JPH11504345A

JPH11504345A - オリゴマー化合物合成の改良法

Info

Publication number: JPH11504345A
Application number: JP9519869A
Authority: JP
Inventors: ラビクマー，バスリンガ・ティー
Original assignee: Isis Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ionis Pharmaceuticals Inc
Priority date: 1995-11-17
Filing date: 1996-11-15
Publication date: 1999-04-20
Also published as: EP0886638A4; US5705621A; US6051699A; US5859232A; WO1997019092A1; EP0886638A1; AU1021097A

Abstract

(57)【要約】ホスホジエステル、ホスホロチオエート、およびホスホロジチオエート共有結合を有するオリゴマー化合物を製造する、合成方法を提供する。また、そのような方法に有用な合成中間体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】オリゴマー化合物合成の改良法発明の属する技術分野本発明は、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合を有するオリゴマー化合物の調製方法、およびその調製に有用な中間体に関する。発明の背景オリゴヌクレオチドおよびその類似体は、分子生物学における、ある種の方法において、プローブ、プライマー、リンカー、アダプター、および遺伝子フラグメントとして開発され使用されてきた。これらの方法に使用されるオリゴヌクレオチドの修飾には、例えばフルオレセイン、ビオチン、ジゴキシゲニン、アルカリホスファターゼ、または他のリポーター分子のような、非同位体標識による標識がある。他の修飾は、生成する類似体のヌクレアーゼに対する安定性を向上するために、リボースリン酸バックボーンに施されてきた。これらの修飾には、メチルホスホネート、ホスホロチオエート、及びホスホロジチオエート結合、そして２’−Ｏ−メチルリボース糖単位の使用がある。更なる修飾には、取り込みおよび細胞分布を調節するために行われるものがある。診断および治療の両方にこの化合物をうまく利用することと共に、改良されたオリゴヌクレオチドおよびその類似体が要求され続けている。ほとんどの疾病状態を含む、多細胞生物における身体状態のほとんどが、タンパク質によって影響されることはよく知られている。そのようなタンパク質は、直接的に作用するか、あるいは、酵素的もしくは他の機能を通じて作用して、動物およびヒトにおける多くの疾病および調節機能に大きな割合で寄与している。疾病状態に対しては、古典的な治療は一般に、そのようなタンパク質との相互作用に焦点を合わせ、それらタンパク質の、病気の原因となる、もしくは病気を増強する機能を調節する努力をしてきた。より新しい治療のアプローチでは、そのようなタンパク質の実際の生成を調節することが望まれている。タンパク質の生成を妨げることにより、最小の副作用で最大の治療効果が得られうる。好ましくないタンパク質の生成につながる遺伝子の発現を妨げるか、あるいは調節することは、そのような治療のアプローチの一般的な目的である。特定の遺伝子の発現を阻害する一つの方法は、オリゴヌクレオチド、特に、特定の標的メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）配列に相補的なオリゴヌクレオチドを使用するものである。現在、そのような使用のために、いくつかのオリゴヌクレオチドについて臨床試験が行われている。ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドは、現在、ヒトの様々な疾病状態の臨床試験において、アンチセンス試薬として使用されており、それには抗ウィルス性試薬としての使用も含まれている。転写因子は、転写の調節の際、二本鎖ＤＮＡと相互作用する。オリゴヌクレオチドは、転写因子の競合阻害剤として働き、その作用を調節することが可能である。いくつかの最近の報告は、そのような相互作用について記載している（Ｂielinska,Ａ.ら,Ｓcience,1990,250,997-1000;およびＷu,Ｈ.ら,Ｇene,1990 ,89,203-209を参照すること）。オリゴヌクレオチドおよびその類似体は、タンパク質の間接的および直接的調節剤（regulator）としてのそのような使用に加えて、診断試験における使用も見出された。そのような診断試験は、生物の体液、組織、無傷の（intact）細胞、または単離された細胞成分を使用して行うことが可能である。遺伝子発現の阻害と同様、診断への適用は、オリゴヌクレオチドおよびその類似体が、相補的な核酸鎖とハイブリダイズする能力を利用する。ハイブリダイゼーションは、オリゴマー化合物の、ワトソン−クリックおよび／もしくはフッグステン塩基対を介した、ＲＮＡもしくはＤＮＡへの配列特異的水素結合である。そのような塩基対の塩基は、互いに相補的であると表現される。オリゴヌクレオチドおよびその類似体は研究のための試薬としても広く利用される。それらは、多くの他の生体分子の機能を理解するために、ならびに他の生体分子の調製に有用である。例えば、オリゴヌクレオチドおよびその類似体のＰＣＲ反応におけるプライマーとしての使用は、発展中にある商業界を生み出した。ＰＣＲは商業の、そして研究室の中心的存在となり、ＰＣＲの適用は多様となった。例えば、ＰＣＲの技術は今や法廷、古生物学、進化論の研究、および遺伝相談の分野の使用が見出されている。商業化によって、分子生物学の訓練を受けていない人がＰＣＲを適用する際の助けとなるキットの開発につながった。オリゴヌクレオチドおよびその類似体は、天然物および合成物のどちらも、そのようなＰＣＲ技術においてプライマーとして使用される。オリゴヌクレオチドおよびその類似体は、他の実験方法にも使用される。これらの使用のいくつかは、分子クローニング−実験マニュアル(Ｍolecular Ｃloni ng,ＡＬaboratory Ｍanual)，第２版,Ｊ.Ｓambrookら編集,Ｃold Ｓpring Ｈar bor Ｌaboratory Ｐress,1989;および、分子生物学における最新プロトコール( Ｃurrent Ｐrotocols Ｉn Ｍolecular Ｂiology),Ｆ.Ｍ.Ａusubel ら編集,Ｃurr ent Ｐublications,1993のような、一般的な実験マニュアルに記載されている。そのような使用には、抗体とオリゴマー化合物を用いた発現ライブラリーのスクリーニング、ＤＮＡシークエンシング、in vitroでのポリメラーゼ連鎖反応によるＤＮＡの増幅、およびクローンＤＮＡの部位特異的変異導入における、合成オリゴヌクレオチドプローブとしての使用がある。分子クローニング−実験マニュアル（上述）の第２巻を参照すること。また、分子生物学における最新プロトコール（上述）の第２巻中の“ＤＮＡ−タンパク質相互作用およびポリメラーゼ連鎖反応（ＤＮＡ-proteininteractions and Ｔhe Ｐolymerase Ｃhain Ｒeaction ）”も参照すること。オリゴヌクレオチドおよびその類似体は、所望の使用に合わせて作ることができる、特別な仕様の性質を有するように合成することが可能である。従って、診断における、研究試薬としての、そして治療物質としての有用性を向上するために、多くの化学修飾がオリゴマー化合物に導入されてきた。そのような修飾には、標的鎖への結合を増強する（すなわち、その融解温度（Ｔｍ）を上昇させる）ため；オリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド−標的複合体の同定を補助するため；細胞侵透性を向上するため；オリゴヌクレオチドおよびその類似体の構造もしくは活性を低下もしくは妨害するヌクレアーゼおよび他の酵素に対して安定化させるため;一旦標的に配列特異的に結合したものの分裂（disruption）（終止イベント）の方法を提供するため；そして、オリゴヌクレオチドの薬物動態性を向上するために設計されたものがある。規定された配列のオリゴヌクレオチドを生成するための、リンを含有する共有結合を介したヌクレオシドのカップリングの多くの方法が、化学論文に開示されている。最も一般的な方法の一つは、ホスホルアミダイト法（例えば、ホスホルアミダイト法によるオリゴヌクレオチド合成の進歩（Ａdvances in the Ｓynthe sis of Ｏligonucleotides by the Ｐhosphoramidite Ａpproach),Ｂeaucage,Ｓ .Ｌ.; Ｉyer,Ｒ.Ｐ.,Ｔetrahedron,1992,48,2223-2311；およびそこに引用されている参考文献を参照すること）であり、その方法では、遊離の水酸基を有するヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドを、弱酸の存在下で、保護されたシアノエチルホスホルアミダイト単量体と反応させ、ホスファイト結合構造を生成する。ホスファイト結合の酸化に次いで、シアノエチル基を加水分解し、目的のホスホジエステルもしくはホスホロチオエート結合を生成する。しかしながら、ホスホルアミダイト法には重大な欠点がある。例えば、シアノエチルホスホルアミダイト単量体はかなり高価である。典型的なホスホルアミダイトのカップリングにおいては、かなりの量の単量体が未反応となるが、未反応の単量体を回収できるとしても、大変な困難を伴う。シアノエトキシ基のβ−脱離を使用するもう一つの欠点は、リン保護基を除去する際のアクリロニトリルの生成である。アクリロニトリルは毒性の高い試薬であり、発癌物質の疑いがある（1994-1995 Ａldrich Ｃhemical Ｃompany Ｃatal ogの３２ページを参照すること）。また、アクリロニトリルは、チミジンと環状構造を形成し、ハイブリダイゼーション能力の低下したオリゴマー化合物を生成する疑いがある。これらの修飾されたオリゴマー化合物は、目的のオリゴマー化合物から分離するのが困難なため、好ましくない。従って、当該分野において、これらの問題を克服する合成法の必要性が残されている。オリゴヌクレオチド化合物の固相合成のためのいくつかの方法が知られている。これらは一般に、以下の米国特許に開示されている。第4,458,066号（1984.7. 3発行）；第4,500,707号（1985.2.19発行）；および第5,132,418号（1992.7.21 発行）。更に、ホスホルアミダイト中間体を使用したオリゴヌクレオチドの調製法は、米国特許第4,973,679号（1990.11.27発行）に開示されている。ホスホルアミダイトの調製法は、米国特許第4,415,732号（1983.11.15発行）に開示されている。ホスホルアミダイトヌクレオシド化合物は、米国特許第4,668,777号（1987.5. 26発行）に開示されている。 β−脱離リン保護基を使用したオリゴヌクレオチドの調製法は、米国特許第Ｒ e.34,069号（1992.9.15発行）に開示されている。 β−脱離またはアリル化リン保護基を使用したオリゴヌクレオチドの調製法は、米国特許第5,026,838号（1991.6.25発行）に開示されている。発明の概要共有結合を含有する、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートを有するオリゴマー化合物の調製方法を提供することが、本発明の目的である。更に、そのような方法に有用な合成中間体を提供することが、本発明の目的である。他の目的は、当該分野の技術者に明白であろう。共有結合を含有する、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエートを有するオリゴマー化合物の調製方法を提供する本発明は、これらの目的を満足させる。本発明の１つの観点においては、式IX：［式中：ＺはＣＮ、−Ｓｉ（Ｒ₉）₃、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群より選択される）であり；Ｒ₉はそれぞれ独立して、１から約１０個の炭素原子を有するアルキル、または６から約１０個の炭素原子を有するアリールであり；Ｘ₁はＯまたはＳである。］を有する部分を含有するオリゴマー化合物の調製方法が提供される。この方法は、（ａ）式II：［式中：Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、または−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；Ｘ₃は１から１０個の炭素を有するアルキルであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_p（ｐは１から約１０である）であり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｒ₃およびＲ_3aはそれぞれ水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基（nu cleobase）、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基であり；ｎは０から約５０であり；Ｑはそれぞれ、リン保護基、好ましくは−Ｘ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚであり；Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または４から７個の原子を含有し、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原子を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｒ₆は１から１０個の炭素を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルである。］を有する化合物を提供し；（ｂ）式IIの化合物を、式III：［式中：Ｒ_3aは水素であり；そして、Ｒ₂は水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであるが、ただし、Ｒ₂およびＲ₃の両方が同時に固相支持体に結合されたリンカーであることはない。］を有する化合物と反応させてオリゴマー化合物を生成する、の各工程を含む。本発明の方法のある好ましい具体例は、オリゴマー化合物の酸化の工程を更に含む。好ましい具体例では、本発明の方法は、酸化されたオリゴマー化合物を転換して、式III（ｎは１ずつ増加する）を有する更なる化合物を生成することを更に含む。本発明の方法は、酸化工程の前、もしくは後に、キャッピングの工程を含むのが好ましい。本発明の他の好ましい具体例は、オリゴマー化合物を切断し、式Ｉ：を有する化合物を生成する工程を含む。本発明のある好ましい具体例では、ＺはＣＮである。本発明の他の好ましい具体例では、Ｒ₆はそれぞれイソプロピルである。好ましい具体例では、Ｘ₁およびＸ₂はそれぞれ独立してＯまたはＳであることが可能である。好ましい具体例では、式IIの化合物は、式Ｖ：を有する化合物と、式VI：を有する化合物を酸の存在下で反応させることによって得られる。好ましくは、Ｒ₅はＮ，Ｎ−ジイソプロピルアミノである。また、本発明は式VII：［式中：Ｘ₁はＯまたはＳであり；Ａは（Ｒ₇）（Ｒ₈）Ｐ−であり；Ｒ₈はＲ₅であるか、または式Ｘ：［式中：Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；Ｘ₃は１から１０個の炭素を有するアルキルであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_p（ｐは１から約１０である）であり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または、４から７個の原子からなり、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原予を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｑはそれぞれリン保護基、好ましくは−Ｘ₁Ｈもしくは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚであり；ｍは０から約５０であり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基である］を有し；そして、Ｒ₇はＲ₅であるか、または式VIII：［式中：Ｒ₃は水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；そして、ｎは、０から約５０であり、ただしｍとｎの合計は５０を越えない］を有し；そして、ＺはＣＮ、−Ｓｉ（Ｒ₉）₃、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群から選択される）であり；Ｒ₉はそれぞれ独立して、１から約１０個の炭素原子を有するアルキル、または６から約１０個の炭素原子を有するアリールである。］を有する新規の化合物を提供する。本発明の化合物のある好ましい具体例では、ＺはＣＮである。他の好ましい具体例では、ＺはＳｉ（Ｒ₉）₃である。更に好ましい具体例では、ＡはＨまたは− Ｐ（Ｒ₅）₂である。ある好ましい具体例では、Ｒ₅は−Ｎ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂）₂であり、他の好ましい具体例では、Ｒ₇は式VIIを有する。好ましくは、ｎは１から３０であり、１から約２０がより好ましい。ある好ましい具体例ではｎは０である。より好ましい具体例では、ＺはＣＮであり、Ｘ₁はＯであり、そしてＡはＨであるか；または、ＺはＣＮであり、Ｘ₁はＳであり、そしてＡはＨである。