JPS58201714A - 新抗生物質３１，５５９ｒｐを含有する動物に与えるための組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は抗生物質を含有する組成物に関するものである
。

本発明は、新抗生物質３１．５５９ＲＰ　　またはその
金属との、または含窒素塩基との塩類を含有す・る組成
物を提供する。３１．５５９ＲＰ　は貴重な抗コクシジ
ウム活性、および抗菌活性、および抗マラリア活性を有
する。これはまた反皺動物のための成長因子として、ま
た豚における赤痢を阻止するため薬剤として貴重である
。

新抗生物質３１．５５９　ＲＰ、その性質および製造に
ついては後記するが、本願の原州願に相当する特願昭５
０−２６４４３にも記載されている。

本発明は３１．５５９　ＲＰ　　またはその金属とのあ
るいは含窒素塩基との塩０．０００１ないし９９．９重
ｉ％と動物により消費されうる物質とを含む動物投与用
組成物を提供する。（当然のことながら、用いる塩はど
れも投与される濃度および投与量において無毒性である
陽イオンを含まねばならない。）このような組成物は、
動物用混合飼料あるいは動物を飼育するための濃縮混合
物、３１．５５９ＲＰあるいはその金属とのまたは含窒
素塩基との塩、および任意に他の抗コクシジウム剤・か
らなりうる。

これら組成物は鳥における、そして特に家禽におけるコ
クシジウム症に対抗するのに特に有用である。

適当な効果を生ずるために必要な用量は、勿論、飼料の
割合によってかなり広い範囲内で変化しうる。一般的に
言えば、動物へ与えられる飼料が３１．５５９　ＲＰ　
　マタハソノ塩をｏ、ｏｏ５なイシ０．０４重量係含め
ば十分である。

３１．５５９１Ｐ　　またはその塩は、上記濃度で、完
全な飼料中に隈なく一様な分散系として分布させること
ができる。

これはまた０、０２５ないし１優の用量で補助飼料中全
体に分布させることもでき、そしてこの場合にはしばし
ばビタミン類および無機塩類といった他の添加物を伴う
。これら補助飼料は、主要食と混ぜてもよいし、または
そのまま喰ぺさせてもよい。これらは通常は主要食の５
ないし２０憾に相当する。

完全食あるいは補助飼料をつくるために使われる「ゾレ
ミクス」は、飼料増量材中に希釈された３１．５５９Ｒ
Ｐ　　またはその塩０．０５ないし２０ｑ６を含むのが
普通である。これらは、活性生成物を飼料中に隈な（一
様に分布させることを容易にする便利な中間品である。

プレミクス自身は、可食変性剤、例えば可食染料、香味
付けの物質、分散剤、あるいはアグロメレーション防止
剤、および飼料増量材が添加された３１，５５９ＲＰ　
　またはその１４９９．９ないし２０１を含有する濃縮
物から一般に製造される。

濃縮物およびゾレミクスは一般に粉である。補助１１１
Ｉｌ狛および完全飼料は粉か、通常の技術により製造さ
れる顆粒状のどちらでもありうる。

次の実施例（百分率は重量て未示〕は本発明組成物を説
明するものである。

実施例Ａ 次の組成を有する基本飼料を調製する：穀類粗粉　　　
　　　１３．４ｉ係 大麦粉　　　　１３．４１係 とうもろこし粉　　　　　　１３．４１　幅小麦粉　　
　　３１．３２係 魚　　　粉　　　　　　　　　　８．９２係大豆粉　　
　　８．９２係 脱水まぐさ粉　　　　　　　　４．５６係酵母エキス　
　　　　　　２．６３係 乾燥乳粉　　　　　　２．６８係 塩化ナトリウム　　　　　　　０．０９係地化カルシウ
ム　　　　　　０．８９優鉱物質成分　　　　　０．０
６係 ビタミン型複合体： ビタミンＡ４．０００　工、Ｕ、／　ｋｇビタミンＤｓ
　　　　　　　　１ｅ０００　工、Ｕ、／ゆ塩化コリン
　　　　　　１１．５ダ／に９′リボフラビン　　　　
　　　２．２４ダ／ゆ３１．５５９ＲＰ　　のナトリウ
ム塩０．０２係をこの飼料に加え、全体に一様に分布さ
せる。

本発明は、反皺動物（牛、羊、および山羊）Ｋ対する発
育因子として、また豚の赤痢に対抗するための薬剤とし
て使用できる３１．５５９ＲＰ　　またはその塩を基本
とする組成物を提供するものである。

