JPS585189A - 新規なアミドヒドロラ−ゼ - Google Patents
新規なアミドヒドロラ−ゼInfo
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- JPS585189A JPS585189A JP56101161A JP10116181A JPS585189A JP S585189 A JPS585189 A JP S585189A JP 56101161 A JP56101161 A JP 56101161A JP 10116181 A JP10116181 A JP 10116181A JP S585189 A JPS585189 A JP S585189A
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- Japan
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- antibiotic
- enzyme
- ability
- solution
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
- C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/18—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing at least two hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system, e.g. rifamycin
- C12P17/182—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system
- C12P17/184—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring heteroatoms in the condensed system containing a beta-lactam ring, e.g. thienamycin
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
- Y10S435/886—Streptomyces
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は新規な１＃Ｘに関し、さらに−しくは式で示さ
れる抗生物質０Ａ−６１２９１の脱バントチイニル化能
を有するが、式 て示される抗生物質Ｐｇ−ｓの脱アセチル化能を実質的
に有しないアミドヒドロラーゼに関する。
れる抗生物質０Ａ−６１２９１の脱バントチイニル化能
を有するが、式 て示される抗生物質Ｐｇ−ｓの脱アセチル化能を実質的
に有しないアミドヒドロラーゼに関する。
本発明者らは先にストレプト建セス会フルボビリディス
Ａ ９３３ ｉｓｔｒａｐｔｒｎｙａａｍ ｆｌｕｖｏ
ｖｒｉｒｔｄｉａＡｌ！１Ｂ）（ＦＡ’ＲＡ／ ＢＰ
−ｔｏｒが上記式（ので示される抗生物質ｐｓ−ｓ′ｆ
ｔ生産すること〔ジャーナル・オブ・ファーメンティジ
ョン−テクノロジー第５７巻（１１１７９年）Ｓｌ＠！
１−２７２貴参照〕、並びにストレプト建セスａｐ、
ＯＡ −１１１９ｉＦＥＢＭ Ｐ−５丁１４）が上記
式（１）で示される抗生！励質０Ａ−６１１９Ａ＠生産
する仁と（特願昭５５−１３５８１８号）を見い出し優
案じ次。
Ａ ９３３ ｉｓｔｒａｐｔｒｎｙａａｍ ｆｌｕｖｏ
ｖｒｉｒｔｄｉａＡｌ！１Ｂ）（ＦＡ’ＲＡ／ ＢＰ
−ｔｏｒが上記式（ので示される抗生物質ｐｓ−ｓ′ｆ
ｔ生産すること〔ジャーナル・オブ・ファーメンティジ
ョン−テクノロジー第５７巻（１１１７９年）Ｓｌ＠！
１−２７２貴参照〕、並びにストレプト建セスａｐ、
ＯＡ −１１１９ｉＦＥＢＭ Ｐ−５丁１４）が上記
式（１）で示される抗生！励質０Ａ−６１１９Ａ＠生産
する仁と（特願昭５５−１３５８１８号）を見い出し優
案じ次。
本発明者らはさらに上記８つの抗生１質ＰＳ。
墨及び□Ａ−６１ｇ９Ａの生成４構ｔ−探求すべく、上
記１ａｌｉ！の１株の生化学的相違について研究を重ね
た結果、成る檀の酵素の生産性に差真がるることをつき
とめ、それが前記の新規なアミドヒドロラーゼであるこ
とを見い出し、本発明會完成するに至つ九ものでおる。
記１ａｌｉ！の１株の生化学的相違について研究を重ね
た結果、成る檀の酵素の生産性に差真がるることをつき
とめ、それが前記の新規なアミドヒドロラーゼであるこ
とを見い出し、本発明會完成するに至つ九ものでおる。
本発明により提供されるアミドヒドロラーゼは一般に下
記に示すような稙々の作用特性を有している。
記に示すような稙々の作用特性を有している。
（１） 本発明により提供されるアミドヒドロラーゼ
は、下記式 （１） で示される抗生物質０Ａ−６１２９１の３位に結合する
バントチイニル側鎖中のバントチイニル基裂させる加力
、すなわち脱バントチイニル化能を有するが、しかし下
記式 ンノエチルチオ側鎖中のアセチル４は開裂させる能力（
脱アセチル化能）ｔ−実質的に有しない、すなわちバン
トチイニル基の適訳的開裂作用を有している点で％徽的
でめる。
は、下記式 （１） で示される抗生物質０Ａ−６１２９１の３位に結合する