他の好ましい具体例では、ＺはＣＮであり、Ｘ₁はＯであり、そしてＲ₆はそれぞれイソプロピルである。更なる好ましい具体例では、ＺはＣＮであり、Ｘ₁はＳであり、そしてＲ₆はそれぞれイソプロピルである。特に好ましい具体例では、本発明の化合物は式IV：［式中、Ｒ₂は好ましくは固相支持体に結合されたリンカー、または水素である。］を有する。好ましい具体例では、ｍおよびｎはそれぞれ０であり；またはＺはＣＮであり、かつＸ₁はＯである。本発明はまた、本発明の方法により製造される生成物を提供する。好ましい具体例の説明本発明は、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合を有するオリゴマー化合物の調製方法、および、その調製に有用な中間体を提供する。本発明の好ましい具体例では、式IX：［式中：ＺはＣＮ、−Ｓｉ（Ｒ₉）₃、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群より選択される）であり；Ｒ₉はそれぞれ独立して、１から約１０個の炭素原子を有するアルキル、または６から約１０個の炭素原子を有するアリールであり；Ｘ₁はＯまたはＳである。］を有する部分を含有するオリゴマー化合物の調製方法が提供される。該方法は、（ａ）式II：［式中：Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、または−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；Ｘ₃は１から１０個の炭素を有するアルキルであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_p（ｐは１から約１０である）であり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｒ₃およびＲ_3aはそれぞれ水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基であり；ｎは０から約５０であり；Ｑはそれぞれ、リン保護基、好ましくは−Ｘ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚであり；Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または４から７個の原子を含有し、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原子を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｒ₆は１から１０個の炭素を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルである。］を有する化合物を提供し；（ｂ）式II：の化合物を、式III：［式中：Ｒ_3aは水素であり；そしてＲ₂は水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであるが、ただし、Ｒ₂およびＲ₃の両方が同時に固相支持体に結合されたリンカーであることはない。］を有する化合物と反応させてオリゴマー化合物を生成する、の各工程を含む。本発明の方法は、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、および／またはホスホロジチオエート結合を含む、多様な結合によって結合された単量体サブユニットを含有するオリゴマー化合物の調製に有用である。ここで使用される場合、“オリゴマー化合物”という用語は、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、および／またはホスホロジチオエート結合によって結合された複数の単量体サブユニットを含む化合物を指して使用される。オリゴマー化合物にはオリゴヌクレオチド、その類似体、および合成オリゴヌクレオチドがある。上述の式IIもしくはIIIを有する、単量体もしくは、より高次のシントン（synthons）には、天然の（すなわち自然に存在する）、および合成の（例えば、天然物を修飾した、あるいは、完全に合成した）ヌクレオシドの両方がある。好ましい具体例では、式IIおよび式IIIの化合物を反応させて、式IVの化合物を生成する。式IIおよび式IIIの化合物をカップリングさせる本発明の方法には、液相および固相化学の両方がある。代表的な液相技術は、本発明の出願人に譲渡されている、米国特許第5,210,264号に述べられている。好ましい具体例では、本発明の方法は、反復固相オリゴヌクレオチド合成法において用いるのに使用される。代表的な固相技術は、標準的なホスホルアミダイト化学を利用したＤＮＡおよびＲＮＡ合成に一般的に使用されるものである（例えば、オリゴヌクレオチドおよび類似体のためのプロトコール；Ｐrotocols Ｆor Ｏligonucleotides Ａnd Ａnalogs,Ａgrawal,Ｓ.編集,Ｈumana Ｐress,Ｔotowa,ＮＪ,1993 を参照すること）。好ましい固相合成では、活性化されたリン酸化合物としてホスホルアミダイトを利用する。この技術では、ホスホルアミダイトの単量体を、伸長するオリゴマー鎖の遊離水酸基と反応させ、中間体であるホスファイト化合物を生成し、続いてそれを標準的な方法を使用して酸化し、Ｐ^V状態にする。この技術は、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、およびホスホロジチオエート結合を含む、数種の型の結合の合成に、一般に使用される。典型的には、そのような方法の第一工程では、当該分野で知られる標準的な方法および手順を使用して、保護された５’−水酸基を含有する第一の単量体もしくはより高次のサブユニットを、通常はリンカーを介して、固相支持体に結合させる。次いで、支持体に結合した単量体もしくはより高次の第一のシントンを処理して５’−保護基を除去し、Ｒ₂が固相支持体に結合されたリンカーである、式IIIの化合物を生成する。典型的には、これは酸で処理することによって行われる。次いで、固相支持体に結合した単量体を式IIの化合物と反応させて式IVの化合物を生成し、これは式IXのホスファイトもしくはチオホスファイト結合を有する。好ましい具体例では、式IIおよびIIIのシントンを、例えば１Ｈ−テトラゾール、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール、もしくはジイソプロピルアミノテトラゾリドのような活性化試薬の存在下、無水条件下で、反応させる。好ましい具体例では、式IXの結合を含有するホスファイトもしくはチオホスファイト化合物を下記のように酸化し、Ｘ₁およびＸ₂がそれぞれＯまたはＳであることが可能である、式ＸＩの結合を有する化合物を生成する。酸化試薬の選択により、式IXの結合が、酸化されて、ホスホトリエステル、チオホスホトリエステル、またはジチオホスホトリエステル結合のいずれになるかが決定する。一般に、ホスファイトトリエステル、チオホスファイトトリエステル、もしくはジチオホスファイトトリエステルの酸化の前、もしくは後のいずれかに、キャッピングの工程を行うのが好ましい。そのようなキャッピングの工程には、カップリングサイクルで反応しなかった鎖をブロックすることによってオリゴマー鎖が短くなるのを防止するという利点があることが、一般に知られている。キャッピングに使用される代表的な試薬は、無水酢酸である。他の適当なキャッピング試薬および方法論は、1989年３月28日発行の米国特許第4,816,571号に見出すことができる。酸による処理によって５’−水酸基保護基を除去し、固相支持体に結合したオリゴマーを更なる式III（Ｒ_3aは水素である）の化合物に転換し、これは次に反復合成に関与できる、すなわち、更なる式IIの化合物と反応させることができる。この過程を、目的の長さのオリゴマーが生成するまで繰り返す。次いで、完成したオリゴマーを固相支持体から切断する。保護された官能基の保護基除去の前もしくは後に行うことができる切断工程により、Ｒ₂が水素である式Ｉを有する化合物が生成する。切断中に、単量体サブユニット間の結合は、ホスホトリエステル、チオホスホトリエステル、もしくはジチオホスホトリエステル結合から、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、もしくはホスホロジチオエート結合に転換される。この転換は、酸素もしくは硫黄保護基である式Ｚ− ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−の損失によっておこるものである。Ｚの種類により、酸素もしくは硫黄保護基の損失は、δ−脱離機構またはδ−断片化（δ- fragmentation）機構のどちらかを介しておこると考えられる。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、Ｚがシリルではない電子求引基である場合の酸素もしくは硫黄保護基の損失は、下記の図Ｉに示すように、δ−脱離機構を介しておこると考えられる。この機構では、まず最初に、塩基が電子求引基Ｚに隣接する炭素原子から、酸性プロトンを引き離す。上記の図Ｉに示すような電子の共鳴運動により、δ−脱離反応を介して酸素もしくは硫黄保護基の損失が生じ、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、もしくはホスホロジチオエート結合が形成されると考えられる。脱保護の他の生成物は、電子求引性置換基Ｚを１−位に有する、１−置換−１，３−ブタジエンである。置換基Ｚは、共鳴、誘起、もしくは他の電子求引機構により、隣接する炭素原子からのプロトンの引抜を促進するように選択される電子求引基であることが可能である。従って、Ｚは、本発明の方法を妨げない限り、様々な電子求引性置換基のいずれであることも可能である。好ましい、シリルではない電子求引性Ｚ基には、ＣＮ、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール基、スルホキシル基、スルホニル基、チオ基、置換されたスルホキシル基、置換されたスルホニル基、または置換されたチオ基（置換基は、アルキル、アリール、またはアルカリールからなる群から選択される）がある。より好ましい具体例では、Ｚはシアノである。Ｚはまた、置換基がアルキル、アリール、もしくはその両方である、三置換シリル部分であることも可能である。特定の理論に拘束されることを望むものではないが、Ｚがそのような三置換シリル部分である場合の酸素もしくは硫黄保護基の損失は、下記の図IIに示す、６−断片化機構を介しておこると考えられる。この図において、求核試薬がシリルのケイ素原予を攻撃し、上記の図IIに示すような電子の共鳴運動により、６−断片化機構を介して酸素もしくは硫黄保護基の損失が生じ、その結果、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、もしくはホスホロジチオエート結合が形成されると考えられる。脱保護の他の生成物は、１，３−ブタジエン、およびＮｕ−Ｓｉ（Ｒ₃）₃である。酸素もしくは硫黄保護基のδ−脱離反応を開始させるために、多様な塩基を使用することが可能である。それらには、水酸化アンモニウム水溶液、メチルアミン水溶液、またはＤＢＵ（１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７ −エン）がある。酸素もしくは硫黄保護基のδ−断片化反応を開始させるために、多様な求核試薬を使用することが可能である。それらには、水酸化アンモニウム、フッ化物イオン、アルキルアミン、水性塩基、およびアルキルアミンを水酸化アンモニウムと組み合わせたものがある。得られる生成物には、ホスフェート、ホスホロチオエート、およびホスホロジチオエートを含有する化合物がある。フッ化物イオンとの接触は、テトラヒドロフラン、アセトニトリル、ジメトキシエタン、もしくは水のような溶媒中で行うのが好ましい。フッ化物イオンは、フッ化テトラアルキルアンモニウム（例えば、フッ化テトラブチルアンモニウム（ＴＢＡＦ））、フッ化カリウム、もしくはフッ化セシウムから選択された一個あるいはそれ以上の塩の形で供給されるのが好ましい。好ましくは、δ−脱離反応もしくはδ−断片化反応を介する酸素もしくは硫黄保護基の除去のための条件により、固相支持体からのオリゴマー化合物の切断も行われる。本発明の方法は、ホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合を有する、多様なオリゴマー化合物の合成に適用することが可能である。ここで使用する場合、“オリゴマー化合物”という用語は、そのようなホスファイト、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合によって連結された、二個あるいはそれ以上の単量体サブユニットを含有するポリマー化合物を意味する。合成サイクルの間、式IIおよび式IIIで表されるシントン中に存在する、先在する任意のヌクレオシド間結合を保護するのが好適である。従って、置換基Ｑは、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、またはホスホロジチオエート結合のようなリン結合を保護するために使用される、多様なリン保護基のいずれであることも可能である。本発明の好ましい具体例では、ＱはＸ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂ −ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚである。他のリン保護基の例には、シアノエチル基およびジフェニルメチルシリルエチル（ＤＰＳＥ）基がある。他の代表的な保護基は、Ｂeaucageら,Ｔetrahedron 1992,48,2223-2311、および、Ｂeaucageら,Ｔet rahedron 1993,49,6123-6194に開示されており、この開示を全体として本明細書の一部としてここに引用する。好ましい具体例では、本発明の方法はオリゴヌクレオチドおよびその類似体の調製に使用される。ここで使用する場合、“オリゴヌクレオチド類似体”という用語は、自然に存在する（すなわち“天然の”）、および自然に存在しない（“ 合成の”）部分のどちらも含有することが可能である化合物を意味し、例えば、修飾された糖および／または核塩基部分を有するヌクレオシドサブユニットがある。そのようなオリゴヌクレオチド類似体は、典型的には、自然に存在するもしくは合成の野生型のオリゴヌクレオチドと、構造的には区別できるが、機能的には互換性がある。従って、オリゴヌクレオチド類似体には、例えば標的とのハイブリダイゼーションによって、目的のＲＮＡもしくはＤＮＡ鎖の構造および／またはダイゼーションによって、目的のＲＮＡもしくはＤＮＡ鎖の構造および／または機能を模倣するのに効果的に機能するような構造の全てが含まれる。合成ヌクレオシドという用語は、本発明の目的では、修飾されたヌクレオシドを指す。代表的な修飾には、自然に存在しない核塩基、ヌクレオシドの糖部分、もしくは両者が同時に得られる、ヌクレオシドの複素環塩基部分の修飾がある。代表的な核塩基には、アデニン、グアニン、シトシン、ウリジン、およびチミン、ならびに、キサンチン；ヒポキサンチン；２−アミノアデニン；アデニンおよびグアニンの６−メチルおよび他のアルキル誘導体；アデニンおよびグアニンの２−プロピルおよび他のアルキル誘導体;５−ハロウラシルおよびシトシン；６−アゾウラシル、シトシンおよびチミン；５−ウラシル（偽ウラシル）；４− チオウラシル；８−ハロ、オキサ、アミノ、チオール、チオアルキル、ヒドロキシル、および他の８−置換アデニンおよびグアニン；５−トリフルオロメチルおよび他の５−置換ウラシルおよびシトシン；７−メチルグアニンのような、他の自然に存在しないもしくは天然の核塩基が含まれる。更なる、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基には、米国特許第3,687,808号（Ｍeriganら）；アンチセンスの研究と応用（Ａntisense Ｒesearch and Ａpplication）のＳang hviによる第１５章,Ｓ.Ｔ.ＣrookeおよびＢ.Ｌebleu(編),ＣＲＣＰress,1993; Ｅnglischら,Ａngewandte Ｃhemie,国際版,1991,30,613-722（特に622および623 ページを参照すること）；および、ポリマーの科学と技術の簡潔事典(Ｃoncise Ｅncyclopedia of Ｐolymer Ｓcience and Ｅngineering),Ｊ.Ｉ.Ｋroschwitz( 編),Ｊohn Ｗiley ＆Ｓons,1990,858-859ページ;Ｃook,Ｐ.Ｄ.,抗癌剤のドラッグデザイン（Ａnti-Ｃancer Ｄrug Ｄesign）,1991,6,585-607に開示されているものがある。更に、‘ヌクレオシド塩基’という用語は、最も古典的な意味ではヌクレオシド塩基ではないがヌクレオシド塩基として働く、ある種の‘万能塩基 ’を含むヌクレオシド塩基のような働きをすることが可能な複素環化合物を含む。特に万能塩基として挙げられるのは３−ニトロピロールである。本発明に適用しうる代表的な糖の２’修飾（Ｒ₁の位置）には、フルオロ、Ｏ −アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアルコキシ、保護されたＯ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルアミノアルキル、Ｏ−アルキルイミダゾール、および、式（Ｏ−アルキル）_m（ｍが１から約１０である）のポリエーテルがある。これらのポリエーテルの中で好ましいのは、クラウンエーテル、およびＯuchiら，薬剤の設計と発見(Ｄrug Ｄesign and Ｄiscovery)1992,9,93;Ｒavasioら,Ｊ．Ｏrg.