JPH11508583A

JPH11508583A - ペプチド系のフィブロネクチン阻害薬

Info

Publication number: JPH11508583A
Application number: JP9504917A
Authority: JP
Inventors: ダッタ，アナンド・スワループ
Original assignee: ゼネカ・リミテッド
Priority date: 1995-07-06
Filing date: 1996-07-02
Publication date: 1999-07-27
Also published as: EP0842195A1; WO1997002289A1; AU6311996A; US6034057A

Abstract

(57)【要約】式（１）の環状二量体ペプチド (式中：ペプチド１およびペプチド２は独立して、平行または逆平行の配向で並置された式−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−のテトラペプチドを表し；ＡＡ１は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびにＰｒｏ、Ｇｌｙ、ＴｉｃおよびＰｈｅから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬまたはＤアミノ酸であり；ＡＡ２は、Ｌｅｕ、ならびにＩｌｅ、ＰｈｅおよびＶａｌから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ４は、Ｖａｌ、ならびにＬｅｕ、Ｉｌｅ、ＰｈｅおよびＣｈａ（シクロヘキシルアラニン）から選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；Ｌ１およびＬ２は独立して、ペプチド１と２を連結して環状ペプチドを形成するための連結部分を表す);またはその塩。これらの環状ジペプチドは、血管細胞接着分子−１およびフィブロネクチンとインテグリン超低速抗原４との相互作用を阻害し、多発性硬化症、喘息または慢性関節リウマチなどにおいて治療に用いられる。

Description

【発明の詳細な説明】ペプチド系のフィブロネクチン阻害薬細胞−細胞および細胞−細胞外マトリックス相互作用の多くは、タンパク質リガンド（たとえばフィブロネクチン、ビトロネクチンおよびＶＣＡＭ−１）と、それらのインテグリン系受容体(integrin receptor)［たとえばＶＬＡ−４（α ４β１）］により仲介される。最近の研究で、これらの相互作用は多くの生理学的状態（たとえば胚の発育および創傷の治癒）および病理学的状態（たとえば腫瘍細胞の侵入および転移、炎症、アテローム性動脈硬化症ならびに自己免疫疾患）において重要な役割を果たすことが示された。これらの相互作用のうちのあるものを選択的に阻害しうる薬剤は、多数の疾患の処置に有用であると推定される。インテグリンは、非共有結合したαおよびβサブユニットから構成されるヘテロ二量体型の細胞表面受容体である。分子生物学およびタンパク質化学を利用して、多数のαおよびβサブユニットが確認された。これらのインテグリンファミリーはβサブユニットに基づいて分類することができる。βサブユニットは１またはそれ以上のαサブユニットと結合することができる。最も広く分布しているインテグリンはβ１類に属し、これは超低速抗原（very late antigen(ＶＬＡ) ）としても知られている。第２類のインテグリンは白血球特異性受容体であり、３種類のαサブユニットのうちの１つがβ２タンパク質と複合体を形成したものからなる。細胞接着性物質（cytoadhesin）αＩＩｂβ３およびαｖβ３は第３類のインテグリンを構成する。多様なタンパク質がインテグリン系受容体に対するリガンドとして作用する。一般に、インテグリンが認識するタンパク質は３つの類、すなわち細胞外マトリックスタンパク質、血漿タンパク質、および細胞表面分子のうちの１つに属する。細胞外マトリックスタンパク質、たとえばコラーゲン、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、ラミニン、トロンボスポンジンおよびビトロネクチンは、多数のインテグリンに結合する。これらの接着性タンパク質の多くは血漿中をも循環し、活性化した血球に結合する。インテグリンに対するリガンドである他の血漿成分には、フィブリノーゲンおよびＸ因子が含まれる。細胞結合した補体Ｃ３ｂｉおよび幾つかのトランスメンブランタンパク質、たとえばＩｇ様細胞接着分子（ＩＣＡＭ−１，２，３）および血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）（これらはＩｇスーパーファミリーの構成員子である）も、あるインテグリンに対しては細胞表面リガンドとして作用する。多くのインテグリンにつき標的アミノ酸配列が確認された。たとえばα５β１、αＩＩβ３およびαＶβ３における標的配列は、フィブロネクチン、フィブリノーゲン、トロンボスポンジン、１型コラーゲン、ビトロネクチンおよびｖＷＦのようなタンパク質中に見られるＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐトリペプチドである。しかしＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ配列は、接着性リガンドが利用する唯一のインテグリン認識モチーフではない。他のインテグリンα４β１は配列Ｌｅｕ−Ａｓｐ −Ｖａｌを介してフィブロネクチンの可変領域（ＣＳＩ）を結合させ、血小板インテグリンαＩＩｂβ３はフィブリノーゲンのガンマ鎖のカルボキシ末端にある配列Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｌｙｓ−Ｇｌｎ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｖａｌをも認識する。本発明は主として、リガンドＶＣＡＭ−１とそれのインテグリン系受容体ＶＬＡ−４（α４β１）の相互作用を遮断する薬剤に関する［ＶＬＡ−４に関する総説についての参考文献：インテグリンＶＬＡ−４の構造とそれの細胞−細胞および細胞マトリックス接着機能，M.E.Hemler,M.J.Elices,C.Parker and Y.Takada, Immunological Reviews,114(1990)45-65］。インテグリンα４β１は、造血系前駆細胞、末梢および細胞毒性Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、単球、胸腺細胞ならびに好酸球を含めた、多数の造血細胞および樹立細胞系において発現する。細胞−細胞外マトリックス相互作用にのみ関与する他のβ１インテグリンと異なり、α４ β１は細胞−細胞相互作用および細胞−細胞外マトリックス相互作用の両方を仲介する。活性化したα４β１を発現している細胞は、フィブロネクチンのカルボキシ末端細胞結合性ドメイン（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ仲介でないもの）、内皮細胞上に発現しているＶＣＡＭ−１に結合し、また相互に結合してホモタイプ凝集を促進する。内皮細胞によるＶＣＡＭ−１の発現は、ＩＮＦ−γ、ＴＮＦ−α およびＩＬ−１βのような炎症前サイトカインによりアップレギュレーションされる。 α４β１仲介による細胞接着の調節は、Ｔ細胞増殖、胚中心へのＢ細胞局在化、ならびに内皮細胞への活性化Ｔ細胞および好酸球の接着を含めた多数の生理学的プロセスにおいて重要である。さらに、インテグリンα４β１仲介によるプロセスは、転移における黒色腫細胞侵入、慢性関節リウマチにおける滑膜のＴ細胞浸潤、自己免疫性糖尿病、大腸炎、実験自己免疫性脳脊髄炎における血液−脳関門の白血球透過、アテローム性動脈硬化症、末梢血管疾患、心臓血管疾患および多発性硬化症のような幾つかの疾患において、関連が指摘されている。上記疾患のプロセスでＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１相互作用が関連しているという証拠は、インビトロおよびインビボでの種々の炎症実験モデル（たとえばマウスにおける接触性皮膚過敏反応）、実験自己免疫性脳脊髄炎、肺の抗原攻撃、糖尿病、潰瘍性大腸炎、腎炎および同種移植片拒絶反応において、ペプチドＣＳ−１、およびＶＬＡ−４またはＶＣＡＭ−１に特異的な抗体がもつ役割を調べることにより蓄積された。他の関連疾患には、喘息、乾せん、再狭窄、心筋炎および炎症性腸疾患が含まれる。たとえば関節炎の実験モデル（近交系の雌ルーイス（Lewis）ラットに、グループＡストレプトコッカス細胞壁由来のペプチドグリカン−多糖類フラグメントの単回腹腔内注射により誘導した関節炎）において、関節炎の発症時に（０〜４日日目；３００μｇ／日）、または定着した関節炎を伴う動物に１１〜１６日目にＣＳ−１を静脈内注射すると、急性および慢性両方の炎症を抑制することが示された［参考文献：合成フィブロネクチンペプチドがラットにおいて白血球の接着および補強を阻害することにより関節炎を抑制する，S.M.Wahl,J.B.Allen,K.L .Hines,T.Imamichi,A.M.Wahl,L.T.Furcht and J.B.McCarthy,J.Clin.Invest.,94 (1994)655-662］。他の炎症モデル（オキサゾロンまたは２，４−ジニトロフルオロベンゼン感作マウスにおける接触過敏症）において、抗−α−４特異性モノクローナル抗体Ｒ１−２またはＰＳ／２の静脈内投与（攻撃の４〜６時間前）が遠心性(efferent) 反応を有意に阻害した（耳腫脹反応の５０〜６０％低下）。［参考文献：インテグリンα−４サブユニットに対するモノクローナル抗体がネズミの接触過敏反応を抑制する，P.L.Chisholm,C.A.Williams and R.R.Lobb,Eur.J.Immunol.,23(199 3)682-688］。腸炎症モデル（コットントップタマリン（Cotton-top tamarin）における急性大腸炎）において、ＶＬＡ−４を結合させる抗−α４インテグリンモノクローナル抗体ＨＰ１／２が急性大腸炎を有意に減退させた。これに対し２種類の抗−Ｅ−セレクチン−モノクローナル抗体（ＢＢ１１およびＥＨ８）は、コットントップタマリンにおいて１０日間の治療期間後に大腸炎をわずかに減退させただけであった［参考文献：抗−α４インテグリン−モノクローナル抗体によるコットントップタマリンの大腸炎減退，D.K.Podolsky,R.Lobb,N.King,C.D.B enlamin,B.Pepinsky,P.Sehgal and M.deBeaumont,J.Clin.Invest.,92(1993)372- 380］。これらの抗体は、多発性硬化症に類似する中枢神経系の炎症状態である自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）のモデルにも有効であることが示された。両疾患とも、循環白血球が血液−脳関門を透過し、ミエリンに損傷を与え、神経伝達障害および麻痺を引き起こす。ＥＡＥは、動物にミエリン塩基性タンパク質のようなＣＮＳタンパク質に対する初回抗原刺激を与えることによって能動的に誘導するか、またはこれらのＣＮＳ抗原に対して特異的な活性化したリンパ球を注射することによって養子的に（adoptively）誘導できる。種々のモノクローナル抗体［ＭＫ／１（抗−ＶＣＡＭ−１）、ならびにＳＰ／２およびＬＰＡＭ−１（抗α４インテグリン）］は、照射した雌（ＰＬ／Ｊ×ＳＪＬ）Ｆ１マウスに注射すると疾病の発症を遅らせた。α４インテグリンに対する抗体（ＬＰＡＭ−１およびＰＳ／２）の注射を疾病発症まで３日毎に継続すると、疾病の発症が遅れただけでなく、この場合には疾病の程度も著しく軽減した［参考文献：ＣＤ４Ｔ細胞が脳実質に進入するためには、それがα４インテグリンを表面発現することが必要である，J.L.Baron,J.A.Madri,N.H.Ruddle,J.Hashim and C.A.Janeway,Jr.,J.Exp.Me d.,177(1993)57-68］。 α４−インテグリン（ＬＰＡＭ−１）とそれのリガンドＶＣＡＭ−１の両方に特異的な抗体は、非肥満−糖尿病マウスのインスリン依存性真性糖尿病の治療にも有効であることが示された。