JPS58176547A - イムノアフイニテイ−クロマトグラフイ−用担体 - Google Patents

イムノアフイニテイ−クロマトグラフイ−用担体

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JPS58176547A
JPS58176547A JP57059627A JP5962782A JPS58176547A JP S58176547 A JPS58176547 A JP S58176547A JP 57059627 A JP57059627 A JP 57059627A JP 5962782 A JP5962782 A JP 5962782A JP S58176547 A JPS58176547 A JP S58176547A
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antigen
antibody
immunoaffinity
chromatography
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三原　敏夫
Hiroyasu Suzuki
弘康 鈴木
Kazuhiko Arai
一彦 新井
Yoshiaki Ishimatsu
石松　義章
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は生物学的活性を有する有用物質、特に抗体をリ
ガンドとして結合するイムノアフィニティークロマトグ
ラフィー用担体に関し、より詳しくは水酸基を有する水
不溶性ゲルをエポキシド活性化法により活性化し、次い
でポリエチレングリコール誘導体を導入することにより
抗体回収効率が向上し、非特異的吸着を防ぎ、繰返し使
用に耐え、かつ固定化効率の高いイムノアフィニティー
クロマトグラフィー用吸着体を得ることができるイムノ
アフィニティークロマトグラフィー用担体に関するＯ 近年、バイオテクノロジーの技術革新は目ざましく、遺
伝子組換え、細胞融合技術は微生物あるいは細胞の大量
培養により、ホルモン、酵素等の有用物質特にインター
７＝ロン、ソマトスタチン、インシーリン等の微量有用
物質の生産を可能にした。又、ヒトのリンパ球の細胞融
合によるリンホカイン類の生産も抗腫瘍作用、免疫賦活
剤として注目され始めている。（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｊ
、　Ａｃａａ　Ｓｃｉ。
Ｕ、　Ｓ、　Ａ、工８　７７１７（’８１））これらの
生物学的に活性な有用物質には治療薬として期待される
ものが多く、その精製プロセスの良否が工業化の成否を
決定する程である。
現在、分離精製手段としては、溶解度の差、電荷の差、
分子サイズ、形状の差、化学的又は物理的親和力の差な
どを利用する方法が広く用いられているが、これらの手
段はその分離原理が物質の物理的あるいは化学的特性の
差に基づいているため、分離の特異性が一般に低く、精
製純度を上げるためには数種の方法を組合せて使用せね
ばならず、精製効率が低いという欠点を有する。
一方、生伴高分子の生物学的親和力は、固有の特異的な
高次構造に起因して特異性が極めて高く、この生物学的
親和力を分離精製に利用するアフィニティークロマトグ
ラフィーは精製効率の高い優れた精製手段であり、特に
生物学的活性を有する微量有効成分の分離精製には好適
である。イムノアフィニティークロマトグラフィーは特
に微量で生物学的活性が高く、きびしい特異性を有する
抗体をリガンドとして使用するため、精製効率がきわめ
