JPH11513992A

JPH11513992A - シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患を治療するための薬剤および方法

Info

Publication number: JPH11513992A
Application number: JP9523869A
Authority: JP
Inventors: ナイス，ジョナサン・ダブリュー
Original assignee: イースト・カロライナ・ユニバーシティ
Priority date: 1995-12-22
Filing date: 1996-12-23
Publication date: 1999-11-30
Also published as: AU728377C; US6136791A; WO1997023230A1; AU728377B2; EP0876149A1; KR19990076695A; EP0876149A4; CA2241255A1; AU1350197A; RU98113785A

Abstract

(57)【要約】デアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療を必要とする対象におけるそのような疾患の治療法を開示する。その方法は、ＸおよびＸ₁が各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ₁が低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ₂がＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである式（Ｉ）の化合物あるいはその薬学的に許容される塩を、対象に、疾患を治療するのに有効な量で投与することを含む。本発明の方法に有用な医薬配合物も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療方法関連出願本出願は、１９９５年１２月２２日付け米国特許出願第０８／５７７，１８５号の一部継続出願である。発明の分野本発明は、５−メチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン（５ｍＡＺＣ）またはその類似体を投与することによる、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を一部特徴とする疾患の治療を必要とする対象におけるそのような疾患の治療方法に関する。発明の背景シチジンデアミナーゼ（ＣＤ）の過剰発現は、人にかかわる多くの疾患を伴う。例えば、ある種の白血病は広く用いられる抗癌剤シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）では治療が難しい。ａｒａＣに対して反応がないことは、主に、デオキシシチジンキナーゼ遺伝子の位置の不活性化（その生成物は、ａｒａＣの、癌を殺す形への活性化に必要である）、あるいはシチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現（ａｒａＣを不活性形ａｒａウラシルに脱アミノ化することによって、ａｒａＣを非活性化する）のいずれかによることが分かっている。シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現によるａｒａＣに対するこの耐性を抑える適切な治療法は現在ない。シチジンデアミナーゼの過剰発現は、エイズに関係するウイルスであるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の感染サイクルにもかかわっている。ＨＩＶ感染の初期段階は、ウイルスが標的とするＣＤ−４＋Ｔリンパ球によるシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする。この初期の一群の感染細胞をなくすことが、その後の感染レベルの制御に非常に重要となる。現在、ＨＩＶ感染症およびエイズの１つの治療法は、３′−アシド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）の投与である。しかしながら、この治療には毒性問題が伴う。そのような毒性は、一部は、ＡＺＴが全身に投与され、あらゆる複製組織区分において宿主細胞を損なうという事実により生じる。毒性を伴う副作用のない、ＡＺＴの同じまたは改善された効能を有するＨＩＶ感染症の治療法が現在求められている。この問題の１つの解決法は、複製細胞に対する毒性が少なく、そしてＨＩＶ感染細胞においてウイルスを殺す形（ＡＺＴ）に優先的に活性化される、ＡＺＴのプロドラッグであった。関節炎の症状を伴う炎症細胞がシチジンデアミナーゼを過剰発現することも明らかになっている。従って、関節炎を仲介する炎症細胞に対して毒性の代謝産物に優先的に活性化される比較的非毒性のプロドラッグが有用であろう。発明の概要シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療を必要とする対象におけるそのような疾患の治療法について開示する。本発明では、５−メチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン（５ｍＡＺＣ）またはその類似体（以後、”活性化合物”と呼ぶ）を、そのような治療を必要とする対象に、疾患の治療に有効な量で投与する。従って、本発明の第１の面は、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療を必要とする対象におけるそのような疾患の治療方法であって、式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ₁は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ₂はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、対象に、疾患の治療に有効な量で投与することを含む治療方法である。式Ｉの化合物を、対象に、シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）耐性白血病の治療に有効な量で投与することによる、そのような治療を必要とする対象におけるａｒａＣ耐性白血病の治療法は、上記方法の別の具体的な面である。式Ｉの化合物を、対象に、ＨＩＶ感染症の治療に有効な量で投与することによる、そのような治療を必要とする対象におけるＨＩＶ感染症の治療法は、上記方法の別の具体的な面である。式Ｉの化合物を、対象に、関節炎の治療に有効な量で投与することによる、そのような治療を必要とする対象における関節炎の治療法は、上記方法のさらに別の具体的な面である。本発明の第２の面は、シチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする癌の治療を必要とする対象におけるそのような癌の治療法であり、式Ｉの化合物を、対象に、そのような癌の治療に有効な量で投与することは、上記方法の１つの具体的な面である。本発明の第３の面は、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療に有効な量のここに記載の活性化合物を、薬学的に許容される担体（例えば、滅菌液体または固体担体）中に含有する医薬組成物である。本発明の第４の面は、ここに記載の活性化合物の、上記方法を実施するための薬剤の製造への使用である。図面の簡単な説明図１は、シチジンデアミナーゼを過剰発現するＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞、および過剰発現しないＨＴ−２９ＳＦ細胞における、５ｍＡＺＣの効能を比較する投与量反応曲線のグラフである。”トランスウエル”ペトリ皿の底部区分室でＨＴ− ２９ＳＦ細胞を、そして上部区分室でＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞を平板培養した（各々１，０００細胞）。半透膜がトランスウエルの２つの区分室を分けており、その結果、両区分室は組織培養基に投与された薬剤を等しく浴びる。ｘ軸上の数字は、５ｍＡＺＣを７２時間連続投与した濃度（μＭ）を示し；ｙ軸上の数字は、生存細胞数を示す。