インスリン依存性真性糖尿病は、活性化されたＴリンパ球が膵島のインスリン産生β細胞を破壊する自己免疫疾患であると考えられる。抗体Ｒ１−２は、非肥満−糖尿病マウスのインスリン炎発症を用量依存性様式で阻害した。疾病の遮断に伴ってランゲルハンス島のリンパ球浸潤が著しく減少した［参考文献：ネズミの養子自己免疫性糖尿病の発生機序は、４−インテグリンと血管細胞接着分子−１の相互作用を必要とする，J.L.Baron,E-P.Reich, I.Visintin and C.A.Janeway,Jr.,J.Clin.Invest.,93(1994)1700-1708］。インテグリンα４β１を発現する細胞は、フィブロネクチンのヘパリンII結合性ドメイン中、およびカルボキシ末端細胞結合性ドメイン内にある交互スプライシングしたタイプIII結合性セグメント（IIIＣＳ）中の配列に結合することが示された。α４β１は、IIIＣＳ領域内のＣＳ−１と呼ばれるペプチド配列（２５アミノ酸のペプチド）に高い親和性で結合する。これは、この配列がフィブロネクチン中の主なα４β１相互作用部位であることを示唆している。トリペプチドＬｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌは、フィブロネクチンへの造血細胞接着を支持することができる、またはα４β１仲介による細胞結合を阻害することができる、ＣＳ− １内の最小配列である［ＣＳ１に関する参考文献：フィブロネクチンのオルタナティブスプライシングしたタイプIII結合性セグメントドメイン内の主な細胞タイプ特異性接着部位（ＣＳ１）の最小必須配列はロイシン−アスパラギン酸−バリンである，A.Komoriya,L.J.Green,M.Mervic,S.S.Yamada,K.M.Yamada and M.J. Humphries,J.Biol.Chem.,23(1991)15075-15079；造血細胞によるフィブロネクチンのＶ領域内ＬＤＶ配列の活性化依存性認識,E.A.Wayner and N.L.Kovach,J.Cel l Biol.,116(1992)489-497］。前記のＬｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ含有配列のほか、環状オクタペプチド１−アダマンタンアセチル−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ −Ｃｙｓ（２システイン残基間にジスルフィド橋を含む）が、ＬＤＶ含有ペプチドＣｙｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ −Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒと同程度に、ＣＳ−１コーティングしたプレートへのジャーカット細胞接着を阻害するのに有効であると報告された（ＩＣ₅₀ ３０μＭ）。この環状ペプチドは、フィブロネクチンコーティングしたプレートへのジャーカット細胞の結合も阻害した。このオクタペプチドは、α４β１誘導による接着を阻害するほか、αＶβ３およびαＩＩｂβIIIａ依存性アッセイにおいても機能を阻害した。したがってこのペプチトはα４β１仲介による接着について選択的ではない［参考文献：環状ＲＧＤペプチドはα４β１と結合性フラグメント１および血管細胞接着分子との相互作用を阻害する，P.M.Cardarelli ,R.R.Cobb,D.M.Nowlin,W.Scholz,F.Gorcsan,M.Moscinski,M.Yasuhara,S-L.Chian g andT.J.Lobl,J.Biol.Chem.,269(1994)18668-18673］。幾つかの小さなペプチド［参考文献：Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ配列の非ペプチド系代理物質（surrogate）、ならびに炎症、自己免疫疾患および腫瘍の進行の治療におけるそれらの使用、ＹＥＤＡリサーチ・アンド・ディベロップメント社、国際特許出願公開第WO 94/02445号、公開日１９９４年２月３日］も、α４β １誘導による接着を阻害すると報告された。ジスルフィド環状ペンタペプチドであるＡｒｇ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−チオプロリン−Ｃｙｓ（チオプロリン＝チアゾリジン−４−カルボン酸）もフィブロネクチンへの白血球接着の阻害物質であると報告された。さらにこの環状ペプチドは、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ細胞結合中心ドメインを含む、フィブロネクチンの１２０ｋＤａキモトリプシン分解フラグメントへの結合も阻害した。この場合もこのペプチドは選択的でなかった。それは α４β１およびα５β１の両方に結合する［参考文献：新規な環状ペンタペプチドがα４β１およびα５β１インテグリン仲介による細胞接着を阻害する，D.M. Nowlin,F.Gorcsan,M.Moscinski,S-L.Chiang,T.J.Lobl and P.M.Cardarelli,J.Bi ol.Chem.,268(1993)20352-20359］。本発明は、比較的小さな二環式ペプチドがＶＣＡＭ−１とＶＬＡ４の相互作用を効果的に阻害しうるという知見に基づく。本発明の１態様によれば、式１（図１）の環状二量体ペプチド（式中：ペプチド１およびペプチド２は独立して、平行または逆平行の配向で並置された式−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−のテトラペプチドを表し；ＡＡ１は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびにＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｔｉｃ、ＧｌｎおよびＰｈｅから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬまたはＤアミノ酸であり；ＡＡ２は、Ｌｅｕ、ならびにＩｌｅ、Ｐｈｅ、ＰｒｏおよびＶａｌから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ４は、Ｖａｌ、ならびにＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ＰｒｏおよびＣｈａ（シクロヘキシルアラニン）から選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；Ｌ１およびＬ２は独立して、ペプチド１と２を連結して環状ペプチドを形成するための連結部分を表す）；またはその塩が提供される。本発明は、式１（図１）の環状二量体ペプチド（式中：ペプチド１およびペプチド２は独立して、平行または逆平行の配向で並置された式−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−のテトラペプチドを表し；ＡＡ１は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｐｒｏ、Ｇｌｙ、Ｔｉｃ、Ｐｈｅ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬまたはＤアミノ酸であり；ＡＡ２は、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｖａｌ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ４は、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｃｈａ（シクロヘキシルアラニン）、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；Ｌ１およびＬ２は独立して、ペプチド１と２を連結して環状ペプチドを形成するための連結部分を表す）；またはその塩を提供する。本明細書において、テトラペプチド−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−は、別途記載しない限りＡＡ１にそのＮ−末端をもち、ＡＡ４にそのＣ−末端をもち、アミノ酸は別途記載しない限りＬ立体配置をもつ。この環状ペプチドは好ましくは、本明細書に記載するＭＯＬＴ−４細胞／フィブロネクチンアッセイにおいて＜２０μＭ、より好ましくは＜１５μＭのＩＣ₅₀ をもち、またはこのペプチドは、本明細書に記載するＭＯＬＴ−４細胞／組換え可溶性ＶＣＡＭ−１アッセイにおいて＜１００μＭ、好ましくは＜５０μＭのＩＣ₅₀をもつ。好ましくはＡＡ４は一般式４（図４）をもち、式中、Ｒ¹はアミノ酸側鎖であり、Ｒ²およびＲ³は独立してＨまたはＣ₁ _〜4アルキル（好ましくはＨまたはＭｅ、特にＨ）を表す。ペプチド１と２が逆平行に並置されている場合、Ｌ１およびＬ２は好ましくは一般式５（図４）をもち、式中、Ｒ⁴はＨまたはＣ₁ _〜4アルキル（特にＨ）を表し、ＸはＣＨ₂において所望によりＣ₁ _〜4アルキルで置換された−(ＣＨ₂)_n（ｎ＝１〜４）、および−ＣＨ₂において所望によりＮＨ₂で置換された−(ＣＨ₂)_n（ｎ＝１〜４）から選択されるか；またはＸとＮＲ⁴は一緒に式８、式８ａもしくは式９の基（図４）（ｎ＝０〜４）を表す。ペプチド１と２が平行に並置されている場合、Ｌ１およびＬ２は好ましくはそれぞれ一般式７および６（図４）をもち、式中、Ｒ⁵およびＲ⁶は独立してＨまたはＣ₁ _〜4アルキル（特にＨ）を表し、ＸはＣＨ₂において所望によりＣ₁ _〜4アルキルで置換された−(ＣＨ₂)_n（ｎ＝１〜４）を表すか、または；ＸとＮＲ⁵は一緒に式８、式８ａもしくは式９の基（図４）（ｎ＝０〜４）を表すか、または；ＸとＮＲ⁶は一緒に式８、式８ａもしくは式９の基（図４）（ｎ＝０〜４）を表し；ただし、ＸとＮＲ⁵およびＸとＮＲ⁶の両方が式８、式８ａもしくは式９のいずれかの組合わせを表す場合、−(ＣＨ₂)_nモチーフは重複しない。好ましい意味は：ＡＡ１がＩｌｅであり、ＡＡ２がＬｅｕであり、ＡＡ３がＡｓｐであり、ＡＡ４がＶａｌである。好ましいＩｌｅ類似体を図８に示す。好ましくはペプチド１と２は逆平行に並置されている。好ましくはＬ１とＬ２は等しい。ＡＡ１に適する意味には、ｔ−Ｌｅｕおよびｔ−ブチル−Ａｌａが含まれる。ＡＡ１に適する他の意味には、Ｄ−Ｌｅｕ、ＭｅＩｌｅおよびＭｅＰｈｅが含まれる。ＡＡ２に適する他の意味はＮｌｅであり、ＡＡ４に適する他の意味はＬｅｕ、ＮｖａまたはＮｌｅである。ペプチド１と２が逆平行に並置されている場合につき、Ｌ１およびＬ２に好ましい意味を図７に示す。ペプチド１と２が平行に並置されている場合につき、Ｌ１およびＬ２に好ましい意味を図１２に示す。Ｌ１およびＬ２に好ましい他の意味を図１７に示す。本発明の環状ジペプチドは下記の利点のうち少なくとも１つをもつ。すなわちそれらは本発明者らの試験において、既知の化合物、たとえばＣＳ１およびＹＥＤＡ特許で請求されている化合物より有効であり；それらはＣＳ−１より小さい２５アミノ酸であるため、より容易に合成され；環状ペプチドは酵素分解に対してより安定である。化合物番号１（表２）は特に好ましい化合物であり、化合物番号１１〜１４も同様である。特に好ましい化合物はインビボスクリーニングで活性を示した［マウスインビボＣＨＳ（接触過敏症）モデルにおいて］−後記の実施例２参照。１０ｍｇ／ｋｇ／日および１ｍｇ／ｋｇ／日のＣＳ１は、阻害率０％を示した。本発明の被験化合物については、有効濃度で毒性が見られなかった。本発明の他の態様によれば、本発明の環状ジペプチドを薬剤学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共に含む薬剤組成物が提供される。本組成物は下記に適する剤形であってよい：経口用、たとえば錠剤、カプセル剤、水性もしくは油性の液剤、懸濁剤もしくは乳剤；鼻用、たとえば吹入剤、鼻用スプレーもしくは点鼻剤；膣もしくは直腸用、たとえば坐剤；吸入投与用、たとえば微細な粉末状もしくは液状エアゾル剤として；舌下もしくは口腔用、たとえば錠剤もしくはカプセル剤；または非経口用（静脈内、皮下、筋肉内、血管内または注入）、たとえば無菌の水性もしくは油性の液剤もしくは懸濁剤。本組成物は局所投与に適する剤形、たとえばクリーム剤、軟膏剤およびゲル剤であってもよい。