これら組成物は、３１．５５９ＲＰ　　またはその塩を
含む反皺動物または原剤の混合飼料および動物を飼育す
るための濃縮混合物からなる。

適当な効果を生ずるために必要な用量は、当然のことな
がら、動物種によりまた飼料自体の栄養価により広い範
囲内で変動しうる。

動物１頭につき３１．５５９ＲＰ５０ないし２５０ダの
１日量を動物に与えるのが特に有利である。

３１．５５９　ＲＰ　は、しばしばビタミン類および無
機塩といった他の添加物と共に、本抗生物質０．０１な
いし０．１係を含む補助飼料中に隈な（分布させること
が好ましい。これら補助飼料は主要食と混合してもよい
し、またはそのまま喰べてもよ（、そして通常は毎日の
食糧のおよそ１ないし１０優に相当する。このようにし
て、３１，５５９ＲＰは毎日の糧食の０．０００１−０
．０１重量係に相当する。

完全糧食または補助飼料をつくるために用いられる「プ
レミクス」は一般に飼料増量材中に希釈された３　１．
５５９　ＲＰ　　Ｏ，１ないし５％を含む。これらは、
３１．５５９ＲＰ　　を飼料中に隈な（均一に分布させ
ることを容易にする便利な中間品である。

「プレミクス」自身は、可食変性剤、例えば可食染料、
香味物質、分散剤、あるいはアグロメレーション防止剤
、および飼料増量材が添加された３１．５５９ＲＰ　　
９９．９ないし５憾を含有する濃縮物から一般に製造さ
れる。

濃縮物およびプレミクスは一般に粉である。補助飼料は
粉か、あるいは通常の技術に従って製造された顆粒状の
どちらでもありうる。これら組成物における３１．５５
９ＲＰ　　またはその塩は、コーティングの無い、ある
いはコーティングで覆われた微細粒子の形をとることが
できる。

次の実施例は、成長因子どしての３１．５５９ＲＰの使
用を説明するものである。

実施例Ｂ ホルンュタイン種の１２頭の若い去勢牛を個々の牛舎に
入れ（その平均表面積は４８　ｍ２である）、次に目方
を計る。調べようとする飼料を、０日、即ち実験開始日
から供給する。次に、去勢牛を２８日後、そして次に５
６日後に秤量し、この期間中に消費された飼料の重電を
決定する。〇−２８日および２Ｂ−５６日の期間内で調
査した各飼料に対し、平均重量取得および飼料の平均転
化度を決定する。

動物に１８二回飼料を与える。毎日の糧食は、去勢牛が
何も残さずに最大量の食物を吸収するように決める。こ
の実験で、若い去勢牛を３群に分割する。各動物はと５
もろこし、干し草、およびタンパク質補助剤からなる基
本飼料を受ける。

群Ｉの各動物は基本飼料を受ける。群■の各動物は、タ
ンパク質補助剤が１００〜の抗生物質３１．５５９ＲＰ
　を含む基本飼料を受ける。群■の各動物は、タンパク
質補助剤が２００９の抗生物質３１．５５９ＲＰ　を含
む基本飼料を受ける。動物１頭当りの毎日の平均糧食は
次の組成を有する：８用いたタンパク質補助剤は、メッ
サーズ、ランドマーク社（、Ｍｅｓａｒｓ、Ｌａｎｄｍ
ａｒａｋ、工ｎａ、　）により供給される“プロ　ブレ
ンド（ＰＲＯＢＬＥＮＤ）５０”で、次のものから成る
： 総タンパク質当量　　〉５０　係 脂　　　質　　　　　〉１壬 植物繊維　　　く９憾 ビタミンＡ　　　　＞必、０００単位／〜得られた結果
を次の表に示す。

このようにして、最初の２８日間に、１顕画り１日につ
き１００１ｎ９の３１．５５９ＦＬＰ　を受けた動物は
、対照動物よりも体重取得が６％多く、そして転化度が
１．６係少ないが、これら百分率は３１．５５９ＲＰ　
を１００１ｖ／頭／日受けた動物の場合には、それぞれ
１５．３４および１３．４　％である。

第二の期間（２Ｂ−５６日）で、１００ダ／日の３１．
５５９ＲＰ　　を受けた動物は高投与量を受けた動物に
追いつく。次に、重量取得は、１００■／日の投与量に
おいて、対照のそれよりも１３．４１高く、転化度は９
．８係低い。そしてこれら百分率は２００Ｆ＋１＆／日
の投与量に対してはそれぞれ９．６係および７．６％で
ある。実験の全期間にわたり（５６日間）、１日当りの
３１’、５５９　ＲＰ　　１’００および２００ＩＩｌ
ｙのそれぞれの用量において、対照と比較して、毎日の
平均取得は７．８および１２．２１改嵜され、転化度は
６．４係および１０．２１改善される。

３１．５５９ＲＰ　は、あとでもっと完全に同定さ１ れるが、ストレプトマイセス属に属し、ストレプ（ＮＲ
ＲＬ５７８７）と呼ばれる新しい微生物を培養すること
により得られる。この微生物は微生物工業技術研究所に
微工研菌寄第４３２９号として寄託されている。

