JPH1179976A - 徐放性製剤の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】薬物含量が高く、初期放出の抑制された、かつ
安定した放出性を示す徐放性マイクロカプセルの提供。 【解決手段】生理活性物質を、脂溶性物質、特にビタミ
ンＥを含有する生体内分解性高分子重合物の有機溶媒溶
液に添加し分散・乳化させることを特徴とする徐放性マ
イクロカプセルの製造法、および該製造法により得られ
る徐放性マイクロカプセル。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、投与直後の生理活
性物質の過剰量の初期放出が抑制され、投与直後から長
期に亘って一定量の生理活性物質を安定的に放出する徐
放性マイクロカプセルおよびその製造法に関する。

【０００２】

【従来の技術】各種の生理活性ポリペプチドや低分子水
溶性薬物の徐放性マイクロカプセルについては多くの報
告があるが［クリティカル リビュー イン セラピュー
ティック ドラッグ キャリアー システム(Critical Rev
iews in Therapeutic Drug Carrier Systems), 12巻, 1
-9頁(1995); 特表平2-503315号公報; EPA 0586238; ジ
ャーナル オブ ファーマシューティカル サイエンス(J.
Pharm.Sci.), 75巻, 750-755頁(1986); 特開昭57-11851
2号公報］、それらの多くが、(1)製造工程において薬物
の外水相への漏出が大きく薬物の封入率が低い、(2)得
られるカプセルは一般的に多孔質で初期放出が大きい、
また、(3)製造工程により生理活性物質が変性し、十分
な生物学的利用率が得られない、と云う欠点を有してお
り、満足すべき長期の徐放性を達成していないのが現状
である。マイクロスフィアの徐放性の改善について、特
開昭61-63613号には、ポリ乳酸を基剤とするマイクロス
フィアの投与一定時間経過後の活性成分の放出速度の低
下を防止する目的で、活性成分を分散させるポリ乳酸の
有機溶媒溶液中に、該溶媒に溶解しかつ生体内で消化さ
れる脂溶性の添加物（中鎖脂肪酸トリグリセリド、低級
脂肪酸トリグリセリド等）を均一に溶解することが記載
されている。しかしながら、他の基剤への応用や活性成
分の水溶液を用いるマイクロカプセルの調製についての
示唆はない。特開平8-151321号公報には、無晶型水溶性
生理活性物質と高分子重合物とを含み、Ｓ／Ｏ／Ｗ型乳
化物から製造されるマイクロカプセルが開示されている
が、薬物の水溶液を内水相として用いるマイクロカプセ
ルの製造法や水溶性生理活性ペプチドの金属複合体を用
いる方法については一切記載されていない。また、ＥＰ
０７６５６６０号公報には、無晶型２−ピペラジノン
−１−酢酸誘導体を含有するマイクロカプセルが記載さ
れており、その製造において、Ｓ／Ｏ／Ｗ型乳化物が用
いられている。しかし薬物水溶液を内水相として用いる
マイクロカプセルの製造法や水溶性生理活性ペプチドの
金属複合体を用いる方法についての記載はない。一般
に、水溶性生理活性物質のマイクロカプセルの製造にお
いては、薬物含量の均質性や操作性の点で、薬物を固体
状で用いる例えば、Ｓ／Ｏ型よりもＷ／Ｏ型の方が優れ
ており、工業規模での大量生産においては、Ｗ／Ｏ型で
用いることが望まれている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】生体内分解性高分子重
合物を用いた徐放性製剤は、生理活性物質の初期放出、
特に投与１日以内の過剰量の放出が抑制され、しかも長
期に亘って一定量の生理活性物質が安定的に放出される
のが好ましい。このような生理活性物質の生理活性を保
持しながら、初期放出が少なく、かつ長期に亘る一定し
た徐放性を有する均質なマイクロカプセルを簡便に製造
しうる製造法を提供することである。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記課題を
解決するため鋭意研究した結果、水溶性生理活性物質の
徐放性マイクロカプセルの製造法において、該生体内分
解性高分子重合物の有機溶媒溶液に、あらかじめ油脂類
を約3％〜約30％添加した均一有機溶媒溶液を油相とし
て用いることにより、投与直後の生理活性物質の過剰量
の初期放出が抑制され、しかも長期に亘って一定した放
出性を示す、非常に優れた徐放性マイクロカプセルを製
造できることを見出した。これに基づいてさらに鋭意研
究した結果、本発明を完成した。すなわち、本発明は
（1）水溶性生理活性物質のマイクロカプセルの製造法
において、水溶性生理活性物質を含む水溶液を内水相と
し、生体内分解性高分子重合物及び油脂類を含む均一有
機溶媒溶液を油相とするｗ／ｏ型乳化物を形成させ、有
機溶媒を除去することを特徴とする徐放性マイクロカプ
セルの製造法、（2）ｗ／ｏ型乳化物を水相に分散さ
せ、水中乾燥法により有機溶媒を除去する上記(1)記載
の製造法、（3）水溶性生理活性物質と塩基性物質とを
含む水溶液を内水相とする上記(１)記載の製造法、
（4）水溶性生理活性物質が分子量約２００から約８０,
０００のポリペプチドである上記(1)記載の製造法、
（5）水溶性生理活性物質がインテグリン拮抗物質であ
る上記(1)記載の製造法、

【０００５】（6）インテグリン拮抗物質がＧＰIIb／II
Ia 拮抗物質である上記(5)記載の製造法、（7）ＧＰIIb
／IIIa 拮抗物質が、式(I)

【化２】 〔式中、Ａ¹及びＡ²はそれぞれプロトン受容基又はプロ
トン受容基に変換し得る基を、Ｄはヘテロ原子及び／又
は５もしくは６員環を介していてもよい２ないし６の原
子鎖のスペーサー（但し、５もしくは６員環は結合位置
により２又は３原子鎖と換算する）を、Ｒ¹は水素原子
又は炭化水素基を、Ｒ²は水素原子又はα−アミノ酸か
ら−ＣＨ(ＮＨ₂)ＣＯＯＨを除いた残基を示すか、又は
Ｒ¹とＲ²は結合して５もしくは６員環を形成してもよ
く、Ｐはヘテロ原子及び／又は５もしくは６員環を介し
ていてもよい１ないし１０の原子鎖のスペーサー（但
し、５もしくは６員環は結合位置により２又は３原子鎖
と換算する）を、Ｙはエステル化又はアミド化されてい
てもよいカルボキシル基を、ｎは０ないし８の整数を示
す。〕で表される2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体または
その塩である上記(6)記載の製造法、（8）2-ピペラジノ
ン-1-酢酸誘導体（I)が(S)-4-(4-グアニジノベンゾイル
アミノ)アセチル-3-[3-(4-グアニジノベンゾイルアミ
ノ)]プロピル-2-オキソピペラジン-1-酢酸である上記
(7)記載の製造法、（9）2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体
(I)の塩が(S)-4-(4-グアニジノベンゾイルアミノ)アセ
チル-3-[3-(4-グアニジノベンゾイルアミノ)]プロピル-
2-オキソピペラジン-1-酢酸 塩酸塩である上記(7)記載
の製造法、（10）2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体(I)の塩
が(S)-4-(4-グアニジノベンゾイルアミノ)アセチル-3-
[3-(4-グアニジノベンゾイルアミノ)]プロピル-2-オキ
ソピペラジン-1-酢酸 ２塩酸塩である上記(7)記載の製
造法、（11）生体内分解性高分子重合物が脂肪族ポリエ
ステルである上記(1)記載の製造法、（12）脂肪族ポリ
エステルが乳酸・グリコール酸共重合物である上記(11)
記載の製造法、（13）油脂類が脂溶性ビタミンである上
記(1)記載の製造法、（14）脂溶性ビタミンがα−トコ
フェロールである上記(13)記載の製造法、

【０００６】（15）油脂類の徐放性マイクロカプセル全
量に対する最終含有率が約３％ないし約３０％(w/w)で
ある上記(1)記載の製造法、（16）水溶性生理活性物質
と塩基性物質とを含む水溶液を内水相とし、生体内分解
性高分子重合物と油脂類とを含む均一有機溶媒溶液を油
相とするＷ／Ｏ型乳化物を水相に分散させてＷ／Ｏ／Ｗ
型乳化物を形成させ、水中乾燥に付し有機溶媒を除去す
る上記(1)記載の製造法、（17）塩基性物質が塩基性ア
ミノ酸である上記(3)または(16)記載の製造法、（18）
塩基性アミノ酸がL-アルギニンである上記(17)記載の製
造法、（19）塩基性物質の徐放性マイクロカプセル全量
に対する最終含有率が約１％ないし約８％(w/w)である
上記(3)または(16)記載の製造法、（20）水溶性生理活
性ペプチドの金属複合体を、生体内分解性高分子重合物
と油脂類とを含む均一有機溶媒溶液に分散させたＳ／Ｏ
型分散液より有機溶媒を除去することを特徴とする徐放
性マイクロカプセルの製造法、（21）Ｓ／Ｏ型分散液を
水相に分散させてＳ／Ｏ／Ｗ型乳化物を形成させ、水中
乾燥法により有機溶媒を除去する上記(20)記載の製造
法、（22）水溶性生理活性ペプチドがヒト成長ホルモン
である上記(20)記載の製造法、（23）水溶性生理活性ペ
プチドの金属複合体がヒト成長ホルモンの亜鉛複合体で
ある上記(20)記載の製造法、（24）上記(1)記載の製造
法で製造される徐放性マイクロカプセル、（25）上記(2
0)記載の製造法で製造される徐放性マイクロカプセル、
（26）水溶性生理活性物質を含む水溶液を内水相とし、
生体内分解性高分子重合物を含む有機溶媒溶液を油相と
するｗ／ｏ型乳化物を形成させ、有機溶媒を除去するこ
とを特徴とする徐放性マイクロカプセルの製造のための
油脂類の使用、（27）水溶性生理活性ペプチドの金属複
合体の徐放性マイクロカプセルの製造のための油脂類の
使用、などに関する。

【０００７】本明細書において、アミノ酸、ペプチド、
保護基などに関して略号で表示する場合、IUPAC-IUB Co
mmission on Biochemical Nomenclatureによる略号ある
いは当該分野における慣用略号に基づくものとし、また
アミノ酸に光学異性体がありうる場合は、特に明示しな
ければＬ体を示すものとする。本明細書中マイクロカプ
セルとは、生理活性物質と高分子重合物を含有する微粒
子マイクロスフェア、マイクロパーティクル、ナノパー
ティクル、ナノスフェア、ナノカプセルの総称を意味す
る。本明細書中Ｓ/Ｏ/Ｗ型乳化物およびＷ/Ｏ/Ｗ型乳化
物とは、それぞれ固/油/水(水中油中固相)型乳化物およ
び水/油/水(水中油中水相)型乳化物を意味する。本発明
に用いられる水溶性生理活性物質としては水溶性の薬物
であれば特に限定されないが、生理活性ポリペプチドあ
るいは抗血小板剤（例えば、インテグリン拮抗物質）、
抗腫瘍剤、抗生物質、解熱鎮痛消炎剤、鎮咳去痰剤、鎮
静剤、筋弛緩剤、抗てんかん剤、抗潰瘍剤、抗鬱剤、抗
アレルギー剤、強心剤、不整脈治療剤、血管拡張剤、降
圧利尿剤、糖尿病治療剤、抗凝血剤、止血剤、抗結核
剤、ホルモン剤、麻薬拮抗剤、骨吸収抑制剤、骨形成促
進剤、血管新生抑制剤などとして用いられる化合物など
が挙げられる。