て高く、又抗原性を有するすべての物質の精製に利用で
きるという広′（・応用範囲を有している。
インターフェロンの精製においては、１回のイムノアフ
ィニティークロマトグラフィーで活性を５０００倍に上
昇させることができた。（Ｎａｔｕｒｅ。
イムノアフィニティークロマトグラフィーにおいて、リ
ガンドとして利用される抗体としては、従来免疫動物の
血清あるいは腹水を冷エタノール法等で精製したものを
使用していた。これらは特異性の異る抗体の混合物であ
り、抗原特異性、抗体力価環一定品質の抗体の産生は困
難であった。
しかし、１９７５年にに３ｈｌｅｒとＭｉｌｓｔｅｉｎ
により、リンパ球の細胞融合法が確立されて以来（Ｎａ
ｔｕｒｅ　２５６　４９５．　（’７５））、高い結合
特異性を有するモノクローナル抗体が、大量かつ均質に
調製可能になり、イムノアフィニティークロマトグラフ
ィーの工業的規模での利用の可能性が実現化した。
高純度の精製を要求されるイムノアフィニティークロマ
トグラフィーにおいては目的物資以外の不純物質の混入
を極力避ける必要があり、不純物質の非特異的な吸着の
抑制が重要な課題である。
更に実用的には抗体が高価なため、繰返し使用が必須条
件であり、調製された吸着体の安定性も重要である。
一般に水酸基を有する水不溶性ゲルにリガンド。
を結合するにあたっては共有結合法が優れ、従来ハロゲ
ン化シアンを用いた水酸基を有する水不溶性ゲルの活性
化法が多用されてきたが、この方法は結合部分に荷電部
が導入され、非特異的吸着、リガンドの漏出といった問
題があった。
荷電部を導入しない活性化法としてはエポキシド活性化
法が挙げられ、この方法によれば担体とリガンドの架橋
部に化学的に安定なアルキルアミン結合及びエーテル結
合が形成され、静電的相互作用による非特異的吸着もな
く、工業的規模での使用にも適している。（Ｊ、　Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ。
１３５．４２７（’７７））　　特公昭５６−２３５８
８号公報には水不溶性ゲルをエポキシド活性化法を用い
て活性化し、酵素あるいは酵素抑制剤を結合させる方法
が開示されている。
本発明者らはこの方法を用いてイムノアフィニティーク
ロマトグラフィー用吸着体を得ようと試みたが、抗体の
結合量が低く、高−条件で長時間の反応を必要とし、抗
体活性が低下し、望ましい吸着体を得ることができなか
った。そこで更にスペーサーの導入を試み、一般によく
使用される−（Ｃ１ｈ）ｎ−構造を有するスペーサーを
用いたが、なお不純物の非特異的吸着を避けることはで
きなかった。
本発明者らは固定化効率が高く、非特異的吸着がなく、
抗原回収率が高（、しかも繰返し使用に耐えるイムノア
フィニティークロマトグラフィー用吸着体に望ましい担
体を得るべ（鋭意研究し、水酸基を有する水不溶性ゲル
をエポキシドにより活性化し、スペーサーとして一〇　
−（ＣＨ２−Ｃｌ−４２−０−）ｍ−構造を有するポリ
エチレングリコール誘導体を導入することによって本発
明を完成した。
すなわち本発明に係るスペーサーは親水性を有するため
不純物の非特異的吸着がなく、エポキシ活性化法と併用
することによって優れたイムノアフィニティークロマト
グラフィー用担体を得ることができる。
以下、本発明の詳細な説明する。
イムノアフィニティークロマトグラフィー用担体として
は水不溶性ゲルが使用され、例えば天然物としてはアガ
ロース（セファロース）、デキストラン、セルロース、
多孔性セルロースピーズ、合成高分子としてはポリアク
リルアミド、多孔性ガラス等が挙げられ、中でもリガン
ドである抗体の結合容量、非特異的吸着の排除等の観点
