JPS584556B2 - 胆汁酸の測定装置 - Google Patents
胆汁酸の測定装置Info
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- JPS584556B2 JPS584556B2 JP52111017A JP11101777A JPS584556B2 JP S584556 B2 JPS584556 B2 JP S584556B2 JP 52111017 A JP52111017 A JP 52111017A JP 11101777 A JP11101777 A JP 11101777A JP S584556 B2 JPS584556 B2 JP S584556B2
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- Japan
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- fluorescence
- measuring device
- bile acid
- coil
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- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6486—Measuring fluorescence of biological material, e.g. DNA, RNA, cells
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- G—PHYSICS
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は血液（血清）、胆汁中の胆汁酸の定量を行う胆
汁酸の測定方法に関する。
汁酸の測定方法に関する。
更に詳しくは、本発明は血液又は胆汁試料を加温して酵
素の非動化を行い、次いでその試料に３α−ＨＳＤとＮ
ＡＤとの混合試薬を添加し混合攪拌して反応させ、その
反応生成物のＮＡＤＨを螢光光度計によって螢光定量測
定を可能とする胆汁酸の測定装置に関する。
素の非動化を行い、次いでその試料に３α−ＨＳＤとＮ
ＡＤとの混合試薬を添加し混合攪拌して反応させ、その
反応生成物のＮＡＤＨを螢光光度計によって螢光定量測
定を可能とする胆汁酸の測定装置に関する。
従来血液、（血清）胆汁中の胆汁酸の測定方法としては
、真重氏らによって提案された抽出操作を省く螢光測定
による自動測定方法が知られている。
、真重氏らによって提案された抽出操作を省く螢光測定
による自動測定方法が知られている。
この方法は、血液又は胆汁試料に３α−Ｈ Ｓ Ｄ （
３ ａ − ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈ
ｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）及びＮ Ａ Ｄ （ Ｄ ｉｐ
ｈｏｓｐｈｏｐｙｒｉｄｉｎｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
）の混合液を加えて混合攪拌し、次いでジアホラーゼ
及びレゾアズリンの混合液を加えて混合攪拌して得られ
たその反応生成物の一つである螢光物質のレゾルフイン
を螢光光度計にて螢光定量し、それによって胆汁酸を演
算により定量測定するものである。
３ ａ − ｈｙｄｒｏｘｙｓｔｅｒｏｉｄ ｄｅｈ
ｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ）及びＮ Ａ Ｄ （ Ｄ ｉｐ
ｈｏｓｐｈｏｐｙｒｉｄｉｎｅ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ
）の混合液を加えて混合攪拌し、次いでジアホラーゼ
及びレゾアズリンの混合液を加えて混合攪拌して得られ
たその反応生成物の一つである螢光物質のレゾルフイン
を螢光光度計にて螢光定量し、それによって胆汁酸を演
算により定量測定するものである。
従ってこの方法によれば、反応が複雑であり、試薬の純
度に対する要求度が非常に高い。
度に対する要求度が非常に高い。
更にこの方法によれば、反応試薬の数が多いので試薬混
合による弊害が起りやすい。
合による弊害が起りやすい。
本発明者はこれらの事情に鑑み鋭意研究を重ねて、反応
の途中に螢光物質のＮＡＤＨが生成されており、このＮ
ＡＤＨの螢光測定によって胆汁酸の定量測定が可能であ
ることを見出し、ここにその自動的な連続測定が実際に
可能な具体的な装置を提案するものであり、その具体的
