JPH11514331A

JPH11514331A - 抗原輸送用組成物

Info

Publication number: JPH11514331A
Application number: JP8521879A
Authority: JP
Inventors: ビーサンチアゴ，ノエミ; ハース，スーザン; レオーネ−ベイ，アンドレー; ジェイミルステイン，サム; バラントセビッチ，イブグエニ
Original assignee: エミスフェアーテクノロジーズインク
Priority date: 1995-01-13
Filing date: 1996-01-16
Publication date: 1999-12-07
Also published as: US5709861A; AU704776B2; HUP9702307A2; NO973250D0; EP0812212A1; WO1996021464A1; NO973250L; FI972945L; EP0812212A4; MX9705082A; CA2209492A1; PL321275A1; FI972945A0; FI972945A7; AU5131596A

Abstract

(57)【要約】本発明は、抗原の輸送に関する。抗原と、アシル化またはスルホン化アミノ酸またはポリアミノ酸を含む輸送システムが提供される。これらの組成物の調製及び投与方法も提供される・

Description

【発明の詳細な説明】抗原輸送用組成物発明の分野本発明は、抗原の輸送、好ましくは経口輸送に有用な組成物に関する。これらの組成物の調製及び投与方法も開示する。発明の背景抗原を目指す標的に輸送する従来の手段は、生物学的、化学的及び物理的障害物の存在によって制限されることが多かった。典型的には、これらの障害物は、それを通して輸送が行われる環境、輸送用標的の環境、または標的そのものによってもたらされる。多くの抗原にとっての循環系への経口輸送は、胃腸（ＧＩ）管の粘膜層や上皮細胞などの物理的障害がなければ、動物への投与の選択肢である。これらの障害は、ある種の抗原に対しては比較的不透過性であるが、経口経路で輸送されるべき抗原が循環系に到達するためには通り抜けなければならない。また、経口輸送は、ＧＩ管のｐＨ変化や、口腔及びＧＩ管に存在する強力な消化酵素の存在といった化学的障害によっても妨げられる。さらに、経口投与された可溶性抗原は、無反応状態即ち寛容を引き起こしうる。抗原の経口投与方法は既に開発されているが、それは、抗原発現及び適当な抗原表現細胞の摂取を向上させるために、弱毒化した微生物またはポリアクチド(p olyactide)／ポリグリコリド(polyglycolide)（ＰＬＡ／ＰＧＡ）小球体のいずれかを用いることに依存していた。しかし、弱毒化生物は、正当に誘導されなければ、毒性を再発することがあった。さらに、ＰＬＡ／ＰＧＡ小球体の広範囲の使用は不可能であった。これらのキャリアは有機溶媒を必要とし、抗原を変化または変性させる可能性があるからである。また、ＰＬＡ／ＰＧＡ系は調製が困難であった。近年、抗原を含む生物学的活性剤の輸送のための、混合アミノ酸（タンパク質）の人工ポリマーからなる小球体が開示された。Santiago，等，Pharmaceutical Res．Vol.10，No.8(1993)。しかし、この分野において、単純で、高価でなく、調製が容易な系であって、広範囲の抗原を、特に経口経路で輸送できる系が未だに要求されている。発明の要旨抗原輸送に有用な組成物を提供する。これらの輸送用組成物は、（ａ）抗原；及び（ｂ）キャリアからなり、このキャリアは、（ｉ）アシル化アミノ酸；（ｉｉ）少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸；（ｉｉｉ）スルホン化アミノ酸；（ｉｖ）少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸または（ｖ）それらの混合物からなる群から選択される。図面の簡単な説明図１は、ＯＶＡ抗原及び修飾アミノ酸キャリアの経口胃管栄養法で投与したマウスからのマウス脾臓細胞のＯＶＡ抗原に曝した後のオボアルブミンＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖を示すグラフである。図２は、ＯＶＡ抗原及び修飾アミノ酸キャリアの経口胃管栄養法で投与したマウスからのマウス脾臓細胞のＯＶＡ抗原に曝した後のＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖を示すグラフである。図３は、ＯＶＡ抗原及び修飾アミノ酸キャリアの経口胃管栄養法で投与したマウスからのマウス脾臓細胞のＯＶＡ抗原に曝した後のＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖を示すグラフである。図４は、ＯＶＡ抗原及び修飾アミノ酸キャリアの経口胃管栄養法で投与したマウスからのマウス脾臓細胞の種々の濃度のＯＶＡ抗原に曝した後のＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖を示すグラフである。図５は、対照群マウスからのマウス脾臓細胞のＯＶＡ抗原に曝した後のＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖を示すグラフである。図６は、対照群マウスからのマウス脾臓細胞の種々の濃度のＯＶＡ抗原に曝した後のＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖を示すグラフである。図７は、ＯＶＡ抗原及びＮ-シクロヘキサノイル−（ｌ）−チロシン及びＮ− シクロヘキサノイルロイシンの混合物で経口胃管栄養法で投与したマウスに誘発された抗−ＯＶＡＩｇＧタイターを示すグラフである。図８は、ＯＶＡ抗原を皮下プライミング投与し、次いで、ＯＶＡ抗原と混合スルホン化アミノ酸で経口追加抗原刺激したマウスに誘発された抗−ＯＶＡＩｇＧタイターを示すグラフである。発明の詳細な説明本発明は、種々の生物学的、化学的、及び物理学的障害を通した抗原の輸送に関する。本発明の組成物は、環境即ち生理学的減成を受ける抗原の輸送に特に適している。本発明が提供する他の利点は、容易に入手できる、即ち調製が容易な高価でない出発物質を用いることを含む。本発明の製剤方法は、これらの組成物を調製及び単離するのにコスト効率が良く、簡単に行なえ、なおかつ市販製品用の工業的規模にしやすい。本発明の組成物は、これらに限られないが、鳥類や例えば霊長類及びヒト等の哺乳類を含む動物に抗原を投与するのに有効である。本発明の輸送用組成物は、免疫反応を誘発する。抗原本発明で好ましく用いられる抗原は下記のものだが、これらに限定されない。合成または天然起源のタンパク質及びペプチド；多糖類に限られない炭水化物；脂質；例えば、細菌、ウイルス、寄生虫、及びそれらのサブユニットまたは抽出物といった生物学的起源から単離した抗原、あるいはこれらの組み合わせ。特に、連鎖球菌Streptcoccus pneumoniae，S．typhi VI carbohydrate，Hemophilus in fluenzae(type B)，Acellular B．pertussis，Neisseria meningiditis(A,C)，H ．influenzae(type B，Hib)，Clostridium tetani(破傷風)，及び，Corynebacte rium diphtheriae(ジフテリア)挙げることができる。キャリアアミノ酸は、本発明で有用なキャリアの調製に用いられる基本的な材料である。アミノ酸は、少なくとも１つのフリーなアミノ基を有するカルボン酸であり、天然及び合成アミノ酸である。本発明で用いるのに好ましいアミノ酸はα−アミノ酸、最も好ましいのは、天然α−アミノ酸である。多くのアミノ酸及びアミノ酸エステルが、例えば、Aldrich Chemical Co．(Milwaukee,WI,USA)；Sigma Che mical Co.(St.Louis，MO,USA)；及び、Fluka Chemical Corp．(Ronkonkoma,NY,U SA)等の多くの販売元から容易に入手できる。本発明で用いるのに好適な代表的かつ非限定的なアミノ酸は、下記の一般式で表される。式中、Ｒ¹は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₂−Ｃ₄アルケニルを示す。