丸い（_●）データポイントはＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞の場合の投与量反応を示す。四角い（_■）データポイントはＨＴ−２９ＳＦ細胞の場合の投与量反応を示す。発明の詳細な説明本発明の方法は、５−メチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン（５ｍＡＺＣ）もしくはその類似体またはその薬学的に許容される塩（すなわち、”活性化合物”）を投与することによるシチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患に病む対象の治療に用いることができる。そのような疾患の例は、癌、シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）耐性白血病、ＨＩＶ感染症、および関節炎であるが、これらに限定されない。好ましい態様では、本発明の方法は、シチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする癌に病む対象の治療に用いることができる。これらの癌の例は、結腸の腺癌、肺の腺癌、胃の腺癌、乳房の腺癌、ヴィルムス腫、軟骨癌、軟骨肉腫、白血病、前立腺腫、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫）、腎臓の腫瘍、膵臓の腫瘍、顎部の腫瘍、肝臓腫瘍（例えば、肝芽腫、悪性肝癌）、神経芽腫、網膜芽腫、黒色腫、基底細胞癌、肉腫、および肝臓転移性癌（例えば、結腸癌）である。出願人は本発明を特定の理論に結び付けることは望まないが、下記のスキーム１に示すように、５ｍＡＺＣはシチジンデアミナーゼおよびデオキシシチジンデアミナーゼによって３′−アジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）へ代謝されるらしい：さらに、シチジンデアミナーゼを過剰発現しない細胞に悪影響を及ぼすことなく、シチジンデアミナーゼを過剰発現する腫瘍細胞において優先的にＡＺＴへ脱アミノ化されることによって、５ｍＡＺＣの別の作用が本発明において促進されるらしい。本発明は主に人を対象にした治療に関するものであるが、獣医学的目的のためのイヌおよびネコのような他の哺乳動物を対象にした治療にも用いうる。ここで用いられるように、用語”低級アルキル”とは、Ｃ１〜Ｃ４線状または枝分かれアルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、第２ブチル、および第３ブチルのことをいう。メチルが一般に好ましい。ここで用いられるように、用語”低級アルケニル”とは、Ｃ２〜Ｃ５線状または枝分かれアルケニル、例えばエテニル、プロペニル、およびブテニルのことをいう。ここで用いられるように、用語”低級アルキニル”とは、Ｃ２〜Ｃ５線状また枝分かれアルキニル、例えばプロピニルおよびブチニルのことをいう。ここで用いられるように、用語”ハロアルキル”とは、１つ以上の水素がハロ基（例えば、クロロ−−、フルオロ−、ブロモ−またはヨード−基）で置換された上記定義通りの低級アルキルのことをいい、−ＣＦ₃が一般に好ましい。本発明の実施の際に有用な活性化合物には式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ₁は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ₂はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物が含まれる。本発明の好ましい態様では、Ｒ₁はメチルまたは−ＣＦ₃であり、Ｒ₂は−Ｎ₃またはＯＨである。本発明の特に好ましい態様では、Ｒ₁はメチルであり、Ｒ₂は−Ｎ₃である。本発明の実施の際に有用な５ｍＡＺＣの類似体には、５−メチル−２′，３′ −ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロペン−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロペン −２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピン−２′，３′ −ジデオキシシチジン、および５−プロピン−２′，３′−ジデオキシ−３′− アジドシチジンが含まれるが、これらに限定されない。５ｍＡＺＣの構造は公知である。例えば、T．S．Lin 等の J．Med．Chem．２６，１６９１−１６９６（１９８３）参照。５ｍＡＺＣはケムシンラボラトリーズ（米国カンザス州レネキサ）から入手可能である。本発明を実施するために有用な化合物は、当業者にとって明らかな公知の手順により合成しうる。例えば、T．S．Lin 等の上記論文； T．Kulikowski 等の Acta Biochim．Polonica １６，２０１−２１７（１９６９）； J．J．Fox 等の J．Amer．Chem．Soc.，８１，１７８−１８７（１９５９）参照。ここに記載の活性化合物は、上述のように、それらの薬学的に許容される塩の形で製造することができる。薬学的に許容される塩は、親化合物の望まれる生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的効能を付与しない塩である。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等で形成される酸付加塩；および有機酸、例えは酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸等で形成される塩；（ｂ）塩素、臭素およびヨウ素のような元素陰イオンから形成される塩、並びに（ｃ）アンモニウム塩のような塩基から誘導される塩、ナトリウムおよびカリウムの塩のようなアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウムの塩のようなアルカリ土類金属塩、そしてジクロロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンのような有機塩基との塩である。治療のための活性化合物の投与量は、治療される症状および対象の状態によって変わる。一般に、投与量は０．１μmol/kgの少ない量でもよいが、少なくとも１．０μmol/kgであるのがより好ましく、少なくとも２５μmol/kgであるのが最も好ましい。活性化合物の投与量は一般に、１０００μmol/kgの多量でもよいが、５００μmol/kg未満であるのがより好ましく、１００μmol/kg未満であるのが最も好ましい。投与する活性化合物の個々の配合物の溶解度により、１日毎の投与量を１つまたはいくつかの単位投与量投与で分けてもよい。活性化合物の投与は治療的に（すなわち、救助治療として）行っても、または予防的に行ってもよい。シチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患を治療する本発明の治療法で用いる医薬組成物には、吸入、経口、直腸、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内を含む）、および経皮投与に適したものが含まれる。組成物は好都合なことには単位投与量形で提供することができ、当業界で周知のどのような方法でも製造しうる。ある場合に最も適した投与ルートは、対象の疾患の解剖学的な位置、治療する症状の性質および重症度、並びに使用する個々の配合物による。配合物は好都合なことには単位投与形で提供することができ、当業界で周知のどのような方法でも製造しうる。シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする白血病または他の疾患の本治療法では、活性化合物は上記の投与量範囲で投与される。活性薬剤の投与量は、治療される症状および悪い薬理学的作用が生じる投与量によって変わる。当業者は投与量を決定するときそのようなファクターを考慮する。本発明の１つの態様では、活性化合物は、ａｒａＣ耐性白血病の対象に、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼによってａｒａＣ耐性癌細胞を殺すのに十分な濃度のＡＺＴに代謝されるに足りる量で投与する。本発明の別の面では、活性化合物は単独で、あるいはａｒａＣ耐性白血病の予防または治療用の１種以上の抗白血病薬と組み合わせて用いうる。