から、アガロースが優れている。更にポリビニルアルコ
ールを架橋して得られた水不溶性ゲル（以下ボッ々−ル
ビーズとする）はアガロースとほぼ同等の効果を有する
優れた素材である。
水酸基を有する水不溶性ゲルを活性化するにあたっては
エポキシド基を有する２官能性化合物、例エバエビハロ
ヒドリン、ビスオキシランを用いる。前者としてはエピ
クロルヒドリンが望ましく、エポキシドが挙げられる。
これらの化合物は比較的緩和な条件で反応し、容易にエ
ポキシ基を導入することができる。
スペーサーは立体障害による抗原回収率の低下を防止す
るために必要であり、本発明におｌ、１て（１次式の化
合物、 Ｎ１−１２−　（ＣＨ２）ｎ−０−（Ｃ■ｚ・ＣＨ２０
）ｍ−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨ２・・・（１） 又は ＮＨ２−ＮＨ・Ｃｏ−（Ｑ−ｂ）ｎ　−０−（ＣＸ−１
２・ＣＨ２０）　ｍ−（Ｑ（２）。
−ＣＯ１１ＮＨ＠ＮＨｚ　　・・・（２）を使用する。
式中ｍは１〜１０であり、立体障害の防止にはｍは１０
以下で充分であり、それ以上であっても効果が向上しな
いばかりか、却って抗原回収率が低下する。式中ｎは２
〜３が適当である。上記（１）、（２）の化合物はどの
ような方法で製造してもよく、例えばポリエチレングリ
コールに常法によりアミノ基又はヒドラジド基を導入す
る方法（’ｌ”ｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ　Ｌｅｔｔｅｒｓ
　Ｎ１３１．　Ｐ、　２８３９（’７８））、又、市販
の中間体、例えば１，２−ビス（２−シアノエトキシ）
エタン（東京化成社製）を還元あるいは水和反応によっ
てアミン基又はヒドラジド基を導入する方法（シアン化
合物の化学と工業、岡田他、幸書房）などがあり、更に
ｒｌＪ販品を購入することもできる。例えば床束化学、
社製、α、ω−ビス（３−アミノプロピル）ポリエチレ
ンクリコールエーテルナトカアル。
エポキシド活性化水不溶性ゲルへのポリエチレングリコ
ール誘導体の結合は強アルカリ性の条件下でエポキシ基
と反応させる。ポリエチレングリコール誘導体の使用量
は水不溶性ゲルに導入しているエポキシ基の１０〜１０
０倍モルテアル。
通常ｐＨ９〜ｊ３．２５〜７５℃で３〜２０時間反応さ
せる。
抗体と本発明に保る担体との結合法はゲルタールアルデ
ヒドによる結合法、抗体の糖鎖部分のグリコール部を過
ヨウ素酸酸化して結合する方法などがあり、またＮ−ヒ
ドロキシコノ蔦り酸イミドニスデル化して結合する方法
も副反応の起きない結合法ではあるか、やや操作が煩雑
であり、□□□ｔｈｏｄｅＥｎｚｙｍａｌ、　３４．７
７　（’７４　）　）その他の公知の結合法を使用する
ことができる。
グルタルアルデヒドによる結合法は担体なｐＨ５〜９で
グルタルアルデヒド溶液と１５〜６０分反応させ充分に
洗滌する。グルタルアルデヒドは担体に結合しているア
ミノ基又はヒドラジド基の１０〜１００倍モル使用する
。次いで担体を抗体溶液とｐｉ（６，５〜９、温度４〜
２５°Ｃの条件下で３〜２４時間反応させ、担体に結合
しているアルデヒド基と抗体分子中のアミノ基をシッフ
塩基反応で結合する０ また、抗体の糖鎖部分を過ヨウ素酸酸化する方法は先ず
、抗体を過ヨウ素酸又はその塩を用いて酸性条件下で酸
化する。このとき、酸化はグリコールの隣接ヒドロキシ
ル基間で起り、１モルのｌ０４−がＩＯ３−に還元され
ると同時に、この部位が分断され、２モルのアルデヒド
基が生成する。
生成したアルデヒド基を本発明担体のアミン基又はヒド
