JPS5828292A - 発酵法によるｌ−リジンの製造法 - Google Patents
発酵法によるｌ−リジンの製造法Info
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- JPS5828292A JPS5828292A JP56125006A JP12500681A JPS5828292A JP S5828292 A JPS5828292 A JP S5828292A JP 56125006 A JP56125006 A JP 56125006A JP 12500681 A JP12500681 A JP 12500681A JP S5828292 A JPS5828292 A JP S5828292A
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- C12N15/03—Bacteria
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は発酵法によるＬ ＋ ＩＪリジン製造法に関す
る。さらに詳しく社、本発ＩＭＵコリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属し、Ｌ−リジン生産能
を有し、かつプリンアナログ抵抗性およびピリミジンア
ナログ抵抗性の少なくとも１ｇ（Ｄ性質を有する菌株を
栄養培地に培養し、生成蓄積したＬ−リジンを皺培養物
から採取することを４１黴とする発酵法によるシーリジ
ンの製造法に関する。
る。さらに詳しく社、本発ＩＭＵコリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属し、Ｌ−リジン生産能
を有し、かつプリンアナログ抵抗性およびピリミジンア
ナログ抵抗性の少なくとも１ｇ（Ｄ性質を有する菌株を
栄養培地に培養し、生成蓄積したＬ−リジンを皺培養物
から採取することを４１黴とする発酵法によるシーリジ
ンの製造法に関する。
そＯ目的とするところは必須アンノ酸の１つであり、医
薬品あるいは飼料や食品への添加剤として督ｌＩＯ大き
いＬ−リジンを工業的安価に製造する方法を提供するこ
とにある。
薬品あるいは飼料や食品への添加剤として督ｌＩＯ大き
いＬ−リジンを工業的安価に製造する方法を提供するこ
とにある。
従来、発酵法によるＬ−９ジンの製造法ＫＷＩＡしては
コリネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、アース
ロバフタ−属、バチルス属の細菌やその他の微生物のホ
毫セリ／（またはメチオニンとスレオニン）ｌ！求性変
異株（特公昭３６−６４１１９号、Ｕ８Ｐ２，９７９，
４３９）やその他要求性変異株〔特公昭４＄−１８６７
７号、同５１−２１０７８号、同５ｌ−３４４７７（Ｕ
ＢＰ＆８２Ｌ４７２）を同５５−１０４０号、特開＠５
６−８６９２号。
コリネバクテリウム属、ブレビバクテリウム属、アース
ロバフタ−属、バチルス属の細菌やその他の微生物のホ
毫セリ／（またはメチオニンとスレオニン）ｌ！求性変
異株（特公昭３６−６４１１９号、Ｕ８Ｐ２，９７９，
４３９）やその他要求性変異株〔特公昭４＄−１８６７
７号、同５１−２１０７８号、同５ｌ−３４４７７（Ｕ
ＢＰ＆８２Ｌ４７２）を同５５−１０４０号、特開＠５
６−８６９２号。
同５１＄−９７８４号〕を用いる方法、また各種薬剤抵
抗性変異株〔特公＠４８−２８０７８号（０８Ｐ３，７
０７，４４１）を同５３−１８３３号、同５３−４８５
９１号、特開＠５３−８６０８９号、同５３１３９４号
、同５５−１１７１５号ｔＪ８Ｐ３，６８７，８１０）
などを用いる方法、あるいはこれらの組合せの性質を有
する微生物を用いる方法などが知られている。
抗性変異株〔特公＠４８−２８０７８号（０８Ｐ３，７
０７，４４１）を同５３−１８３３号、同５３−４８５
９１号、特開＠５３−８６０８９号、同５３１３９４号
、同５５−１１７１５号ｔＪ８Ｐ３，６８７，８１０）
などを用いる方法、あるいはこれらの組合せの性質を有
する微生物を用いる方法などが知られている。
本発明者らは、Ｌ−リジンの生産性の改良された菌株を
得るため種々研究を重ねえ結果、コリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属するＬ−リジン生産菌
株に、さらにプリンアナログ抵抗性およびピリミジンア
ナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を付与した菌株は
Ｌ ＋ リジン生産能が飛躍的に向上することを見出し
本発明を完成するに至った。発酵法によるＬ−リジンの
製造に際し、プリンアナログ抵抗性、ピリミジンアナロ
グ抵抗性の性質を持った菌株を用いればＬ−リジンの生
産性が飛躍的に改善されることは本発明者らによっては
じめて見出され九知見である。
得るため種々研究を重ねえ結果、コリネバクテリウム属
またはブレビバクテリウム属に属するＬ−リジン生産菌
株に、さらにプリンアナログ抵抗性およびピリミジンア
ナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を付与した菌株は
Ｌ ＋ リジン生産能が飛躍的に向上することを見出し
本発明を完成するに至った。発酵法によるＬ−リジンの
製造に際し、プリンアナログ抵抗性、ピリミジンアナロ
グ抵抗性の性質を持った菌株を用いればＬ−リジンの生
産性が飛躍的に改善されることは本発明者らによっては
じめて見出され九知見である。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明方法では、コリネバクテリウム属またはブレビバ
クテリウム属に属し、プリンアナログ抵抗性およびピリ
ミジンアナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を有する
Ｌ−リジン生産菌株であればいかなる菌株をも用いるこ
とができる。す表わち、本発明ではコリネバクテリウム
属またはブレビバクテリウム属に属し、Ｌ−リジン生産
能を既に有する菌株にプリンアナログ抵抗性およびピリ
ミジンアナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を付与せ
しめた菌株を用いてもよいし、コリネバクテリウム属ま
たはブレビバクテリウム属に属し、プリンアナログ抵抗
性およびピリミジン抵抗性の少なくとも１種の性質を有
する菌株にＩ、 ＋ リジン生産能を付与せしめた菌株
を用いてもよい、たとえば、コリネバクテリウム属また
はブレビバクテリウム属に属するＬ−リジン生産能を有
する菌株としては、各種の栄養（例えばホモセリン、メ
チオニン。
クテリウム属に属し、プリンアナログ抵抗性およびピリ
ミジンアナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を有する
Ｌ−リジン生産菌株であればいかなる菌株をも用いるこ
とができる。す表わち、本発明ではコリネバクテリウム
属またはブレビバクテリウム属に属し、Ｌ−リジン生産
能を既に有する菌株にプリンアナログ抵抗性およびピリ
ミジンアナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を付与せ
しめた菌株を用いてもよいし、コリネバクテリウム属ま
たはブレビバクテリウム属に属し、プリンアナログ抵抗
性およびピリミジン抵抗性の少なくとも１種の性質を有
する菌株にＩ、 ＋ リジン生産能を付与せしめた菌株
を用いてもよい、たとえば、コリネバクテリウム属また
はブレビバクテリウム属に属するＬ−リジン生産能を有
する菌株としては、各種の栄養（例えばホモセリン、メ
チオニン。
スレオニン、ヒスチジン！プロリン、アラニン。
ロインン、インロイシン、バリン、セリ／、グルタミン
酸、パントテン酸、ニコチン酸アｔド。
酸、パントテン酸、ニコチン酸アｔド。
酢酸、アデニン、ヒボキサンチン、イノシ） −ルおよ
びこれらの組合わせ）１！求性、各種のアミノ酸アナロ
グ（例えばリジン、スレオニｙ。
びこれらの組合わせ）１！求性、各種のアミノ酸アナロ
グ（例えばリジン、スレオニｙ。
メチオニンｐ ロイシン、イソロ０イシン、バリン。
アスパラギン酸、トリプトファンあるいはヒスチジンの
アナログおよびこれらの組合せ）抵抗性、その他の薬剤
（例えば各種抗生物質・サルらの組合せ）抵抗性の１つ
あるいはこれらの組合せの性質を有するＩ、 ＋ ＩＪ
レジン産菌株が挙げられる。
アナログおよびこれらの組合せ）抵抗性、その他の薬剤
（例えば各種抗生物質・サルらの組合せ）抵抗性の１つ
あるいはこれらの組合せの性質を有するＩ、 ＋ ＩＪ
レジン産菌株が挙げられる。
したがって、かくの如きＬ−リジン生産菌株に、さらに
プリンアナログ抵抗性およびピリミジンアナログ抵抗性
の少なくとも１ｓの性質を付与することによって本発明
に使用する菌株を得ることもできるし、コリネバクテリ
ウム属に属し、プリンアナログ抵抗性およびピリミジン
アナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を有する菌株に
上記のごとき各種栄養要求性、各楢アミノ酸アナログ抵
抗性、またはその他業剤の抵抗性を付与することＫよっ
て得られるＬ−リジン生産１株を本発明で使用すること
もできる。また、本発明に用いる菌株は上記のごとき性
質の他にＬ＋ ＩＪレジン産に寄与するいかなる性質を
備えていてもさしつかえない。
プリンアナログ抵抗性およびピリミジンアナログ抵抗性
の少なくとも１ｓの性質を付与することによって本発明
に使用する菌株を得ることもできるし、コリネバクテリ
ウム属に属し、プリンアナログ抵抗性およびピリミジン
アナログ抵抗性の少なくとも１種の性質を有する菌株に
上記のごとき各種栄養要求性、各楢アミノ酸アナログ抵
抗性、またはその他業剤の抵抗性を付与することＫよっ
て得られるＬ−リジン生産１株を本発明で使用すること
もできる。また、本発明に用いる菌株は上記のごとき性
質の他にＬ＋ ＩＪレジン産に寄与するいかなる性質を
備えていてもさしつかえない。
本発明に用いる菌株のプリンアナログ抵抗性としては、