バントチイニル側鎖中のバントチイニル基裂させる加力
、すなわち脱バントチイニル化能を有するが、しかし下
記式 ンノエチルチオ側鎖中のアセチル４は開裂させる能力（
脱アセチル化能）ｔ−実質的に有しない、すなわちバン
トチイニル基の適訳的開裂作用を有している点で％徽的
でめる。
（２） 本発明により提供されるアンドヒドロラーゼ
は、一般的にＬ−アンノ酸アシラーゼの性状をもち、Ｌ
、−アシルアミノ酸、丙えばＮ−クロロアセチルルーフ
ェニルアラニンの脱アシル化作用ヲ有するが、Ｄ−アシ
ルアミノ酸の脱アシル化龍をもたないＬ−アジルアイノ
酸アンドヒドロラーゼのｌａｉである。
は、一般的にＬ−アンノ酸アシラーゼの性状をもち、Ｌ
、−アシルアミノ酸、丙えばＮ−クロロアセチルルーフ
ェニルアラニンの脱アシル化作用ヲ有するが、Ｄ−アシ
ルアミノ酸の脱アシル化龍をもたないＬ−アジルアイノ
酸アンドヒドロラーゼのｌａｉである。
（３） 本発明ＶＣより提供されるアンドヒドロラー
ゼは、ペニシリン争アシラーゼの鳩舎に知られているよ
うに、成る種の遊離アミノ基又はアンド結合を含・Ｈす
る基質に対して、アシルーコエンザイムＡ（ＣｏＡ）か
らアシル基管転移させる作用ｔも併せもっている・易合
本ある。例えば、本発明ｒこより提供されるアミドヒド
ロラーゼは、前記式（Ｉ）で示される抗生命質０Ａ−６
１２９Ａの３位の側鎖中のバントチイニル基を、アセチ
ル−ＣｏＡ。
ゼは、ペニシリン争アシラーゼの鳩舎に知られているよ
うに、成る種の遊離アミノ基又はアンド結合を含・Ｈす
る基質に対して、アシルーコエンザイムＡ（ＣｏＡ）か
らアシル基管転移させる作用ｔも併せもっている・易合
本ある。例えば、本発明ｒこより提供されるアミドヒド
ロラーゼは、前記式（Ｉ）で示される抗生命質０Ａ−６
１２９Ａの３位の側鎖中のバントチイニル基を、アセチ
ル−ＣｏＡ。
プロピオニル−ＣａＡ、ブチリル−ＣｏＡ又はグルタリ
ル−ＣｏＡ中のアセチル基、プロピオニル基、ブチリル
基筐たはグルタリル冶と交換する触媒作用；および／め
るいは６−アミノペニシランＥ＆（６−ＡＦＡ）の６−
位υノアミノ基に対しアセチル−ＣｏＡ、プロピオニル
−ＣｏＡ、ブチリル−ＣｏＡまたはグルタリル−ＣｏＡ
からアセチル基、プロピオニル基、ブチリル盾−または
グルタリル為金転、停させる作用を有していることかめ
る。
ル−ＣｏＡ中のアセチル基、プロピオニル基、ブチリル
基筐たはグルタリル冶と交換する触媒作用；および／め
るいは６−アミノペニシランＥ＆（６−ＡＦＡ）の６−
位υノアミノ基に対しアセチル−ＣｏＡ、プロピオニル
−ＣｏＡ、ブチリル−ＣｏＡまたはグルタリル−ＣｏＡ
からアセチル基、プロピオニル基、ブチリル盾−または
グルタリル為金転、停させる作用を有していることかめ
る。
本Ｍ Ｌ１１４により礎供されるアンドヒドロラーゼは
遍虐、ストレプトミセス嬌に属するカルバペネム系抗生
吻ＩＮ生産ｍを栄養培地中で培養し、その培地から前記
特性を有するアミドヒドロラーゼをそれ目体公刊の方法
によって回収することによシ生産することができる。
遍虐、ストレプトミセス嬌に属するカルバペネム系抗生
吻ＩＮ生産ｍを栄養培地中で培養し、その培地から前記
特性を有するアミドヒドロラーゼをそれ目体公刊の方法
によって回収することによシ生産することができる。
本生産に使用しうるストレプトミ竜ス鵬に禰するカルバ
ペネム系抗生物質生産園としては、下記式 で示されるカルバベネム骨格を有する抗生物質。
ペネム系抗生物質生産園としては、下記式 で示されるカルバベネム骨格を有する抗生物質。
νりえはチェナマイシン（Ｒ，＝ＣＨ，（ＯＨ）Ｃｆｉ
−募ｉｔ、 ＝−ｓｃｉノーＣＭ、ＮＨ，： Ｊ、
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｍ。
−募ｉｔ、 ＝−ｓｃｉノーＣＭ、ＮＨ，： Ｊ、
Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｍ。
し、１〜１２（１９７９年）〕、〕Ｎ−アセチルチェナ
マイシンＡ’、−Ｃ八（ＯＨ）ＣＨ−寥Ｒ３−−８ＣＨ
，ＣＨ，ＮＨＣＯＣＨ，：特開昭５１−６５２９４号公
報〕、Ｎ−アセチルデヒドロチェナマイシン［Ｒｌ ＝
ＣＨｌ（Ｃ）＃）Ｃツノ−Ｉ Ｒ１：ツへ５ＣＨ−Ｃ
ＨＮＩｉＣＯＣ八：％囲昭５３−１３０４９４号公報］
、エビチェナマイシンＡ、Ｂ、Ｏ及びＤＣＲ，ｍＣＨ，
（Ｏｌｉ ｌ Ｃｆ１− ；Ｒ、ｘ 、ＳＣへＣＢ、Ｎ
ｌｉ、 ：判開昭５２−６５２９３号公報及び材開昭５
２−１３１５９６号公報〕、ＭＭＩＴＢ８０〔Ｒ，＝Ｃ
八（０３０，Ｈ）ＣＨ−寥Ｒ＠ ｘｚ−８ＣＨ，ＣＭ、
ＮＨＣＯＣＨ，：Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、 ３２
、２９５〜３０４（１９７９年）〕、ＭＭ１３９０２
ｒ−Ｒ１＝ＣＢ。
マイシンＡ’、−Ｃ八（ＯＨ）ＣＨ−寥Ｒ３−−８ＣＨ
，ＣＨ，ＮＨＣＯＣＨ，：特開昭５１−６５２９４号公
報〕、Ｎ−アセチルデヒドロチェナマイシン［Ｒｌ ＝
ＣＨｌ（Ｃ）＃）Ｃツノ−Ｉ Ｒ１：ツへ５ＣＨ−Ｃ
ＨＮＩｉＣＯＣ八：％囲昭５３−１３０４９４号公報］
、エビチェナマイシンＡ、Ｂ、Ｏ及びＤＣＲ，ｍＣＨ，
（Ｏｌｉ ｌ Ｃｆ１− ；Ｒ、ｘ 、ＳＣへＣＢ、Ｎ
ｌｉ、 ：判開昭５２−６５２９３号公報及び材開昭５
