JPH11511113A - シクロプロピルインドール類およびそのセコ前駆体、ならびにプロドラッグとしてのこれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、抗がん剤として使用することができる、式（Ｉ）および式（II）の化合物を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 シクロプロピルインドール類およびそのセコ前駆体、 ならびにプロドラッグとしてのこれらの使用 本発明はシクロプロピルインドールの一般クラスの新規アミノ類似体およびそ のセコ前駆体に関し、特にがんのための抗体指向性（antibody-directed ）酵素 −プロドラッグ治療法（ADEPT ）および遺伝子指向性酵素−プロドラッグ治療法 （GDEPT ）用のプロドラッグとしてのこれらの化合物の使用に関する。 発明の背景 がんの治療において、プロドラッグの使用は臨床上非常に有益な概念である。 なぜならば、特に、腫瘍に関係する抗原に結合するモノクローナル抗体に連結す ることが可能な酵素の影響下でプロドラッグが抗腫瘍剤に転換することができる 場合、こうしたプロドラッグと酵素／モノクローナル抗体複合体との組合せは非 常に強力な臨床薬剤となるからである。“抗体指向性酵素／プロドラッグ治療法 ”（ADEPT ）と称されることが多い、がん治療に対するこの方法は国際公開公報 第88/07378号に開示されている。 プロドラッグを使用した患者の腫瘍細胞の治療の方法として、“ウイルス指向 性酵素プロドラッグ治療法”（VDEPT ）と命名された、さらに別の治療方法が提 案された。腫瘍細胞はプロドラッグを活性化することができる酵素をコードする 遺伝子を保有するウイルスベクターの標的となる。この遺伝子は組織特異的プロ モーターまたはエンハンサー配列によって転写調節することもできる。腫瘍細胞 内でプロドラッグが活性薬剤に転換されるために、ウイルスベクターが腫瘍細胞 内に入り、酵素を発現する（Huber ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA（1991）88,803 9 ）。あるいは、遺伝子の送達のために非ウイルス法が使用されてきた。こうし た方法として、リン酸カルシウム共沈殿、マイクロインジェクション、リポソー ム、直接ＤＮＡ取り込み、および受容体仲介ＤＮＡ転移が含まれる。これらは M organ & French,Annu.Rev.Biochem.,1993,62;191に概説されている。用語“GDEP T ”（遺伝子指向性酵素プロドラッグ治療法）はウイルスおよび非ウイルス送達 システムの両方を含むものとして使用される。 シクロプロピルインドール化合物は、天然産物 CC-1065（V.L.Reynoldsら、J. Antibiot.,39,1986,319-334 ）およびデュオカルマイシン（duocarmycin ）類（ D.L.Boger,Pure & Appl.Chem.,66,1994,837-844 ）とともに、低pM範囲に IC50 を有する、非常に有効な抗腫瘍抗生物質の１種である。これらの化合物はＤＮＡ の小溝に結合してアデニンのＮ−3 の位置で高度に配列選択的な様相でアルキル 化する（D.L.Boger ら、Tetrahedron,47,1991,2661-2682 ）。アルキル化サブユ ニットをモデル化した化合物を使用した研究によって、より安定な開環セコ前駆 体がシクロプロピルインドール化合物と同程度に有効であることがわかった。そ の上、閉環はＤＮＡのアルキル化に必須ではなく、6-置換体（D.L.Boger ら、J. Am.Chem.Soc.,113,1991,3980-3983 ）および1-置換体（D.L.Boger and W.Yun,J. Am.Chem.Soc.,116,1994,5523-5524 ）の両者によって、アルキル化の割合に対し てある程度の電気的制御が行なわれる。 酸素置換体がカルバメートとして保護されており、活性化のために（非特異的 酵素加水分解によって）これを開裂しなければならない、天然産物の多数の合成 類似体が調製されている。これらの化合物として以下の構造Ａを有するカルゼレ シン（carzelesin）（L.H.Liら、Cancer Res.,52,1992,4904-4913 ）が含まれる 。 関連する化合物が以下の構造Ｂを有する KW-2189（E.Kobayashi ら、Cancer R es.,54,1994,2404-2410 ）である。 カルゼレシンおよび KW-2189の両者ともにある範囲のヒト腫瘍に対する抗がん 活性を示し、臨床試験中である。同様の型のその他の類似体が国際公開公報第88 /04659号および国際公開公報第91/16324号に開示されている。 発明の開示 一つの局面において、本発明は式（Ｉ）で示される、新規クラスの置換セコイ ンドリン： ［式中、 ＸはハロゲンまたはＯＳＯ₂Ｒであって、ＲはＨあるいは場合によって１〜４ 個のヒドロキシル、酸（ＣＯＯＨ）若しくはアミノ基（このアミノ基は１または ２個の低級アルキル基で置換されていてもよい）で置換された低級直鎖若しくは 分枝鎖の低級アルキル（炭素原子数５までの）を表し； ＹはＮＨ₂，ＮＯ₂，ＮＨＯＨ，ＮＨＲ，ＮＲＲ，Ｎ（Ｏ）ＲＲ，ＮＲＯＨ，Ｓ ＲまたはＳＳＲ、ここでＲは上記定義通りであるが、ＹがＳＳＲの場合はＲは式 （Ｉ）のもう一つの分子部分でもあり得（すなわち対称形ジスルフィド）； Ｅは−Ｎ＝または−ＣＨ＝； ＧはＯ，ＳまたはＮＨであり；そして Ｑは５位から７位までのいずれかの位置での１〜３個の（Ｑが２または３個で ある場合は同一でも異なっていてもよい）Ｈ，ＯＲ，ＮＲＲ，ＣＯＮＨＲ，ＮＨ ＣＯＲまたはＮＨＣＯＮＨＲ（ここでＲは上記定義通り）、式（Ia）の基： であり、式中、ＥおよびＧは上記の定義通り、Ｊ¹は３個までの（Ｊ¹が２または ３個である場合は同一でも異なっていてもよい）Ｈ，ＯＲ，ＮＲＲ，ＣＯＮＨＲ またはＮＨＣＯＲ基（ここでＲは上記定義通り）、あるいは式−ＣＯＮＨＪ²， −ＮＨＪ²，またはＯＪ²の基であり、Ｊ²は−(ＣＨ₂)_mＨｔ基であり、ここでｍ は１〜４の整数であり、Ｈｔは５または６員の炭素環または複素環であり、その うち１もしくは２が酸素、硫黄もしくは窒素であってよく、残りの原子は炭素で ある； あるいはこれらの生理学的機能性誘導体に関する。 第２の局面において、本発明は式（II）で示されるクラスの化合物： 式中、 Ｐ，Ｘ，Ｑ，ＥおよびＧは式（Ｉ）に関する上記の定義通り、Ｒ¹は上記定義ど おりの基Ｒであり、そしてＰは式IIa，IIb，またはIIc の構造から選択され： 式中、 Ｐ，ＺはＨまたはMe； ｎは１または２；および Ｒ²はＲ，ＣＯＮＨＲ，ＮＨＣＯＲ，ＯＲまたはＳＯ₂Ｒであり、ここでＲは上 記義通りである またはこれらの生理学的機能性誘導体に関する。 式（Ｉ），（II）および（IIa-c ）の化合物は異なる鏡像体またはジアステレ オマー形態で存在していてもよいことが認識される。この場合、上の式は任意の 可能な鏡像体もしくはジアステレオマー形態またはそれらの混合物を示すものと 理解されるべきである。 ハロゲン基はフッ素、塩素、臭素またはヨウ素基を意味する。塩素基が好まし い。式（Ｉ）および（II）の好ましい化合物として、ＸがＣｌであるものが含ま れる。ＱがＨまたは5,6,7-トリＯMeで、Ｐが式IIb 中、Ｒ²がＨまたはＣＯＮＨ Ｒ（Ｒは上記定義通り）のものが好ましい。Ｑが式（Ia）の基の場合、５−また ６−位置に接続されているものが好ましい。 好ましいＱとして、以下のものが含まれる： −ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｎモルホリド、 −ＣＯＮＨＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）₂、 −ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂（2-ピリジル）、 −ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Me）₂、 −ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃、 −ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ、 −ＮＨＣＯＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ（Me）₂、および −ＮＨＣＯＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯＯＨ。 Ｊ²が−(ＣＨ₂)_mＨｔ基の場合、ｍは好ましくは２、Ｈｔは好ましくは炭素５ もしくは６員環あるいは酸素１個および／または窒素１個（両方が存在する場合 は隣り合っていない）を含む５もしくは６員環であり、最も好ましくはＮモルホ リド（すなわち窒素に接続されたモルホリノ）またはピリジルである。 これらの基は望ましくは式（Ｉ）または（II）核の５または６位置に連結され る。 式（II）中のＲ¹基は好ましくは水素またはメチルである。 Ｐが（IIb ）基の場合、ニトロ基が４−（パラ）または２−位置にあるのが好 ましい。 別の局面において、本発明は式（Ｉ）および（II）の化合物の抗がん剤として の使用に関する。この化合物は、例えば白血病性貧血、ならびに特に乳房、腸お よび肺の腫瘍（小細胞肺上皮性悪性腫瘍を含む）を含む固形がんの治療方法にお いて、酸素性および低酸素性腫瘍細胞の選択的殺傷のために使用することができ る。 さらに別の局面において、本発明は、ADEPT またはGDEPT 治療法における、（ 例えば E.coli から単離した）ニトロレダクターゼまたはカルボキシペプチダー ゼ酵素と共同させた式（II）の化合物の使用に関する。ＹがＮＯ₂またはＮ（Ｏ ）ＲＲである式（Ｉ）の化合物もまたニトロレダクターゼと共同させて使用する ことができる。 本発明は、製薬上許容される担体または希釈剤とともに式（Ｉ）または式（II ）の化合物を含む薬剤組成物をも提供する。 発明の詳細な説明 Ａ．式（Ｉ）の化合物の合成 式（Ｉ）の化合物は図式１および２において特定の例について概説する方法に よって調製することができる。図式１において、4-クロロ-3- ニトロ安息香酸を t-ブチルエステルに転換し、これをマロン酸ジメチルのナトリウム塩と縮合させ る。t-ブチルエステルを切断し、生成した酸をクルチウス転位させて、カルボベ ンゾキシ基で保護されたアニリンを生成させる。マロネートを水素化ジイソブチ ルアルミニウムで還元して、対応するジオールを生成させる。その後、酸化白金 上での水素化によって、ニトロ基を選択的に還元する。生成したアミンをジ-t- ブチルカーボネートで保護し、続いてジエチルアゾジカーボネートと環化させて 、インドリン環を形成させる。ＲＳＯ₂Ｃｌ（ＸがＳＯ₂Ｒの場合；図式１の例で はＲはＣＨ₃である）との反応によって３−位置のヒドロキシメチル基をスルホ ン酸エステルに変換し、Boc 保護基をＨＣｌで切断する。生成した不安定なアミ ン塩酸化物をすぐに適当なカルボン酸（図式１の例においては、Ｅが−ＣＨ＝− 、ＧがＮＨ、そしてＱが5,6,7-トリメトキシの場合を説明しており、5,6,7-トリ メトキシインドール-2- カルボン酸が使用される）に連結させる。カルボベンゾ キシ保護基を水素化分解によって除去する。ハロゲン化リチウム（Ｘがハロゲン の場合）との反応によって、メシレートをＸ基（図式１の場合は塩素）で置換す る。 図式２においては、2-クロロ-3- ニトロ安息香酸のt-ブチルエステルをマロン 酸ジメチルと縮合させて、図式１と同一の方法を使用して遊離酸に変換させる。 トリエチルアミンの存在下でのジフェニルホスホリルアジドとの反応によって、 中間体のイソシアネートの分子内トラッピングを介して直接2-インドロンとなる 。ボランでの還元によって対応するインドリンが得られ、このインドリン窒素を Boc 基で保護する。ナトリウムメトキシドによるジエステルの処理によって、脱 カルボキシメチル化が生じ、モノエステル誘導体が生成され、これをハロゲン化 ジイソブチルアルミニウムで還元する。生成したアルコールをＲＳＯ₂Ｃl（Ｘが ０ＳＯ₂Ｒの場合）で処理し、次にハロゲン化リチウム（Ｘがハロゲンの場合） で置換する。図式２においては、塩化リチウムでの処理が示され、塩素化合物が 生成し、これを適当なカルボン酸（図式１の例においては、Ｅが−ＣＨ＝、Ｇが ＮＨ、そしてＱが5,6,7-トリメトキシの場合を説明しており、5,6,7-トリメトキ シインドール-2-カルボン酸が使用される）に連結させる。 次に酸化白金上での水素化によって、6-ニトロ基を還元すると式Ｉ中、ＹがＮ Ｈ₂の化合物が得られる。 Ｂ．式（II）の化合物の合成 式（Ｉ）の化合物をＰ基の反応性誘導体、例えば(IIa)の酸塩化誘導体または( IIb)のクロロホルメート誘導体と反応させることによって、式(IIa)および式(II b)の化合物が調製される。これらの反応性中間体は(IIa)のカルボン酸誘導体ま たは(IIb)のアルコール誘導体から製造することができる。これらの反応性誘導 体は式Ｐ−Ｈ（このＰは上記定義通り）のカルボン酸誘導体から製造することが できる。カルボン酸およびアルコールはそれ自体知られた化学によって製造する ことができる。化合物の中のいくつかは市販されている。図式１は4-ニトロベン ジルクロロホルメートを使用したものを図示している。 式(IIC)の化合物は、イソシアネートなどのグルタミン酸誘導体とＰが水素で ある式（II）の化合物とカップリングさせることによって製造することができる 。グルタミン酸のカルボキシ基はＣ_1-6アルキル保護基とのエステル化によって 保護することができる。これにはt-ブチルエステル基が好ましい。こうしたエス テル基を使用する場合、グルタミン酸誘導体と式（Ｉ）の化合物との反応後、加 水分解によってこれらを除去することができる。場合によってはこの結果ラセミ 化が生じ得る。 式（II）の化合物のグルタミン酸誘導体の製造のための適当な反応条件に関し て、例えば国際公開公報第88/07378号および国際公開公報第91/03460号を参照す ることができる。 また、特にＱが式（Ia）基の場合について、国際公開公報第88/04659号および 国際公開公報第91/16324号に開示された合成経路を参照することができる。本発 明の化合物を製造するために、類似した経路を使用することができる。 Ｃ．GDEPT Ｃ（ｉ）−ベクターシステム 一般的に、GDEPT 治療法において使用するベクターはあらゆる好適なＤＮＡま たはＲＮＡベクターであり得る。 好適なウイルスベクターとして、レトロウイルスに基づくものが含まれる。こ うしたベクターは当業界で広く入手可能である。Huber ら（同上）はヘパトーマ 、乳房、結腸または皮膚細胞のトランスフォーメーションのためのアンホトロピ ックレトロウイルスの使用を報告している。Culverら（Science(1992)256;1550- 1 552）もまたGDEPT におけるレトロウイルスベクターの使用について記載してい る。これらのベクターまたはこれらから誘導されたベクターもまた使用すること ができる。本発明における使用のための好適なベクターを製造するため、その他 のレトロウイルスもまた使用することができる。こうしたレトロウイルスとして ラウス肉腫ウイルス（RSV ）が含まれる。 Englehardtら（Nature Genetics(1993)4;27-34）には、嚢胞性線維症トランス メンブランコンダクタンス生成物（CFTR）の細胞中への送達におけるアデノウイ ルスに基づくベクターの使用が記載されており、これらのアデノウイルスに基づ くベクターもまた使用することができる。肺中の細胞に本発明に従うシステムを 送達するために、アデノウイルスプロモーターおよびその他の調節配列を利用す るベクターを使用することができ、したがってこれは肺腫瘍を治療する際に有用 である。 モロニーマウス白血病ウイルスに基づくベクターを含む、その他のベクターシ ステムが知られている（Ram,Z ら、Cancer Research(1993)53;83-88；Dalton & Treisman,Cell(1992)68;597-612）。これらのベクターはβ−グロブリン最少プ ロモーター中の上流にクローン化されたマウス白血病ウイルス（MLV ）エンハン サーを含有する。このβ−グロブリンのＡＴＧ開始までの 5’非翻訳領域がこの 酵素の有効な翻訳を導くために提供される。 上記のベクター中で使用される好適なプロモーターとして、MLV，CMV，RSV お よびアデノウイルスプロモーターが含まれる。好ましいアデノウイルスプロモー ターはアデノウイルス初期遺伝子プロモーターである。強力な哺乳類プロモータ ーもまた好適である。こうしたプロモーターの例は MizushimaおよびNagata（(1 990),Nucl．Acids Res.18;5322）を参照して入手することができる EF-1αプロ モーターである。本質的に同様の転写活性を保持しているこれらのプロモーター の変異体もまた使用することができる。 Ｃ（ii）−ニトロレダクターゼ Ｐが(IIa)または(IIb)基である式（II）の化合物からニトロレダクターゼでＰ 基を除去することによって、これを活性化することができる。 好ましくは、この酵素は細菌ニトロレダクターゼなどの非哺乳類ニトロレダク ターゼ酵素である。国際公開公報第93/08288号に開示されたE.coliニトロレダク ターゼが特に好ましい。この酵素は標準的組換えＤＮＡ技術、例えば酵素のクロ ーン化、遺伝子配列の決定、および例えば部位特異性変異による配列の切除、置 換、欠失または挿入などの方法での遺伝子配列の変更、によって改変することが できる。標準的組換えＤＮＡ技術の説明については、Sambrookら（1989,Cold Sp ring Harbor ）による「Molecular Cloning 」を参照することができる。