たとえば、６−メルカプトグアニン。
たとえば、６−メルカプトグアニン。
８−アザグアニ／、２−フロロアデニン、リペルシジン
、６−メチルプリン、８−アザキサンチン、８−アザア
デニン、８−メルカプトグアノシン、６−メルカプトグ
アノシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−メルカ
プトプリン。
、６−メチルプリン、８−アザキサンチン、８−アザア
デニン、８−メルカプトグアノシン、６−メルカプトグ
アノシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−メルカ
プトプリン。
デコイニン、サイコフラニンなどに対する抵抗性があげ
られる。また本発明に用いる菌株のピリミジンアナログ
抵抗性としては、たとえば、５−ブ四モウラシル、６−
アザウラシル、５−フロロウラシル、５−ブロモ−２−
デオキシウリジン、２−チオウラシル、６−メチル−２
−チオウラシル、アミセナ７などに対する抵抗性があげ
られる。
られる。また本発明に用いる菌株のピリミジンアナログ
抵抗性としては、たとえば、５−ブ四モウラシル、６−
アザウラシル、５−フロロウラシル、５−ブロモ−２−
デオキシウリジン、２−チオウラシル、６−メチル−２
−チオウラシル、アミセナ７などに対する抵抗性があげ
られる。
本発明の変異株を酵導する際に用いられる親株は、従来
、Ｌ−グルタミン酸生産菌として知られているコリネバ
クテリウム属またはブレビバクテリウム属に属する微生
物であシ、例えば、コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴｃｃ１３ｏ３２゜コリネバクテリウム・アセトアシ
ドフイラムＡ Ｔ ＣＣ１３８７０＊ ブレビバクテ
、リウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１３８６９＊
ブレビバクテリウム・フラバムＡＴＣＣ１４０６７など
がある。
、Ｌ−グルタミン酸生産菌として知られているコリネバ
クテリウム属またはブレビバクテリウム属に属する微生
物であシ、例えば、コリネバクテリウム・グルタミクム
ＡＴｃｃ１３ｏ３２゜コリネバクテリウム・アセトアシ
ドフイラムＡ Ｔ ＣＣ１３８７０＊ ブレビバクテ
、リウム・ラクトフェルメンタムＡＴＣＣ１３８６９＊
ブレビバクテリウム・フラバムＡＴＣＣ１４０６７など
がある。
本発明に使用する微生物のうち、プリンアナログ抵抗性
菌株の具体的−例としてコリネバクテリウム・グルタミ
・クムＨ−３１０７倣工研−寄第６０９６号、ブレビバ
クテリウムやラクトフェルメンタムＨ−３１１４微工研
菌寄第６０９８号を、またピリミジンアナログ抵抗性菌
株の具体的例としてコリネバクテリウム・グルタミクム
Ｈ−３１０６徽工研菌寄ｇａｏｓｓ号ｔブレヒハクテリ
ウム・ラクトフェルメンタムＨ−３１１３微工研劇寄第
６０９７号を挙げることができる。これらのうち、黴工
研菌寄第６０９６号および６０９５号の菌株は、リジン
生産能を有するコリネバクテリウム・グルタミクムＦｇ
Ｒ，ｍ−ｐａａａ４ （ホモセリン賛求性、ロイシン要
求性、チアリジン抵抗性、サルファメサジン抵抗性）の
細胞を０．１規定トリス−ｆｆレインｆＲＭ（ｉＩｉ液
（ｐａｓ、ｏ）中に１０″Ｃ８１１Ｑ／釘の磯度に懸濁
し、ここにＮ−メチル−Ｎ１−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジンをｍｉｓ度０．２譜βになるように麟加し、め
温で３０分間靜装した後、プリンアナログの１檀である
６−メルカプトグアノシン（６Ｍ Ｇ ） （ｏ、４−
）を含む下記のごとき組成を有する最少培地寒天平板培
地と、ピリミジンアナログの１檜である６−アザウラシ
ル（６−ＡＵ）（０，４寓ｇ廓）を含む同様の最少ｊ＠
丸寒天平板培地にそれぞれ■塗抹し、生育するコロニー
の中から選択された変異株で１７、それぞれ６−メルカ
プトグアノシン抵抗性または６−アザウラシル抵抗性を
有する点で、表−１に示すように親株のＦＥＲＭ−Ｐ４
Ｏ１０と明らかに区別できる。また微工研′ｗ４薔第６
０９８号および第６０９７号の菌株は、リジン生産能を
有するブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＨ３
０５６（５−ＬｙｅＲ。
菌株の具体的−例としてコリネバクテリウム・グルタミ
・クムＨ−３１０７倣工研−寄第６０９６号、ブレビバ
クテリウムやラクトフェルメンタムＨ−３１１４微工研
菌寄第６０９８号を、またピリミジンアナログ抵抗性菌
株の具体的例としてコリネバクテリウム・グルタミクム
Ｈ−３１０６徽工研菌寄ｇａｏｓｓ号ｔブレヒハクテリ
ウム・ラクトフェルメンタムＨ−３１１３微工研劇寄第
６０９７号を挙げることができる。これらのうち、黴工
研菌寄第６０９６号および６０９５号の菌株は、リジン
生産能を有するコリネバクテリウム・グルタミクムＦｇ
Ｒ，ｍ−ｐａａａ４ （ホモセリン賛求性、ロイシン要
求性、チアリジン抵抗性、サルファメサジン抵抗性）の
細胞を０．１規定トリス−ｆｆレインｆＲＭ（ｉＩｉ液