皮膚パッチも考慮される。配合物全般については、Comprehensive Medi cal Chemistry,Vol.5，編集者Hanschら，パーガモン・プレス1990の25.2章に記載されている。一般に上記の組成物は慣用される賦形剤を用いて従来法で調製することができる。しかし経口投与用組成物の場合、環状ジペプチド有効成分を胃内での酵素の作用から保護するためのコーティングを含むことが好都合であるかもしれない。本発明の好ましい組成物は、１回量剤形での経口投与に適するもの、たとえば各１回量中に２．５〜５００ｍｇ、好ましくは１０〜１００ｍｇの環状ジペプチドを含有する錠剤もしくはカプセル剤、または溶液１ｍｌ当たり０．５〜１００ｍｇ、好ましくは１ｍｌ当たり１〜１０ｍｇの環状ジペプチドを含有する、非経口投与に適するものである。非経口組成物は、好ましくは必要ならばｐＨ５〜９に緩衝化した等張食塩水または等張デキストロース中の溶液である。あるいは非経口組成物は少なくとも５日間にわたって徐々に放出するように設計されたものであってもよく、この場合１回量当たりのポリペプチドの量は通常の注射用配合物を用いる場合に必要な量より一般に多い。好ましい徐放性配合物は連続放出配合物、たとえば欧州特許第 58481号に記載されている種類の配合物である。好ましい徐放性非経口配合物は、１回量当たり１０〜１００ｍｇの環状ジペプチドを含有する。本発明の組成物は、普通は経口１日量が０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、非経口１日量が２０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇとなるように投与されるであろう。したがって本発明は、医薬として使用するための本明細書に記載する環状ジペプチドを提供する。本発明の他の態様によれば、ＶＣＡＭ−１および／またはフィブロネクチンとインテグリン系受容体ＶＬＡ−４の相互作用を阻害する処置を必要とする温血動物、すなわちヒトのような哺乳動物において、それを阻害する方法であって、該哺乳動物に有効量の式１の環状ジペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩を投与することを含む方法が提供される。好ましい態様においては、そのような処置を必要とする哺乳動物は多発性硬化症、喘息または慢性関節リウマチに罹患している。本発明は、ＶＣＡＭ−１とインテグリン系受容体ＶＬＡ−４の相互作用により仲介される疾患または医学的状態の治療に用いる新規な医薬の製造におけるそのような式１の環状ジペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩の使用をも提供する。合成の詳細本発明の式１の環状二量体ペプチドは、ペプチド化学の技術分野で周知の、類似化合物の合成に適用できる任意の方法で製造することができる。たとえば本発明の環状ジペプチドは下記に開示されるものと類似の方法で得ることができる： “Solid Phase Peptide Synthesis：A Practical approach”AthertonおよびShe ppard（オックスフォード・ユニバーシティー・プレスのＩＲＬ出版社発行、1989 ）、“固相ペプチド合成”、StewartおよびYoung（イリノイ州パース・ケミカル・カンパニー発行、1984）、“ペプチド合成の原理”（ベルリン、スプリンガー出版社，1984）、“ペプチド合成の実際”（ベルリン、スプリンガー出版社，19 84）、ならびに一連の書籍“アミノ酸、ペプチドおよびタンパク質”(vol.1-25; vol.25を1994年に発行)（英国ケンブリッジ、ロイヤル・ソサエティー・オブ・ケミストリー発行）。合成は自動的手段または手動による手段で行うことができる。本発明の環状ジペプチドを製造するための好ましい方法には下記のものが含まれる：− （ａ）式１０（図１０）（式中、Ｐｒ１はＡＡ３の側鎖中の酸基の保護基を表す）の保護された環状ジペプチドから１またはそれ以上の慣用されるペプチド保護基を除去して、式１の本発明の環状ジペプチドを得る。所望により、同時にまたはその後、慣用される他のペプチド保護基をも除去する；（ｂ）２つのペプチド単位、すなわち一方はカルボン酸基を含むもの、またはその反応性誘導体、他方はアミノ基を含むものを、式１に示す配列をもつ保護された、または保護されていない環状二量体ペプチドが製造されるように結合させることによりアミド結合を形成させ、必要ならば上記（ａ）の方法を用いて保護基を除去する。本発明を限定ではない以下の実施例により説明する。図１は式１を示す。図２は逆平行に並置されたペプチド１と２を示す。図３は平行に並置されたペプチド１と２を示す。図４は式４〜９を示す。図５は化合物５（表２）の合成を示す。図６は化合物８（表２）の合成を示す。図７はペプチド１と２の逆平行並置のために好ましいリンカーを示す。図８はＩｌｅの類似体を示す。図９はＴｉｃ（１）およびニペコチン酸（２）を示す。図１０は式１０を示す。図１１は化合物１（表２）の詳細な構造を示す。図１２はペプチド１と２の平行並置のために好ましいリンカーを示す。図１３は化合物１（表２）の合成を示す。図１４は化合物１（表２）の合成の第２経路を示す。図１５は化合物３（表２）の合成を示す。図１６は化合物４（表２）の合成を示す。図１７は好ましいリンカーを示す。図中の矢印結合は、結合点のみを示す（すなわち−ＣＨ₂−基ではない）。結合点の指示は、別途明記または示唆しない限り、窒素原子が−Ｃ(Ｏ)−に結合する、およびその逆などであろう。表１は環状ジペプチドの合成と精製を示す。表２は環状ジペプチドの特性を示す。略号：Ｂｏｃｔ−ブトキシカルボニルＣｈａシクロヘキシルアラニンＤａｂ２，４−ジアミノ−酪酸Ｆｍｏｃ９−フルオレニルメトキシカルボニルＮｌｅノルロイシンＯｒｎオルニチンＰｂｆ２,２,４,７-ペンタメチルジヒドロベンゼンフラン-5-スルホニルＴｉｃ１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸Ｚベンジルオキシカルボニル温度は、別途明記しない限りすべて摂氏である。実施例１−化合物１〜１６（表２）の合成この環状ジペプチドを２つの異なる経路で製造した。これらの各方法において、必要な線状ペプチドは２−クロロトリチルクロリド樹脂を用いる固相ペプチド合成法により製造された。合成経路を図１３と１４に示し、詳細を以下において、この節と２節目に記載する。保護されたペプチドをこの樹脂上で組み立てたのち、線状ペプチドを樹脂から開裂させ、何ら精製せずに後続工程に用いた。しかし最終生成物は特性解明の前に逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で十分に精製された。ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のブロモ酢酸ｔ−ブチル（４．８８ｇ，２５ｍｍｏｌ）を、１−ピペラジンカルボン酸ｔ−ブチル（４．６５ｇ，２５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．５ｇ，２５ｍｍｏｌ）の、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中における溶液に添加した。反応混合物を一夜撹拌し、一夜で分離した固体を濾去し、濾液を蒸発乾固した。残渣を酢酸エチルと水の間で分配し、次いで有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、蒸発乾固した。残渣をエーテル −イソヘキサンから結晶化して、生成物（５．６６ｇ，７５％，融点９９〜１００℃）を得た［元素分析：実測値Ｃ５９.８％，Ｈ９.６％，Ｎ９.１％；Ｃ₁₅Ｈ₂ ₈ Ｎ₂Ｏ₄理論値Ｃ６０．０％，Ｈ９．４％，Ｎ９．３３％］。［シリカゲルプレート上での薄層クロマトグラフィーは単一スポットを示した；Ｒｆ：酢酸エチル −イソヘキサン（１：１）中で０．３８，メタノール−クロロホルム（１：９）中で０．６８］。１.１節に記載した化合物（５ｇ，１６．６ｍｍｏｌ）をトリフルオロ酢酸− 水混合物（９５：５；５０ｍｌ）で１時間処理した。酸を真空中での蒸発により除去し、残留する油をエーテルで摩砕処理すると固体が得られ、これを採集し、エーテルで洗浄し、真空下にＰ₂Ｏ₅／ＫＯＨで乾燥させた（６．２５ｇ，融点１７７〜１８２℃）。次いで炭酸カリウム（６．９２ｇ，３当量）を含有する水とアセトンの混合物（１：１；１５０ｍｌ）にこの固体を溶解した。アセトン（３０ｍｌ）中の９−フルオレニルメチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（５．６６ｇ，１６．７ｍｍｏｌ）を２０分かけて撹拌下に添加した。ＭＫ₂ＣＯ₃溶液の添加により溶液のｐＨを約９に維持した。室温で一夜撹拌したのち、アセトンを減圧下での蒸発により除去し、この水溶液をＫＨＳＯ₄溶液で酸性化した。生成物を酢酸エチル中へ抽出し、この溶液を水（６回）および飽和ＮａＣｌ溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ₄で乾燥させ、蒸発させると油が得られ、これをイソヘキサンおよびエーテルで摩砕処理すると凝固した(収量３.７２ｇ，６０％) 。試料をエタノール−エーテルから再結晶した。融点１７９〜１８２℃、ＭＨ⁺ ３６７。ジクロロメタン（１５ｍｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（５２５μｌ，３当量）中のＦｍｏｃ−ピペラジン誘導体（３６６ｍｇ，１ｍｍｏｌ）を、２ −クロロトリチルクロリド樹脂（ノバ・バイオケム(Nova Biochem.),１ｇ）に添加し、反応混合物を７５分間、緩和に振盪した。メタノール中の１０％ジイソプルピルエチルアミン溶液（１０ｍｌ）を添加し、１０分間振盪を続けた。樹脂を濾別し、塩化メチレン、ジメチルホルムアミド、塩化メチレン、エーテルで順に洗浄し、真空オーブン内で５０℃において乾燥させた（重量１．１３ｇ）。上記の樹脂を焼結ガラスディスク付きの反応器に装入した。次いで下記の一連の反応を手動で実施して、目的とするペプチド樹脂を得た。（ａ）ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで２回処理（５分を１回、および１５分を１回）してＦｍｏｃ基を除去した。（ｂ）ジメチルホルムアミド洗浄（５回）。（ｃ）Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）（７６０ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（７００μｌ，４ｍｍｏｌ）により活性化したＦｍｏｃ−Ｖａｌ（６７８ｍｇ，２ｍｍｏｌ）で、ジメチルホルムアミド（４ｍｌ）中において１時間アシル化した。（ｄ）ジメチルホルムアミド洗浄（５回）。Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）(８２２ｍｇ，２ｍｍｏｌ)、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ（７００ｍｇ，２ｍｍｏｌ）、およびＦｍｏｃ−Ｉｌｅ（７００ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を用いて以上の脱保護および結合サイクルを繰り返し、クロロトリチル樹脂に結合した保護されたテトラペプチド誘導体を得た。Ｎ−末端Ｆｍｏｃ−基をジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで開裂させ（５分を１回、および１５分を１回）、ペプチド樹脂をジメチルホルムアミド、塩化メチレン、およびエーテルで順に洗浄し、真空オーブン内で５０℃において乾燥させた。このペプチド樹脂を酢酸−トリフルオロエタノール−塩化メチレン（２：２：６）混合物（２５ｍｌ）に２時間懸濁させた。樹脂を濾過により分離し、上記の溶剤混合物で洗浄した。濾液を合わせて蒸発させ、残渣をエーテルで摩砕処理して、線状テトラペプチド誘導体を酢酸塩として得た。次いでこの酢酸塩を水−アセトニトリル（２：１，６０ｍｌ）混合物に溶解し、０℃に冷却し、１．０５当量の１ＮＨＣｌを添加し、内容物を凍結乾燥することにより、塩酸塩に変換した。