実施さ れる改変は、酵素が式IIにおける保護基Ｐのニトロ基または式ＩにおいてＹで表 される場合のニトロもしくはアミンＮ−オキサイド基を還元する能力を残存させ たままで、例えば反応速度または選択性などの酵素のその他の性質を変更するも のならばどんなものでもよい。 その他、この酵素をコードする核酸配列が各種の別のベクター配列に連結され たベクターを製造するのに必要な操作の結果、Ｎ−および／またはＣ−末端配列 で小さな切除が生起することがある。 Ｃ（iii）カルボキシペプチダーゼ Ｐが(IIc)基の場合の式（II）の化合物はカルボキシペプチダーゼ酵素でのＰ 基の除去によって活性化することができる。 この酵素は好ましくは細菌のカルボキシペプチダーゼ、特にカルボキシペプチ ダーゼ CPG2 またはPseudomonasのγ−グルタミルヒドロラーゼ EC.3.4.22.12（ Levy CC & Goldman P J.Biol.Chem.242;p2933(1967)）である。 カルボキシペプチダーゼ G2 （CPG2）は国際公開公報第88/07378号に開示され ている。天然の CPG2 が好ましいが、（例えば各場合において約1，2，3，4，5 ，10または20残基の）アミノ酸の置換、欠失または挿入である、配列の変更もま た可能である。いずれの場合も、変更は酵素がプロドラッグを活性な薬剤に転換 する能力を天然の酵素と実質的に同程度に維持する範囲のものである。この文に おける「実質的に同程度」とは望ましくは大きさで１桁以内、好ましくは約50倍 、例えば約２倍未満ものから２，５，または10倍大きいものまでである。 特異的変更に加えて、酵素の活性が上記に定義されたように実質的に不変であ るかぎり、切除、置換、欠失または挿入によって酵素に別の変更をさせることも できる。例えば、この酵素をコードする核酸配列が適切なプロモーターに連結さ れたベクターを製造するのに必要な操作の結果、Ｎ−および／またはＣ−末端配 列で小さな切除が生起することがある。 Ｄ．ADEPT ADEPT システムに応用するため、ある腫瘍特異的マーカーに対する抗体をニト ロレダクターゼまたはカルボキシペプチダーゼ酵素に連結させる。これらの酵素 は上記のように改変してもよい。抗体はモノクローナルでもポリクローナルでも よい。本発明の目的のためには、別に特定しないかぎり、用語「抗体」には腫瘍 標的抗原に対する結合活性を保持している抗体全体の断片が含まれる。こうした 断片には単鎖抗体とともに Fv，F(ab')および F(ab')₂断片が含まれる。さらに 、抗体およびそれらの断片は例えば EP-A-239400号に記載されたようなヒト化抗 体でもよい。 抗体は通常のハイブリドーマ技術によって、または改変抗体もしくは断片の場 合ならば、組換えＤＮＡ技術、例えばプロモーターに作動可能に連結された改変 抗体もしくは断片をコードするＤＮＡ構築物の好適な宿主ベクター中での発現、 によって製造することができる。好適な宿主細胞として、細菌（例えばE.coli） 、酵母、昆虫および哺乳類のものが含まれる。抗体をこれらの組換え技術によっ て製造する場合、（場合によっては上記のように改変された）酵素をコードする 核酸配列を抗体またはその断片をコードする構築物の配列の3'または5'末端に連 結することによって、その酵素を製造することができる。 Ｅ．生理学的機能性誘導体 プロドラッグの生理学的機能性誘導体として、塩、アミドおよびエステル類が 含まれる。エステルとして、エステル基の非カルボニル部分が直鎖もしくは分枝 鎖Ｃ_1-6アルキル（メチル、n-プロピル、n-ブチルもしくはt-ブチル）、または Ｃ_3-6環状アルキル（例えば、シクロヘキシル）から選択される、カルボン酸エ ステルが含まれる。塩として、生理学的に許容される塩基塩、例えばアルカリ金 属（例えばナトリウム）などの適当な塩基から誘導される塩、アルカリ土類金属 （例えばマグネシウム）塩、アンモニウムおよびＮＲ"₄（Ｒ”はＣ_1-4アルキル ）塩が含まれる。その他の塩として、塩酸および酢酸塩を含む酸付加塩が含まれ る。アミドとして、非置換ならびにモノおよびジ置換誘導体が含まれる。これ らの誘導体は薬学分野でそれ自体既知の技術によって製造することができる。 本発明の化合物の投与後に体内で誘導体が形成されることによって、その他の 生理学的機能性誘導体が生起することも可能である。 例えば、式（Ｉ）および（II）、特にＹがＮＨ₂またはＮＨＲの場合、の化合 物の多くは式(III)のシクロプロピルイミン構造を経由して細胞毒性となり得る ： ［式中、Ｒ，Ｅ，ＧおよびＱは上記定義の通りである］。 このイミン基（＝ＮＲ）は、式（II）の化合物中のＰ基の分断が発生したときに も生じることがある。 Ｆ．本発明の適用 本発明の化合物をヒトまたは動物の身体の治療方法において使用することがで きる。こうした治療として、治療が必要な患者に対して、ADEPT またはGDEPT 治 療システムの一部として、本発明の式（Ｉ）の化合物または本発明の式（II）の 化合物を投与することを含む、新生物疾患の患者の新生物細胞の増殖を処置する 方法が含まれる。新生物疾患には白血病ならびに固形腫瘍（例えば、小細胞肺上 皮性悪性腫瘍を含む、乳房、腸および肺腫瘍）が含まれる。 腫瘍の治療に関しては、治療として、患者における腫瘍の影響を軽減するため に医師が行なうどんな程度のものも含まれると理解されるべきである。したがっ て、腫瘍の完全な鎮静化が目標の到達点ではあるが、有効な治療として、腫瘍の 部分的な鎮静化および転移を含む腫瘍の増殖速度の低減を達成することができる どんな程度のものも含まれる。これらの程度でも、延命および／または生活の質 の向上ならびに疾病症状の緩和に有効となり得る。 Ｆ（ｉ）：式（Ｉ）の化合物 本発明の式（Ｉ）の化合物を患者の新生物疾患の治療方法において使用するこ とができる。この方法は治療が必要な患者に対して有効な量の式（Ｉ）の化合物 を投与することを含む。この化合物を医薬組成物の形態で投与することができる 。 化合物の正確な用量は、患者の状態や必要性を考慮して、医師の判断によるが 、典型的な用量は患者１日について約 0.1−200 mg/Kg 、好ましくは約 10−100 mg/Kgの範囲となると考えられる。 Ｆ（ii）：ADEPT 治療法 ADEPT のための抗体／酵素複合体は同時に投与することができるが、臨床の実 用上は、酵素／薬剤複合体に腫瘍標的の領域に局在化する機会を与えるため、酵 素／薬剤複合体をプロドラッグより前、例えば72時間前まで、またはさらに１週 間前に投与することが好ましいことがわかることが多い。このように操作するこ とによって、プロドラッグを投与するとき、プロドラッグの細胞毒性剤への変換 が、酵素／薬剤複合体が局在化した領域、すなわち標的腫瘍の領域に限られる傾 向があり、式（II）の化合物の早すぎる放出が最小限となる。 ADEPT において、酵素／薬剤複合体の局在化度（自由に循環している活性複合 体に対する局在化したものの割合を称する）は国際公開公報第89/10140号に記載 されたクリアランスおよび／または不活性化システムを使用してさらに強化する ことができる。これには、通常複合体の投与後でプロドラッグの投与前に、酵素 を不活性化し、そして／または血液からの複合体のクリアランス（除去）を加速 するための、複合体の一部に結合することができるような成分（「第２成分」） の投与が含まれる。こうした成分として、酵素を不活性化することができる、シ ステムの酵素成分に対する抗体が含まれ得る。 第２成分が血管区域から出るのを制限するために、第２成分をデキストラン、 リポソーム、アルブミン、マクログロブリン、またはＯ血液型赤血球などの巨大 分子に連結させてもよい。それに加えてまたはそれとは別に、第２成分に十分な 数の共有結合したガラクトース残基、またはラクトースもしくはマンノースなど のその他の糖類の残基を含ませて、これが血漿中の複合体に結合するが、肝臓中 でガラクトースまたはその他の糖類に対する受容体によって、血漿から複合体と ともに除去されるようにすることもよい。第２成分はプロドラッグの投与前およ び投与中に局在化した複合体を不活性化する恐れがある腫瘍の血管外部分には検 知し得る程度には決して入ることがなく使用されるように、投与および設計しな ければならない。 ADEPT システムにおいて、プロドラッグおよび複合体の用量は究極的には、医 師の判断によるもので、医師は患者の年令、体重および状態などの因子を考慮す る。プロドラッグおよび複合体の好適な用量が Bagshawe ら、Antibody,Immunoc onjugates,and Radiopharmaceuticals(1991),4,915-922に記載されている。患者 １日についての複合体の好適な用量は 500-200,000酵素単位／m²（例えば 20,00 0 酵素単位／m²）、そしてプロドラッグの好適な用量は約 0.1-200 mg/Kg、好ま しくは約 10-100 mg/Kg であり得る。 所望の治療部位において複合体の最大濃度を確保するため、普通は２つの成分 の投与を少なくとも４時間の間隔とすることが望ましい。正確な投与方式は標的 となる腫瘍の性質およびプロドラッグの性質などの各種の因子によって影響を受 けるが、通常は所望の治療部位において48時間以内に適正濃度の複合体となる。 ニトロレダクターゼとともに使用するADEPT システムは、また好ましくは酵素 のための好適な補助因子を含む。好適な補助因子として、ニコチン酸またはニコ チンアミドのリボシドまたはリボチドが含まれる。 抗体／酵素複合体は ADEPT治療法において通常使用されるどんな好適な経路に よっても投与することができる。これには下記Ｆ（iv）節に記載するような方式 および製剤での抗体の腸管外投与が含まれる。 Ｆ(iii)：GDEPT 治療法 治療におけるベクターの使用のためには、例えば Ramら（同上）の記載のよう に、通常ベクターをウイルス粒子中に封入して、その粒子を腫瘍部位に送り込む 。ウイルス粒子は腫瘍に対する標的化を強化するため、抗体、その断片（単鎖を 含む）または腫瘍指向性リガンドを含むように改変することができる。あるいは ベクターをリポソーム中に封入することもできる。リポソームは特定の腫瘍を標 的にさせることが可能である。これはリポソームに腫瘍指向性抗体を接続するこ とによって達成し得る。ウイルス粒子をまたリポソームに組み込むこともできる 。 粒子は医師の裁量によって任意の好適な方法によって腫瘍に送り込まれ得る。好 ましくは、ウイルス粒子は腫瘍細胞に選択的に感染する能力があるものである。 「選択的感染」とは、ウイルス粒子が主として腫瘍細胞に感染し、治療する疾患 の性質について、感染した非腫瘍細胞の割合が、プロドラッグの投与による非腫 瘍細胞の損傷が許容できる程度に低くなる範囲のものを意味する。結局、これは 医師によって決定される。 投与の好適な１経路は無菌溶液中の粒子の注射である。例えば、封入する細胞 系から単離したウイルスを局所潅流法または直接腫瘍内用法、または例えば腹腔 内注射による体腔内への直接注射（腔内投与）によって投与することもできる。 もちろん、GDEPT のための的確な用量用法は各臨床医によって各患者について 決定される必要がある一方、プロドラッグおよびそのプロドラッグから放出され る細胞毒性薬剤の厳密な性質によって制御を受けるものであるが、いくつかの一 般的な指針を与えることができる。この型の化学治療としては通常は改変ウイル スの腸管外投与が挙げられ、静脈内注射が最も実用的であることが多い。 GDEPT システムにおいて、送り込まれるウイルスまたはその他のベクターの量 は上記の ADEPTシステムにおけるものと同様の酵素の細胞内濃度を提供する程度 のものである。典型的には、ベクターを患者に投与し、その後トランスフェクト または感染した（ウイルスベクターの場合）細胞によるベクターの取り込みを例 えば標的組織の生検サンプルを回収して分析することによってモニターする。こ れは、患者にある範囲の試験的用量を投与して、標的細胞または腫瘍の感染また はトランスフェクションの程度を測定することを含む臨床試験によって決定され 得る。必要なプロドラッグの量は ADEPTシステム用の場合と同様かまたはそれよ り多い。 GDEPT システムを使用する場合、プロドラッグは通常酵素をコードするベクタ ーの投与の後に投与される。プロドラッグの好適な用量は患者１日につき、約 0 .1−200 mg/Kg 、好ましくは約 10−100 mg/Kgである。 Ｆ（iv）：薬剤またはプロドラッグの投与 式（Ｉ）の化合物または式（II）のプロドラッグを単独で投与することは可能 であるが、これらを医薬製剤として提供するのが好ましい。製剤は化合物ととも にそれらの１以上の許容される担体、および場合によってはその他の治療用成分 を含む。担体または担体類は製剤の他の成分と適合性があり、そしてこれらのレ シピエントに対して有害でないという意味で、「許容される」ものでなければな らず、例えばリポソームなどである。好適なリポソームとして、例えば、陽性荷 電のリピド（N[1-(2,3- ジオレイルオキシ）プロピル]-N,N,N-トリエチルアンモ ニウム(DOTMA)）を含むもの、ジオレイルホスファチジルエタノールアミン(DOPE )を含むもの、および3β[N-(n',N'-ジメチルアミノエタン)-カルバモイル]コレ ステロール(DC-Chol)を含むものが含まれる。 腸管外または筋肉内投与に好適な製剤には、抗酸化剤、緩衝剤、静菌剤、殺菌 性抗生物質および対象のレシピエントの血液と等張性の製剤にするための溶質を 含んでもよい無菌注射水溶液または非水溶液；ならびに懸濁剤および濃厚化剤を 含んでもよい無菌水性または非水性懸濁液、そして化合物が目標の血液成分また は１以上の器官に届くように設計されたリポソームまたはその他のミクロパーテ ィキュレートシステムが含まれ得る。製剤は、一回用量または多数回用量の容器 、例えば封入アンプルおよびバイアルで提供され得、使用の直前に注射のために 無菌液状担体、例えば水を添加するだけでよいように、凍結乾燥（lyophilize） 状態で保存することができる。注射溶液および懸濁液は、前記の種類の無菌粉末 、顆粒または錠剤から即時に調製することができる。 特に上に述べた成分に加えて、製剤に本件の型の製剤に関係する当業界で通常 のその他の薬剤を含ませてもよいと理解されるべきである。可能な製剤の中で、 無菌で発熱物質を含まない水性および非水性溶液が好ましい。 用量を経時的に、例えば、毎日、毎週もしくは毎月の間隔で、または患者の特 別の必要性に応じて投与することができる。好ましい投与経路は経口投与および 注射、典型的には腸管外または筋肉内注射または腫瘍内注射である。 もちろん正確な用量方法は個々の患者について個々の診療医によって決定され る必要があり、一方これは式（Ｉ）の化合物の厳密な性質によって調節されるも のであるが、ある程度の一般的な指示は与えることができる。典型的な用量範囲 は一般的に１回または多数回用量について上記の通りである。患者の状態および その他の因子によっては、医師の裁量範囲で別の用量を使用することもできる。 以下の実施例は本発明を説明するものである。 実施例 1：6-アミノ-3-(クロロメチル)-1-[(5',6',7'- トリメトキシインドー ル-2'-イル)カルボニル]インドリンの調製 (a)t- ブチル 4- クロロ-3- ニトロベンゾエート 1,2-ジクロロエタン（150 mL）中の4-クロロ-3- ニトロ安息香酸（10.03 g，5 0 mmol），ＳＯＣｌ₂（4.4 mL，60 mmol ）および DMF（4 滴）を還流下で14時 間撹拌し、冷却して蒸発させた。生成した粗酸塩化物を THF（100 mL）に溶解し 、 0℃に冷却して、THF （150 mL）中のカリウムt-ブトキシド（5.57 g，50 mmo l）溶液を窒素下で30分間で滴下した。混合物を 0℃でさらに15分撹拌し、水性 ＮａＨＣＯ₃で希釈し、EtＯAc（×２）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄） して蒸発させた。残渣をシリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィー（石油エ ーテル／EtＯAc；30：１）し、白色結晶固体の t- ブチル 4- クロロ-3- ニトロ ベンゾエート（11.45 g，89％），mp（石油エーテル）70-71℃を得た。¹ＨＮＭ Ｒ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.42（d，J＝2.0 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），8.11（dd，J＝8.4，2.0 Hz，1Ｈ，Ｈ-6），7.61（d，J＝8.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），1.61（s，9Ｈ，t-Bu） 。分析値．Ｃ₁₁Ｈ₁₂ＣｌＮＯ₄としての計算値：Ｃ，51.3；Ｈ，4.7；Ｎ，5.4； Ｃｌ，13.8。実測値：Ｃ，51.6；Ｈ，4.8；Ｎ，5.4；Ｃｌ，14.0％。 (b) ジメチル（4-カルボキシ-2- ニトロフェニル）マロネート 水素化ナトリウム（油中 60％分散物として 13.5 g，0.34 mol）を窒素下で石 油エーテル（×3 ）で洗浄し、無水 THF（400 mL）中に懸濁させた。内部温度を 30℃未満に保つように水浴冷却しながら、THF （50 mL）中のジメチルマロネー ト（40.4 mL，0.35 mol)溶液を 45 分間で滴下し、無水 THF（300 mL）を追加し て生成したゲルを分散させた。上記のt-ブチル 4- クロロ-3- ニトロベンゾエー ト（21.7 g，84 mmol ）を添加し、混合物を窒素下で還流しながら15時間撹拌し た。赤茶色の溶液を冷却し、水中に注ぎ入れ、ニトロネートの赤色が消えるまで 、水性ＨＣｌ（2 N，約 60 mL）を徐々に添加した。THF を蒸発させ、水性相を ＣＨ₂Ｃｌ₂（×3 ）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。残 渣にギ酸（100 mL）を添加し、混合物を 50℃で 4時間（tlc 分析で残存t-ブチ ルエステルが示されなくなるまで）撹拌した。