Ｒ²は、Ｃ₁−Ｃ₂₄アルキル、Ｃ₂−Ｃ₂₄アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）フェニル、（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）フェニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ナフチル、（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、フェニル（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）、ナフチル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、または、ナフチル（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）を示す。Ｒ²は、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₂−Ｃ₄アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、 −ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯ₂Ｒ³、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルケニル、３−１０の環原子を有し、ヘテロ原子がＮ、Ｏ、Ｓ、またはこれらの組み合わせの１つ以上であるヘテロ環、アリール、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルク(alk)）アリール、アル(ar)（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、またはこれらの組み合わせで任意に置換されていてもよい。Ｒ²は、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組み合わせによって任意に分断されていてもよい。Ｒ³は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₂−Ｃ₄アルケニルを示す。本発明で、アミノ酸即ちペプチドの成分として用いられる好ましい天然アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、ヒドロキシプロリン、γ− カルボキシグルタマート、フェニルグリシン、またはＯ−ホスホセリンである。最も好ましい天然アミノ酸は、アルギニン、ロイシン、リシン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、バリン、及びフェニルグリシンである。本発明で用いられる好ましい非天然アミノ酸は、β−アラニン、α−アミノブチル酸、γ−アミノブチル酸、γ−（アミノフェニル）ブチル酸、α−アミノイソブチル酸、シトルリン、ε−アミノカプロン酸、７−アミノヘプタン酸、β− アスパラギン酸、アミノ安息香酸、アミノフェニル酢酸、アミノフェニルブチル酸、γ−グルタミン酸、システイン、ε−リシン、ε−リシン、メチオニンスルホン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、ｄ−オルニチン、ｐ−ニトロ− フェニルアラニン、ヒドロキシプロリン、１，２，３，４−テトラヒドロイソキノリン−３−カルボン酸、及びチオプロリンである。ポリアミノ酸は、ペプチドでもよいし、例えばエステル、無水または無水結合といった結合可能な他の基によって形成される結合によって結合した２以上のアミノ酸であってもよい。ペプチドは、ペプチド結合で結合した２以上のアミノ酸である。ペプチドは、２つのアミノ酸のジペプチドから、数百のアミノ酸のポリペプチドまで変化することができる。Walker，Chambers Biological Dictionary，Cambridge，England ：Chambers Cambridge，1989，215頁参照。特に、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、及びペンタペプチドが挙げられ、中でも好ましいペプチドは、ジペプチド及びトリペプチドである。ペプチドは、ホモまたはヘテロペプチドであってよく、天然アミノ酸、合成アミノ酸、またはそれらの組み合わせを含んでよい。修飾アミノ酸、ポリアミノ酸、またはペプチドは、アシル化またはスルホン化されており、アミノ酸アミド及びスルホンアミドを含む。アシル化アミノ酸特に、下記式で表されるアシル化アミノ酸を挙げることができる。Ａｒ−Ｙ−（Ｒ⁴）_n−ＯＨＩＩここで、Ａｒは、置換または無置換フェニルまたはナフチルであり；Ｒ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₂₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₂₄アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）フェニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）フェニル、（Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル）ナフチル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ₁ −Ｃ₁₀アルキル）、フェニル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）、ナフチル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、または、ナフチル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）を示す。Ｒ⁵は、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、 −ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯ₂Ｒ⁷、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロ環アルキル、アルカリル、ヘテロアリール、ヘテロアルカリル、またはこれらの組み合わせで任意に置換されていてもよい。Ｒ⁷は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₁−Ｃ₄アルケニルを示す。Ｒ⁵は、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組み合わせによって任意に分断されていてもよい。Ｒ⁶は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₁−Ｃ₄アルケニルを示す。また、特に、下記式で表されるものを挙げることができる。ここで、Ｒ⁸は、（ｉ）シクロアルキルを示し、Ｃ₁−Ｃ₇アルキル、Ｃ₂−Ｃ₇アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₇アルコキシ、ヒドロキシ、フェニル、フェノキシまたは−ＣＯ₂Ｒ¹¹で任意に置換されていてもよく、Ｒ¹¹は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₁−Ｃ₄アルケニルを示す；あるいは、（ｉｉ）Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキルで置換されたＣ₁−Ｃ₆アルキルを示す。Ｒ⁹は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₂−Ｃ₄アルケニルを示す。Ｒ¹⁰は、Ｃ₁−Ｃ₂₄アルキル、Ｃ₂−Ｃ₂₄アルケニル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）フェニル、（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）フェニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）ナフチル、（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、フェニル（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）、ナフチル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、または、ナフチル（Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル）を示す。