（８，２１６）＝３４．６７，ｐ＜０．００１］はあるが、用量と日数の相互作用はない［Ｆ（２４，２１６）＝０．７５，ｐ＞０．５］ことが明らかになった。０．３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇのＦＧ８０９４を投与したグループの平均逃亡潜伏時間はビヒクル対照グループ又は０．１ｍｇ／ｋｇグループより短いようであるが、ＮｅｗｍａｎＫｅｕｌｓ事後テストではこの所見は確認されなかった。プローブ試験北東区での遊泳に費やされた時間％の分散を分析すると、有意な用量効果はない［Ｆ（３，２８）＝０．１８］ことが判明した（詳細については図３ｂ参照）が、これは、記憶力又は習得能力がグループ間で変わらないことを意味している。手がかりによる想起可視プラットフォームに到達するまでの平均逃亡潜伏時間の分散を分析すると、有意な用量効果はない［Ｆ（３，２８）＝０．５４］ことが示された。しかし、平均経路長には有意な用量効果があった［Ｆ（３，２８）＝４．２７，ｐ＜０．０５］。事後Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓテストにより、ビヒクルグループは全てのＦＧ８０９４投与グループに比べて有意に長い経路を移動したことが示された（図３ｃ）。想起テスト平均逃亡潜伏時間の分散を分析することにより、有意な用量効果［Ｆ（３，２８）＝３．５３，ｐ＜０．０５］があることが判明した。事後Ｎｅｗｍａｎ−Ｋａｅｕｌｓテストにより、ビヒクルグループの平均逃亡潜伏時間はどのＦＧ８０９４グループより長い（ｐ＜０．０５）ことが示された。これらのデータは、ＦＧ８０９４を投与したグループは、ビヒクル対照グループよりもよく隠蔽プラットフォームの位置に関する空間情報を記憶していたことを示している（図３ｄ参照）。反転学習反転学習の間には、プラットフォームを南西区の中央に移動させておいた。平均逃亡潜伏時間の分散を分析すると、有意な用量効果［Ｆ（３，２８）＝３．３１，Ｐ＜０．０５］、有意な試験効果［Ｆ（３，８４）＝９．５３，Ｐ＜０．００１］はあるが、有意な相互作用はない［Ｆ（９，８４）＝１．６６，ｐ＞０．１］ことが明らかになった。事後Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓテストにより、ビヒクルグループの平均逃亡潜伏時間は全てのＦＧ８０９４グループより有意に長い（ｐ＜０．０５）ことが示された。その後の反転学習日には、用量は平均逃亡潜伏時間に効果を及ぼさなかった。従って、これらのデータは、ＦＧ８０９４が、隠蔽プラットフォームの新たな空間位置を学習するラットの能力を高めたことを示している。論考ベンゾジアゼピン受容体アゴニストは、ヒト及び動物において不安解消作用及び抗痙攣作用を有するが、健忘症誘起作用をも有する。反対に、ＢＺ受容体逆アゴニストは、不安生成作用及び痙攣誘起作用を有するが、動物においては認知強化作用を有している。ＢＺ受容体アンタゴニストは、固有の作用を有してはいないが、ＢＺ受容体アゴニストと受容体逆アゴニストの両方の作用を遮断する。本実験は、完全ＢＺ受容体アゴニストとは対照的に、選択的α５ＢＺ受容体逆アゴニスト、ＦＧ８０９４が、動物において、痙攣誘起作用はないが認知強化作用を有することを示している。ｉｎｖｉｖｏ結合実験の結果、ＦＧ８０９４が１．０ｍｇ／ｋｇで実質的に全てのα５含有受容体を占有するが、α２／３及びα１受容体はそれぞれ３５％及び１５％以下しか占有しないことが示された。従って、ＦＧ８０９４は１．０ｍｇ／ｋｇでは、α５含有受容体選択的である。ＦＧ８０９４は１０．０ｍｇ／ｋではα１、α２及びα３含有受容体を有意に占有し、その結果、ＦＧ８０９４は１．０ｍｇ／ｋｇを超える用量ではα５含有受容体選択的ではない。電気生理学的実験において、ＦＧ８０９４は、α５β２γ２受容体サブタイプでは完全受容体逆アゴニストであり、α２又はα３を含む受容体サブタイプでは低い半受容体逆アゴニストであり、脳中の主要なサブユニット組み合わせ体であるα１β２γ２ではアンタゴニストであることが示された。これらのデータは、ＦＧ８０９４の主要なｉｎｖｉｖｏ作用が主として海馬に存在するα５含有サブタイプで発揮されることを示唆している。ＭＷＭでは、ラットを不透明の水を入れたプール中に沈めたプラットフォームを見つけるようにトレーニングする。動物は、探索戦略を導くように部屋の壁の周りに配置された種々の視覚的手がかりを用いると思われる。