ギ酸を蒸発させ、残渣を EtＯA c中に入れ、水（×3 ）で洗浄した。有機層を水性ＮａＨＣＯ₃（×2 ）で抽出し 、水性相を酸性化（濃ＨＣｌ）し、ＣＨ₂Ｃｌ₂（×2 ）で抽出した。有機層を乾 燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させ、生成したクリーム色の固体をベンゼン（約 250 mL ）から再結晶させて、クリーム色の柱体としてジメチル（4-カルボキシ-2- ニトロフェニル）マロネート（21.8 g，87％），mp147-149℃、が得られた。¹Ｈ ＮＭＲ（(ＣＤ₃)₂ＳＯ）δ 13.77（br s，1Ｈ，ＣＯ₂Ｈ），8.52（d，J＝1.7 Hz ，1Ｈ，Ｈ-3），8.28（dd，J＝8.1，1.7 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.70（d，J＝8.1 Hz ，1Ｈ，Ｈ-6），5.62（s，1Ｈ，ArＣＨ），3.71（s，6Ｈ，ＣＯ₂Me）。¹³Ｃ Ｎ ＭＲ δ 166.9，165.1（ＣＯＯMe，ＣＯＯＨ），148.2，134.0，133.1，132.3 ，132.1，125.5（Ｃ-1,2,3,4,5,6），54.3（ArＣＨ），52.9（ＯMe）。分析値． Ｃ₁₂Ｈ₁₁ＮＯ₈としての計算値：Ｃ，48.5；Ｈ，3.7；Ｎ，4.7。実測値：Ｃ，48. 7；Ｈ，3.5；Ｎ，4.7％。 (c) ジメチル［4-( ベンジルオキシカルボニル)-アミノ-2- ニトロフェニル］ マロネート 1,2-ジクロロエタン（60 mL ）中の上記マロネート（3.44g，11.6 mmol）、Ｓ ＯＣｌ₂（1.0 mL，13.9 mmol ）および DMF（4 滴）の溶液を還流下で 1時間撹 拌し、冷却し、蒸発させた。残渣を Me₂ＣＯ（30 mL ）に溶解し、 0℃で、水（ 30 mL ）およびアセトン（100 mL）中のナトリウムアジド（2.26 g，35 mmol） の溶液に激しく撹拌しながら10分間で滴下した。さらに 0℃で30分置いた後、Et ＯAc（100 mL）を添加し、大部分の Me₂ＣＯを蒸発させ、EtＯAc層を水で洗浄し 、乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。残渣を無水トルエン（35 mL ）に溶解し 、還流下で40分撹拌した。冷却した溶液にベンジルアルコール（2.2 mL，21 mmo l ）を添加し、混合物を20℃で 2時間［tlc プレートに点滴したサンプルが黄色 のジメチル（4-アミノ-2- ニトロフェニル）マロネートの形成を示さなくなるま で］撹拌した。その後混合物を蒸発させ、残渣を Kugelrohr（1 mmＨｇ，90℃） で蒸留し、過剰のベンジルアルコールを除去した。シリカゲル上、石油エーテル ／EtＯAc（3：1）で溶出させたフラッシュクロマトグラフィーによって、黄色油 状のジメチル［4-(ベンジルオキシカルボニル)-アミノ-2- ニトロフェニル］マ ロネート（3.77 g，81％）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.16 （d ，J＝2.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-3），7.59（dd，J＝8.5，2.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.4 2-7.33（m，6Ｈ，Ｈ-6 and Ph），7.11（s，1Ｈ，ＮＨ），5.25（s，1Ｈ，ArＣ Ｈ），5.22（s，2Ｈ，ＯＣＨ₂Ph），3.78（s，6Ｈ，ＣＯ₂Me）；¹³Ｃ ＮＭＲδ 167.9，（ＣＯ₂Me），152.8（ＮＣＯ₂），149.0，139.1，135.4，131.9，128.7 ，128.6，128.4，122.7，121.9，114.6（芳香族Ｃ），67.6（ＯＣＨ₂Ph），53.5 （ArＣＨ），53.2（ＯMe）；MS（DEI）m/z 402 （2％，Ｍ⁺），91（100％，Ｃ₇ Ｈ₇）；HRMS Ｃ₁₉Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₈としての計算値 402.10631、実測値 402.10594。 (d)2- ［4-（ベンジルオキシカルボニル）アミノ-2- ニトロフェニル］プロパ ン-1,3- ジオール THF （100 mL）中のジイソブチルアルミニウムハイドライド（ヘキサン中 1 M 溶液 93 mL、93 mmol ）溶液に、氷−塩浴で（内部温度を -7−0℃に維持するよ うに）冷却しながら窒素下で、THF （80 mL ）中の上記の2-ニトロフェニルマロ ネート（3.12 g，7.75 mmol ）溶液を30分間で滴下した。混合物を 1時間で20℃ に温め、その後氷−冷水性ＨＣｌ（3 N，260 mL）中に注ぎ入れた。THF を蒸発 させ、水性残渣をEtＯAc（×3 ）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸 発させた。シリカゲル上、EtＯAc／石油エーテル（1：3、次に 1：1、次に2：1 ）で溶出させた無水カラムクロマトグラフィーによって、回収したジメチル［4- （ベンジルオキシカルボニル）アミノ-2- ニトロフェニル］マロネート（0.42 g ，13％）および淡褐色の発泡体として 2-［4-(ベンジルオキシカルボニル)アミ ノ-2- ニトロフェニル］プロパン-1,3- ジオール（1.35 g，50％）が得られた。 後者のサンプルをＣＨＣｌ₃から結晶化し、薄黄色フレーク、mp 119−121℃が得 られた。¹ＨＮＭＲ（(ＣＤ₃)₂ＳＯ）δ 10.15（s，1Ｈ，ＮＨ），7.97（d，J＝2 .2 Hz，1Ｈ，Ｈ-3），7.60（dd，J＝8.6，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.49（d，J＝8 .6 Hz，1Ｈ，Ｈ-6），7.45-7.33（m ，5Ｈ，Ph），5.18（s，2H，ＯＣＨ₂Ph）， 4.67（t，J＝5.3 Hz，2H，ＯＨ），3.73-3.66（m ，2H，ＣＨＨＯＨ），3.63-3. 56（m，2H，ＣＨＨＯＨ），3.23（p，J＝6.4 Hz，1H，ArＣＨ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 153.3（ＮＣＯ₂），150.9，137.8，136.2，129.0（Ｃ-1,2,4およびPhの i Ｃ），129.9，121.7，112.3（Ｃ-3,5,6），128.4，128.11，128.09，（Phの o，m，pＣ），66.1（ＯＣＨ₂Ph），61.8（ＣＨ₂ＯＨ），44.1（ArＣＨ）。分析 値．Ｃ₁₇Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₆としての計算値：Ｃ，59.0；Ｈ，5.2；Ｎ，8.1。実測値：Ｃ ，58.9；Ｈ，5.4；Ｎ，8.3％。 (e)2- ［2-アミノ-4-(ベンジルオキシカルボニル)アミノフェニル］プロパン-1 ,3- ジオール ptＯ₂（0.12 g）を含むEtＯＨ（80 mL ）中の上記のニトロジオール（1.02 g ，2.9 mmol）溶液を 50 psi および20℃で50分水素化し、セライトを通して濾過 し、蒸発させた。シリカゲル上、EtＯAc／MeＯＨ（20：1、次に 10：1）で溶出 させた無水カラムクロマトグラフィーによって、非常に薄い黄色の油状物として 表記の化合物（0.88 g，94％）が得られた。¹ＨＮＭＲ（(ＣＤ₃)₂ＳＯ）δ 9.36 （s，1Ｈ，ＮＨ），7.43-7.30（m，5H，Ph），6.82（d，J＝2 Hz，1Ｈ，Ｈ-3） ，6.81（d，J＝8.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-6），6.58（dd，J＝8.3 ，2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-5 ），5.12（s，2H，ＯＣＨ₂Ph），4.82（s，2H，ＮＨ₂またはＯＨ），4.50（s，2 H，ＮＨ₂またはＯＨ），3.69-3.62（m，2H，ＣＨＨＯＨ），3.54-3.46（m，2H， ＣＨＨＯＨ），2.83（p，J＝6.2 Hz，1H，ArＣＨ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 153.2 （ＮＣＯ₂），146.8，137.2，136.8，120.4（Ｃ-1,2,4およびPhの iＣ），128.3 ，127.92，127.86（Phの o，m，pＣ），127.0，107.2，105.2（Ｃ-3,5,6），65. 3（ＯＣＨ₂Ph），62.3（ＣＨ₂ＯＨ），43.2（ArＣＨ）；MS（DEI）m/z 316 （30 ％，Ｍ⁺），285（30％，Ｍ−ＣＨ₂ＯＨ），91（100％，Ｃ₇Ｈ₇）；HRMSＣ₁₇Ｈ₂₀ Ｎ₂Ｏ₄としての計算値 316.14231，実測値 316.14182。 (f)2- ［4-（ベンジルオキシカルボニル）アミノ-2-(t-ブチルオキシカルボニ ル)アミノフェニル］プロパン-1,3- ジオール THF （120 mL）および水（60 mL ）中の上記のアミノジオール（0.70 g，2.21 mmol ）、ジ-t- ブチルジカーボネート（0.53 g，2.4 mmol）およびＮａ₂ＣＯ₃ （0.26 g，2.4 mmol）の溶液を20℃で撹拌した。5 および 8日後に、単相を維持 するのに十分な THFおよび水とともに、ジ-t- ブチルジカーボネート（2×0.53 g）をさらに添加した。14日後、THF を蒸発させ、水性層をEtＯAc（×2 ）で抽 出し、有機性抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。シリカゲル上、EtＯ Ac／石油エーテル（2：1、次に 4：1 ）で溶出させた無水カラムクロマトグラフ ィーによって、白色発泡体の表記の化合物（0.78 g，85％）が得られた。¹ＨＮ ＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ）δ 9.67（s，1Ｈ，ＮＨ），8.62（s，1Ｈ，ＮＨ），7.60 （s，1 Ｈ，Ｈ-3），7.44-7.31（m，5Ｈ，Ph），7.19（dd，J＝8.5，1.7 Hz，1 Ｈ，Ｈ-5），7.08（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-6），5.14（s，2Ｈ，ＯＣＨ2Ph）， 4.84（t ，J＝4.7 Hz，2Ｈ，ＯＨ），3.78-3.70（m，2Ｈ，ＣＨＨＯＨ），3.54- 3.45（m，2Ｈ，ＣＨＨＯＨ），2.98（p，J＝6.3 Hz，1Ｈ，ArＣＨ），1.45（s， 9Ｈ，t-Bu）；13Ｃ ＮＭＲ d 153.3（Ｄ₂Ｏ交換において 2つのピークに分 解、2×ＮＣＯ₂），137.1，137.0，136.7，129.4（Ｃ-1,2,4 およびPhの iＣ） ，128.4，127.91，127.87（Phの o，m，pＣ），127.4，114.6，114.4（Ｃ-3,5,6 ），78.8（ＯＣMe₃），65.5（ＯＣＨ₂Ph），62.8（ＣＨ₂ＯＨ），43.9（ArＣＨ ），28.1(Ｃ(ＣＨ3)3)；MS（DEI）m/z 416 （2％，Ｍ⁺），91（100％，Ｃ₇Ｈ₇） ；HRMSＣ₂₂Ｈ₂₈Ｎ₂Ｏ₆としての計算値 416.19474，実測値 416.19544。 (g)6- ［（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］-1-（t-ブチルオキシカルボニ ル）-3- （ヒドロキシメチル）インドリン THF（60 mL）中の上記のt-ブチルオキシカルボニルジオール（0.74 g，1.78 m mol ）およびトリフェニルホスフィン（0.84 g，3.2 mmol）の溶液に、窒素下で ジエチルアゾジカルボキシレート（0.47 mL，3.0 mmol）を 5分間で滴下し、混 合物を20℃で撹拌した。10分後、混合物を EtＯAcで希釈し、水性ＮａＣｌで洗 浄し、有機相を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。シリカゲル上、EtＯAc／石 油エーテル（1：2）で溶出させた無水カラムクロマトグラフィーによって、還元 されたジエチルアゾジカルボキシレートと表記の生成物が重複したバンドが得ら れた。生成物の少量画分が非常に薄い黄色油状物として純粋状態で得られた。¹ ＨＮＭＲ（(ＣＤ₃)₂ＳＯ）δ 9.68（s，1Ｈ，ＮＨ），7.97（br s，1Ｈ，Ｈ-7） ，7.44-7.31（m，5H，Ph），7.11（d，J＝8.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），6.98（br d,J ＝8 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），5.13（s，2Ｈ，ＯＣＨ₂Ph），4.90（t，J＝5.0 Hz，1Ｈ ，ＯＨ），3.94（見かけ上 t，J＝10.3 Hz，1Ｈ，ＮＣＨＨ），3.75（dd，J＝11 .3，5.1 Hz，1Ｈ，ＮＣＨＨ），3.61-3.54（m，ddに崩壊，J＝10.2，Ｄ20交換に おいて 4.7 Hz，1H，ＣＨＨＯＨ），3.41-3.28（m，2Ｈ，ArＣＨＣＨＨＯＨ）， 1.51（s，9Ｈ，t-Bu）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 153.2，151.6（2×ＮＣＯ₂）， 143（br），138.6，136.7，126.4（Ｃ-6,8,9およびPhの iＣ），128.3，127.96 ，127.90（Phの o，m，pＣ），124.4，112.1，105.0（Ｃ-4,5,7），79.7（ＯＣM e₃），65.5，63.9（ＯＣＨ₂Ph，ＣＨ₂ＯＨ），51.4（Ｃ-2），41.2（Ｃ-3），28 .0（Ｃ(ＣＨ₃)₃）；MS（DEI）m/z 398 （4％，Ｍ+）；HRMSＣ₂₂Ｈ₂₆Ｎ₂Ｏ₅とし ての計算値 398.18417，実測値 398.18402。 (h)6- ［（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］-1-（t-ブチルオキシカルボニ ル）-3- ［（メタンスルホニルオキシ）メチル］インドリン ＣＨ₂Ｃｌ₂（60 mL）中の前記の反応で得られた混合物（アルコール約 1.8 mm ol ）およびEt₃Ｎ（0.50 mL，3.6 mmol）の溶液に、0℃でメタンスルホニルクロ ライド（0.25 mL，3.2 mmol）を添加し、混合物を15分撹拌した。水性ＮａＨＣ Ｏ₃を添加し、混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（×2 ）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄ ）し、蒸発させた。シリカゲル上、ＣＨＣｌ₃．EtＯAc（20：1，次に10：1）で 溶出させたフラッシュクロマトグラフィーによって、白色発泡体の表記の化合物 （0.79 g，2 段階で93％）が得られた。1ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 7.73（s，1 Ｈ，Ｈ-7），7.41-7.31（m，5H，Ph），7.12（d，J＝8.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），6.7 3（s，1Ｈ，Ｈ-5），5.19（s，2Ｈ，ＯＣＨ₂Ph），4.32（dd，J＝9.9，5.5 Hz， 1Ｈ，ＣＨＨＯＳＯ₂Me），4.18（dd，J＝9.9，8.1 Hz，1Ｈ，ＣＨＨＯＳＯ₂Me） ，4.11-4.02（m，1Ｈ，ＮＣＨＨ），3.92-3.84（m，1Ｈ，ＮＣＨＨ），3.72-3.6 2（m，1Ｈ，Ｈ-3），2.96（s，3Ｈ，ＯＳＯ₂Me），1.56（s，9Ｈ，t-Bu）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 153.2，152.1（2×ＮＣＯ₂），143.9，138.7，136.0，123.6（Ｃ -6,8,9およびPhの iＣ），128.6，128.3（br）（Phの o，m，pＣ），124.9，112 .7，105.9（Ｃ-4,5,7），81.2（ＯＣMe₃），71.0（ＣＨ₂ＯＳＯ₂），67.0（ＯＣ Ｈ₂Ph），51.1（Ｃ-2），39.1（Ｃ-3），37.5（ＯＳＯ₂ＣＨ₃），28.4（Ｃ(ＣＨ₃ )₃）；MS（DEI）m/z 476 （5％，Ｍ+），91（100％，Ｃ7Ｈ7）；HRMSＣ₂₃Ｈ₂₈ Ｎ₂Ｏ₇Ｓとしての計算値 476.16172，実測値 476.16070。 (i)6- ［（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］-3- ［（メタンスルホニルオ キシ）メチル］-1- ［(5',6',7'-トリメトキシインドール-2'-イル)カルボニル ］インドリン 上記のベンジルオキシカルボニルアミノインドリン（306 mg，0.64 mmol ）を ＨＣｌ飽和 EtＯAc（10 mL ）中、20℃で 1時間（tlc が反応の終了を示すまで ）撹拌し、混合物を蒸発させた。この粗インドリン塩酸塩に、DMF （15 mL ）中 の1-（3-ジメチルアミノプロピル）-3- エチルカルボジイミド塩酸塩（EDCI，0. 37 g，1.9 mmol）および5,6,7-トリメトキシインドール-2- カルボン酸［Y.Fuku daら、Tetrahedron,1994,50,2793-2808］（161 mg，0.64 mmol）を添加し、混合 物を窒素下で20℃で22時間撹拌した。DMF を蒸発させ、残渣をEtＯAcおよび水に 溶解し、EtＯAcでもう１回抽出し、有機性抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発 させた。