２−１３１５９６号公報〕、ＭＭＩＴＢ８０〔Ｒ，＝Ｃ
八（０３０，Ｈ）ＣＨ−寥Ｒ＠ ｘｚ−８ＣＨ，ＣＭ、
ＮＨＣＯＣＨ，：Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、 ３２
、２９５〜３０４（１９７９年）〕、ＭＭ１３９０２
ｒ−Ｒ１＝ＣＢ。
（Ｏ２０，Ｅ）ＣＨ−、Ｒ，ニー５ＣＨ＝ＣＩＩＮＨＣ
ＯＣＩｌ、：Ｊ、 Ａｖｓｔｉｂイｏｔイｃｌ、３２
，２９５〜３０４Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｇｉｏａ、３２．
２９５〜３０４（１９７９年）〕、抗生物質ＰＳ−ｓ
〔Ｒ１−Ｃ鳥Ｃへ−」Ｒ，＝ −８Ｃ；Ｈ，ＣＨ，ＮＨ
ＣＯＣＭ、 ； Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｇｉｏａ。
ＯＣＩｌ、：Ｊ、 Ａｖｓｔｉｂイｏｔイｃｌ、３２
，２９５〜３０４Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｇｉｏａ、３２．
２９５〜３０４（１９７９年）〕、抗生物質ＰＳ−ｓ
〔Ｒ１−Ｃ鳥Ｃへ−」Ｒ，＝ −８Ｃ；Ｈ，ＣＨ，ＮＨ
ＣＯＣＭ、 ； Ｊ、 Ａｎｔｉｂｉｏｇｉｏａ。
３３．７９６〜８０３ （１９８０年）〕、抗生物’Ｒ
ＰＳ−６ＣＲ，＝ （ＣＨｈ）、ＣＨ−Ｉ Ｒ，＝−８
ＣＨ。
ＰＳ−６ＣＲ，＝ （ＣＨｈ）、ＣＨ−Ｉ Ｒ，＝−８
ＣＨ。
ＣＨ，ＮＨＣＯＣＨ＠ ： Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ
ｍ、 ３３ 。
ｍ、 ３３ 。
１１２８〜１１３丁（１９８０年）〕、抗生物質Ｐ Ｓ
−７［Ｒ，＝Ｃｌ１．Ｃ１ｌ、−、Ｒ，＝−８ＣＨ＝
ＣＢＮＨＣＯＣＨ８： Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｇｉｏａ、
３３ ｍ １１２８〜１１３丁（１９８０年）〕、抗
生物質ＰＳ−８（Ｒ，−（ＣＭ、）ｔＣＨ，ｌ Ｒ，、
＝、 ４０Ｈ，、、ＣＨＮＨＣＯＣ１１＠ ： ｔｐ！
ｆＷ昭５６１５１８１号公報〕、カーペチマイシンＡＣ
Ｒ電−（ＣＨ，）、＜０Ｂ）Ｃ−３Ｒ，−一３ＣＨ＝Ｃ
ＨＮｔｌＣＯＣＨ，： Ｊ、 Ａｓｔｉｂｉｏｔｉａ
ｍ、 ３３゜１３８８〜１３８９ （１９８０年）〕、
Ｃ−１ｅａ ９ ａｓ、ＣＲ，＝ ＜ＣＩｉ、＞１＜０
３０．Ｈ）Ｃ−募Ｒ３＝３；ＣＢ＝ＣＨＮＨＣＯＣｆｌ
、 ： Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉａａ、３ Ｂ 。
−７［Ｒ，＝Ｃｌ１．Ｃ１ｌ、−、Ｒ，＝−８ＣＨ＝
ＣＢＮＨＣＯＣＨ８： Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｇｉｏａ、
３３ ｍ １１２８〜１１３丁（１９８０年）〕、抗
生物質ＰＳ−８（Ｒ，−（ＣＭ、）ｔＣＨ，ｌ Ｒ，、
＝、 ４０Ｈ，、、ＣＨＮＨＣＯＣ１１＠ ： ｔｐ！
ｆＷ昭５６１５１８１号公報〕、カーペチマイシンＡＣ
Ｒ電−（ＣＨ，）、＜０Ｂ）Ｃ−３Ｒ，−一３ＣＨ＝Ｃ
ＨＮｔｌＣＯＣＨ，： Ｊ、 Ａｓｔｉｂｉｏｔｉａ
ｍ、 ３３゜１３８８〜１３８９ （１９８０年）〕、
Ｃ−１ｅａ ９ ａｓ、ＣＲ，＝ ＜ＣＩｉ、＞１＜０
３０．Ｈ）Ｃ−募Ｒ３＝３；ＣＢ＝ＣＨＮＨＣＯＣｆｌ
、 ： Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉａａ、３ Ｂ 。
■１５〜１４３０（１９８０年）〕、ＦＡ−３１０８８
−ｆＶ ＣＲ，＝ＨＯＣＨ，（ＣＨ，）Ｃ−ＨＩｔ＠二
〇 ＪｓｃＢ＝ｃＢＮＨｃｏｃＨｓ：％開昭５５−１３６２
８１１号公権〕等の抗生物質の生産Ｆ１５をＭする微生
物が包含され、具体的には次の本の１に挙げることかで
きる。
−ｆＶ ＣＲ，＝ＨＯＣＨ，（ＣＨ，）Ｃ−ＨＩｔ＠二
〇 ＪｓｃＢ＝ｃＢＮＨｃｏｃＨｓ：％開昭５５−１３６２
８１１号公権〕等の抗生物質の生産Ｆ１５をＭする微生
物が包含され、具体的には次の本の１に挙げることかで
きる。
ストレプト′ミセス争フルボビリディス（Ｓｔｒａｐｔ
ｏ−ｍｙｅａａ ｆ′ｕｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ）ＡＴ
ＣＣ１５８ｆＪ ３及び２１９５４、ＦＥＲＮ Ｐ−
３９３５〜３９３丁ストレプトミセスーカトレヤ（Ｓｔ
ｒａｐｔｏｍｙａａｍｃａｔｔｌａｙａ）ＮＲＲＬ ８
０５７ストレブトンセス・フラボグリゼウスｉＳｔｒｇ
ｐｔｏ−ｍｙｃａａ ｆｌａｖｏｇｒｉａａｕａ）Ｎ
ＲＲＬ ８１３９及び１４Ｇ ストレプトミセス県オリパセ９ス（Ｓｔデａｐｔｔｎｎ
ｙｃａａｏ１ｉｖａａｍｕａ） ＡＴＣＣ２１３７９〜
２１３８２．３１１２６及び３１３６５、ＮＣＩＢ８２
３８及び８５０９ ストレグトイセス９ゲダエンシス（’；ｔｒｍｐｔｏｍ
ｙｃａａｇｍｄａｎａｎｍｉａ） ＡＴ ＣＣ４８８０
ストレプト電セス・アルゲンテオルス（ｓｔｒａｐｔｏ
−ｔｎｙｃｍａ ａｒｇａｓｔａｏｌｕａ） ＡＴＣＣ
１１００９ストレプトＺセス−７ラボビイレンス（Ｓｔ
ｒａｐｔｏ−ｍｙｃａａ ｆｌａｖｏｖイｒａｎｇ）
Ａ７’ＣＣ３３２０ストレプト２セｘ−フラプス（
Ｓｔｒａｇｔｏｍｖｃｍａｆｌａｖｕａ） ＡＴＣＣ