Ｒ¹⁰は、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₂−Ｃ₄アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＣＯ₂Ｒ¹²、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルキル、Ｃ₃−Ｃ₁₀シクロアルケニル、３−１０の環原子を有し、ヘテロ原子がＮ、Ｏ、Ｓ、またはこれらの組み合わせの１つ以上であるヘテロ環、アリール、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルク(alk)）アリール、アル(ar)（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、またはこれらの組み合わせで任意に置換されていてもよい。Ｒ¹⁰は、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組み合わせによって任意に分断されていてもよい。Ｒ¹²は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₂−Ｃ₄アルケニルを示す。いくつかの好ましいアシル化アミノ酸は、サリチロイルフェニルアラニン、及び以下の式で表される化合物を含む。特に、下記式で表される化合物を挙げることができる。ここで、ＡはＴｙｒ、Ｌｅｕ、Ａｒｇ、ＴｒｐまたはＣｉｔであり、ＡがＴｙｒ、Ａｒｇ、ＴｒｐまたはＣｉｔであるとき、Ａは２以上の官能基において任意にアシル化されていてもよい。好ましい化合物は、ＡがＴｙｒであるもの、ＡがＴｙｒであって２以上の官能基でアシル化されているもの、ＡがＬｅｕであるもの、ＡがＡｒｇであるもの、ＡがＡｒｇであって２以上の官能基でアシル化されているもの、ＡがＴｒｐであるもの、ＡがＴｒｐであって２以上の官能基でアシル化されているもの、ＡがＣｉｔであるもの、ＡがＣｉｔであって２以上の官能基でアシル化されているものである。さらに、下記式で表される化合物も挙げることができる。ここで、ＡはＡｒｇまたはＬｅｕであり、ＡがＡｒｇであるとき、Ａは２以上の官能基において任意にアシル化されていてもよい。ここで、ＡはＬｅｕまたはフェニルグリシンである。ここで、Ａはフェニルグリシンである。そして、ここで、Ａはフェニルグリシンである。アシル化アミノ酸は、単一のアミノ酸、２以上のアミノ酸混合物、またはアミノ酸エステル類を、アミノ酸に存在するフリーなアミノ基と反応してアミドを生成するアミン修飾剤と反応させることによって調製できる。アシル化アミノ酸の調製に有用なアシル化試薬の好適かつ非限定的な例としてここで、Ｒ¹³は、調製されるべき修飾アミノ酸に適した基、例えばアルキル、アルケニル、シクロアルキル、または芳香族基、特に、メチル、エチル、シクロヘキシル、フェニル、またはベンジル基を示すが、これらに限定されず、Ｘは脱離基を示す。典型的な脱離基は、塩素、臭素及びヨウ素等のハロゲンであるが、これらに限られない。アシル化剤の例は、非限定的に、塩化アセチル、塩化プロピル、塩化シクロヘキサノイル、塩化シクロペンタノイル、塩化シクロヘプタノイル、塩化ベンゾイル、塩化ヒプリル等のハロゲン化アシル、無水酢酸、無水プロピオン酸、無水シクロヘキサン酸、無水安息香酸、無水ヒブリル酸等の無水物を含むが、これらに限定されない。好ましいアシル化剤は、塩化ベンゾイル、塩化ヒプリル、塩化アセチル、塩化シクロヘキサノイル、塩化シクロペンタノイル、及び塩化シクロヘプタノイルである。また、アミン基は、カルボキシル基と、アミノ酸、特にフェニルアラニン、トリプトファン、及びチロシン等の浸水性アミノ酸のカルボジイミド誘導体といったカップリング試薬との反応によっても修飾できる。さらなる例として、ジシクロヘキシルカルボジイミド等を含む。アミノ酸が多官能性であるとき、即ち１以上の−ＯＨ、−ＮＨ₂、または−ＳＨを有するときは、任意に１またはそれ以上の官能基をアシル化して、例えばエステル、アミド、またはチオエーテル結合を形成してもよい。例えば、多くのアシル化アミノ酸の調製において、アミノ酸は、水酸化ナトリウムまたはカリウム等の金属水酸化物水溶液に溶解され、アシル化剤が添加される。反応時間は、約１から約４時間、好ましくは約２から約２．５時間の範囲とすることができる。混合物の温度は、通常は約５℃から約７０℃、好ましくは約１０度から約５０℃の範囲に維持する。アミノ酸のＮＨ₂基の当量当たりに用いるアルカリの量は、ＮＨ₂１当量につき、通常は約１．２５モルから約３モル、好ましくは約１．５モルから２．２５モルである。反応溶液のｐＨは、通常は約８から約１３、好ましくは約１０から約１２の範囲である。用いられるアミノ修飾剤の量は、アミノ酸のフリーなＮＨ₂の全モル量に基づくアミノ酸の量に関係する。一般に、アミノ修飾剤は、アミノ酸の全ＮＨ₂基モル当量につき、約０．５から約２．５モル当量、好ましくは約０．７５から１．２５モル当量の範囲である。修飾アミノ酸生成反応は、典型的には、例えば濃塩酸等の適当な酸で、混合物のｐＨを、約２から約３になるまで調節することによって停止(quench)される。混合物は、室温に放置することにより、透明な上相と白色またはオフホワイトの析出物とに分離する。上相は廃棄し、濾過またはデカンテーション(decantation )によって修飾アミノ酸を回収する。次いで、粗製の修飾アミノ酸を水に混合する。不溶性物質は濾過で取り除き、濾過物を真空で乾燥する。修飾アミノ酸の収率は、一般的には約３０から約６０％であり、通常は約４５％である。また本発明は、複数アシル化された、例えばジアシル化、トリアシル化された修飾アミノ酸も考慮する。アミノ酸エステルまたはアミドを出発材料とするときは、それらを、ヂメチルホルムアミドまたはピリジン等の適当な有機溶媒に溶解し、アミノ修飾剤と、約５℃から約７０℃、好ましくは約２５℃の温度で、約７から約２４時間反応させる。アミノ酸エステルに対して使用するアミノ修飾剤の量は、、アミノ酸について述べたものと同じである。その後、反応溶媒を陰圧で除去し、任意に、エステルまたはアミノ官能基を取り除く。これは、アミノ酸エステルを、例えば、１Ｎの水酸化ナトリウム等の適当なアルカリ溶液で、約５０℃から約８０℃、好ましくは７０℃の温度で、加水分解によってエステル基を除去し、フリーなカルボキシル基を持つ修飾アミノ酸を形成するのに十分な時間加水分解することによって取り除かれる。加水分解混合物は、次いで、室温に冷却し、例えば２５％塩酸水溶液で、ｐＨ約２カラ２．５まで酸性化する。修飾アミノ酸は溶液から析出し、濾過またはデカンテーション等の従来の手段によって回収される。修飾アミノ酸は、酸析出、再結晶、または固体カラム支持体での分画によって精製してもよい。分画は、シリカゲル、アルミナ等の適当な固体カラム支持体において、酢酸／ブタノール／水等の溶媒混合物を移動相として用いて行ってもよいし、移動相としてトリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物を用いた反転相カラム支持体で行ってもよいし、移動相として水を用いたイオン交換クロマトグラフィーで行ってもよい。また、修飾アミノ酸は、無機塩等の不純物を除去するために、メタノール、ブタノール、またはイソプロパノール等の低級アルコールで抽出することによって精製してもよい。修飾アミノ酸は、一般的にはアルカリ水溶液（ｐＨ≧９）に可溶であり、エタノール、ｎ−ブタノール、及びトルエン／エタノールの１：１（ｖ／ｖ）溶液には一部可溶であり、中性の水には不溶である。修飾アミノ酸のアルカリ金属塩、例えばナトリウム塩は、一般的に、ｐＨ約６−８において水に可溶である。ポリアミノ酸またはペプチドにおいて、１以上のアミノ酸を修飾（アシル化）できる。修飾ポリアミノ酸またはペプチドは、１以上のアシル化アミノ酸を含有する。線状修飾ポリアミノ酸及びペプチドは、一般的には、唯一のアシル化アミノ酸を含むが、ポリアミノ酸または及びペプチド配置は、１以上のアシル化アミノ酸を含むことができる。ポリアミノ酸及びペプチドは、アシル化アミノ酸を重合させてもよいし、重合後にアシル化してもよい。特に、下記の化合物を挙げることができる。