シリカゲル上、EtＯAc／石油エーテル（1：1）で溶出させた残渣の無水 クロマトグラフィーによって、薄いピンク色の結晶固体として、表記の化合物（ 209 mg，53％），mp（EtＯAc／石油エーテル）153-154℃が得られた。¹ＨＮＭＲ δ 11.44（s，1Ｈ，インドールＮＨ），9.85（s，1Ｈ，カルバメートＮＨ），8. 38（s，1Ｈ，Ｈ-7），7.46-7.33（m，5H，Ph），7.33（d，J＝8.2 Hz，1Ｈ，Ｈ- 4），7.25（dd，J＝8.2，1.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.03（d，J＝1.9 Hz，1Ｈ，Ｈ- 3'），6.95（s，1Ｈ，Ｈ-4'），5.15（s，2Ｈ，ＯＣＨ₂Ph），4.62（見かけ上 t ，J＝10 Hz，1Ｈ，ＣＨ₂），4.45（dd，J＝9.8，5.1 Hz，1Ｈ，ＣＨ₂），4.35（ dd，J＝9.8，7.2 Hz，1Ｈ，ＣＨ₂），4.27（dd，J＝10.9，5.3 Hz，1Ｈ，ＣＨ₂ ），3.93（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.87-3.80（m，1Ｈ，Ｈ-3），3.81（s，3Ｈ，Ｏ ＣＨ₃），3.80（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.18（s，3Ｈ，ＯＳＯ₂Me）；¹³Ｃ ＮＭ Ｒ δ 160.1，153.3，149.1，144.0，139.8，139.1，139.0，136.6，130.8，1 24.6，123.1（Ｃ-6,8,9,2',5',6',7',8',9',Phの iＣ，ＮＣＯ，ＮＣＯ₂，１つ のピークは観測されなかった），128.4，128.0，127.9（Phの o，m，pＣ），125 .3，113.9，107.7，106.1，98.0（Ｃ-4,5,7,3',4'），71.3（ＣＨ₂ＯＳＯ₂），6 5.6（ＯＣＨ₂Ph），61.0，60.9，55.9（3×ＯＣＨ₃），53.0（Ｃ-2），39.3（Ｃ -3），36.5（ＯＳＯ₂ＣＨ₃）；分析値．Ｃ₃₀Ｈ₃₁Ｎ₃Ｏ₉Ｓ．0.5 EtＯAcとしての 計算値：Ｃ，58.8；Ｈ，5.4；Ｎ，6.4。実測値：Ｃ，58.7；Ｈ，5.3；Ｎ，6.6％ 。 (j)6- アミノ-3- （クロロメチル）-1- ［(5',6',7'-トリメトキシインドール- 2'-イル)カルボニル］インドリン THF （50 mL ）中の上記のインドリン（233 mg，0.38 mmol ）およびPd／Ｃ（ 5％，100 mg）に、水（12 mL ）中のギ酸アンモニウム（0.24 g，3.8 mmol） 溶液を添加し、混合物を20℃で撹拌した。70分後、さらにPd／Ｃ（30 mg ）を添 加し、100 分後（tlc が反応の終了を示したとき）、触媒を濾過して除去し、Et ＯAcで洗浄した。濾液を水性ＮａＣｌで希釈し、EtＯAc（×2 ）で抽出し、抽出 物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。（EtＯAc／石油エーテル（2：1）で溶 出させた）無水クロマトグラフィーによって、薄い黄色の発泡体として、6-アミ ノ-3- ［（メタンスルホニルオキシ）- メチル］-1-［（5',6',7'-トリメトキシ インドール- 2'- イル）カルボニル］インドリン（154 mg，85％）が得られた。 このメシレート（mesylate）（150 mg，0.32 mmol ）およびＬｉＣｌ（0.13 g， 3.2 mmol）を DMF（5 mL）中、70℃で窒素下で80分撹拌し、DMF を蒸発させた。 残渣をEtＯAcおよび水に溶解し、EtＯAcでもう１回抽出し、有機性抽出物を乾燥 （Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。EtＯAc／石油エーテル（1：1）で溶出させた無 水クロマトグラフィーによって、本発明の表記の化合物（87 mg，66％），mp（E tＯAc／Et₂Ｏ）173-174℃が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 11.36（d ，J＝1.6 Hz，1Ｈ，ＮＨ），7.44（br s，1Ｈ，Ｈ-7），7.05（d，J＝8.0 Hz，1 Ｈ，Ｈ-4），6.96（d，J＝2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'），6.95（s，1Ｈ，Ｈ-4'），6.3 0（dd，J＝8.0，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），5.18（s，2Ｈ，ＮＨ₂），4.54（dd，J＝ 10.8，8.7 Hz，1Ｈ，ＮＣＨＨ），4.20（dd，J＝10.8，4.4 Hz，1Ｈ，ＮＣＨＨ ），3.93（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.91（dd，J＝9.9，3.5 Hz，1Ｈ，ＣＨＨＣｌ） ，3.81（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.79（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.74-3.60（m，2Ｈ， ＣＨＣＨＨＣｌ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 159.9，149.0，144.2，139.6，139.0，1 31.2，125.1，123.1，118.8（Ｃ-6,8,9,2',5',6',7',8',9'，ＮＣＯ，１つのピ ークは観測されなかった），124.7，109.5，105.6，102.9，98.0（Ｃ-4,5,7,3', 4'），61.0，60.9，55.9（3×ＯＣＨ₃），54.5（Ｃ-2），47.9（ＣＨ₂Ｃｌ），4 1.8（Ｃ-3）。分析値．Ｃ₂₁Ｈ₂₂ＣｌＮ₃Ｏ₄としての計算値：Ｃ，60.7；Ｈ，5.3 ；Ｎ，10.1。実測値：Ｃ，60.7；Ｈ，5.4；Ｎ，9.8％。実施例 2：6-アミノ-3- （クロロメチル）-1- ［(5',6',7'-トリメトキシインド ール- 2'- イル）カルボニル］インドリンの合成の別法 この実施例は図式２に略記する合成経路を説明する。 (a)t- ブチル-2- クロロ-5- ニトロベンゾエート 1,2-ジクロロエタン（150 mL）中の2-クロロ-5- ニトロ安息香酸（10.14 g，5 0.3 mmol），チオニルクロライド（4.4 mL，60 mmol ）および DMF（4 滴）を還 流下で14時間撹拌し、冷却して蒸発させた。この酸塩化物を THF（100 mL）に溶 解し、 0℃に冷却して、THF （150 mL）中のカリウムt-ブトキシド（5.57 g，50 mmol ）溶液を窒素下で30分間で滴下した。混合物を 0℃でさらに15分撹拌し、 水性ＮａＨＣＯ₃で希釈し、EtＯAc（×２）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄ ）して蒸発させた。石油エーテルから結晶化させて、白色結晶固体のt-ブチル 2- クロロ-5- ニトロベンゾエート（10.1 g，78％），mp 91.5-92℃を得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.59（d，J＝2.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-6），8.24（dd，J＝8.8 ，2.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.63（d，J＝8.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-3），1.65（s，9Ｈ，t- Bu）：13Ｃ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）d 163.0（ＣＯ2tBu），146.1，140.0，133.3 ，（Ｃ-1,2,5），132.0，126.1，126.0（Ｃ-3,4,6），84.0（ＣMe3），28.1（Ｃ Ｈ₃）。分析値．Ｃ₁₁Ｈ₁₂ＣｌＮＯ₄としての計算値：Ｃ，51.3；Ｈ，4.7 ；Ｎ ，5.4；Ｃｌ，13.8。実測値：Ｃ，51.3；Ｈ，4.5；Ｎ，5.6；Ｃｌ，14.0％。 (b) ジメチル（2-カルボキシ-4- ニトロフェニル）マロネート 水素化ナトリウム（油中 60％分散物として 12.42 g，310 mmol）を窒素下で 石油エーテル（×3 ）で洗浄し、無水DMSO（250 mL）中に懸濁させた。内部温度 を 30℃未満に保つように水浴冷却しながら、DMSO（50 mL ）中のジメチルマロ ネート（37.3 mL，330 mmol）溶液を35分間で滴下した。t-ブチル-2- クロロ-5- ニトロベンゾエート（20.0 g，78 mmol ）を添加し、混合物を窒素下で70−80 ℃で 4時間撹拌した。赤茶色の溶液を冷却し、水（300 mL）中に注ぎ入れ、ニト ロネートの赤色が消えるまで、水性ＨＣｌ（2 N，約 60 mL）を徐々に添加した 。混合物をＣＨ₂Ｃｌ₂（×3 ）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発 させた。残渣にギ酸（60 mL ）を添加し、混合物を 20℃で15時間、次に50℃で 7時間（tlc 分析で残存 t- ブチルエステルが示されなくなるまで）撹拌した。 ギ酸を蒸発させ、残渣を EtＯAc中に入れ、水性ＮａＣｌ（×3 ）で洗浄した。 有機層を水性ＮａＨＣＯ₃（×3 ）で抽出し、水性相を酸性化（濃ＨＣｌ）し、 Ｃ Ｈ₂Ｃｌ₂（×3 ）で抽出した。有機相を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させ、残渣 をベンゼンから再結晶（2 クロップ(crop)）させて、クリーム色の針状体として ジメチル（2-カルボキシ-4- ニトロフェニル）マロネート（20.27 g，88％），m p163-164℃、が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.99（d，J＝2.5 Hz，1Ｈ ，Ｈ-3），8.44（dd，J＝8.6，2.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），8.4（v br s，1Ｈ，ＣＯ₂ Ｈ），7.73（d，J＝8.6 Hz，1Ｈ，Ｈ-6），5.94（s，1Ｈ，ArＣＨ），3.83（s， 6Ｈ，ＣＯ₂Me）。13Ｃ ＮＭＲ δ 169.6，167.8（ＣＯ₂Me，ＣＯ₂Ｈ），147. 4，141.4，132.2，129.7，127.6，126.8（Ｃ-1,2,3,4,5,6），54.4（ArＣＨ）， 53.3（ＯMe）。Ｃ₁₂Ｈ₁₁ＮＯ₈としての分析計算値：Ｃ，48.5；Ｈ，3.7 ；Ｎ，4 .7。実測値：Ｃ，48.7；Ｈ，3.7；Ｎ，5.0％。 (c)3,3- ジ（メトキシカルボニル）-6- ニトロ-2- インドロン ジメチル（2-カルボキシ-4- ニトロフェニル）マロネート（18.43g，62 mmol ）およびジフェニルホスホリルアジド（DPPA，13.4 mL，62 mmol）の溶液に、ト リエチルアミン（8.64 mL，62 mmol）を添加し、混合物を還流下で15時間撹拌し た。橙茶色の溶液を冷却し、小容積に濃縮し、固体を濾過して取出し、 2 NＨＣ ｌで、次に水で洗浄した。熱MeＯＨ（約 80 mL）とともに摩砕し、薄黄色粉末と して表記の化合物（15.4 g，84％），mp 234-239℃（分解）が得られた。¹ＨＮ ＭＲ（(ＣＤ₃)₂ＳＯ）δ 11.43（br s，1Ｈ，ＮＨ），7.97（dd，J＝8.3，2.1Hz ，1Ｈ，Ｈ-5），7.66（d，J＝8.3 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），7.62（d，J＝2.1 Hz，1Ｈ ，Ｈ-7），3.76（s，6Ｈ，ＣＯ₂Me）；13Ｃ ＮＭＲ δ 167.4，163.9（ＣＯ2 Me，ＣＯＮＨ），148.4，143.7，130.4（Ｃ-6,8,9），126.7，117.7，104.6（Ｃ -4,5,7），65.7（Ｃ-3），54.0（ＯMe）；ＩＲ（ＫＢｒ）1767（ＣＯＮＨ），17 36（ＣＯ₂Me），1524（ＮＯ₂），1348（ＮＯ₂），1246 cm-1 ；MS（DEI）294 （ 85％，Ｍ⁺），250（100％，Ｍ−ＣＯ₂）；HRMS Ｃ₁₂Ｈ₁₀Ｎ₂Ｏ₇としての計算値 294.04880、実測値 294.04851。Ｃ₁₂Ｈ₁₀Ｎ₂Ｏ₇としての計算値：Ｃ，49.0；Ｈ ，3.4；Ｎ，9.5。実測値：Ｃ，49.1；Ｈ，3.4；Ｎ，9.6％。 (d)3,3- ジ（メトキシカルボニル）-6- ニトロインドリン THF （350 mL）中の3,3-ジ（メトキシカルボニル）-6- ニトロ-2- インドロン （10.38g，35.2 mmol ）の懸濁液に窒素下でボラン−ジメチルスルフィド（6.35 mL，63 mmol）を添加し、混合物を還流下で 1時間撹拌した。薄黄色の溶液を冷 却し、MeＯＨ（10 mL ）、次にＨ₂Ｏ（10 mL）、次に水性ＨＣｌ（2 N ，50 mL ）を添加し、その後混合物を20℃で２，３分撹拌した。THF を蒸発させ、水性残 渣をEtＯAc（×2 ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させ、生 成したオレンジ色の固体を20℃でＣＨ₂Ｃｌ₂（2×100 mL）とともに摩砕し、大 部分の3-（メトキシカルボニル）-6- ニトロインドール不純物を除去するために 濾過した。ＣＨ₂Ｃｌ₂溶液をシリカの短いカラムを通して濾過し、さらにＣＨ₂ Ｃｌ₂を加えて溶出させ、溶媒を蒸発させ、生成した黄色固体をMeＯＨから再結 晶させ、黄色結晶固体として表記の化合物（5.11 g，52％），mp 139.5-140.5℃ が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 7.64（dd，J＝8.3，2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ- 5），7.56（d，J＝8.3 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），7.41（d，J＝2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-7）， 4.24（d，J＝1.9 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂），4.16（br s，1Ｈ，ＮＨ），3.82（ s ，6Ｈ，ＣＯ₂Me）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 168.7（ＣＯ₂Me），151.7，149.8，130. 8（Ｃ-6,8,9），127.2，114.2，104.2（Ｃ-4,5,7），62.7（Ｃ-3），54.1（Ｃ- 2），53.6（ＯMe）；ＩＲ（ＫＢｒ） 3351（ＮＨ），1732（ＣＯ₂Me），1535（ ＮＯ₂），1351（ＮＯ₂），1279cm-1 。分析値．Ｃ₁₂Ｈ₁₂Ｎ₂Ｏ₆としての計算値 ：Ｃ，51.4；Ｈ，4.3；Ｎ，10.0。実測値：Ｃ，51.4；Ｈ，4.4；Ｎ，10.0％。 (e)1- （t-ブチルオキシカルボニル）-3,3- ジ（メトキシカルボニル）-6- ニ トロインドリン THF （100 mL）中の3,3-ジ（メトキシカルボニル）-6- ニトロインドリン（3. 04 g，10.8 mmol ）、ジ-t- ブチルジカーボネート（3.55 g，16.3 mmol ）およ び4-ジメチルアミノピリジン（70 mg，0.5 mmol）の溶液を20℃で 2時間撹拌し 、その後還流下で10分（tlc 分析が完全変換を示すまで）撹拌した。THF を蒸発 させ、残渣をEtＯAc／石油エーテル（1：4）で溶出させた無水カラムクロマトグ ラフィーによって精製し、薄黄色の発泡体（4.10 g，99％）が得られた。サンプ ルをMeＯＨから結晶化させ、非常に薄い黄色の針状物、mp 131.5-132.5℃が得ら れた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.70，8.34（2×br s，1Ｈ，Ｈ-7），7.89（d d，J＝8.5，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.66（d，J＝8.5 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），4.59（ s，2Ｈ，ＮＣＨ₂），3.83（s，6Ｈ，ＣＯ₂Me），1.60（s，9Ｈ，t-Bu）；13Ｃ Ｎ ＭＲ δ 168.1（ＣＯ₂Me），151.2，149.7（Ｃ-6,8,9，ＮＣＯ₂，2つのピーク は観測されなかった），127.4，117.6，110.0（Ｃ-4,5,7），82.5（ＯＣMe₃）， 61（br，Ｃ-3），54.6（Ｃ-2），53.9（ＯMe），28.3（Ｃ(ＣＨ₃)₃）。分析値． Ｃ₁₇Ｈ₂₀Ｎ₂Ｏ₈としての計算値：Ｃ，53.7；Ｈ，5.3；Ｎ，7.4。実測値：Ｃ，53 .6；Ｈ，5.4；Ｎ，7.5％。 (f)1- （t-ブチルオキシカルボニル）-3- （メトキシカルボニル）-6- ニトロ インドリン THF （100 mL）中の1-（t-ブチルオキシカルボニル）-3,3- ジ（メトキシカル ボニル）-6- ニトロインドリン（2.11 g，5.55 mmol ）溶液にＮａＯMe（MeＯＨ 中の 1.28 M 溶液 4.8 mL，6.1 mmol）を窒素下で20℃で滴下し、即時に強い紫 色を得た。 5分後、トリフルオロ酢酸（0.51 mL，6.7 mmol）を一度に添加し、 ニトロネート色を消失させた。