（ｐａｓ、ｏ）中に１０″Ｃ８１１Ｑ／釘の磯度に懸濁
し、ここにＮ−メチル−Ｎ１−ニトロ−Ｎ−ニトロソグ
アニジンをｍｉｓ度０．２譜βになるように麟加し、め
温で３０分間靜装した後、プリンアナログの１檀である
６−メルカプトグアノシン（６Ｍ Ｇ ） （ｏ、４−
）を含む下記のごとき組成を有する最少培地寒天平板培
地と、ピリミジンアナログの１檜である６−アザウラシ
ル（６−ＡＵ）（０，４寓ｇ廓）を含む同様の最少ｊ＠
丸寒天平板培地にそれぞれ■塗抹し、生育するコロニー
の中から選択された変異株で１７、それぞれ６−メルカ
プトグアノシン抵抗性または６−アザウラシル抵抗性を
有する点で、表−１に示すように親株のＦＥＲＭ−Ｐ４
Ｏ１０と明らかに区別できる。また微工研′ｗ４薔第６
０９８号および第６０９７号の菌株は、リジン生産能を
有するブレビバクテリウム・ラクトフェルメンタムＨ３
０５６（５−ＬｙｅＲ。
Ｌｅｕ−ｒ ＨｏｍｅｅｒｉｎＬ）から同様の変異処理
によって６−メルカグトグアノシン抵抗性株と６−アザ
ウラシル抵抗性株としてそれぞれ選択された変異株であ
シ表−１に示すように親株と明らかに区別できる。
によって６−メルカグトグアノシン抵抗性株と６−アザ
ウラシル抵抗性株としてそれぞれ選択された変異株であ
シ表−１に示すように親株と明らかに区別できる。
表−１（＋：充分な生育、＋：成る程度の生育、−：生
育せず） 上記最少培地寒天平板培地の組成ニゲルコース１０ ｆ
／ｌ−塩化アンモニウム４ ｆ／Ｊ ＋ ＫＨ２ＰＯａ
ｌ ｆ／Ｉ ｔ Ｋ２ＨＰＯ４３ｔ／ｌ ｌ Ｍｒ８０
４−７Ｈ，ＯＯ，４ｆ／ｌ。
育せず） 上記最少培地寒天平板培地の組成ニゲルコース１０ ｆ
／ｌ−塩化アンモニウム４ ｆ／Ｊ ＋ ＫＨ２ＰＯａ
ｌ ｆ／Ｉ ｔ Ｋ２ＨＰＯ４３ｔ／ｌ ｌ Ｍｒ８０
４−７Ｈ，ＯＯ，４ｆ／ｌ。
ＦｅＳＯ４−７Ｈ，Ｏα０１ ｆ／ｊ ＊ Ｍｎ５Ｏ４
’ ４Ｈ！ ＯＯ，０１ｆ／ｌ ＊酸素２Ｖ１．ビオチ
ンｓ ｏ ｐｖ／Ｉ ｅ寒天２０□。
’ ４Ｈ！ ＯＯ，０１ｆ／ｌ ＊酸素２Ｖ１．ビオチ
ンｓ ｏ ｐｖ／Ｉ ｅ寒天２０□。
ｐ Ｈ７，２゜
本発明に使用する培地組成としては使用菌株の利用しう
る炭素源、無機物その他の必要な栄養素を程良く含有す
るものであれば合成培地、天然培地のいずれも使用でき
る。
る炭素源、無機物その他の必要な栄養素を程良く含有す
るものであれば合成培地、天然培地のいずれも使用でき
る。
すなわち炭素源としてはグルコース、フックトースンル
ビトール、グリセロール、Ｒ糖、 澱粉、−一一澱粉加
水分解物、糖蜜、果汁などの各種炭水化物、酢酸、フマ
ール酸、乳酸、コ・・り酸などの有機酸、さらにエタノ
ール、メタノールなどのアルコール類も使用できる。
ビトール、グリセロール、Ｒ糖、 澱粉、−一一澱粉加
水分解物、糖蜜、果汁などの各種炭水化物、酢酸、フマ
ール酸、乳酸、コ・・り酸などの有機酸、さらにエタノ
ール、メタノールなどのアルコール類も使用できる。
輩素源としては、アンモニア、塩化アンモニウＡ、硫ａ
！アンモニウム、酢敏アンモニウム。
！アンモニウム、酢敏アンモニウム。
リン酸アンモニウム蝉の各種無機酸のアンモニウム塩、
尿素、アミンＩＬその他含脅素化合物。
尿素、アミンＩＬその他含脅素化合物。
ならびにペプトン、肉エキス、＃母エキス、コーン・ス
チープ・リカー、カゼイン加水分解物。
チープ・リカー、カゼイン加水分解物。
大豆粕酸加水分解物、谷橿発酵劇体およびその消化物な
どが使用できる。
どが使用できる。
さらに無機物としては、リン酸第−カリウム。
リン酸第二カリウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネ
シウム−塩化ナトリウム、硫酸＃ＩＰ、ｌ鉄。
シウム−塩化ナトリウム、硫酸＃ＩＰ、ｌ鉄。
ａｍマンガン−炭酸カルシウムなどを使用する。
勿論、本発ｖ４に使用する微生物が生育のために特定の
栄養素を必要とする場合には、その栄養素を適当量培地
中に存在させなければならないが、これらの物質は窒素
源として例示した天然物に含まれて添加される場合がお
る。また培地中に各種の麟加物、例えば各種抗生物質、
αアミノ酪酸、システィン、ロイシン、ロイシン発酵液
あるいはアスパラギン酸ｐグルタミン酸などを添加する
ことによｆｉＬ−リジン生産量を増加させうる場合があ
る。
栄養素を必要とする場合には、その栄養素を適当量培地
中に存在させなければならないが、これらの物質は窒素
源として例示した天然物に含まれて添加される場合がお
る。また培地中に各種の麟加物、例えば各種抗生物質、
αアミノ酪酸、システィン、ロイシン、ロイシン発酵液
あるいはアスパラギン酸ｐグルタミン酸などを添加する
ことによｆｉＬ−リジン生産量を増加させうる場合があ
る。
培養は振ｍｌ培養あるいは線部通気攪拌培養などの好気
的条件下で行なう、培養温度は通常２０〜４０℃の範囲
で、培地のｐＨは３〜９の範囲で、好ましくは中性付近
に保持することが望ましいか、これ以外の条件下でも使
用麺株が生育すれば実施できる。培地のｐＨ調節は炭酸
カルシウム、酸あるいはアルカリ溶液、ｐＨ緩衝剤など