３１．５５９ＲＰ　は炭素、水素および酸素を含む。

そのす）　ＩＪウム塩の元素組成はおよそ次の通りであ
る二 ０　＝　６３．２係、Ｈ＝８．８係、ｏ　＝　２４．３
％、１１ａ＝２．９係 その中性当量（酢酸中でナトリウム塩を過塩素３１．５
５９ＲＰ　　のナトリウム塩は多分法の実験式：は分子
内に四つのメトキシ基が 存在することを示す。

２ ３１．５５９ＲＰ　のナトリウム塩は次の諸性質を有す
る。このものは白色微結晶性の粉末である：〔Ｐｈａｒ
ｍａｃｏｐＡｅ　Ｉｌ’ｒａｎｃａｉｓｅ　　ＮＤｒ版
、第２部、１３頁（１９７２）の表示法を使用〕このも
のは、水に事実上不溶、炭化水素溶媒、例えばヘキサン
に僅溶、アルコール類、例えばメタノール、ケトン類、
例えはアセトン、ジメチルホルムアミド、および酢酸エ
チルに可溶、塩素化溶媒、例えば塩化メチレンおよびク
ロロホルムに易溶：その融点（コフラーベンチで測定）
は２２０℃（分解を伴う）である： その士争嚇旋光度：（０＝１．０５０　　メタノール中
） その紫外スペクトル（エタノール中０．９５０Ｊ！１０
、（−濃度の溶液で測定）は２１０　ｎｍ、まで特徴的
吸収を示さす：その赤外スペクトル（臭化カリウムとの
混合物の錠剤で測定）を添付図面の第１図に示したが、
線図において、ミクロンで表わした波長（上の目盛）と
ｃＩＩＬ−１で表わした波数（下の目盛）を横軸として
プロットし、また光学密度を縦軸としてプロットした。

この化合物の主な赤外吸収帯〔波数（ｃＩＩＬ−１）で
表示〕を次の表■に示す。

表　　■ ３．４３０８−１．３７２ｓｈ　１．０９０ｓｈ　７７
５θｈ３．１８０　Ｓ　１．３６２８ｈ　１，０７２　
Ｂ　　７６５８ｈ２．９７０　ＶＢ　１．３５０　ｓｈ
　１，０６５　ｓｈ　、７４８　ｍ２１９３５８　１１
３３５　ａｈ　１．０４０　Ｓ　　７０５　ｍ２ｅ９２
５　ａｈ　１．２９８８ｈＬＯ１８５６５５ａｈ２．８
８０　ｓ　　１．２９２　ｍ　　１．０００　ａｈ　６
３５　ｍ２．８２５　ｍ　　１．２６０　ｓｈ　　９８
５　ｓ　　６１０　ｗ２．６００　ａｈ　１．２３８８
　９６Ｂ　ＶＢ　５９０　ＶＷ２．０６０　ｖｗ　１．
２２０　ｓｈ　　９４０　Ｓ　　５７（ｌ　ａｈｌ、９
４５　ｖｗｌ、２００　ｓ　　９２８　ｍ　５６５　ｗ
ｌ、８５０　ｖｗ　１．１９０　ｓｈ　　９１２　Ｓ　
　５５０　ｗｌ、７６０　ｖｗ　１．１８５　ｓｈ　　
８９０　ｍ　５３５　ｗｌ、７３０　ｖｗ　１．．１７
０８　８７０８５００　ｖｗｌ、６３０８ｈ　１．１５
２Ｗ　　８５２ｍ　４８２ＶＷ１．５９０　Ｂ　１．１
４０　ｓｈ　　８２８　ｍ　４２０　ｍｌ、４５０　Ｂ
　　１．１１５　Ｓ　　８１５８ｈ　３７８　Ｗｌ、３
９８　Ｂ　　１．１０８　ｓｈ　　７９２　ｓｈ　３５
０　ｍｌ、３８０　Ｓ　　１．０９２　Ｖｓ　　７８８
　ｍ５ ７Ｂ　＝非常に強い　　　８２強 ｍ＝中程度　　　　　Ｗ＝弱 ｖｗ　＝非常に弱い　　　θｈ′−肩 ３１．５５９ＲＰ　　のナトリウム塩はまた二つの混合
溶媒系を用いるシリカゲル薄層の上昇クロマトグラフィ
ーにより特徴づけられる： １）酢酸エチル、シクロヘキサン、水およびシタノール
（体積で５Ｏ−５０−２５−５）：この系では、３１．
５５９ＲＰ　　のナトリウム塩は０．５のＲｆ　　を有
する。