薄黄色溶液を水性ＮａＣｌで希釈し、EtＯAcで抽 出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させ、薄い黄色油状の粗表記化合物 を得た。この化合物は室温に保つと空気酸化する徴候があったので、それ以上は 精製しないで、このまま次の段階で使用した。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.67 ，8.34（2×br s，1Ｈ，Ｈ-7），7.85（dd，J＝8.2，2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.4 9（d，J−8.2 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），4.48（dd，J＝10.5，5.4 Hz，1Ｈ，ＮＣＨ₂Ｃ Ｈ），4.28（dd，J＝10.5，5.3 Hz，1Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨ），4.22（t，J＝10.6Hz ，1Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨ），3.82（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me），1.60（s，9Ｈ，t-Bu）；13 Ｃ ＮＭＲ δ 170.5（ＣＯ₂Me），151.6，149.1（Ｃ-6,8,9，ＮＣＯ₂， 2つ のピークは観測されなかった），125.5，117.7，109.9（Ｃ-4,5,7），（ＯＣMe₃ ，ピークは観測されなかった），53.1（ＯMe），50.3（Ｃ-2），44.4（Ｃ-3）,2 8.3 （Ｃ(ＣＨ₃)₃）。HRMSＣ₁₅Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₆としての計算値：322.11649。実測値 ：322.11627。 (g)1- （t-ブチルオキシカルボニル）-3- （ヒドロキシメチル）-6- ニトロイ ンドリン THF （100 mL）中のジイソブチルアルミニウムハイドライド（トルエン中の 1 M溶液 22.2 mL，22.2 mmol ）溶液に、THF （80 mL ）に溶解した上記操作によ って得られた粗モノエステルを窒素下で 0℃で30分間で滴下した。この橙黄色の 溶液をこの温度で25分撹拌し、その後氷冷水性ＨＣｌ（2 N，100 mL）中に注ぎ 入れ、EtＯAc（×2 ）で抽出した。抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させ、 残渣をEtＯAc／石油エーテル（1：1）で溶出させた無水カラムクロマトグラフィ ーによって精製し、橙黄色の固体（1.30 g，ジエステルから80％）が得られた。 サンプルをベンゼンから再結晶化させ、黄色の結晶固体、mp 168.5-169℃が得ら れた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.64，8.31（2×br s，1Ｈ，Ｈ-7），7.83（d d，J＝8.2，2.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.34（d，J＝8.2 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），4.16（ dd，J−11.4，10.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），3.96（dd，J＝11.4，5.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-3 ），3.84（d，J＝6.2Hz，2Ｈ，ＣＨ₂ＯＨ），3.62-3.54（m，1Ｈ，Ｈ-3），1.91 （br s，1Ｈ，ＯＨ），1.59（s，9Ｈ，t-Bu）；13Ｃ ＮＭＲ δ 152.0，148. 6，144（br），139（br）（Ｃ-6,8,9，ＮＣＯ₂），124.6，117.7，109.7（Ｃ-4 ，5,7），82（br，ＯＣMe₃），64.8（ＣＨ₂ＯＨ），51.3（Ｃ-2），41.8（Ｃ-3 ），28.3 （Ｃ(ＣＨ₃)₃）。分析値．Ｃ₁₄Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₅としての計算値：Ｃ，57.1 ；Ｈ，6.2；Ｎ，9.5。実測値：Ｃ，57.2；Ｈ，6.2；Ｎ，9.5％。 (h)1- （t-ブチルオキシカルボニル）-3- （クロロメチル）-6- ニトロインド リン ＣＨ₂Ｃｌ₂（70 mL）中の1-（t-ブチルオキシカルボニル）-3- （ヒドロキシ メチル）-6- ニトロインドリン（1.21 g，4.11 mmol ）およびEt₃Ｎ（1.15 mL， 8.2 mmol）溶液に、メタンスルホニルクロライド（0.57 mL，7.4 mmol）を 0℃ で滴下し、この薄黄色の溶液を 5分撹拌した。水を添加して、混合物をＣＨ₂Ｃ ｌ₂（×2）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。粗メシレー トをＬｉＣｌ（0.70 g，16 mmol ）とともに DMF（10 mL ）に溶解し、混合物を 窒素下、80℃で 1時間撹拌した。DMF を蒸発させ、残渣を EtＯAcおよび水に溶 解し、再度 EtＯAcで抽出し、有機抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた 。EtＯAc／石油エーテル（1：9）で溶出させた無水カラムクロマトグラフィーに よって、薄黄色の発泡体の表記の化合物（1.12 g，87％）が得られた。サンプル をベンゼン−石油エーテルから結晶化させ、黄色の結晶固体、mp 111-111.5℃が 得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 8.67，8.34（2×br s，1Ｈ，Ｈ-7），7.8 6（dd，J＝8.2，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.35（d，J＝8.2 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），4. 2 2（dd，J＝11.6，9.6 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.04-3.97（m，1Ｈ，Ｈ-2），3.82-3.7 4（m，2Ｈ，ＣＨＨＣｌ，Ｈ-3），3.68-3.62（m，1Ｈ，ＣＨＨＣｌ），1.60（s ，9Ｈ，t-Bu）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 151.8，149.0，144（br），138（br）（Ｃ- 6，8,9，ＮＣＯ₂），124.6，117.8，110.0（Ｃ-4,5,7），82.0（ＯＣMe₃），52. 4（Ｃ-2），46.3（ＣＨ₂Ｃｌ），41.7（Ｃ-3），28.4（Ｃ(ＣＨ₃)₃）。分析値． Ｃ₁₄Ｈ₁₈ＣｌＮ₂Ｏ₄としての計算値：Ｃ，53.8；Ｈ，5.5；Ｎ，11.3；Ｃｌ，11. 3。実測値：Ｃ，54.0；Ｈ，5.5；Ｎ，9.1；Ｃｌ，11.5％。 (i)3- （クロロメチル）-6- ニトロ-1-［(5',6',7'-トリメトキシインドール-2 '-イル）カルボニル］インドリン ＨＣｌ飽和EtＯAc（8 mL）中で1-（t-ブチルオキシカルボニル）-3- （クロロ メチル）-6- ニトロインドリン（134 mg，0.43 mmol ）を20℃で 2.5時間（tlc が反応の終了を示すまで）撹拌し、混合物を蒸発させた。DMF（5 mL）中の1-（3 -ジメチルアミノプロピル）-3- エチルカルボジイミドハイドロクロライド（EDC I，0.25 g，1.29 mmol ）および 5,6,7- トリメトキシインドール-2- カルボン 酸（108 mg，0.43 mmol ）を添加し、混合物を20℃で撹拌した。10分間でオレン ジ色が褪色して明黄茶色の溶液になった。2 時間後、DMF を蒸発させ、残渣を E tＯAcおよび水に溶解し、再度 EtＯAcで抽出し、有機抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄ ）し、蒸発させた。EtＯAcから橙黄色の固体を再結晶化して、黄色の結晶固体の 表記の化合物（96 mg，50％），mp 187-188℃が得られた。母液をEtＯAc／石油 エーテル（1：2）で溶出させた無水カラムクロマトグラフィーによって精製し、 第 2クロップの生成物（46 mg，合計収率74％）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣ ｌ₃）δ 9.48（s，1Ｈ，ＮＨ），9.08（d，J＝2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-7），7.92（dd ，J＝8.2，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.38（d，J＝8.6 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），6.94（d ，J＝2.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'），6.81（s，1Ｈ，Ｈ-4'），4.73（dd，J＝10.5，9.6 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.52（dd，J＝10.5，5.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.07（s，3Ｈ， ＯＣＨ₃），4.02-3.95（m，1Ｈ，Ｈ-3），3.95（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.89（s， 3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.87（dd，J＝11.2，4.7 Hz，1Ｈ，ＣＨＨＣｌ），3.71（dd， J＝11.2，8.1 Hz，1Ｈ，ＣＨＨＣｌ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 160.4 （ＮＣＯ）， 150.3，148.7，144.7，140.7，138.8，137.7，128.8，125.8，123.5（Ｃ-6,8,9, 2',5',6',7',8',9'），124.2，119.5，112.9，106.9，97.5（Ｃ-4,5,7,3',4'） ，61.4，61.1，56.2（3×ＯＣＨ₃），54.3（Ｃ-2），46.1（ＣＨ₂Ｃｌ），43.2 （Ｃ-3）。分析値．Ｃ₂₁Ｈ₂₀ＣｌＮ₃Ｏ₆としての計算値：Ｃ，56.6；Ｈ，4.5； Ｎ，9.4；Ｃｌ，8.0 。実測値：Ｃ，54.8；Ｈ，4.5；Ｎ，9.3；Ｃｌ，8.1％。 (j)6- アミノ-3- （クロロメチル）-1-［(5',6',7'-トリメトキシインドール-2 '- イル）カルボニル］インドリン THF （8 mL）中の3-（クロロメチル）-6- ニトロ-1-［(5',6',7'-トリメトキ シインドール- 2'- イル）カルボニル］インドリン（57 mg，0.13 mmol）溶液を ptＯ₂（25 mg）とともに 45 psi 、20分間20℃で水素化し、セライトを通して濾 過し、蒸発させた。EtＯAc／石油エーテル（1：1）で溶出させた無水カラムクロ マトグラフィーによって、上記の実施例 1で調製された物質と同一（tlc，¹ＨＮ ＭＲ）の本発明の表記の化合物（53 mg，100％）が得られた。 実施例 3：3-（クロロメチル）-6-［（4"-ニトロベンジルオキシカルボニル） アミノ］-1-［(5',6',7'-トリメトキシインドール- 2'- イル）カルボニル］イ ンドリン THF （4 mL）中の 1（30 mg，0.07 mmol）の溶液に、4-ニトロベンジルクロロ ホルメート（27 mg，1.7 mmol）を 0℃で添加し、混合物をこの温度で30分撹拌 した。水を添加し、混合物を EtＯAc（×2）で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂Ｓ Ｏ₄）し、蒸発させた。EtＯAc／石油エーテル（1：1）で溶出させたフラッシュ クロマトグラフィーによって、薄黄色の粉末として表記の化合物（33 mg，77％ ）mp（ＣＨＣｌ₃からEt2Ｏとともに摩砕して）199-200℃，が得られた。¹ＨＮＭ Ｒ［(ＣＤ3)2ＳＯ］δ 11.43（s，1Ｈ，インドールＮＨ），9.97（s，１Ｈ，カ ルバメートＮＨ），8.35（br s，1Ｈ，Ｈ-7），8.28（br d，J＝8. Hz，2Ｈ， Ｈ-3"，5"），7.70（br d，J＝8.8 Hz，2Ｈ，Ｈ-2"，6"），7.34（d ，J＝8.2 H z，1Ｈ，Ｈ-4），7.24（dd，J＝8.2 ，1.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.02（d ，J＝2.0 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'），6.96（s，1Ｈ，Ｈ-4'），5.30（s，2Ｈ，ＯＣＨ₂Ar），4.6 3（dd，J＝10.8，8.7 Hz，1Ｈ，ＮＣＨＨ），4.28（dd，J＝10.8，4.5 Hz，1Ｈ ，ＮＣＨＨ），4.02-3.95（m，1Ｈ，ＣＨＨＣｌ），3.92（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃）， 3.86-3.76（m，2Ｈ，ＣＨＣＨＨＣｌ），3.81（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.79（s，3 Ｈ， ＯＣＨ₃）。分析値．Ｃ₂₉Ｈ₂₇ＣｌＮ₄Ｏ₈としての計算値：Ｃ，58.5；Ｈ，4.6； Ｎ，9.4。実測値：Ｃ，58.4；Ｈ，4.3；Ｎ，13.7％。 実施例 4：2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボ ニル］-N-［2-（2-ピリジニル）エチル］インドール-6- カルボキサミドハイド ロクロライド ＮａＯMe溶液（MeＯＨ中 3.3 M溶液 60 mL，197 mmol）に氷−塩浴中で冷却し ながら、窒素下で、無水Me０Ｈ（200 mL）中のt-ブチル 4- ホルミルベンゾエー ト（8.52 g，41 mmol ）およびメチルアジドアセテート［M.S.Allen，L.K.Hamak er，A.J.La Loggia，J.M.Cook,Synth.Commun.,1992,22,2077-2102］（28.5 g，2 48 mmol）の溶液を 1時間で滴下した。黄色の懸濁液をさらに 0℃で 1時間撹拌 し、 4℃で15時間置き、その後水で希釈し、固体を濾別し、暗所で乾燥した。無 水キシレン（400 mL）中のこの粗アジドシンナメート（8.76 g，29 mmol ）の溶 液を窒素下で還流しながらキシレン（100 mL）に 2時間で滴下し、溶液を還流下 でさらに 1時間撹拌し、その後冷却して蒸発させた。MeＯＨから再結晶化させて 、白色固体のt-ブチル 2- （メトキシカルボニル）インドール-6- カルボキシレ ート（4.72 g，42％），mp 189-190.5℃，が得られた。¹ＨＮＭＲ〔(ＣＤ₃)₂Ｓ Ｏ〕δ 12.26（s ，1Ｈ，ＮＨ），8.08（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.73（d， J＝8.4 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），7.61（dd，J＝8.4，1.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.21（d ，J＝1.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），3.89（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me），1.56（s，9 Ｈ，ＣＯ₂tBu）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 165.5（ＣＯ₂tBu），161.4（ＣＯ₂Me），1 36.5，130.0，129.9，127.3（Ｃ-2,6,8,9），121.9，120.3，114.4，107.5（Ｃ- 3,4,5,7），80.4（ＯＣMe₃），52.1（ＯＣＨ₃），27.8（tBu）。分析値（Ｃ₁₅Ｈ₁₇ ＮＯ₄） Ｃ，Ｈ，Ｎ。 t-ブチル 2- （メトキシカルボニル）インドール-6- カルボキシレート（4.74 g，17.2 mmol ）をギ酸（35 mL ）中、80℃で20分撹拌し、冷却し、水で希釈し 、固体を濾別して乾燥し、白色固体として2-（メトキシカルボニル）インドール -6- カルボン酸（3.78 g，100％），mp 270.5-271.5℃を得た。¹ＨＮＭＲ［(Ｃ Ｄ₃)₂ＳＯ］δ 12.80（br s，1Ｈ，ＣＯ₂Ｈ），12.31（s，1Ｈ，ＮＨ），8.13（ s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.75（d，J=8.4 Hz，１Ｈ，Ｈ-4），7.66（dd，J＝ 8. 4，1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.23（dd，J＝2.0，0.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7） ，3.91（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 167.8（ＣＯ₂Ｈ），161.4（Ｃ Ｏ₂Me），136.5，129.8，129.7，126.6（Ｃ-2,6,8,9），121.9，120.6，114.7， 107.5（Ｃ-3,4,5,7），52.0（ＯＣＨ₃）。