３３１１１にストレプトミセス・シオヤエンシス（Ｓｔ
ｒｍｐｔｏ−ｍｙｃｍａ ｍｉｏｙａｍｎｓｉａ） Ａ
ＴＣＣ１３９８９ストレプトミセス・クレメウスーサブ
スビシス・オーラテイリス＜Ｓｔデーｐｔｏｔ＊ｙｃｍ
ｍ ａｒｅｎａ’ｓ ａｓｈｓ＞ｍｙｃａｓ ｆｕｌｖ
ｏｖｉｒｉｄｉａ Ａ ９ Ｓ ３ ） （ＦＥＲＮＢ
Ｐ−１０） ストレプトオセス争スビシスＫＣ−ｓｅａｓ（Ｓｔｒｍ
ｐｔｏｍｙｃａａ ａｐ、 ＫＣ−６＠ ４３ ＦＥＲ
Ｎ ）−４４６７ ストレプト＜セス・グリセウス・サプスビシスΦクリオ
フイラス（Ｓｔｒａｐｔｏｔｐｈｙｏａｍ ｇｒｉａｍ
ｕｍａｗｂｓｐ、 ａｒｙｏｐｈｉｌｓｍ） Ｉ Ｆ
ｏ １３８８ ＠ストレプトミセス・トクノネンシス（
Ｓｔｒｍｐｔｏ−ｔｎｙｏａａ ｔｏｋｕｎｏｎｍｎ
ｍｉａ） Ｆ Ｅ Ｒ＾（Ｐ−４８４８上−に亭げた
微生物のうち、ストレプトミセス・フルボビリディス、
ストレプトミセス・カトレヤ、ストレプトずセス拳りレ
メウス・サブスビシス・オーラテイリス及びストレプト
ミセス・アルゲンテオルスが好適であり、中でもストレ
プトミセス・フルボビリディスＡ９３３が特に好適であ
り、その萌学的性質を説明すれば次のとおりである。
ｏ−ｍｙｅａａ ｆ′ｕｌｖｏｖｉｒｉｄｉａ）ＡＴ
ＣＣ１５８ｆＪ ３及び２１９５４、ＦＥＲＮ Ｐ−
３９３５〜３９３丁ストレプトミセスーカトレヤ（Ｓｔ
ｒａｐｔｏｍｙａａｍｃａｔｔｌａｙａ）ＮＲＲＬ ８
０５７ストレブトンセス・フラボグリゼウスｉＳｔｒｇ
ｐｔｏ−ｍｙｃａａ ｆｌａｖｏｇｒｉａａｕａ）Ｎ
ＲＲＬ ８１３９及び１４Ｇ ストレプトミセス県オリパセ９ス（Ｓｔデａｐｔｔｎｎ
ｙｃａａｏ１ｉｖａａｍｕａ） ＡＴＣＣ２１３７９〜
２１３８２．３１１２６及び３１３６５、ＮＣＩＢ８２
３８及び８５０９ ストレグトイセス９ゲダエンシス（’；ｔｒｍｐｔｏｍ
ｙｃａａｇｍｄａｎａｎｍｉａ） ＡＴ ＣＣ４８８０
ストレプト電セス・アルゲンテオルス（ｓｔｒａｐｔｏ
−ｔｎｙｃｍａ ａｒｇａｓｔａｏｌｕａ） ＡＴＣＣ
１１００９ストレプトＺセス−７ラボビイレンス（Ｓｔ
ｒａｐｔｏ−ｍｙｃａａ ｆｌａｖｏｖイｒａｎｇ）
Ａ７’ＣＣ３３２０ストレプト２セｘ−フラプス（
Ｓｔｒａｇｔｏｍｖｃｍａｆｌａｖｕａ） ＡＴＣＣ
３３１１１にストレプトミセス・シオヤエンシス（Ｓｔ
ｒｍｐｔｏ−ｍｙｃｍａ ｍｉｏｙａｍｎｓｉａ） Ａ
ＴＣＣ１３９８９ストレプトミセス・クレメウスーサブ
スビシス・オーラテイリス＜Ｓｔデーｐｔｏｔ＊ｙｃｍ
ｍ ａｒｅｎａ’ｓ ａｓｈｓ＞ｍｙｃａｓ ｆｕｌｖ
ｏｖｉｒｉｄｉａ Ａ ９ Ｓ ３ ） （ＦＥＲＮＢ
Ｐ−１０） ストレプトオセス争スビシスＫＣ−ｓｅａｓ（Ｓｔｒｍ
ｐｔｏｍｙｃａａ ａｐ、 ＫＣ−６＠ ４３ ＦＥＲ
Ｎ ）−４４６７ ストレプト＜セス・グリセウス・サプスビシスΦクリオ
フイラス（Ｓｔｒａｐｔｏｔｐｈｙｏａｍ ｇｒｉａｍ
ｕｍａｗｂｓｐ、 ａｒｙｏｐｈｉｌｓｍ） Ｉ Ｆ
ｏ １３８８ ＠ストレプトミセス・トクノネンシス（
Ｓｔｒｍｐｔｏ−ｔｎｙｏａａ ｔｏｋｕｎｏｎｍｎ
ｍｉａ） Ｆ Ｅ Ｒ＾（Ｐ−４８４８上−に亭げた
微生物のうち、ストレプトミセス・フルボビリディス、
ストレプトミセス・カトレヤ、ストレプトずセス拳りレ
メウス・サブスビシス・オーラテイリス及びストレプト
ミセス・アルゲンテオルスが好適であり、中でもストレ
プトミセス・フルボビリディスＡ９３３が特に好適であ
り、その萌学的性質を説明すれば次のとおりである。
！）形態
禎微−下でよく分枝した８中１糸より、直状〜曲状（Ｓ
ｔｒａｉｇｈｔ−／ｊｇｃｓｏｓａ）の気菌糸を伸長し
、輪生枝ｔ／′ｉみとめられない。成熟し友胞子鎖はｌ
Ｏ〜５０−園の楕円〜円筒形をし九１子から成り、胞子
のうｒよ−められない、胞子の大きさは（０，８〜１．
０ ） Ｘ （１，０−４０）ミクロン位で、胞子の表
向は平滑である。＃毛胞子はみとめられない。
ｔｒａｉｇｈｔ−／ｊｇｃｓｏｓａ）の気菌糸を伸長し
、輪生枝ｔ／′ｉみとめられない。成熟し友胞子鎖はｌ
Ｏ〜５０−園の楕円〜円筒形をし九１子から成り、胞子
のうｒよ−められない、胞子の大きさは（０，８〜１．
０ ） Ｘ （１，０−４０）ミクロン位で、胞子の表
向は平滑である。＃毛胞子はみとめられない。
黛） 各檜培地における生育状態
培！１１は％記しないかぎり！１１”−３０℃で行った
。
。
また色調の記載は主としてエッチ・ディ・トレスナーと
イー・ジエーーパカス（Ｈａ Ｄｅ Ｔｒａｍ鴇−
デａｎｄ Ｅ、 Ｊ、Ｂａｔｔｋｕｍ）ｉ、ジャーｆｋ
ｅ＃ブー７プライド・ミクロピオロジイー（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆＡｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｅｇｙ
）１１巻、４号、（１９１！３年）３３５〜３３８頁の
方法に従い、０内に示す符号［ＣＨＭコード（ｎｏｄｓ
）〕はコンテイナー・コーポレーション拳オプ・アメリ
カのカラー・／−一モニー ６−ｖ ニュ７ ｐｙ （
Ｃｏｓｊａ４ｓｇｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆ Ａ
ｙｎｍｒｉｃａのＣｏ１ｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎ
ｕａｌ ） ｆ用いた。
イー・ジエーーパカス（Ｈａ Ｄｅ Ｔｒａｍ鴇−
デａｎｄ Ｅ、 Ｊ、Ｂａｔｔｋｕｍ）ｉ、ジャーｆｋ
ｅ＃ブー７プライド・ミクロピオロジイー（Ｊｏｕｒｎ
ａｌ ｏｆＡｐｐｌｉｅｄ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｅｇｙ
）１１巻、４号、（１９１！３年）３３５〜３３８頁の
方法に従い、０内に示す符号［ＣＨＭコード（ｎｏｄｓ
）〕はコンテイナー・コーポレーション拳オプ・アメリ
カのカラー・／−一モニー ６−ｖ ニュ７ ｐｙ （
Ｃｏｓｊａ４ｓｇｒ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆ Ａ
ｙｎｍｒｉｃａのＣｏ１ｏｒ Ｈａｒｍｏｎｙ Ｍａｎ
ｕａｌ ） ｆ用いた。
（１） シュークロース・硝酸塩寒天培地：黄灰（怠
ｄａ〕〜灰色（２／＃）の中等度生育上に、明るい茶入
（１／＃）〜茶入（ｓ（Ａ）の気−系を着生し、溶解性
色素はみとめられない。
ｄａ〕〜灰色（２／＃）の中等度生育上に、明るい茶入
（１／＃）〜茶入（ｓ（Ａ）の気−系を着生し、溶解性
色素はみとめられない。
（２）クルコース・アスバツギン寒天培地：明るい黄Ｃ
＊’Ａｆｂ−１！ｆｈ：ｌの良好な生育上に、明るい茶
入〔ミｆａ〕〜暗い灰〔３イル〕の気博糸を７１生し、
溶解性色素はみ−とめられない。
＊’Ａｆｂ−１！ｆｈ：ｌの良好な生育上に、明るい茶
入〔ミｆａ〕〜暗い灰〔３イル〕の気博糸を７１生し、
溶解性色素はみ−とめられない。
（３） グリセリン・アスパラギン寒天培地＜ｒｓｐ檜
地−５）： 入貢（３ｇｇ）、一部間るい茶入（３／＃）の成好な生
育上ＶＣ１明るい灰１ｊ）〜明るい灰赤茶（５／＃）の
気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめられない。
地−５）： 入貢（３ｇｇ）、一部間るい茶入（３／＃）の成好な生
育上ＶＣ１明るい灰１ｊ）〜明るい灰赤茶（５／＃）の
気菌糸を着生する。溶解性色素はみとめられない。
（４） スターチ無＋ｉＡ塩が天培地＜ｒｓｐ培地−
４）：うす黄〔２ｄｈ〕〜うす黄緑［２４ｉｄａ〕の良
好な生茸上に暗い灰［３ｊＡ］の気菌糸ｋｌ生する。溶
解性色素は生成しない。
４）：うす黄〔２ｄｈ〕〜うす黄緑［２４ｉｄａ〕の良
好な生茸上に暗い灰［３ｊＡ］の気菌糸ｋｌ生する。溶
解性色素は生成しない。
（叫 チロシン寒天培地（ＩＳＰ培地−７）：明るい黄
（１７６）、ｔ＆ｔ／（明るいオリーブ基（２ｇｇ）の
良好な生育上に、明るい灰（ｄ’ｌだがやや縁がかつ友
気−系ｔ−着生する。培地は極〈備かに茶色を帯びる。
（１７６）、ｔ＆ｔ／（明るいオリーブ基（２ｇｇ）の
良好な生育上に、明るい灰（ｄ’ｌだがやや縁がかつ友
気−系ｔ−着生する。培地は極〈備かに茶色を帯びる。
＃
（６） 栄養寒天培地：。
明るい茶入（３／＃）の中等度生育上に、明るい灰〔ｄ
〕の気菌糸を着生する。俗解色素はみとめられない。
〕の気菌糸を着生する。俗解色素はみとめられない。
（７） イーストエキス・麦芽エキス寒天培地（ｒｓ
ｐ培地−２）： 白［６）の良好な生育上に、明るい茶入（８７ａ）〜茶
入（ｓｊ＆）の気１糸を着生する。溶解性色ぶはみとめ
られない。
ｐ培地−２）： 白［６）の良好な生育上に、明るい茶入（８７ａ）〜茶
入（ｓｊ＆）の気１糸を着生する。溶解性色ぶはみとめ
られない。
（８） オートミール寒天培地＜ｚｓｐ培地−３）：
暗い灰（３４ｈ）の良好な生育上に、明るい茶入ＣＢｆ
ｇＥ〜暗い灰［３ｊ４］の気厘糸を着生する。溶ｖ１王
已索は−められない。
暗い灰（３４ｈ）の良好な生育上に、明るい茶入ＣＢｆ
ｇＥ〜暗い灰［３ｊ４］の気厘糸を着生する。溶ｖ１王
已索は−められない。
（９） リンゴ酒石灰摩天培地：
明るいオリーブ基（Ｌ！ｇｓ）の中ａ！？度の生付上に
、明るい灰茶［：３７＃］の気１糸ｔ一層生し、溶解性
色素はみとめられない。
、明るい灰茶［：３７＃］の気１糸ｔ一層生し、溶解性
色素はみとめられない。
鱒 ヘプトン・イーストエキス・鉄埋天４地＜ＩＳＰ培
地−６）： うす黄（２ｄ６）の良好な生育上にあゎい白（Ｖ〕〜明
るい灰ＣｄＥの気直系’ｔｙＭ生する。
地−６）： うす黄（２ｄ６）の良好な生育上にあゎい白（Ｖ〕〜明
るい灰ＣｄＥの気直系’ｔｙＭ生する。
３） 生埋的性質
（１） 生ＩＩ漏度範囲
イーストエキス・麦芽エキス４天培地（ｒｓｐ４、＋ｌ
−２）ｉ用いてＩ Ｏ＠、 ２０”、 ２５”、 ３０
”ｅ３４°、３７°、４ Ｇ”、４５”、５０℃Ｉ）％
！ＪＩＫ”’Ｃ％ｇの結城％３７℃では殆んど元育出米
ない。４０℃以上で釦よ・Ｃ＜祐Ｍ’Ｌない、その他の
谷！一度では住肯がみとめられた。最適生Ｗム度軸畑は
２０〜３０℃と思われる。
−２）ｉ用いてＩ Ｏ＠、 ２０”、 ２５”、 ３０
”ｅ３４°、３７°、４ Ｇ”、４５”、５０℃Ｉ）％
！ＪＩＫ”’Ｃ％ｇの結城％３７℃では殆んど元育出米
ない。４０℃以上で釦よ・Ｃ＜祐Ｍ’Ｌない、その他の
谷！一度では住肯がみとめられた。最適生Ｗム度軸畑は
２０〜３０℃と思われる。
（２） グツテンの液化：液化する。
（３） スターチの加水分解二分解する。
（４） 脱脂牛乳の・礎固、ペプトン化：峡、−はし
ないが、ペプトン化する。
ないが、ペプトン化する。
（５） 硝酸塩の遺元：瀘元する。