ラジド基と接触させてシッフ塩基反応で結合させる。
シック塩基は酸性又はアルカリ性条件下では不安定であ
り、イムノアフィニティークロマトグラフィーにおいて
吸着タンノくり質の溶出を酸性又はアルカリ性で行う場
合にはシッフ塩基の安定化が望ましく、水素化ホウ素ナ
トリウム又はシアノ水素化ホウ素ナトリウムその他の還
元剤により、…５〜９、温度４〜２５℃で数１０分から
数１０時間還元することにより容易に安定化させること
ができる。
以下、実施例を挙げてさらに具体的に説明するが、本発
明はこれによって制限されるものではない。
なお、以下の実施例において抗原回収率は下記の方法に
よって測定した。
■）抗原の放射性ヨウ素（１２５１識 クロラミ７Ｔ法（Ｎａｔｕｒｅ、　１９４　”４９５（
’　６２））により　　Ｉで標識し、ゲル濾過により精
製した。
２）可溶性抗体の抗原結合量の測定 一定量の抗体溶液に　　■標識した抗原溶液の希釈系列
溶液を等量加７忙良く攪拌し、一定時間放置後遠心分離
し、上清又は沈降物の放射活性を測定し、結合し得る抗
原量の最大値を求めた。
（抗原濃度、抗体濃度及び放置時間は予備実験により決
定した。） ３）吸着体（固定化抗体）の抗原結合量の測定吸着体を
カラムに充填し、１２５Ｉで標識した抗原を供給してア
フィニティークロマトグラフィーを行い、吸着された抗
原の放射活性を測定して、吸着体の抗原結合量を求めた
。
４）抗原回収率の算出 実際のカラム反応において吸着された抗原量（３）と吸
着体の作製に使用した可溶性抗体が結合し得る抗原量の
最大値閑の比率で求めた。
すなわち、抗原回収率＝　ｙ　ｘ　１ｏ　ｏ　％とじた
。
グラスフィルター上でよく洗滌し、吸引濾過したセファ
ロース４Ｂ（ファルマシ７１Ｊ：製）２０Ｊｉ’＼（ （湿重量）を丸底フラスコに入れ蒸留水３ｏｍｌと２　
Ｍ、Ｎａ０１−１１３　ｍｌ、　ｘピクロルヒドリｙ　
３ｍｌを順次加え、４０’Ｃの恒温槽中で２時間振とう
した。
次いでグラスフィルター上で蒸留水でよく洗浄して活性
化ゲルを得た。約５００μｍｏｌｅ／９（固形分）のエ
ポキシ基が導入された。エポキシ基の定量は塩酸による
滴定法（Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　９０゜８７　
（’７４　）　）によった。（以下の実施例比較例にお
いても同じ） 実施例１−１で調製したエピクロルヒドリン活性化セフ
ァロース４Ｂ２０ｇ（湿重量）を丸底グラス：７　Ｋ　
入れ、蒸留水１００　ｍｌ、　　２　Ｍ、ＮａＯＨ１０
０ｍｅ１　α、ω−ビス（３−アミノプロピル）−ジエ
チレングリコールエーテル（仏学化学社製）２゜ｙを加
え、４０℃の恒温槽中で一晩振とうした。
約４５０　μｍｏｌｅ　／’Ｊ　（固形分）ノα、ω−
ビス（３−アミノプロピル）ジエチレングリコールエー
テルが結合した。なお、α、ω−ビス（３−アミノプロ
ピル）ジエチレングリコールエーテルの結合量はケルダ
ール法による窒素含量の分析法により求めた。（有機定
量分析、基礎分析化学講座１１、共立出版）（以下の実
施例比較例においても同じ）。
ケン化度９９．５モル％、平均分子量６０００のポバー
ル２０ｇをトルエン３００ｍ１に溶解し、トリレンジイ
ソシアナートをポバールに対して１モル％加え、１００
℃で激しく攪拌しながら５時間反応させた後、アセトン
で抽出し、蒸留水で洗滌し、架橋ポバールピーズを調製
した。
セファロース４Ｂに代えて実施例２−１で得たポバール
ピーズを用い、エピクロルヒドリンの使用量を６ｍｌに
した以外は実施例１−１と同様にしてポバールピーズを
活性化した。約３００μｍｏｌｅＺｇ（固形分）のエポ