Ｃhem.1991,56,4329；およびＤelgardoら,Ｃritical Ｒeviews in Ｔher apeutic Ｄrug Ｃarrier Ｓystems 1992,9,249に開示されているもののような、直鎖および環状ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）および（ＰＥＧ）−含有基である。更なる糖の修飾は、Ｃook,Ｐ.Ｄ．（上述）に開示されている。フルオロ、Ｏ−アルキル、Ｏ−アルキルアミノ、Ｏ−アルキルイミダゾール、Ｏ−アルキルアミノアルキル、およびアルキルアミノ置換は、２’および５’置換ピリミジンヌクレオチドを有するオリゴマー化合物（Ｏligomeric Ｃompounds having Ｐ yrimidine Ｎucleotide(s) with 2'and 5'Ｓubstitutions）と題する、１９９５年３月６日付けの米国特許出願第08/398,901号に記載されている。リボース環にＯ−置換基を有する糖もまた、本発明に適用しうる。代表的な環のＯ−置換基には、Ｓ、ＣＨ₂、ＣＨＦ、およびＣＦ₂がある（例えば、Secrist ら，第１０回国際円卓会議“ヌクレオシド、ヌクレオチド、およびその生物学的適用”の“プログラムおよび要約”の要約２１(Ａbstract 21,Ｐrogram ＆Ａbs tracts,Ｔenth Ｉnternational Ｒoundtable,Ｎucleosides,Ｎucleotides and t heir Ｂiological Ａpplications)Ｐark Ｃity,Ｕtah,Ｓept.16-20,1992を参照すること）。ここで使用する場合、“アルキル”という用語は、直鎖、分枝鎖、および脂環式炭化水素の基を含むが、それらに限定されるものではない。本発明のアルキル基は置換されていてもよい。代表的なアルキル置換基は、米国特許第5,212,295 号、カラム１２の４１−５０行に開示されている。ここで使用する場合、“アルアルキル”という用語は、例えばベンジル基のような、アリール基を有するアルキル基を示す。“アルカリール”という用語は、例えばメチルフェニル基のような、アルキル基を有するアリール基を示す。“アリール”基は芳香環式化合物であり、フェニル、ナフチル、アントラシル、フェナントリル、ピレニル、およびキシリルを含むが、それらに限定されるものではない。ここで使用する場合、“複素環アルキル”という用語は、一個あるいはそれ以上のヘテロ原子（すなわち炭素ではない原子）を有するアルキル環系を示す。好ましい複素環アルキル基には、例えば、モルホリノ基がある。ここで使用する場合、“複素環アルケニル”という用語は、一個あるいはそれ以上の二重結合、および一個あるいはそれ以上のヘテロ原子を有する環系を示す。好ましい複素環アルケニル基には、例えば、ピロリジノ基がある。本発明の好ましい具体例では、Ｒ₂、Ｒ₃、またはＲ_3aは、固相支持体に結合されたリンカーであることが可能である。固相支持体は、Ｃaruthersの米国特許第 4,415,732号；4,458,066号；4,500,707号；4,668,777号；4,973,679号；および5 ,132,418号、そして、Ｋosterの米国特許第4,725,677号およびＲe.34,069号に記載されているような、固相合成方法論における固相として機能することができる物質である。リンカーは、固相合成技術において、最初のシントン分子の官能基（例えば水酸基）に固相を結合させるために働く短い分子として、当該分野で知られている。好適なリンカーは、例えば、オリゴヌクレオチドおよび類似体−実用的アプローチ（Ｏrigonucleotides Ａnd Ａnalogues ＡＰractical Ａpproac h）Ｅkstein,Ｆ.（編）,ＩＲＬＰress,Ｎ.Ｙ.,1991の第１章、１−２３ページに開示されている。本発明に係る固相支持体には、例えば、定孔ガラス(controlled pore glass；ＣＰＧ)、オキサリル化−定孔ガラス(例えば、Ａlulら,Ｎucleic Ａcids Ｒesea rch 1991,19,1527を参照すること）、ＴentaＧel支持体−アミノポリエチレングリコール誘導体化支持体（例えば、Ｗrightら,Ｔetrahedron Ｌetters 1993,34, 3373を参照すること）、およびＰoros−ポリスチレン／ジビニルベンゼンのコポリマーを含む、固相方法論における使用に好適なものとして、当該分野で一般に知られるものがある。本発明のある好ましい具体例では、Ｒ₂、Ｒ₃、またはＲ_3aは水酸基保護基であることが可能である。多様な水酸基保護基を、本発明の方法に使用することが可能である。好ましくは、保護基は、塩基性条件下で安定であるが、酸性条件下で除去することが可能なものである。一般に、保護基は、特定の反応条件に対して化学的官能基を不活性にし、そして、分子の残部に実質上の損傷を与えることなく、分子中のそのような官能基部分に付加および除去することが可能である。代表的な水酸基保護基は、Ｂeaucageら,Ｔetrahedron 1992,48,2223-2311；および、ＧreeneおよびＷuts，有機合成における保護基（Ｐrotective Ｇroups in Ｏr ganic Ｓynthesis）第２版，第２章,Ｊohn Ｗiley ＆Ｓons,Ｎew Ｙork,1991に開示されている。Ｒ₂、Ｒ₃、およびＲ_3aに使用される好ましい保護基には、ジメトキシトリチル（ＤＭＴ）、モノメトキシトリチル、９−フェニルキサンテン− ９−イル（Ｐｉｘｙｌ）、および９−（ｐ−メトキシフェニル）キサンテン−９ −イル（Ｍｏｘ）がある。Ｒ₂またはＲ₃基を、当該分野でよく知られる技術により、本発明のオリゴマー化合物から除去し、遊離の水酸基を生成することが可能である。例えば、ジメトキシトリチル保護基は、ギ酸、ジクロロ酢酸、トリクロロ酢酸、ｐ−トルエンスルホン酸のようなプロトン酸、または例えば臭化亜鉛のようなルイス酸によって除去することができる。例えば、Ｇreene and Ｗuts（上述）を参照すること。本発明の好ましい具体例では、アミノ基を、例えば２’−アルコキシ基（例えばＲ₁がアルコキシである）のような、アルキルもしくは他の基に付加する。そのようなアミノ基は、自然に存在するあるいは自然に存在しない核塩基中にも、通常存在する。一般的に、これらのアミノ基は、本発明のオリゴマー化合物の合成の間、保護された形態であることが好ましい。これらの目的に適した、代表的なアミノ保護基は、ＧreeneおよびＷuts，有機合成における保護基(Ｐrotective Ｇroups in Ｏrganic Ｓynthesis)，第２版,第７章,Ｊohn Ｗiley ＆Ｓons,Ｎ ew Ｙork,1991に述べられている。一般に、ここで使用する場合、“保護された ”という用語は、“核塩基”のような分子の部分に関連して使用される場合、分子部分が、保護基によって保護された一個あるいはそれ以上の官能基を含有することを指す。ホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート結合を生成するための酸化の際に使用される硫化（sulfurizing）試薬には、Ｂeaucage試薬（例えば、Ｉyer, Ｒ.Ｐ．ら,Ｊ.Ｃhem.Ｓoc.,1990,112,1253-1254およびＩyer,Ｒ.Ｐ.ら,Ｊ.Ｏrg. Ｃhem.,1990,55,4693-4699を参照すること）；二硫化テトラエチルチウラム（例えば、Ｖu,Ｈ.,Ｈirschbein,Ｂ.Ｌ.,Ｔetrahedron Ｌett.,1991,32,3005-3008を参照すること）;四硫化ジベンゾイル（例えば、Ｒao,Ｍ.Ｖ.ら,Ｔetrahedron Ｌ ett.,1992,33,4839-4842を参照すること）；ジ（フェニルアセチル）二硫化物（例えば、Ｋamer, Ｐ.Ｃ.Ｊ.,Ｔetrahedron Ｌett.,1989,30,6757-6760を参照すること）；硫黄、および、トリアリール、トリアルキル、トリアルアルキル、もしくはトリアルカリールホスフィンのようなリガンドと硫黄の組み合わせがある。ホスホジエステルもしくはホスホロチオエート結合の生成に使用される有用な酸化試薬には、ヨウ素／テトラヒドロフラン／水／ピリジン、または過酸化水素／水、またはｔｅｒｔ−ブチル過酸化水素、またはｍ−クロロ過安息香酸のような過酸がある。酸化の場合、水性条件下で反応を行うことができるのに対し、硫化の場合、反応は無水条件下で、空気、特に酸素のない状態で行う。本発明に係る、特定の標的とハイブリダイズできるオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド類似体は、約５から約５０個の単量体サブユニットから成るのが好ましい。より好ましくは、このような化合物は約１０から約３０個の単量体サブユニット、特に１５から２５個の単量体サブユニットから成るのが好ましい。より大きいオリゴマー化合物の構築における“基礎単位（building blocks ）”として（すなわち、式IIのシントンとして）使用する場合、より小さいオリゴマー化合物が好ましい。一般的な式IIの二量体、三量体、もしくはより高次の化合物のライブラリーを、本発明の方法におけるシントンとして使用するために製造することが可能である。より大きいオリゴヌクレオチドの自動化された合成において、液相化学を介して合成された小さい配列を利用すると、カップリング効率および最終的に得られるオリゴヌクレオチドの純度が向上する。例えば、Ｍ iura,Ｋ.ら,Ｃhem.Ｐharm.Ｂull.,1987,35,833-836;Ｋumar,Ｇ.およびＰoonian, Ｍ.Ｓ.,Ｊ.Ｏrg.Ｃhem.,1984,49,4905-4912；Ｂannwarth,Ｗ.,Ｈelvetica Ｃhim ica Ａcta,1985,68,1907-1913；Ｗolter,Ａ.ら，ヌクレオシドおよびヌクレオチド（nucleosides and nucleotides）,1986,5,65-77を参照すること。また、二量体およびより長いシントン（すなわち、式IIの化合物において、ｎが１より大きい）の使用により、一個もしくはそれ以上のヌクレオチドが欠失した、より短い（失敗の）配列の生成を低減するという、更なる利点が提供されることも認識されるであろう。一個のヌクレオチドが欠失した配列(“ｎ−１量体 ”)を目的のオリゴヌクレオチドから分離するのはしばしば困難であるため、その混入量を低減するのは、特に有利なことである。本発明の１つの観点においては、本発明の化合物は、その生成または活性を調節することが望まれるタンパク質をコードする、ＲＮＡもしくはＤＮＡを調節するために使用される。従って、使用すべき組成物の標的部分は、ＤＮＡもしくはＲＮＡのあらかじめ選択された部分と相補的であるように、すなわちその部分とハイブリダイズできるように選択される。本発明の方法の好ましい具体例では、式IIの化合物は、式Ｖ：を有する保護されたヌクレオシドを、式VI：のホスファイト化合物と、酸の存在下で反応させて製造する。好適な酸には、例えばジイソプロピルアンモニウムテトラゾリドを含む、ホスホルアミダイトのカップリングに有用であるとして当該分野で知られるものがある。式VIの化合物は、式ＨＯＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＣＨ₂Ｚを有するアルコールを三塩化リンと反応させ、その生成物Ｃｌ₂ＰＸ₁ＣＨ₂ＣＨ＝ＣＨＣＨ₂Ｚを、少なくとも２当量の式［（Ｒ₆）₂Ｎ］₂ＮＨを有するアミンと反応させて製造するのが好ましい。それぞれのＲ₆基は、同じであるか、もしくは異なるものであることが可能であり、好ましくは１から約１０個の炭素原子、より好ましくは１から６個の炭素原子、中でも３個の炭素原子を有するアルキルであり、特にイソプロピル基が好ましい。Ｘ₁およびＸ₂は、それぞれ独立して、ＯまたはＳであることが可能である。従って、キラルなリン結合を有する化合物は、本発明の意図するところである。Ｓ tec,Ｗ.Ｊ.およびＬesnikowski,Ｚ.Ｊ.,分子生物学における方法（Ｍethods in Ｍolecular Ｂiology）Ｖol.20：オリゴヌクレオチドおよび類似体のためのプロトコール（Ｐrotocols for Ｏligonucleotides and Ａnalogs）,Ｓ.Ａgrawal（編）,Ｈumana Ｐress,Ｔotowa,Ｎ.Ｊ.(1993)，１４章を参照すること。また、Ｓ tec,Ｗ.Ｊ.ら,核酸の研究（Ｎucleic Ａcids Ｒesearch）,Ｖol.19,Ｎo.21,5883 -5888(1991)；およびヨーロッパ特許出願公開ＥＰ 0 506 242号を参照すること。また、本発明の好ましい具体例では、一般式VII：［式中、Ｘ₁、Ａ、およびＺは上で定義したとおりである。］を有する化合物を提供する。本発明のオリゴマー化合物は、診断、治療、そして研究のための試薬およびキットとして使用することが可能である。それらは、好適な製薬上許容しうる希釈剤もしくは担体を含有させることにより、医薬組成物において使用することが可能である。それらは更に、タンパク質の好ましくない生成を特徴とする病気を有する生物の治療に使用することが可能である。生物を、好ましくないタンパク質をコードする核酸鎖と特異的にハイブリダイズすることができる配列を有するオリゴヌクレオチドと接触させる。この型の処理は、単細胞の原核および真核生物から多細胞真核生物におよぶ広範の生物に実施することが可能である。ＤＮＡ− ＲＮＡ転写もしくはＲＮＡ−タンパク質翻訳を、遺伝、代謝、もしくは細胞の制御の主要な部分として利用するいずれの生物も、本発明に係る治療および／もしくは予防処置が可能である。細菌、酵母、原生動物、藻類、全ての植物、および温血動物を含む、全てのより高等な動物の種類のような、外観上多様な生物を治療することが可能である。更に、多細胞真核生物は、その細胞活性の不可欠部分としてＤＮＡ−ＲＮＡ転写およびＲＮＡ−タンパク質翻訳の両方を有するので、そのそれぞれの細胞を処理することが可能である。更にまた、真核細胞のオルガネラの多く（例えば、ミトコンドリアおよび葉緑体）も、転写および翻訳機構を有する。従って、単細胞、細胞集団、またはオルガネラもまた、治療もしくは診断のためのオリゴヌクレオチドで処理することができる生物の定義に含むことが可能である。認識されるように、本発明の方法の工程は、特定の回数、あるいは特定の配列で行う必要はない。本発明の更なる目的、利点、および新規の特徴は、当該分野の技術者には、以下の実施例の考察により明らかとなるであろうが、それら実施例は例証を意図するものであり、制限を意図するものではない。実施例１１−クロロ−２−ブテン−４−オール２−ブテン−１，４−ジオール（６００ｇ、６．８１ｍｏｌ）を、冷却器、圧均等化用添加用漏斗、およびメカニカルスターラーを装備した、５リットルの三つ口丸底フラスコに添加した。ここに、無水エーテル（１４００ｍＬ）およびピリジン（６０４．９ｍＬ．７．４９ｍｏｌ）を添加した。反応フラスコを０℃に冷却し、塩化チオニル（５４５．６ｍＬ、７．４９ｍｏｌ）を、２．５時間にわたり、滴下した。添加終了後、反応混液を室温まで暖まらせ、一晩中撹拌した。その後、反応混液を氷水５００ｍＬに注ぎ、エーテルで抽出した（２ｘ４００ｍＬ）。合一したエーテル抽出液を飽和炭酸水素ナトリウム、次いでブラインで洗浄し、乾燥した（Ｎａ₂ＳＯ₄）。乾燥した抽出液を濃縮して標記の化合物を得、更なる精製をせずに次の工程に使用した。実施例２４−シアノ−２−ブテン−１−オール１−クロロ−２−ブテン−４−オール（２３０ｇ、２．１４ｍｏｌ）を無水アセトニトリル（１２５０ｍＬ）に溶解し、アルゴン雰囲気下で３Ｌの丸底フラスコに添加した。シアン化カリウム（８２５ｇ、１２．５ｍｏｌ）の全量を一度に添加し、反応混液を室温で３時間撹拌した。ＮａＩ（１６ｇ、０．０５４ｍｏｌ）を添加し、反応混液を室温で一晩中撹拌した。反応混液を濾過し、固形物を酢酸エチル（８００ｍＬ）で洗浄した。濾液を真空下（in vacuo）濃縮して油を得、これをエーテル（７５０ｍＬ）で懸濁した（triturate）。この混合液を濾過し、澄んだ濾液を濃縮した。粗生成物を短縮経路（short path）を使用して蒸留し、標記の化合物（ｂｐ８９−９１℃（０．２ｍｍＨｇにおいて）、ＩＲ（ｎｅａｔ）ｃｍ^-1：３４００、２９００、２２５０、１６５０）を得た。実施例３４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイトマグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した５００ｍＬの三つ口フラスコをアルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃のオーブンで１時間乾燥する。無水エーテル（１５０ｍＬ）および三塩化リン（６７．５ｍｍｏｌ）をフラスコに添加する。エーテル（５０ｍＬ）に溶解した４−シアノブテン−１−オール（５０ｍｍｏｌ）を、０℃（氷浴）で撹拌しながら、圧均等化用添加用漏斗を使用して、徐々に反応フラスコに添加する。添加終了後、氷浴を除去し、反応混液を室温で３時間撹拌する。その後、反応混液を５００ｍＬのフラスコに移し、減圧下で濃縮する。無水エーテル（２００ｍＬ）に溶解した生成物に、ジイソプロピルアミン（５７．７ｍＬ）を、０℃、アルゴン下で添加する。添加終了後、室温で１６時間、撹拌を続ける。反応混液を濾過および濃縮して、標記の化合物を得る。実施例４保護されたホスホルアミダイト単量体の製造Ａ．５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル− Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁（septum）を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（７ｍｍｏｌ）、および、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール（５．