２）塩化メチレンとメタノール（体積で９４−６）：こ
の系では、３１．５５９ＲＰ　　のナトリウム１は０．
７のＲｆ　　を有する。この３１，５５９ＲＰ　のナト
リウム塩は次式を有することが見出された：６ Ｈ２ＣＯ０Ｈ８ ３１，５５９１Ｐ　　は、特にある種のべ”ラム陽性菌
に対し静菌活性を発揮する。幾つかの微生物に対する３
　１．５５９　ＲＰ　　ナトリウム塩の静菌活性が、こ
の目的に常用される希釈法の一つにより決定された。各
微生物に対し、指定された条件下□で、ｉ当な栄養培養
液中で目に見え乞発育を抑制する活性物−の最ホ濃度を
決定する。各種の測定の結果を次の表■に示すが、ここ
で、最小静菌濃度は試験培地１Ｑ、ｃ、当りの物質のマ
イクログラム数で表わされている。　　　　　　゛ ７ 遺−」乳 ひよこにおける３１．５５９ＲＰナトリウム塩の５０チ
致死ｉｔ　（ＬＤｓ。）は、−回の投与量として、１５
０１ｖ／即（経口）である。

抗コクシジウム活性 ３１．５５９１Ｐナトリウム塩の抗コクシジウム活性を
、アイメリア　テネラ（ｆｌｔｉｍｅｒｉａ　ｔｅｎｅ
ｌｌａ）またはアイメリア　アセルブリナ（ａａｅｒｖ
ｕｌｉｎａ　）で感染させたひよこで測定する。３１，
５５９ＲＰのナトリウム塩を餌の中に０．００５および
０．０４重量％の無毒性濃度で餌に混入したとき、実質
的な抗コクシジウム活性が示される。

３１．５５９Ｒｐを産生する生物は、インドで採取した
土の試料から採取されたストレゾトマイセス株で、これ
にＤＢ　２４．５６７の番号が与えられた。その試料は
、ノーゾーン・レジオナル・リサーチ・ｙざラトリー・
オデ・デ・Ｕ、ｓ、ｙ”パートメント・オブ・アグリカ
ルチャー（ｔｈｅ　Ｎｏｒｔ、ｈｏｒｎＲｅｇｉｏｎａ
ｌ　　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　　ｏ
ｆ　　ｔｈｅ　　Ｕ、日。

Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ａｇｒｉｏｕｌｔｕｒｅ
　）、ペオリア市、イリノイ州（Ｕ、８．ム、）に発鈴
され、ここでＮＲＲＬ５７８７なる照合の下に記録され
た。

この株は、少量の土を滅菌蒸留水中にけん濁し、とのけ
ん濁液な種々な濃度に希釈し、そして各希釈液の少量を
栄養寒天培地を含むぺ）　９皿の表面に拡げることから
なる一般法により単離される。

微生物の発育を許す２５℃で２．３日間のインキュベー
ション後、コロニイ−（これは更に深く調べるために単
離することが望ましい）を取出し、斜面栄養寒天上に移
植して一層豊富な培養をつくり出す。

ストレゾトマイセス株Ｄ８２４３６７は橿ストレゾトマ
イセス　ハイグロスコぎクスに属し、その本質的特徴は
、ＨｏＤ、）レスナー（ＴＲ１１１８ＮＢＲ）およびＢ
、Ｊ、バッカス（ＢＡＯＫＵＳ　）　（応用微生物学上
、２４３−２５０．１９５（Ｓ）により、またＳ。

Ａ、’７ツク、Ｘ　マｙ　（ＷＡＫ８ＭＡＮ　）　（放
線ｉｌｌ、　ｒ−ウィリアムス・アンド・ウイルキンス
社、パルチモア、１９６１．２３０−２３１頁）により
・定義され、結局、ストレゾトマイセス・ハイグロスコ
ぎクス株ＤＢ　２４，３６７なる名前により表示された
。

Ｓ、バイグロスコークス　ＤＳ２４３７は、ＬＤ、）レ
スナーおよびＢ、Ｊ、バッカス、ならびＫ　Ｓ、Ａ、ワ
ックスマンが種Ｓ、ハイグロスコピクスを定義した三つ
の特徴に一致する次の三つの特性を有する： ＆）その芽胞槽は一般に２．６回巻いた線輪を有する固
く締ったラセンで終っていて、これらラセン状芽胞柄は
多少なりとも長く伸びたふさを形づくるようにフィラメ
ントに沿って通常は密集する。

ｂ）その胞子形成をした気中画線体が、発達の好時期に
達したとき、Ｓ、ハイグロスコピクス種により示される
それと一致する暗灰色の着色を示す。

Ｃ）気中画線体の良好な発育を許すある培地上で、湿っ
た外観を呈する輝いた黒い領域が、時が経つにつれて胞
子形成した表面に現われて来る。

Ｓ、バイグロスコークスＤ８２４５６７の場合に１ は、気中画線体の形成は、しばしば極く僅かに起るだけ
で、ある種の培地上では現われないことさえある。灰色
の胞子形成した気中菌綿体が現われるとき、黒い域の形
成は、もしそれが起るときは、一般にどちらかといえば
散在して生じ、画線体の全表面のすべてにわたるのでは
なく気中画線体上に局所的に分布した小さい点あるいは
小さい領域に限られる。しかし、特にゾリドハム（Ｐｒ
ｉａｈａｍ）酵母寒天、ゾリドハムオートミールおよび
トマトペースト寒天、およびグルコース−アスパラギン
寒天上で明白であり、観察可能である。