本発明の医薬組成物（”配合物”）の製造では、活性薬剤またはその生理学的に許容される塩（”活性化合物”）は、とりわけ許容される担体と一般に混合される。もちろん、担体は配合物中の他のどのような成分とも適合性であるという意味で許容されるものでなければならず、そして患者に有害なものであってはならない。担体は固体または液体、あるいは両者でもよく、単位投与量配合物、例えば、０．５〜９９重量％の活性化合物を含有しうる錠剤として、化合物と共に配合するのが好ましい。１種以上の活性化合物を本発明の配合物に混合してもよく（例えば、配合物は上記の１種以上の追加薬剤を含有していてもよい）、配合物は、１種以上の補助治療成分を含んでいてもよい成分を混合することより本質的になる、どのような周知の調剤技術によっても製造しうる。経口投与に適した配合物は、各々所定量の活性化合物を含有するカプセル、カシェ、ロゼンジ、または錠剤のような個別単位で；粉末または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型エマルジョンとして提供しうる。そのような配合物は、活性化合物および適当な担体（上記のような１種以上の補助成分を含有していてもよい）を結合させる工程を含むどのような適当な調剤法によって製造してもよい。一般に、本発明の配合物は、活性化合物と液体もしくは微粉砕固体担体または両者とを均質かつ緊密に混合し、そして、必要ならば、得られた混合物を成形することによって製造する。例えば、錠剤は、活性化合物を、場合により１種以上の補助成分と共に含有する粉末または顆粒を圧縮または成形することによって製造しうる。圧縮錠剤は、適当な機械で、場合により結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、および／または表面活性剤／分散剤と混合した、粉末または顆粒のようなさらさらした形の化合物を、圧縮することによって製造しうる。成形錠剤は、適当な機械で、不活性液体結合剤で湿らせた粉末化合物を成形することによって製造しうる。経口投与用配合物は、配合物の胃での分解を防ぎ、そして薬剤を小腸で放出させる、当業界で公知の腸内分解性コーティング含んでいてもよい。口腔（舌下）投与に適した配合物には、通常はショ糖およびアカシアまたはトラガカントであるフレーバー基剤中に活性化合物を含むロゼンジ；およびゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアカシアのような不活性基剤中に化合物を含むトローチが含まれる。非経口投与に適した本発明の配合物は、活性化合物の滅菌水性および非水性注射溶液よりなり、その製剤は受容者の血液と等張性であるのが好ましい。これらの製剤は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬、および配合物を受容者の血液と等張性にする溶質を含んでいてもよい。水性および非水性滅菌懸濁液は懸濁化剤および増粘剤を含んでいてもよい。配合物は、単位投与量または多投与量容器、例えば密封アンプルおよびバイアルで提供してもよく、使用直前に食塩水または注射用水のような滅菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥（フリーズドライまたはリオフィライズ）状態で貯蔵してもよい。すぐに用いうる注射溶液および懸濁液は、前記の種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から製造しうる。直腸投与に適した配合物は単位投与量座薬として提供するのが好ましい。これらは、活性化合物と１種以上の慣用的な固体担体、例えはココアバターとを混合し、そして得られる混合物を成形することによって製造しうる。経皮投与に適した配合物は、長時間、受容者の表皮と緊密に接触し続けるようにした個別パッチとして提供しうる。経皮投与に適した配合物はイオン導入（例えは、Pharmaceutical Research ３，３１８（１９８６））によって放出してもよく、緩衝化してもよい活性化合物の水溶液の形を一般にとる。次の実施例は本発明をさらに十分に説明するためのものであり、本発明を限定するものと解釈すべきではない。次の実施例において、ｇはグラム、ｈは時間、 kgはキログラム、mlはミリリットル、Ｍはモル、μgはマイクログラム、そして μmolはマイクロモル、nmolはナノモル、pmolはピコモル、μCiはマイクロキューリーを意味する。実施例１シチジンデアミナーゼを過剰発現する細胞における５ｍＡＺＣの効果ＨＴ−２９ＳＦヒト腺癌細胞は高レベルのシチジンデアミナーゼ（ＣＤ）を自然に発現する。ＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞は、通常よりもさらに高いＣＤレベルを発現するＨＴ−２９ＳＦ系統の下位系統である（ＨＴ−２９ＳＦ細胞の発現レベルの約５．４倍）。シチジンデアミナーゼを過剰発現する細胞が他の細胞よりも５ｍＡＺＣに対してより敏感であるかどうかを調べるために、ＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞をトランスウエルペトリ皿の上部区分室で平板培養し、ＨＴ−２９ＳＦ細胞を低部区分室で平板培養した（各々１０００細胞）。半透膜がトランスウエルの２つの区分室を分けており、その結果、両区分室は組織培養基に投与された薬剤を等しく浴びる。５ｍＡＺＣは０〜５０μMの濃度で７２時間連続投与した。この実験結果は図１に示す。この実験結果は、ＣＤを高度に過剰発現する細胞が５ｍＡＺＣに対して敏感であるという考えを立証している。実施例２５ｍＡＺＣの試験管内活性上記実施例１で得た結果に基づいて、５０μMの５ｍＡＺＣの投与量をさらに詳細な分析のために選択した。５ｍＡＺＣを透過しうる膜によってのみ分けられた区分室中にＨＴ−２９ＳＦ細胞およびＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞を含む同じトランスウエル皿中で、２つの実験を５重に行った。結果は以下の表１に示す：実施例３５ｍＡＺＣの生体内活性；ヒト腫瘍異種移植モデル５ｍＡＺＣが生体内活性を示すかどうか判定するために、生後１６週のメスのＢａｌｂ／Ｃｎｕ／ｎｕマウス３匹の左肩甲骨部分に２．０×１０⁶ＨＴ−２９ＳＦ細胞を、右肩甲骨部分に２．０×１０⁶ＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞を皮下接種した。１匹のマウスに１５０mg/kgの５ｍＡＺＣを１日２回腹腔内投与した。他のマウスには食塩水のみを投与した。この処理を５週間続け、そこで動物を安楽死させ、固形腫瘍を切り取り、重さを測定した。検査した腫瘍は次の重量特性を有していた：ＨＴ−２９ＳＦ^CD＋５ｍＡＺＣ：０．２２ｇ±０．３１ｇ（Ｎ＝２）ＨＴ−２９ＳＦ＋５ｍＡＺＣ：１．０２ｇ±０．１３ｇ（Ｎ＝２）ＨＴ−２９ＳＦ^CD＋食塩水：０．９６ｇ（Ｎ＝１）ＨＴ−２９ＳＦ＋食塩水：１．１３ｇ（Ｎ＝１）別の実験では、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス３０匹に５×１０⁶ＨＴ−２９ＳＦ細胞を皮下注射した。１２匹の動物に６００mg/kg/日５ｍＡＺＣを側腹部に２８日間投与した。１８匹の動物に同じスケジュールで食塩水を注射した。２９日目に、動物を犠牲にして、腫瘍の体積を標準的な方法で定量した。食塩水を投与した対照グループの平均腫瘍体積は５０９±２９２mm³であった。これに対して、５ｍＡＺＣで処理した動物の平均腫瘍体積は２７３±９７mm³であり、大きさの平均減少率は４６％であった。これらの結果は、５ｍＡＺＣが、試験管内および生体内で分子種において、シチジンテアミナーセを過剰発現する腫瘍細胞に対してもっぱら毒性に活性化されることを明示している。実施例４結腸腫瘍におけるＣＤ過剰発現：生体外患者データシチジンデアミナーゼ（ＣＤ）が、正常な組織と比較して、特定の腫瘍で過剰発現するという仮定を、結腸癌のために腸の切除を行った患者から得た外科手術検体を用いて行った実験で証明した。病理学的評価のために得た腫瘍検体および隣接する正常な組織を、基質として［³Ｈ］−シチジンを用いて、R．L．Momparl erおよびJ．Laliberte，J．Leukemia Res.，１４（９），７５１−５４（１９９０）の方法により、ＣＤ活性について分析した。簡単に説明すると、外科手術検体からの結腸腫瘍および隣接粘膜を５mMトリス−Ｃｌ、ｐＨ７．