（６） メラニン様色素の生成：
ヘプトン・イースト会鉄寒天培地（ＩＳＦ培地−６）及
びチロシン寒天培地ではメラニン様色素の生成は認めら
れなかつ友、トリプトン・イーストエキス・プロス培地
ｔｌｓＦ培地−１１）で極く僅かに茶色の色素を生産し
た。
びチロシン寒天培地ではメラニン様色素の生成は認めら
れなかつ友、トリプトン・イーストエキス・プロス培地
ｔｌｓＦ培地−１１）で極く僅かに茶色の色素を生産し
た。
４） 各種炭素源の同化性（プリドハム・ゴトリプ轢天
＠地用） （１）Ｌ−アラビノース ＋ （２）Ｄ−キシロース ＋ （８）Ｄ−グルコース ＋ （４）Ｄ−フラクトース ＋ （５） シュークロース 土（６） イノ
シトール 士（７）Ｌ−ラムノース
＋ （８） ラフィノース − （９）Ｄ−マンニトール ＋ ＋は同化する、 −は同化しない。
＠地用） （１）Ｌ−アラビノース ＋ （２）Ｄ−キシロース ＋ （８）Ｄ−グルコース ＋ （４）Ｄ−フラクトース ＋ （５） シュークロース 土（６） イノ
シトール 士（７）Ｌ−ラムノース
＋ （８） ラフィノース − （９）Ｄ−マンニトール ＋ ＋は同化する、 −は同化しない。
上記の１学的性’ｆｆｌ ｋ ４つストレプ）ｔセス・
フルボビリディスＡ９３３は、通商産業省工業技術院微
生物工業技術研究所に微工研条寄第１θ号（ＦＩ！Ｉ″
ＲＭ ＢＰ−１ｏ）として国際寄託されている。
フルボビリディスＡ９３３は、通商産業省工業技術院微
生物工業技術研究所に微工研条寄第１θ号（ＦＩ！Ｉ″
ＲＭ ＢＰ−１ｏ）として国際寄託されている。
本宅間に健うす１１述し几如さストレプトンセス晴に（
・ζするカルバペネム系五主物・道生産函の培養のため
の栄４源としては、坂、ｉ−凶の栄養源として通常使用
されるもの、例えば炭水化物、窒素源、無情Ｖふなどの
同化できる栄４源１に：１史用できる。例えば、ぶどう
楯、グリセリン、＝ｊｌ芽糖、蔗糖、糖蜜、デキストリ
ン、殿粉などの炭水化物や、大豆油、落花生油、ラード
などの油脂、脂肪類の如き炭素源；ペプトン、肉エキス
、大豆粉、綿実粉、乾燥酵母、コーンスチープリカー、
酵母エキス、脱脂乳、カゼイン、硝ｉ麦ナトリウム、４
ｆ４酸アンモニ９ム、硫酸アンモニウムなどの電累源寡
燐酸二カリウム、食塩、炭１設カルシウム、−ハマグネ
シウムなどの無ＩＡ塩が使用でき、必要により微量金桟
例えばコバルト、マンガンなどを添加することができる
。栄誉源としては、その他、本発明のアミドヒドロラー
ゼを生産するものであれば、いずれの１ぜ誉源でも１更
用でさ、公知の放線菌の培賃材料ンよいずれも；走用で
きる。ま九、加熱殺菌時及び培養中における発泡を抑え
るため、シリコン、植物油などの消剋剤金（コΣ加する
こともできる。
・ζするカルバペネム系五主物・道生産函の培養のため
の栄４源としては、坂、ｉ−凶の栄養源として通常使用
されるもの、例えば炭水化物、窒素源、無情Ｖふなどの
同化できる栄４源１に：１史用できる。例えば、ぶどう
楯、グリセリン、＝ｊｌ芽糖、蔗糖、糖蜜、デキストリ
ン、殿粉などの炭水化物や、大豆油、落花生油、ラード
などの油脂、脂肪類の如き炭素源；ペプトン、肉エキス
、大豆粉、綿実粉、乾燥酵母、コーンスチープリカー、
酵母エキス、脱脂乳、カゼイン、硝ｉ麦ナトリウム、４
ｆ４酸アンモニ９ム、硫酸アンモニウムなどの電累源寡
燐酸二カリウム、食塩、炭１設カルシウム、−ハマグネ
シウムなどの無ＩＡ塩が使用でき、必要により微量金桟
例えばコバルト、マンガンなどを添加することができる
。栄誉源としては、その他、本発明のアミドヒドロラー
ゼを生産するものであれば、いずれの１ぜ誉源でも１更
用でさ、公知の放線菌の培賃材料ンよいずれも；走用で
きる。ま九、加熱殺菌時及び培養中における発泡を抑え
るため、シリコン、植物油などの消剋剤金（コΣ加する
こともできる。
上記の如き栄養源の配合割合は臀Ｋ ？ｌｌ１１約され
るものではなく、広軸囲に区って変えることができ、１
更用する前元生産函にとって最適の栄４！源の組成校び
配合、４１Ｉ合ンよ、当業者であれば量率な小規僕実躾
により４鴫に決定することができる。
るものではなく、広軸囲に区って変えることができ、１
更用する前元生産函にとって最適の栄４！源の組成校び
配合、４１Ｉ合ンよ、当業者であれば量率な小規僕実躾
により４鴫に決定することができる。
ま友栄％培地は培養に先立ち殺菌することができ、この
殺菌の前又ｖｉ咬で、培地のｐＨ金４〜９の範囲、詩に
ｐＨ６〜８の範囲ＩＣ調節するのが有利である。
殺菌の前又ｖｉ咬で、培地のｐＨ金４〜９の範囲、詩に
ｐＨ６〜８の範囲ＩＣ調節するのが有利である。
かかる宋譬培地での前記生産菌の培′４は原則的には、
一般の放線菌による抗生物質の製造において通常使用さ
れている方法に準じて行なうことができる０通常好気的
条件下に項一するのが好適であり、通常攪拌しながら及
び／又は通気しながら行なうことができる。また、培養
方法としては一！直培養、振盪培養、通気撹拌をともな
う液内８！髪のいずれも・１′８１！用可能であるが、
７′ＩＮ、内＠髪が有利である。
一般の放線菌による抗生物質の製造において通常使用さ
れている方法に準じて行なうことができる０通常好気的
条件下に項一するのが好適であり、通常攪拌しながら及
び／又は通気しながら行なうことができる。また、培養
方法としては一！直培養、振盪培養、通気撹拌をともな