６ｍｍｏｌ）、および、無水アセトニトリル（５０ｍＬ）をフラスコに添加する。この混合液を室温で撹拌し、アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した４−シアノ−２ −ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（１０．５ｍｍｏl）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を減圧下で濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、標記の化合物を得る。Ｂ．Ｎ２−イソブチリル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン−３ ’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、Ｎ２−イソブチリル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（７．５ｍｍｏｌ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を減圧下で濃縮し、得られた生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製する。Ｃ．Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシアデノシン−３’ −Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ −２’−デオキシアデノシン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（６ｍｍｏｌ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過および濃縮し、得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を得る。Ｄ．Ｎ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン−３’− Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、Ｎ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ −２’−デオキシシチジン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、アセトニトリル（５０ｍＬ）に溶解した４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（７．５ｍｍｏｌ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を減圧下で濃縮し、得られた生成物をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製する。実施例５カップリングの方法Ａ．Ｔ−Ｔホスホロチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン、１００ミリグラム（４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（容量／容量）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物を、ジクロロメタン、次いでアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeauc age試薬のアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、Ｔ−Ｔのホスホロチオエート二量体を得る。Ｂ．Ｃ−Ｔホスホロチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（１００ｍｇ、４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ４−ベンゾイル−５’−Ｏ− ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、ｄＣ−Ｔのホスホロチオエート二量体を得る。Ｃ．Ｔ−Ｔホスホジエステル二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（１００ｍｇ、４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂、次いでアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．１Ｍのヨウ素の水／ピリジン／ＴＨＦ（２：２０：８０、ｖ／ｖ／ｖ）溶液を添加して、室温で５分間反応させる。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、Ｔ−Ｔのホスホジエステル二量体を得る。Ｄ．５’−ＴＴＴＴＴＴＴ−３’ホスホロチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４− シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。この一連の過程を更に５回繰り返し、完全に保護されたチミジン七量体を得る。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、ＴＴＴＴＴＴＴのホスホロチオエート七量体を得る。Ｅ．５’−ｄ（ＧＡＣＴ）−３’ホスホロチオエート四量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４− シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン−３’−Ｏ−（４−シアノ −２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）の無水アセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ２− イソブチリル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（４ −シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理し、その後、５５℃で２４時間、インキュベートする。。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ｄＧ−ｄＡ−ｄＣ−Ｔ−３’のホスホロチオエート四量体を得る。実施例６１−トリメチルシリルチオキシ−４−シアノ−２−ブテン１−シアノ−２，３−ブタジエン（０．１ｍｏｌ）、および、トリメチルシリルチオール（０．１ｍｏｌ）をアルゴン雰囲気下で無水エーテル（３００ｍｌ）に添加して撹拌した混合液に、触媒量の酢酸ロジウムを室温で添加する。２４時間後、反応混液を濾過および濃縮して、標記の化合物を得る。実施例７４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルチオホスホロジアミダイトマグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した５００ｍＬの三つ口フラスコを、１２０℃のオーブンで１時間乾燥した後、組み立てる。フラスコは、冷却の間アルゴンで満たし、フラスコ内をアルゴン雰囲気に保持する。無水エーテル（１５０ｍＬ）および三塩化リン（６７．５ｍｍｏｌ）をフラスコに添加する。１−トリメチルシリル−４−シアノ−２−ブテン（５０ｍｍｏl）のエーテル（５０ｍＬ）溶液を、０℃（氷浴）で撹拌しながら、圧均等化用添加用漏斗を使用して、徐々に反応フラスコに添加する。添加終了後、氷浴を除去し、反応混液を室温で３時間撹拌する。その後、反応混液を５００ｍＬのフラスコに移し、減圧下で濃縮する。得られた残渣を無水エーテル（２００ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルアミン（５７．７ｍＬ）を、０℃、アルゴン下で添加する。添加終了後、室温で１６時間、撹拌を続ける。反応混液を濾過および濃縮し、得られた残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を得る。実施例８保護されたホスホロチオアミダイト単量体の製造Ａ．５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル− Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、１２０℃のオーブンで１時間乾燥した後、組み立てる。フラスコは、冷却の間アルゴンで満たし、フラスコ内をアルゴン雰囲気に保持する。フラスコに、５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（７ｍｍｏｌ）、および、５ −（４−ニトロフェニル）−１Ｈ−テトラゾール（５．６ｍｍｏｌ）、および、無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、４− シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルチオホスホロジアミダイト（１０．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を濾過し、濾液を減圧下で濃縮し、シリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を得る。Ｂ．Ｎ２−イソブチリル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン−３ ’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、１２０℃のオーブンで１時間乾燥した後、組み立てる。フラスコは、冷却の間アルゴンで満たし、フラスコ内をアルゴン雰囲気に保持する。フラスコに、Ｎ２−イソブチリル-５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン（５ｍｍｏｌ）およびジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルチオホスホロジアミダイト（７．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を濾過し、得られた濾液を減圧下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を得る。Ｃ．Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシアデノシン−３’ −Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、１２０℃のオーブンで１時間乾燥した後、組み立てる。フラスコは、冷却の間アルゴンで満たし、フラスコ内をアルゴン雰囲気に保持する。フラスコに、Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシアデノシン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、４−シアノ−２−ブテニル-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルチオホスホロジアミダイト（６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過および濃縮し、得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製して、標記の化合物を得る。Ｄ．Ｎ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン−３’− Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、１２０℃のオーブンで１時間乾燥した後、組み立てる。フラスコは、冷却の間アルゴンで満たし、フラスコ内をアルゴン雰囲気に保持する。フラスコに、Ｎ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液を室温で撹拌し、４−シアノ−２−ブテニル-Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルチオホスホロジアミダイト（７．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理する。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ₄）および濾過し、濾液を減圧下で濃縮する。得られた残渣をシリカゲルフラッシュカラムクロマトグラフィーにより精製し、標記の化合物を得る。実施例９カップリングの方法Ａ．Ｔ−Ｔホスホロジチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン、１００ミリグラム（４ｍｍｏｌｅ）（市販品を入手可能）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’ −水酸基を脱保護する。生成物を、ジクロロメタン、次いでアセトニトリルで洗浄する。０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２ −ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物を、アセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有するＣＰＧを、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間、処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮し、Ｔ−Ｔのホスホロジチオエート二量体を得る。Ｂ．Ｃ−Ｔホスホロジチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（１００ｍｇ、４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’− デオキシシチジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、ｄＣ−Ｔのホスホロジチオエート二量体を得る。Ｃ．Ｔ−Ｔホスホロチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（１００ｍｇ、４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をＣＨ₂Ｃｌ₂、次いでアセトニトリルで洗浄する。０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’ −Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．１Ｍのヨウ素の水／ピリジン／ＴＨＦ（２：２０：８０、ｖ／ｖ／ｖ）溶液を添加して、室温で５分間反応させる。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有するＣＰＧを、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、Ｔ−Ｔのホスホロチオエート二量体を得る。Ｄ．５’−ＴＴＴＴＴＴＴ−３’ホスホロジチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４− シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。この一連の過程を更に５回繰り返し、完全に保護されたチミジン七量体を得る。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、ＴＴＴＴＴＴＴのホスホロチオエート七量体を得る。Ｅ．５’−ｄ（ＧＡＣＴ）−３’ホスホロジチオエート四量体の合成エステル結合を介してＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に移し、２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４− シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン−３’−Ｏ−（４−シアノ −２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のＣＨ₂Ｃｌ₂溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）の無水アセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ２− イソブチリル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（４ −シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルチオホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８、ｖ／ｖ／ｖ）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、６５℃で２４時間処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ｄＧ−ｄＡ−ｄＣ− Ｔ−３’のホスホロチオエート四量体を得る。実施例１０標準的な脱保護の方法Ａ．