前記の線状ペプチド塩酸塩（３８８ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（６００ｍｌ）に溶解し、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）（２１８ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）を添加し、次いでジイソプルピルエチルアミン（３００μｌ，１．７２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで真空下で蒸発乾固した。前記の粗製環状ジペプチドを、トリフルオロ酢酸−水混合物（９５：５；２５ｍｌ）およびトリイソプルピルシラン（２００μｌ）で１時間処理して、アスパラギン酸の側鎖保護基を除去した。蒸発させて小容量にし、次いでエーテルで摩砕処理して粗製環状ペプチドを得た。これを、Ｖｙｄａｃ２１８ＴＰ１０２２カラム上で０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水濃度勾配（２０〜５０％）を１０．０ｍｌ／分の流量で６５分間にわたって用いる調製用逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含有する画分を合わせて凍結乾燥させ、精製環状ペプチド（４６ｍｇ）を得た。このペプチドをアミノ酸分析および質量分析により特性解明した。２．化合物１の合成（第２経路、図１４）図１４に示した第２経路では、第１経路で用いたテトラペプチド誘導体の代わりに線状オクタペプチド誘導体（構造を後記に示す）の合成を行った。第１および第２経路の両方とも最初の３工程は同じである。２.１. 化合物１の合成（図１４、工程４および５）工程３（図１４）で得たＦｍｏｃ保護テトラペプチド樹脂を２分した。樹脂の半分を標準法によりピペリジンで処理してＮ−末端Ｆｍｏｃ基を開裂させ、なお樹脂に結合している部分保護したテトラペプチド誘導体を得た（工程４）。他方の半分を酢酸−トリフルオロエタノール−塩化メチレン混合物（２：２：６）で標準法により処理して、Ｆｍｏｃ保護テトラペプチド誘導体を樹脂から開裂させた（工程５）。このＦｍｏｃ保護したフラグメント（８００ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ）を、次いでなお樹脂に結合しているテトラペプチドフラグメントに、連鎖延長法に際して各種アミノ酸誘導体を結合させるのに用いる標準法（ＨＢＴＵ，３５２ｍｇ，０．９３ｍｍｏｌ，ジイソプルピルエチルアミン３２５μｌ，１．８５ｍｍｏｌ）により結合させた。２.２. 化合物１の合成（図１４、工程６、７および８）樹脂上で組み立てた線状オクタペプチド誘導体を、第１経路で用いた標準法によりＮ−末端で脱ブロッキングし（Ｆｍｏｃの開裂）、樹脂から開裂させ、環化し脱保護した［Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）の開裂］。次いで表１に記載した溶剤系を用いてこの二量体ペプチドを精製した（収量３７４ｍｇ）。３．化合物２の合成このペプチドを、対応するＩｌｅ含有化合物１につき先に記載した第１経路により製造した。ＨＰＬＣ分析はこの生成物が目的の二量体（３８％）と環状モノマー（６２％）の混合物であることを示した。表１に記載した溶剤系を用いる逆相ＨＰＬＣ精製により目的の二量体ペプチドが得られ、これをアミノ酸分析および質量分析により特性解明した（表２）。４．化合物３の合成（図１５）この環状ジペプチド（表１）の合成に必要な線状ペプチドを、２−クロロトリチルクロリド樹脂上で組み立てた。実施例１．３（化合物１）にＦｍｏｃ−ピペラジン誘導体につき記載したと同様な方法で、３−ブロモプロピオン酸をこの樹脂と反応させた。次いで５倍過剰のピペラジンをこの３−ブロモプロピオニル− Ｏ−（２−クロロトリチル）−樹脂に添加して、樹脂に結合したピペラジニル− Ｎ−プロピオニル誘導体（構造を後記の図１５、工程１に示す）を得た。次いでＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、およびＦｍｏｃ− Ｉｌｅを１．３節に記載した方法で樹脂に結合させて、Ｆｍｏｃ−テトラペプチドピペラジニル誘導体を得た。Ｎ−末端Ｆｍｏｃ基を開裂させるための標準法によりピペリジン処理して、工程２（図１５）に示した部分保護テトラペプチド誘導体を得た。３−ブロモプロピオン酸、ピペラジン、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、およびＦｍｏｃ−Ｉｌｅを用いた標準法による結合および脱保護反応により、２つのピペラジン基を含むオクタペプチド誘導体（図１５、工程４）を得た。次いでこのペプチドを、化合物１につき先に記載した方法で樹脂から開裂させ、環化し、脱保護し、精製した。５．化合物４および５の合成これら両化合物を、化合物１の合成につき先に記載した第２経路（図１４）で合成した。図１６および５に示すように、Ｎ−末端に遊離アミノ基をもつフラグメントのうち１つは樹脂に結合したまま残し、Ｎ−末端にＦｍｏｃ基を含む第２フラグメントを樹脂から開裂させた。Ｃ−末端カルボキシル基を含む第２フラグメントをＨＢＴＵ法で活性化し、なお樹脂に結合しているフラグメントに結合させた。樹脂上で組み立てた線状ペプチド誘導体を、化合物１の合成に用いた標準法でＮ−末端を脱ブロッキングし（Ｆｍｏｃの開裂）、樹脂から開裂させ、環化し、脱保護した［Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）の開裂］。次いで表１に記載した溶剤系を用いて、この二量体ペプチドを精製した。６．化合物６の合成 β−アラニンから出発して、線状デカペプチド、Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）−Ｖａｌ−β−Ａｌａ−Ｄ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ） −Ｖａｌ−β−Ａｌａをクロロトリチル樹脂上で組み立てた。合成の残りの部分（開裂、環化および脱保護）は化合物１のものと同様であった。７．化合物７の合成７.１. このペプチドを、２−クロロトリチルクロリド上で下記の方法により組み立てた線状ペプチド（下記の構造）の二量体化により製造した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ（７００ｍｇ，２ｍｍｏｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（１．０５ｍｌ，６ｍｍｏｌ）の、乾燥ジクロロメタン（２０ｍｌ）中における溶液を、ジクロロメタン（１０ｍｌ）中における２−クロロトリチルクロリド樹脂（２ｇ）の懸濁液に添加し、反応混合物を緩和に７５分間振盪した。メタノール中の１０％ジイソプルピルエチルアミン溶液（１０ｍｌ）を添加し、さらに１０分間振盪を続けた。樹脂を濾別し、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタンおよびエーテルで順に洗浄し、５０℃で真空オーブン内において乾燥させた（重量２．４ｇ）。上記の樹脂を焼結ガラスディスク付きの反応器に装入した。次いで下記の一連の反応を手動で実施して、目的とするペプチド樹脂を得た。（ａ）ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで２回処理（５分を１回、および１５分を１回）してＦｍｏｃ保護基を除去し、次いでジメチルホルムアミドで５回洗浄した。（ｂ）このＬｅｕ樹脂を、Ｏ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−１,１,３, ３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）（１．５２ｇ，４ｍｍｏｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（１．４ｍｌ，８ｍｍｏｌ）により活性化したＦｍｏｃ−Ｖａｌ（１．４２ｇ，４ｍｍｏｌ）で、ジメチルホルムアミド（８ｍｌ）中において３０分間アシル化した。反応後に樹脂をジメチルホルムアミドで５回洗浄して（前記と同様）過剰の試薬を除去し、乾燥させた。こうして得たＦｍｏｃ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ樹脂の半分のみを次の工程に用いた。（ｃ）Ｆｍｏｃ−ニペコチン酸(７０２ｍｇ,２ｍｍｏｌ)、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ( ６７８ｍｇ，２ｍｍｏｌ)、およびＦｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)（８２２ｍｇ，２ｍｍｏｌ）を用いて以上の脱保護および結合サイクルを繰り返し、樹脂に結合した目的とする部分保護テトラペプチド誘導体を得た。酢酸−トリフルオロエタノール−ジクロロメタン（２：２：６；１５ｍｌ）で２回、１時間処理することにより、ペプチドを樹脂から開裂させた。この樹脂を濾別し、上記の脱ブロッキング溶剤混合物で洗浄した。濾液を合わせて蒸発させ、残渣をエーテルで摩砕処理して、線状の部分保護テトラペプチドを酢酸塩として得た。次いでこのペプチドを水−アセトニトリル（２：１，６０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、１．０５当量の１ＮＨＣｌを添加し、凍結乾燥することにより、塩酸塩に変換した。前記の線状ペプチド塩酸塩（３５０ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（５００ｍｌ）に溶解し、ＨＢＴＵ（１９４ｍｇ，０．５１ｍｍｏｌ）を添加し、次いでジイソプルピルエチルアミン（２６８μｌ，１．５３ｍｍｏｌ）を添加した。反応を逆相ＨＰＬＣにより監視した。３時間後に、出発物質を検出できなくなった時点で反応混合物を蒸発乾固し、残渣をトリフルオロ酢酸−水混合物（９５：５，２５ｍｌ）およびトリイソプロピルシラン（５００μｌ）で１時間処理した。蒸発させて小容量にしたのち、エーテルを添加し、粗生成物を濾過により採集した。ＨＰＬＣ分析は生成物が目的の二量体（７２％）と環状モノマー（２８％）の混合物であることを示した。表１に記載した溶剤系を用いる逆相ＨＰＬＣにより目的の二量体ペプチドが得られ、これをアミノ酸分析および質量分析により特性解明した（表２）。８．化合物８、ｃ（Ｄ−Ａｒｇ−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｄ −Ａｒｇ−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ）の合成（図６）２−クロロトリチルクロリド樹脂を用いる固相法によりこの環状ペプチドを製造した。合成の詳細を下記に示す。部分保護した線状ペプチドを樹脂上で組み立てたのち、ペプチドを樹脂から開裂させ、何ら精製せずに後続工程に用いた。ただし最終生成物は、逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって十分に精製したのち特性解明された。８.１. Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−クロロトリチル樹脂の製造（図６、工程１）２−クロロトリチルクロリド樹脂（アレキシックス・コーポレーション（Alex ix Corporation）；Ｃｌ１．３５ｍｍｏｌ／ｇ；５ｇ）をジクロロメタン（３０ｍｌ）（モレキュラーシーブ上で乾燥）中で５分間膨潤させた。Ｆｍｏｃ− Ｖａｌ（１．７ｇ，５ｍｍｏｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（２．６３ｍｌ，１５ｍｍｏｌ）の、ジクロロメタン（２５ｍｌ）中における溶液を添加し、この懸濁液を４５分間、機械的に振盪した。メタノール（９ｍｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（１ｍｌ）を添加し、さらに５分間振盪を続けた。樹脂を濾過により採集し、ジクロロメタン、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、イソプロパノールおよびエーテルで順に洗浄し、最後に５０℃で真空オーブン内において乾燥させた（重量５．