ここで、Ａ及びＢは、独立に、ＡｒｇまたはＬｅｕである。スルホン化アミノ酸スルホン化修飾アミノ酸、ポリアミノ酸、及びペプチドは、少なくとも１つのフリーなアミン基を、該少なくとも１つのフリーなアミン基と反応するスルホン化剤でスルホン化することによって修飾される。特に、下記の式で表される化合物を挙げることができる。Ａｒ−Ｙ−（Ｒ¹⁴）−ＯＨＬＶここで、Ａｒは置換または非置換フェニルまたはナフチルである。Ｒ¹⁵は、Ｃ₁−Ｃ₂₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₂₄アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）フェニル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）フェニル、（Ｃ₁−Ｃ₁ ₀ アルキル）ナフチル、（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ₁−Ｃ₁ ₀ アルキル）、フェニル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）、ナフチル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルキル）、または、ナフチル（Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル）を示す。Ｒ¹⁵は、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、Ｃ₁−Ｃ₄アルケニル、Ｃ₁−Ｃ₄アルコキシ、−ＯＨ、−ＳＨ、−及びＣＯ₂Ｒ¹⁷、またはこれらの組み合わせで任意に置換されていてもよい。Ｒ¹⁷は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₁−Ｃ₄アルケニルを示す。Ｒ¹⁵は、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組み合わせによって任意に分断されていてもよい。Ｒ¹⁶は、水素、Ｃ₁−Ｃ₄アルキル、またはＣ₁−Ｃ₄アルケニルを示す。スルホン化アミノ酸の調製に有用なスルホン化剤の好適かつ非限定的な例としては、式Ｒ¹⁸−ＳＯ₂−Ｘで表されるスルホン化剤を含み、Ｒ¹⁸は、調製すべき修飾アミノ酸に好適な、例えば、アルキル、アルケニル、シクロアルキル、または芳香族基を示し、Ｘは前記のような脱離基を示す。スルホン化剤の一例は、塩化ベンゼンスルホン酸である。修飾ポリアミノ酸及びペプチドは、１以上のスルホン化アミノ酸を含む。線状修飾ポリアミノ酸及びペプチドは、一般的には、唯一のスルホン化アミノ酸を含むが、ポリアミノ酸または及びペプチド配置は、１以上のスルホン化アミノ酸を含むことができる。ポリアミノ酸及びペプチドは、スルホン化アミノ酸を重合させてもよいし、重合後にスルホン化してもよい。輸送システム本発明の１つの実施態様では、修飾アミノ酸、ポリアミノ酸、またはペプチドは、１以上の修飾アミノ酸、ポリアミノ酸、またはペプチドを、投与に先立って抗原と単に混合することによって直接キャリアとして使用できる。他の実施態様では、修飾アミノ酸は、抗原を含む小球体の形成に用いられる。ここで述べる抗原及びキャリアは、免疫反応の向上をもたらす。この利点は、特に小球体の形態において見られる。抗原含有小球体は、一般的には、マトリクス形態またはマイクロカプセル形態をとることができる。マトリクス形態は、中空マトリクス球体で、キャリアが中空の中心部の周囲にマトリクスの殻を形成し、活性剤がマトリクスを通して分配されるもの、および、固体マトリクス粒子で、キャリアが、活性剤を分配する球状マトリクス連続体を形成するものがある。マイクロカプセル形態は、活性剤が溶液状または固体状のいずれかでカプセルか去れ、キャリアがカプセル化された物質の周囲に殻を形成する。マイクロカプセル形態は、本発明のキャリアの自己集合によって最もしばしば形成される。輸送用組成物は、小球体形状をなし、キャリア小球体は、キャリアを適当な溶質中に溶解し、キャリア溶液を析出剤(precipitator)に接触させることにより、自己集合させることによって調製される。さらに、小球体は、従って、本発明の組成物を有し、ｐＨ調節によって、特定の酸、塩基、または中性のｐＨ領域で選択的に可溶化できる。酸性環境を標的とする組成物は、胃のｐＨの様な酸性ｐＨにおいて選択的に可溶化とすることができる。これらの組成物は、酸可溶性キャリアで調製される。酸可溶性キャリアは、約１から約６．８のｐＨ領域の少なくとも一部で、主にカチオン形態で存在する。しかし、約６．８より上、即ちｐＨ６．８より高い選択された領域では、キャリアは主にプロトン化されず水に不溶である。従って、キャリアは塩基性または中性ｐＨにおいて自己集合して小球体となり、輸送用組成物の活性剤は、キャリアが酸性ｐＨに出会って可溶化されるまで放出されない。アルカリ性環境を標的とする組成物は、腸の遠心部分のｐＨのようなアルカリ性ｐＨにおいて選択的に可溶となるようにすることができる。これらの組成物は、塩基可溶性キャリアで調製される。酸可溶性キャリアは、約７．２から約１１のｐＨ領域の少なくとも一部で、主にアニオン形態で存在する。しかし、７．２以下では、キャリアは主にプロトン化され水に不溶である。従って、キャリアは酸性または中性ｐＨにおいて自己集合して小球体となり、輸送用組成物の活性剤は、キャリアが塩基性ｐＨに出会って可溶化されるまで放出されない。中性環境を標的とする組成物は、中性ｐＨにおいて選択的に可溶となるようにすることができる。これらの組成物は、中性キャリアで調製される。中性可溶性キャリアは、中性ｐＨ、即ち約６．８から約７．２で、主に中性形態で存在する。しかし、この領域に上または下では、キャリアは不溶である。従って、キャリアは酸性または塩基性ｐＨにおいて自己集合して小球体となり、輸送用組成物の活性剤は、キャリアが中性ｐＨに出会って可溶化されるまで放出されない。典型的な小球体製剤では、最終溶液は、溶液１ｍｌ当たり約１０ｍｇから約２０００ｍｇ、好ましくは、溶液１ｍｌ当たり約７５から約２００ｍｇのキャリアを含む。この混合物は、任意に、約２０℃から約６０℃、好ましくは４０℃に、キャリアが溶解するまで加熱される。溶液中に残った粒子は、濾紙を通した重力濾過等の従来の手段によって濾過される。キャリア溶液は、通常は高温に維持したまま抗原及び析出剤と混合する。この析出剤は、例えば、酸不溶性キャリアでは、約１Ｎから約３Ｎの濃度の酢酸またはクエン酸等の酸性溶液、塩基不溶性キャリアでは塩基性溶液、中性不溶性キャリアでは中性溶液である。抗原は、析出化溶液と共に混合してもよく、別々に混合してもよい。その結果得られる混合物は、光学顕微鏡で小球体の形成が観察されるのに十分な時間保持される。キャリア溶液を析出化溶液に添加するのが好ましいが、析出化溶液をキャリア溶液に添加してもよい。上記の溶液は、任意に安定化剤などの手家財を含んでもよい。このような添加剤の存在は、活性剤の安定性及び分散性を向上させる。安定化添加剤は、約０．１から５％（ｗ／ｖ）、好ましくは０．５％（ｗ／ｖ）の濃度で用いられる。安定化添加剤の好ましく非限定的な例としては、緩衝塩、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリリシン、及びシクロデキストリンが含まれる。好ましい安定化剤は、アラビアゴム、ゼラチン、及びメチルセルロースである。小球体にカプセル化される抗原の量は、多くの要因に依存し、カプセル化溶液中の抗原濃度やそのキャリアに対する親和性も含む。最終的製剤の抗原濃度は、投与が要求される量によっても変化する。必要な場合、正確な濃度は、例えば反転相ＨＰＬＣ分析によって決定される。本発明の組成物が小球体形態であるとき、小球体の粒子サイズは、抗原の標的への輸送を効率的にするために変えうる。典型的には、本発明の小球体は１０μ ｍ未満、好ましくは約０．１μｍから約１０μｍであり、最も好ましくは０．２ μｍから約１０μｍである。抗原を含有する小球体のサイズは、カプセル化溶液のｐＨ、浸透圧、イオン強度、または溶液中のイオンのサイズ、及び／まてゃあ小球体形成及び負荷工程で用いる析出化剤といった種々の物理的または化学的パラメータを操作することによって制御できる。例えば、ＧＩ管では、冑腸管内の標的領域に抗原を有効に輸送するために、十分地位鯖小球体を用いるのが好ましい。小さな小球体は、球体を適当な流体（例えば生理食塩水）に懸濁し、筋肉内または皮下で循環系に直接注射することにより、非経口投与することができる。