８、ム、ワックスマン著「放線菌」により参考として述
べられたＳ、ハイグロスコピクスの株は、その形態学的
外観が記述されている二、三の培地上で、ＤＢ２４＋３
６７株と比べて若干の小さい差異を示すが、その最も重
要なものは、前者がショ糖を含む硝酸塩寒天および栄養
寒天上で気中画線体を形成するのに対して、ＤＢ　２４
３６７株はこれら二つの培地上で気中画線体を形成しな
いという事実からなる。更にまた、炭素源としてショ糖
２ を含む培地上で８．ハイグロスコピクスは硝酸塩外下で
硝酸塩を大幅に橿硝酸塩に還元する。しかし、これらの
小さい差異はＤＢ　２４ｔ３６７株と、他の点について
は主要な特徴をもっている種Ｓ、ハイグロスコピクスと
の間を区別する程十分に重要なものではない。

Ｓ、ハ・ｆグロスコビクスＤＳ２４１３６７は、ある限
られた巻き数、稀には６または４回巻きを有する固く締
ったラセンで一般に終る胞子の鎖を形成するが、場合に
よっては、多数回巻いたラセンか、完全な−巻きをつく
ることなくその末端部分で単に宵がっている少数の胞子
鎖か、あるいは多少なりともゆるいそして巻いていない
ラセンを観察することも可能である。胞子を生ずる仕組
みは、ふさ状構造を有し、少数の枝をもつラセン状芽胞
柄は主フィラメント（その長さは極めて相当なものであ
る）に沿って挿入されている。胞子は卵形ないし円筒形
で、０．８ないし１．０μ１０．６ないし０．８μの寸
法を有する。顕微鏡検査は、ペンネット寒天上でまたゾ
リドハムオートミールートマト寒天上で、胞子を生ずる
器官について全く同一の構成を示した。その胞子形成の
方法により、Ｓ、−−仝Ａ！シＬ乙ユｇノジー朋じしち
至Ａ１はゾリドハム分類の８ｐｉｒａ　５ｅｃｔｉｏｎ
に置かれる。

日、ハイグロスコピクスＤＢ　２４，３６７は２５°Ｃ
でよく発育し、３７℃ではそれ程よくなく、そして５０
℃では発育しない。２５℃で行われた培養で、このもの
は次の生化学的特性を有する。

ストレプトマイセス　ハイグロ不コークス　ＤＢ２４，
５６７の培養特性を次の表に示す。これらは特に断らな
い限り、良好な発育段階に達した、即ち２５℃でおよそ
２ないし６週間後の培養の特性である。これら特注はス
トレプトマイセスの形態学的特徴を決定するために常用
される栄養寒天およびブイヨン上で観察したものであり
、寒天培地上での培養は斜面寒天上で行われた。用いた
培地のＨつかは、「放線菌Ｊ　（Ｓ、Ａ、ワックスマン
、１９３−１９７頁、クロニカ　ボタニカ　カンパ＝　
−（０ｈｒｏｎｉｃａ　Ｂｏｔａｎｉｃａ、　Ｏｏｍｐ
ａｎｙ　）、ウオルサム、マサチューセッツ州、Ｕ、Ｓ
、Ａ、、１９５０年〕に示された処方に従い調製した。

この場合、その培地は文字Ｗによって示され、その後に
続いて「放線菌」中でそれらに与えられている番号を付
けた。

他の培地あるいはその中の構成成分についての参考は次
の通りである： 参考Ａ’−［ペンネット寒天Ｊ−８，Ａ−ワックスマン
−放線菌、２巻、６３１頁−４５０−デ・ウィリアムス
・アンド・ウィルキン５ ス社、パルチモア、１９６１゜ 参考Ｂ−「ヒツキー・アンド・トレスナー寒天」−Ｔ、
Ｇ、ゾリドハムおよび共同者 ＡｎｔｉｔｌｉＯｔｉＱ８　Ａｎｎｕａｌ、（抗生物質
年報）、１９５Ｓ−１９５７，９５０頁。

参考〇−処方Ｗ−２６、これに２チの寒天を添加。

参考Ｄ−「酵母エキス寒天Ｊ−Ｔ、（）、７’＋７ドハ
ムおよび共同者、抗生物質年報、１９５６−１９５７．
９５０頁。

参考Ｅ−「トマトペースト　オートミール寒天」−Ｔ、
Ｇ、ゾリドハムおよび共同者、抗生物質年報、１９５６
−１９５７．９５０頁。

参考Ｆ−ｒメラニン形成培地Ｊ−Ｂ、Ａ、ワックスマン
−放線菌、２巻、６３３頁−／ｌ６４２−ず・ウィリア
ムス・アンド・ウィルキンス社、パルチモア、１９６１
゜ 参考Ｇ−Ｗ、Ｊグラ１ンディ（ＧＲＵＮＤＹ　）および
共同者、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ａｎｄ　Ｏｈｅｍ、
、　２．４０１　。