２５ｇ）。８.２. Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ −Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−クロロトリチル樹脂の製造（図６、工程２および３）前記のＦｍｏｃ−Ｖａｌ樹脂（２ｇ）を焼結ガラスディスク付きの反応器に装入した。次いで下記の一連の反応を手動で実施して、目的とするペプチド樹脂を得た。（ａ）ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジンで２回処理（５分を１回、および１５分を１回）してＦｍｏｃ基を除去し、次いでジメチルホルムアミドで５回洗浄して過剰の試薬および開裂生成物を除去した。（ｂ）Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）（１．９０ｇ，５ｍｍｏｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（１．７５ｍｌ，１０ｍｍｏｌ）により活性化したＦｍｏｃ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)（２．０６ｇ，５ｍｍｏｌ）で、ジメチルホルムアミド（８ｍｌ）中において１時間アシル化した。樹脂を再びジメチルホルムアミドで５回洗浄して過剰の試薬を除去した。Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ（１.７８ｇ，５ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−ＭｅＩｌｅ（１.８４ｇ，５ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)(３．７６ｇ，５ｍｍｏｌ) を用いて以上の脱保護および結合サイクルを繰り返し、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ( Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−クロロトリチル樹脂を得た。この樹脂の半分を用いて、このペンタペプチド樹脂をさらに延長させて保護されたデカペプチド樹脂を得る反応を実施した。このペンタペプチド樹脂につき、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ（８５０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ (ＯＢｕｔ)（１．０３ｇ，２．５ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ（８５５ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−ＭｅＩｌｅ（９２０ｍｇ，２．５ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)（１．８７ｇ，２．５ｍｍｏｌ）を用いて、脱ブロッキングおよび結合反応を続けた。化合物１の場合と同様に、Ｆｍｏｃ−Ｄ−Ａｒｇ誘導体の結合はＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）およびジイソプルピルエチルアミンを用いて活性化された。ジメチルホルムアミド中の２０％ピペリジン（５分を１回、および１５分を１回）でＮ−末端Ｆｍｏｃ− 基を開裂させ（工程３）、ペプチド樹脂、Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ− Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−クロロトリチル樹脂をジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、およびエーテルで順に洗浄し、５０℃で真空オーブン内において乾燥させた。８.３. Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ −Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ,ＨＣl の製造（図６、工程４）ペプチド樹脂、Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ) −Ｖａl−Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａl −クロロトリチル樹脂を、酢酸−トリフルオロエタノール−ジクロロメタン(２：２：６)混合物（２５ｍｌ）に１時間懸濁した。樹脂を濾別し、同混合物でさらに１時間、再処理した。濾液を合わせて蒸発させ、残渣をエーテルで摩砕処理して、Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ− Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌを酢酸塩 (１.３４ｇ)として得た。次いでこの酢酸塩を水−アセトニトリル混合物（２：１，６０ｍｌ）に溶解し、０℃に冷却し、１．０５当量の１ＮＨＣｌを添加し、内容物を凍結乾燥させることにより、塩酸塩に変換した。８.４. ｃ（Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ）の製造（図６、工程５）前記の線状ペプチド塩酸塩、Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ( ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ(ＨＣｌ)（１．３４ｇ，０．７ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（７００ｍｌ）に溶解し、この溶液にＯ−（７−アザベンゾトリアゾール −１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＡＴＵ）（２６４ｍｇ，０．７ｍｍｏｌ）およびジイソプルピルエチルアミン（３７０μｌ，２．１ｍｍｏｌ）を添加した。環化反応を分析用ＨＰＬＣにより監視した。反応が終了した時点で（室温で２時間）、反応混合物を真空中で蒸発乾固し、エーテルを添加し、固体を濾過により採集した。生成物［Ｖｙｄａｃ２１８ＴＰ５４カラム上で０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水濃度勾配（６０〜９５％）を１．０ｍｌ／分の流量で３０分間にわたって用いた際の保持時間２２．０６分］を何ら精製せずに次の工程に用いた。８.５. ｃ（Ｄ−Ａｒｇ−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ− ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ）［化合物８］の製造（図６、工程６）前記の保護された環状ペプチド、ｃ(Ｄ−Ａｒｇ(Ｐｂｆ)−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ−Ｄ−Ａｒｇ（Ｐｂｆ）−ＭｅＩｌｅ−Ｌｅｕ− Ａｓｐ(ＯＢｕｔ)−Ｖａｌ）を、トリフルオロ酢酸−水混合物（９５：５；３０ｍｌ）およびトリイソプルピルシラン（１ｍｌ）で１５０分間処理して、アルギニンおよびアスパラギン酸の側鎖保護基を除去した。蒸発させて小容量にし、次いでエーテルで摩砕処理して粗製環状ペプチド（１．０６ｇ）を得た。この粗生成物を、デルタパック（Deltapak）Ｃ₁₈カラム（３０×３０ｍｍ）上で０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水濃度勾配（２０〜３６％）を３０．０ｍｌ／分の流量で８０分間にわたって用いる調製用逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含有する画分を合わせて凍結乾燥させ、精製環ペプチド（２８０ｍｇ）を得た。このペプチド［ＨＰＬＣで単一ビーク、Ｖｙｄａｃ２１８ＴＰ５４カラム上で０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水濃度勾配（２０〜４５％）を１．０ｍｌ／分の流量で３０分間にわたって用いた際の保持時間２９．６０分］をアミノ酸分析および質量分析により特性解明した（表２）。９．化合物９および１０の合成これら両化合物とも、化合物８につき先に記載したものと同じ方法で合成された。１０．化合物１１〜１４の合成化合物１に用いた第２経路（図１４，２節）によりこれらのペプチドを合成した。化合物１１、１２および１４については線状オクタペプチド誘導体、ならびに化合物１３についてはデカペプチド誘導体（表１に示す配列）を、前記方法によりまず樹脂上で組み立て、次いで開裂、環化および脱保護して、目的生成物を得た。１１．化合物１５の合成化合物８につき先に記載したものと同じ方法で化合物１５を合成した。ただしＦｍｏｃ−ＮＨ(ＣＨ₂)₂−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＯＯＨを用いて、普通にはない連結基 −ＮＨ(ＣＨ₂)₂−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＯ−を取り込ませた。この誘導体の合成を以下に記載する。Ｆｍｏｃ−ＮＨ(ＣＨ₂)₂−Ｓ−ＣＨ₂−ＣＯＯＨ（上記で使用）は２−アミノエタンチオールおよび２−ブロモ酢酸から得られた。塩酸２−アミノエタンチオール（５．６８ｇ，５０ｍｍｏｌ）を水（２００ｍｌ）に溶解し、これに炭酸水素ナトリウム（２５．２ｇ，３００ｍｍｏｌ）を添加した。アセトニトリル（１００ｍｌ）に溶解した２−ブロモ酢酸（６．９５ｇ，５０ｍｍｏｌ）を少量ずつ３０分かけて、上記で調製した溶液に撹拌下に添加した。室温で１時間後にアセトニトリル（１５０ｍｌ）中における９−フルオレニルメチル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ）（１６．８５ｇ，５０ｍｍｏｌ）の溶液を添加し、１６時間撹拌を続けた。わずかに混濁した溶液を蒸発させて大部分のアセトニトリルを除去し、残りの水溶液を酢酸エチルで抽出し（５０ｍｌで３回）、塩酸の添加により酸性化した（ｐＨ２）。白色固体を採集し、水で洗浄し、真空中で４５℃において乾燥させた。収量１７ｇ（９５％）、（Ｍ＋Ｈ）⁺３５８．０。１２．化合物１６の合成化合物８につき先に記載したものと同じ方法で化合物１６を合成した。実施例２ −インビトロおよびインビボアッセイ以下の実施例では以下の略号および供給源を用いた。ＭＯＬＴ−４細胞−リンパＴ細胞系（ＡＴＣＣ由来）フィブロネクチン−試薬用ヒトフィブロネクチン。ヒト血漿からゼラチン−セファロースアフィニティークロマトグラフィーにより精製。販売元：バイオ・プロダクツ社、英国エルストリー、製品Ｎｏ．９１３６。フィブロネクチンに関する総説：フィブロネクチン−細胞表面および血液の接着性糖タンパク質，K.M.Ya mada and K.Olden,Nature,275(1978)179-184。ｒｓＶＣＡＭ−１−（参考文献：Biochem Biophys Res Comm 1991 178 N3:149 8-1504）。ＶＣＡＭ−１は、血管内皮により、またマクロファージ様およびダンドゥリティック（dandritic）細胞タイプ上に、特定の炎症性刺激に応答して産生される細胞表面糖タンパク質である。ＶＣＡＭ−１は、単核白血球上に存在するインテグリンＶＬＡ−４と相互作用する。ＶＣＡＭ−１に対するｃＤＮＡは、ＩＬ−１β−活性化したヒト内皮細胞由来のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより単離された。昆虫細胞においてバキュロウイルス発現系を用いて、大量のタンパク質を発現させた。ＶＣＡＭ−１発現細胞は多様なＶＬＡ− ４発現細胞系（ジャーカット、ＴＨＰ−１、Ｕ９３７）に特異的に結合することが示された。