もちろん、輸送用組成物の投与形態は、投与すべき抗原の要求に依存する。大きなアミノ酸小球体（５０μｍ以上）は、経口輸送システムでは有効性が劣る傾向がある。本発明の組成物は、１以上の酵素阻害剤を含んでもよい。このような酵素阻害剤は、非限定的に、アクチノニン(actinonin)またはエピアクチノニン(epiactin inin)及びこれらの誘導体を含む。これらの化合物は次の構造を有する。これらの化合物の誘導体は、米国特許第５，２０６，３８４号に開示されている。アクチノニン誘導体は、次の式で表される。ここで、Ｒ¹⁹は、スルホキシメチル、または、カルボキシル、または、カルボキシアミド、ヒドロキシアミノカルボニル及びアルコキシカルボニルから選択される置換カルボキシル基を示し、Ｒ２０は、ヒドロキシル、アルコキシ、ヒドロキシアミノ、またはスルホキシアミノ基を示す。他の酵素阻害剤は、アプロチニン（トラシロール）及びバウマン−バーク阻害剤を含むが、これらに限定されない。本発明の組成物は、１以上の賦形剤（類）、希釈剤（類）、崩壊剤（類）、滑剤（類）、可塑剤（類）、着色剤（類）、または投与用溶液（類）を添加することによって投与単位に製剤される。好ましい投与単位形態は、経口投与単位形態である。最も好ましい投与単位形態は、錠剤、カプセル、または液体であるが、これらに限られない。投与単位形態は、生物学的または免疫源的に有効量の抗原を含有してもよいが、多数回投与で抗原の合計投与量とするときは、それより少ない量を含有してもよい。投与単位形態は、この分野における従来の方法で調製される。これらの量は、根本薬(prime)として用いるか、あるいは追加抗原刺激として用いるかによって変化する。本発明のキャリアは、抗原の生理学的及び生物学的特性を変化させない。さらに、カプセル化工程は、抗原の構造を変化させない。任意の抗原を、アミノ酸小球体に取り込むことができる。これらの組成物は、抗原による経口ワクチン化、免疫化において特に有利である一方、それが投与される動物の身体内の、小球体が標的領域に到達する前に出会う環境によって損傷されまたは有効性が劣化する。例えば、それ自身が胃腸粘膜を通過せず取り込まれない及び／または胃腸管の酸及び酵素によって化学的開裂を受けないペプチドまたはタンパク質抗原が輸送される。このような抗原は、例えば、非限定的に、インフルエンザ、ジフテリア、破傷風、はしか、ポリオ、肝炎等の疾患に抗しする免疫化を与えるのに用いられるようなものを含む。本発明の組成物は、ここで特定される粘膜及び血清の両方の抗体を誘発するのにより有効である。抗原は、例えば免疫刺激といった生物学的効果のために投与される。本発明の組成物または投与単位形態の投与は、好ましくは経口あるいは皮下または十二指腸内注入である。好ましい実施態様の説明以下の実施例は本発明を説明するが限定するものではない。実施例１Ｎ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−チロシンの調製（Ｌ）−チロシン（61.6g，0.34モル）を、１９０ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。塩化シクロヘキサノイル（49.32mL，0.34モル）を、この混合物に滴下した。２Ｎの水酸化ナトリウムをさらに添加し、反応混合物を室温で２時間攪拌した。次いで、混合物を水性（４：１）塩酸でｐＨ９．５まで酸性化した。生成した沈殿を真空濾過した。固体を２Ｎの水酸化ナトリウムに溶解し、凍結乾燥して３３．５ｇのＮ,Ｏ−ジシクロヘキサノイル−（Ｌ）−チロシンを得た。生成物を、ブタノール／酢酸／水を溶離液として用いたシリカゲル上のクロマトグラフィによって精製した。純粋な物質は白色固体であった。１．マススペクトル：Ｍ＋２３ｍ／ｅ３１４２．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d=6.8(d,2H); 6.4( d,2H); 4.4(m,1H); 2.5(ddd,2H); 2.0(m,2H); 1.6(m,10H); 1.2(m,10H)．３．ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：3350，2900，2850，1600，1520，1450，14 00，1300．実施例２Ｎ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニンの調製（Ｌ）−アルギニン（103.2g，0.6モル）を、６００ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。塩化シクロヘキサノイル（87mL，0.6モル）を、この混合物に滴下した。反応混合物を５０℃に２時間保持した。次いで、混合物を室温に冷却し、水性（４：１）塩酸でｐＨ２．３まで酸性化した。生成した沈殿をデカンテーションによって分離した。固体を２Ｎの水酸化ナトリウムに溶解し、凍結乾燥して６４．１ｇのＮ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニンを得た。生成物を、ブタノール／酢酸／水を溶離液として用いたシリカゲル上のクロマトグラフィによって精製した。単離した生成物は、Ｎ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニン、及び、Ｎ（α）-Ｎ（β）-ジシクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニンであった。Ｎ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニン１．マススペクトル：Ｍ＋１ｍ／ｅ３９５２．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍδ=8.75(br, 1H); 7.6(br,5H); 4.0(m,1H); 3.05(m,2H); 2.15(m,1H); 1.1-1.5(br.m,14H）．Ｎ（α）-Ｎ（β）-ジシクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニンであった。１．マススペクトル：Ｍ＋１ｍ／ｅ２８５２．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d=2.0(m,3H); 1.8- 1.4(br.m,17H); 1.3-1.0(br.m,20H)．実施例３Ｎ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−シトルリンの調製Ｌ−シトルリン（35.2g，0.2モル）を、２００ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。塩化シクロヘキサノイル（29mL，0.2モル）を、この混合物に滴下した。反応混合物を薬２５℃に１時間保持した。次いで、混合物を水性（４：１）塩酸でｐＨ２．６まで酸性化した。生成した沈殿をデカンテーションで分離した。固体をｐＨ６．５まで２Ｎの水酸化ナトリウムに溶解し、凍結乾燥して４４．２ｇのＮ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−シトルリンを得た。生成物は白色固体であった。１．マススペクトル：Ｍ＋２３ｍ／ｅ３０８２．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：d=4.1(dd,1H); 2.9 (t,2H); 2.1(m,2H); 1.6-1.2(br.m,14H)．３．ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：3400，3300，2950，2850，1700，1650，16 00，1450，1400 cm^-1．実施例４Ｎ−シクロペンタノイル−（Ｌ）−アルギニンの調製（Ｌ）−アルギニン（32.8g，0.19モル）を、１８８ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。塩化シクロペンタノイル（22.9mL，0.19モル）を、この混合物に滴下した。反応混合物を約２５℃に２時間保持した。次いで、水性（４：１）塩酸でｐＨ１．５まで酸性化した。生成した沈殿をデカンテーションによって分離した。固体を２Ｎの水酸化ナトリウムｐＨ７．５まで溶解し、凍結乾燥して６７．４ｇのＮ−シクロペンタノイル−（Ｌ）−アルギニンを得た。生成物は、白色固体であった。