ＮＨ₄ＯＨを使用する脱保護ホモチミジンホスホロチオエート十二量体を、実施例５（Ｄ）の方法により合成した。十二量体を、飽和ＮＨ₄ＯＨで、２４時間、６５℃で処理し、質量分析法により測定された、完全に脱保護された生成物を得た。Ｂ．ＣＨ₃ＮＨ₂を使用する脱保護ホモチミジンホスホロチオエート十二量体を、実施例５（Ｄ）の方法により合成した。十二量体を、ＣＨ₃ＮＨ₂で、５５℃で処理し、質量分析法により測定された、完全に脱保護された生成物を得た。実施例１１ホスホロチオエートホモＴ二十量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン（市販品を入手可能）をガラス反応器に移す。ＣＰＧに結合した５’−Ｏ −ＤＭＴ−チミジンをアセトニトリルで３０秒間、次いでジクロロメタンで３０秒間、洗浄した。ＣＰＧに結合した５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジンをジクロロ酢酸（３％）のジクロロメタン溶液で２分間処理し、次いで、アセトニトリルで３分間洗浄した。得られたＣＰＧに結合した脱トリチル化されたチミジンを、等量の５’−Ｏ− ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）（０．２Ｍ）のアセトニトリル溶液、および、１Ｈ −テトラゾール（０．４Ｍ）のアセトニトリル溶液と、同時に、室温で５分間反応させた。試薬を濾過により除去（drain away）し、この工程を更に５分間繰り返した。得られたＣＰＧに結合したＴ−Ｔ二量体をアセトニトリルで３０秒間洗浄し、Ｂeaucage試薬（０．５Ｍ）のアセトニトリル溶液で、３分間、酸化した。この硫化工程を更に３分間繰り返した。ＣＰＧをアセトニトリルで３０秒間洗浄し、次いで、等量の、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）、および、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦで１分間処理し、未反応の部位をキャップした。上記の洗浄、脱トリチル化、単量体サブユニットとの反応、酸化、およびキャッピングの過程を１８回繰り返して、二十量体ホモチミジンホスホロチオエートオリゴマー化合物を合成した。ＣＰＧに結合した二十量体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、室温で２時間処理した。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、ホスホロチオエートホモＴ二十量体を得た。合成は１μｍｏｌｅのスケールで実施し、脱離したｐ，ｐ’−ジメトキシトリフェニルメチルカチオンの分光光度定量による測定により、全体のカップリング効率が９９％より大きいことが見出された。実施例１２ホスホロチオエート混合配列二十量体（ＧＣＣ−ＣＡＡ−ＧＣＴ−ＧＧＣ−ＡＴＣ−ＣＧＴ−ＣＡ）の合成実施例１１の方法に次いで、実施例４（ａ、ｂ、ｃ、およびｄ）の保護された単量体サブユニット：５’−Ｏ−ＤＭＴ−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）；Ｎ２−イソブチリル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（４−シアノ −２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）；Ｎ６−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（４−シアノ −２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）；Ｎ４−ベンゾイル−５’−Ｏ−ＤＭＴ−２’−デオキシシチジン−３’−Ｏ−（４−シアノ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）を使用して、混合配列二十量体（ＧＣＣ−ＣＡＡ−ＧＣＴ−ＧＧＣ−ＡＴＣ−ＣＧＴ−ＣＡ）を合成した。合成は１μｍｏｌｅのスケールで実施し、二十量体を、ＮＨ₄ＯＨ水溶液で、室温で１時間処理し、次いで２０時間、６０℃に加熱して、脱保護した。粗オリゴマーを逆相ＨＰＬＣにより精製した。更に、キャピラリーゲル電気泳動により、生成物を確認した。実施例１３シリル含有ヌクレオシドの合成本発明の代表的なシリル含有ヌクレオシドの合成を、下記のスキーム３に示す。まず、市販品の、１−アセトキシ−１，３−ブタジエン（化合物１）を、Ｒｈ₂ Ｃｌ₂（ＣＯ）₄の存在下で（Ｒ₉）₃Ｓｉ−Ｈと反応させ、化合物２を生成する。Ｋ₂ＣＯ₃のメタノール溶液を使用して水酸基を脱保護し、化合物３を得た。その後、化合物３を０℃でＰＣｌ₃のエーテル溶液と反応させて化合物４を生成し、更にそれをイソプロピルアミンのエーテル溶液と反応させて、化合物５を生成する。その後、化合物５を、室温で、テトラゾールのＣＨ₂Ｃｌ₂溶液の存在下で、５’−ＤＭＴヌクレオシド６と反応させ、シントン７を生成する。実施例１４１，１，１−トリフェニル−４−アセトキシ−１−シラ−２−ブテンの製造１−アセトキシ−１，３−ブタジエン（０．１ｍｏｌ）、トリフェニルシラン（０．１ｍｏｌ）、および、Ｒｈ₂Ｃｌ₂（ＣＯ）₄（１９４．５ｍｇ、０．６２５ｍｏｌ）のトルエン（１００ｍＬ）溶液を、室温で、アルゴン雰囲気下で、３日間撹拌した。反応混液を脱色炭で処理し、混合液を短時間煮沸する。冷却後、反応混液をセライトを通じて濾過する。溶液を濃縮して標記の化合物を得る。実施例１５１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテン−４−オールの製造実施例１４による粗アセトキシ化合物を２５０ｍＬのメタノールに溶解し、２５．０ｇの炭酸カリウムの全量を一度に添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過および濃縮する。濃縮残渣を水／酢酸エチル（２００／２００ｍｌ）に分配する。有機層を分取し、ブラインで洗浄し、乾燥および濃縮する。粗生成物をシリカゲルを使用したフラッシュクロマトグラフィーで精製し、純粋な生成物を得る。実施例１６１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルビスホスホルアミダイトの製造マグネティックスターラー、ガラス栓、およびアルゴンの挿入口を装備した５００ｍＬの三つ口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃のオーブンで１時間乾燥する。反応フラスコに、無水エーテル（１５０ｍＬ）および三塩化リン（６７．５ｍｍｏｌ）を充填する。１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテン−４−オール（５０ｍｍｏｌ）のエーテル（５０ｍＬ）溶液を、０℃（氷浴）で撹拌しながら、圧均等化用添加用漏斗を使用して、徐々に反応フラスコに添加する。添加終了後、氷浴を除去し、反応混液を３時間撹拌する。その後、反応混液を５００ｍＬのフラスコに移し、減圧下で濃縮する。この生成物を無水エーテル（２００ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルアミン（５７．７ｍＬ）を、０℃、アルゴン下で添加する。添加終了後、室温で１６時間（一晩）、撹拌を続ける。反応混液を濾過および濃縮して、標記の化合物を得る。実施例１７保護されたホスホルアミダイト単量体の製造Ａ．５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン（７ｍｍｏｌ）、および、５−（４−ニトロフェニル）−１Ｈ −テトラゾール（５．６ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌し、１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（１０．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を減圧下で濃縮し、粘性のある、泡立った液体を得る。粗生成物をシリカゲルを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、生成物を得る。精製の間、トリエチルアミン（１％）を使用する。Ｂ．Ｎ²−イソブチリル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２ ’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、Ｎ²−イソブチリル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシグアノシン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌し、１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（７．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を減圧下で濃縮し、得られた生成物をシリカゲルを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。精製の間、トリエチルアミン（１％）を使用する。Ｃ．Ｎ⁶−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’ −デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２ −ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、Ｎ⁶−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシアデノシン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌し、１，１，１−トリフェニル-１−シラ−２−ブテニル-Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（６ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過および濃縮し、得られた生成物をシリカゲルを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。精製の間、トリエチルアミン（１％）を使用する。Ｄ．Ｎ⁴−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’ −デオキシシチジン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２− ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）マグネティックスターラー、アルゴンガス挿入口、および隔壁を装備した２５０ｍＬの二口フラスコを、アルゴン雰囲気下で組み立てる。ガラス器具は全て、１２０℃で１時間乾燥する。フラスコに、Ｎ⁴−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシシチジン（５ｍｍｏｌ）、および、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾリド（４ｍｍｏｌ）を充填する。無水アセトニトリル（５０ｍＬ）を添加する。この混合液をアルゴン雰囲気下、室温で撹拌し、１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト（７．５ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（５０ｍＬ）溶液を添加する。２時間撹拌後、反応混液を濾過し、濾液を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈し、冷飽和炭酸水素ナトリウム溶液で１度洗浄し、ブラインで処理し、乾燥する（ＭｇＳＯ₄）。乾燥した溶液を減圧下で濃縮し、得られた生成物をシリカゲルを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。精製の間、トリエチルアミン（１％）を使用する。実施例１８カップリングの方法Ａ．Ｔ−Ｔホスホロチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（１００ｍｇ、４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物を、ジクロロメタン、次いでアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン−３’−Ｏ− （１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で９０分間処理し、その後、５５℃で１２時間、インキュベートする。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮した後、室温において、１．０Ｍのテトラ−ｎ−ブチルフッ化アンモニウムのＴＨＦ溶液で処理し、Ｔ−Ｔのホスホロチオエート二量体を得る。Ｂ．Ｃ−Ｔホスホロチオエート二量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（１００ｍｇ、４ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ⁴−ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシシチジン− ３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で９０分間処理し、その後、５５℃で１２時間、インキュベートする。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮した後、室温において、１．０Ｍのテトラ−ｎ−ブチルフッ化アンモニウムのＴＨＦ溶液で処理し、ｄＣ−Ｔのホスホロチオエート二量体を得る。Ｄ．５’−ＴＴＴＴＴＴＴ−３’ホスホロチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル −１−シラ−２−ブテニル-Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。この一連の過程を更に５回繰り返し、完全に保護されたチミジン七量体を得る。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で９０分間、室温で処理する。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、ＴＴＴＴＴＴＴのホスホロチオエート七量体を得る。Ｅ．５’−ｄ（ＧＡＣＴ）−３’ホスホロチオエート四量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−チミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ⁴− ベンゾイル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシシチジン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ⁶− ベンゾイル-５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル− Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）の無水アセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeauc age 試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２ＭのＮ²− イソブチリル−５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（１，１，１−トリフェニル−１−シラ−２−ブテニル −Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucag e試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理し、その後、５５℃で２４時間、インキュベートする。。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ｄＧ−ｄＡ−ｄＣ−Ｔ−３’のホスホロチオエート四量体を得る。実施例１９３’−Ｏ−レブリニルチミジン標記の化合物を、Ｇ.Ｋumar,Ｍ.Ｓ.Ｐoonian,Ｊ.Ｏrg.Ｃhem.1984,49,4905-49 12に発表された方法に従って合成した。実施例２０３’−Ｏ−レブリニル−Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン５’−ＤＭＴ−Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン（７１．６ｇ、０．１１２ｍｏｌ）を１０００ｍｌのフラスコに移し、無水ジオキサン（７００ｍｌ）を添加して、溶液が均一化するまで撹拌する。その後、ジシクロヘキシルカルボジイミド（５７．８ｇ、０．２８０ｍｏｌ）、レブリン酸（２５．９ｇ、０．２２４ｍｏｌ）、および４−ジメチルアミノピリジン（０．５６ｇ）を添加し、マグネティックスターラーを使用して激しく撹拌する。３時間後、反応混液を濾過し、固形残渣を酢酸エチル（２５０ｍｌ）で洗浄する。濾液を合一し、濃縮して生成物を得る。この生成物をジクロロメタン（４００ｍｌ）に溶解し、２．５％ＤＣＡのジクロロメタン（１６０ｍｌ）溶液を添加して撹拌する。