【０００８】該水溶性生理活性物質としては、２５℃に
おいて水に対する溶解度が０．１％（w/w）以上、好ま
しくは１％（w/w）以上であるものが具体的に挙げられ
る。本発明の構成成分である生理活性ポリペプチドとし
ては、哺乳動物にとって有用な生理活性を有し、臨床上
用いることができる種々のペプチドまたはタンパク質が
挙げられる。該「生理活性ポリペプチド」は、その分子
量が、モノマーとして、例えば約２００ないし約２０
０,０００のものが用いられ、好ましくは約２００ない
し約８０,０００のものが汎用される。好ましい生理活
性ポリペプチドには、生化学の分野で高次構造を有する
と云われるタンパク質に分類される高分子が含まれる。
本発明で用いられる生理活性ポリペプチドの種類は、本
発明の目的が達成される限り特に限定されないが、その
活性の代表的なものとしては、例えば成長因子類、サイ
トカイン類、酵素類およびホルモン類などが挙げられ
る。より具体的には、例えば以下のペプチドないしタン
パク質などが挙げられる。

【０００９】（１）成長因子類としては、例えば神経成
長因子(ＮＧＦ−１，ＮＧＦ−１など)、神経栄養因子
(ＮＴＦ)、上皮細胞成長因子(ＥＧＦ)、血小板由来増殖
因子（ＰＤＧＦ)、インスリン様成長因子(ＩＧＦ−１，
ＩＧＦ−２，ＩＧＦ−３など)、繊維芽細胞増殖因子
（ａＦＧＦ，ｂＦＧＦ)、骨形成原成長因子（ＢＭＰ−
１，ＢＭＰ−２，ＢＭＰ−３，ＢＭＰ−４など)、心房
性ナトリウム利尿因子（ＡＮＰ)、軟骨誘導因子などが
挙げられる。 （２）サイトカイン類としては、例えばインターフェロ
ン類(ＩＦＮ−α，−β，−γなど)、インターロイキン
類（ＩＬ−１〜ＩＬ−１１など)、カケクチン、オンコ
スタチン、コロニー刺激因子類(Ｇ−ＣＳＦ，Ｍ−ＣＳ
Ｆ，ＧＭ−ＣＳＦなど)、トロンボポエチン(ＴＰＯ)，
エリスロポエチン(ＥＰＯ)などが挙げられる。 （３）酵素類としては、例えば組織プラスミノーゲン・
アクチベータ（ｔＰＡ)、ウロキナーゼ（ＵＫ）、スト
レプトキナーゼ、プロテインＣ、メタロプロテアーゼ
類、スーパーオキシド・ディスムターゼ（ＳＯＤ)、第
ＶＩＩＩ及びＩＸ因子などが挙げられる。 （４）ホルモン類としては、例えば成長ホルモン（Ｇ
Ｈ)、成長ホルモン放出因子(ＧＲＦ)、インスリン、グ
ルカゴン、ガストリン、プロラクチン、副腎皮質刺激ホ
ルモン(ＡＣＴＨ)、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ)、卵
胞刺激ホルモン(ＦＳＨ)、黄体形成ホルモン(ＬＨ)、ヒ
ト絨毛性ゴナドトロピン(ｈＣＧ)、カルシトニンなどが
挙げられる。該生理活性ポリペプチドの好ましい例とし
ては、例えばホルモン類〔例えば、成長ホルモン類（ヒ
ト成長ホルモン類など)、インスリン類（ヒトインスリ
ン類など)など〕、サイトカイン類（例えば、インター
フェロン類、インターロイキン類など)などが挙げられ
る。

【００１０】本発明で用いられる生理活性ポリペプチド
は、天然由来あるいは遺伝子組換えやペプチド合成技術
によって人工的に得られた合成品、半合成品、遺伝子組
換体〔例えば、遺伝子組換えヒト成長ホルモン（以下、
rhＧＨと略称することがある）〕いずれでもよい。これ
らはその活性に影響のない限り糖鎖を有していてもよ
く、また糖鎖構造が本来の構造と異なっていてもよい。
さらに、これらは任意の生理活性ポリペプチドまたは蛋
白のムテイン、誘導体、類縁体および活性フラグメント
なども含む。以下において「生理活性ポリペプチド」、
「成長ホルモン類」、「インスリン類」、「インターフェ
ロン類」、「インターロイキン類」は、それぞれこれら糖
鎖を有しているもの、ムテイン、誘導体、類縁体および
活性フラグメントを含む。さらに生理活性ポリペプチド
が任意のポリペプチドのムテイン、誘導体、類縁体であ
る場合、その作用機作は作動性あるい拮抗性のいずれで
もよい。また、本発明で用いられる生理活性ポリペプチ
ドは、金属原子と複合体（コンプレックス）を形成して
いてもよい。ポリペプチドの金属複合体（金属コンプレ
ックス）としては、ポリペプチドの水不溶性または水難
溶性多価金属複合体や金属錯体などが挙げられる。かか
る金属複合体を形成させる金属としては、生体に悪影響
をおよぼさない金属であれば特に限定されないが、水溶
性多価金属（２価、３価あるいは４価の金属、例えば
鉄、銅、亜鉛等の遷移金属、アルミニウム等のIIIb族金
属、錫等のIVb族金属など）が好ましい。また、ポリペ
プチドの金属複合体としては、生理活性ポリペプチドと
水溶性多価金属塩(例えば、前記多価金属と塩酸、硫
酸、硝酸、チオシアン酸等の無機酸との塩あるいは前記
多価金属と脂肪族カルボン酸（例えば、脂肪族モノ、
ジ、トリカルボン酸、好ましくは、炭素数２ないし９の
脂肪族カルボン酸など）、芳香族酸（例えば、安息香
酸、サリチル酸など）などの有機酸との塩）の接触によ
り得られる生理活性ポリペプチド金属塩が好ましい。該
生理活性ペプチド金属塩は、生理活性ポリペプチドと水
溶性多価金属塩とを両者の溶解性を極端に下げない範囲
で選択されたｐＨに調製された水溶液中で混合すること
により生成され得る。この際、生理活性ポリペプチドと
水溶性多価金属塩との量比(モル比)は、例えば１：１〜
１：１０００、好ましくは１：１〜１：１００、より好
ましくは１：１〜１：５０であり、両者の濃度はそれぞ
れ単独の溶解度範囲内でかつ生成する複合体の溶解度以
上である事が望まれる。また水溶液は、必要に応じて弱
酸性、中性あるいは弱酸性に調製される。生理活性ポリ
ペプチドが分子内に酸性基（例、カルボキシル基、スル
ホ基など）を有する場合、マイクロカプセルへの取り込
み率の向上、及び放出性のコントロールの目的で、多価
金属との水不溶性または水難溶性複合体とすることは有
効である。

【００１１】抗血小板剤としてはインテグリン拮抗物
質、さらにはＧＰIIb／IIIa 拮抗物質が挙げられる。Ｇ
ＰIIb／IIIa 拮抗物質としては例えば、蛇毒ペプチド
（例、バルブリン（barbourin）、あるいはＡrg−Ｇly
−Ａsp 配列を有するペプチド、例えばＡrg−Ｇly−Ａs
p−Ｓer、（Ａrg−Ｇly−Ａsp−Ｓer）テトラマー、Ｇl
y−Ａrg−Ｇly−Ａsp−Ｓer−Ｐro、シクロ−Ｓ,Ｓ−
〔Ａc−Ｃys(Ｎα−メチル)Ａrg−Ｇly−Ｄ−Ａsn−ペ
ニシラミン〕−ＮＨ₂（ＳＫ＆Ｆ−１０６７６０：ファ
ーマシューティカル リサーチ（Pharm. Res.)，11巻，1
358-1390頁 1994年)、さらにＧＰIIb／IIIa 拮抗作用と
同様の活性を有する化合物、例えば(Ｓ)−４−〔(４−
アミジノベンゾイル)グリシル〕−３−メトキシ−カル
ボニルメチル−２−オキソピペラジン−１−酢酸、４−
(４−アミジノベンゾイルグリシル)−２−オキソピペラ
ジン−１，３−２酢酸・塩酸塩、Ｌ−Ｔyr−Ｎ−(ブチ
ルスルホニル)−Ｏ−〔４−(４−ピペリジニル)ブチ
ル〕モノハイドロクロライド（Ｌ−７００４６２／ＭＫ
−３８３：サーキュレーション（Circulation) 88巻，1
512-1517頁，1993年)、エチル ３Ｓ−〔４−〔〔４−
(アミノイミノメチル)フェニル〕アミノ〕−１，４−ジ
オキソブチル〕アミノ−４−ペンチノエート 塩酸塩
（ＳＣ−５４６８４Ａ：Circulation，91巻，403-410
頁，1995年)、〔１−〔Ｎ−(ｐ−アミジノフェニル)−
Ｌ−Ｔyr〕−４−ピペリジニル〕酢酸（Ｒo−４４−９
８８３：Thromb. Haemostas.，70巻，817-821頁，1993
年)、サイクリック〔Ｄ−２−アミノブチリル−Ｎ−２
−メチル−Ｌ−Ａrg−Ｇly−Ｌ−Ａsp−３−アミノメチ
ル−安息香酸〕メタンスルフォン酸塩（ＤＭＰ７２８：
Circulation，89巻，3-12頁，1994年）、式

【化３】 で表される(3S-trans)-5-[[[4'-(アミノイミノメチル)-
[1,1'-ビフェニル]-4-イル]オキシ]メチル]-2-オキソ-
ピロリジン-3-酢酸 (Fradafiban; BIBU 52: Circulatio
n, 96, 1130-1138, 1997)、2(S)-[(p-トルエンスルホニ
ル)アミノ]-3-[[[5,6,7,8-テトラヒドロ-4-オキソ-5-[2
-(ピペリジン-4-イル)エチル]-4H-ピラゾロ[1,5-a][1,
4]ジアゼピン-2-イル]カルボニル]アミノ]プロピオン酸
(L-738,167:The Journal of Pharmacology and Experi
mental Therapeutics, 281, 677-689, 1997)、式

【化４】 で表されるイントリフィバン（Intrifiban）[インテグ
リン（Integrelin）] (Circulation, 94, 2083-2089, 1
996)、式

【化５】 で表されるＦＫ−６３３(特開平５−１４８２０７)、な
どが挙げられる。またＧＰIIb／IIIa 拮抗物質としては
例えば、前記式(Ｉ)で表される２-ピペラジノン-1-酢酸
誘導体（I）またはその塩が挙げられる。前記式(Ｉ)で
表される２-ピペラジノン-1-酢酸誘導体（I）として
は、例えば、ＷＯ９６／３３９８２に記載された化合物
などが挙げられるが、なかでも、Ａ¹及びＡ²がそれぞれ
（１）置換基としてＣ_2-8アルコキシカルボニルオキシ
基またはＣ_2-8アルコキシカルボニル基をそれぞれ有し
ていてもよいアミジノ基またはグアニジノ基、（２）オ
キソ基またはハロゲン化されていてもよいＣ_1-4アルキ
ル基で置換されていてもよいオキサジアゾリル基を有し
ていてもよいアミノ基、または（３）オキソ基またはハ
ロゲン化されていてもよいＣ_1-4アルキル基で置換され
ていてもよいオキサジアゾリル基［好ましくは、（１）
メトキシカルボニルオキシをそれぞれ有していてもよい
アミジノ基またはグアニジノ基または（２）置換基とし
て５−オキソ−１,２,４−オキサジアゾール−３−イル
または５−トリフルオロメチル−１,２,４−オキサジア
ゾール−３−イルを有していてもよいアミノ基］であ
り、Ｄが式

【化６】 〔式中、ａは０〜２の整数を示す〕で表される基［好ま
しくは、フェニレン基］であり、Ｒ¹が水素原子であ
り、Ｒ²が水素原子又はＣ_1-4アルコキシ基で置換されて
いてもよいフェニル基を有していてもよいＣ_1-4アルキ
ル基［好ましくは、水素原子又はｐ−メトキシベンジル
基］であり、Ｐが式−Ｚ−Ｂ−〔式中、Ｚは結合手、−
ＮＨ−または−ＮＨ−ＣＯ−を示し、Ｂは式