マススペクトル：Ｍ＋１ｍ／ｅ２７１．実施例５Ｎ−シクロヘキサノイル−（ｔ）−アルギニンの調製（ｔ）−アルギニン（14.2g，0.1モル）を、１００ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。塩化シクロヘキサノイル（13mL，0.098モル）を、この混合物に滴下した。反応混合物を２５℃に２時間保持した。次いで、混合物を室温に冷却し、水性（４：１）塩酸でｐＨ６．６まで酸性化した。生成した白色沈殿をデカンテーションによって分離した。固体を最小量の２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。生成物である白色固体（11.6g，49%）を、水性（４：１）塩酸で約７−９に酸性化することによってｐＨ低下により精製して単離した。Ｎ−シクロヘキサノイル−（Ｌ）−アルギニン１．マススペクトル：Ｍ＋１ｍ／ｅ２４２３２．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：ｐｐｍδ=4.9(s,1H ); 2.2(m,1H); 1.7-1.4(m,5H); 1.3-1.0(m,5H); 0.8(s,9H)．３．ＩＲ（ＫＢｒ）ｃｍ^-1：3350,2950,2850,1550,1500,1400 cm^-1．実施例１−５の方法に従って、以下のアミノ酸及びペプチドを合成した。シクロヘキサノイル−Ａｌａ、ｍ−（シクロヘキサノイルアミノ）安息香酸、ｐ−（シクロヘキサノイルアミノ）安息香酸、４−（シクロヘキサノイル−アミノ）ブチル酸、６−（シクロヘキサノイルアミノ）ヘキサン酸、シクロヘキサノイルアントラニル酸、シクロヘキサノイル−Ａｒｇ−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル−Ａｓｐ、無水イサトイ酸−Ａｓｐ(isatoicanhydride-Asp)、シクロヘキサノイル−Ｇｌｕ、シクロヘキサノイル−Ｇｌｙ、シクロヘキサノイル−Ｇｌｙ−Ａｒｇ、シクロヘキサノイル−Ｉｌｅ、シクロヘキサノイル−Ｌｅｕ、シクロペンタノイル−Ｌｅｕ、シクロペンタノイル−Ｌｅｕ、３−メチルシクロヘキサノイル−Ｌｅｕ、２−メチルシクロヘキサノイル−Ｌｅｕ、４−メチルシクロヘキサノイル−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル−（Ｄ）−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル− （ｔ）−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル−Ｌｅｕ−Ａｒｇ、シクロヘキサノイル− Ｌｅｕ−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル−（Ｄ）−Ｌｅｕ−（Ｌ）−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ、シクロヘキサノイル−Ｌｙｓ、シクロヘキサノイル−Ｏｒｎ、シクロヘキサノイル−Ｐｈｅ、シクロヘプタノイル− Ｐｈｇ、シクロヘキシルプロパノイル−Ｐｈｇ、シクロヘキサノイル−Ｐｈｇ、シクロペンタノイル−Ｐｈｇ、シクロプロパノイル−Ｐｈｇ、４−メチルシクロヘキサノイル−Ｐｈｇ、シクロヘキサノイル−（Ｄ）−Ｐｈｇ、シクロヘキサノイル−Ｔｉｏ、シクロヘキサノイル−Ｔｒｐ、シクロヘキサノイル−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ、シクロヘキサノイル−Ｖａｌ、シクロペンタノイル−Ｖａｌ、シクロヘキサノイル−Ｖａｌ−Ｖａｌ、シクロヘプタノイル−Ｌｅｕ、及び、シクロヘキシルプロパノイル−Ｌｅｕ。実施例６スルホン化４−（４−アミノフェニル）ブチル酸の調製４−（４−アミノフェニル）ブチル酸（20g，0.11モル）を、１１０ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウム溶液に溶解した。室温で約５分間攪拌した後、塩化ベンゼンスルホン酸（14.2mL，0.11モル）を、このアミノ酸溶液に１５分以上かけて滴下した。室温で約３時間攪拌した後、混合物を塩酸の添加でｐＨ２まで酸性化した。生成した薄褐色沈殿を濾過よって単離した。沈殿物を温水で洗浄して乾燥した。４ −（フェニルスルホンアミド）４−フェニルブチル酸の収量は２４．３ｇ（６９％）であった。融点は１２３−２５℃であった。必要ならば、この修飾アミノ酸を、再結晶及び／またはクロマトグラフィによって精製してもよい。実施例７スルホン化４−アミノ安息香酸の調製実施例６の方法に従って、４−アミノ安息香酸を４−（フェニルスルホンアミド）安息香酸に変換した。実施例８スルホン化４−アミノフェニル酢酸、４−アミノヒプリル酸、及び４−アミノメチル安息香酸の調製実施例６の方法に従って、４−アミノフェニル酢酸、４−アミノヒプリル酸、及び４−アミノメチル安息香酸を、各々、４−（フェニルスルホンアミド）フェニル酢酸、４−（フェニルスルホンアミド）ヒプリル酸、及び４−（フェニルする本アミドメチル）安息香酸に変換した。実施例９スルホン化アミノ酸混合物の調製反応の前に、１６のアミノ酸の混合物を調製した。混合物の成分を表１にまとめて示す。６５ｇのアミノ酸混合物（全［-ＮＨ₂］基濃度＝０．６１モル）を、７６０ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（０．７６２５当量）に室温で溶解した。２０分攪拌した後、塩化ベンゼンスルホン酸（７８ｍｌ、１当量）を２０分以上かけて添加した。次いで、反応混合物を２．５時間、加熱無しで攪拌した。幾分の沈殿が生じ、ＮａＯＨ溶液（２Ｎ）を溶液がｐＨ９．３になるまでさらに添加した。反応混合物を室温で終夜攪拌した。その後、混合物を希塩酸（３８％、１：４）で酸性化し、クリーム色の物質を析出させた。得られた析出物をデカンテーションで単離し、水酸化ナトリウム（２Ｎ）に溶解した。次いで、この溶液を真空下で取り除き、黄色固体を生じて真空乾燥した。実施例１０スルホン化アミノ酸混合物の調製９６．１ｇ（０．８５モルの-ＮＨ₂）のアミノ酸混合物（表２参照）を、６４３ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウム溶液（１．５当量）に溶解した。３０分室温で攪拌した後、塩化ベンゼンスルホン酸（１０８ｍｌ、０．８６モル）を１５分以上かけて滴下した。室温で２．５時間攪拌した後、反応混合物のｐＨ（ｐＨ５）を２Ｎ水酸化ナトリウム溶液でｐＨ９に調節した。反応混合物を室温で終夜攪拌した。その後、混合物を希塩酸（４：１、Ｈ₂Ｏ：ＨＣｌ）でｐＨ２．５に酸性化し、修飾アミノ酸の沈殿を析出させた。上相を除去し、得られた黄色沈殿物をデカンテーションで単離し、水で洗浄して２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。この溶液を真空下で取り除き、黄色固体を生じて真空乾燥した。原料修飾アミノ酸の収量は１３７．９ｇであった。実施例１１塩化ベンゾイルを用いた修飾アミノ酸混合物の調製８６ｇ（０．８５モルの-ＮＨ₂）のアミノ酸混合物（実施例１０の表２参照）を、６３７ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウム溶液（１．５当量）に溶解した。１０分室温で攪拌した後、塩化ベンゾイル（９９ｍｌ、０．８５モル）を１０分以上かけて滴下した。室温で２．５時間攪拌した後、反応混合物のｐＨ（ｐＨ１２）を２Ｎ希塩酸（４：１、Ｈ₂Ｏ：ＨＣｌ）でｐＨ２．５に調節し、修飾アミノ酸の沈殿を生ぜしめた。１時間放置の後、得られた沈殿物をデカンテーションで単離し、水で洗浄して水酸化ナトリウム（２Ｎ）に溶解した。次いで、この溶液を真空下で取り除き、修飾アミノ酸を白色固体（２２０．５ｇ）として得た。実施例１２スルホン化Ｌ−バリンの調製Ｌ−バリン（50g，0.43モル）を、室温で１０分間攪拌することにより、３７６ｍＬ（０．７５当量）の２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解した。次いで、塩化ベンゼンスルホン酸（68.7mL，0.38モル，1.25当量）を、このアミノ酸溶液に２０分以上かけて滴下した。室温で２時間攪拌した後、沈殿が現れた。沈殿を、２００ｍＬの２Ｎ水酸化ナトリウム溶液を更に添加することによって溶解した。さらに３０分間攪拌した後、希塩酸（４：１、Ｈ₂Ｏ：ＨＣｌ）を、反応混合物のｐＨが２．６になるまで添加した。