分析値（Ｃ₁₁Ｈ₉ＮＯ₄）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 THF （20 mL ）中の2-（メトキシカルボニル）インドール-6- カルボン酸（29 0 mg，1.32mmol）および1,1'-カルボニルジイミダゾール（257 mg，1.59 mmol） を還流下で 1時間撹拌し、その後冷却し、蒸発させた。DMF （5 mL）中の2-（2- アミノエチル）ピリジン（0.19 mL，1.6 mmol）を添加し、混合物を80℃で 2時 間撹拌し、その後冷却し、蒸発させた。熱EtＯAcとともに摩砕して、白色固体の 2-（メトキシカルボニル）-N-［2-（2-ピリジニル）エチル］インドール-6-カル ボキサミド（360 mg，84％），mp191-193℃を得た。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］ δ 12.24（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），8.61（t，J＝5.5 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ ），8.54-8.50（m，1Ｈ，Ｈ-6'），7.97（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.71（td ，J＝7.6，1.8 Hz，１Ｈ，Ｈ-4'），7.70（d，J＝8.6 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.55（ dd，J＝8.6，1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.29（d，J＝7.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'），7.23 （ddd，J＝7.4，4.8，0.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-5'），7.20（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7） ，3.90（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me），3.64（q，J＝6.8 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ｐｙ） ，3.03（t，J＝7.4 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ｐｙ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.6 （ＣＯＮＨ），161.5（ＣＯ₂Me），159.2（Ｃ-2'），136.7，131.0，129.1，128 .5（Ｃ-2,6,8,9），149.0，136.4，123.1，121.6，121.4，118.9，112.2，107.5 （Ｃ-3,4,5,7,3',4',5',6'），51.9（ＯＣＨ₃），39.3，37.3（ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ ｐｙ）。分析値（Ｃ₁₈Ｈ₁₇Ｎ₃Ｏ₃） Ｃ，Ｈ，Ｎ。 THF（20 mL）およびＨ₂Ｏ（3 mL）中の2-（メトキシカルボニル）-N-［2-（2- ピリジニル）エチル］インドール-6- カルボキサミド（326 mg，1.01 mmol）お よびＫＯＨ（68 mg，1.21 mmol）を20℃で15時間、その後65℃で 3時間撹拌し、 冷却して、2N ＨＣｌ（0.61 mL，1.2 mmol）で中和した。THF を蒸発させ、水性 残渣を冷却し、固体を濾別して乾燥し、白色固体のの2-カルボキシ-N-［2-（2- ピリジニル）エチル］インドール-6- カルボキサミド（258 mg，83％），mp 198 -199℃を得た。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 13.14（br s，1Ｈ，ＣＯ₃Ｈ），1 2.07（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），8.59（t，J＝5.6 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ）， 8.54-8.51（m，1Ｈ，Ｈ-6'），7.95（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.71（td，J ＝7.7，1.7 Hz，１Ｈ，Ｈ-4'），7.68（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.53（dd ，J＝8.5，1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.29（d，J＝7.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'），7.23（d dd，J＝7.4，4.7，0.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-5'），7.13（d，J＝1.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-3また はＨ-7），3.64（q，J＝6.8 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ｐｙ），3.02（t，J ＝7. 4 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ｐｙ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.7（ＣＯＮＨ），16 2.5（ＣＯ₂Ｈ），159.2（Ｃ-2'），136.5，130.6，130.5，128.7（Ｃ-2,6,8,9） ，149.0，136.4，123.1，121.4，118.7，112.2，107.0 （1 ピークが重複してい るかまたは観測されなかった。Ｃ-3,4,5,7,3',4',5',6'），39.3，37.3（ＮＨＣ Ｈ₂ＣＨ₂ｐｙ）。分析値（Ｃ₁₇Ｈ₁₅Ｎ₃Ｏ₃）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 1-（t-ブトキシカルボニル）-3- （クロロメチル）-6- ニトロインドリン（24 8 mg，0.79 mmol ）をＨＣｌ−飽和ジオキサン（8 mL）中で20℃で40分（tlc が 反応の終了を示すまで）撹拌し、混合物を蒸発させた。DMF （20 mL ）中の1-（ 3-ジメチルアミノプロピル）-3- エチルカルボジイミドハイドロクロライド（0. 30 g，1.58 mmol ）および2-カルボキシ-N-［2-（2-ピリジニル）エチル］イン ドール-6- カルボキサミド（245 mg，0.79 mmol ）を添加し、オレンジ色の溶液 を20℃で撹拌した。24時間後、DMF を蒸発させ、残渣をEtＯAcおよび水性ＮａＨ ＣＯ₃とともに摩砕した。固体を濾別し、MeＯＨから再結晶化して、黄色固体と して2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N -［2-（2-ピリジニル）エチル］インドール-6- カルボキサミド（267 mg，67％ ），mp 204-207℃が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12.15（s ，1Ｈ， インドールＮＨ），8.99（d，J＝2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-7），8.61（t，J＝5.5 Hz，1 Ｈ，アミドＮＨ），8.55-8.52（m，1Ｈ，Ｈ-6"），8.04（dd，J＝8.3，2.3Hz，1 Ｈ，Ｈ-5），8.02（s，１Ｈ，Ｈ-3'またはＨ-7'），7.75（d，Ｊ＝8.6 Hz，1Ｈ ，Ｈ-4またはＨ-4'），7.74（d，Ｊ＝8.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-4またはＨ-4'），7.71（ dd，J＝7.6，1.9 Hz，1Ｈ，Ｈ-4"），7.56（dd，J＝8.5，1.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-5'） ，7.31（d，J＝7.7 Hz，1Ｈ，Ｈ-3"），7.28（d，J＝1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'または Ｈ-7'），7.23（ddd，J＝7.2，4.9，0.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-5"），4.86（t，J ＝10.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.51（dd，J＝10.7，5.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.19-4.0 6 （m，3Ｈ，Ｈ-3およびＣＨ₂Ｃｌ），3.66（q，J＝6.7 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂Ｃ Ｈ₂ｐｙ），3.04（t，J＝7.4 Hz，2Ｈ，ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ｐｙ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.7（ＣＯＮＨ），160.4（ＣＯＮ），159.2（Ｃ-2"），147.6，144.6，13 9.9，135.7，131.8，130.8，128.9（Ｃ-6,8,9,2',6',8',9'），149.0，136.4，1 23.1，121.4（Ｃ-3",4",5",6"），125.5，121.6，119.4，118.8，112.0，111.2 ，106.1（Ｃ-4,5,7,3',4',5',7'），54.0（Ｃ-2），47.0（ＣＨ₂Ｃｌ），42.0（ Ｃ-3），39.3，37.3（ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ｐｙ）。サンプルをハイドロクロライド塩 に変換し、熱EtＯAcとともに摩砕して、薄黄色の粉末として2-［［3-（クロロメ チル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N-［2-（2-ピリジニル） エチル］インドール-6- カルボキサミドハイドロクロライド、mp 250-255℃（分 解）が得られた。分析値（Ｃ₂₆Ｈ₂₂ＣｌＮ₅Ｏ₄．0.25ＨＣｌ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 実施例 5：2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボ ニル］-N-［2-（4-モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミドハイ ドロクロライドの調製 2-（メトキシカルボニル）インドール-6- カルボン酸を上記の方法によって4- （2-アミノエチル）- モルホリンに連結させて、白色粉末の2-（メトキシカルボ ニル）-N-［2-（4-モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミド（78 ％），mp 226-227.5℃（MeＯＨ）が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12 .24（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），8.42（t，J＝5.6 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），7 .97（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.71（d，J＝8.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.56（dd ，J＝8.4，1.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.20（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），3.90（s， 3Ｈ，ＣＯ₂Me），3.58（t，J＝4.6 Hz，4Ｈ，ＣＨ₂Ｏ），3.41（q，J＝6.5 Hz， 2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂），2.48（t，J＝7.0 Hz，2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂），2.4 2（t，J＝4.1 Hz，4Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.6（ＣＯＮ Ｈ），161.5（ＣＯ₂Me），136.7，131.0，129.1，128.5（Ｃ-2,6,8,9），121.6 ，118.9，112.3，107.5（Ｃ-3,4,5,7），66.2（ＣＨ₂Ｏ），57.3，53.2（ＣＨ₂ Ｎ），51.9（ＯＣＨ₃），36.6（ＮＨＣＨ₂）。分析値（Ｃ₁₇Ｈ₂₁Ｎ₃Ｏ₄）Ｃ，Ｈ ，Ｎ。 2-（メトキシカルボニル）-N-［2-（4-モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミドを上記の方法によって加水分解し、白色固体の2-カルボキシ-N- ［2-（4-モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミド（83％），mp 2 27-233℃が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12.03（s ，1Ｈ，インドー ルＮＨ），8.42（t，J＝5.6 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），7.96（s，1Ｈ，Ｈ-3また はＨ-7），7.68（d，J＝8.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.54（dd，J＝8.4，1.3 Hz，1Ｈ ，Ｈ-5），7.10（d，J−1.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），3.60（t，J＝4.6 Hz ，4Ｈ，ＣＨ₂Ｏ），3.42（q，J＝6.5 Hz，2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂），2.53（t，J＝ 6.9 Hz，2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂），2.50-2.45（m，4Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；¹³ Ｃ ＮＭＲ δ 166.8（ＣＯＮＨ），162.7（ＣＯ₂Ｈ），136.5，131.1，130 .4，128.7（Ｃ-2,6,8,9），121.4，118.6，112.2，106.8（Ｃ-3,4,5,7），66.0 （ＣＨ₂Ｏ），57.3，53.1（ＣＨ₂Ｎ）36.4（ＮＨＣＨ₂）。HRMS（DEI）Ｃ₁₆Ｈ₁₉ Ｎ₃Ｏ₄としての計算値 317.13756。実測値 317.13693。 上記の方法によって、1-（t-ブトキシカルボニル）-3- （クロロメチル）-6- ニトロインドリンを2-カルボキシ-N-［2-（4-モルホリニル）エチル］インドー ル-6- カルボキサミドに連結させ、熱MeＯＨとともに摩砕して、黄色固体の2-［ ［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N-［2-（4 -モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミド（50％），mp 227-228 ℃（分解）が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12.15（s ，1Ｈ，インド ールＮＨ），8.98（d，J＝2.0 Hz，1Ｈ，Ｈ-7），8.41（t，J=5.5 Hz，1Ｈ，ア ミドＮＨ），8.04（dd，J＝8.3，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5)，8.01（s，1Ｈ，Ｈ-3'ま たはＨ-7'），7.76（d，J＝8.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-4またはＨ-4'），7.74（d，J＝8.0 Hz，1Ｈ，Ｈ-4またはＨ-4'），7.57（dd，J＝8.5，1.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-5’），7. 28（d，J＝1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'またはＨ-7'），4.86（t，J＝10.1 Hz，1Ｈ，Ｈ- 2），4.51（dd，J＝10.7，5.