によって行なう。培養時間は通常１〜６日間で培養液中
にＬ−リジンが生成蓄積する。
的条件下で行なう、培養温度は通常２０〜４０℃の範囲
で、培地のｐＨは３〜９の範囲で、好ましくは中性付近
に保持することが望ましいか、これ以外の条件下でも使
用麺株が生育すれば実施できる。培地のｐＨ調節は炭酸
カルシウム、酸あるいはアルカリ溶液、ｐＨ緩衝剤など
によって行なう。培養時間は通常１〜６日間で培養液中
にＬ−リジンが生成蓄積する。
培養終了後、培養液よシ菌体などの沈澱物を除去し、公
知のイオン交換処ｍ法、濃縮法、吸着法、塩析法などを
併用することにより、培養液からＬ−リジンを回収する
ことができる。
知のイオン交換処ｍ法、濃縮法、吸着法、塩析法などを
併用することにより、培養液からＬ−リジンを回収する
ことができる。
以下、実施例をあげて本発明を具体的に示す。
実施例１
種菌としてコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１
０７倣工研菌寄第６０９６号（６−メルカプトグアノシ
ン抵抗性）を用いた。
０７倣工研菌寄第６０９６号（６−メルカプトグアノシ
ン抵抗性）を用いた。
この菌株をグルコース４０ｆ／１．尿素３１／ｌ。
ＫＨ，Ｐｏ、 １．５ ｆ／ＩＩ Ｋ２ＨＰＯ４０，５
ｆ／ｌ ｔＭｆｓｏ４−７Ｈ，ＯＱ、 ５ ｆ／ｌ 、
ビオチｙ ｓ Ｏｐｆ／Ｌ ヘプトン２０φ、＃母エ
キス５ ｆ／ｌからなる種培地（１）Ｉ（７，２）２０
−を含む３００ｄ容三角フラスコに接種し、３０℃で２
４時間培養した。
ｆ／ｌ ｔＭｆｓｏ４−７Ｈ，ＯＱ、 ５ ｆ／ｌ 、
ビオチｙ ｓ Ｏｐｆ／Ｌ ヘプトン２０φ、＃母エ
キス５ ｆ／ｌからなる種培地（１）Ｉ（７，２）２０
−を含む３００ｄ容三角フラスコに接種し、３０℃で２
４時間培養した。
この培養液２−を廃糖蜜９０ ｆ／ｌ （グルコース換
算）、大豆粕酸加水分解物２０ ｆ／ｌ （大豆軸重１
゛換算）、ｍ安５９／ｌ、尿素３ ｆ／ｌ 、ＭｆＢＯ
４・？）（、ＯＯ，５ｆ／ｌ 、 Ｋ、ＨＰＯ４０，
７り／ｊ ＋ ＣａＣ０Ｂ５０１力からなる発酵培地
（ｐＨ７，２）２０ｄを含む３ｏｏｎ谷三角フラスコに
接極し、３０℃で３日間振盪培養を行なった。この時培
養液中にＬ−リジン（−塩酸塩として、以下同様）が３
８ ｆ／ｌ生成蓄積してい友。対照として同一の条件で
同時に培養した親株であるＦｇＲＭ−Ｐ ３６３４は３
４ ｆ／ｌであった。
算）、大豆粕酸加水分解物２０ ｆ／ｌ （大豆軸重１
゛換算）、ｍ安５９／ｌ、尿素３ ｆ／ｌ 、ＭｆＢＯ
４・？）（、ＯＯ，５ｆ／ｌ 、 Ｋ、ＨＰＯ４０，
７り／ｊ ＋ ＣａＣ０Ｂ５０１力からなる発酵培地
（ｐＨ７，２）２０ｄを含む３ｏｏｎ谷三角フラスコに
接極し、３０℃で３日間振盪培養を行なった。この時培
養液中にＬ−リジン（−塩酸塩として、以下同様）が３
８ ｆ／ｌ生成蓄積してい友。対照として同一の条件で
同時に培養した親株であるＦｇＲＭ−Ｐ ３６３４は３
４ ｆ／ｌであった。
培養終了後、本発明菌株（微工研菌寄第６０９６号の培
養液１ｊを遠心分離して得た上清液を硫酸でｐＨ１，５
に調整した後ダイヤイオン８ Ｋ −Ｉ Ｂ （Ｈ”型
９強酸性イオン交換樹脂の商品名伊三菱化成社ｍ＞のカ
ラムクロマトに通塔してＬ−リジンを吸着させ、カラム
を水洗後、袖アン烏ニア水で溶出してＬ−リジンを含む
画分を集めて′５Ｉｔｌｉｌシた。濃縮液を塩酸で１１
Ｈ２にｖ１４整した後、エタノールを添加しながら冷却
することによりＬ−リジンを晶出させ、Ｌ ＋ ＩＪレ
ジン酸塩の結晶３０．４Ｆを得た。
養液１ｊを遠心分離して得た上清液を硫酸でｐＨ１，５
に調整した後ダイヤイオン８ Ｋ −Ｉ Ｂ （Ｈ”型
９強酸性イオン交換樹脂の商品名伊三菱化成社ｍ＞のカ
ラムクロマトに通塔してＬ−リジンを吸着させ、カラム
を水洗後、袖アン烏ニア水で溶出してＬ−リジンを含む
画分を集めて′５Ｉｔｌｉｌシた。濃縮液を塩酸で１１
Ｈ２にｖ１４整した後、エタノールを添加しながら冷却
することによりＬ−リジンを晶出させ、Ｌ ＋ ＩＪレ
ジン酸塩の結晶３０．４Ｆを得た。
実施例２
表−２に示す菌株を実施例１に示し九種培地にそれぞれ
接種し３０℃で２４時間培養した。
接種し３０℃で２４時間培養した。
この培養液２１１７を、グルコース９０□、大豆粕酸加
水分解物２０φ（大豆粕重量換算）。
水分解物２０φ（大豆粕重量換算）。
硫安ｓ ｙ／ｌ ＋尿素３ ｆ／Ｉ ｔ Ｍｆ８０．−
７Ｈ，Ｏ（Ｌ ５ ｔ／Ｉ。
７Ｈ，Ｏ（Ｌ ５ ｔ／Ｉ。
ｙ；ｇ、ｐｏ、 １ｙ／ｌ ｔ ビオチン５０声φ、サ
イアミン・ＨＣＪ −２００１’Ｗ／ｋｌｅ ＦｅＳ
Ｏ４・７Ｈ２０１０呼４゜Ｍｎ５Ｏ，＠４Ｈ，０１０ｍ
ｙ’ｌ ｔ ＣａＣ０，２０ｆ／ｌからなる発酵培地（
ｐＨ７，２）２０−を含む３００−容三角フラスコに接
種し、３０℃で３日間振盪培養を行なった。このとき、
培地中におけるＬ−リジン蓄積量を表−２に示した。
イアミン・ＨＣＪ −２００１’Ｗ／ｋｌｅ ＦｅＳ
Ｏ４・７Ｈ２０１０呼４゜Ｍｎ５Ｏ，＠４Ｈ，０１０ｍ
ｙ’ｌ ｔ ＣａＣ０，２０ｆ／ｌからなる発酵培地（