う液内８！髪のいずれも・１′８１！用可能であるが、
７′ＩＮ、内＠髪が有利である。
使用しうる培養温度は使用する生産菌株に応じて変える
ことができるが、一般に２０〜４０℃、好ましくは２５
〜３５℃の軛囲内の温度が好適である。
ことができるが、一般に２０〜４０℃、好ましくは２５
〜３５℃の軛囲内の温度が好適である。
また、培養を好適に行なうため、必要に応じて、培養中
に培誉拗のｐＨｔ−４〜９、特に６〜８の範囲に１Ｉｌ
１１１［ｌ′ｉすることができる。
に培誉拗のｐＨｔ−４〜９、特に６〜８の範囲に１Ｉｌ
１１１［ｌ′ｉすることができる。
大規模な大譬培４の場合、適宜種母培養を行ない、これ
を栄＃培地に接種し、液体培養するのが南°利である。
を栄＃培地に接種し、液体培養するのが南°利である。
また、培誉時１１ｊ１は、培地の組成や培養温度、使用
生産株等により異なるが、通常５ｏ−ｓｏ待時間荻Ｊ、
囲である。
生産株等により異なるが、通常５ｏ−ｓｏ待時間荻Ｊ、
囲である。
なお、１史用する培４条件は、使用する生産菌株の特性
に応じて、当業者であれば量率な実験により、継適宋件
ｋｄ易に決定することができる。
に応じて、当業者であれば量率な実験により、継適宋件
ｋｄ易に決定することができる。
かくして得られる培養物からの本発明の酵素の抽出、精
美は、一般の酵素の抽出、精製法に従って行なうことが
できる。
美は、一般の酵素の抽出、精製法に従って行なうことが
できる。
例えば適当な方法によ）培養物から一体を分離し友のち
、その一体を拳耗剤の存在−下ですりつぶす方法、リゾ
チーム等の浴菌酵Ａｔ用いる方法、超音波エネルギーを
適用する方法、浸透圧ショックを適用する方法等の公知
の任意の方法によ如破壊するか、ｔ−たはソデイウムコ
ール酸、トリト／Ｘ−１００のような界面活性剤、トル
エン尋の存在下で撮嫌もしくは放置することにより、本
発明の酵素ｔ−菌体外に排出させた後、その菌体処理液
をＦ１１！法、遠心分離方法などの適当な操作により処
理し、固形物１に除去するか、或いは該菌体処理液を水
、慢価液もしくは適当な溶剤で抽出することによってｌ
＃ｉ酵素液金得る。ま友通常の酵素回収法、すなわちよ
抽出液に必要により凍結乾燥法、アルコール沈殿法、ア
セトン沈殿法等を適宜遺択して実施することにより該粗
酵素液から粗酵素粉末を得ることもできる。
、その一体を拳耗剤の存在−下ですりつぶす方法、リゾ
チーム等の浴菌酵Ａｔ用いる方法、超音波エネルギーを
適用する方法、浸透圧ショックを適用する方法等の公知
の任意の方法によ如破壊するか、ｔ−たはソデイウムコ
ール酸、トリト／Ｘ−１００のような界面活性剤、トル
エン尋の存在下で撮嫌もしくは放置することにより、本
発明の酵素ｔ−菌体外に排出させた後、その菌体処理液
をＦ１１！法、遠心分離方法などの適当な操作により処
理し、固形物１に除去するか、或いは該菌体処理液を水
、慢価液もしくは適当な溶剤で抽出することによってｌ
＃ｉ酵素液金得る。ま友通常の酵素回収法、すなわちよ
抽出液に必要により凍結乾燥法、アルコール沈殿法、ア
セトン沈殿法等を適宜遺択して実施することにより該粗
酵素液から粗酵素粉末を得ることもできる。
上記粗酵素液もしくは粗酵素粉末よりさらに精製酵素標
品を得るには、例えばセファデックス龜しくはバイオゲ
ル等を用いるゲルＰ遍法、イオン交換体を用いる吸着溶
出法、ポリアクリルアンドゲル等を用いる電気泳動法
／Ｎイド党オキシアバタイ）１−用いる吸着溶出法、蔗
糖密度勾配遠心法等の沈降法、アフイニテイクロマト法
、分子ふるい嗅もしくは中窒糸ｖ！＆吟を用いる分画法
等を適宜胞択し、組み合わせて実施することにより、精
製され几酵素標品を得ることができる。
品を得るには、例えばセファデックス龜しくはバイオゲ
ル等を用いるゲルＰ遍法、イオン交換体を用いる吸着溶
出法、ポリアクリルアンドゲル等を用いる電気泳動法
／Ｎイド党オキシアバタイ）１−用いる吸着溶出法、蔗
糖密度勾配遠心法等の沈降法、アフイニテイクロマト法
、分子ふるい嗅もしくは中窒糸ｖ！＆吟を用いる分画法
等を適宜胞択し、組み合わせて実施することにより、精
製され几酵素標品を得ることができる。
また、培養時間を長くして自己消化を行なわせた揚台の
培養Ｐ液について屯、同様に処理することにより＋、元
明の酵素ｔ−得ることができろ。
培養Ｐ液について屯、同様に処理することにより＋、元
明の酵素ｔ−得ることができろ。
次に実軸ｌ１ｌＩにより本発明上さらに説明する。
実施例１
グリセリン３６ｇ、ニスサンミート〔味の素−ｄ：１１
＆５Ｉｉ、魚粉ｔ ｓ Ｉ、 ＩＣ，ｌ１ＰＯ，ａ １
１１゜ＭｇＳＯ４−’ＩＨ，Ｏａ ９１％ＣａＣ０，１
，３Ｓ Ｉ ｋ水道水に溶解し、ｐＨ全７．１ＫＰＪＩ
４整涜、全量を４６０−としたものを１ｓ１！ｊずつ２
５〇−容のエルレンマイヤーフラスコに分注し、１２０
℃で１５分間殺菌し友、培地冷却後ストレプトマイセス
・フルボビリディスＡ９３３（ＦＥＲＭ １３ｐ−１
ａ）ｔ−接種し、２８℃で６８時間撮４ｍ培祷した。培
養後遠心分陥により菌体を得、αＯＩＭリン酸カリウム
曖衝液（ｐＨ７゜１）で２度洗浄後、同緩衝液に全ｍｔ
ｏｏｙ程度になるように−濁し友、これを超音波処理（
２０ＫＨｚ、ｇｏ＊、５分間）によって菌体を破砕し、
遠心分阿１餅で固形＊１除き、細胞抽出液１１０＋Ｊｔ
−得た。これに粉末状の（ＮＨ４）ＩＳＯ４ｔ−加え、