【化７】 （式中、ｂは０〜１の整数を示し、ｃは１〜５の整数を
示す）で表される基を示す〕で表される基［好ましく
は、式

【化８】 で表される基］であり、Ｙが式−ＣＯ−Ｒ⁷〔式中、Ｒ⁷
は（１）ヒドロキシ基、（２）置換基としてＣ_1-4アル
コキシ−カルボニル基または５−メチル−２−オキソ−
１,３−ジオキソレン−４−イル基をそれぞれ有してい
てもよいＣ_1-8アルコキシ基またはＣ_2-12アルケニリル
オキシ基、または（３）式−ＯＣＨ(Ｒ^7a)ＯＣＯＲ
⁸（式中、Ｒ^7aは水素原子またはＣ_1-6アルキル基を示
し、Ｒ⁸はＣ_1-6アルキル基またはＣ_5-7シクロアルキル
オキシ基を示す）で表される基を示す〕で表される基
［好ましくは、カルボキシル基］であり、ｎが１〜４の
整数［好ましくは、２〜３の整数］である2-ピペラジノ
ン-1-酢酸誘導体が好ましく、さらに２-ピペラジノン-1
-酢酸誘導体としては（Ｓ)-４-(４-グアニジノベンゾイ
ルアミノ)アセチル-３-[３-(４-グアニジノベンゾイル
アミノ)]プロピル-２-オキソピペラジン-１-酢酸や
（Ｓ)-４-(４-アミジノベンゾイルアミノ)アセチル-３-
[３-(４-アミジノベンゾイルアミノ)]プロピル-２-オキ
ソピペラジン-１-酢酸、あるいはその塩酸塩や酢酸塩な
どが挙げられる。なかでも、（Ｓ)-４-(４-グアニジノ
ベンゾイルアミノ)アセチル-３-[３-(４-グアニジノベ
ンゾイルアミノ)]プロピル-２-オキソピペラジン-１-酢
酸の塩酸塩、とりわけ、（Ｓ)-４-(４-グアニジノベン
ゾイルアミノ)アセチル-３-[３-(４-グアニジノベンゾ
イルアミノ)]プロピル-２-オキソピペラジン-１-酢酸モ
ノ塩酸塩または（Ｓ)-４-(４-グアニジノベンゾイルア
ミノ)アセチル-３-[３-(４-グアニジノベンゾイルアミ
ノ)]プロピル-２-オキソピペラジン-１-酢酸ジ塩酸塩が
好ましく用いられ、（Ｓ)-４-(４-グアニジノベンゾイ
ルアミノ)アセチル-３-[３-(４-グアニジノベンゾイル
アミノ)]プロピル-２-オキソピペラジン-１-酢酸ジ塩酸
塩は、（Ｓ)-４-(４-グアニジノベンゾイルアミノ)アセ
チル-３-[３-(４-グアニジノベンゾイルアミノ)]プロピ
ル-２-オキソピペラジン-１-酢酸モノ塩酸塩を含有する
溶液に濃塩酸を加え、ｐＨを約１〜２（好ましくは約
１．５）に調整することにより製造することができる。
また、得られた（Ｓ)-４-(４-グアニジノベンゾイルア
ミノ)アセチル-３-[３-(４-グアニジノベンゾイルアミ
ノ)]プロピル-２-オキソピペラジン-１-酢酸ジ塩酸塩
は、エタノールなどを用いて結晶化することもできる。

【００１２】前記抗腫瘍剤としては、ブレオマイシン，
メソトレキセート，アクチノマイシンＤ，マイトマイシ
ンＣ，硫酸ビンブラスチン，硫酸ビンクリスチン，ダウ
ノルビシン，アドリアマイシン，ネオカルチノスタチ
ン，シトシンアラビノシド，フルオロウラシル，テトラ
ヒドロフリル−５−フルオロウラシル，クレスチン，ピ
シバニール，レンチナン，レバミゾール，ベスタチン，
グリチルリチン，ポリＩＣ，ポリＡＵ，ポリＩＣＬＣな
どのポリ核酸類［免疫応答（山村雄一、森沢成司編；19
77年発行）１４３頁］などが挙げられる。上記抗生物質
としては、例えばゲンタマイシン，ジベカシン，カネン
ドマイシン，リビドマイシン，トブラマイシン，アミカ
シン，フラジオマイシン，シソマイシン，塩酸テトラサ
イクリン，塩酸オキシテトラサイクリン，ロリテトラサ
イクリン，塩酸ドキシサイクリン，アンピシリン，ピペ
ラシリン，チカルシリン，セファロチン，セファロリジ
ン，セフォチアム，セフスロジン，セフメノキシム，セ
フメタゾール，セファゾリン，セフォタキシム，セフォ
ペラゾン，セフチゾキシム，モキサラクタム，チエナマ
イシン，スルファゼシン，アズスレオナムなどが挙げら
れる。

【００１３】前記の解熱，鎮痛，消炎剤としては、サリ
チル酸，スルピリン，フルフェナム酸，ジクロフェナッ
ク，インドメタシン，モルヒネ，塩酸ペチジン，酒石酸
レボルファノール，オキシモルフォンなどが挙げられ
る。鎮咳去痰剤としては、塩酸エフェドリン，塩酸メチ
ルエフェドリン，塩酸ノスカピン，リン酸コデイン，リ
ン酸ジヒドロコデイン，塩酸アロクラマイド，塩酸クロ
フェダノール，塩酸ピコペリダミン，クロペラスチン，
塩酸プロトキロール，塩酸イソプロテレノール，硫酸サ
ルブタモール，硫酸テルブタリンなどが挙げられる。鎮
静剤としては、クロルプロマジン，プロクロルペラジ
ン，トリフロペラジン，硫酸アトロピン，臭化メチルス
コポラミンなどが挙げられる。筋弛緩剤としては、メタ
ンスルホン酸プリジノール，塩化ツボクラリン，臭化パ
ンクロニウムなどが挙げられる。抗てんかん剤として
は、フェニトイン，エトサクシミド，アセタゾラミドナ
トリウム，クロルジアゼポキシドなどが挙げられる。抗
潰瘍剤としては、メトクロプロミド，塩酸ヒスチジンな
どが挙げられる。抗うつ剤としては、イミプラミン，ク
ロミプラミン，ノキシプチリン，硫酸フェネルジンなど
が挙げられる。抗アレルギー剤としては、塩酸ジフェン
ヒドラミン，マレイン酸クロルフェニラミン，塩酸トリ
ペレナミン，塩酸クレミゾール，塩酸ジフェニルピラリ
ン，塩酸メトキシフェナミンなどが挙げられる。

【００１４】強心剤としては、トランスパイオキソカン
ファー，テオフィロール，アミノフィリン，塩酸エチレ
フリンなどが挙げられる。不整脈治療剤としては、プロ
プラノール，アルプレノロール，ブフェトロール，オキ
シプレノロールなどが挙げられる。血管拡張剤として
は、塩酸オキシフェドリン，ジルチアゼム，塩酸トラゾ
リン，ヘキソベンジン，硫酸バメタンなどが挙げられ
る。降圧利尿剤としては、ヘキサメトニウムブロミド，
ペントリニウム，塩酸メカミルアミン，塩酸エカラジ
ン，クロニジンなどが挙げられる。糖尿病治療剤として
は、グリミジンナトリウム，グリピザイド，塩酸フェン
フォルミン，塩酸ブフォルミン，メトフォルミンなどが
挙げられる。抗凝血剤としては、ヘパリンナトリウム，
クエン酸ナトリウムなどが挙げられる。止血剤として
は、トロンボプラスチン，トロンビン，メナジオン亜硫
酸水素ナトリウム，アセトメナフトン，ε−アミノカプ
ロン酸，トラネキサム酸，カルバゾクロムスルホン酸ナ
トリウム，アドレノクロムモノアミノグアニジンメタン
スルホン酸塩などが挙げられる。抗結核剤としては、イ
ソニアジド，エタンブトール，パラアミノサリチル酸な
どが挙げられる。ホルモン剤としては、プレドニゾロ
ン，リン酸ナトリウムプレドニゾロン，デキサメタゾン
硫酸ナトリウム，ベタメタゾンリン酸ナトリウム，リン
酸ヘキセストロール，酢酸ヘキセストロール，メチマゾ
ールなどが挙げられる。

【００１５】麻薬拮抗剤としては、酒石酸レバロルファ
ン，塩酸ナロルフィン，塩酸ナロキソンなどが挙げられ
る。骨吸収抑制剤としては、（硫黄含有アルキル）アミ
ノメチレンビスフォスフォン酸などが挙げられる。骨形
成促進剤としては、ビタミンＫ₂や副甲状腺ホルモン、
あるいは式（II)

【化９】 〔式中、環Ａは置換されていてもよいベンゼン環を、Ｒ
は水素原子または置換されていてもよい炭化水素基を、
Ｂはエステル化またはアミド化されていてもよいカルボ
キシル基を、Ｘは−ＣＨ(ＯＨ)−または−ＣＯ−を、ｋ
は０または１を、k'は０、１または２を示す〕で表され
る化合物またはその塩などが挙げられる（特開平３−２
３２８８０号、特開平４−３６４１７９号公報）。

【００１６】血管新生抑制剤としては、血管新生抑制ス
テロイド［サイエンス(Science), 221巻, 719頁(198
3)］、フマギリン［ヨーロッパ特許公開第325199号公
報］、フマギロール誘導体［ヨーロッパ特許公開第3570
61号、同第359036号、同第386667号、同第415294号公
報］などが挙げられる。生理活性物質はそれ自身（遊離
体）であっても、薬理学的に許容される塩（例えば、生
理活性物質がアミノ基などの塩基性基を有する場合、無
機酸、例えば塩酸、硫酸、硝酸、あるいは有機酸、例え
ば炭酸、コハク酸などとの塩、生理活性物質がカルボキ
シル基などの酸性基を有する場合、無機塩基、例えばナ
トリウム、カリウムなどのアルカリ金属、あるいは有機
塩基化合物、例えばトリエチルアミンなどの有機アミン
類、アルギニンなどの塩基性アミノ酸類との塩）であっ
てもよい。生理活性物質の遊離体が水溶性でない場合、
水溶性の塩に変換して用いてもよい。徐放性マイクロカ
プセルにおいて、生理活性物質の配合量はその種類、所
望の薬理効果あるいは効果の持続時間などによって異な
るが、例えばマイクロカプセルに対して好ましくは約
０.０１％〜約５０％(W/W)が用いられる。さらに好まし
くは約０.１％〜約３０％(W/W)が用いられる。

【００１７】本発明で用いる生体内分解性高分子重合物
の具体例としては、ポリ脂肪酸エステル（例、ポリ乳
酸、ポリグリコール酸、ポリクエン酸、ポリリンゴ酸、
ポリ乳酸カプロラクトンなど）、ポリ−α−シアノアク
リル酸エステル、ポリ−β−ヒドロキシ酪酸、ポリアル
キレンオキサレート（例、ポリトリメチレンオキサレー
ト、ポリテトラメチレンオキサレートなど)、ポリオル
ソエステル、ポリオルソカーボネート、あるいはその他
のポリカーボネート（例、ポリエチレンカーボネート、
ポリエチレンプロピレンカーボネートなど)、ポリアミ
ノ酸（例、ポリ−γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸、ポ
リ−Ｌ−アラニン、ポリ−γ−メチル−Ｌ−グルタミン
酸など)、ヒアルロン酸エステルなどが挙げられる。こ
れらの高分子重合物は１種（単独重合物）でもよく、ま
た２種以上の共重合物、あるいは単なる混合物でもよ
く、またそれらの塩でもよい。

【００１８】これらの生体内分解性高分子重合物の生体
内分解性は、例えば高分子重合物を注射剤として投与し
た場合、高分子重合物から分解生成した水溶性低分子量
断片の高分子重合物投与総量に対する割合（w/w％）で
定義され、一般に、皮下又は筋肉内投与後の３カ月間で
１０％以上、好ましくは、皮下又は筋肉内投与後の１年
間で８０％以上である。該生体内分解性高分子重合物は
好ましくは脂肪族ポリエステル（脂肪酸ポリエステル）
である。該生体内分解性高分子重合物の好ましい具体例
としては、脂肪族ポリエステルが挙げられ、とりわけヒ
ドロキシカルボン酸の単独重合物または共重合物あるい
はそれらの混合物などが挙げられる。該ヒドロキシカル
ボン酸としては特に限定されないが、一般式