そのような方法は、動物が先ず部屋の「マップ」（即ち、固定された視覚的手がかりと隠蔽プラットフォームとの空間関係）を形成し、次いで隠蔽プラットフォームまでの経路を導くマップを用いなければならないので、フレキシブルな認知プロセスを想定している。プールの任意の位置に入れた、十分トレーニングを受けたラットは、多かれ少なかれ真っ直ぐに隠蔽プラットフォーム目指して泳ぐが、これは、ラットが局所領域について詳細な知識又は「認知マップ」を有しており、試験を行う度に隠蔽プラットフォームまでの新たな経路を計画し得ることを示唆している。この実験において、連続トレーニング日に隠蔽プラットフォームを見つけるまでの平均潜伏時間を示す図３ａを精査することにより、０．３ｍｇ／ｋｇ及び１．０ｍｇ／ｋｇを投与したラットは常に、ビヒクル又は０．１ｍｇ／ｋ投与グループより短い時間でプラットフォームを見つけたが、この効果から統計的な有意性を得ることはできなかったことが示される。プローブ試験においては、トレーニング試験中に沈められたプラットフォームが置かれていた区の探索に対照グループと薬剤グループが費やした時間量には差がなく、これは、認知地図を形成・利用する種々のグループの能力に差がなかったことを示唆している。同様に、可視プラットフォームを見つけるための平均潜伏時間にはグループ間に差はなかったが、これは、ＦＧ８０９４が運動系又は感覚系に作用を及ぼさないことを示している。しかし、最終可視プラットフォーム試験の６日後の通常トレーニングの初日には、隠蔽プラットフォームを見つけるまでの平均潜伏時間は、ＦＧ８０９４を投与した全てのグループで有意に短縮された。これらのデータは、ビヒクルを投与したラットより、ＦＧ８０９４を投与したラットの方がプラットフォームの位置と可視手がかりとの空間関係を良好に維持及び／又は想起したことを示している。さらに、隠蔽プラットフォームを南西区の中央の新しい位置に移動させると、１．０ｍｇ／ｋｇのＦＧ８０９４を投与したラットはビヒクルを投与したラットより速くこの新しい位置について学習した。結論として、ＦＧ８０９４は、痙攣誘起作用がない、選択的α５ＢＺ受容体逆アゴニストである。ＭＷＭ、海馬依存性空間記憶テストにおいて、ＦＧ８０９４は、ラットの空間情報記憶能力を著しく高めたが、これは、認知プロセスが強化されていることを示唆している。表１．安定にトランスフェクトした細胞上のベンゾジアゼピン部位のＫｉ値。阻害曲線は、Ｋｄの２倍の濃度の［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８で標識した受容体を用いて実施した。Ｋｉ値は、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｓｏｆ方程式に従って計算した。示されているデータは３〜６回の測定の平均値±ＳＥＭである。表２．ＦＧ８０９４投与後の３つの脳領域におけるｉｎｖｉｖｏ［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８結合の阻害マウスに［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８（０．１ｍＣｉ／ｇ）を注入し、殺す３０分前に、１０ｍｇ／ｋｇ又は１ｍｇ／ｋｇのＦＧ８０９４を腹腔内注入した。一般法に記載のように、脳領域を切除し、ホモジナイズして、濾過した。データは、対照（ビヒクル治療）動物に対する結合阻害％として表わされ、５回（１０ｍｇ／ｋｇ）又は１０回（１ｍｇ／ｋｇ）の測定の平均値±ＳＥＭである。図面の説明図１： α１β２γ２及びα５β２γ２を発現する卵母細胞におけるＧＡＢＡＥＣ₂₀ 電流応答に及ぼすフルニトラゼパム（１μＭ）、ＤＭＣＭ（１μＭ）及びＦＧ８０９４（１μ Ｍ）の効果。データは、少なくとも４つの別々の卵母細胞の平均値±標準偏差として表わされている。図２： β２γ２と共に種々のαサブユニット含有受容体を発現する卵母細胞におけるＧＡＢＡＥＣ₂₀電流応答に及ぼすＦＧ８０９４（１μＭ）の効果。データは、少なくとも４種の別々の卵母細胞の平均値±標準偏差として表わされている。図３：ビヒクル又はＦＧ８０９４（示されている用量）でＩＰ予備治療を受けてから３０分後の各治療グループについての、（ａ）各トレーニング日にＭｏｒｒｉｓ水迷路の北東区の沈められたプラットフォームを見つけるまでの平均潜伏時間、（ｂ）全試験時間（６０秒）の百分率として表された北東区の探索に費やされた時間、（ｃ）可視プラットフォームトレーニングの最終日に水迷路の北東区で可視プラットフォームを見つけるまでの平均潜伏時間、（ｄ）トレーニング最終日から６日後に北東区において沈められたプラットフォームに到達するまでの平均潜伏時間を示す。