１９５２゜ ６ 参考Ｈ−「無機塩デンノン寒天Ｊ　−Ｔ、Ｇ、ｆ　リド
ハムおよび共同者、抗生物質年報、１９５６−１９５７
．９５１頁。

参考ニー処方ｗ−１に相当するが、ただし、シヨ糖３０
．９の代りにグルコース１５．９を用いた。

参考Ｊ−処方ｗ−１に相当するか、ただし、ショ糖３０
ｇの代りにグリセリン１５ｇを用いた。

参考に一処方Ｗ−１８に相当するが、ただし、ショｍ３
ｏｇの代りにグルコース１５ｇを用いた。

参考り一処方Ｗ−１８に相当するが、ただし、ショ糖を
除き、夜中に部分的に浸した戸紙の小片を用いた。

参考Ｍ−１１菌の純粋培養研究法の手引き（Ｍａｎｕａ
ｌｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｏｒ　ｐｕｒｅ　Ｃｕ１ｔ
ｕｒｅ　５ｔｕｄｙ　ｏｆＢａｃｔｅｒｉａ　）　、Ｊ
−ソサイテイ・オブ・アメリカン・バクテリオロゾスト
（５ｏｃｉｅｔｙｏｆ　Ａｍｏｒｉｃａｎ　Ｂａｃｔｅ
ｒｉｏｌｏｇｉｓｔｓ　）、シュ・　　ネーブ、Ｎ−Ｙ
−＊　Ｎｓｏ　　１８゜参考Ｎ−「素ゼ？チン」−［細
菌の純粋培養研究法の手引き」−ソサイテイ・オブ・ア
メリカン・バクテリオロジスト、ゾユネープ、Ｎ、Ｙ、
　、　＋１５８−１８の指示に準じて調製。

参考Ｐ−市販脱脂乳粉末、製造業者の指示に準じて再構
成。

参考Ｑ、　−Ｈ２Ｂ生成への研究のために次の文献に示
された培地、Ｈ，Ｄ、）レスナーおよびＦ・。

ダンが（ＤＡＮＧＡ　）−ジャーナル・オプ・バクテリ
オロジ−（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＢａｃｔθｒｉｏｌ（
＞ｇｙ　）、７６．２３９−２４４゜１９５８゜ ６４ 上記の表における発育度は、次のように減少の順序で分
類しである：即ち、非常に良い、良い、かなり良い、中
程度、非常に温和、貧弱、非常に乏しいかまたはゼロ。

ストレプトマイセス　ハイグロスコピクス　ＤＢ２４．
３６７がその発育のために各種の炭素源および窒素源を
利用する能力を、プリトノ１ム・アンド・ゴットリープ
法（ｔｈｅ　Ｐｒｉｄｈａｍ　ａｎｄ　Ｇｏｔｔｌｉａ
ｂｍｅｔｈｏｄ　）　（Ｊ、　ｏｆ　Ｂａｃｔ、、　５
６．１０７−１１４゜１９４８）に準じて決定した。発
育の度合いは、著者により指示された基本培地上で、た
だし、グルコースを各種の試験炭素源の一つで置き換え
、あるいは（ＮＨ４）ｇ８０４Ｙ：各種の試験窒素源の
一つで置き換えて、２５℃において適当なインキュベー
ション期間後に観察した。その結果を次の表に示す。

５ ３１．５５９ＲＰはストレプトマイセス　ハイグロスコ
ピクス　ＤＢ　２４，３６７またはその生産性突然変異
体（即ち、３１．５５９　ｕｐｖっくり出丁ことのでき
る突然変異体）を培地中で好気的に培養し、培養中に生
じた３１，５５９Ｒｐｙ、−そのまま、または塩として
単離することにより製造される。

この３１，５５９ＲＰおよびその塩の製造方法は本願の
原出願に相当する特願昭５０−２６４４３で特許請求さ
れている。　　、 ストレプトマイセス　ハイグロスコピクスＤＳ２４．３
６７の培養は、好気的な表面培養または深部培養のどの
方法によっても実施できるが、後者の方が便利さの理由
から好°ましい。この目的のために、発酵工業で常用て
れる各種の型の装置を使用できる。

特に、次の順序が培養の実施に採用できる＝８ ↓ 振とうフラスコ中で培養 発酵培地は、同化しうる炭素源と同化しうる窒素源、鉱
物質成分、特に塩化物、そして任意に発育因子を本質的
に含まねばならず、そしてこれら材料は明確に定まった
生成物として、あるいは各種起源の生物学的産物で経験
されるように、被雑な混合物として導入することができ
る。

同化しうる適当な炭素源には、炭水化物、例えばグルコ
ース、デキストリン、デンプンまたは他の炭水化物物質
、例えば糖アルコール類（グリセリンを含めて）、およ
びある種の有機酸、例えば乳酸またはクエン酸が含まれ
る。幾つかの動物油または植物油、例えばラード油また
は大豆油をこれら各種の炭水化物源の代りに使用でき、
あるいはこれらに追加することができる。