修飾アミノ酸の沈殿が形成され、デカンテーションで回収した。この物質を、２Ｎ水酸化ナトリウムに溶解し、真空乾燥して白色固体を得た。原料修飾アミノ酸の収量＝８４．６ｇ、７７％。実施例１３ヒプリル酸を用いた修飾フェニルアラニンメチルエステルの調製Ｌ−フェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（15g，0.084モル）を、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（１００ｍＬ）に溶解し、そこにピリジン（３０ｍＬ）を添加した。塩化ヒプリル溶液（16.6g 0.084モル，100mL DMF中）を、このアミノ酸エステル溶液に２回に分けて即座に添加した。反応混合物を室温で終夜攪拌した。次いで、反応混合物を真空で濃縮し、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解した。溶液を７０℃で３時間加熱し、メチルエステルを加水分解してフリーのカルボキシル基とした。その後、溶液を希塩酸（１：３ＨＣｌ／Ｈ₂Ｏ）を用いてｐＨ２．２５まで酸性化した。ガム状の沈殿物が形成され、これを回収し、１Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。この溶液を真空下で濃縮し、１８．６ｇの原料修飾アミノ酸生成物を得た（収量＝１８．６ｇ）。アセトニトリルから再結晶した後、純粋な修飾アミノ酸（１２ｇ）を白色粉末として回収した。融点２２３−２２５℃。実施例１４抗原／キャリア組成物の調製キャリア溶液は、９００ｍｇのＮ−シクロヘキサノイル−（ｌ）−チロシンと、１．３ｇのＮ−シクロヘキサノイルロイシンとを、１．５ｍｌの水に添加することにより調製した。抗原溶液は、３ｍｇのオボアルブミン（ＯＶＡ）抗原を、１．５ｍｌの１．７Ｎクエン酸／１％アラビアゴム／２％シクロデキストリンの溶液に添加することにより調製した。キャリア溶液及びＯＶＡ抗原溶液を４０℃に加熱し、混合した。サンプルは、７５ｍｇ／ｍＬのキャリア濃度と１ｍｇ／ｍＬのＯＶＡ抗原濃度を有していた。実施例１５マウスにおける免疫反応下記の成分を用いて、標準ＣＲＰＭＩ細胞培養媒質を調製した。１．ＭＥＭアミノ酸溶液（５０^X）、(Gibco)（１０ｍｌ）２．ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（１０ＭＬ１００Ｘ）(Gibco)（１０ｍｌ）３．ＭＥＭピルビン酸ナトリウム（１００ｎＭ、１００^X）(Gibco)（１０ｍｌ）４．ＭＥＭビタミン溶液（１００^X）、(gibco)（１０ｍｌ）５．Ｌ−グルタミン（２００ｎＭ、１００^X）、(Gibco)（１０ｍｌ）６．ペニシリン−ストレプトマイシン、(Gibco)（１０ｍｌ）７．ゲンタマイシン試薬溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）、(Gibco)（１ｍｌ）８．Ｈｅｐｅｓ緩衝溶液（１Ｍ）、(Gibco)（２ｍｌ）９．２−メルカプトエタノール（５×１０Ｍ）、(Sigma)（１ｍｌ）１０．重炭酸ナトリウム、(Gibco)（２ｇ）１１．ＲＰＭＩ媒質１６４０、（Gibco）１リットルとする量洗浄用媒質として用いる時は、５容量％のＦＢＳ（Gemini Bioproducts Inc. ）を添加した。培養媒質としてもちいる時は、１０容量％のＦＢＳ(Hyclone)を添加した。絶食させたマウスにケタミンで麻酔をかけ、次いで、経口栄養法によって、実施例１４の方法に従って調製した抗原／キャリア組成物（０．１ｍｇのＯＶＡ抗原及び７．５ｍｇのキャリア）のプライミング投与量を投与した。この方法を、３群にわけたマウスに、以下の日程で続けた。群１：１、２、３、８、９、及び１０日目に投与。群２：８、９、及び１０日目に投与。群３：１０日目に投与。全ての群は、１０日目の最後のプライミング投与の８週間後、３回の連続した毎日の投与で追加抗原刺激した。投与過程が完了した後、マウスを犠牲にした。それらの脾臓を取り出し、脾臓細胞を得て以下のように調製した。１．鉗子で脾臓を細かく分ける。２．０．１ＭのＮＨ₄Ｃｌ-Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．１）で赤血球を溶解する。３．ＣＲＰＭＩ５％ＦＢＳで脾臓細胞を３回洗浄する。４．ＣＲＰＭＩ１０％ＦＢＳに脾臓細胞を再懸濁する。５．ヘマトサイトメータで脾臓細胞密度を数える。６．脾臓細胞密度を７×１０⁶／ｍｌに調節する。脾臓細胞は、ＯＶＡ抗原特異的Ｔ細胞増殖について検定した。増殖アッセイに用いた物質は以下のものである。１．平底プレート、９６ウェル(Corning)；２．チミジン、（メチル−３Ｈ−）−(Dupont)；３．ＣＶＡ（４ｍｇ／ｍｌ、ＣＲＰＭＩ中）；４．ｍＡｂｓ−抗−ＣＤ４（ＧＫＬ．５）---ラットＩｇＧ₁ｂ（ＡＴＣＣからのハイブリドーマ）；抗−ＣＤ８（２．４３）---ラットＩｇＧ₂ｂ（ＡＴＣＣからのハイブリドーマ）。アッセイ方法は以下の通りである。１．５０μｌまたは１００μｌの脾臓細胞懸濁液を各ウェルに添加する（７×１０³細胞／ウェル）。２．ＯＶＡ抗原溶液または培養媒質を添加する。３．対応する量のｍＡｂ溶液（４０μｇ／ｍｌ）または培養媒質を添加し全容量を２００μｌ／ウェルとする。４．ＣＯ２インキュベータで５日間インキュベートする。５．採収の１日前に、１μＣｉ／ウェルの³Ｈ−チミジンを添加する。６．細胞を採収し、ベータカウンターでチミジンを決定する。抗−ＣＤ４抗体または抗−ＣＤ８抗体を、幾つかのウェルに添加し、増殖がＣＤ４＋Ｔ細胞によることを示す。マウス群１、２、及び３からの２００μｇ／ｍｌの濃度のアッセイＯＶＡ抗原での細胞アッセイの結果を、各々図１、２、及び３に示した。種々のアッセイＯＶＡ抗原濃度でのマウス群３からの細胞アッセイの結果を、図４に例示する。比較例１５Ａ非免疫マウスを犠牲にした。脾臓細胞を得て、実施例１５の方法に従ってアッセイを行った。アッセイＯＶＡ抗原濃度２００μｇ／ｍｌでのアッセイの結果を図５に示す。種々のアッセイＯＶＡ抗原濃度でのアッセイの結果を図６に示す。実施例１６マウスでの抗原イン・ビボ実験マウスに、実施例１４の方法で調製した抗原／キャリア組成物を投与した。実施例１５の群１、２、及び３のマウスから、最初のプライミング投与後５２日目に血液サンプルを採取した。血清を、下記の方法でＥＬＩＳＡを用いてアッセイを行い、抗−ＯＶＡ血清ＩｇＧ誘導を測定した。血清ＩｇＧタイター決定（単一ユニットプレートの内部ウェルのみを使用）１．各ウェルに、１００μｌのＯＶＡ溶液（４μｇ／ｍｌ炭酸緩衝液中、ｐＨ９．６）を添加する。２．４℃で終夜インキュベートするか、室温で２時間振とうしながらインキュベートする。３．０．０５％のTween 20 を含むイミダゾール緩衝液に、５分間１回浸漬し、プレートを４回満たして洗浄する。４．３００μｌのＢＳＡを添加し、室温で３０分間インキュベートする。５．上記のように洗浄する。６．サンプルの最初の列、最初の標準曲線ウェル、及び正及び負の対照を除いて、各ウェルに１／１５に希釈したＢＳＡ１００ｍｌを添加する。７．サンプル及び対照を添加する。サンプル：各サンプルの１／２００の希釈液１５０μｌを、サンプル列の最初のウェルに配置する。５０μｌを厳密に３倍希釈する。正の対照：過剰免疫血清(hyper immune serum)の１／２０００希釈液の２００μ ｌを第１のウェルに配置する。１００μｌを厳密に２倍希釈し１／６４０００（６ウェル）とする。負の対照：無垢のマウスからのプールした血清（１／２００希釈）：１００μｌ。「バックグラウンド」：少なくとも２つのウェルの血清以外の全ての試薬。８．振とうしながら室温で２時間インキュベートする。９．０．０５％のTween 20 を含むイミダソール緩衝液を、５分間１回浸漬し、８回洗浄する。１０．１００μｌのGoat抗−マウスＩｇＧアルカリホスファターゼ複合体（４％ＰＥＧを含む１／１５ＰＢＳ／ＢＳＡ溶液で１／１０００に希釈）を添加する。１１．数分間振とうした後、４℃で終夜インキュベートする。１２．０．０５％のTween 20 を含むイミダゾール緩衝液で８回洗浄する。１３．新たに調製したｐＮＮＰ溶液１００μｌを各ウェルに添加し、暗中室温で現像する。１４．ＯＤ₄₀₅を読み取る。１５．１／２０００標準のＯＤ₄₀₅＝１．２となるとき（約０．５−１時間）記録する。１６．サンプルの抗体タイターを希釈液のＯＤの内挿から計算する。（ＯＤ₄₀₅ ＝３×バックグラウンドとなる最大希釈）。結果を図７に示す。