４中で均質化し、氷上で３回の５秒パルスで音波破砕し、そして５０mMトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４に調整した。ホモジネートを１２，０００×ｇで１５分間４℃にて遠心分離し、ホモジネートを分析を行うまで−７０℃で貯蔵した。タンパク質濃度はバイオラッドタンパク質分析キッドを用いて測定し、ウシγ−グロブリンを標準として用いた。シチジンデアミナーゼ活性の判定のために、反応混合物（１００μL）は２５m Mトリス−Ｃｌ、ｐＨ７．４、０．５μCiの［³Ｈ］−シチジンおよび０．０２〜０．０５mgのホモジネート組織を含有していた。反応は３７℃で３０分間行い、次いで３mLの冷０．００１ＮＨＣｌで停止した。反応混合物を、使用前に、３m LのＨ₂Ｏ、１mLの０．１ＮＨＣｌ、および３mLのＨ₂Ｏで２回洗浄したワットマンＰ−８１ホスホセルロースディスク上に置いた。混合物を重力によって１時間穏やかに流動させ、次に放射能について分析した。結果はタンパク質含有量について標準化し、nmol／分／mgタンパク質として表した。この実験結果は以下の表２に示す。実施例５結腸腫瘍における５ｍＡＺＣのＡＺＴへの優先的脱アミノ化５ｍＡＺＣが、正常な隣接粘膜と比べて、ヒト結腸腫瘍においてＡＺＴへ優先的に脱アミノ化されるという仮説を、上記実施例４に記載の同じ生体外試料で証明した。基質として［³Ｈ］−５ｍＡＺＣを用いて、酵素反応の［³Ｈ］−ＡＺＴ生成物をＨＰＬＣによって単離し、放射性標識生成物をJ．W．Nyce 等、Proc．N atl．Acad．Sci．USA ９０，２９６０−２９６４（１９９３）に記載のように定量した。簡単に説明すると、次のこと以外は実施例４に記載の手順を繰り返した：各反応混合物は０．２６μCiの［³Ｈ］−５ｍＡＺＣを含有していた。反応は５０μLの２Ｍ過塩素酸で停止し、混合物を、４０mM 酢酸ナトリウム中の１２．５％アセトニトリル移動相、ｐＨ７．０を用いる４．６×２５cmベックマン超球状ＯＤＳを使用するＨＰＬＣによって分離した。非標識５ｍＡＺＣおよびＡＺＴを得られたピークの確証に用いた。放射性標識５ｍＡＺＣおよびＡＺＴに相当するフラクションを集め、シンチレーション計数によって放射能を分析した。結果はタンパク質含有量について標準化し、pmol／分／mg タンパク質として表し，以下の表３に示す。結腸腫瘍組織に見られるＡＺＴがシチジンデアミナーゼ活性によって生成される（上記スキーム１参照）ことを確認するために、シチジンデアミナーゼ阻害剤であるテトラヒドロウリジン（ＴＨＵ）を、腫瘍組織ホモジネートおよび放射性標識５ｍＡＺＣを含有する反応混合物に加えた；生成された放射性標識ＡＺＴの量を上記のように分析し、次に、ＴＨＵを含有しない反応混合物中で生成された放射性標識ＡＺＴの量と比較した。この実験結果も以下の表３に示す。上記実施例は本発明を説明するためのものであり、本発明を限定するものと解釈すべきではない。本発明は請求の範囲、およびここに含まれる請求の範囲に相当するものによって限定される。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９８年２月１３日【補正内容】明細書シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患を治療するための薬剤および方法関連出願本出願は、１９９５年１２月２２日付け米国特許出願第０８／５７７，１８５号の一部継続出願である。発明の背景発明の分野本発明は、式Ｉの活性薬剤に関し、並びに５−メチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン（５ｍＡＺＣ）、その類似体またはその薬学的に有効な塩を、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を一部伴う疾患の治療を必要とする対象に、疾患の治療およびその症状の改善に有効な量で投与することを含むそのような疾患の治療に関する。本発明は、式Ｉの活性薬剤に関し、並びにシチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を一部伴う疾患の治療において、５−メチル −２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン（５ｍＡＺＣ）、その類似体またはその薬学的に有効な塩を、そのような治療を必要とする対象に、疾患の治療およびその症状の改善に有効な量で投与することを含む、上記疾患の治療に関する。シチジンデアミナーゼ（ＣＤ）の過剰発現は、人にかかわる多くの疾患を伴う。例えば、ある種の白血病は広く用いられる抗癌剤シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）では治療が難しい。ａｒａＣに対して反応がないことは、主に、デオキシシチジンキナーゼ遺伝子の位置の不活性化（その生成物は、ａｒａＣの、癌を殺す形への活性化に必要である）、あるいはシチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現（ａｒａＣを不活性形ａｒａウラシルに脱アミノ化することによって、ａｒａＣを非活性化する）のいずれかによることが分かっている。シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現によるａｒａＣに対するこの耐性を抑える適切な治療法は現在ない。シチジンデアミナーゼの過剰発現は、エイズに関係するウイルスであるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の感染サイクルにもかかわっている。ＨＩＶ感染の初期段階は、ウイルスが標的とするＣＤ−４＋Ｔリンパ球によるシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする。この初期の一群の感染細胞をなくすことが、その後の感染レベルの制御に非常に重要となる。現在、ＨＩＶ感染症およびエイズの１つの治療法は、この治療に伴って３′− アジド−３′−デオキシチミジンを投与することである。しかしながら、この治療には毒性問題が伴う。そのような毒性は、一部は、ＡＺＴが全身に投与され、あらゆる複製組織区分において宿主細胞を損なうという事実により生じる。毒性を伴う副作用のない、ＡＺＴの同じまたは改善された効能を有するＨＩＶ感染症の治療法が現在求められている。この問題の１つの解決法は、複製細胞に対する毒性が少なく、そしてＨＩＶ感染細胞においてウイルスを殺す形（ＡＺＴ）に優先的に活性化される、ＡＺＴのプロドラッグであった。さらに、関節炎の症状を伴う炎症細胞がシチジンデアミナーゼを過剰発現することも明らかになっている。従って、関節炎を仲介する炎症細胞に対して毒性の代謝産物に優先的に活性化される比較的非毒性のプロドラッグを提供することが望ましい。発明の概要シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患の治療法は、そのような治療を必要とする対象に、５−メチル−２′，３′ −ジデオキシ−３′−アジドシチジン（５ｍＡＺＣ）、その類似体、またはその薬学的に許容される塩（以後、”活性化合物”と呼ぶ）を、疾患の治療に有効な量で投与することを含む。シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患の治療法は、治療を必要とする対象に、疾患の治療に有効な量の式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ¹は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ²はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物またはその薬学的に許容される塩を投与することを含む。シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）耐性白血病の治療法は、治療を必要とする対象に、抗ａｒａＣ耐性白血病に有効な量の化学式Ｉの化合物を投与することを含む。ＨＩＶ感染症の治療法は、治療を必要とする対象に、抗ＨＩＶに有効な量の化学式Ｉの化合物を投与することを含む。関節炎の治療法は、抗関節炎に有効な量の化学式Ｉの化合物を関節炎対象者に投与することを含む。シチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う癌の治療法は、治療を必要とする対象に、抗癌に有効な量の化学式Ｉの化合物を投与することを含む。本発明の薬剤は、上記治療に用いる医薬の製造に適している。医薬は経口、非経口、局所、および経皮配合物、並びにインプラントの形で、そしてキットの形で提供される。図面の簡単な説明図１は、シチジンデアミナーゼを過剰発現するＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞、および過剰発現しないＨＴ−２９ＳＦ細胞における、５ｍＡＺＣの効能を比較する投与量反応曲線のグラフである。”トランスウエル”ペトリ皿の底部区分室でＨＴ− ２９ＳＦ細胞を、そして上部区分室でＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞を平板培養した（各々１，０００細胞）。半透膜がトランスウエルの２つの区分室を分けており、その結果、両区分室は組織培養基に投与された薬剤を等しく浴びる。ｘ軸上の数字は、５ｍＡＺＣを７２時間連続投与した濃度（μＭ）を示し；ｙ軸上の数字は、生存細胞数を示す。丸の（_●）データポイントはＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞の場合の投与量反応を示す。四角の（_■）データポイントはＨＴ−２９ＳＦ細胞の場合の投与量反応を示す。発明の詳細な説明本発明の方法は、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患の治療に有効な量の本発明の活性化合物を、治療を必要とする対象に投与することによって、そのような疾患の治療に用いうる。それは５ −メチル−２′，３′−デオキシシチジンデアミナーゼ（５ｍＡＺＣ）、その類似体、またはその薬学的に許容される塩（すなわち、”活性化合物”）である。治療しうる疾患の例は、癌、シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）耐性白血病、ＨＩＶ感染症、および関節炎であるが、これらに限定されない。好ましい態様では、本発明の方法は、シチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする癌を病む対象の治療に用いられる。これらの癌の例は、結腸の腺癌、肺の腺癌、胃の腺癌、乳房の腺癌、ヴィルムス腫、軟骨癌、軟骨肉腫、白血病、前立腺腫、脳腫瘍（例えば、神経膠腫、星状細胞腫）、腎臓の腫瘍、膵臓の腫瘍、顎部の腫瘍、肝臓腫瘍（例えば、肝芽腫、悪性肝癌）、神経芽腫、網膜芽腫、黒色腫、基底細胞癌、肉腫、および肝臓転移性癌（例えば、結腸癌）である。出願人は本発明を特定の理論に結び付けることは望まないが、下記のスキーム１に示すように、５ｍＡＺＣはシチジンデアミナーゼおよびデオキシシチジンデアミナーゼによって３′−アジド−３′−デオキシチミジン（ＡＺＴ）へ代謝されるらしい：シチジンデアミナーゼを過剰発現しない細胞に悪影響を及ぼすことはないが、５ｍＡＺＣは、シチジンデアミナーゼを過剰発現する腫瘍細胞においてＡＺＴへ優先的に脱アミノ化されるらしい。本発明は主に人を対象にした治療に関するものであるが、獣医学的目的のためのイヌおよびネコのような他の哺乳動物を対象にした治療にも用いうる。ここで用いられるように、用語”低級アルキル”とは、Ｃ₁〜Ｃ₄線状または枝分かれアルキル、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、第２ブチル、および第３ブチルのことをいう。メチルが一般に好ましい。ここで用いられるように、用語”低級アルケニル”とは、Ｃ₂〜Ｃ₅線状または枝分かれアルケニル、例えばエテニル、プロペニル、およびブテニルのことをいう。ここで用いられるように、用語”低級アルキニル”とは、Ｃ₂〜Ｃ₅線状また枝分かれアルキニル、例えはプロピニルおよびブチニルのことをいう。ここで用いられるように、用語”ハロアルキル”とは、１つ以上の水素がハロ基（例えば、クロロ− −、フルオロ−、ブロモ−またはヨード−基）で置換された上記定義通りの低級アルキルのことをいい、−ＣＦ₃が一般に好ましい。本発明の実施の際に有用な活性化合物には式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ¹は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ²はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物が含まれる。本発明の好ましい態様では、Ｒ¹はメチルまたは−ＣＦ₃であり、Ｒ²は−Ｎ₃またはＯＨである。本発明の特に好ましい態様では、Ｒ¹はメチルであり、Ｒ²は−Ｎ₃である。ここではこれらの化合物の薬学的に許容される塩も包含される。本発明の実施の際に有用な５ｍＡＺＣの類似体には、５−メチル−２′，３′ −ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロペン−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロペン −２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピン−２′，３′ −ジデオキシシチジン、および５−プロピン−２′，３′−ジデオキシ−３′− アジドシチジンが含まれるが、これらに限定されない。５ｍＡＺＣの構造は公知である。例えば、T．S．Lin 等の J．Med．Chem．２６，１６９１−１６９６（１９８３）参照。５ｍＡＺＣはケムシンラボラトリーズ（米国カンザス州レネキサ）から入手可能である。本発明の実施に有用な化合物は、当業者にとって明らかな公知の手順により合成しうる。例えば、T．S． Lin 等の上記論文； T．Kulikowski 等の Acta Biochim．Polonica １６，２０１−２１７（１９６９）； J．J．Fox 等の J．Amer．Chem．Soc.,８１，１７８−１８７（１９５９）参照。ここに記載の活性化合物は、上述のように、それらの薬学的に許容される塩の形で製造することができる。”薬学的に許容される塩”とは、親化合物の望まれる生物学的活性を保持し、望ましくない毒物学的効能を付与しない塩である。そのような塩の例は、（ａ）無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸等で形成される酸付加塩；および有機酸、例えば酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、グルコン酸、クエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、安息香酸、タンニン酸、パルミチン酸、アルギン酸、ポリグルタミン酸、ナフタレンスルホン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、ポリガラクツロン酸等で形成される塩；（ｂ）塩素、臭素およびヨウ素のような元素陰イオンから形成される塩、並びに（ｃ）アンモニウム塩のような塩基から誘導される塩、ナトリウムおよびカリウムの塩のようなアルカリ金属塩、カルシウムおよびマグネシウムの塩のようなアルカリ土類金属塩、そしてジクロロヘキシルアミンおよびＮ−メチル−Ｄ−グルカミンのような有機塩基との塩である。治療のための活性化合物の投与量は、治療対象の症状および状態によって変わ少なくとも１．０μmol/kgであるのがより好ましく、少なくとも２５μmol/kgであるのが最も好ましい。活性化合物の投与量は一般に１０００μmol/kgの多い量でもよいが、５００μmol/kg未満であるのがより好ましく、１００μmol/kg未満であるのが最も好ましい。投与する活性化合物の個々の配合物の溶解度により、１日毎の投与量を１つまたはいくつかの単位投与量投与で分けてもよい。活性化合物の投与は救助治療のように治療的に行っても、または予防的に行ってもよい。シチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患を治療する本発明の治療法で用いる医薬組成物には、吸入、経口、直腸、非経口（皮下、皮内、筋肉内、静脈内を含む）、および経皮投与に適したものが含まれる。組成物は好都合なことには単位投与量形態で提供することができ、当業界で周知のどのような方法でも製造しうる。