ｐＨ７，２）２０−を含む３００−容三角フラスコに接
種し、３０℃で３日間振盪培養を行なった。このとき、
培地中におけるＬ−リジン蓄積量を表−２に示した。
懺−２
）Ｉ−３１０６３６１
ブレビバクテリウム・ラクトフシレメンタムＨ−３０５
６３１ｆ／Ｉ Ｈ−３１１４３５１ Ｈ−３１１３３４＃ 実施例３ 種菌として、コリネバクテリウム・グルタミクム黴工研
曹寄第６０９５号の菌株を使用し九・ この菌株を実施例１で使用し九植培地３０〇−を含む２
１容三角フラスコに接種し、３０℃で２４時間振盪培養
を行なった。この種培養液１ｊを廃糖蜜１００ ｅｌｌ
（グルコース換算）、ｎｒｓｏ４−７Ｈ！ＯＯ，ａ
ｅｌｌ 、 ＫＨ，ＰＯ４０，７ｖ／Ｉ 。
６３１ｆ／Ｉ Ｈ−３１１４３５１ Ｈ−３１１３３４＃ 実施例３ 種菌として、コリネバクテリウム・グルタミクム黴工研
曹寄第６０９５号の菌株を使用し九・ この菌株を実施例１で使用し九植培地３０〇−を含む２
１容三角フラスコに接種し、３０℃で２４時間振盪培養
を行なった。この種培養液１ｊを廃糖蜜１００ ｅｌｌ
（グルコース換算）、ｎｒｓｏ４−７Ｈ！ＯＯ，ａ
ｅｌｌ 、 ＫＨ，ＰＯ４０，７ｖ／Ｉ 。
尿素３９／Ｉｔ大豆粕酸加水分解物１８１（大豆粕重量
換算および後述する通シの方法で予め調製したロイシン
発酵液１．４４ （ｖ／ｒ）からなる発酵培地（ｐＨ７
，ｚ）ｘｏｊを含む３０４谷ジヤーフアメンターに接種
し、通気量１０１ｋ。
換算および後述する通シの方法で予め調製したロイシン
発酵液１．４４ （ｖ／ｒ）からなる発酵培地（ｐＨ７
，ｚ）ｘｏｊを含む３０４谷ジヤーフアメンターに接種
し、通気量１０１ｋ。
攪拌速度４００ ｒｐｍ 、 ３０℃で２２１アンモニ
ア水で培養液のｐＨをｓ、Ｂｃｗ４整しながら４８時間
培養した。この時培養液中にＬ−リジンが４３ ｆ／ｌ
生成蓄積した。親株であるＦＥＲＭ−Ｐ３６３４の菌株
を同様に培養した場合のＬ ＋ ＩＪレジン産量はａ
７ ｔ／Ｉであった・上記発酵培地に使用したロイシン
発酵液は次の通り調製した。
ア水で培養液のｐＨをｓ、Ｂｃｗ４整しながら４８時間
培養した。この時培養液中にＬ−リジンが４３ ｆ／ｌ
生成蓄積した。親株であるＦＥＲＭ−Ｐ３６３４の菌株
を同様に培養した場合のＬ ＋ ＩＪレジン産量はａ
７ ｔ／Ｉであった・上記発酵培地に使用したロイシン
発酵液は次の通り調製した。
ロイシン生産株であるコリネバクテリウム・グルタミク
ムＡＴＣＣ２１８８５をグルコース５０ ｅｌｌ 、ペ
プトン１０ ｆ／Ｉ 、酵母エキス１０ｆ／ｌ、コーン
・スチープ・リーカー ５ ｅｌｌ 。
ムＡＴＣＣ２１８８５をグルコース５０ ｅｌｌ 、ペ
プトン１０ ｆ／Ｉ 、酵母エキス１０ｆ／ｌ、コーン
・スチープ・リーカー ５ ｅｌｌ 。
ＮａＣｊ ！５ ｅｌｌ 、尿素３ ｆ／Ｉ 、 ヒオ
チン５（ｊｐｆ／１からなる種培地（ｐＨｙ、ｚ）ａｊ
を含む５Ｉ容ジヤー７アーメンターに接種し、通気量３
Ｑ分。
チン５（ｊｐｆ／１からなる種培地（ｐＨｙ、ｚ）ａｊ
を含む５Ｉ容ジヤー７アーメンターに接種し、通気量３
Ｑ分。
攪拌数６００ ｒｐｌａで３０℃、１７時間培養を行な
った。この種培養液１１を酢酸アンモニウム５ ｅｌｌ
ｔ ＫＨ２ＰＯ４２ｆ／１１ ＭｆＳＯ，・７Ｈ，Ｏ
Ｏ，５ｒ／７＋ Ｆ（３Ｓｏ ａ ・７Ｈｚ ＯＯ−１
ｆ／Ｉ −Ｍｎ Ｓ Ｏａ ・ｎＨｚ Ｏｏ、０１ｆ／
ｊ、ビオチ；／ ５０ Ｉｆ／ｌ ｐチアミン塩酸塩１
００パＡからなる発酵培地（ｐＨａｓ）１０ｊを含む３
０４容ジャーファーメンタ−に接種し、通気＊ １ｏ
ＩＡ−ｅ攪拌速度４００ｒｐｍ。
った。この種培養液１１を酢酸アンモニウム５ ｅｌｌ
ｔ ＫＨ２ＰＯ４２ｆ／１１ ＭｆＳＯ，・７Ｈ，Ｏ
Ｏ，５ｒ／７＋ Ｆ（３Ｓｏ ａ ・７Ｈｚ ＯＯ−１
ｆ／Ｉ −Ｍｎ Ｓ Ｏａ ・ｎＨｚ Ｏｏ、０１ｆ／
ｊ、ビオチ；／ ５０ Ｉｆ／ｌ ｐチアミン塩酸塩１
００パＡからなる発酵培地（ｐＨａｓ）１０ｊを含む３
０４容ジャーファーメンタ−に接種し、通気＊ １ｏ
ＩＡ−ｅ攪拌速度４００ｒｐｍ。
３０℃で６０時間通気攪拌培養を行なった。なお培養途
中から酢酸アンモニウム７嘔、酢酸３８９６の両者を含
む混液を使用して、培養のｐＨを亀＄に調整しながら連
続ツイードを行なつえ。
中から酢酸アンモニウム７嘔、酢酸３８９６の両者を含
む混液を使用して、培養のｐＨを亀＄に調整しながら連
続ツイードを行なつえ。
ζ５してＬ−１ｔイシン１翫ｓ ｔ／Ｊ を會むロイ
シフ働−諌を得て、これを上［１−９ジンＯ発ｇＮ１１
に０一部に供し大。
シフ働−諌を得て、これを上［１−９ジンＯ発ｇＮ１１
に０一部に供し大。
手続補正書
昭和５７年１１月ＩＱ日
特許庁長官 殿
１、事件の表示
昭和５６年特許願第１２５００６号
２、発明の名称
発酵法によるし一リジンの製造法
３、補正をする者
事件との関係 特許出願人
郵便番号 １００
住 所 東京都千代田区大手町−丁目６番１号名 称
（１０２）協和醗酵工業株式会社（置 ： ０３−
２０１−７２１１内線２７５１）５、補正の内容 （８） 回書第１４頁表−２を次の様に訂正する。
（１０２）協和醗酵工業株式会社（置 ： ０３−