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.19-4.06（m，3Ｈ，Ｈ-3およ びＣＨ₂Ｃｌ），3.59（t，J＝4.5 Hz，4Ｈ，ＣＨ₂Ｏ），3.42（q，J＝6.5 Hz，2 Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂），2.50（t，J＝6.9 Hz，2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂），2.46 -2.41（m，4Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.7（ＣＯＮＨ），16 0.4（ＣＯＮ），147.6，144.6，144.0，135.7，131.8，130.8，129.0（Ｃ-6,8,9 , 2',6',8',9'），125.5，121.6，119.5，118.9，112.0，111.2，106.1（Ｃ-4,5,7 ,3',4',5',7'），66.2（ＣＨ₂Ｏ），57.4（ＣＯＮＨＣＨ₂ＣＨ₂），54.0（Ｃ-2 ），53.3（ＮＣＨ₂ＣＨ₂Ｏ），47.0（ＣＨ₂Ｃｌ），42.0（Ｃ-3），36.6（ＣＯ ＮＨＣＨ₂）。サンプルをハイドロクロライド塩に変換し、熱EtＯＨとともに摩 砕して薄黄色粉末の2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］ カルボニル］-N-［2-（4-モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミ ドハイドロクロライド、mp 280-285℃（分解）が得られた。分析値（Ｃ₂₅Ｈ₂₆Ｃ ｌＮ₅Ｏ₅．ＨＣｌ．Ｈ₂Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 実施例 6：2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボ ニル］-N-（1,3-ジヒドロキシ-2-プロピル）インドール-6- カルボキサミドの調 製 上記の方法によって、2-（メトキシカルボニル）インドール-6- カルボン酸を 2-アミノ-1,3- ビス（t-ブチルジメチルシリル）-1,3- プロパンジオールに連結 させ、生成物を（1：4のEtＯAc：石油エーテルで溶出させる）無水カラムクロマ トグラフィーによって精製して、薄黄色の発泡体のN-［1,3-ビス（t-ブチルジメ チルシリルオキシ）-2- プロピル］-2- （メトキシカルボニル）インドール-6- カルボキサミド（87％）が得られた。熱石油エーテルとともに摩砕して、白色針 状物、mp 127-129℃が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 9.24（s ，1Ｈ，イ ンドールＮＨ），8.03（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.72（d，J＝8.3 Hz，1 Ｈ ，Ｈ-4），7.43（dd，J＝8.3，1.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.24（dd，J＝1.9，0.8 H z，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），6.64（d，J＝8.3 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），4.26-4. 18（m，1Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ），3.97（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me），3.90（dd，J＝9.6，3 .5 Hz，2Ｈ，ＣＨ₂Ｏ），3.67（dd，J＝9.6，6.4 Hz，2Ｈ，ＣＨ₂Ｏ），0.92（s ，18Ｈ，^tBu），0.10（s，6Ｈ，ＳｉMe），0.09（s，6Ｈ，ＳｉMe）；¹³Ｃ Ｎ ＭＲ δ 167.0（ＣＯＮＨ），162.0（ＣＯ₂Me），136.4，131.5，129.6，129. 4（Ｃ-2,6,8,9），122.6，118.5，112.1，108.5（Ｃ-3,4,5,7），60.4（ＣＨ₂Ｏ ），52.2，51.9（ＣＯＮＨＣＨ，ＯＣＨ₃），25.9（t-Bu），18.2（ＳｉＣMe₃） ，-5.4，-5.5（ＳｉMe₂）。分析値 （Ｃ₂₆Ｈ₄₄Ｎ₂Ｏ₅Ｓｉ₂）（^*ＣＲＬ 7726 c oming）。 THF （20 mL）中のN-［1,3-ビス（t-ブチルジメチルシリルオキシ）-2- プロ ピル］-2- （メトキシカルボニル）インドール-6- カルボキサミド（744 mg，1. 43 mmol ）およびテトラブチルアンモニウムフルオライド（THF 中 1 M溶液 2.9 mL，2.9 mmol）を20℃で80分撹拌し、蒸発させた。残渣をMeＯＨ（10 mL ）か ら結晶化し、白色固体のN-［1,3-（ジヒドロキシ-2- プロピル）-2- （メトキシ カルボニル）インドール-6- カルボキサミド（305 mg，73％），mp 205-207℃が 得られた。母液の無水カラムクロマトグラフィー（20：1 のEtＯAc：MeＯＨで溶 出させた）によって第 2クロップ（57 mg，14％）が得られた。¹ＨＮＭＲ［( Ｃ Ｄ₃)₂ＳＯ］δ 12.22（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），7.97（s，1Ｈ，Ｈ-3または Ｈ-7），7.94（d，J＝8.0 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），7.70（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ， Ｈ-4），7.59（dd，J＝8.5 ，1.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.20（d，J＝1.6 Hz，1Ｈ ，Ｈ-3またはＨ-7），4.66（t，J＝5.7 Hz，2Ｈ，ＯＨ），4.03-3.95（m，1Ｈ， ＣＯＮＨＣＨ），3.90（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me），3.54（t，J＝5.8 Hz，4Ｈ，ＣＨ₂ ＯＨ）。分析値 （Ｃ₁₄Ｈ₁₆Ｎ₂Ｏ₅）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 N-（1,3-ジヒドロキシ-2- プロピル）-2- （メトキシカルボニル）インドール -6- カルボキサミドを上記の方法によって加水分解し、白色固体(97 ％)の2-カ ルボキシ-N-（1,3-ジヒドロキシ-2- プロピル）インドール-6- カルボキサミド 、mp 240-245℃が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］ δ 13.11（br s，1Ｈ ，ＣＯ₂Ｈ），12.05（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），7.98（s，1Ｈ，Ｈ-3または Ｈ-7），7.92（d，J＝7.9 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），7.70（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ， Ｈ-4），7.58（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.14（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7） ，4.4（br s，2Ｈ，ＯＨ），4.08-3.92 （m，1Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ），3.56（d，J ＝5.7 Hz，4Ｈ，ＣＨ₂ＯＨ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.8（ＣＯＮＨ），162.5（ ＣＯ₂Ｈ），136.5，130.8，130.5，128.6（Ｃ-2,6,8,9），121.3，118.9，112.4 ，107.0（Ｃ-3,4,5,7），60.4（ＣＨ₂ＯＨ），53.8（ＣＯＮＨＣＨ）。分析値 （Ｃ₁₃Ｈ₁₄Ｎ₂Ｏ₅）（^*ＣＲＬ 7729 coming）。 上記の方法によって、1-（t-ブトキシカルボニル）-3- （クロロメチル）-6- ニトロインドリンを2-カルボキシ-N-（1,3-ジヒドロキシ-2- プロピル）インド ール-6- カルボキサミドに連結し、EtＯAc層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させ て、残渣をEtＯＨから再結晶させて、クリーム色粉末の2-［［3-（クロロメチル ）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N- （1,3-ジヒドロキシ-2- プ ロピル）インドール-6- カルボキサミド（29％），mp 230-231℃（分解）が得ら れた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］ δ 12.13（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），8. 98（d，J＝2.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-7），8.05（dd，J＝8.3，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），8. 04（s，1Ｈ，Ｈ-3'またはＨ-7'），7.95（d,J＝8.0 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），7. 76（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-4'），7.75（d，J＝8.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.61（d d，J＝8.5，1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-5'），7.29（d，J＝1.6 Hz，1Ｈ，Ｈ-3’または Ｈ-7'），4.87（t，J＝10.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.70（t，J＝5.7 Hz，2Ｈ，ＯＨ ），4.51（dd，J＝10.7 ,5.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.19-4.06（m，3Ｈ，Ｈ-3およ びＣＨ₂Ｃｌ），4.04-3.97 （m，1Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ），3.55（t，J＝5.7 Hz，4 Ｈ，ＣＨ₂ＯＨ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 166.8（ＣＯＮＨ），160.4（ＣＯＮ），1 47.6，144.6，139.9，135.7，131.8，131.0，128.9（Ｃ-6,8,9,2',6',8',9'）， 125.5，121.4，119.4，119.1，112.2，111.2，106.1（Ｃ-4,5,7,3',4',5',7'） ，60.4（ＣＨ₂ＯＨ），54.0（Ｃ-2），53.8（ＣＯＮＨＣＨ），47.0（ＣＨ₂Ｃｌ ），42.0（Ｃ-3）。分析値 （Ｃ₂₂Ｈ₂₁ＣｌＮ₄Ｏ₆）。 実施例 7：N-（カルボキシメチル）-2- ［［3-（クロロメチル）-6- ニトロイ ンドリン-1- イル］カルボニル］インドール-6- カルボキサミドの調製 上記の方法によって、ＮａＨＣＯ₃（ 1当量）の存在下で2-（メトキシカルボ ニル）インドール-6- カルボン酸をグリシンt-ブチルエステルハイドロクロライ ドに連結させ、白色固体のN-［（ブトキシカルボニル）メチル］-2- （メトキシ カルボニル）インドール-6- カルボキサミド（86％），mp 181-183.5℃（EtＯＡ c）が得られた。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ 9.58（s ，1Ｈ，インドールＮＨ） ，8.06（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.68（d，J＝8.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.52 （dd，J−8.4，1.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.20（dd，J＝2.0，0.8 Hz，1Ｈ，Ｈ-3ま たはＨ-7），6.82（t，J＝4.7 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），4.20（d，J＝5.0 Hz，2 Ｈ，ＣＨ₂），3.96（s，3Ｈ，ＣＯ₂Me），1.51（s，9Ｈ，t-Bu）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 169.5，167.7，162.1（3×ＣＯ），136.4，130.6，129.7，129.5（Ｃ-2,6 ,8,9），122.5，118.8，112.3，108.4（Ｃ-3,4,5,7），82.6（ＯＣMe₃），52.2 （ＯＣＨ₃），42.7（ＣＯＮＨＣＨ₂），28.1（t-Bu）。分析値（Ｃ₁₇Ｈ₂₀Ｎ₂Ｏ₅ ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 THF （50 mL ）およびＨ₂Ｏ（15 mL）中のN-［（ブトキシカルボニル）メチル ］-2- （メトキシカルボニル）インドール-6- カルボキサミド（0.94 g，2.8 mm ol）およびＬｉＯＨ．Ｈ₂Ｏ（0.19 g，4.5 mmol）を20℃で15時間、その後65℃ で 7時間撹拌し、冷却し、THF を蒸発させた。EtＯAcを添加し、混合物を水性Ｎ ａＨＣＯ₃で抽出し、水性層を酸性化した。EtＯAcでの抽出によって、目的の生 成物および対応する二酸の混合物が得られた。（10：1 ＣＨＣｌ₃：EtＯＨで溶 出させた）無水カラムクロマトグラフィーによって、白色粉末のN-［（ブトキシ カルボニル）メチル］-2- カルボキシインドール-6- カルボキサミド（97 mg，1 1％），mp 267-268.5℃ が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 13.15（br s，1Ｈ，ＣＯ₂Ｈ），12.11（s ，1Ｈ，インドールＮＨ），8.82（t，J＝5.8Hz ，1Ｈ，アミドＮＨ），7.99（s，1Ｈ，Ｈ-3またはＨ-7），7.71（d，J＝8.5 Hz ，1Ｈ，Ｈ-4），7.56（dd，J＝8.5，1.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.13（s，1Ｈ，Ｈ-3 またはＨ-7），3.90（d，J＝5.8 Hz，2Ｈ，ＣＨ₂），1.43（s，9Ｈ，t-Bu）。 M S（DEI）m／z 318（30％，Ｍ⁺），188（100％）；HRMS Ｃ₁₆Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₅として の，計算値 318.12157、実測値 318.12136。 上記の方法によって、1-（t-ブトキシカルボニル）-3- （クロロメチル）-6- ニトロインドリンをN-［（ブトキシカルボニル）メチル］-2- カルボキシインド ール-6- カルボキサミドに連結して、生成物をEtＯAcから再結晶させ、黄色固体 のN-［（ブトキシカルボニル）メチル］-2- ［［3-（クロロメチル）-6- ニトロ インドリン-1- イル］カルボニル］インドール-6- カルボキサミド（69％），mp 286℃（分解）が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12.20（d ，J＝1.5 Hz，1Ｈ，インドールＮＨ），8.99（d ，J＝2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-7），8.50（t，J ＝6.0 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），8.06（s，1Ｈ，Ｈ-3'またはＨ-7'），8.05（dd ，J＝8.2，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.78（d，J＝8.5 Hz，1Ｈ，Ｈ-4'），7.75 （d，J＝8.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.60（dd，J＝8.5，1.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-5'），7.3 0（d，J＝1.6 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'またはＨ-7'），4.87（t，J＝10.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-2 ），4.51（dd，J＝10.7，5.