ＶＣＡＭ−１に関する他の参考文献：バキュロウイルス感染昆虫細胞により合成された組換えヒト血管細胞接着分子（ＶＣＡＭ−１）の発現と機能解明，J.K.Stoltenborg,R.A.Straney,R.J.Tritch,W.M.Mackin and H.J.George,P rotein Expression and Purification,4(1993)585-593。ＰＲＭＩ１６４０−細胞培地。販売元：ギブコＢＲＬ社（ライフ・テクノロジーズ；カタログＮｏ３１８７０−０２５）。ＦＣＳ−ウシ胎児血清。販売元：アドバンスト・プロテイン・プロダクツ社（英国ウエスト・ミッドランド）、カタログＮｏ．ＡＳ−３０２−５０。ＢＣＥＣＦ−ＡＭ−２′,７′−（２−カルボキシエチル）−５−(ε６)−カルボキシエチルフルオレセインアセトキシメチルエステル。販売元：モレキュラー・プローブズ社、米国；カタログＮｏ．Ｂ−１１５０。ＣＨＯＤＧ４４−チャイニーズハムスター卵巣細胞系（ＡＴＣＣ由来；参考文献：Som Cell Mol Gen 1986;12;555-666）。ＤＭＥＭ−ダルベッコ改変イーグル培地。販売元：ギブコＢＲＬ社（ライフ・テクノロジーズ；カタログＮｏ４１９６６−０２９）。抗生物質−ペニシリン−ストレプトマイシン。販売元：ギブコＢＲＬ社（ライフ・テクノロジーズ；カタログＮｏ１５０７０−０２２）。フルオルスカン（Fluorskan）−蛍光光度計ＨＵＶＥＣ−ヒト臍帯内皮細胞。初代培養物は組織試料から調製された（参考文献：J Clin Invest.1973 52;2745-2747）。組換え体ヒトＴＮＦα−腫瘍壊死因子アルゼット（Alzet）浸透圧ミニポンプ−皮下埋込み式ミクロ浸透圧ポンプ。アルザ・コーポレーション（Alza Corporation）、カリフオルニア州パロ・アルト。２.１ＭＯＬＴ−４細胞／フィブロネクチン−ＶＣＡＭ−１接着アッセイＭＯＬＴ−４細胞／フィブロネクチン−ＶＣＡＭ−１接着アッセイを用いて、ＭＯＬＴ−４細胞膜上に発現したインテグリンＶＬＡ４（超低速抗原、α４／β １）とフィブロネクチンまたは組換え可溶性ＶＣＡＭ−１（ｒｓＶＣＡＭ−１）との相互作用を調べる。フィブロネクチンまたはｒｓＶＣＡＭ−１をポリスチレン製９６ウェルミクロタイタープレートに４℃で一夜、それぞれ２０μｇ／ｍｌおよび１μｇ／ｍｌの濃度でコーティングする。これに続いて濃縮ＢＳＡ溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）を添加して、非特異的結合部位をブロックする。これらの溶液を吸引したのち、等容量の化合物およびＭＯＬＴ−４細胞懸濁液（１×１０⁶細胞／ｍｌ）を添加する。３７℃で２時間のインキュベーション中に接着が起こる。緩和に撹拌し、続いて真空吸引することにより、接着していないか、またはゆるく接着した細胞を除去する。残留する接着細胞の定量を酸性ホスファターゼ活性の比色アッセイ法により行い、分光光度計により読み取る。接着を阻害する化合物は、吸収の読みを低下させる。標準、対照および被験条件を三重にアッセイし、各プレートにつき全体（阻害薬なし）および非特異的（フィブロネクチンなし）標準に対する阻害率％を計算する。２.２細胞−細胞アッセイ２.２.１ＶＣＡＭ−１細胞ＭＯＬＴ−４細胞（５％のＦＣＳおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０）を蛍光色素ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（３×１０⁶細胞当たり３０μ ｇ／ｍｌ）で標識する。全長ＶＣＡＭ−１ｃＤＮＡでトランスフェクションしたＣＨＯＤＧ４４を、ＦＡＣＳ分析によりＶＣＡＭ−１発現につき選択し、９６ウェル組織培養プレート中で集密状態まで増殖させる。接着アッセイに用いる前に、ＣＨＯＤＧ４４細胞を３回洗浄する（５％のＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、および２％の抗生物質を補充したＤＭＥＭ）。ＭＯＬＴ−４（１０⁵細胞／ウェル）細胞でＶＣＡＭ−１発現ＣＨＯ細胞を覆い、３７℃、５％ＣＯ₂で３０分間インキュベートする。プレートを３回洗浄する（５％のＦＣＳおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０）ことにより、接着していない細胞を除去し、次いでプレートをティッシュペーパーで吸収乾燥させる。各ウェルに１００μｌの２％トリトン（Triton）Ｘ−１００を添加し、フルオルスカンを用いてプレートを読み取る（励起＝４８５ｎＭ、発光＝５３８ｎＭ）。化合物を適切な溶剤に溶解し、ＨＵＶＥＣ培養物に添加する前のＭＯＬＴ−４細胞に添加し、対照ビヒクル処理細胞と化合物処理細胞の接着（蛍光）量を比較して接着阻害率を計算する。２.２.２ヒト臍帯内皮細胞ＭＯＬＴ−４細胞（５％のＦＣＳおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０）を蛍光色素ＢＣＥＣＦ−ＡＭ（３×１０⁶細胞当たり３０μ ｇ／ｍｌ）で標識する。初代ＨＵＶＥＣを９６ウェル組織培養プレート中で集密状態まで増殖させ、２Ｕ／ｍｌの組換えヒトＴＮＦαと共に１８時間インキュベートする。接着アッセイに用いる前に、初代ＨＵＶＥＣ単層を洗浄する（５％のＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、および２％の抗生物質を補充したＭ１９９）。ＭＯＬＴ−４（１０⁵細胞／ウェル）細胞で初代ＨＵＶＥＣを覆い、３７℃、５％ＣＯ₂で３０分間インキュベートする。プレートを３回洗浄する（５％のＦＣＳおよび２ｍＭのＬ−グルタミンを補充したＲＰＭＩ１６４０）ことにより、接着していない細胞を除去し、次いでプレートをティッシュペーパーで吸収乾燥させる。各ウェルに１００μｌの２％トリトン（Triton）Ｘ−１００を添加し、フルオルスカンを用いてプレートを読み取る（励起＝４８５ｎＭ、発光＝５３８ｎＭ）。化合物を適切な溶剤に溶解し、ＨＵＶＥＣ培養物に添加する前のＭＯＬＴ−４細胞に添加し、対照ビヒクル処理細胞と化合物処理細胞の接着（蛍光）量を比較して接着阻害率を計算する。２.３インビボ接触過敏反応Ｂａｌｂ／Ｃ雄マウス（２０〜２５ｇ）をオキサゾロン（アセトン／オリーブ油中０．２４％のもの５０μｌ）で、背面の毛を剃った皮膚領域に局所適用することにより感作する。７日後にオキサゾロン（アセトン／オリーブ油中０．２５％のもの２５μｌ）を耳の表面に局所適用することによりマウスを攻撃する。２４時間にわたって耳の腫脹を発症させたのち、耳の厚さを測定し、攻撃前の厚さと比較して耳の厚さの増加率％を計算する。オキサゾロン攻撃の２４時間前に埋め込んだアルゼット浸透圧ミニポンプで毎日投与（１日１回）することにより化合物を送入し、ビヒクル処理動物と化合物処理群（１群当たりの動物数ｎ＝６）を比較することにより炎症反応の阻害を計算する。２.４オボアルブミン遅延型インビボ過敏症モデルＢａｌｂ／Ｃ雌マウス（２０〜２５ｇ）を、側腹部においてオボアルブミンエマルション（シグマ社；完全フロイントアジュバント（ディフコ社）との混合（１：１）２ｍｇ／ｍｌ溶液０．１ｍｌの皮下注射）で免疫化する。７日後にオボアルブミン（食塩水中の１％熱凝集オボアルブミン３０μｌ）を足底下注射（左後足底）することによりマウスを攻撃する。足の腫脹を２４時間にわたって発症させたのち、足底の厚さを測定し、攻撃前の厚さと比較し、足底の厚さの増加率％を計算する。オボアルブミン攻撃の２４時間前に埋め込んだアルゼット浸透圧ミニポンプで毎日投与（１日１回）することにより化合物を送入し、ビヒクル処理動物と化合物処理群（１群当たりの動物数ｎ＝５）を比較することにより炎症反応の阻害を計算する。２.５インビボ抗原誘発性関節炎モデル完全フロイントアジュバント中における１００μｇのメチル化ＢＳＡの組合わせでマウスを免疫化し、７日後に追加免疫化し（皮下）、次いで百日咳菌（Bord etella pertussis）を腹腔内注射する。追加免疫化の２週間後に、動物を１００ μｇのメチル化したウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）で関節内攻撃し、ひざ関節の腫脹、組織学的状態、および急性期タンパク質の変化を調べることにより、炎症／関節炎の程度を判定する。攻撃の前日から７〜１４日間、化合物を投与し、炎症／関節炎の程度を対照動物および反対側のひざと比較する。２.６実験自己免疫性脳脊髄炎モデル脊髄ホモジネート、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）または起脳炎ペプチドと完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）との混合物を皮下注射し、これと共に百日咳毒素を腹腔内注射することにより、疾患を誘発する。急性疾患を誘発するためには、免疫化の２日後に百日咳菌の注射を繰り返す。慢性疾患を誘発するためには百日咳菌を用いず、７日の間隔でＣＦＡ中の抗原をマウスに２回投与する。組織学的に支持されている臨床採点法により疾患を評価する。攻撃の前日から７〜１４日間、化合物を投与し、症状を対照動物と比較する。以下のデータは本出願人のソフトウェアを用いて作成された配列表を示す。これらのソフトウェアはいずれかの特許事務所に用意される予定である。以下の配列表中の化合物はすべて表１および２に式で表されている。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年７月２６日【補正内容】米国特許５２２９３６６は、ペプチド含有ポリエチレングリコール誘導体および該誘導体を含む組成物を開示している。この誘導体は２つのペプチド残基を含有することができる。双方の残基はＬｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌを含有するオクタペプチドであってもよい。この組成物は、血小板の凝固／凝集を阻止すると報告されている。この文献は、その２つのペプチド残基が環化している誘導体は開示していない。前記のＬｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ含有配列のほか、環状オクタペプチド１−アダマンタンアセチル−Ｃｙｓ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ −Ｃｙｓ（２システイン残基間にジスルフィド橋を含む）が、ＬＤＶ含有ペプチドＣｙｓ−Ｌｅｕ−Ｈｉｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ −Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｔｈｒと同程度に、ＣＳ−１コーティングしたプレートへのジャーカット細胞接着を阻害するのに有効であると報告された（ＩＣ₅₀ ３０μＭ）。この環状ペプチドは、フィブロネクチンコーティングしたプレートへのジャーカット細胞の結合も阻害した。このオクタペプチドは、α４β１誘導による接着を阻害するほか、αｖβ３およびαＩＩｂβIIIａ依存性アッセイにおいても機能を阻害した。したがってこのペプチドはα４β１仲介による接着について選択的ではない［参考文献：環状ＲＧＤペプチドはα４β１と結合性フラグメント１および血管細胞接着分子との相互作用を阻害する，P.M.Cardarelli ,R.R.Cobb,D.M.Nowlin,W.Scholz,F.Gorcsan,M.Moscinski,M.Yasuhara,S-L.Chian g and T.J.Lobl,J.Biol.Chem.,269(1994)18668-18673］。幾つかの小さなペプチド［参考文献：Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｖａｌ配列の非ペプチド系代理物質（surrogate）、ならびに炎症、自己免疫疾患および腫瘍の進行の治療におけるそれらの使用、ＹＥＤＡリサーチ・アンド・ディベロップメント社、国際特許出願公開第WO 94/02445号、公開日１９９４年２月３日］も、α４β １誘導による接着を阻害すると報告された。ジスルフィド環状ペンタペプチドであるＡｒｇ−Ｃｙｓ−Ａｓｐ−チオプロリン−Ｃｙｓ（チオプロリン＝チアゾリジン−４−カルボン酸）もフィブロネクチンへの白血球接着の阻害物質であると報告された。さらにこの環状ペプチドは、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ細胞結合中心ドメインを含む、フィブロネクチンの１２０ｋＤａキモトリプシン分解フラグメントへの結合も阻害した。