ある場合に最も適した投与ルートは、対象における疾患の解剖学的な位置、治療する症状の性質および重症度、並びに使用する個々の配合物による。配合物は好都合なことには単位投与形態で提供することができ、当業界で周知のどのような方法でも製造しうる。シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う白血病または他の疾患の本治療法では、活性化合物は上記の投与量範囲で投与される。活性薬剤の投与量は、治療される症状および悪い薬理学的効果が生じる投与量によって変わる。当業者は投与量を決定するときそのようなファクターを考慮する。本発明の１つの態様では、活性化合物は、ａｒａＣ耐性白血病を病む対象に、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼによって代謝されて抗ａｒａＣ耐性癌に有効な量のＡＺＴが生成されるのに効果的な量で投与される。活性化合物は単独で、あるいはａｒａＣ耐性白血病の予防または治療用の１種以上の抗白血病薬と組み合わせて用いうる。本発明の医薬組成物の”配合物”への製造では、活性薬剤またはその生理学的に許容される塩（”活性化合物”）は、とりわけ許容される担体と混合されるのが一般的である。もちろん、担体は配合物中の他のどのような成分とも適合性であり、そして一般に対象の健康に有害なものではないという点で許容されるものでなければならない。担体は固体または液体、あるいは両者の混合物でもよく、単位投与量配合物、例えば、０．５〜９９重量％の活性化合物を含有しうる錠剤として、活性化合物と共に配合するのが好ましい。１種以上の活性化合物を本発明の配合物に混合してもよく、例えば、配合物は上記の１種以上の追加薬剤を含有していてもよい。配合物は、成分を、１種以上の補助治療成分を含んでいてもよい１種以上の担体と混合することを含む、どのような周知の調剤技術によっても製造しうる。経口投与に適した配合物は、各々所定量の活性化合物を含有するカプセル、カシェ、ロゼンジ、または錠剤のような個別単位で；粉末または顆粒として；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液として；あるいは水中油型または油中水型エマルジョンとして提供しうる。そのような配合物は、活性化合物および適当な担体（上記のような１種以上の補助成分を含有していてもよい）を結合させることを含むどのような適当な調剤法によって製造してもよい。一般に、本発明の配合物は、活性化合物と液体もしくは微粉砕固体担体または両者とを均質かつ緊密に混合し、そして、必要ならば、得られた混合物を成形することによって製造する。例えば、錠剤は、活性化合物を、場合により１種以上の補助成分と共に含有する粉末または顆粒を圧縮または成形することによって製造しうる。圧縮錠剤は、適当な機械で、場合により結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、および／または表面活性剤／分散剤と混合した、粉末または顆粒のようなさらさらした形の化合物を圧縮することによって製造しうる。成形錠剤は、適当な機械で、不活性液体結合剤で湿らせた粉末化合物を成形することによって製造しうる。経口投与用配合物は、配合物の胃での分解を防ぎ、そして薬剤を小腸で放出させる、当業界で公知の腸内分解性コーティング含んでいてもよい。口腔（舌下）投与に適した配合物には、通常はショ糖およびアカシアまたはトラガカントであるフレーバー基剤中に活性化合物を含むロゼンジ；およびゼラチンおよびグリセリンまたはショ糖およびアカシアのような不活性基剤中に化合物を含むトローチが含まれる。非経口投与に適した本発明の配合物は、活性化合物の滅菌水性および非水性注射溶液よりなり、その製剤は受容者の血液と等張性であるのが好ましい。これらの製剤は、酸化防止剤、緩衝剤、静菌薬、および配合物を受容者の血液と等張性にする溶質を含んでいてもよい。水性および非水性滅菌懸濁液は懸濁化剤および増粘剤を含んでいてもよい。配合物は、単位投与量または多投与量容器、例えば密封カプセルおよびバイアルで提供してもよく、使用直前に食塩水または注射用水のような滅菌液体担体を添加するだけでよい凍結乾燥（フリーズドライまたはリオフィライズ）状態で貯蔵してもよい。注射溶液および懸濁液は、前記の種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から製造しうる。直腸投与に適した配合物は単位投与量座薬として提供するのが好ましい。これらは、活性化合物と１種以上の慣用的な固体担体、例えばココアバターとを混合し、そして得られる混合物を成形することによって製造しうる。経皮投与に適した配合物は、長時間、受容者の表皮と緊密に接触し続けるようにした個別パッチとして提供しうる。経皮投与に適した配合物はイオン導入（例えば、Pharmaceutical Research ３，３１８（１９８６））によって放出してもよく、活性化合物の緩衝化してもよい水溶液の形を一般にとる。次の実施例は本発明をさらに十分に説明するためのものであり、本発明を限定するものと解釈すべきではない。次の実施例において、ｇはグラム、ｈは時間、 kgはキログラム、mlはミリリットル、Ｍはモル、μgはマイクログラム、そして μmolはマイクロモル、nmolはナノモル、pmolはピコモル、μCiはマイクロキューリーを意味する。実施例実施例１：シチジンデアミナーゼを過剰発現する細胞における５ｍＡＺＣの効果ＨＴ−２９ＳＦヒト腺癌細胞は高レベルのシチジンデアミナーゼ（ＣＤ）を自然に発現する。ＨＴ−２９ＳＦ^CDは、通常よりもさらに高いＣＤレベルを発現するＨＴ−２９ＳＦ系統の下位系統である（ＨＴ−２９ＳＦ細胞の発現レベルの約５．４倍）。シチジンデアミナーゼを過剰発現する細胞が他の細胞よりも５ｍＡＺＣに対してより敏感であるかどうかを調べるために、ＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞をトランスウエルペトリ皿の上部区分室で平板培養し、ＨＴ−２９ＳＦ細胞を低部区分室で平板培養した（各々１０００細胞）。半透膜がトランスウエルの２つの区分室を分けており、その結果、両区分室は組織培養基に投与される薬剤を等しく浴びる。５ｍＡＺＣは０〜５０μMの濃度で７２時間連続投与した。この実験結果は図１に示す。この実験結果は、ＣＤを高度に過剰発現する細胞が５ｍＡＺＣに対して敏感であるという考えを立証している。実施例２：５ｍＡＺＣの試験管内活性上記実施例１で得た結果に基づいて、５０μMの５ｍＡＺＣの投与量をさらに詳細な分析のために選択した。５ｍＡＺＣを透過しうる膜によってのみ分けられた区分室中にＨＴ−２９ＳＦ細胞およびＨＴ−２９ＳＦ^CD細胞を含む同じトランスウエル皿中で、２つの実験を５重に行った。結果は以下の表１に示す：実施例３：５ｍＡＺＣの生体内活性；ヒト腫瘍異種移植モデル５ｍＡＺＣが生体内活性を示すことを判定するために、生後１６週のメスのＢａｌｂ／Ｃｎｕ／ｎｕマウス２匹の左肩甲骨部分に２．０×１０⁶ＨＴ−２９ＳＦ（シチジンデアミナーゼ非生成）細胞を、右肩甲骨部分に２．０×１０⁶ＨＴ−２９ＳＦ^CD（シチジンデアミナーゼ生成）細胞を皮下接種した。これらのマウスの１匹に１５０mg/kgの５ｍＡＺＣを１日２回腹腔内投与した。他のマウスには食塩水のみを投与した。この処理を５週間続け、そこで動物を安楽死させ、固形腫瘍を切り取り、重さを測定した。検査した腫瘍は次の重量特性を有していた：１− ＨＴ−２９ＳＦ^CD＋５ｍＡＺＣ：０．２２ｇ±０．３１ｇ（Ｎ＝２）２− ＨＴ−２９ＳＦ＋５ｍＡＺＣ：１．０２ｇ±０．１３ｇ（Ｎ＝２）３− ＨＴ−２９ＳＦ^CD＋食塩水：０．９６ｇ（Ｎ＝１）４− ＨＴ−２９ＳＦ＋食塩水：１．１３ｇ（Ｎ＝１）別の実験では、ＢＡＬＢ／ｃヌードマウス３０匹に５×１０⁶ＨＴ−２９ＳＦ細胞を皮下注射した。１２匹の動物に６００mg/kg/日５ｍＡＺＣを側腹部に２８日間投与した。１８匹の動物に同じスケジュールで食塩水を注射した。２９日目に、動物を犠牲にして、腫瘍の体積を標準的な方法で定量した。食塩水を投与した対照グループの平均腫瘍体積は５０９±２９２mm³であった。これに対して、５ｍＡＺＣで処理した動物の平均腫瘍体積は２７３±９７mm³であり、大きさの平均減少率は４６％であった。実施例２および３の結果は、５ｍＡＺＣが、試験管内および生体内で分子種において、シチジンデアミナーゼを過剰発現する腫瘍細胞に対してもっぱら毒性に活性化されることを明示している。