同化しうる適当な窒素源は極めて多様である。

９ これらは非常に簡単な化学物質、例えば無機または有機
アンモニウム塩、尿素およびある種のアミノ酸でよい。

窒素はまた主にタンパク質の形で窒素ン含む複雑な物質
として、例えばカゼイン、ラクトアルブミン、グルテン
およびそれらの加水分解物、大豆粉、落花生粉、魚粉、
肉エキス、酵母エキス、ジスチラーズ　ソリューゾルお
ヨヒコ゛−ンースチープとしても導入できる。

添加される鉱物質成分のうち、あるものは緩衝または中
和効果をもつことができ、例えばアルカリ金塊またはア
ルカリ土類全島リン酸塩、あるいは炭酸カルシウムまた
はマグネシウムがある。他のもの、例えばアルカリ金属
およびアルカリ土類のために、また３’Ｌ５５９ＲＰの
生成のために必要なイオン平衡をも・たらす。最後に、
あるものは一層特殊にストレプトマイセス　ハイグロス
コピクス　Ｄ８２４＃３６７の代謝反応の活性化剤とし
て作用し、これらには亜鉛、コバルト、鉄、銅およびマ
ンガン塩がある。

適当な発育因子はビタミン型天然物、例えばリボフラビ
ン、葉酸およびパントテン酸である。

培養の開始における発酵培°地の−は５．□８ムいし７
．８、そしてなるべくは６．２ないし７ゾと丁べきであ
る。発酵過程に最適の温度は２５ないし３０℃であるが
、２３ないし６３℃の温度で満足すべき生産か達成され
る。発酵の通気はかなり広い値の間で変動しうる。しか
し、培養液１ノ尚り空気０．３′ないし３′ノ／分の通
気速度が非常に適当であることが見出されている。３１
，５５９ＲＰの□最大収量は２ないし８日間の培養後に
得られ、そしてこの時間は用いた培地によって本質的に
決まる。

これらの事実から、３１．５５９ＲＰ製造のためのスト
レプトマイセス　ハイグロスコピクスＤＢ２４．３６７
の培養に対する一般的条件は大幅に変動することができ
、特定の必要条件に適合させることかできる。

３１ｍ’５５９　ＲＰは培養の生成物から次の方法で単
離できる。

培地を酸性の−で、一般には３ないし６、なるべくは５
に近い−でｆ過する。ｆ塊に留まった活性物質をとのｆ
塊から適当な溶媒、例えば低級アルコール、例えばメタ
ノール、あるいは塩素化溶媒、例えば塩化メチレンによ
り抽出する。

適当なアルカリでの処理後、３１，５５９１Ｐは上記溶
液から、減圧下での濃縮、および任意にそれに続いての
塩に対する非溶媒あるいは塩が溶けにくい溶媒での希釈
、そして冷室内での保存め後に、結晶化によって例えば
ナトリウム塩の形で単離される。

３１．５５９Ｒｐあるいはそのナトリウム塩は、常法に
より、例えば結晶化、各種吸着剤上でのクロマトグラフ
ィー、または向流分配により精製できる。

法例は３Ｌ５５９ｕｐの製造方法を説明する参考例であ
る。

参考例 ム）発、＃ 次の成分’に１７０Ｊ発酵器に導入する。

２ ペゾトン　　　　　１，２００　＃ 酵母エキス　　　　　６００ｇ グルコース１水和物　　　１．２００　ｇ寒天　　　２
４０ｇ 水道水　　　　　　　　１１０ノとするのに十分な量ｐ
ＨＹＩＱＮ水酸化ナトリウム溶液（７０Ｇｏ　）の添加
により７．６０に調節する。この培地を、その中に１２
２℃の水蒸気Ｙ４０分間泡立てることにより滅菌する。

冷却後、培養液の体積は、滅菌過程で水蒸気が凝縮する
ために、１２０ノとなり、−は６．８５である。次に、
この培養液ｔ、かきまぜたエルシンマイヤーフラスコ中
でつくったストレプトマイセス　ハイグロスコピクスＤ
Ｂ　２４．３６７の培養（２００ｃｃ）で接種する。培
養’＆２７℃で２５時間発育させる。この間滅菌空気で
攪拌し、通気する。このようにして、このものは生産培
養を接種するのに適するようになる。

生産培養は、次の物質を導入した８００ノの発酵器で行
われる。

ゾスチラーズ　ソリューデル　　　２＃６ 豆顆粒　　　　　　　　　１１０１ｃ グリセリン　　　　　　６に＆ 塩化ナトリウム　　　　　２ｋｇ 水道水　　　　　　　　　６６５１とする量培地のｐＨ
Ｙ１ＯＮ水酸化す）ＩＪウム溶液（２００ｃｃ）の添加
により７．５０に調節する。次に、培養ｉｖ、その中に
１２２℃の水蒸気Ｙ４０分間通じることにより滅菌する
。冷却後、培養液の体積は、滅菌過程で水蒸気が凝縮す
るために６９０１となる。これｔｌ グルコース１水和物　　　４峠 を含む滅菌水溶液（１０Ｊ）の追加により４００１にす
る。