【化１０】 [式中、Ｒは水素又はアルキル基を示す。]で表わされる
ヒドロキシカルボン酸が好ましい具体例として挙げられ
る。上記式中、Ｒで示されるアルキル基としては、例え
ば炭素数１から８の直鎖あるいは分枝状のアルキル基
（例、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチ
ル、イソブチル、第３級ブチル、ペンチル、ヘキシル、
ヘプチル、オクチル等）が好ましい。これらの中で、炭
素数１〜３の直鎖あるいは分枝状のアルキル基が特に好
ましい。

【００１９】上記ヒドロキシカルボン酸の好ましい具体
例としては、例えばグリコール酸、乳酸、ヒドロキシ酪
酸（例、２-ヒドロキシ酪酸）、２'-ヒドロキシ吉草
酸、２-ヒドロキシ-３-メチル酪酸、２-ヒドロキシカプ
ロン酸、２-ヒドロキシイソカプロン酸、２-ヒドロキシ
カプリル酸などが挙げられる。このうち特に、グリコー
ル酸、乳酸、２-ヒドロキシ酪酸、２-ヒドロキシ-３-メ
チル酪酸、２-ヒドロキシカプロン酸が好ましい。さら
に、グリコール酸、乳酸、２-ヒドロキシ酪酸が特に好
ましい。これらのヒドロキシカルボン酸において、Ｄ−
体、Ｌ−体及びＤ,Ｌ−体が存在するものは、そのいず
れを用いてもよいが、Ｄ,Ｌ−体が好ましい。該共重合
物の共重合の形式は、ランダム、ブロック、グラフトの
何れでもよい。これらのグリコール酸共重合物において
は、生体内での分解が比較的速やかで単独で用いた場合
の放出期間が１ケ月以内のものが好ましい。特に、乳酸
・グリコール酸単独重合物または共重合物（以下、どち
らか一方の酸の単独重合物及び相方の共重合物を含め
て、単に、乳酸・グリコール酸重合物と称する。また、
ＰＬＧＡと略記することがある）又はヒドロキシ酪酸・
グリコール酸重合物（以下、どちらか一方の酸の単独重
合物及び相方の共重合物を含め単にヒドロキシ酪酸・グ
リコール酸共重合物と称す）が好ましい。本発明に使用
される生体内分解性高分子重合物は、一般的な合成法
（例えば、特開昭６１−２８５２１号公報参照）で問題
なく合成できる。

【００２０】本発明に使用されるこれらの生体内分解性
高分子重合物の重量平均分子量は、約２,０００ないし
約８００,０００のものが好ましく、より好ましくは約
５,０００ないし約２００,０００の範囲から選定され
る。上記高分子重合物として乳酸・グリコール酸共重合
物を用いる場合、乳酸／グリコール酸のモル比は、好ま
しくは約１００／０ないし約２５／７５、より好ましく
は約１００／０ないし約５０／５０である。乳酸・グリ
コール酸共重合物の重量平均分子量は、好ましくは約
５,０００ないし約３０,０００、より好ましくは約５,
０００から約２０,０００である。上記の高分子重合物
としてヒドロキシ酪酸・グリコール酸共重合物（例、２
−ヒドロキシ酪酸・グリコール酸共重合物）を用いる場
合、ヒドロキシ酪酸／グリコール酸のモル比は好ましく
は１００／０ないし約２５／７５、より好ましくは約１
００／０ないし約５０／５０である。特に、２−ヒドロ
キシ酪酸／グリコール酸のモル比は好ましくは約６０／
４０ないし約３０／７０である。ヒドロキシ酪酸・グリ
コール酸共重合物の重量平均分子量は好ましくは約５,
０００ないし約２５,０００、より好ましくは約５,００
０から約２０,０００である。上記高分子重合物として
酪酸・グリコール酸共重合物を用いる場合、酪酸／グリ
コール酸のモル比は好ましくは約１００／０ないし約２
５／７５である。上記高分子重合物として例えばポリ乳
酸（Ａ）とグリコール酸・２−ヒドロキシ酪酸共重合物
（Ｂ）との混合物を用いる場合、(Ａ)/(Ｂ)で表わされ
る混合比が約１０／９０から約９０／１０（重量比）の
範囲で使用される。好ましくは約２５／７５から約７５
／２５（重量比）の範囲である。ポリ乳酸の重量平均分
子量は約５,０００から約３０,０００のものが好まし
い。さらに約６,０００から約２０,０００のものが特に
好ましい。

【００２１】なお、本明細書における重量平均分子量と
は、ポリスチレンを基準物質とするゲルパーミェーショ
ンクロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定した高分子重合
物のポリスチレン重量換算の平均分子量をいう。さらに
具体的には、重量平均分子量が１２０,０００、５２,０
００、２２,０００、９,２００、５,０５０、２,９５
０、１,０５５、５８０、１６２の９種類のポリスチレ
ンを基準物質とし、ＧＰＣカラムＫＦ８０４Ｌ×２（昭
和電工製）、ＲIモニターＬ−３３００（日立製作所
製）を使用、移動相としてクロロホルムを用いたＧＰＣ
で測定したポリスチレン換算の分子量をいう。該高分子
重合物の多分散性は重量平均分子量／数平均分子量とし
て定義され、一般に１ないし３.５、好ましくは１.５な
いし２.５である。これら生体内分解性高分子重合物の
使用量は、生理活性物質の薬理活性の強さと、該物質の
放出の速度及び期間などによって決まり、例えば生理活
性物質に対して約０.２ないし約１００００倍（重量
比）、好ましくは約１ないし約１０００倍（重量比）の
量をマイクロカプセル基剤として用いるのがよい。油相
中の生体内分解性高分子重合物の濃度は、約０.５ない
し約９０％（W/W）、さらに好ましくは約２ないし約６
０％（W/W）から選ばれる。

【００２２】上記生体内分解性高分子重合物の有機溶媒
液に添加する油脂類としては、該有機溶媒液中において
相分離を起こすことなく溶解し、かつ生体内で分解・吸
収されるものであればいずれでもよいが、脂肪酸または
その塩、グリセリン脂肪酸エステルおよびプロピレング
リコール脂肪酸エステルを除く油脂類が好ましく、例え
ば脂溶性ビタミン（ビタミンＡ、ビタミンＤ、ビタミン
Ｅ、ビタミンＫなど）、中鎖脂肪酸トリグリセリド（ミ
グリオールなどの炭素数８〜１２の脂肪酸のトリグリセ
ロール）、コレステロール、リン脂質類などが挙げられ
る。上記生体内分解性高分子重合物の有機溶媒液に添加
する油脂類としては、脂溶性ビタミン、コレステロー
ル、リン脂質類などが好ましく用いられ、なかでも、脂
溶性ビタミンが好ましく、とりわけ、α−トコフェロー
ル（ビタミンＥ）または酢酸トコフェロール（ビタミン
Ｅ酢酸塩）などが好ましく用いられる。生体内分解性高
分子重合物の有機溶媒液中に添加する油脂類は、徐放性
マイクロカプセル全量に対する油脂類の最終含有率が約
１％〜約５０％(W/W)、さらに好ましくは約３％〜約３
０％(W/W)となる量が用いられる。また本発明におい
て、Ｗ/Ｏ法あるいはＷ/Ｏ/Ｗ法により徐放性マイクロ
カプセルを製造する場合、生理活性物質を含有する水相
にさらに塩基性物質を添加してもよく、生理活性物質が
酸性の薬物あるいは薬物の酸性塩（塩酸塩など）（例え
ば水相の pＨが６以下となる）の場合に添加することが
望ましい。塩基性物質としては例えば、L-ヒスチジン、
L-アルギニン、L-リジンなどの塩基性アミノ酸や N-メ
チルグルカミンなどが挙げられる。生理活性物質の水溶
液中に添加する塩基性物質は、徐放性マイクロカプセル
全量に対する塩基性物質の最終含有率が約０.１％〜約
２０％(W/W)、さらに好ましくは約１％〜約８％(W/W)と
なる量が用いられる。

【００２３】本発明製造法においては、有機溶媒の除去
に水中乾燥法を適用する場合、外水相に浸透圧調節剤を
含有させることが好ましい。該浸透圧調節剤としては、
水溶液とした場合、浸透圧を示すものであればいかなる
物質であってもよい。該浸透圧調節剤の具体例として
は、例えば水溶性の多価アルコール類、水溶性の一価ア
ルコール類、水溶性の無機物（例、無機塩)、水溶性の
単糖類、二糖類、オリゴ糖及び多糖類あるいはそれらの
誘導体、水溶性の有機酸又はその塩、水溶性のアミノ
酸、水溶性のペプチド、タンパク質あるいはそれらの誘
導体などが挙げられる。これらのうち水溶性の多価アル
コール類、水溶性の無機物、水溶性の単糖類、二糖類、
オリゴ糖及び多糖類あるいはそれらの誘導体、水溶性の
有機酸又はその塩が好ましい。さらに、塩類、水溶性の
多価アルコール類及び水溶性の無機物が特に好ましい。
上記水溶性の無機塩としては、例えば塩化カリウム、塩
化ナトリウム、臭化カリウム、臭化ナトリウム、ヨウ化
カリウム、ヨウ化ナトリウム等のハロゲン化アルカリ金
属、塩化カルシウム、塩化マグネシウム等のハロゲン化
アルカリ土類金属、硫酸ナトリウム、硫酸カリウム等の
アルカリ金属硫酸塩、硫酸マグネシウム、硫酸カルシウ
ム等のアルカリ土類金属硫酸塩、リン酸二水素カリウ
ム、リン酸水素二カリウム、リン酸カリウム、リン酸二
水素ナトリウム、リン酸水素二ナトリウム、リン酸ナト
リウム等のアルカリ金属リン酸塩類などが挙げられる。
このうち、塩化ナトリウムが好ましい。

【００２４】上記水溶性の多価アルコール類としては、
例えばグリセリン等の二価アルコール類、アラビトー
ル、キシリトール、アドニトール等の五価アルコール
類、マンニトール、ソルビトール等の六価アルコール類
などが挙げられる。これらのうち六価のアルコール類が
好ましい。上記水溶性の一価アルコール類としては、例
えばメタノール、エタノール、イソプロピルアルコール
等が挙げられる。これらのうちエタノールが好ましい。
上記水溶性の単糖類としては、例えばアラビノース、キ
シロース、リボース、２−デオキシリボース等の五炭糖
類、ブドウ糖、果糖、ガラクトース、マンノース、ソル
ボース、ラムノース、フコース等の六炭糖類が挙げられ
る。これらのうち六炭糖類が好ましい。上記水溶性の二
糖類としては、例えば麦芽糖、セロビオース、α−トレ
ハロース、乳糖、ショ糖などが挙げられる。これらのう
ち乳糖及びショ糖が好ましい。

【００２５】上記水溶性のオリゴ糖としては、例えばマ
ルトトリオース、ラフィノース等の三糖類、スタキオー
ス等の四糖類などが挙げられる。これらのうち三糖類が
好ましい。上記水溶性の多糖類としては、例えばセルロ
ース、デンプン、グリコーゲン等のグルカン類、ペクチ
ン酸等のガラクツロナン類、アルギン酸等のマンヌロナ
ン類、イヌリン、レバン等のフルクタン類、キチン等の
Ｎ−アセチルグリコサミン重合体類、イネワラのキシラ
ン等のキシラン類、マンナン、グルコマンナン、ガラク
トマンナン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヘパ
リン等のジヘテログルカン類などが挙げられる。これら
のうちグルカン類、ジヘテログルカン類が好ましい。上
記水溶性の単糖類、二糖類、オリゴ糖及び多糖類の誘導
体としては、例えばグルコサミン、ガラクトサミン、グ
ルクロン酸、ガラクツロン酸などが挙げられる。