な構成は緩衝液添加管、加温コイル、混合攪拌コイル及
び螢光光度計の螢光フローセルをこの順に備え、更に緩
衝液添加管に試料導入管及びその下流に加圧空気投入管
を付設し、かつ加温コイルと混合攪拌コイルとの間に３
α−ＨＳＤとＮＡＤとの混合液添加管を付設して螢光光
度計により反応生成物のＮＡＤＨを螢光定量測定できる
よう構成してなる胆汁酸の測定装置である。
の途中に螢光物質のＮＡＤＨが生成されており、このＮ
ＡＤＨの螢光測定によって胆汁酸の定量測定が可能であ
ることを見出し、ここにその自動的な連続測定が実際に
可能な具体的な装置を提案するものであり、その具体的
な構成は緩衝液添加管、加温コイル、混合攪拌コイル及
び螢光光度計の螢光フローセルをこの順に備え、更に緩
衝液添加管に試料導入管及びその下流に加圧空気投入管
を付設し、かつ加温コイルと混合攪拌コイルとの間に３
α−ＨＳＤとＮＡＤとの混合液添加管を付設して螢光光
度計により反応生成物のＮＡＤＨを螢光定量測定できる
よう構成してなる胆汁酸の測定装置である。
すなわち本発明に係る胆汁酸の測定装置の主要な特徴の
一つは、反応生成物ＮＡＤＨの螢光定量による胆汁酸の
定量測定にある。
一つは、反応生成物ＮＡＤＨの螢光定量による胆汁酸の
定量測定にある。
従って試薬としては３α−ＨＳＤとＮＡＤとの混合液の
みで螢光定量の対象反応生成物が得られるわけであり、
これによって試薬数・量及び試料量の低減が可能となる
と共に、試薬又はこれと試料の混合機構が簡単になり、
更に定量の再現性が良好となる。
みで螢光定量の対象反応生成物が得られるわけであり、
これによって試薬数・量及び試料量の低減が可能となる
と共に、試薬又はこれと試料の混合機構が簡単になり、
更に定量の再現性が良好となる。
本発明に係る胆汁酸の測定装置によれば、まず血液又は
胆汁試料はその酵素の非動化を行うために、加熱処理に
付される。
胆汁試料はその酵素の非動化を行うために、加熱処理に
付される。
例えば約６７℃の温浴に約５分間供される。
次いでその試料に３α−ＨＳＤとＮＡＤとの混合液を加
えて混合攪拌し反応させて一定時間後にその反応生成物
であるＮＡＤＨを螢光光度計で螢光定量し、それによっ
て胆汁酸を演算定量する。
えて混合攪拌し反応させて一定時間後にその反応生成物
であるＮＡＤＨを螢光光度計で螢光定量し、それによっ
て胆汁酸を演算定量する。
螢光定量では、例えば螢光光度計の螢光用フローセルに
ＮＡＤＨが生成された試料が適宜吸引導入されそのＮＡ
ＤＨが定量される。
ＮＡＤＨが生成された試料が適宜吸引導入されそのＮＡ
ＤＨが定量される。
なお、ＮＡＤＨが生成される反応式は次のように考えら
れる。
れる。
以下図に示す実施装置例に基いて本発明を例証する。
第１図において、胆汁酸の測定装置１ａは、温水振とり
槽２ａと、この槽内に浸漬された加温コイル部１１ａと
、このフィル部の入口に設けられた血液（血清）試料投
入管５ａ及びｐＨ７．４のトリスバツファ添加管１２ａ
と、前記加温コイル部１１ａの出口より順に連結された
混合攪拌コイル１３ａと、螢光光度計８ａの螢光フロー
セル７ａと、排出管１０ａと、前記加温コイル部１１ａ
と混合攪拌コイル１３ａ．Ｔｈの間に連結された試薬添
加管６ａとから主として構成されている。
槽２ａと、この槽内に浸漬された加温コイル部１１ａと
、このフィル部の入口に設けられた血液（血清）試料投
入管５ａ及びｐＨ７．４のトリスバツファ添加管１２ａ
と、前記加温コイル部１１ａの出口より順に連結された
混合攪拌コイル１３ａと、螢光光度計８ａの螢光フロー
セル７ａと、排出管１０ａと、前記加温コイル部１１ａ
と混合攪拌コイル１３ａ．Ｔｈの間に連結された試薬添
加管６ａとから主として構成されている。
なお１４ａは加圧空気投入管である。
次に以上のような構成を備えた胆汁酸の測定装置１ａを
用いる場合の測定方法を具体的に説明する。
用いる場合の測定方法を具体的に説明する。
まず試料は試料投入管５ａより投入されトリスバソファ
添加Ｗ１２ａよりトリスバツファの添加を受けてｐＨを
７．４に調整され加圧空気投入管１４ａにより各試料間
を区別すべく空気が投入され加温コイル部１１ａに至る
。
添加Ｗ１２ａよりトリスバツファの添加を受けてｐＨを
７．４に調整され加圧空気投入管１４ａにより各試料間
を区別すべく空気が投入され加温コイル部１１ａに至る
。
そして温水振とう槽２ａ内で６７℃５分間の加温を受け
混合攪拌コイル１３ａに至るが、その途中で試薬添加管
６ａよりリン酸バツファによりｐＨ７．４に調整された
ＮＡＤと３α−ＨＳＤの混合液の添加を受ける。
混合攪拌コイル１３ａに至るが、その途中で試薬添加管
６ａよりリン酸バツファによりｐＨ７．４に調整された