１時間後、反応混液をジクロロメタン（４００ｍｌ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム溶液で洗浄する。有機層を分取し、乾燥および濃縮する。粗生成物をシリカゲルを使用したフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標記の化合物を得る。実施例２１Ｔ−Ｔホスホロチオエート二量体の合成３’−Ｏ−レブリニルチミジン（５ｍｍｏｌｅ）および１Ｈ−テトラゾール（５ｍｍｏｌｅ）を無水アセトニトリル（２５ｍｌ）に添加し、アルゴン雰囲気下、室温で撹拌した溶液に、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）チミジン−３’−Ｏ−（４−ジフェニルメチルシリル−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）（６ｍｍｏｌｅ）のアセトニトリル（２０ｍｌ）溶液を添加する。３時間撹拌後、硫化試薬（硫黄（２００ｍｍｏｌｅ）／トリエチルアミン（２０ｍｍｏｌｅ）をジクロロメタン（７５ｍｌ）に入れた混合液）の全量を一度に添加する。５時間後、反応混液を濾過および濃縮する。粗生成物を、シリカゲル、および溶出液として酢酸エチル／ヘキサンを使用したフラッシュクロマトグラフィーで精製する。実施例２２３’−Ｏ−レブリニル基の脱保護５’−（Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−（Ｏ−レブリニル）− チミジン二量体（３５．０ｇ）を、ヒドラジン水和物（１０．０ｇ）、ピリジン（２４０ｍｌ）、および酢酸（２４０ｍｌ）の氷冷溶液に溶解する。１０分後、氷を添加し、ジクロロメタンで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥して濾過し、溶媒を除去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１）、その後、酢酸エチル、０．１％−トリエチルアミン）で精製し、目的の生成物を得る。実施例２３チミジル−チミジン二量体アミダイトの合成アルゴン雰囲気下で、１Ｈ−テトラゾール（５ｍｍｏｌ）および４−シアノ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３０ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（１００ｍｌ）溶液を、チミジル−チミジン二量体（２０ｍｍｏｌ）に添加する。２時間後、酢酸エチルを添加し、溶液を炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出する。有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥し、溶媒を減圧下で除去する。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、目的の生成物を得る。実施例２４Ｃ−Ｔ−ホスホロチオエート二量体の合成３’−Ｏ−レブリニルチミジン（５ｍｍｏｌｅ）および１Ｈ−テトラゾール（５ｍｍｏｌｅ）を無水アセトニトリル（２５ｍｌ）に添加し、アルゴン雰囲気下、室温で撹拌した溶液に、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’ −デオキシシチジン−３’−Ｏ−（４−ジフェニルメチルシリル−２−ブテニル −Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）（６ｍｍｏｌｅ）のアセトニトリル（２０ｍｌ）溶液を添加する。３時間撹拌後、硫化試薬（硫黄（２００ｍｍｏｌｅ）／トリエチルアミン（２０ｍｍｏｌｅ）をジクロロメタン（７５ｍｌ）に入れた混合液）の全量を一度に添加する。５時間後、反応混液を濾過および濃縮する。粗生成物を、シリカゲル、および溶出液として酢酸エチル／ヘキサンを使用したフラッシュクロマトグラフィーで精製する。実施例２５３’−Ｏ−レブリニル基の脱保護５’−（Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−（Ｏ−レブリニル）− ２’−デオキシシチジニル−チミジン二量体（３５．０ｇ）を、ヒドラジン水和物（１０．０ｇ）、ピリジン（２４０ｍｌ）、および酢酸（２４０ｍｌ）の氷冷溶液に溶解する。１０分後、氷を添加し、ジクロロメタンで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥して濾過し、溶媒を除去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１）、その後、酢酸エチル、０．１％−トリエチルアミン）で精製し、目的の生成物を得る。実施例２６２’−デオキシシチジニル−チミジン二量体アミダイトの合成アルゴン雰囲気下で、１Ｈ−テトラゾール（５ｍｍｏｌ）および４−シアノ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３０ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（１００ｍｌ）溶液を、２’−デオキシシチジニル−チミジン二量体（２０ｍｍｏｌ）に添加する。２時間後、酢酸エチルを添加し、溶液を炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出する。有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥し、溶媒を減圧下で除去する。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、目的の化合物を得る。実施例２７ｄ（Ａ−Ｇ）−ホスホロチオエート二量体の合成３’−Ｏ−レブリニル−２’−デオキシグアノシン（５ｍｍｏｌｅ）および１Ｈ−テトラゾール（５ｍｍｏｌｅ）を無水アセトニトリル（２５ｍｌ）に添加し、アルゴン雰囲気下、室温で撹拌した溶液に、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシアデノシン−３’−Ｏ−（４−ジフェニルメチルシリル−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）（６ｍｍｏｌｅ）のアセトニトリル（２０ｍｌ）溶液を添加する。３時間撹拌後、硫化試薬（硫黄（２００ｍｍｏｌｅ）／トリエチルアミン（２０ｍｍｏｌｅ）をジクロロメタン（７５ｍｌ）に入れた混合液）の全量を一度に添加する。５時間後、反応混液を濾過および濃縮する。粗生成物を、シリカゲル、および溶出液として酢酸エチル／ヘキサンを使用したフラッシュクロマトグラフィーで精製する。実施例２８３’−Ｏ−レブリニル基の脱保護５’−（Ｏ−４，４’−ジメトキシトリチル）−３’−（Ｏ−レブリニル）− ２’−デオキシアデノシニル−２’−デオキシグアノシン二量体（３５ｇ）を、ヒドラジン水和物（１０．０ｇ）、ピリジン（２４０ｍｌ）、および酢酸（２４０ｍｌ）の氷冷溶液に溶解する。１０分後、氷を添加し、ジクロロメタンで抽出する。有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥して濾過し、溶媒を除去する。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（酢酸エチル／ｎ−ヘキサン（１：１）、その後、酢酸エチル、０．１％−トリエチルアミン）で精製し、目的の生成物を得る。実施例２９２’−デオキシアデノシニル−２’−デオキシグアノシン二量体アミダイトの合成アルゴン雰囲気下で、１Ｈ−テトラゾール（５ｍｍｏｌ）および４−シアノ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトライソプロピルホスホロジアミダイト（３０ｍｍｏｌ）の無水アセトニトリル（１００ｍｌ）溶液を、２’−デオキシアデノシニル−２’−デオキシグアノシン二量体（２０ｍｍｏｌ）に添加する。２時間後、酢酸エチルを添加し、溶液を炭酸水素ナトリウム水溶液で抽出する。有機層を硫酸ナトリウムにより乾燥し、溶媒を減圧下で除去する。残渣をカラムクロマトグラフィーで精製し、目的の生成物を得る。実施例３０５’−ＴＴＴＴＴＴＴ−３’ホスホロチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−チミジル−チミジン−３’−Ｏ−（４−シアノ− ２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、末反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。この一連の過程を更に２回繰り返し、完全に保護されたチミジン七量体を得る。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理し、その後、５５℃で１時間、インキュベートする。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ＴＴＴＴＴＴＴ−３’のホスホロチオエート七量体を得る。実施例３１５’−ｄ（ＴＴＣＴＡＧＴ）−３’ホスホロチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシアデノシニル−２’−デオキシグアノシン−３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’− Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−２’−デオキシシチジニル−チミジン −３’−Ｏ−（４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）のアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、０．２Ｍの５’− Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−チミジル−チミジン−３’−Ｏ−（４ −シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト）の無水アセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄しＮ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理し、その後、５５℃で２４時間、インキュベートする。。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ｄ（ＴＴＣＴＡＧＴ）−３’のホスホロチオエート七量体を得る。実施例３２無水レブリン酸１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）（２０７ｇ、１ｍｏｌ）のジエチルエーテル（１．２ｌ）溶液を、レブリン酸（２３２ｇ、２ｍｏｌ）の無水ジエチルエーテル（８００ｍｌ）溶液に添加した。数分以内に、反応フラスコ内で、無色の沈殿の生成、およびわずかな温度上昇が認められた。５時間撹拌後、濾過により固形物（ＤＣＵ）を除去し、溶媒を減圧下で除去した。２２０ｇの半固体生成物（室温で）を得、更なる精製をせずに次の反応に使用した。実施例３３Ｎ⁴−ベンゾイル−３’−Ｏ−レブリニル−２’−デオキシシチジン無水レブリン酸（５１．４ｇ、２４０ｍｍｏｌ）を、５’−ＤＭＴ−Ｎ⁴−ベンゾイル−デオキシシチジン（７６ｇ、１２０ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（２４０ｍｌ）溶液に添加した。４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（３９０ｍｇ）を添加した。２時間後、ほとんどのピリジンを真空下で除去し、残存した濃色の溶液を氷／水（約２ｋｇ）に注ぎ、数時間撹拌した。生成した沈殿を濾過により単離し、水（２ｌ）で洗浄し、真空下で乾燥した。更に水分を除去するため、固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３００ｍｌ）に溶解した。有機層を分取し、Ｎａ₂ＳＯ₄ により乾燥し、蒸発させた。残渣を、ｐ−トルエンスルホン酸（２１ｇ）の酢酸エチル／メタノール（７５ｍｌ、８５：１５、ｖ／ｖ）溶液に溶解した。数分（１５−２０分）後、フラスコの内容物が凝固した。微細粉砕した固形物を、ジエチルエーテル（総量５００ｍｌのエーテル）で抽出した。固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１ｌ）に溶解し、ＮａＨＣＯ₃水溶液（１Ｍ）で抽出した。この工程の間に生成した固形物（生成物）を濾過により分取した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄により乾燥し、真空下で濃縮した。約９０％の溶媒を除去した後、更に生成物を濾過により単離した。固形画分を合一する：４４ｇ（８５％）。ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液から、更に生成物を回収することが可能である。実施例３４３’−Ｏ−レブリニルチミジン５’−ジメトキシトリチルチミジン（２７２．３ｇ、５００ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（５００ｍｌ）溶液を無水レブリン酸（２１４ｇ、１ｍｏｌ）のピリジン（５００ｍｌ）溶液に添加した。ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ、１ｇ）を添加した。５時間後、ほとんどの溶媒をエバポレーションにより除去し、残存した濃色の油を氷（２ｋｇ）／ＮａＨＣＯ₃（１Ｍ、１ｌ）に注ぎ、数時間撹拌した。油性／固形沈殿を濾過により単離し、水で数回洗浄した。固形物を真空下で乾燥した。生成物から更に水分を除去するため、固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂に溶解し、水層を分離し、有機層をＮａ₂ＳＯ₄により乾燥し、蒸発させた。微細粉砕した固形物を、ｐ−トルエンスルホン酸（８０ｇ）の酢酸エチル／メタノール（８５：１５、５００ｍｌ）溶液に添加した。２０分後、反応混液を飽和ＮａＨＣＯ₃ （９００ｍｌ）溶液に添加した（ＣＯ₂発生）。この混合液にジエチルエーテル（５００ｍｌ）を添加した。二層を分離し、有機層から希ＮａＨＣＯ₃溶液で再抽出した。合一した水層をジエチルエーテルで抽出した。生成物を単離するため、水層をＣＨ₂Ｃｌ₂またはＣＨＣｌ₃で数回抽出した。ＣＨ₂Ｃｌ₂画分を合一し、Ｎａ₂ＳＯ₄により乾燥し、濃縮した。残渣を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶させた（収率：５５−６０％）。実施例３５Ｎ−ベンゾイル−３’−Ｏ−レブリニル−２’−デオキシアデノシン無水レブリン酸（５１．４ｇ、２４０ｍｍｏｌ）を、５’−ＤＭＴ−Ｎ−ベンゾイル−デオキシアデノシン（１２０ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（２４０ｍｌ）溶液に添加した。４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（３９０ｍｇ）を添加した。２時間後、ほとんどのピリジンを真空下で除去し、残存した濃色の溶液を氷／水（約２ｋｇ）に注ぎ、数時間撹拌した。生成した沈殿を濾過により単離し、水（２ｌ）で洗浄し、真空下で乾燥した。更に水分を除去するため、固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３００ｍｌ）に溶解した。有機層を分取し、Ｎａ₂ＳＯ₄により乾燥し、蒸発させた。残渣を、ｐ−トルエンスルホン酸（２１ｇ）の酢酸エチル／メタノール（７５ｍｌ、８５：１５、ｖ／ｖ）溶液に溶解した。数分（１５−２０分）後、フラスコの内容物が凝固した。微細粉砕した固形物を、ジエチルエーテル（総量５００ｍｌのエーテル）で抽出した。固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１ｌ）に溶解し、ＮａＨＣＯ₃水溶液（１Ｍ）で抽出した。この工程の間に生成した固形物（生成物）を濾過により分取した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄により乾燥し、真空下で濃縮した。固形画分を合一した：４４ｇ（８５％）。実施例３６Ｎ²−イソブチリル−３’−Ｏ−レブリニル−２’−デオキシグアノシン無水レブリン酸（５１．４ｇ、２４０ｍｍｏｌ）を、５’−ＤＭＴ−Ｎ²−イソブチリル−デオキシグアノシン（１２０ｍｍｏｌ）の無水ピリジン（３００ｍｌ）溶液に添加した。４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）（３９０ｍｇ）を添加した。２時間後、ほとんどのピリジンを真空下で除去し、残存した濃色の溶液を氷／水（約２ｋｇ）に注ぎ、数時間撹拌した。生成した沈殿を濾過により単離し、水（２ｌ）で洗浄し、真空下で乾燥した。更に水分を除去するため、固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂（３００ｍｌ）に溶解した。有機層を分取し、Ｎａ₂ＳＯ₄により乾燥し、蒸発させた。残渣を、ｐ−トルエンスルホン酸（２１ｇ）の酢酸エチル／メタノール（７５ｍｌ、８５：１５、ｖ／ｖ）溶液に溶解した。数分（１５ −２０分）後、フラスコの内容物が凝固した。微細粉砕した固形物を、ジエチルエーテル（総量５００ｍｌのエーテル）で抽出した。固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂（１ｌ）に溶解し、ＮａＨＣＯ₃水溶液（１Ｍ）で抽出した。この工程の間に生成した固形物（生成物）を濾過により分取した。