【００２６】上記水溶性の有機酸又はその塩としては、
例えばクエン酸、酒石酸、リンゴ酸、これらのアルカリ
金属塩（例、ナトリウム塩、カリウム塩等）などが挙げ
られる。上記水溶性のアミノ酸としては、例えばグリシ
ン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェ
ニルアラニン、チロシン、トリプトファン、セリン、ト
レオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、システイ
ン、メチオニン等の中性アミノ酸、アスパラギン酸、グ
ルタミン酸等の酸性アミノ酸、リジン、アルギニン、ヒ
スチジン等の塩基性アミノ酸等が挙げられる。またこれ
らの水溶性アミノ酸の酸（例、塩酸、硫酸、リン酸等）
又はアルカリ（例、ナトリウム、カリウム等のアルカリ
金属等）との塩を用いてもよい。水溶性のペプチド、タ
ンパク質あるいはそれらの誘導体としては、例えばカゼ
イン、グロブリン、プロラミン、アルブミン、ゼラチ
ン、プロタミン、ヒストンなどが挙げられる。

【００２７】浸透圧調節剤は単独で使用しても、１種以
上を混合して使用してもよい。これらの浸透圧調節剤の
外水相中での濃度は、浸透圧調節剤が非イオン性物質の
場合、約０.００１ないし約６０％(W/W)で、好ましくは
約０.０１ないし約４０％(W/W)、より好ましくは約０.
０５ないし約３０％(W/W)である。また、浸透圧調節剤
がイオン性物質の場合、上記の濃度を全体のイオン価で
除した濃度が用いられる。浸透圧調節剤の添加濃度は、
その溶解度以下である必要はなく、一部が有機溶媒中で
分散状態であってもよい。以下に、本発明の製造法の各
工程について詳述する。水溶性生理活性物質の水溶液を
水相として用いるマイクロカプセルの製造法において
は、まず、水溶性生理活性物質（以下、薬物と略するこ
ともある）を水に溶解し、これに必要であれば前記の塩
基性アミノ酸などの塩基性物質、さらに薬物保持物質
（例えば、ゼラチン、寒天、ポリビニールアルコールな
ど）を加えて溶解し、水相（内水相）を調製する。内水
相における薬物の濃度は、好ましくは約０．１ないし約
１５０％（W/V）である。さらに好ましくは約２０ない
し約１３０％（W/V）である。特に好ましくは約６０な
いし約１２０％（W/V）である。該水相には、薬物の安
定性、溶解性を保つためのｐＨ調整剤として、炭酸、酢
酸、シュウ酸、クエン酸、リン酸、塩酸等、水酸化ナト
リウム、アルギニン、リジンおよびそれらの塩などを添
加してもよい。また、さらに薬物の安定化剤として、ア
ルブミン、ゼラチン、クエン酸、エチレンジアミン四酢
酸ナトリウム、デキストリン、亜硫酸水素ナトリウム、
ポリエチレングリコール等のポリオール化合物などを、
あるいは保存剤として、一般に用いられるパラオキシ安
息香酸エステル類（メチルパラベン、プロピルパラベン
など)、ベンジルアルコール、クロロブタノール、チメ
ロサールなどを添加してもよい。

【００２８】このようにして得られた水相を、生体内分
解性高分子重合物（以下、ポリマーと略することもあ
る）および油脂類を含む均一な有機溶媒溶液（油相）中
に加え、ついで乳化操作を行い、Ｗ／Ｏ型乳化物を製造
する。該乳化操作は、公知の分散法、例えば断続振とう
法、プロペラ型撹拌機あるいはタービン型撹拌機などの
ミキサーによる方法、コロイドミル法、ホモジナイザー
法、超音波照射法等により行われる。上記したポリマー
溶液（油相）は、ポリマーを水と実質的に混和しない有
機溶媒に溶解したものが用いられる。該有機溶媒の水に
対する溶解度は、好ましくは、常温（２０℃）で３％
（W/W）以下である。また有機溶媒の沸点は１２０℃以
下であることが好ましい。有機溶媒としては、例えばハ
ロゲン化炭化水素（例、ジクロロメタン，クロロホル
ム，クロロエタン，トリクロロエタン，四塩化炭素な
ど）、炭素数３以上のアルキルエーテル類（例、イソプ
ロピルエーテルなど）、脂肪酸のアルキル（炭素数４以
上）エステル（例、酢酸ブチルなど）、芳香族炭化水素
（例、ベンゼン，トルエン，キシレンなど）等が挙げら
れる。これらは２種以上適宜の割合で混合して用いても
よい。有機溶媒は、さらに好ましくはハロゲン化炭化水
素（例、ジクロロメタン，クロロホルム，クロロエタ
ン，トリクロロエタン，四塩化炭素など）である。有機
溶媒は、特に好ましくはジクロロメタンである。

【００２９】ついで、このようにして製造されたＷ／Ｏ
型乳化物から有機溶媒を常法に従い除去する。溶媒の除
去方法としては、例えば噴霧乾燥法や水中乾燥法などが
挙げられるが水中乾燥法が好ましく用いられる。噴霧乾
燥法は、得られたＷ／Ｏ型乳化物をノズル等を用いてス
プレードライヤ（噴霧乾燥器）の乾燥室内に噴霧し、極
めて短期間内に微粒化液滴内の溶媒を揮発させる方法で
あり、該ノズルとしては例えば、二流体ノズル型、圧力
ノズル型、回転ディスク型等がある。該水中乾燥法は、
Ｗ／Ｏ型乳化物を水相（外水相）中に加え、Ｗ／Ｏ／Ｗ
型乳化物を形成させた後、油相中の溶媒を除去すること
により行われる。外水相の体積は、一般的には油相体積
の約１ないし約１０,０００倍から選ばれる。さらに好
ましくは、約２ないし約５,０００倍から選ばれる。特
に好ましくは、約５ないし約２,０００倍から選ばれ
る。上記外水相中に乳化剤を加えてもよい。該乳化剤
は、一般に安定なＷ／Ｏ／Ｗ型乳化物を形成できるもの
であればいずれでもよい。具体的には、例えばアニオン
性界面活性剤（オレイン酸ナトリウム，ステアリン酸ナ
トリウム，ラウリル硫酸ナトリウムなど）、非イオン性
界面活性剤（ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エス
テル〔ツイーン（Tween）８０，ツイーン（Tween）６
０，アトラスパウダー社〕，ポリオキシエチレンヒマシ
油誘導体〔HCO-60，HCO-50，日光ケミカルズ〕など），
ポリビニルピロリドン，ポリビニルアルコール，カルボ
キシメチルセルロース，レシチン，ゼラチン，ヒアルロ
ン酸などが挙げられる。乳化剤は、好ましくはポリビニ
ルアルコールである。これら乳化剤の中の１種類か、い
くつかを組み合わせて使用してもよい。使用の際の濃度
は、約０.００１から約２０％（W/W）の範囲から適宜選
択できる。さらに好ましくは約０.０１から約１０％（W
/W）の範囲で用いられる。特に好ましくは約０.０５か
ら約５％（W/W）の範囲で用いられる。また、外水相中
に前記した浸透圧調節剤を加えてもよい。

【００３０】本発明の製造法において、Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳
化物を形成させる際にＷ／Ｏ型乳化物の粘度を約１５０
センチポアズ(ｃｐ)ないし約１０,０００ｃｐに調整す
ることが好ましい。粘度を調整する方法としては、例え
ば（１）油相の生体内分解性高分子重合物の濃度を調整
する、（２）水相と油相との量比を調整する、（３）Ｗ
／Ｏ型乳化物の温度を調整する、（４）外水相の温度を
調整する、（５）Ｗ／Ｏ型乳化物を外水相に注入する際
に、例えばラインヒーター、クーラーなどでＷ／Ｏ型乳
化物の温度を調整するなどの方法が挙げられ、これらの
方法は単独でも、組み合わせて使用してもよい。上記方
法においては、要は、Ｗ／Ｏ型乳化物がＷ／Ｏ／Ｗ型乳
化物になる時のＷ／Ｏ型乳化物の粘度が約１５０ｃｐな
いし約１０,０００ｃｐになるようにしさえすればよ
い。上記（１）において、油相の生体内分解性ポリマー
の濃度を調整する場合の濃度は、生体内分解性ポリマー
の種類、有機溶媒の種類等で変化するので一義的に決定
されるものではないが、好ましくは約１０ないし約８０
％（W/W）である。上記（２）において、水相と油相と
の量比を調整する場合の量比は、薬物の種類および量、
油相の性質によって一義的に決定されるものではない
が、好ましくはＷ／Ｏ＝約１％ないし約５０％（Ｖ／
Ｖ）である。

【００３１】上記（３）において、Ｗ／Ｏ型乳化物の温
度を調整する場合の温度は、例えば約−２０℃ないし有
機溶媒の沸点の範囲、好ましくは約０℃ないし約３０
℃、更に好ましくは約１０℃ないし約２０℃である。Ｗ
／Ｏ型乳化物の粘度の調整の時期は、上記（１）および
（２）の場合は、Ｗ／Ｏ型乳化物を製造する時点で行う
ことができる。また、上記（４）において、例えば外水
相にＷ／Ｏ型乳化物を添加する際に外水相の温度をあら
かじめ調整しておくことにより、上記（３）と同様の結
果となるようにすればよい。外水相の温度は、例えば約
５℃ないし約３０℃、好ましくは約１０℃ないし約２５
℃、更に好ましくは約１２℃ないし約２０℃である。有
機溶媒を除去する方法は、自体公知の方法に従って行う
ことができる。例えばプロペラ型撹拌機あるいはマグネ
チックスターラーなどで撹拌しながら常圧もしくは徐々
に減圧にして有機溶媒を蒸発させる方法、ロータリーエ
バポレーターなどを用いて真空度を調節しながら有機溶
媒を蒸発させる方法などが挙げられる。

【００３２】一方、水難溶性の生理活性ペプチドの金属
塩を生理活性物質として用いる場合には、生理活性ペプ
チド金属塩を生体内分解性高分子重合物と油脂類とを含
有する有機溶媒液に分散させて得られた分散液をよく混
合して、生理活性ペプチド金属塩が有機溶媒液中におい
て実質的に均一に分散・懸濁している分散安定性の高い
有機溶媒分散液（以下、便宜上S/O型乳化物と称するこ
とがある）を得る。上記有機溶媒としては、前記Ｗ／Ｏ
型乳化物の調製において生体内分解性高分子重合物と油
脂類とを含有する油相の調製に用いられるのと同様の有
機溶媒が用いられる。上記s／o型乳化物の調製には、公
知の分散法が用いられる。該分散法としては、例えば、
断続振とう法、プロペラ型撹拌機あるいはタービン型撹
拌機などのミキサーによる方法、コロイドミル法、ホモ
ジナイザー法、超音波照射法などが挙げられる。この場
合、所望により水不溶性溶媒と共に水溶性溶媒を用いる
ことも有効である。該水溶性溶媒は、水溶性を有し、上
記水不溶性溶媒と混合し得るものであればいかなるもの
でもよい。該水溶性溶媒の具体例としては、例えばアル
コール類(例、メタノール、エタノール、プロピルアル
コール、イソプロピルアルコール等)、アセトン、アセ
トニトリルなどが挙げられる。ｓ／ｏ型乳化物の調製に
おいては、生理活性物質をより細かく微粒化して分散さ
せることが好ましく、微粒子の粒径は通常約１nmないし
約３０μm、好ましくは約１nmないし約５μm、最も好ま
しくは約１nmないし約１μmである。

【００３３】次いで、このようにして製造されたＳ／Ｏ
型乳化物は、前記Ｗ／Ｏ型乳化物の場合と同様の手法に
より有機溶媒除去に付されるが、好ましくは水中乾燥法
に付す。好ましくは、外水相中に上記濃度の浸透圧調節
剤を含有させて行う。すなわち、該油相をさらに浸透圧
調節剤を含有した第２相目の水相中に加え、Ｓ／Ｏ／Ｗ
型乳化物を形成させた後、油相中の有機溶媒を除去さ
せ、マイクロカプセルを製造する。Ｓ／Ｏ／Ｗ型水中乾
燥法における外水相に乳化剤を加えてもよく、その例と
しては、前記Ｗ／Ｏ／Ｗ型乳化物を形成する際に用いら
れるものと同様の乳化剤が用いられる。