実施例１７マウスにおける抗原イン・ビボ実験マウスは、ＯＶＡ抗原（１０μｇ）で皮下プライミング投与し、１０日後に経口投与で追加抗原刺激した（１００μｇＯＶＡ抗原及び実施例１０方法に従って調製したスルホン化アミノ酸混合物）。プライミング投与から２、２．５、５、６、１０、１２、１４、及び１６週間後に取り出した血液からの血清を、実施例１６の方法に従ってＥＬＩＳＡでアッセイを行い、抗−ＯＶＡ血清ＩｇＧタイターを測定した。結果を図８に示す。ここに述べた全ての特許、特許出願、出版物、試験方法は、参考文献として取り入れる。本発明の多くの変形例が、上記の詳細な説明を鑑みて、当業者にそれ自身を示唆している。そのような全ての変形は、添付する請求の範囲が求める全範囲の中に含まれる。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年３月１０日【補正内容】請求の範囲１．（ａ）抗原と、（ｂ）(i)アシル化アミノ酸； (ii)少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸； (iii)スルホン化アミノ酸； (iv)少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸；及び、 (v)これらの組み合わせからなる群から選択される物質からなる少なくとも１つのキャリアとからなる組成物。２．混合物である請求項１記載の組成物。３．小球体である請求項１記載の組成物。４．前記抗原がペプチドである請求項１記載の組成物。５．前記キャリアがアシル化アミノ酸である請求項１記載の組成物。６．前記キャリアが少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸である請求項１記載の組成物。７．前記キャリアがスルホン化アミノ酸である請求項１記載の組成物。８．前記キャリアが少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸である請求項１記載の組成物。９．（ａ）オボアルブミンと、（ｂ）(i)アシル化アミノ酸； (ii)少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸； (iii)スルホン化アミノ酸； (iv)少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸；及び、 (v)これらの組み合わせからなる群から選択される物質からなる少なくとも１つのキャリアとからなる組成物。１０．（Ａ）請求項１記載の組成物と、（Ｂ）(a)賦形剤、 (b)希釈剤、 (c)崩壊剤、 (d)滑剤、 (e)可塑剤、 (f)着色剤、 (g)投与溶液、または、 (h)これらの任意の組み合わせからなる投与単位。１１．錠剤、カプセル、または液体である請求項１０記載の投与単位。１２．動物に抗原を投与する方法であって、前記動物に請求項１記載の組成物を経口投与することからなる方法。１３．請求項１記載の組成物の調製方法であって、抗原と、 (i)アシル化アミノ酸； (ii)少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸； (iii)スルホン化アミノ酸； (iv)少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸；及び、 (v)これらの組み合わせからなる群から選択される物質からなる少なくとも１つのキャリアとを混合することからなる方法。【手続補正書】【提出日】１９９７年８月２６日【補正内容】（１）明細書第３頁５行目に「Ｎ-シクロヘキサノイル−（１）−チロシン」とあるのを、「Ｎ-シクロヘキサノイル−（Ｌ）−チロシン」に訂正する。（２）明細書第５頁下から７行目に「無水または無水結合」とあるのを、「または無水結合」に訂正する。（４）明細書第６頁下から１３行目に「Ｃ₁−Ｃ₂₄アルケニル」とあるのを、「Ｃ₂−Ｃ₂₄アルケニル」に訂正する。（５）明細書第６頁下から１２、１１、１０、及び９行目に「Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル」とあるのを、「Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル」に訂正する。（６）明細書第６頁下から８行目及び最終行に「Ｃ₁−Ｃ₄アルケニル」とあるのを、「Ｃ₂−Ｃ₄アルケニル」に訂正する。（７）明細書第１７頁下から６行目に「塩化プロピル」とあるのを、「塩化プロピオニル」に訂正する。（９）明細書第２０頁下から９行目に「Ｃ₁−Ｃ₂₄アルケニル」とあるのを、「Ｃ₂−Ｃ₂₄アルケニル」に訂正する。（１０）明細書第２０頁下から８、７、６、及び５行目に「Ｃ₁−Ｃ₁₀アルケニル」とあるのを、「Ｃ₂−Ｃ₁₀アルケニル」に訂正する。（１１）明細書第２０頁下から４行目及び最終行に「Ｃ₁−Ｃ₄アルケニル」とあるのを、「Ｃ₂−Ｃ₄アルケニル」に訂正する。（１２）明細書第２７頁５行目に「d=」とあるのを、「δ＝」に訂正する。（１３）明細書第２７頁１７行目に「d=」とあるのを、「δ＝」に訂正する。【手続補正書】【提出日】１９９８年６月２６日【補正内容】【図１】【図２】【図３】【図４】【図５】【図６】【図７】【図８】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 47/20 Ａ６１Ｋ 47/20 Ｚ 47/42 47/42 ＺＣ０７Ｋ 14/00 Ｃ０７Ｋ 14/00 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者レオーネ−ベイ，アンドレーアメリカ合衆国コネティカット 06877 リッジフィールドウッドランドウェイ 20 (72)発明者ミルステイン，サムジェイアメリカ合衆国ニューヨーク 10538 ラーチモントノールウッドドライブ１ (72)発明者バラントセビッチ，イブグエニアメリカ合衆国ニューヨーク 10801 ニューロシェルクーパードライブ 127

Claims

【特許請求の範囲】１．（ａ）抗原と、（ｂ）(i)アシル化アミノ酸； (ii)少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸； (iii)スルホン化アミノ酸； (iv)少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸；及び、 (v)これらの組み合わせからなる群から選択される物質からなる少なくとも１つのキャリアとからなる組成物。２．混合物である請求項１記載の組成物。３．小球体である請求項１記載の組成物。４．前記抗原がペプチドである請求項１記載の組成物。５．前記キャリアがアシル化アミノ酸である請求項１記載の組成物。６．前記キャリアが少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸である請求項１記載の組成物。７．前記キャリアがスルホン化アミノ酸である請求項１記載の組成物。８．前記キャリアが少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸である請求項１記載の組成物。９．（ａ）オボアルブミンと、（ｂ）(i)アシル化アミノ酸； (ii)少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸； (iii)スルホン化アミノ酸； (iv)少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸；及び、 (v)これらの組み合わせからなる群から選択される物質からなる少なくとも１つのキャリアとからなる組成物。１０．（Ａ）請求項１記載の組成物と、（Ｂ）(a)賦形剤、 (b)希釈剤、 (c)崩壊剤、 (d)滑剤、 (e)可塑剤、 (f)着色剤、 (g)投与溶液、または、 (h)これらの任意の組み合わせからなる投与単位。１１．錠剤、カプセル、または液体である請求項１１記載の投与単位。１２．動物に抗原を投与する方法であって、前記動物に請求項１記載の組成物を経口投与することからなる方法。１３．請求項１記載の組成物の調製方法であって、抗原と、 (i)アシル化アミノ酸； (ii)少なくとも１つのアシル化アミノ酸を含むポリアミノ酸； (iii)スルホン化アミノ酸； (iv)少なくとも１つのスルホン化アミノ酸を含むポリアミノ酸；及び、 (v)これらの組み合わせからなる群から選択される物質からなる少なくとも１つのキャリアとを混合することからなる方法。