有機層をＮａ₂ＳＯ₄により乾燥し、真空下で濃縮した。固形画分を合一し、生成物を得た。実施例３７ β−シアノエチルホスホロジクロリダイトこの化合物をＯgilvie,Ｋ.Ｋ.Ｃan.Ｊ.Ｃhem.58,2686(1980)に報告された方法で合成した。実施例３８５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−３’−Ｏ−レブリニルチミジン−５’−イルホスホロチオエート５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン（４１ｇ、６３ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（１００ｍｌ）と共蒸発させた後、無水ＴＨＦ（２００ｍｌ）に溶解し、４Ａモレキュラーシーブを添加し、１５分間放置した。２−シアノエチルホスホロジクロリダイト（１１．９ｇ、６９ｍｍｏｌ）を、１，２，４−トリアゾール（９．６ｇ、１３８ｍｍｏｌ）およびピリジン（１１．２ｍｌ、１３８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（３００ｍｌ）に添加して撹拌した懸濁液に、−３５℃で添加する。１０分後、上記の５’ −Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジンの無水溶液を、３０分間にわたり、滴下により添加した。更に１０分後、３’−Ｏ−レブリニルチミジン［２１．０ｇ、６２ｍｍｏｌ、あらかじめピリジン（５０ｍｌ）と共沸したもの］の無水ＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を、１０分間にわたって添加し、更に２０分後、混合液を室温まで暖まらせた。６０分後、Ｂeaucage試薬（４０．０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を添加し、生成物を１５分間撹拌した。ピリジン（２０ｍｌ）を添加し、反応混液を濾過した。固形物をＥｔＯＡｃで洗浄し、合一した濾液を減圧下で濃縮した。残渣のＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ）溶液を飽和炭酸水素ナトリウム（２ｘ３００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ ＳＯ₄）および真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ＥｔＯＡｃで溶出した好適な画分を回収および減圧濃縮し、無色のガラス質である、標記の化合物を得た。実施例３９５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−チミジン−５’−イルホスホロチオエート５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−３’−Ｏ−レブリニルチミジン−５’−イルホスホロチオエート（４６．８ｇ、４２ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（１１．５ｍｌ）の酢酸−ピリジン（１：２ｖ／ｖ、ｐＨ５．１、３４５ｍｌ）の氷冷溶液に溶解した。混合液を室温まで暖まらせ、計３０分後、生成物を氷（２０００ｍｌ）に注いだ。氷を溶解させ、生成した無色の沈殿を、濾過により回収した。固形物を水で洗浄した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（６００ｍｌ）に溶解し、溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）および真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルで分画し、ＥｔＯＡｃで溶出した画分を合わせて蒸発させ、無色のガラス質である、標記の化合物（６１％）を得た。実施例４０５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−チミジン−５’−イルホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−チミジン−５’−イル−ホスホロチオエート（８．５４ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を、無水ジオキサン（３０ｍｌ）と共蒸発させた後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１２０ｍｌ）に再度溶解し、ビス（ジイソプロピルアミノ）−４−シアノ−２−ブテニルオキシホスファイン（２９．７ｍｍｏｌ）、次いで１−Ｈ−テトラゾール（０．８９ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合液を室温で１時間撹拌した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍｌ）で希釈し、氷冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で濃縮した。残渣のＥｔＯＡｃ−ヘキサン（７：３ｖ／ｖ、３０ｍｌ）溶液を、同じ溶媒系で充填したシリカゲルのショートカラムに通した。カラムを同じ溶媒で洗浄し、生成物を含有する画分を回収し、真空下で濃縮して、油を得た。油をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（２００ｍｌ）を、渦を巻かせながら（with swirling）、徐々に添加した。生成した無色の油から、上清をデカントにより除去し、その手順を繰り返した。残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）に溶解し、溶液を減圧下で濃縮して、標記の化合物を得た。実施例４１５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−３’−Ｏ−レブリニル −Ｎ−ベンゾイル−２−デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエート５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン（４１ｇ、６３ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（１００ｍｌ）と共蒸発させた後、無水ＴＨＦ（２００ｍｌ）に溶解し、４Ａモレキュラーシーブを添加し、１５分間放置した。１，２，４−トリアゾール（９．６ｇ、１３８ｍｍｏｌ）およびピリジン（１１．２ｍｌ、１３８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（３００ｍｌ）に添加して撹拌した懸濁液に、２−シアノエチルホスホロジクロリダイト（１１．９ｇ、６９ｍｍｏｌ）を、−３５℃で添加した。１０分後、上記の５’ −Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジンの無水溶液を、３０分間にわたり、滴下により添加した。更に１０分後、３’−Ｏ−レブリニル−Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン［６２ｍｍｏｌ、あらかじめピリジン（５０ｍｌ）と共沸したもの］の無水ＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を、１０分間にわたって添加し、更に２０分後、混合液を室温まで暖まらせた。６０分後、Ｂeaucage試薬（４０．０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を添加し、生成物を１５分間撹拌した。ピリジン（２０ｍｌ）を添加し、反応混液を濾過した。固形物をＥｔＯＡｃで洗浄し、合一した濾液を減圧下で濃縮した。残渣のＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ）溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２ｘ３００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）および真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ＥｔＯＡｃで溶出した好適な画分を回収し、減圧濃縮して、標記の化合物を得た。実施例４２５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ−ベンゾイル−２’ −デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエート５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−３’−Ｏ−レブリニル−Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエート（４２ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（１１．５ｍｌ）の酢酸−ピリジン（１：２ｖ／ｖ、ｐＨ５．１、３４５ｍｌ）の氷冷溶液に溶解した。混合液を室温まで暖まらせ、計３０分後、生成物を氷（２０００ｍｌ）に注いだ。氷を溶解させ、生成した無色の沈殿を、濾過により回収した。固形物を水で洗浄した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（６００ｍｌ）に溶解し、溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）および真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルで分画し、ＥｔＯＡｃで溶出した画分を合わせて蒸発させ、標記の化合物を得た。実施例４３５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ−ベンゾイル−２’ −デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ−ベンゾイル−２ ’−デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエート（８．５４ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を、無水ジオキサン（３０ｍｌ）と共蒸発させた後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１２０ｍｌ）に再度溶解し、ビス（ジイソプロピルアミノ）−４−シアノ−２− ブテニルオキシホスファイン（２９．７ｍｍｏｌ）、次いで１−Ｈ−テトラゾール（０．８９ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合液を室温で１時間撹拌した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍｌ）で希釈し、氷冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で濃縮した。残渣のＥｔＯＡｃ−ヘキサン（７：３ｖ／ｖ、３０ｍｌ）溶液を、同じ溶媒系で充填したシリカゲルのショートカラムに通した。カラムを同じ溶媒で洗浄し、生成物を含有する画分を回収し、真空下で濃縮して、油を得た。油をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（２００ｍｌ）を、渦を巻かせながら、徐々に添加した。生成した無色の油から、上清をデカントにより除去し、その手順を繰り返した。残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）に溶解し、溶液を減圧下で濃縮して、標記の化合物を得た。実施例４４５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−３’−Ｏ−レブリニル −Ｎ２−イソブチリル−２−デオキシグアノシン−５’−イル−ホスホロチオエート５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン（４１ｇ、６３ｍｍｏｌ）を、無水ピリジン（１００ｍｌ）と共蒸発させた後、無水ＴＨＦ（２００ｍｌ）に溶解し、４Ａモレキュラーシーブを添加し、１５分間放置した。１，２，４−トリアゾール（９．６ｇ、１３８ｍｍｏｌ）およびピリジン（１１．２ｍｌ、１３８ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（３００ｍｌ）に添加して撹拌した懸濁液に、２−シアノエチルホスホロジクロリダイト（１１．９ｇ、６９ｍｍｏｌ）を、−３５℃で添加した。１０分後、上記の５’ −Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジンの無水溶液を、３０分間にわたり、滴下により添加した。更に１０分後、３’−Ｏ−レブリニル−Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン［６２ｍｍｏｌ，あらかじめピリジン（５０ｍｌ）と共沸したもの］の無水ＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液を、１０分間にわたって添加し、更に２０分後、混合液を室温まで暖まらせた。６０分後、Ｂeaucage試薬（４０．０ｇ、２００ｍｍｏｌ）を添加し、生成物を１５分間撹拌した。ピリジン（２０ｍｌ）を添加し、反応混液を濾過した。固形物をＥｔＯＡｃで洗浄し、合一した濾液を減圧下で濃縮した。残渣のＥｔＯＡｃ（１０００ｍｌ）溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２ｘ３００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）および真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルクロマトグラフィーで精製し、ＥｔＯＡｃで溶出した好適な画分を回収し、減圧濃縮して、標記の化合物を得た。実施例４５５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ２−イソブチリル− ２’−デオキシグアノシン−５’−イル−ホスホロチオエート５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−３’−Ｏ−レブリニル−Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン−５’−イル−ホスホロチオエート（４２ｍｍｏｌ）を、ヒドラジン一水和物（１１．５ｍｌ）の酢酸−ピリジン（１：２ｖ／ｖ、ｐＨ５．１、３４５ｍｌ）の氷冷溶液に溶解した。混合液を室温まで暖まらせ、計３０分後、生成物を氷（２０００ｍｌ）に注いだ。氷を溶解させ、生成した無色の沈殿を、濾過により回収した。固形物を水で洗浄した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（６００ｍｌ）に溶解し、溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）および真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルで分画し、ＥｔＯＡｃで溶出した画分を合一および濃縮し、標記の化合物を得た。実施例４６５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ２−イソブチリル− ２’−デオキシグアノシン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２ −ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ２−イソブチリル −２’−デオキシグアノシン−５’−イル−ホスホロチオエート（８．５４ｇ、８．５ｍｍｏｌ）を、無水ジオキサン（３０ｍｌ）と共蒸発させた後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（１２０ｍｌ）に再度溶解し、ビス（ジイソプロピルアミノ）−４−シアノ −２−ブテニルオキシホスファイン（２９．７ｍｍｏｌ）、次いで１−Ｈ−テトラゾール（０．８９ｇ、１２．８ｍｍｏｌ）を添加した。混合液を室温で１時間撹拌した後、ＣＨ₂Ｃｌ₂（２００ｍｌ）で希釈し、氷冷飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２００ｍｌ）で抽出した。有機層を乾燥し（Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で濃縮した。残渣のＥｔＯＡｃ−ヘキサン（７：３ｖ／ｖ、３０ｍｌ）溶液を、同じ溶媒系で充填したシリカゲルのショートカラムに通した。カラムを同じ溶媒で洗浄し、生成物を含有する画分を回収し、真空下で濃縮して、油を得た。油をＣＨ₂Ｃｌ₂（３０ｍｌ）に溶解し、ヘキサン（２００ｍｌ）を、渦を巻かせながら、徐々に添加した。生成した無色の油から、上清をデカントにより除去し、その手順を繰り返した。残渣をＣＨ₂Ｃｌ₂（１０ｍｌ）に溶解し、溶液を減圧下で濃縮して、標記の化合物を得た。実施例４７５’−ｄ（ＣＴＣＡＣＧＴ）−３’−ホスホロチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチルチミジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３’−イル− Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン− ５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト０．２Ｍのアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３ ’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルホスホルアミダイト０．２Ｍのアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３ ’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−チミジン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト０．２Ｍの無水アセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’− 水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理し、その後、５５℃で２４時間、インキュベートする。。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ｄ（ＣＴＣＡＣＧＴ）−３’のホスホロチオエート七量体を得る。実施例４８５’−ｄ（ＣＴＣＡＣＧＣ）−３’ホスホロチオエート七量体の合成エステル結合を介してＣＰＧ（定孔ガラス）に結合した５’−Ｏ−ジメトキシトリチル−Ｎ４−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン（５０ｍｇ、２ｍｍｏｌｅ）をガラス反応器に入れ、２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２ ’−デオキシシチジン−３’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ２−イソブチリル−２’−デオキシグアノシン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト０．２Ｍのアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ’−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３ ’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−Ｎ−ベンゾイル−２’−デオキシアデノシン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ− ジイソプロピルホスホルアミダイト０．２Ｍのアセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’−水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。２％ジクロロ酢酸のジクロロメタン溶液（ｖ／ｖ）を添加して、５’−水酸基を脱保護する。生成物をアセトニトリルで洗浄する。その後、５’−Ｏ−（４，４’−ジメトキシトリチル）−Ｎ⁴−ベンゾイル−２’−デオキシシチジン−３ ’−イル−Ｏ−２−シアノエチル−Ｏ−チミジン−５’−イル−ホスホロチオエートの４−シアノ−２−ブテニル−Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルホスホルアミダイト０．２Ｍの無水アセトニトリル溶液、および、０．４Ｍの１Ｈ−テトラゾールのアセトニトリル溶液を添加し、室温で５分間反応させる。生成物をアセトニトリルで洗浄し、その後、０．０５ＭのＢeaucage試薬のアセトニトリル溶液を添加して、室温で５分間反応させる。この硫化工程を、更に１回、５分間、繰り返す。支持体をアセトニトリル、次いで、無水酢酸／ルチジン／ＴＨＦ（１：１：８）溶液で洗浄し、Ｎ−メチルイミダゾール／ＴＨＦを添加して、未反応の５’− 水酸基をキャップする。生成物をアセトニトリルで洗浄する。化合物を含有する担体を、３０％水酸化アンモニウム水溶液で、９０分間、室温で処理し、その後、５５℃で２４時間、インキュベートする。。水溶液を濾過し、減圧下で濃縮して、５’−ｄ（ＣＴＣＡＣＧＣ）−３’のホスホロチオエート七量体を得る。この明細書において言及または引用する特許、刊行物、および他の公表された文書のそれぞれは、その全部分を本明細書の一部としてここに引用する。当業者には、本発明の好ましい具体例に多くの変更および改変が施されてもよく、そして、それらの変更および改変が本発明の精神から逸脱することなく行いうることが認識されるだろう。従って、付帯する請求の範囲は、全てのこうした均等の変更を本発明の真の精神および範囲に含まれるものとして包含することを意図する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月２４日【補正内容】差し替え用紙８４−８８頁の翻訳文：翻訳文７７頁の次に挿入する３９．次の式：［式中Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、または−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_p（ｐは１から約１０である）であり；Ｒ₂は水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；Ｒ₃は水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり、ただし、Ｒ₂およびＲ₃の両方が同時に固相支持体に結合されたリンカーであることはなく；Ｘ₁はＯまたはＳであり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｘ₃はそれぞれ１から１０個の炭素を有するアルキルであり；Ｑはそれぞれ−Ｘ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚであり；ｍおよびｎはそれぞれ独立して、０から約５０の整数であり、ただし、ｍとｎの合計は５０を越えない；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基であり；そしてＺはＣＮ、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群から選択される）である］を有する化合物。４０．Ｒ₂が固相支持体に結合されたリンカーである、請求項３９記載の化合物。４１．Ｒ₂が水素である、請求項３９記載の化合物。４２．ｍおよびｎがそれぞれ０である、請求項３９記載の化合物。４３．ＺがＣＮであり、かつＸ₁がＯである、請求項３９記載の化合物。４４．Ｒ₈がＲ₅である、請求項２３記載の化合物。４５．ｎが２から５０であり、Ｑがそれぞれ式−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂ −Ｚを有する、請求項４４記載の化合物。４６．式IX：［式中：ＺはＣＮ、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群から選択される）であり；そして、Ｘ₁はＯまたはＳである。］を有する部分を含有するオリゴマー化合物であって、（ａ）式II：［式中：Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、または−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；Ｘ₃は１から１０個の炭素を有するアルキルであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_p（ｐは１から約１０である）であり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｒ₃は水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基であり；ｎは０から約５０であり；Ｑはそれぞれ−Ｘ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚであり；Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または、４から７個の原子を含有し、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原子を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｒ₆は１から１０個の炭素を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルである。］を有する化合物を提供し；（ｂ）式IIの化合物を、式III：［式中：Ｒ_3aは水素であり；そして、Ｒ₂は水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーである］を有する化合物と反応させ；（ｃ）工程（ｂ）の生成物を酸化して、式III（式中、Ｒ_3aは水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーである）を有する更なる化合物を生成する、の各工程により製造される化合物。【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１１月４日【補正内容】差し替え用紙第７７頁の翻訳文翻訳文第７１頁第３行から第７２頁第１行の記載を次の記載に差し替えるＸ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｒ₃およびＲ_3aはそれぞれ水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基であり；ｎは０から約５０であり；Ｑはリン保護基であり；Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または、４から７個の原子を含有し、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原子を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｒ₆は１から１０個の炭素を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルである。］を有する化合物を提供し；（ｂ）式IIの化合物を、式III：［式中：Ｒ_3aは水素であり；ｍは１から約５０であり；そして、Ｒ₂は水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであるが、Ｒ₂およびＲ₃の両方が同時に固相支持体に結合されたリンカーであることはない］を有する化合物と反応させてオリゴマー化合物を生成する、

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．式IX：［式中：ＺはＣＮ、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群から選択される）であり；そして、Ｘ₁はＯまたはＳである。］を有する部分を含有するオリゴマー化合物の製造方法であって、（ａ）式II：［式中：Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、または−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；Ｘ₃は１から１０個の炭素を有するアルキルであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_p（ｐは１から約１０である）であり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；Ｒ₃およびＲ_3aはそれぞれ水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基であり；ｎは０から約５０であり；Ｑはリン保護基であり；Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または、４から７個の原子を含有し、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原子を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｒ₆は１から１０個の炭素を有する直鎖もしくは分枝鎖アルキルである。］を有する化合物を提供し；（ｂ）式IIの化合物を、式III：［式中：Ｒ_3aは水素であり；そして、Ｒ₂は水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであるが、Ｒ₂およびＲ₃の両方が同時に固相支持体に結合されたリンカーであることはない］を有する化合物と反応させてオリゴマー化合物を生成する、の各工程を含む方法。２．更に、オリゴマー化合物を酸化して、式III（式中、Ｒ₃は水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；そして、ｍは１ずつ増加する。）を有する更なる化合物を生成する工程を含む、請求項１記載の方法。３．更にキャッピングの工程を含む、請求項２記載の方法。４．キャッピングの工程が酸化後に行われる、請求項３記載の方法。５．キャッピングの工程が酸化に先だって行われる、請求項３記載の方法。６．更に、オリゴマー化合物を切断し、式Ｉ：を有する化合物を生成する工程を含む、請求項３記載の方法。７．ＺがＣＮであり、そしてＱがＸ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂ −Ｚである、請求項１記載の方法。８．Ｒ₆がそれぞれイソプロピルである、請求項７記載の方法。９．Ｘ₂がＯである、請求項７記載の方法。１０．Ｘ₁がＳである、請求項９記載の方法。１１．Ｘ₁がＯである、請求項９記載の方法。１２．Ｘ₂がＳである、請求項７記載の方法。１３．Ｘ₁がＳである、請求項１２記載の方法。１４．Ｘ₁がＯである、請求項１２記載の方法。１５．式IIの化合物が、式Ｖ：を有する化合物を式VI：を有する化合物と酸の存在下で反応させることによって得られる、請求項１記載の方法。１６．式VII：［式中：Ｘ₁はＯまたはＳであり；Ａは（Ｒ₇）（Ｒ₈）Ｐ−であり；Ｒ₈はＲ₅であるか、または式Ｘ：［式中：Ｒ₁はそれぞれ独立して、Ｈ、−ＯＨ、−Ｆ、−Ｏ−Ｘ₃−Ｄであり；Ｘ₃は１から１０個の炭素を有するアルキルであり；ＤはＨ、アミノ、保護されたアミノ、アルキルで置換されたアミノ、イミダゾール、または（−Ｏ−Ｘ₃）_pであり；Ｘ₂はそれぞれＯまたはＳであり；（ｐは１から約１０である）Ｒ₅は−Ｎ（Ｒ₆）₂、または、４から７個の原子からなり、窒素、硫黄、および酸素からなる群から選択された３個までのヘテロ原子を有する複素環アルキルもしくは複素環アルケニルであり；Ｑはそれぞれリン保護基であり；ｍは０から約５０であり；Ｂはそれぞれ独立して、自然に存在するもしくは自然に存在しない核塩基、または、自然に存在するもしくは自然に存在しない保護された核塩基である。］を有し；そして、Ｒ₇はＲ₅であるか、または式VIII：［式中：Ｒ₃は水素、水酸基保護基、または固相支持体に結合されたリンカーであり；そして、ｎは、０から約５０であり、ただしｍとｎの合計は５０を越えない］を有し；そして、ＺはＣＮ、ハロゲン、ＮＯ₂、アルカリール、スルホキシル、スルホニル、チオ、置換されたスルホキシル、置換されたスルホニル、または置換されたチオ（置換基はアルキル、アリール、またはアルカリールからなる群から選択される）である。］を有する化合物。１７．ＺがＣＮであり、そしてＱがＸ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚである、請求項１６記載の化合物。１８．Ｘ₁がＯである、請求項１７記載の化合物。１９．Ｘ₁がＳである、請求項１７記載の化合物。２０．ＡがＨである、請求項１７記載の化合物。２１．Ａが−Ｐ（Ｒ₅）₂である、請求項１７記載の化合物。２２．Ｒ₅が−Ｎ（ＣＨ（ＣＨ₃）₂）₂である、請求項２０記載の化合物。２３．Ｒ₇が式VIIを有する、請求項１６記載の化合物。２４．ｎが１から３０である、請求項２３記載の化合物。２５．ｎが１から約２５である、請求項２３記載の化合物。２６．ｎが０である、請求項２３記載の化合物。２７．ＺがＣＮであり；Ｘ₁がＯであり；そしてＡがＨである、請求項１７記載の化合物。２８．ＺがＣＮであり；Ｘ_lがＳであり；そしてＡがＨである、請求項１７記載の化合物。２９．ＺがＣＮであり；Ｘ₁がＯであり；そしてＲ₆がそれぞれイソプロピルである、請求項１７記載の化合物。３０．ＺがＣＮであり；Ｘ₁がＳであり；そしてＲ₆がそれぞれイソプロピルである、請求項１７記載の化合物。３１．式IV：を有する、請求項１６記載の化合物。３２．Ｒ₂が固相支持体に結合されたリンカーである、請求項３１記載の化合物。３３．Ｒ₂が水素である、請求項３１記載の化合物。３４．ｍおよびｎがそれぞれ０である、請求項３１記載の化合物。３５．ＺがＣＮであり；ＱがＸ₁Ｈまたは−Ｘ₁−ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−Ｚであり；そして、Ｘ₁がＯである、請求項３１記載の化合物。３６．請求項３記載の方法により製造される生成物。３７．前記切断工程が、δ−脱離機構を介して前記オリゴマー化合物から式Ｚ− ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−の部分を除去する、請求項６記載の方法。３８．前記切断工程が、δ−断片化機構を介して前記オリゴマー化合物から式Ｚ −ＣＨ₂−ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ₂−の部分を除去する、請求項６記載の方法。