この場合もこのペプチドは選択的でなかった。それは α４β１およびα５β１の両方に結合する［参考文献：新規な環状ペンタペプチドがα４β１およびα５β１インテグリン仲介による細胞接着を阻害する，D.M. No wlin,F.Gorcsan,M.Moscinski,S-L.Chiang,T.J.Lobl and P.M.Cardarelli,J.Biol .Chem.,268(1993)20352-20359］。本発明は、比較的小さな環状ペプチドがＶＣＡＭ−１とＶＬＡ４の相互作用を効果的に阻害しうるという知見に基づく。ペプチド１と２が逆平行に並置されている場合につき、Ｌ１およびＬ２に好ましい意味を図７に示す。ペプチド１と２が平行に並置されている場合につき、Ｌ１およびＬ２に好ましい意味を図１２に示す。Ｌ１およびＬ２に好ましい他の意味を図１７に示す。本発明の環状二量体ペプチドは下記の利点のうち少なくとも１つをもつ。すなわちそれらは本発明者らの試験において、既知の化合物、たとえばＣＳ１およびＹＥＤＡ特許で請求されている化合物より有効であり；それらはＣＳ−１より小さい２５アミノ酸であるため、より容易に合成され；環状ペプチドは酵素分解に対してより安定である。化合物番号１（表２）は特に好ましい化合物であり、化合物番号１１〜１４も同様である。特に好ましい化合物はインビボスクリーニングで活性を示した［マウスインビボＣＨＳ（接触過敏症）モデルにおいて］−後記の実施例２参照。１０ｍｇ／ｋｇ／日および１ｍｇ／ｋｇ／日のＣＳ１は、阻害率０％を示した。本発明の被験化合物については、有効濃度で毒性が見られなかった。本発明の他の態様によれば、本発明の環状二量体ペプチドを薬剤学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーと共に含む薬剤組成物が提供される。本組成物は下記に適する剤形であってよい：経口用、たとえば錠剤、カプセル剤、水性もしくは油性の液剤、懸濁剤もしくは乳剤；鼻用、たとえば吹入剤、鼻用スプレーもしくは点鼻剤；膣もしくは直腸用、たとえば坐剤；吸入投与用、たとえば微細な粉末状もしくは液状エアゾル剤として；舌下もしくは口腔用、たとえば錠剤もしくはカプセル剤；または非経口用（静脈内、皮下、筋肉内、血管内または注入）、たとえば無菌の水性もしくは油性の液剤もしくは懸濁剤。本組成物は局所投与に適する剤形、たとえばクリーム剤、軟膏剤およびゲル剤であってもよい。皮膚パッチも考慮される。配合物全般については、Comprehensive Medi cal Chemistry,Vol.5，編集者Hanschら，パーガモン・プレス1990の25.2章に記載されている。一般に上記の組成物は慣用される賦形剤を用いて従来法で調製することができる。しかし経口投与用組成物の場合、環状二量体ペプチド有効成分を胃内での酵素の作用から保護するためのコーティングを含むことが好都合であるかもしれない。本発明の好ましい組成物は、１回量剤形での経口投与に適するもの、たとえば各１回量中に２．５〜５００ｍｇ、好ましくは１０〜１００ｍｇの環状二量体ペプチドを含有する錠剤もしくはカプセル剤、または溶液１ｍｌ当たり０．５〜１００ｍｇ、好ましくは１ｍｌ当たり１〜１０ｍｇの環状二量体ペプチドを含有する、非経口投与に適するものである。非経口組成物は、好ましくは必要ならばｐＨ５〜９に緩衝化した等張食塩水または等張デキストロース中の溶液である。あるいは非経口組成物は少なくとも５日間にわたって徐々に放出するように設計されたものであってもよく、この場合１回量当たりのポリペプチドの量は通常の注射用配合物を用いる場合に必要な量より一般に多い。好ましい徐放性配合物は連続放出配合物、たとえば欧州特許第 58481号に記載されている種類の配合物である。好ましい徐放性非経口配合物は、１回量当たり１０〜１００ｍｇの環状二量体ペプチドを含有する。本発明の組成物は、普通は経口１日量が０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、非経口１日量が２０μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇとなるように投与されるであろう。したがって本発明は、医薬として使用するための本明細書に記載する環状二量体ペプチドを提供する。本発明の他の態様によれば、ＶＣＡＭ−１および／またはフィブロネクチンとインテグリン系受容体ＶＬＡ−４の相互作用を阻害する処置を必要とする温血動物、すなわちヒトのような哺乳動物において、それを阻害する方法であって、該哺乳動物に有効量の式１の環状二量体ペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩を投与することを含む方法が提供される。好ましい態様においては、そのような処置を必要とする哺乳動物は多発性硬化症、喘息または慢性関節リウマチに罹患している。本発明は、ＶＣＡＭ−１とインテグリン系受容体ＶＬＡ−４の相互作用により仲介される疾患または医学的状態の治療に用いる新規な医薬の製造におけるそのような式１の環状二量体ペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩の使用をも提供する。合成の詳細本発明の式１の環状二量体ペプチドは、ペプチド化学の技術分野で周知の、類似化合物の合成に適用できる任意の方法で製造することができる。たとえば本発明の環状二量体ペプチドは下記に開示されるものと類似の方法で得ることができる：“Solid Phase Peptide Synthesis：A Practical approach”AthertonおよびSheppard（オックスフォード・ユニバーシティー・プレスのＩＲＬ出版社発行、 1989）、“固相ペプチド合成”、StewartおよびYoung（イリノイ州パース・ケミカル・カンパニー発行、1984）、“ペプチド合成の原理”（ベルリン、スプリンガー出版社，1984）、“ペプチド合成の実際”（ベルリン、スプリンガー出版社，1984）、ならびに一連の書籍“アミノ酸、ペプチドおよびタンパク質”(vol.1 -25;vol.25を1994年に発行)（英国ケンブリッジ、ロイヤル・ソサエティー・オブ・ケミストリー発行）。合成は自動的手段または手動による手段で行うことができる。本発明の環状二量体ペプチドを製造するための好ましい方法には下記のものが含まれる：− （ａ）式１０（図１０）（式中、Ｐｒ１はＡＡ３の側鎖中の酸基の保護基を表す）の保護された環状二量体ペプチドから１またはそれ以上の慣用されるペプチド保護基を除去して、式１の本発明の環状二量体ペプチドを得る。所望により、同時にまたはその後、慣用される他のペプチド保護基をも除去する；（ｂ）２つのペプチド単位、すなわち一方はカルボン酸基を含むもの、またはその反応性誘導体、他方はアミノ基を含むものを、式１に示す配列をもつ保護された、または保護されていない環状二量体ペプチドが製造されるように結合させることによりアミド結合を形成させ、必要ならば上記（ａ）の方法を用いて保護基を除去する。本発明を限定ではない以下の実施例により説明する。図１は式１を示す。図２は逆平行に並置されたペプチド１と２を示す。図３は平行に並置されたペプチド１と２を示す。図４は式４〜９を示す。図５は化合物５（表２）の合成を示す。図６は化合物８（表２）の合成を示す。図７はペプチド１と２の逆平行並置のために好ましいリンカーを示す。図８はＩｌｅの類似体を示す。図９はＴｉｃ（１）およびニペコチン酸（２）を示す。図１０は式１０を示す。図１１は化合物１（表２）の詳細な構造を示す。図１２はペプチド１と２の平行並置のために好ましいリンカーを示す。図１３は化合物１（表２）の合成を示す。図１４は化合物１（表２）の合成の第２経路を示す。図１５は化合物３（表２）の合成を示す。図１６は化合物４（表２）の合成を示す。図１７は好ましいリンカーを示す。図中の矢印結合は、結合点のみを示す（すなわち−ＣＨ₂−基ではない）。結合点の指示は、別途明記または示唆しない限り、窒素原子が−Ｃ(Ｏ)−に結合する、およびその逆などであろう。表１は環状二量体ペプチドの合成と精製を示す。表２は環状二量体ペプチドの特性を示す。略号：Ｂｏｃｔ−ブトキシカルボニルＣｈａシクロヘキシルアラニンＤａｂ２，４−ジアミノ−酪酸Ｆｍｏｃ９−フルオレニルメトキシカルボニルＮｌｅノルロイシンＯｒｎオルニチンＰｂｆ２,２,４,７-ペンタメチルジヒドロベンゼンフラン-５-スルホニルＴｉｃ１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸Ｚベンジルオキシカルボニル温度は、別途明記しない限りすべて摂氏である。実施例１−化合物１〜１６（表２）の合成この環状二量体ペプチドを２つの異なる経路で製造した。これらの各方法において、必要な線状ペプチドは２−クロロトリチルクロリド樹脂を用いる固相ペプチド合成法により製造された。合成経路を図１３と１４に示し、詳細を以下において、この節と２節目に記載する。保護されたペプチドをこの樹脂上で組み立てたのち、線状ペプチドを樹脂から開裂させ、何ら精製せずに後続工程に用いた。しかし最終生成物は特性解明の前に逆相高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で十分に精製された。ジクロロメタン（５０ｍｌ）中のブロモ酢酸ｔ−ブチル（４．８８ｇ，２５ｍｍｏｌ）を、１−ピペラジンカルボン酸ｔ−ブチル（４．６５ｇ，２５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３．５ｇ，２５ｍｍｏｌ）の、ジクロロメタン（３０ｍｌ）中における溶液に添加した。反応混合物を一夜撹拌し、一夜で分離した固体を濾去し、濾液を蒸発乾固した。残渣を酢酸エチルと水の間で分配し、次いで有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥させ、蒸発乾固した。残渣をエーテル −イソヘキサンから結晶化して、生成物（５．６６ｇ，７５％，融点９９〜１００℃）を得た［元素分析：実測値Ｃ５９.８％，Ｈ９.６％，Ｎ９.１％；Ｃ₁₅Ｈ₂ ₈ Ｎ₂Ｏ₄理論値Ｃ６０．０％，Ｈ９．４％，Ｎ９．３３％］。［シリカゲルプレート上での薄層クロマトグラフィーは単一スポットを示した；Ｒｆ：酢酸エチル − イソヘキサン（１：１）中で０．３８，メタノール−クロロホルム（１：９）中で０．６８］。このペプチド樹脂を酢酸−トリフルオロエタノール−塩化メチレン（２：２：６）混合物（２５ｍｌ）に２時間懸濁させた。樹脂を濾過により分離し、上記の溶剤混合物で洗浄した。濾液を合わせて蒸発させ、残渣をエーテルで摩砕処理して、線状テトラペプチド誘導体を酢酸塩として得た。次いでこの酢酸塩を水−アセトニトリル（２：１，６０ｍｌ）混合物に溶解し、０℃に冷却し、１．０５当量の１ＮＨＣｌを添加し、内容物を凍結乾燥することにより、塩酸塩に変換した。前記の線状ペプチド塩酸塩（３８８ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド（６００ｍｌ）に溶解し、Ｏ−（ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，１，３，３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート（ＨＢＴＵ）（２１８ｍｇ，０．５７ｍｍｏｌ）を添加し、次いでジイソプルピルエチルアミン（３００μｌ，１．７２ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温で２４時間撹拌し、次いで真空下で蒸発乾固した。前記の粗製環状二量体ペプチドを、トリフルオロ酢酸−水混合物（９５：５；２５ｍｌ）およびトリイソプルピルシラン（２００μｌ）で１時間処理して、アスパラギン酸の側鎖保護基を除去した。蒸発させて小容量にし、次いでエーテルで摩砕処理して粗製環状ペプチドを得た。これを、Ｖｙｄａｃ２１８ＴＰ１０２２カラム上で０．１％トリフルオロ酢酸を含有するアセトニトリル−水濃度勾配（２０〜５０％）を１０．０ｍｌ／分の流量で６５分間にわたって用いる調製用逆相ＨＰＬＣにより精製した。生成物を含有する画分を合わせて凍結乾燥させ、精製環状ペプチド（４６ｍｇ）を得た。このペプチドをアミノ酸分析および質量分析により特性解明した。３．