上記^(*)は、該グループの平均値がビヒクル対照グループの平均値と有意に異なることを示している（事後Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓテスト、ｐ＜０．０５と想定される）。ペレット化投与ＦＧ８０９４のペレットを実験の２時間前にＳＣ移植したこと以外は上記と類似の後続水迷路実験を開始し、１日で全トレーニングを行ったが、該実験により、この場合も、ＦＧ８０９４により行動が改善されたことが示された。２回目の実験では、上記と全く同じようにして、ビヒクル又はＦＧペレットをラットに移植した。しかし、最初の４回の遊泳試験の後、動物に［³Ｈ］ＦＧ８０９４をＩＶ注入し、３分後に、動物の脳を素早く取り出した。ｉｎｖｉｖｏ結合により、ＦＧ８０９４が脳のα５サブタイプ含有ＧＡＢＡ−_A受容体の約８５％を占有したことが示された。動物に［³Ｈ］Ｒｏ１５−１７８８を注入したこと以外は第２回目の実験と同一の第３回目の実験により、ＦＧ８０９４は非α５サブタイプ含有ＧＡＢＡ_A受容体を有意には占有しなかったことが示された。これは、（ｉ）ＦＧ８０９４が水迷路テストにおいて空間記憶力を高め、（ii）用いた用量プロトコルにより、ＦＧ８０９４の脳レベルが、他のサブタイプを含む受容体を有意に占有することなく、 α５含有ＧＡＢＡ_A受容体の８５％を占有するのに十分であったことを示している。これらのデータは、α５受容体逆アゴニストが関連認知不全を伴う神経障害の治療に有用であり、痙攣又は沈静を起こさせなかったことを示している。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１月３日【補正内容】１５．経口投与用に適合されている、請求項１０、１１、１３又は１４に記載の医薬組成物。１６．認知の強化に用いるための、請求項１２に記載の方法で検出された化合物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．痙攣を起こさせずに認知を強化する方法であって、該治療を要する患者に、ＧＡＢＡ_A α₁及び／又はＧＡＢＡ_Aα₂及び／又はＧＡＢＡ_Aα₃受容体では受容体アゴニストでも受容体逆アゴニストでもない、ＧＡＢＡ_Aα₅受容体逆アゴニストである化合物を、痙攣をおこさせずに認知を強化するのに十分有効な量投与することを含む前記方法。２．認知の強化を要する患者がアルツハイマー病に罹患しているヒトである、請求項１に記載の方法。３．認知強化化合物が、α₅受容体に対してα₁受容体の２５倍以上選択的である、請求項２に記載の方法。４．認知強化化合物が、α₅含有受容体に対してα₁、α₂及びα₃含有受容体の５０倍以上選択的である、請求項２に記載の方法。５．認知強化化合物が、α₅β₃γ₂受容体に対しては２以下、α₁β₃γ₂受容体に対しては２０以上のＫｉ（ｎＭ）値を有する、請求項２に記載の方法。６．認知強化化合物が、α₂β₃γ₂受容体に対して２０以上のＫｉ（ｎＭ）値を有する、請求項５に記載の方法。７．痙攣を起こさせずに患者の認知を強化するための薬剤の製造における、ＧＡＢＡ_Aα₁及び／又はＧＡＢＡＡα₂及び／又はＧＡＢＡ_Aα₃では受容体アゴニストでも受容体逆アゴニストでもない、ＧＡＢＡ_Aα₅受容体逆アゴニストである化合物の使用。８．患者がアルツハイマー病に罹患しているヒトである、請求項７に記載の使用。９．請求項３から６のいずれか一項に記載の受容体結合特性を有する化合物の請求項７又は８に記載の使用。１０．ＧＡＢＡ_Aα₁及び／又はＧＡＢＡ_Aα₂及び／又はＧＡＢＡ_Aα₃受容体では受容体アゴニストでも受容体逆アゴニストでもない、ＧＡＢＡ_Aα₅受容体逆アゴニストである化合物及び医薬上許容し得る担体を含む医薬組成物。１１．請求項３から６のいずれか一項に記載の特性を有する化合物を有効量含む、アルツハイマー病の治療に適した、請求項１０に記載の医薬組成物。１２．痙攣を起こさせずに認知を高め得る化合物を検出する方法であって、ＧＡＢＡ_A結合受容体を用いて、前記化合物がα₅逆アゴニストであって、α₁及び／又はα₂及び／又はα₃ではアゴニストでも逆アゴニストでもないことを決定することを含む前記方法。１３．該化合物が請求項３から６のいずれか一項に記載の特性を有する、請求項１２に記載の方法。１４．請求項１２又は１３に記載の方法により検出された化合物及び医薬上許容し得る担体を含む医薬組成物。１５．経口投与用に適合されている、請求項１０、１１、１３又は１４に記載の医薬組成物。１６．請求項１２に記載の方法で検出された化合物。