キシ基が導入された。
実施例２−２で得られたエヒリロルヒドリン活骨化ポバ
ールビーズを用いた他は実施例１−２と同様にしてポリ
エチレングリコールエーテル誘導体を結合し、本発明担
体を得た。約２００μｍｏ！ｅ／ｇ（固形分）のα、ω
−ビス（３−アミノプロピル）ジエチレングリコールエ
ーテルが結合した。
実施例　３−１　抗ウシアルブミン抗体の結合実施例１
−２（セファロース使用）及び実施例２−３（ポバール
ビーズ使用）で調製した本発明担体各５ｇ（湿重量）を
５％グルタルアルデヒド５ｏｍｅで３０分処理し、０．
０１Ｍリン酸緩衝液（以下Ｐ　１３　Ｓとする）（ｐｉ
−１８，０）で充分洗滌した。
別に抗ウシアルブミン抗体をウサギの抗血清（富士臓器
社製）より硫安塩析及びＤＥＡＥセルロースカラムクロ
マトグラフィーにより調製した。この抗ウシアルブミン
抗体７５ｍ９を０．０１ｇＰＢＳ（ｐＨ８，０）　５０
ｍｌに溶解し、グルタルアルデヒドで活性化した各相体
と４℃で一晩それぞれ反応させた。さらに０．２　Ｍエ
タノールアミン（ｐ＋（ｓ、ｓ）により室温で２時間処
理し、未反応のアルデヒド基をブロックした。次にＮａ
Ｂ８４５０■により、温度４℃で６時間反応させ、シッ
フ塩基を還元し、イムノアフィニティークロマトグラフ
ィー用吸着体を得た。この場合の抗原結合量を第１表に
示した。
第１表 製 実施例３−１で調製した抗ウシアルブミン抗体結合セフ
ァロース４Ｂ及びポバールピーズ各５１ＩＩｔをそれぞ
れＩＣＩｎφのカラムに充填し、ウシ血清０．２゜ｍｅ
をカラム上部より供給し、０．０２Ｍホウ酸バッフーｆ
−（ｐ１１８．０．　　ｏ、ｔ　５Ｍ、Ｎａ（Ｊ含有）
を溶出液の０１）２８０ｎｍが０．００５以下になるま
で流下させた。次に０．２Ｍグリシン−塩酸バッファー
（ＰＨ２，５）を通液して吸着されていたウシアルブミ
ンを溶出した。抗原回収率及び精製純度を第２表精製純
度はグリシン−塩酸バッファー溶出画分をＳＤＳポリア
クリルアミド電気泳動後、クマジープリリアントプルー
染色し、島津二波長クロマトスキャナーＣ８−９ｔｏ（
島津製作所製）により求めた。（以下の実施例比較例に
おいても同様とする。）またカラム反応における流速は
５ｍｌ／儂２・ｈであった。
実施例　３−３　繰返し使用によるアルブミンの精製 実施例３−２と同一のカラム操作を繰返し行ったところ
、実施例３−１で得られたイムノアフィニティークロマ
トグラフィー・用吸着体は抗ウシアルブミン結合セファ
ロース４Ｂ及びポバールピーズ共３０回繰返し使用後も
抗原回収率、精製純度とも低下はみられなかった。この
結果を第１図に示した。
精製抗ウシアルブミン抗体に代えて抗原結合力のないγ
−グロブリン（Ｂｏｖｉｎｅ、　　マイルス社製）を用
いた他は実施例３−１と同様にして吸着体を得た。担体
１１湿重量）あたり１ｌＩｎ９のγ−グロブリンが結合
した。
実施例　４−２　非特異的吸着量の測定実施例・１−１
で調製した吸着体５ｍｌを１ｃｒｒＬφのカラムに充填
し、牛血清アルブミン（ＢＳＡ）５ｍ９をカラム」二部
より供給し、００２Ｍホウ酸バッファー（ｐｌ（８，０
，０，１５Ｍ、ＮａＣ７含有）を流下させた。カラムか
らの溶出液のＯＤ２　ｓ　ｏ　ｎｍが０．００５以下に
なるまで同一バノフ７−を通液後１．０．２Ｍグリシン
−塩酸バッファー（ｐＨ２，５）を通液した。このとき
のＢＳＡ回収率を第３表に示した。第３表より本発明に
よれば非特異的吸着がほとんど排除されていることが判
明する。
第３表 なお、タンパク質の定量はＬｏｗｒｙの方法によった。
（Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　１９３．２５６（＋