実施例４：結腸腫瘍におけるＣＤ過剰発現生体外患者データシチジンデアミナーゼ（ＣＤ）が、正常な組織と比較して、特定の腫瘍で過剰発現するという仮定を、結腸癌のために腸の切除を行った患者から得た外科手術検体を用いて行った実験で証明した。病理学的評価のために得た腫瘍検体および隣接する正常な組織を、基質として［³Ｈ］−シチジンを用いて、R．L．Homparl erおよびJ．Laliberte，J．Leukemia Res.，１４（９），７５１−５４（１９９０）の方法により、ＣＤ活性について分析した。簡単に説明すると、外科手術検体からの結腸腫瘍および隣接粘膜を５mMトリス−Ｃｌ、ｐＨ７．４中で均質化し、氷上で３つの５秒パルスで音波破砕し、そして５０mMトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４に調整した。ホモジネートを１２，０００×ｇで１５分間４℃にて遠心分離し、ホモジネートを分析を行うまで−７０℃で貯蔵した。タンパク質濃度はバイオラッドタンパク質分析キッドを用いて測定し、ウシγ−グロブリンを標準として用いた。シチジンデアミナーゼ活性の判定のために、反応混合物（１００μL）は２５m Mトリス−Ｃｌ、ｐＨ７．４、０．５μCiの［³Ｈ］−シチジンおよび０．０２〜０．０５mgのホモジネート組織を含有していた。反応は３７℃で３０分間行い、次いで３mLの冷０．００１ＮＨＣｌで停止した。反応混合物を、使用前に、３m LのＨ₂Ｏ、１mLの０．１ＮＨＣｌ、および３mLのＨ₂Ｏで２回洗浄したワットマンＰ−８１ホスホセルロースディスク上に置いた。混合物を重力によって１時間穏やかに流動させ、次に放射能について分析した。結果はタンパク質含有量について標準化し、nmol／分／mg タンパク質として表した。この実験結果は以下の表２に示す。請求の範囲１．化学式Ｃ₇Ｎ₃Ｈ₈Ｏ₂Ｒ¹Ｒ²ＸＸ¹ （式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであるが、共にＣであることはなく；Ｒ¹は低級アルキル、アルケニルおよびアルキニル、ハロゲンおよびハロアルキルよりなる群から選択され；そしてＲ²はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノおよびハロゲンよりなる群から選択される）を有する薬剤、またはその薬学的に許容される塩。２．Ｒ¹がメチルであり、Ｒ²が−Ｎ₃である、請求項１に記載の薬剤。３．Ｒ¹がＣＦ₃である、請求項１または２に記載の薬剤。４．５−メチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′ −ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５ −プロペン−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピン− ２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピン−２′，３′− ジデオキシシチジン、および５−プロピン−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジンよりなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか一項に記載の薬剤。５．化学式を有する、請求項１〜４のいずれか一項に記載の薬剤、またはその薬学的に許容される塩。６．ＸがＮよりなり、Ｘ¹がＣよりなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬剤。７．ＸがＣよりなり、Ｘ¹がＮよりなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬剤。８．ＸがＮよりなり、Ｘ¹がＮよりなる、請求項１〜５のいずれか一項に記載の薬剤。９．放射性標識をさらに含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の薬剤。１０．凍結乾燥（フリーズドライまたはリオフィライズ）されている、請求項１〜９のいずれか一項に記載の薬剤。１１．Ｒ¹のハロアルキルが、１つ以上のクロロ、フルオロ、ブロモおよびヨードによって置換されているアルキルよりなる群から選択される、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の薬剤。１２．Ｒ¹のフルオロアルキルが−ＣＦ₃よりなる、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の薬剤。１３．請求項１〜１２のいずれか一項に記載の薬剤；および薬学的に許容される担体を含む組成物。１４．約０．５〜約９９％の該薬剤を含む、請求項１３に記載の組成物。１５．単位投与量形態の請求項１３または１４に記載の組成物。１６．多投与量形態の請求項１３〜１５のいずれか一項に記載の組成物。１７．カプセル、カシェ、トローチ、ロゼンジ、粉末、顆粒、溶液、懸濁液、エマルジョンおよび錠剤よりなる群から選択される形の請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の組成物。１８．担体が固体および液体担体よりなる群から選択される、請求項１３〜１７のいずれか一項に記載の組成物。１９．他の治療薬、フレーバー剤、潤滑剤、懸濁化剤、増粘剤、結合剤、不活性希釈剤、表面活性剤、分散剤、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤、および等張性にするための溶質よりなる群から選択される薬剤をさらに含む、請求項１３〜１８のいずれか一項に記載の組成物。２０．治療薬が抗白血病薬を含む、請求項１３〜１９のいずれか一項に記載の組成物。２１．抗白血病薬がシトシンアラビノシドよりなる、請求項１３〜２０のいずれか一項に記載の組成物。２２．請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の組成物、および腸内分解性コーティングを含む、経口用配合物。２３．フレーバー剤および不活性希釈剤がショ糖、アカシア、トラガカント、ゼラチンおよびグリセリンよりなる群から選択される、請求項１３〜２２のいずれか一項に記載の組成物を含む舌下用配合物。２４．溶液、懸濁液またはエマルジョンよりなる、請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の組成物を含む非経口用配合物。２５．請求項１３〜２１および２４のいずれか一項に記載の配合物を含むアンプルまたはバイアル。２６．単位投与量形態の請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の組成物を含む直腸用配合物。２７．請求項１３〜２１のいずれか一項に記載の組成物およびイオン泳動媒質を含む経皮用配合物。２８．請求項１３〜２１および２７のいずれか一項に記載の配合物を含むパッチを含む、経皮用デバイス。２９．請求項２８に記載の経皮用デバイスおよびイオン泳動放出手段を含む、イオン泳動デバイス。３０．密封容器中の請求項１３〜２９のいずれか一項に記載の組成物、およびそれを投与するための説明書を含む、治療用キット。３１．シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う疾患の予防または治療方法であって、そのような治療を必要とする対象に、疾患に対抗するのに有効な量の化学式Ｃ₇Ｎ₃Ｈ₈Ｏ₂Ｒ¹Ｒ²ＸＸ¹（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり、Ｒ¹は低級アルキル、アルケニルおよびアルキニル、ハロゲンおよびハロアルキルよりなる群から選択され，そしてＲ² はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノおよびハロゲンよりなる群から選択される）の薬剤、またはその薬学的に許容される塩よりなる群から選択される薬剤を投与することを含む方法。３２．Ｒ¹がメチルであり、Ｒ²が−Ｎ₃である、請求項３１に記載の方法。３３．