ＮＡＤと３α−ＨＳＤの混合液の添加を受ける。
かくして混合試料は数分間の混合攪拌を受けるが隣接す
る各混合試料が混ることなく各々ＮＡＤＨの生成反応を
完了する。
る各混合試料が混ることなく各々ＮＡＤＨの生成反応を
完了する。
そして、励起波長３４０ｎｍげい光波長４５０ｎｍで適
宜ＮＡＤＨの螢光定量測定が行われ、その測定値に基い
て胆汁酸の定量が行われる。
宜ＮＡＤＨの螢光定量測定が行われ、その測定値に基い
て胆汁酸の定量が行われる。
第１図は本発明に係る胆汁酸の測定装置の一例な示す機
能説明図である。 １ａ……胆汁酸の測定装置、５ａ……試料投入管、６ａ
……試薬添加管、７ａ……螢光フローセル、８ａ……螢
光光度計、１１ａ……加温コイル、１２ａ……トリスバ
ッファ添加管、１３ａ……混合攪拌コイル、１４ａ……
加圧空気投入管。
能説明図である。 １ａ……胆汁酸の測定装置、５ａ……試料投入管、６ａ
……試薬添加管、７ａ……螢光フローセル、８ａ……螢
光光度計、１１ａ……加温コイル、１２ａ……トリスバ
ッファ添加管、１３ａ……混合攪拌コイル、１４ａ……
加圧空気投入管。
Claims (1)
- １ 緩衝液添加管、加温コイル、混合攪拌コイル及び螢
光光度計の螢光フローセルをこの順に備え、更に緩衝液
添加管に試料導入管及びその下流に加圧空気投入管を付
設し、かつ加温コイルと混合攪拌コイルとの間に３α−
ＨＳＤとＮＡＤとの混合液添加管を付設して螢光光度計
により反応生成物のＮＡＤＨを螢光定量測定できるよう
構成してなる胆汁酸の測定装置。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52111017A JPS584556B2 (ja) | 1977-09-14 | 1977-09-14 | 胆汁酸の測定装置 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP52111017A JPS584556B2 (ja) | 1977-09-14 | 1977-09-14 | 胆汁酸の測定装置 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5444597A JPS5444597A (en) | 1979-04-09 |
| JPS584556B2 true JPS584556B2 (ja) | 1983-01-26 |
Family
ID=14550276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP52111017A Expired JPS584556B2 (ja) | 1977-09-14 | 1977-09-14 | 胆汁酸の測定装置 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS584556B2 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5639797A (en) * | 1979-09-07 | 1981-04-15 | Japan Spectroscopic Co | Analytical method of bile acid and apparatus for the same |
| JPS5847255A (ja) * | 1981-09-14 | 1983-03-18 | Nisshin Denki Seisakusho:Kk | 液体クロマトグラフ装置 |
| JPS596897A (ja) * | 1982-07-06 | 1984-01-13 | Sekisui Chem Co Ltd | 固定化酵素を用いた生体成分の定量法 |
| CN100454002C (zh) * | 2006-05-17 | 2009-01-21 | 杭州利安生物科技有限公司 | 辅酶ⅰ及其衍生物含量的测定方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5284796A (en) * | 1976-01-07 | 1977-07-14 | Osuga Toshiaki | Microanalysis of bile acid |
-
1977
- 1977-09-14 JP JP52111017A patent/JPS584556B2/ja not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5444597A (en) | 1979-04-09 |
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