【００３４】油相中の有機溶媒の除去は、通常用いられ
る方法が採用される。該方法としては、プロペラ型撹拌
機、あるいはマグネチックスターラーなどで撹拌しなが
ら徐々に減圧して行うか、ロータリーエバポレーターな
どを用いて、真空度を調節しながら除去する。この場
合、高分子重合物の固化がある程度進行し、内層から生
理活性物質の放出による損失が減少した時点で、溶媒の
除去をより完全にする目的で、Ｓ／Ｏ／Ｗ型乳化物を徐
々に加温して行うと所要時間を短縮することができる。
また、温度以外の方法で増粘化及び固化を行う場合は、
単にＳ／Ｏ／Ｗ型乳化物を撹拌下放置するか、加温する
か、窒素ガスなどを吹き付けるか、することなどによっ
て除去してもよい。この溶媒の除去過程は生理活性物質
の放出をコントロールするマイクロカプセルの表面構造
を大きく左右する重要な過程である。例えば、除去の速
度を速く行うことによって、表面に多くの細孔を生じ、
またより大きな細孔となり、生理活性物質の放出速度を
高める。

【００３５】このようにして得られたマイクロカプセル
は遠心分離あるいは濾過して分取した後、マイクロカプ
セルの表面に付着している遊離の生理活性物質、該生理
活性物質の保持物質などを、蒸留水で数回繰り返し洗浄
し、必要であれば加温し減圧下でマイクロカプセル中の
水分の除去及びマイクロカプセル剤中の溶媒の除去をよ
り完全に行う。得られたマイクロカプセルは、通常蒸留
水などに再分散後、凍結乾燥して保管されるが凍結乾燥
の際に、凝集防止剤を加えてもよい。該凝集防止剤とし
ては、例えばマンニトールなどの水溶性多糖類、澱粉類
（例、コーンスターチなど）、無機塩類、アミノ酸、タ
ンパク質などが挙げられる。これらのうち好ましくはマ
ンニトールである。マイクロカプセルと凝集防止剤との
混合比（重量比）は、約５０：１ないし約１：１、好ま
しくは約２０：１ないし約１：１、更に好ましくは約１
０：１ないし約５：１である。洗浄中の粒子同士の凝集
を防ぐために、洗浄液である蒸留水に凝集防止剤を加え
てもよい。該凝集防止剤としては、例えばマンニトー
ル，ラクトース，ブドウ糖，などの水溶性多糖、グリシ
ン等のアミノ酸、フィブリン，コラーゲン等のタンパク
質、塩化ナトリウム，リン酸水素ナトリウム等の無機塩
類などが挙げられる。凝集防止剤は、好ましくはマンニ
トールである。

【００３６】また、凍結乾燥の後、所望により、減圧下
加温してマイクロカプセル中の水分および有機溶媒の除
去をさらに行ってもよい。加熱温度が基剤として用いた
生体内分解性ポリマーのガラス転移温度未満では、生理
活性ペプチドの過剰量の初期放出性改善の効果がなく、
また高温過ぎるとマイクロカプセルの融着，変形，生理
活性物質の分解，劣化等の危険性が増大する。加熱温度
は一概にいえないが、基剤として用いた生体内分解性ポ
リマーの物性（例、分子量，安定性等），生理活性ペプ
チド，マイクロカプセルの平均粒子径，加熱時間，マイ
クロカプセルの乾燥程度，加熱方法等を考慮し適宜決定
することができる。好ましくは、基剤として用いた生体
内分解性ポリマーのガラス転移温度以上で、該マイクロ
カプセルの各粒子が互いに付着しない程度の温度で加熱
乾燥する。より好ましくは、基剤として用いた生体内分
解性ポリマーのガラス転移温度からガラス転移温度より
約３０℃高い温度範囲内で加熱乾燥する。ここにおい
て、ガラス転移温度とは、示差走査熱量計を用い、加温
速度毎分１０または２０℃で昇温した際に得られる中間
点ガラス転移温度をいう。

【００３７】加熱乾燥時間も加熱温度，処理するマイク
ロカプセル量などによって異なるが、一般的にはマイク
ロカプセル自体の温度が所定の温度に達した後、約２４
ないし約１２０時間が好ましい。さらに約４８ないし約
１２０時間が好ましい。加熱方法は特に限定されない
が、マイクロカプセルが均一に加熱される方法であれば
いかなる方法を用いてもよい。上記で得られたマイクロ
カプセルは、必要であれば軽く粉砕した後、篩過して、
大きすぎるマイクロカプセル部分を除去する。マイクロ
カプセルの粒子径は、徐放性の程度により懸濁剤として
使用する場合には、その分散性、通針性を満足させる範
囲であればよく、例えば、平均径として約０.５〜４０
０μmの範囲が挙げられ、より好ましくは約２〜２００
μmの範囲にあることが望まれる。マイクロカプセルを
無菌製剤にするには、製造全工程を無菌にする方法、ガ
ンマ線を滅菌する方法、防腐剤を添加する方法などが挙
げられるが、特に限定されない。

【００３８】本発明製造法により製造されたマイクロカ
プセルは、経口的および非経口的に投与できる。例え
ば、筋肉内、皮下、血管、臓器、あるいは関節腔、腫瘍
などの病巣に容易に注射剤及び埋め込み剤として投与す
ることができる。また、種々の製剤に成型して投与する
こともでき、そのような製剤を製造する際の原料物質と
しても使用され得る。上記製剤としては、注射剤、経口
投与製剤（例、散剤、顆粒剤、カプセル剤、錠剤）、経
鼻投与製剤、坐剤（例、直腸坐剤、膣坐剤）などが挙げ
られる。これらの製剤は、常法に従って製造することが
できる。例えば、本発明のマイクロカプセルを注射剤と
するには、本発明のマイクロカプセルを分散剤（例、ツ
イーン（Ｔween）８０、ＨＣＯ ６０（日光ケミカルズ
製）、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸ナトリ
ウムなど）、保存剤（例、メチルパラベン、プロピルパ
ラベン、ベジールアルコール、クロロブタノールな
ど）、等張化剤（例、塩化ナトリウム、グリセリン、ソ
ルビトール、ブドウ糖など）などと共に水性懸濁剤に、
あるいはオリーブ油、ゴマ油、ラッカセイ油、綿実油、
コーン油などの植物油、プロピレングリコールなどに分
散して油性懸濁剤に成形され、徐放性注射剤とする。さ
らに、上記のマイクロカプセルの徐放性注射剤は、懸濁
剤として、上記の組成以外に、賦形剤（例、マンニトー
ル、ソルビトール、ラクトース、ブドウ糖など）を加え
て、再分散した後、凍結乾燥もしくは噴霧乾燥して固型
化し、用時に、注射用蒸留水あるいは適当な分散剤を加
えると、より安定した徐放性注射剤が得られる。

【００３９】本発明製造法により得られるマイクロカプ
セルを例えば錠剤にするには、一般に公知の製法に準じ
て行うことができる。例えば賦形剤（例、乳糖、結晶セ
ルロース、白糖、トウモロコシデンプン等のデンプン類
など）、崩壊剤（例、トウモロコシデンプン等のデンプ
ン類、クロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチ
ルスターチナトリウム、炭酸カルシウムなど）、結合剤
（例、結晶セルロース、アラビアゴム、デキストリン、
カルボキシメチルセルロース、ポリビニールピロリド
ン、ヒドロキシプロピルセルロースなど）又は滑沢剤
（例、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレ
ングリコール６０００など）などを添加して圧縮成形す
る。

【００４０】本発明製造法により得られるマイクロカプ
セルを例えば経鼻投与製剤にするには、固状、半固状又
は液状のものに成形され、いずれも一般に用いられる製
法で行うことができる。例えば、上記固状のものとして
は、該マイクロカプセルをそのまま、あるいは賦形剤
（例、グルコース、マンニトール、デンプン、微結晶セ
ルロースなど）、増粘剤（例、天然ガム類、セルロース
誘導体、アクリル酸重合物など）などを添加、混合して
粉状の組成物とする。上記液状のものとしては、注射剤
の場合とほとんど同様で、油性あるいは水性懸濁剤とす
る。半固状の場合は、水性又は油性のゲル剤、あるいは
軟膏状のものがよい。また、これらはいずれも、pＨ調
節剤（例、炭酸、リン酸、クエン酸、塩酸、水酸化ナト
リウムなど）、防腐剤（例、パラオキシ安息香酸エステ
ル類、クロロブタノール、塩化ベンザルコニウムなど）
などを加えてもよい。

【００４１】本発明製造法により得られるマイクロカプ
セルを坐剤とするには、油性又は水性の固状、半固状あ
るいは液状のものをそれぞれ油性基剤又は水性基剤とし
て用いて、自体公知の方法で製造しうる。上記組成物に
用いる油性基剤としては、マイクロカプセルを溶解しな
いものであればよく、例えば高級脂肪酸のグリセリド
[例、カカオ脂、ワイテプゾル類（ダイナマイトノーベ
ル社）など]、中鎖脂肪酸トリグリセリド[例、ミグリオ
ール類（ダイナマイトノーベル社）など]、あるいは植
物油（例、ゴマ油、大豆油、綿実油など）などが挙げら
れる。また、水性基剤としては、例えばポリエチレング
リコール類、プロピレングリコール、水性ゲル基剤とし
ては、例えば天然ガム類、セルロース誘導体、ビニール
重合体、アクリル酸重合体などが挙げられる。

【００４２】本発明製造法により得られるマイクロカプ
セルは、初期バーストが抑制されかつ一定した薬物量を
長期に亘って放出するため、低毒性で一定した薬効が得
られ、安全で効能の高い徐放剤となり得る。しかも、慢
性疾患の治療に応用することによりこれまで頻回投与を
余儀なくされた患者に対しては、その肉体的負担をなく
しコンプライアンスを得ることが出来る。例えば下垂体
小人症の場合には、成長ホルモンの投与はかかせないも
のであり、従来乳幼児あるいは若年患者に対しては数カ
月から10年以上の長期に亘り連日あるいは隔日に皮下あ
るいは筋肉内投与されているが、本発明製造法により得
られる徐放性マイクロカプセルにおいては数週間から数
カ月に一度の投与で十分な薬効が得られるため、これら
の患者のコンプライアンスの改善に大いに寄与できる。
また例えば水溶性生理活性物質が、抗血栓剤である本発
明の徐放性マイクロカプセルを血栓症の治療に用いる場
合には、通常の投与法では抗血栓作用の副作用として出
血傾向が懸念されるが、本発明の徐放性マイクロカプセ
ルでは副作用を発現しない薬効濃度領域内に血中濃度を
長期に亘って安定的に維持できるため、長期に亘る当該
慢性疾患の治療だけでなく、その予防にも積極的に使用
できる。このように、本発明のマイクロカプセルは、副
作用や毒性が低いので（例えば、マウス、ラット、イ
ヌ、ウマ、ウシ、ヒトなどの温血哺乳動物）に安全に投
与できる。

【００４３】徐放性マイクロカプセルの投与量として
は、主薬である生理活性物質の種類と含量、剤形、薬物
放出の持続時間、投与対象動物、投与目的により種々異
なるが、該主薬の有効量であればよい。例えば生理活性
ペプチドあるいはその塩の徐放性マイクロカプセルが１
週間型製剤である場合、好ましくは、成人１人当たり約
０.０００１ないし１０mg／kg体重の範囲から適宜選ぶ
ことができる。さらに好ましくは約０.０００５ないし
１mg／kg体重の範囲から適宜選ぶことができる。投与回
数は、１週間に１回、２週間に１回、あるいは１ケ月に
１回など、該生理活性ペプチドの種類と含量、剤型、放
出の持続時間、対象疾患、対象動物などによって適宜選
ぶことができる。徐放性製剤の有効成分である生理活性
ポリペプチドが、例えばヒト成長ホルモンで、２週間型
製剤を下垂体性小人症の患者に投与する場合には、有効
成分として通常、約０.０１ないし約５mg／kg体重、好
ましくは約０.０３ないし約１mg／kg体重の範囲から適
宜選び、２週間に１回投与するのがよい。また生理活性
物質がインスリンの場合、糖尿病患者に対する投与量
は、有効成分として通常、約０.００１ないし約１mg／k
g体重、好ましくは約０.０１ないし約０.２mg／kgの範
囲から適宜選び、１週間に１回投与するのがよい。