５１））。また、カラム反応における流速は５ｍ／！／
ＣｒｒＬ２・ｈであった。
精製抗ウシアルブミン抗体を、ウサギの抗血清（富士臓
器株制）より硫安塩析により調製した。
この精製抗ウシアルブミン抗体４０ｍ９を、１０ｍ１の
０．１　Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３，７）に溶解し、ＮａＩ
Ｏ４１ｍ９を添加して、室温で３０分間反応させた。次
にエチレングリコールな最終濃度が０．１Ｍとなるよう
添加し、４°Ｃで４時間反応した。さらにこの反応液を
４℃で１８時間ｏ１Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ３，７）１１に
対し透析した。
実施例５−１で調製したアルデヒド基導入抗ウシアルブ
ミン抗体に、実施例１−２で調製したイムノアフィニテ
ィークロマトグラフィー用担体５ｇ（湿重量）を添加し
、Ｏ，’１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ９）により〆
（を６に調整した。４℃で一晩反応させた後、形成した
シッフ塩基にＮａＢＨ４１０ｍ９を加え、４℃、５時間
、ｐＨ８５の条件で処理して還元し安定化し、イムノア
フィニティークロマトグラフィー用吸着体を得た。この
場合の抗体結合量を第１表に示した。
実施例５−２で調製したイムノアフィニティークロマト
グラフィー用吸着体を使用した他は実施例３−２と同様
にしてウシ血清中のアルブミンの精製を行った。抗原回
収率及び精製純度を第２表に示す。また繰返し３０回使
用後も抗原回収率、精製純度共低下がみられなかった。
比較例　１ 実施例１−１と同様の方法でエポキシ基を導入した七）
ｒロース４８３９　（湿重量）を、精製抗ウシアルブミ
ン抗体（実施例３−１）溶液３ｏｍｌ（１，５ｍｅ）／
ｍｅ　）に分散させ、室温でゆるやかに振とうしながら
反応させた。得られた吸着体の抗体結合量ｍ９／ｇ（湿
重量）を第４表及び第１表に示１″°　　　第４表 また、実施例３−２と同様にしてウシ血清中のアルブミ
ンを精製し、抗原回収率及び精製純度を第２表に示した
。
比較例　２ ＣＮＢｒ活性化セファロース４Ｂ（ファルマシア社製）
１ｇ（乾重量）をｌｌ’ｌ１ｇ旧Ｃ１Ｃ１５ｏに１５分
浸漬し、カップリングバッファー（０，５Ｍ、ＮａＣ６
を含む０．２　Ｍ、ＮａＨＣＯ３ハノ７−ｒ　−ｐｔ（
’８．５）で洗浄した。抗原結合能力のないγ−グロブ
リン（Ｂｏｖｉｎｅ、　　−、イｙ、、、、＜社製）１
　ｓ　ｏｍｇヲ力ｙ　フ＋）　７　’グバツフｔ５０ｍ
ｅに溶解し、ＣＮＢｒ活性化セファロース・１１３を分
散させて、ゆるやかに振とうして４　’Ｃで一晩反応さ
せた。担体１（湿重量）あたり６　ｍ！７′のγ−グロ
ブリンが結合した。さらに０．２゜Ｎ１エタノールアミ
ン（ｐＨ８，５）により室温で２時間処理して活性基の
ブロックを行った。ここで得られた吸着体を用いて実施
例４−２と同一の方法で牛血清アルブミン（ＢＳＡ）の
溶出試験を行った。ホウ酸バッフＩ−溶出画分及びグリ
シン塩酸バッファー溶出画分の回収率を第３表に示した
。
比較例　３ 精製抗つンアルプミン抗体を比較例２と同様の方法テＣ
Ｎｌ３ｒ活性化セファロース４Ｂ（）′アルマシア社製
）に結合した。１ｇ（湿重量）当り５＃ｉの抗体が結合
した。この数値を第１表に併記した。
また、実施例３−２と同様にしてウシ血清中のアルブミ
ンを精製し、抗原回収率及び精製純度を第２表に示した
。更に同一カラムで繰返し試験を行ったところ、７回使
用後、ウシアルブミン吸着量の顕著な低下を示した。こ