２０１−７２１１内線２７５１）５、補正の内容 （８） 回書第１４頁表−２を次の様に訂正する。
表 −２
菌 株 Ｌ−リジン−塩酸塩（９）同
書第１２頁１０行、第１３頁９〜１０行「微工研菌寄第
６０９６号」を「微工研条寄第１４４号」に訂正する。
書第１２頁１０行、第１３頁９〜１０行「微工研菌寄第
６０９６号」を「微工研条寄第１４４号」に訂正する。
００）同書第１５頁３行
「微工研菌寄第６０９５号」を「微工研条寄第１４３号
」に訂正する。
」に訂正する。
Claims (1)
- コリネバクテリウム属またはブレビバクテリウム属に属
し、プリンアナログ抵抗性およびピリミジンアナマグ抵
抗性の少なくとも１種の性質を有するＬ−リジン生産株
を栄養培地に培養し、培養物中にＬ−９ジンを生成蓄積
せしめ、諌培養物からシーリジンを採取することを特徴
とする発酵法によるＬ−リジンの製造法。
Priority Applications (11)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56125006A JPS5828292A (ja) | 1981-08-10 | 1981-08-10 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
| ES514806A ES514806A0 (es) | 1981-08-10 | 1982-08-06 | Un procedimiento para la produccion de l-lisina. |
| GB08222768A GB2103617B (en) | 1981-08-10 | 1982-08-06 | Production of l-lysine by fermentation and new micro-organisms obtained by protoplast fusion |
| MX10191682U MX7411E (es) | 1981-08-10 | 1982-08-06 | Procedimiento microbiologico para la preparacion de-i-lisina |
| FR828213886A FR2511035B1 (fr) | 1981-08-10 | 1982-08-09 | Procede de production de l-lysine par fermentation |
| AU87028/82A AU553843B2 (en) | 1981-08-10 | 1982-08-10 | L-lysine by fermentation |
| IN939/CAL/82A IN155754B (ja) | 1981-08-10 | 1982-08-10 | |
| IT67997/82A IT1156487B (it) | 1981-08-10 | 1982-10-08 | Procedimento e microrganismi per la produzione della l lisina mediante fermentazione |
| IN767/MAS/84A IN159606B (ja) | 1981-08-10 | 1984-10-12 | |
| GB08505658A GB2152509B (en) | 1981-08-10 | 1985-03-05 | Process for the production of l-lysine by fermentation and microorganisms for use therein |
| US06/754,923 US4657860A (en) | 1981-08-10 | 1985-07-15 | Process for producing L-lysine by fermentation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56125006A JPS5828292A (ja) | 1981-08-10 | 1981-08-10 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5828292A true JPS5828292A (ja) | 1983-02-19 |
| JPS6362199B2 JPS6362199B2 (ja) | 1988-12-01 |
Family
ID=14899534
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56125006A Granted JPS5828292A (ja) | 1981-08-10 | 1981-08-10 | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4657860A (ja) |
| JP (1) | JPS5828292A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5988094A (ja) * | 1982-11-10 | 1984-05-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