薬剤が、５−メチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル− ２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピル−２′，３′− ジデオキシシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロペン−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５− プロピン−２′３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピン−２′ ，３′−ジデオキシシチジン、および５−プロピン−２′３′−ジデオキシ−３ ′−アジドシチジンよりなる群から選択される、請求項３１または３２に記載の方法。３４．疾患がシトシンアラビノシド（ａｒａＣ）耐性白血病である、請求項３１〜３３のいずれか一項に記載の方法。３５．対象に、抗白血病に有効な量の抗白血病薬を投与することをさらに含む、請求項３１〜３４のいずれか一項に記載の方法。３６．抗白血病薬を上記薬剤と同時に投与する、請求項３１〜３５のいずれか一項に記載の方法。３７．抗白血病薬がシトシンアラビノシド（ａｒａＣ）よりなる、請求項３１〜３６のいずれか一項に記載の方法。３８．疾患が関節炎よりなる、請求項３１〜３７のいずれか一項に記載の方法。３９．予防法である、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。４０．治療法である、請求項３１〜３８のいずれか一項に記載の方法。４１．薬剤が非経口投与される、請求項３１〜４０のいずれか一項に記載の方法。４２．薬剤が経口投与される、請求項３１〜４０のいずれか一項に記載の方法。４３．薬剤が経皮投与される、請求項３１〜４０のいずれか一項に記載の方法。４４．薬剤が約０．１〜約１０００μmol/kg体重の量で投与される、請求項３１〜４３のいずれか一項に記載の方法。４５．対象が人間である、請求項３１〜４４のいずれか一項に記載の方法。４６．対象が人間以外の動物である、請求項３１〜４５のいずれか一項に記載の方法。４７．人間以外の動物が、獣医がかかわる動物よりなる群から選択される、請求項３１〜４６のいずれか一項に記載の方法。４８．薬剤が抗癌に有効な量で投与される、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を伴う癌を治療するための、請求項３１〜４７のいずれか一項に記載の方法。４９．薬剤が抗ＨＩＶに有効な量で投与される、ＨＩＶ感染症の予防または治療のための、請求項３１〜４７のいずれか一項に記載の方法。５０．薬剤が抗炎症に有効な量で投与される、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼを過剰発現する前炎症性(proinflammatory)細胞の数または毒性を減じるための、請求項５１〜４９のいずれか一項に記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/00 ６４３Ａ６１Ｋ 31/00 ６４３Ｂ 31/70 ６１８ 31/70 ６１８ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療を必要とする対象におけるそのような疾患の治療方法であって、式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ₁は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ₂はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、対象に、疾患の治療に有効な量で投与することを含む治療方法。２．Ｒ₁がメチルであり、Ｒ₂が−Ｎ₃である、請求項１に記載の方法。３．式Ｉの化合物が、５−メチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシ −３′−アシドシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５ −プロピル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アシドシチジン、５−プロペン− ２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロペン−２′，３′−ジデオキシ−３ ′−アシドシチジン、５−プロピン−２′，３′−ジデオキシシチジン、および５−プロピン−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジトシチジンよりなる群から選択される、請求項１に記載の方法。４．疾患が、シトシンアラビノシド（ａｒａＣ）に耐性の白血病である、請求項１に記載の方法。５．抗白血病薬を対象に白血病の治療に十分な量で同時に投与することをさらに含む、請求項４に記載の方法。６．抗白血病薬がシトシンアラビノシド（ａｒａＣ）である、請求項５に記載の方法。７．疾患がＨＩＶ感染症である、請求項１に記載の方法。８．疾患が関節炎である、請求項１に記載の方法。９．対象がシチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患を発症するおそれがあり、活性化合物を予防的に有効な量で投与する、請求項１に記載の方法。１０．投与段階が、活性化合物を対象に非経口投与することによって行われる、請求項１に記載の方法。１１．投与段階が、活性化合物を対象に経口投与することによって行われる、請求項１に記載の方法。１２．シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする癌の治療を必要とする対象におけるそのような癌の治療方法であって、式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ₁は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ₂はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、対象に、上記疾患の治療に有効な量で投与することを含む治療方法。１３．Ｒ₁がメチルであり、Ｒ₂が−Ｎ₃である、請求項１２に記載の方法。１４．Ｒ₁が−ＣＦ₃である、請求項１２に記載の方法。１５．癌が、結腸の腺癌、肺の腺癌、胃の腺癌、乳房の腺癌、ヴィルムス腫、軟骨癌、軟骨肉腫、白血病、前立腺腫、神経膠腫、星状細胞腫、腎臓の腫瘍、膵臓の腫瘍、顎部腫瘍、肝芽腫、悪性肝癌、神経芽腫、網膜芽腫、黒色腫、基底細胞癌および肉腫よりなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。１６．式Ｉの化合物が、５−メチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５− エチル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−エチル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロピル−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジン、５−プロペン −２′，３′−ジデオキシシチジン、５−プロペン−２′，３′−ジデオキシ− ３′−アジドシチジン、５−プロピン−２′，３′−ジデオキシシチジン、および５−プロピン−２′，３′−ジデオキシ−３′−アジドシチジンよりなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。１７．式Ｉ：（式中、ＸおよびＸ₁は各々独立してＣまたはＮであり；Ｒ₁は低級アルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、ハロゲン、またはハロアルキルであり；そしてＲ₂はＨ、−Ｎ₃、−ＯＨ、アミノ、またはハロゲンである）の化合物またはその薬学的に許容される塩を、シチジンデアミナーゼまたはデオキシシチジンデアミナーゼの過剰発現を特徴とする疾患の治療に有効な量で、薬学的に許容される担体中に含む、請求項１２に記載の医薬組成物。１８．組成物が抗白血病薬をさらに含む、請求項１７に記載の医薬組成物。１９．抗白血病薬がシトシンアラビノシド（ａｒａＣ）である、請求項１８に記載の医薬組成物。２０．担体が、固体担体および液体担体よりなる群から選択される、請求項１７に記載の医薬組成物。