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.19-4.08（m，3Ｈ，Ｈ-3およ びＣＨ₂ Ｃｌ），3.92（d，J＝5.9 Hz，2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂），1.44（s，9 Ｈ，t-Bu） ；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 169.1（ＣＯ₂tBu），167.1（ＣＯＮＨ），160.4（ＣＯＮ ），147.6，144.6，140.0，135.7，132.0，130.0，129.2（Ｃ-6,8,9,2',6',8',9 '），125.5，121.7，119.4，118.9，112.2，111.2，106.1（Ｃ-4,5,7,3',4',5', 7'），80.5（ＯＣMe₃），54.0（Ｃ-2），47.0（ＣＨ₂Ｃｌ），42.0（Ｃ-3），41 .9（ＣＨ₂ＣＯ₂tBu），27.7（t-Bu）。分析値 （Ｃ₂₂Ｈ₂₅ＣｌＮ₄Ｏ₆）Ｃ，Ｈ ，Ｎ。 ＨＣｌ−飽和ジオキサン（20 mL ）中のN-［（ブトキシカルボニル）メチル］ -2- ［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］イン ドール-6- カルボキサミド（70 mg，0.14 mmol）懸濁液を20℃で 2時間撹拌し、 ジオキサンの大部分を蒸発させ、残渣を熱EtＯAcとともに摩砕して、薄黄色粉末 のN-（カルボキシメチル）-2- ［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1 - イル］カルボニル］インドール-6- カルボキサミド（50 mg，80％），mp 281 ℃（分解）が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12.57（br s，1Ｈ，ＣＯ₂ Ｈ），12.20（d ，J＝1.3 Hz，1Ｈ，インドールＮＨ），8.99（d ，J＝2.2 Hz ，1Ｈ，Ｈ-7），8.84（t，J＝5.9 Hz，1Ｈ，アミドＮＨ），8.07（s，1Ｈ，Ｈ-3 'またはＨ-7'），8.05（dd，J＝8.3，2.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-5），7.79（d，J＝8.4 H z，1Ｈ，Ｈ-4'），7.75（d，J＝8.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-4），7.61（dd，J＝8.4，1.3 Hz，1Ｈ，Ｈ-5'），7.30（d，J＝1.9 Hz，1Ｈ，Ｈ-3'またはＨ-7'），4.87（t， J＝10.1 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.51（dd，J＝10.7，5.2 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.19-4. 08（m，3Ｈ，Ｈ-3およびＣＨ₂Ｃｌ），3.95（d，J＝5.8 Hz，2Ｈ，ＣＯＮＨＣＨ₂ ）。分析値（Ｃ₂₁Ｈ₁₇ＣｌＮ₄Ｏ₆）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 実施例 8：ジメチル2-（S，R）-［N-［3-（S，R）-（クロロメチル）-1-［（5 ',6',7'- トリメトキシインドール-2'-イル）カルボニル］インドリン-6- イル ］ウレイレン］ペンタンジカルボン酸の調製 無水 THF（8 mL）中の6-アミノ-3- （クロロメチル）-1-［（5',6',7'-トリメ トキシインドール-2'-イル）カルボニル］インドリン（228 mg，0.55 mmol ）の 撹拌溶液に、20℃で無水 THF（1 mL）中のジメチル(S)-2-イソシアネートペンタ ンジオエート（116 mg，0.58 mmol）［J.S.Nowick,N.A.Powell,T.M.Nguyen and G.Noronha,J.Org.Chem.,(1992),57,7364,の方法によって調製］を添加した。40 分後のTLC 分析は不完全な反応を示した。さらにTHF （1 mL）中のイソシアネー ト（0.33 g，1.6 mmol）を添加し、さらに20分後、Ｈ₂Ｏ（10 mL）の添加によっ て反応を停止させ、一晩撹拌した。THF を蒸発させ、水性残渣をEtＯAcで抽出し 、有機層を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。カラムクロマトグラフィー（3 ：1のEtＯAc：石油エーテルで溶出した）によって、(S)-グルタミン酸ジメチル エステルから誘導された尿素および目的のジメチル 2-（S）-［N-［3-（S，R ） -（クロロメチル）-1- ［（5',6',7'- トリメトキシインドール-2'-イル）カル ボニル］インドリン-6- イル］ウレイレン］ペンタンジオエート（約280 mg，約 80％）の薄黄色固体の混合物（¹ＨＮＭＲ）が得られた。 この混合物をMeＯＨ（20 mL）に溶解し、Ｈ₂Ｏ（5 mL）中のセシウムカルボネ ート（3.3 g，約 10 mmol）の溶液を添加し、黄色溶液を20℃で24時間撹拌した 。混合物をEtＯAcで洗浄し、水性層を酸性化（2 N ＨＣｌ）し、EtＯAc（×2） で抽出し、抽出物を乾燥（Ｎａ₂ＳＯ₄）し、蒸発させた。EtＯAc−MeＯＨから結 晶化し、灰白色粉末の 2-（S，R）-［N-［3-（S，R）-（クロロメチル）-1-［（ 5',6',7'- トリメトキシインドール-2'-イル）カルボニル］インドリン-6- イル ］ウレイレン］ペンタンジカルボン酸（108 mg，2段階で33％），mp 173-174℃ （分解）が得られた。¹ＨＮＭＲ［(ＣＤ₃)₂ＳＯ］δ 12.48（br s，2Ｈ，ＣＯ₂ Ｈ），11.42（d，J＝1.5 Hz，1Ｈ，インドールＮＨ），8.75（s ，1Ｈ，ＮＨ） ，8.13（s，1Ｈ，Ｈ-7），7.28（s，2Ｈ，Ｈ-4，5 ），7.01（d，J＝2.2Hz，1Ｈ ，Ｈ-3'），6.96（s，1Ｈ，Ｈ-4'），6.40（d，J＝8.0 Hz，1Ｈ，ＮＨ），4.61 （dd，J＝10.9，8.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-2），4.26（dd，J＝10.9，4.4 Hz，1Ｈ，Ｈ-2 ），4.26-4.18（m，1Ｈ，ＣＨＣＯ₂Ｈ），4.01-3.94（m，1Ｈ，ＣＨＣＨ₂Ｃｌ） ，3.93（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.84-3.78（m，2Ｈ，ＣＨＣＨ₂Ｃｌ），3.82（s， 3Ｈ，ＯＣＨ₃），3.79（s，3Ｈ，ＯＣＨ₃），2.38-2.22（m，2Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂Ｃ Ｏ₂Ｈ），2.06-1.97（m，1Ｈ，ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ），1.86-1.76（m，1Ｈ，ＣＨ₂ ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）；¹³Ｃ ＮＭＲ δ 173.9，173.6（2×ＣＯ₂Ｈ），160.1（ア ミドカルボニル），154.7，149.1，143.9，140.2，139.8，139.0，130.9，125.2 ，124.7，123.1（尿素カルボニル，Ｃ-6,8,9,2',5',6',7',8',9'），124.5， 113.1，106.8，105.9，98.0（Ｃ-4,5,7,3',4'），61.0，60.9，55.9（3×ＯＣＨ₃ ），54.3（Ｃ-2），51.5（ＣＨＣＯ₂Ｈ），47.7（ＣＨ₂Ｃｌ），41.8（Ｃ-3） ，29.9，27.2（ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＯ₂Ｈ）。分析値 （Ｃ₂₇Ｈ₂₉ＣｌＮ₄Ｏ₉．0.5Ｈ₂ Ｏ）Ｃ，Ｈ，Ｎ。 実施例 9：生物学的活性 実施例 1および 3の化合物は哺乳類の腫瘍細胞に対して細胞毒性能力を示すの で、抗がん剤としての研究対象となる。遊離アミン（実施例 1の化合物）は哺乳 類の腫瘍細胞に対して細胞毒性能力を示すので、抗がん剤としての研究対象とな る。これは AA8細胞中で 0.32μM、および UV4細胞に対しては 0.059μM のIC₅₀ を有する。（実施例 3の）対応するプロドラッグは予想されたように細胞毒性が ずっと小さい（ AA8細胞中で 23μM、および UV4細胞に対しては 19.6μMのIC₅₀ ）。これらの評価のため、AA8 および UV4を、ウシ胎児血清（10％ v/v）を含み 抗生物質を含まない Alpha MEMを使用して、対数生育期（それぞれ倍加時間が14 および15時間）に維持し、トリプシン処理によって、一週間毎に 2回継代培養し た。スピネルフラスコで、ペニシリン（100 IU／mL）およびストレプトマイシン （100μg／mL）を添加した上記の培地中で10⁴細胞／mLで細胞を播種することに よって、実験用の大量培養物を調製した。96ウェルのマイクロタイタートレイで 、各ウェルに0.05 mL 中の 200（AA8 ）または 300（UV4 ）細胞を入れて、培養 を開始した。ＣＯ₂インキュベーターで24時間増殖させた後、各トレイ毎に、 8 種の薬剤（プラス 8種の対照）について 5種の濃度の 2組の培養物を提供するた め、 2倍連続希釈物を使用して、薬剤を培地に添加した。18時間後、培養物を新 鮮な培地で 3回洗浄することによって、薬剤を除去し、トレイをさらに78時間イ ンキュベートした。その後、［Finlay,G.J.;Baguley,B.C.;Wilson,W.R.Anal.Bio chem.,1984,139,272-277］の記載にしたがって、メチレンブルーで染色すること によって、細胞密度を測定した。対照と比較して生育を 50％阻害する薬剤の濃 度として、IC₅₀を算出した。 実施例10：ニトロレダクターゼによるプロドラッグの活性化 実施例 3において製造された式（II）の化合物もまた、以下の実験で示すよう に、単離された E.coli NR2 ニトロレダクターゼによる高レベルの活性化を示す 。 96ウェルプレート中、好気条件下で、この化合物を UV4細胞とともに18時間イ ンキュベートした。UV4 細胞系は野性型 AA8から誘導された変異チャイニーズハ ムスター卵巣線維芽細胞系である。これは除去修復の切開ステップでの欠損を有 するUV相補グループ 1変異体であり［Thompson,L.H．ら、Proc.Natl.Acad.Sci.( USA),1980,78,3734；Thompson,L.H.;Carrono,A.V．In Cellular responses to D NA Damage,UCLA Symposium on Molecular and Cellular Biology,New Series, V ol.11(Freidberg,E.C.;Bridges,B.R.;Eds),Alan R.Liss:New York,1983:p 125］ 、かさ高いＤＮＡ１付加物または架橋物を形成する薬剤に対して高度に感受性で ある［Hoy,C.A.ら、Cancer Res.1985,45,1737-1747］。この化合物のIC₅₀を上記 実施例 9のようにして測定し、11.9μMであった。 インキュベートの全期間中に精製 E.coli ニトロレダクターゼ酵素（1μg／mL ）およびNADH（1 mM、補助因子として）を追加した以外は同様に実験を繰り返し た。IC₅₀を測定し、 0.46μMであった。これはこの酵素による26倍の活性化を意 味する。 実施例１(h)で製造された式（Ｉ）の化合物についての同様の一連の実験もま た、顕著な活性化を示した（E.coliニトロレダクターゼ不在下でのIC₅₀は 2.34 μM 、E.coliニトロレダクターゼ存在下でのIC₅₀は 0.006μM であり、酵素によ る 400倍の活性化を意味している）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｄ 401/14 ２０９ Ｃ０７Ｄ 401/14 ２０９ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，Ｓ Ｚ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 ターセル，モーナ ニュージーランド国 1003 オークランド グラフトン，パーク ロード，キャンサ ー リサーチ ラボラトリー，ファカルテ ィー オブ メディシン アンド ヘルス サイエンス，ユニバーシティー オブ オークランド

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式（Ｉ）の化合物またはその生理学的に機能的な誘導体： 式中、 ＸはハロゲンまたはＯＳＯ₂Ｒであり、ここでＲは水素または場合により１ 〜４個のヒドロキシル、酸（ＣＯＯＨ）もしくはアミノ基（このアミノ基は１ま たは２個の低級アルキル基で置換されていてもよい）で置換された直鎖もしくは 分枝鎖の低級（炭素原子数５までの）アルキルを表し； ＹはＮＨ₂、ＮＯ₂、ＮＨＯＨ、ＮＨＲ、ＮＲＲ、Ｎ（Ｏ）ＲＲ、ＮＲＯＨ、 ＳＲまたはＳＳＲであり、ここでＲは上記定義通りであるが、ＹがＳＳＲである 場合には、Ｒは式（Ｉ）のもう一つの部分であり得（すなわち、対称形ジスルフ ィド）； Ｅは−Ｎ＝または−ＣＨ＝であり； ＧはＯ、ＳまたはＮＨであり；そして Ｑは５位から７位までのいずれかの位置での１〜３個の（Ｑが２または３個 である場合は同一でも異なっていてもよい）Ｈ、ＯＲ、ＮＲＲ、ＣＯＮＨＲ、Ｎ ＨＣＯＲまたはＮＨＣＯＮＨＲ（ここでＲは上記定義通り）、式（Ia）の基： であり、上記式中ＥおよびＧは上記定義通りであり、Ｊ¹は３個までの（Ｊ¹が ２または３個である場合は同一でも異なっていてもよい）Ｈ、ＯＲもしくはＮＲ Ｒであり（ここでＲは上記定義通り）、または式−ＣＯＮＨＪ²、−ＮＨＪ²もし くは−ＯＪ²の基であり、ここでＪ²は−（ＣＨ₂）_mＨｔ基であり、ここでm は１ 〜４の整数であり、Ｈｔは５または６員の炭素環または複素環であり、そのうち １もしくは２個の原子が酸素、硫黄もしくは窒素であってよく、残りの原子は炭 素である。 ２．式（II）の化合物またはその生理学的に機能的な誘導体： 式中、 ＸはハロゲンまたはＯＳＯ₂Ｒであり、ここでＲは水素または場合により１ 〜４個のヒドロキシル、酸（ＣＯＯＨ）もしくはアミノ基（このアミノ基は１ま たは２個の低級アルキル基で置換されていてもよい）で置換された直鎖もしくは 分枝鎖の低級（炭素原子数５までの）アルキルを表し； Ｅは−Ｎ＝または−ＣＨ＝であり； ＧはＯ、ＳまたはＮＨであり； Ｑは５位から７位までのいずれかの位置での１〜３個の（Ｑが２または３個 である場合は同一でも異なっていてもよい）Ｈ、ＯＲ、ＮＲＲ、ＣＯＮＨＲ、Ｎ ＨＣＯＲまたはＮＨＣＯＮＨＲ（ここでＲは上記定義通り）、式（Ia）の基： であり、上記式中ＥおよびＧは上記定義通りであり、Ｊ¹は３個までの（Ｊ¹が ２または３個である場合は同一でも異なっていてもよい）Ｈ、ＯＲもしくはＮＲ Ｒであり（ここでＲは上記定義通り）、または式−ＣＯＮＨＪ²、−ＮＨＪ²もし くは−ＯＪ²の基であり、ここでＪ²は−（ＣＨ₂）_mＨｔ基であり、ここでm は１ 〜４の整数であり、Ｈｔは５または６員の炭素環または複素環であり、そのうち １もしくは２個の原子が酸素、硫黄もしくは窒素であってよく、残りの原子は炭 素であり； Ｒ¹は上記定義どおりの基Ｒであり；そして Ｐは式(IIa)、(IIb)または(IIc)の構造： から選択され、上記各式中ＺはＨまたはＭｅであり、ｎは１または２であり、 そしてＲ²は基Ｒ、ＣＯＮＨＲ、ＮＨＣＯＲ、ＯＲまたはＳＯ₂Ｒであり、ここで Ｒは上記定義通りである。 ３．Ｘが塩素である、請求項１または２記載の化合物。 ４．Ｑがインドール環の５，６および７位の３つのメトキシ基である、請求項１ −３のいずれか１つに記載の化合物。 ５．6-アミノ-3- （クロロメチル）-1-［（5',6',7'-トリメトキシインドール-2 '- イル）カルボニル］インドリンまたはこれらの生理学的機能性誘導体。 ６．3-（クロロメチル）-6-［（4"-ニトロベンジルオキシカルボニル）アミノ］ -1-［（5',6',7'-トリメトキシインドール-2'-イル）カルボニル］インドリンま たはこれらの生理学的機能性誘導体。 ７．2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N -［2-（2-ピリジニル）エチル］インドール-6- カルボキサミドまたはこれらの 生理学的に機能的な誘導体。 ８．2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N -［2-（4-モルホリニル）エチル］インドール-6- カルボキサミドまたはこれら の生理学的に機能的な誘導体。 ９．2-［［3-（クロロメチル）-6- ニトロインドリン-1- イル］カルボニル］-N -（1,3-ジヒドロキシ-2- プロピル）インドール-6- カルボキサミド。 10．N-（カルボキシメチル）-2-［［3-(クロロメチル) -6- ニトロインドリン-1 - イル］カルボニル］インドール-6- カルボキサミド。 11．（ｉ）ニトロレダクターゼ酵素をコードし、腫瘍細胞中でこれを発現するこ とができるベクター；および （ii）請求項１−10のいずれか１つに記載の化合物、 を含む、新生物疾患の治療用の２成分システム。 12．（ｉ）ニトロレダクターゼ酵素に連結された腫瘍指向抗体；および （ii）請求項１−10のいずれか１つに記載の化合物、 を含む、新生物疾患の治療用の２成分システム。 13．製薬上許容される担体または希釈剤とともに請求項１−10のいずれか１つに 記載の化合物を含む組成物。 14．ヒトまたは動物の身体の治療方法に使用するための、請求項１−10のいずれ か１つに記載の化合物、請求項11若しくは12記載のシステム、または請求項13記 載の組成物。 15．請求項１−10のいずれか１つに記載の化合物、請求項11若しくは12記載のシ ステム、または請求項13記載の組成物の有効量を治療が必要な患者に投与するこ とを含む、新生物疾患の治療方法。