| US4716513A (en) * | 1985-07-30 | 1987-12-29 | Mitsubishi Denki Kabushiki Kaisha | Base drive circuit in a transistor inverter |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2990735B2 (ja) * | 1990-04-20 | 1999-12-13 | 味の素株式会社 | Ｌ―リジンの発酵的製造法 |
| JP3006939B2 (ja) * | 1991-10-21 | 2000-02-07 | 協和醗酵工業株式会社 | Ｌ−リジンの製造法 |
| US6893848B1 (en) | 1999-04-19 | 2005-05-17 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Desensitized aspartokinase |
| CN1236690C (zh) * | 1999-06-23 | 2006-01-18 | 德古萨股份公司 | 含有赖氨酸的含水动物饲料添加剂及其生产方法 |
| US6984512B1 (en) * | 1999-08-02 | 2006-01-10 | Archer-Daniels-Midland Company | Bacterial strains, methods of preparing the same and use thereof in fermentation processes for L-lysine production |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US2979439A (en) * | 1958-11-04 | 1961-04-11 | Kyowa Hakko Kogyo Kk | Method of producing l-lysine by fermentation |
| JPS4828078B1 (ja) * | 1969-03-20 | 1973-08-29 | ||
| JPS5544597B1 (ja) * | 1969-06-09 | 1980-11-13 | ||
| GB1386705A (en) * | 1972-01-21 | 1975-03-12 | Mitsui Toatsu Chemicals | Method of producing l-lysine by fermentation |
| US3825472A (en) * | 1972-04-27 | 1974-07-23 | Ajinomoto Kk | Method of producing l-lysine by fermentation |
| JPS52102498A (en) * | 1976-02-20 | 1977-08-27 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-lysine |
| JPS539394A (en) * | 1976-07-09 | 1978-01-27 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | Preparation of l-lysine by fermentation |
| JPS57115186A (en) * | 1980-12-29 | 1982-07-17 | Ajinomoto Co Inc | Preparation of l-lysine by fermentation |
-
1981
- 1981-08-10 JP JP56125006A patent/JPS5828292A/ja active Granted
-
1985
- 1985-07-15 US US06/754,923 patent/US4657860A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5988094A (ja) * | 1982-11-10 | 1984-05-21 | Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 |
| US4716513A (en) * | 1985-07-30 | 1987-12-29 | Mitsubishi Denki Kabushiki Kaisha | Base drive circuit in a transistor inverter |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6362199B2 (ja) | 1988-12-01 |
| US4657860A (en) | 1987-04-14 |
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