化合物２の合成このペプチドを、対応するＩｌｅ含有化合物１につき先に記載した第１経路により製造した。ＨＰＬＣ分析はこの生成物が目的の二量体（３８％）と環状モノマー（６２％）の混合物であることを示した。表１に記載した溶剤系を用いる逆相ＨＰＬＣ精製により目的の二量体ペプチドが得られ、これをアミノ酸分析および質量分析により特性解明した（表２）。４．化合物３の合成（図１５）この環状二量体ペプチド（表１）の合成に必要な線状ペプチドを、２−クロロトリチルクロリド樹脂上で組み立てた。実施例１．３（化合物１）にＦｍｏｃ− ピペラジン誘導体につき記載したと同様な方法で、３−ブロモプロピオン酸をこの樹脂と反応させた。次いで５倍過剰のピペラジンをこの３−ブロモプロピオニル−Ｏ−（２−クロロトリチル）−樹脂に添加して、樹脂に結合したピペラジニル−Ｎ−プロピオニル誘導体（構造を後記の図１５、工程１に示す）を得た。次いでＦｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、およびＦｍｏｃ− Ｉｌｅを１．３節に記載した方法で樹脂に結合させて、Ｆｍｏｃ−テトラペプチドピペラジニル誘導体を得た。Ｎ−末端Ｆｍｏｃ基を開裂させるための標準法によりピペリジン処理して、工程２（図１５）に示した部分保護テトラペプチド誘導体を得た。３−ブロモプロピオン酸、ピペラジン、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ、Ｆｍｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｕｔ）、Ｆｍｏｃ−Ｌｅｕ、およびＦｍｏｃ−Ｉｌｅを用いた標準法による結合および脱保護反応により、２つのピペラジン基を含むオクタペプチド誘導体（図１５、工程４）を得た。次いでこのペプチドを、化合物１につき先に記載した方法で樹脂から開裂させ、環化し、脱保護し、精製した。請求の範囲１．式１の環状二量体ペプチド（式中：ペプチド１およびペプチド２は独立して、平行または逆平行の配向で並置された式−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−のテトラペプチドを表し；ＡＡ１は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびにＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｔｉｃ、ＧｌｎおよびＰｈｅから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬまたはＤアミノ酸であり；ＡＡ２は、Ｌｅｕ、ならびにＩｌｅ、Ｐｈｅ、ＰｒｏおよびＶａｌから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ４は、Ｖａｌ、ならびにＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ＰｒｏおよびＣｈａ（シクロヘキシルアラニン）から選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；Ｌ１およびＬ２は独立して、ペプチド１と２を連結して環状ペプチドを形成するための連結部分を表す）；またはその塩。２．ＡＡ１〜ＡＡ４がそれぞれ一般式２（式中、Ｒ¹はアミノ酸側鎖であり、Ｒ²およびＲ³は独立してＨおよびＣ₁ _〜4アルキルから選択される）を有する、請求項１記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。３．ＡＡ１がＩｌｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、ＭｅＩｌｅおよびＭｅＰｈｅから選択され ;ＡＡ２がＬｅｕであり；ＡＡ３がＡｓｐであり；かつＡＡ４がＶａｌである、請求項記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。４．ペプチド１と２が逆平行に並置されている、請求項１〜３のいずれか１項記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。５．Ｌ１およびＬ２が独立して、次式の基 −Ｎ(Ｒ⁴)−Ｘ−Ｃ(Ｏ)− ［式中、Ｒ⁴はＨおよびＣ₁ _〜4アルキルから選択され、ＸはＣＨ₂において所望によりＣ₁ _〜4 アルキルもしくはＮＨ₂で置換されていてもよい−(ＣＨ₂)_n−（ｎ＝１〜４）を表し；またはＸとＮＲ⁴は一緒に基（ｎ＝０〜４）を表す］から選択される、請求項４記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。６．Ｌ１およびＬ２が独立して、図７に示した式のうちのいずれか１つから選択される、請求項４記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。７．Ｌ１およびＬ２が独立して、図１７に示した式１〜１２のうちのいずれか１つから選択される、請求項４記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。８．Ｌ１およびＬ２が独立して、図１７に示した式１、９および１０〜１２のうちのいずれか１つから選択される、請求項７記載の環状二量体ペプチドまたはその塩。９．Ｌ１とＬ２が等しい、請求項１〜８のいずれか１項記載の環状二量体ペプチド。１０．から選択される環状二量体ペプチドまたはその塩。１１．式１の環状二量体ペプチドの製造方法であって：− （ａ）図１０に示した式１０（式中、Ｐｒ１はＡＡ３の側鎖中の酸基の保護基を表す）の保護されたポリペプチドから１またはそれ以上の慣用されるペプチド保護基を除去して式１の本発明の環状ペプチドポリペプチドとなし、所望により、同時にまたはその後、慣用される他のペプチド保護基をも除去し、こうして得られた生成物を所望によりその塩に変換する方法；および（ｂ）２つのペプチド単位、すなわち一方はカルボン酸基を含むもの、またはその反応性誘導体、他方はアミノ基を含むものを、式１に示す配列を有する保護された、または保護されていない環状ペプチドが製造されるように結合させることによりアミド結合を形成し、そして必要であれば前記（ａ）の方法を用いて任意の保護基を除去し、こうして得られた生成物を所望によりその塩に変換する方法から選択される方法。１２．請求項１〜９のいずれか１項記載の環状二量体ペプチドまたはその塩、ならびに薬剤学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーを含む薬剤組成物。１３．少なくとも５日間にわたって徐々に放出するように設計された、非経口投与のための請求項１２記載の薬剤組成物。１４．医薬として用いられる、請求項１〜１０のいずれか１項記載の環状ペプチド。１５．ＶＣＡＭ−１および／またはフィブロネクチンとインテグリン系受容体ＶＬＡ−４との相互作用を阻害する処置を必要とする哺乳動物において、それを阻害する方法であって、該哺乳動物に有効量の、請求項１〜９のいずれか１項記載の環状二量体ペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩を投与することを含む方法。１６．そのような処置を必要とする哺乳動物が多発性硬化症、喘息または慢性関節リウマチに罹患している、請求項１５記載の方法。１７．ＶＣＡＭ−１とインテグリン系受容体ＶＬＡ−４の相互作用により仲介される疾患または医学的状態の治療に用いる医薬の製造における式１の環状二量体ペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．式１の環状二量体ペプチド（式中：ペプチド１およびペプチド２は独立して、平行または逆平行の配向で並置された式−ＡＡ１−ＡＡ２−ＡＡ３−ＡＡ４−のテトラペプチドを表し；ＡＡ１は、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、ならびにＰｒｏ、Ｇｌｙ、Ｔｉｃ、ＧｌｎおよびＰｈｅから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬまたはＤアミノ酸であり；ＡＡ２は、Ｌｅｕ、ならびにＩｌｅ、Ｐｈｅ、ＰｒｏおよびＶａｌから選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ３は、Ａｓｐ、Ｇｌｕ、およびそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；ＡＡ４は、Ｖａｌ、ならびにＬｅｕ、Ｉｌｅ、Ｐｈｅ、Ｓｅｒ、ＰｒｏおよびＣｈａ（シクロヘキシルアラニン）から選択されるそのアミノ酸類似体から選択されるＬアミノ酸であり；Ｌ１およびＬ２は独立して、ペプチド１と２を連結して環状ペプチドを形成するための連結部分を表す）；またはその塩。２．ＡＡ１〜ＡＡ４がそれぞれ一般式２（式中、Ｒ¹はアミノ酸側鎖であり、Ｒ²およびＲ³は独立してＨおよびＣ₁ _〜4アルキルから選択される）を有する、請求項１記載の環状ジペプチドまたはその塩。３．ＡＡ１がＩｌｅ、Ｄ−Ｌｅｕ、ＭｅＩｌｅおよびＭｅＰｈｅから選択され ;ＡＡ２がＬｅｕであり；ＡＡ３がＡｓｐであり；かつＡＡ４がＶａｌである、請求項記載の環状ジペプチドまたはその塩。４．ペプチド１と２が逆平行に並置されている、請求項１〜３のいずれか１項記載の環状ジペプチドまたはその塩。５．Ｌ１およびＬ２が独立して、次式の基 −Ｎ(Ｒ⁴)−Ｘ−Ｃ(Ｏ)− ［式中、Ｒ⁴はＨおよびＣ₁ _〜4アルキルから選択され、ＸはＣＨ₂において所望によりＣ₁ _〜4 アルキルもしくはＮＨ₂で置換されていてもよい−(ＣＨ₂)_n−（ｎ＝１〜４）を表し；またはＸとＮＲ⁴は一緒に基（ｎ＝０〜４）を表す］から選択される、請求項４記載の環状ジペプチドまたはその塩。６．Ｌ１およびＬ２が独立して、図７に示した式のうちのいずれか１つから選択される、請求項４記載の環状ジペプチドまたはその塩。７．Ｌ１およびＬ２が独立して、図１７に示した式１〜１２のうちのいずれか１つから選択される、請求項４記載の環状ジペプチドまたはその塩。８．Ｌ１およびＬ２が独立して、図１７に示した式１、９および１０〜１２のうちのいずれか１つから選択される、請求項７記載の環状ジペプチドまたはその塩。９．Ｌ１とＬ２が等しい、請求項１〜８のいずれか１項記載の環状ジペプチド。１０．から選択される環状ジペプチドまたはその塩。１１．式１の環状ジペプチドの製造方法であって：− （ａ）図１０に示した式１０（式中、Ｐｒ１はＡＡ３の側鎖中の酸基の保護基を表す）の保護されたポリペプチドから１またはそれ以上の慣用されるペプチド保護基を除去して式１の本発明の環状ペプチドポリペプチドとなし、所望により、同時にまたはその後、慣用される他のペプチド保護基をも除去し、こうして得られた生成物を所望によりその塩に変換する方法；および（ｂ）２つのペプチド単位、すなわち一方はカルボン酸基を含むもの、またはその反応性誘導体、他方はアミノ基を含むものを、式１に示す配列を有する保護された、または保護されていない環状ペプチドが製造されるように結合させることによりアミド結合を形成し、そして必要であれば前記（ａ）の方法を用いて任意の保護基を除去し、こうして得られた生成物を所望によりその塩に変換する方法から選択される方法。１２．請求項１〜９のいずれか１項記載の環状ジペプチドまたはその塩、ならびに薬剤学的に許容しうる希釈剤またはキャリヤーを含む薬剤組成物。１３．少なくとも５日間にわたって徐々に放出するように設計された、非経口投与のための請求項１２記載の薬剤組成物。１４．医薬として用いられる、請求項１〜１０のいずれか１項記載の環状ペプチド。１５．ＶＣＡＭ−１および／またはフィブロネクチンとインテグリン系受容体ＶＬＡ−４との相互作用を阻害する処置を必要とする哺乳動物において、それを阻害する方法であって、該哺乳動物に有効量の、請求項１〜９のいずれか１項記載の環状ジペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩を投与することを含む方法。１６．そのような処置を必要とする哺乳動物が多発性硬化症、喘息または慢性関節リウマチに罹患している、請求項１５記載の方法。１７．ＶＣＡＭ−１とインテグリン系受容体ＶＬＡ−４の相互作用により仲介される疾患または医学的状態の治療に用いる医薬の製造における式１の環状ジペプチドまたはその薬剤学的に許容しうる塩の使用。