【００４４】例えば抗血小板薬である前記一般式（Ｉ)
で表わされる２-ピペラジノン-１-酢酸誘導体又はその
塩の徐放性マイクロカプセルを、不安定狭心症患者、Ｐ
ＴＣＡ（経皮的冠動脈内血管形成術）又は冠動脈血栓溶
解療法施行時の虚血性合併症又は冠動脈の再閉塞もしく
は再狭窄発症患者に経口投与する場合、成人（体重５０
kg）に１回当たりの投与量として、マイクロカプセルの
適量が約１mgないし１０ｇ、好ましくは約１mgないし２
ｇの範囲（通常、主薬である化合物（I）として１回に
つき約１ないし５００mg、好ましくは約１０ないし２０
０mgになる範囲）から、適宜選択することができる。
又、不安定狭心症患者、ＰＴＣＡ又は冠動脈血栓溶解療
法施行後の虚血性合併症又は冠動脈の再閉塞もしくは再
狭窄発症患者に非経口投与する場合、例えば上記注射剤
として投与する場合の懸濁溶液の容量は、約０.１ない
し５ml、好ましくは約０.５ないし３mlの範囲（通常、
成人（体重５０kg）の１回当たりの投与量が、主薬であ
る化合物（I）として、約０.０５〜５０mg、好ましくは
１〜２０mgになるような範囲）から適宜選ぶことができ
る。本発明製造法により得られる徐放性マイクロカプセ
ルは、常温あるいは冷所に保存されるが、好ましくは冷
所である。ここでいう常温あるいは冷所とは日本薬局方
において定義されるものである。すなわち、常温とは１
５ないし２５℃、冷所とは１５℃以下を意味する。

【００４５】

【発明の実施の形態】以下に実施例および試験例を挙げ
て、さらに具体的に説明するが、これらは本発明を限定
するものではない。

【実施例】

実施例１ (Ｓ)-４-(４-グアニジノベンゾイルアミノ)アセチル-３
-[３-(４-グアニジノベンゾイルアミノ)]プロピル-２-
オキソピペラジン-1-酢酸（以下、化合物Ａと略称す
る）の塩酸塩５００mg及びＬ−アルギニン１５０mgを蒸
留水１mlに溶解し、内水相とした。一方、乳酸・グリコ
ール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０/５０（モ
ル％），重量平均分子量８,０００）３８５０mg及びビ
タミンＥ５００mgを塩化メチレン７.５mlに溶解し油相
とした。油相を内水相に加え、小型ホモジナイザー（ポ
リトロン）で乳化しＷ/Ｏ型乳化物を得た。このＷ/Ｏ乳
化物を１５℃に冷却した２.７％ＮａＣｌ含有０.１％Ｐ
ＶＡ水溶液８００ml（外水相）中でホモミキサーを使用
して乳化し、Ｗ/Ｏ/Ｗ型乳化物とした。この後、通常の
プロペラ撹拌機で３時間緩徐に撹拌し、塩化メチレンの
揮散と共にマイクロカプセルが固化するのを待って遠心
分離機を用いて捕集した。捕集したマイクロカプセル
は、精製水で水洗後、凍結乾燥に供した。マイクロカプ
セル２０mgをアセトニトリル／蒸留水の２：１混液３ml
に溶解後、０.５Ｎ ＫＯＨ−エタノール溶液３mlを添加
して２５℃で２０時間加水分解した。窒素ガス気流下で
蒸発乾固した残渣を０.５Ｎ ＨＣｌで中和後、最終アミ
ノ酸濃度約２００nmol/mlとなるように０.０１Ｎ ＨＣ
ｌを用いて希釈し、アミノ酸分析計（日立L-8500A）に
供してアルギニンを定量した。マイクロカプセル中アル
ギニン含量は１．６％で、また、後述の実施例５に記載
の方法で定量したマイクロカプセル中ビタミンＥ含量は
１０％であった。

【００４６】実施例２ 化合物Ａの塩酸塩５００mg及びL-アルギニン１５０mgを
蒸留水１mlに溶解し、内水相とした。一方、乳酸・グリ
コール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０/５０
（モル％)，重量平均分子量８,０００）４１００mg及び
ビタミンＥ２５０mgを塩化メチレン８mlに溶解し油相と
した。油相を内水相に加え、小型ホモジナイザー（ポリ
トロン）で乳化しＷ/Ｏ型乳化物を得た。このＷ/Ｏ乳化
物を１５℃に冷却した２.７％ＮａＣｌ含有０.１％ Ｐ
ＶＡ水溶液８００ml（外水相）中でホモミキサーを使用
して乳化し、Ｗ/Ｏ/Ｗ型乳化物とした。この後、通常の
プロペラ撹拌機で３時間緩徐に撹拌し、塩化メチレンの
揮散と共にマイクロカプセルが固化するのを待って遠心
分離機を用いて捕集した。捕集したマイクロカプセル
は、精製水で水洗後、マンニトール４４０mgを加えて凍
結乾燥した。

【００４７】実施例３ 化合物Ａの塩酸塩７５０mg及びL-アルギニン１５０mgを
蒸留水２mlに溶解し、内水相とした。一方、乳酸・グリ
コール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０/５０
（モル％)，重量平均分子量９,０００）３６００mg及び
ビタミンＥ５００mgを塩化メチレン１０mlに溶解し油相
とした。以下、実施例２と同様にＷ/Ｏ型乳化物、さら
にＷ/Ｏ/Ｗ型乳化物を調製しマイクロカプセル凍結乾燥
品を得た。得られたマイクロカプセル中のアルギニン及
びビタミンＥの含量はそれぞれ１.５％（w/w）及び１０
％（w/w）であった。 実施例４ 化合物Ａの塩酸塩５００mg及びL-アルギニン１５０mgを
蒸留水１mlに溶解し、内水相とした。一方、乳酸・グリ
コール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０/５０
（モル％)，重量平均分子量９,０００）４１００mg及び
ビタミンＥ２５０mgを塩化メチレン８mlに溶解し油相と
した。以下、実施例２と同様にＷ/Ｏ型乳化物、さらに
Ｗ/Ｏ/Ｗ型乳化物を調製しマイクロカプセル凍結乾燥品
を得た。得られたマイクロカプセル中のアルギニン含量
及びビタミンＥの含量はそれぞれ１.８％（w/w）及び
５.２％（w/w）であった。

【００４８】比較例１ 化合物Ａ２００mgを蒸留水０.５mlに溶解し、内水相と
した。一方、乳酸・グリコール酸共重合体（乳酸／グリ
コール酸＝５０/５０（モル％)，重量平均分子量９,０
００）１８００mgを塩化メチレン２mlに溶解し油相とし
た。以下、実施例３と同様にＷ/Ｏ型乳化物、さらにＷ/
Ｏ/Ｗ型乳化物を調製しマイクロカプセル凍結乾燥品を
得た。〔表１〕に実施例４および比較例１で得られたマ
イクロカプセルの特性を示す。

【表１】 製 法 薬物封入率 １日放出量 （In vitro溶出試験） 実施例４ ９６ ％ １０ ％ 比較例１ ８８ ％ ６８ ％ 〔表１〕の結果より、化合物Aの塩酸塩を用いて内水相
に３％アルギニンを、油相に５％ビタミンＥを添加して
マイクロカプセルを調製することにより、マイクロカプ
セル中への薬物封入率が向上し、in vitro溶出試験での
初期放出（１日放出量）を抑制することが可能となっ
た。

【００４９】試験例１ 前記実施例１及び比較例１で得られたそれぞれのマイク
ロカプセルを、ＳＤラット（雄性、６週齢）に薬物量と
して２０mg/kgで皮下投与し、投与後の血漿中濃度をＥ
ＬＩＳＡにより測定した。得られた結果を〔図１〕に示
す。〔図１〕においては、実施例１によるマイクロカプ
セルを曲線Ａ、比較例１によるマイクロカプセルを曲線
Ｂで示す。投与１時間後の薬物血漿中濃度は、実施例１
および比較例１のマイクロカプセルにおいて、それぞれ
６８９ng/mlおよび２９２６ng/mlであった。化合物Ａの
塩酸塩を用いて内水相に３％アルギニンを、油相に１０
％ビタミンＥを添加して調製したマイクロカプセルにお
いては、投与後初期の薬物濃度の上昇が抑制され、その
後の血漿中濃度の変動も少なく、約２週間有効血漿中濃
度を安定して持続させることが可能となった。

【００５０】参考例１ アミノ末端にメチオニン付加した組換え型ヒト成長ホル
モン（特開昭６２−１７１６９９号公報の参考例１４に
記載の方法に準じて製造した。以下、Ｍet-ｈＧＨ と略
記する）水溶液(７１０mg/３５５ml ５mＭ ＮＨ₄ＨＣＯ
₃, pＨ７.８)に、Ｚｎ(ＯＡc)₂ ２Ｈ₂Ｏ (７１mg/５ml
Ｈ₂Ｏ)溶液３.５ml (Ｍet-ｈＧＨ：Ｚｎ=１:７ モル)を
撹拌しながら徐々に滴下した。生成した不溶性Ｍet-ｈ
ＧＨ/Ｚｎ複合体を２,５００rpmで２０分間遠心分離
し、上清を除去した後、蒸留水１００mlを加えて再分散
し 凍結乾燥した。

【００５１】実施例５ 乳酸・グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５
０/５０（モル％），重量平均分子量１５,０００ 和光
純薬製）１２７５mg及びビタミンＥ １５０mgを塩化メ
チレン ２.０mlとアセトニトリル ０.４mlとの混液に溶
解し油相とした。この油相に参考例１で得たＭet-ｈＧ
Ｈ/Ｚｎ複合体 ７５mgを分散し、まず超音波照射にて５
分間、さらに小型ホモジナイザー（ポリトロン）を用い
て１５,０００ rpmで１分間微粒化した。このＳ/Ｏ分散
液を１５℃に冷却した１０％マンニトール含有０.１％
ポリビニルピロリドン（ＰＶＡ）水溶液８００mlに添加
し、ホモミキサーを用いて乳化しＳ/Ｏ/Ｗ型乳化物を得
た。次いで通常のプロペラ撹拌機で３時間緩徐に撹拌
し、塩化メチレンの揮散と共に生成するマイクロカプセ
ルを遠心分離機を用いて捕集し、精製水で水洗後、凍結
乾燥に供した。得られたマイクロカプセル２０mgに５ml
の酢酸エチルと１mlの０.１Ｍ酢酸緩衝液（pＨ=４)を加
えて１０分間振盪し、２，５００rpm, １０分間遠心分
離した。得られた酢酸エチル層の紫外線（UV）吸収（２
９４nm）を吸光度計（BeckmanDU 7400）で測定し、マイ
クロカプセル中ビタミンＥ含量を定量した。マイクロカ
プセル中ビタミンＥ含量は１０％であった。

【００５２】実施例６ 乳酸・グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５
０/５０（モル％)，重量平均分子量１５,０００）１３
５０mg及びビタミンＥ ３００mgを塩化メチレン２.０ml
とアセトニトリル ０.４mlとの混液に溶解し油相とし
た。この油相に参考例１で得たｈＧＨ/Ｚｎ複合体 ７５
mgを分散し、まず超音波照射にて５分間、さらに小型ホ
モジナイザー（ポリトロン）を用いて１５,０００rpmで
１分間微粒化した。以下、実施例５と同様にＳ/Ｏ分散
液、さらにＳ/Ｏ/Ｗ型乳化物の調製を経て、マイクロカ
プセル凍結乾燥品を得た。また、実施例５に記載の方法
で定量したマイクロカプセル中のビタミンＥ含量は１７
％であった。