の結果を第１図に示した。
比較例　４ 実施例１−１で活性化したセファロース４８５ｇ（湿重
量）をアンモニア水（２５％）３０ｍｌ中に分散し、４
０°Ｃ２時間反応させてアミン化した。
ケルメール法によりアミノ基の定量を行ったところ、４
８０　μｍｏｌｅ　／９　（固形分）ノアミノ基が導入
された。
このアミノ化セファロース４　Ｂ　５　、！ｉ’　（湿
重１ｉ）に実施例３−１と同様の方法で精製抗つシアル
ブミン抗体を結合させたところ、結合量はｉ（湿重量）
あたり１０ｍ９であった。（第１表に併記）また実施例
３−２と同様にしてウシ血清中のアルブミンを精製し、
抗原回収率及び精製純度を第２表に示した。
比較例　５ 実施例１−１で活性化したセファロース４Ｂ５ｇ（湿重
量）を円底フラスコ中で蒸留水２５ｍ１．２　Ｍ、Ｎａ
０１１２５　ｍ１１ヘキサメチｔ／７ノアミン１，５Ｉ
と４０℃−晩反応させ、１ｇ（固形分）あたり４００μ
ｍｏｌｅのへキサメチレンジアミンを導入した。
このヘキサメチレンジアミン結合セファロース４　Ｂ　
ｓ　ｊｉ　（湿重量）に実施例３−１と同様の方法で精
製抗ウシアルブミン抗体を結合させたところ、結合量は
１ｇ（湿重量）あたり１１ｍ９であった。
（第１表に併記） また実施例３−２と同様にしてウシ血清中のアルブミン
を精製し、抗原回収率及び精製純度を第２表に示した。
【図面の簡単な説明】
第１図はカラム操作におけるウシアルブミン吸着量と繰
り返し回数との関係である。 特許出願人　　電気化学工業株式会社 代理人　弁理士　　　鈴　　木　　定　　子繰り返し回
数 手続補正書 昭和５７年Ｇ月２７日 特許庁長官　若杉和夫殿 ■、小事件表示 昭和５７ガ、特許　　願第５９６２７号２、発明の名称
　イムノアフィニティークロマトグラフィー用担体３、
　補正をする者 事件との関係特許出願人 ４、　代　　理　　人　　〒　　１５０５、　補正命令
の日付　自発 ６、　補正により増加する発明の数、・　　なしく１）
　　　明細書４頁、１６行の「目的物資」を「目的物質
」に訂正する。 （２）　　　同１，９負、１７行１８行の「Ｍｅ　ｔ　
ｈｏｄ　（ＥｎｚｙｍａＩＪを［１ｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎ
ＬｙｍｏｌＪに訂正する。 （３）　　　同、１３頁、１３行の「仏学化学社製」を
「床束化学社製」に訂正する。 （４）　　　同、１５頁、１０行の「・・・３０分処理
し、」の後に「０．１５Ｍ　　Ｎ　ａｃｌを含む」を挿
入する。 （５）　　　同、１６頁、３行の１抗原結合量」を１抗
体結合蓋」に訂正する。 （以上）

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 エポキシド基を有する２官能性化合物で活性化された水
    酸基を有する水不溶性ゲルに次式の化合物。 Ｎ１１２　−　（ＣＩ−１２）、−０−（ＣＨ２−ＣＨ
    ２０）ｍ−（ＣＨ２）−−Ｍｋｌｚ・・・（１） 又は Ｎｌ２−Ｎ）（−Ｃｏ　−（ＣＨ２）ｎ　−ｏ　−（Ｃ
    Ｈ２−ＣＨ２０）−−（ＣＨ２）ｒｌ−ＣＯ−Ｎｌ−１
    ・Ｎ１（２・・・（２）（ただし、式中ｎ　＝　２〜３
    、ｍ　＝　１〜１０である）を結合してなるイムノアフ
    イニテ（−クロマトグラフィー用担体。
JP57059627A 1982-04-12 1982-04-12 イムノアフイニテイ−クロマトグラフイ−用担体 Granted JPS58176547A (ja)

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