培地の−は６．６５である。これを、上記の１７０１Ｊ
発酵器からの接種源培養（４０Ｊ）で接種する。

培養を２７℃で１１３時間発育させ、この間２０５回転
回転子回転するタービンにより攪拌し、滅菌空気（２０
ｍ３／時間の体積で）により通気する。

この操作の終りで、培養の−は７．６５であり、体積は
６８０！である。

Ｂ）抽出 上記のようにして得た培地（４００４り’ｋ、６Ｈ塩酸
溶液（２，８Ｉりの添加により−５にし、次に６０分間
かきまぜる。ｆ過助剤（２０＃）Ｙ加えた後、培地をフ
ィルタープレスでｆ過し、フィルター上でｆ塊を水（１
００１）で洗浄する〔そのｐＨＹ６Ｎ塩酸で５に調節す
る〕。Ｆ’Ｓと洗液を除去する。

ｆ塊をメタノール（３００Ｊ）中ですりまぜ、得られた
混合物’ｔ、６Ｎｔｌ化ナトリウム溶液（２００ｃｃ）
の添加によりｐＨ７に調節し、３０分間かきまぜる。混
合物をフィルタープレスでｆ過し、ＰｊＡｙｔフィルタ
ー上でメタノール（８０Ｊ）で洗浄する。Ｐ液と洗液と
ｔ合わせ、水性濃縮液（３０Ａ’）”ｋ生ずるように減
圧下（５ないし１０ｘｍ　Ｈｇ）で濃縮する。この濃縮
液’＆６Ｎ塩酸（２９０ｃｃ）の添加によりｐＨ３に調
節し、次に塩化メチレン（３０Ｊ）の存在で１０分間か
きまぜる。二相を分ける。水相ｔこの方法により塩化メ
チレンを用いて（各回６０１３ずつ）更に二回抽出する
。

三つの塩化メチレン抽出Ｒｗ合わせ、水（９１）とかき
まぜ、この間水相Ｙ　ｐＨ３’Ｅで酸性にするｉＮ塩酸
２０ｃｃ）。有機相ン単離し、水洗しく　１８１　）、
水相に９．５のｐ）Ｉが得られるまで水酸化ナトリウム
溶ｆｆＹ加える（６Ｎ水酸化ナトリウム溶液２０ＱＱ）
。塩化メチレン相を減圧下に（５ないし１０ｉＩＩＨｇ
）　１１の体積まで濃縮する。

０）精　製 上で得た塩化メチレン濃縮液を室温でヘキサン（１０１
）の中にゆっくり注込む。溶液ｗ濾過し、このようにし
て不活性な不溶物（６３＃）が除去される。Ｆ液を減圧
下に（５ないし１０ｍＨｇ）およそ０．５ノの体積にま
で濃縮する。この溶液を０℃の温度で２時間かきまぜ、
次に、＋４℃で２４時間放置する。得られた結晶を溶液
の遠心により単離し、次に＋４℃でヘキサン（２５００
０）で洗浄し、減圧下に乾燥する。このようＫして６ ３１．５５９１Ｐのナトリウム塩（１０３，９）が単離
される。

Ｄ）再結晶 上で得た３１．５５９ＲＰのナトリウムｔ！（５７１１
）Ｙ：アセトン（１，２１）　Ｋ溶解し、１５分間かき
まぜる。塩酸で洗浄した脱色炭（２，５ｇ）　’Ｙ加え
、混合物を再び３０分間かきまぜ、最後に脱色炭をｆ別
する。ゆっくりかきまぜたＦ液に蒸留水（７５０ｃｃ）
Ｙ加える。５１．５５９　ＲＰのナトリウム塩が０℃の
温良でゆっくり晶出する。

結晶ｗＦ別し、アセトンと水との混合物（体積で５Ｏ−
５０）（１５０００）で洗浄し、減圧下に３５℃で乾燥
する。３１１５５９ＲＰのナトリウム塩（３５，！ｉ’
）が得られる。

母液ヲその元の体積の半分に濃縮し、次にこれを４℃に
冷却すると、３１．５５９ｕｒのナトリウム塩が更に１
３．２．９得られる。

【図面の簡単な説明】

図面は、本発明の組成物で使用する抗生物質３１．５５
９ＲＰの赤外吸収スペクトルである。 ７

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ３１．５５９ＲＰ（酸として、または金属との、あるい
   は含窒素塩基との塩として）　０．０００１ないし９９
   ．９重量幅と動物により消費され５る物質とからなるこ
   とを特徴とする、動物に与えるための組成物。