【００５３】比較例２ 乳酸・グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５
０/５０（モル％），重量平均分子量１５，０００）１
４２５mgを塩化メチレン２.０mlとアセトニトリル０.４
mlとの混液に溶解し油相とした。この油相に実施例１で
得たＭet-ｈＧＨ/Ｚｎ複合体７５mgを分散し、まず超音
波照射にて5分間、さらに小型ホモジナイザー（ポリト
ロン）を用いて１５,０００rpmで１分間微粒化した。以
下、実施例６と同様にＳ/Ｏ分散液、さらにＳ/Ｏ/Ｗ型
乳化物の調製を経て、マイクロカプセル凍結乾燥品を得
た。

【００５４】試験例２ 実施例５、６及び比較例２で得られたマイクロカプセル
をＳＤラット(雄性、６週齢)に皮下投与し(ｈＧＨとし
て１５mg/kg)、血清中濃度をＲＩＡにより測定した。得
られた結果を〔図２〕に示す。〔図２〕に示すように、
比較例２のマイクロカプセルを曲線Ａ、実施例５および
６のマイクロカプセルをそれぞれ曲線ＢおよびＣで示
す。投与１時間後のｈＧＨ血漿中濃度は、比較例２、実
施例５および６のマイクロカプセルにおいて、それぞれ
８１３ng/ml, ６３３ng/mlおよび８４４ng/mlであっ
た。投与２週後までの血中薬物濃度時間曲線下面積(Ａ
ＵＣ）から算出した生物学的利用能(ＢＡ)は、ｈＧＨ溶
液の静脈内投与に比較してそれぞれ４２％, ５６％およ
び５７％であった。また投与２週後までのＡＵＣに対す
る投与１日後までのＡＵＣの割合を初期バースト率(Ｉ
Ｂ)とした時、それぞれ８３％, ７９％および７２％で
あった。油相に１０％ビタミンＥを添加して調製された
実施例１のマイクロカプセルでは、投与後初期（１時間
後）のｈＧＨ血漿中濃度（Ｃ１h）の上昇が抑制され、
その後２週に亘り高い血清中濃度を維持し、ＢＡの増大
とＩＢの抑制が達成された。また油相に１７％ビタミン
Ｅを添加して調製された実施例１のマイクロカプセルで
は、Ｃ１ｈに大きな変化はないが、その後２週間に亘り
高い血清中濃度を維持し、同様にＢＡの増大とＩＢの抑
制が達成された。

【００５５】実施例７ 化合物Ａの２塩酸塩５００mg及びＬ−アルギニン３００
mgを蒸留水１mlに溶解し、内水相とした。一方、乳酸・
グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０/５
０（モル％），重量平均分子量８,０００）３９５０mg
及びビタミンＥ２５０mgを塩化メチレン７.５mlに溶解
し油相とした。油相を内水相に加え、小型ホモジナイザ
ー（ポリトロン）で乳化しＷ/Ｏ型乳化物を得た。この
Ｗ/Ｏ乳化物を１５℃に冷却した２.７％ＮａＣｌ含有
０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml（外水相）中でホモミキ
サーを使用して乳化し、Ｗ/Ｏ/Ｗ型乳化物とした。この
後、通常のプロペラ撹拌機で３時間緩徐に撹拌し、塩化
メチレンの揮散と共にマイクロカプセルが固化するのを
待って遠心分離機を用いて捕集した。捕集したマイクロ
カプセルは、精製水で水洗後、凍結乾燥に供した。マイ
クロカプセル中、薬物封入率は９０％であった。

【００５６】実施例８ 化合物Ａの２塩酸塩５００mg及びＬ−アルギニン３００
mgを蒸留水１mlに溶解し、内水相とした。一方、乳酸・
グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝５０/５
０（モル％），重量平均分子量１０,０００）３１６０m
g及び乳酸・グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール
酸＝５０/５０（モル％），重量平均分子量７,０００）
７９０mgの２種類の乳酸・グリコール酸共重合体３９５
０mgとビタミンＥ２５０mgとを塩化メチレン１５mlに溶
解し油相とした。油相を内水相に加え、小型ホモジナイ
ザー（ポリトロン）で乳化しＷ/Ｏ型乳化物を得た。こ
のＷ/Ｏ乳化物を１５℃に冷却した２.７％ＮａＣｌ含有
０.１％ＰＶＡ水溶液８００ml（外水相）中でホモミキ
サーを使用して乳化し、Ｗ/Ｏ/Ｗ型乳化物とした。この
後、通常のプロペラ撹拌機で３時間緩徐に撹拌し、塩化
メチレンの揮散と共にマイクロカプセルが固化するのを
待って遠心分離機を用いて捕集した。捕集したマイクロ
カプセル中、薬物封入率は９１％であった。

【００５７】

【発明の効果】本発明において、生体内分解性高分子重
合物の有機溶媒液に相分離を起こすことなく溶解する油
脂類を添加することにより、生理活性物質を高含量に含
有し、かつ初期放出の少ない安定した放出性を示すマイ
クロカプセルを調製できる。このマイクロカプセルを使
用することにより、生理活性物質の副作用を軽減させつ
つ長期にわたる投与が可能となり、また投与回数の減少
により患者のコンプライアンスの向上が図れる。

【図面の簡単な説明】

【図１】試験例１で用いたマイクロカプセル投与後の薬
物血中濃度の経時変化を示す。

【図２】試験例２で用いたマイクロカプセル投与後の薬
物血漿中濃度の経時変化を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ａ６１Ｋ 38/22 Ａ６１Ｋ 37/32 38/27 37/36 38/43 37/465 38/44 37/50 38/46 37/54 38/48 37/547 38/21 37/66 Ｈ

Claims (27)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】水溶性生理活性物質のマイクロカプセルの
   製造法において、水溶性生理活性物質を含む水溶液を内
   水相とし、生体内分解性高分子重合物及び油脂類を含む
   均一有機溶媒溶液を油相とするｗ／ｏ型乳化物を形成さ
   せ、有機溶媒を除去することを特徴とする徐放性マイク
   ロカプセルの製造法。
2. 【請求項２】ｗ／ｏ型乳化物を水相に分散させ、水中乾
   燥法により有機溶媒を除去する請求項１記載の製造法。
3. 【請求項３】水溶性生理活性物質と塩基性物質とを含む
   水溶液を内水相とする請求項１記載の製造法。
4. 【請求項４】水溶性生理活性物質が分子量約２００から
   約８０,０００のポリペプチドである請求項１記載の製
   造法。
5. 【請求項５】水溶性生理活性物質がインテグリン拮抗物
   質である請求項１記載の製造法。
6. 【請求項６】インテグリン拮抗物質がＧＰIIb／IIIa 拮
   抗物質である請求項５記載の製造法。
7. 【請求項７】ＧＰIIb／IIIa 拮抗物質が、式(I) 【化１】 〔式中、Ａ¹及びＡ²はそれぞれプロトン受容基又はプロ
   トン受容基に変換し得る基を、Ｄはヘテロ原子及び／又
   は５もしくは６員環を介していてもよい２ないし６の原
   子鎖のスペーサー（但し、５もしくは６員環は結合位置
   により２又は３原子鎖と換算する）を、Ｒ¹は水素原子
   又は炭化水素基を、Ｒ²は水素原子又はα−アミノ酸か
   ら−ＣＨ(ＮＨ₂)ＣＯＯＨを除いた残基を示すか、又は
   Ｒ¹とＲ²は結合して５もしくは６員環を形成してもよ
   く、Ｐはヘテロ原子及び／又は５もしくは６員環を介し
   ていてもよい１ないし１０の原子鎖のスペーサー（但
   し、５もしくは６員環は結合位置により２又は３原子鎖
   と換算する）を、Ｙはエステル化又はアミド化されてい
   てもよいカルボキシル基を、ｎは０ないし８の整数を示
   す。〕で表される2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体または
   その塩である請求項６記載の製造法。
8. 【請求項８】2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体が(S)-4-(4-
   グアニジノベンゾイルアミノ)アセチル-3-[3-(4-グアニ
   ジノベンゾイルアミノ)]プロピル-2-オキソピペラジン-
   1-酢酸である請求項７記載の製造法。
9. 【請求項９】2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体の塩が(S)-4
   -(4-グアニジノベンゾイルアミノ)アセチル-3-[3-(4-グ
   アニジノベンゾイルアミノ)]プロピル-2-オキソピペラ
   ジン-1-酢酸 塩酸塩である請求項７記載の製造法。
10. 【請求項１０】2-ピペラジノン-1-酢酸誘導体の塩が(S)
    -4-(4-グアニジノベンゾイルアミノ)アセチル-3-[3-(4-
    グアニジノベンゾイルアミノ)]プロピル-2-オキソピペ
    ラジン-1-酢酸 ２塩酸塩である請求項７記載の製造
    法。
11. 【請求項１１】生体内分解性高分子重合物が脂肪族ポリ
    エステルである請求項１記載の製造法。
12. 【請求項１２】脂肪族ポリエステルが乳酸・グリコール
    酸共重合物である請求項１１記載の製造法。
13. 【請求項１３】油脂類が脂溶性ビタミンである請求項１
    記載の製造法。
14. 【請求項１４】脂溶性ビタミンがα−トコフェロールで
    ある請求項１３記載の製造法。
15. 【請求項１５】油脂類の徐放性マイクロカプセル全量に
    対する最終含有率が約３％ないし約３０％(w/w)である
    請求項１記載の製造法。
16. 【請求項１６】水溶性生理活性物質と塩基性物質とを含
    む水溶液を内水相とし、生体内分解性高分子重合物と油
    脂類とを含む均一有機溶媒溶液を油相とするＷ／Ｏ型乳
    化物を水相に分散させてＷ／Ｏ／Ｗ型乳化物を形成さ
    せ、水中乾燥に付し有機溶媒を除去する請求項１記載の
    製造法。
17. 【請求項１７】塩基性物質が塩基性アミノ酸である請求
    項３または１６記載の製造法。
18. 【請求項１８】塩基性アミノ酸がL-アルギニンである請
    求項１７記載の製造法。
19. 【請求項１９】塩基性物質の徐放性マイクロカプセル全
    量に対する最終含有率が約１％ないし約８％(w/w)であ
    る請求項３または１６記載の製造法。
20. 【請求項２０】水溶性生理活性ペプチドの金属複合体
    を、生体内分解性高分子重合物と油脂類とを含む均一有
    機溶媒溶液に分散させたＳ／Ｏ型分散液より有機溶媒を
    除去することを特徴とする徐放性マイクロカプセルの製
    造法。
21. 【請求項２１】Ｓ／Ｏ型分散液を水相に分散させてＳ／
    Ｏ／Ｗ型乳化物を形成させ、水中乾燥法により有機溶媒
    を除去する請求項２０記載の製造法。
22. 【請求項２２】水溶性生理活性ペプチドがヒト成長ホル
    モンである請求項２０記載の製造法。
23. 【請求項２３】水溶性生理活性ペプチドの金属複合体が
    ヒト成長ホルモンの亜鉛複合体である請求項２０記載の
    製造法。
24. 【請求項２４】請求項１記載の製造法で製造される徐放
    性マイクロカプセル。
25. 【請求項２５】請求項２０記載の製造法で製造される徐
    放性マイクロカプセル。
26. 【請求項２６】水溶性生理活性物質を含む水溶液を内水
    相とし、生体内分解性高分子重合物を含む有機溶媒溶液
    を油相とするｗ／ｏ型乳化物を形成させ、有機溶媒を除
    去することを特徴とする徐放性マイクロカプセルの製造
    のための油脂類の使用。
27. 【請求項２７】水溶性生理活性ペプチドの金属複合体の
    徐放性マイクロカプセルの製造のための油脂類の使用。