６０％廟和で沈殿した蛋白画分を少量の（ＬＯＩＡｆリ
ン酸カリクム緩衝液（ｐ＃７．１）Ｋ＃！解し、同緩衝
液で十分透析後、予め同緩衝液で平衡化したＤＩＩＡｋ
−セファセル（ファルマシマア社製）カラム（！Ｘ４０
ｆｉ）に吸着させた。
＆５Ｉｉ、魚粉ｔ ｓ Ｉ、 ＩＣ，ｌ１ＰＯ，ａ １
１１゜ＭｇＳＯ４−’ＩＨ，Ｏａ ９１％ＣａＣ０，１
，３Ｓ Ｉ ｋ水道水に溶解し、ｐＨ全７．１ＫＰＪＩ
４整涜、全量を４６０−としたものを１ｓ１！ｊずつ２
５〇−容のエルレンマイヤーフラスコに分注し、１２０
℃で１５分間殺菌し友、培地冷却後ストレプトマイセス
・フルボビリディスＡ９３３（ＦＥＲＭ １３ｐ−１
ａ）ｔ−接種し、２８℃で６８時間撮４ｍ培祷した。培
養後遠心分陥により菌体を得、αＯＩＭリン酸カリウム
曖衝液（ｐＨ７゜１）で２度洗浄後、同緩衝液に全ｍｔ
ｏｏｙ程度になるように−濁し友、これを超音波処理（
２０ＫＨｚ、ｇｏ＊、５分間）によって菌体を破砕し、
遠心分阿１餅で固形＊１除き、細胞抽出液１１０＋Ｊｔ
−得た。これに粉末状の（ＮＨ４）ＩＳＯ４ｔ−加え、
６０％廟和で沈殿した蛋白画分を少量の（ＬＯＩＡｆリ
ン酸カリクム緩衝液（ｐ＃７．１）Ｋ＃！解し、同緩衝
液で十分透析後、予め同緩衝液で平衡化したＤＩＩＡｋ
−セファセル（ファルマシマア社製）カラム（！Ｘ４０
ｆｉ）に吸着させた。
仁のカラムを同緩衝液で十分洗浄後、同緩衝液に溶解し
たＮａＣ１αＩＭ〜＆４Ｍの濃度勾配にて溶出し活性区
分ＲｏｏＩＩＪを得た。これをコロジオンバッグ！５（
ザルトリウスメンブランフィルタ−社製）で濃縮し、（
ＬＯＩＭリン酸カリクム緩端液（ｐＨ７，１）で透析後
、予め同緩衝液で平衡させｆ＜ＤＥＡＥ−セファデック
ス（ファルマシア社製）カラム（１，５Ｘ１５傷に吸着
させた。カラムを同緩衝液で洗浄後、α２８ＭＮａＣ１
ｔ含む同４ａ液で浴出し活性区分６１１１Ｊｔ−得た。
たＮａＣ１αＩＭ〜＆４Ｍの濃度勾配にて溶出し活性区
分ＲｏｏＩＩＪを得た。これをコロジオンバッグ！５（
ザルトリウスメンブランフィルタ−社製）で濃縮し、（
ＬＯＩＭリン酸カリクム緩端液（ｐＨ７，１）で透析後
、予め同緩衝液で平衡させｆ＜ＤＥＡＥ−セファデック
ス（ファルマシア社製）カラム（１，５Ｘ１５傷に吸着
させた。カラムを同緩衝液で洗浄後、α２８ＭＮａＣ１
ｔ含む同４ａ液で浴出し活性区分６１１１Ｊｔ−得た。
この活性区分をコロジオンバッグ２Ｂで濃縮し、αＯＩ
Ｍリン酸カリクム緩衝液で透析説、アンフオライン＜ｐ
Ｈ４〜Ｉｔ−用い、粒状ポリアクリルア建ドゲルを支持
体としてプレパラテイプな等電点電気泳動【行った。活
性区分を集め、予めａＯ１Ｍリン酸カリ９ム緩衝液（ｐ
＃７．１）で平衡化しであるセファデックスＧ−１５０
（ファルマシア社製）カラム（１，９Ｘ６（）ｃｓ）で
ゲ＃−遍を行い％活性区分をコロジオンバッグ２ｓで一
縮後、再びセファデックスＧ−１５０力？Ａ（１，９Ｘ
６０ｍ）でゲルＦ遇を行つ友、この活性区分１５ＩＩ７
全コロジオンバツグ２５で濃縮し、本発明の酵素標品１
．ｓ−（蛋白１ｉ２７０μ９）を得た。
Ｍリン酸カリクム緩衝液で透析説、アンフオライン＜ｐ
Ｈ４〜Ｉｔ−用い、粒状ポリアクリルア建ドゲルを支持
体としてプレパラテイプな等電点電気泳動【行った。活
性区分を集め、予めａＯ１Ｍリン酸カリ９ム緩衝液（ｐ
＃７．１）で平衡化しであるセファデックスＧ−１５０
（ファルマシア社製）カラム（１，９Ｘ６（）ｃｓ）で
ゲ＃−遍を行い％活性区分をコロジオンバッグ２ｓで一
縮後、再びセファデックスＧ−１５０力？Ａ（１，９Ｘ
６０ｍ）でゲルＦ遇を行つ友、この活性区分１５ＩＩ７
全コロジオンバツグ２５で濃縮し、本発明の酵素標品１
．ｓ−（蛋白１ｉ２７０μ９）を得た。
本酵素標品６ｐｂａａのディスクゲル電気泳動を行い、
泳動後ゲルをクマシーブリリアントプル−Ｒで染色して
蛋白の純度を検定し友、ブロモフェノールブルーを指標
とした相対、移動度（ＲｍＢＰＢ＞で表わした場合、本
酵素標品はＲ惰ＢＰＢ−α６２であり、その位置に明瞭
な染色帯が観察され、それ以外では””ＢＰＢ−０，３
３の位１ξご〈微歇の染色帯が観察され友に過ぎなかっ
た。これらの結果から、本酵素標品は蛋白純度として１
５％以上であると推定される。
泳動後ゲルをクマシーブリリアントプル−Ｒで染色して
蛋白の純度を検定し友、ブロモフェノールブルーを指標
とした相対、移動度（ＲｍＢＰＢ＞で表わした場合、本
酵素標品はＲ惰ＢＰＢ−α６２であり、その位置に明瞭
な染色帯が観察され、それ以外では””ＢＰＢ−０，３
３の位１ξご〈微歇の染色帯が観察され友に過ぎなかっ
た。これらの結果から、本酵素標品は蛋白純度として１
５％以上であると推定される。
かくして得られた酵素標品の特性を示せば次のとおりで
ある。
ある。
＋１）作用
■ 脱パントチイニル化＊１ｆ：有する。すなわち、下
記式（層）で示される化合物からバントテイニ □ル
ｉｉを離脱させるｕＱ力を有する。
記式（層）で示される化合物からバントテイニ □ル
ｉｉを離脱させるｕＱ力を有する。
（纏）
＆
（７ｉ！ ＠ −Ｈ＊ ＯＨ又ＦｉＯ８Ｏ，Ｈ）本反応
の具体例は後記試験例ＡＫ示す。
の具体例は後記試験例ＡＫ示す。
＠ Ｌ、アシルアンノ酸の脱アシル化能を示す。
（Ｌ） ＜Ｌ＞
（Ｒ−ｖｆＩＡ残１１ｓ ＨＲ’ ＣＯ＝ ７ シル基
）ただし、Ｄ−アシルアミノ＠ＶＣ対しては実質的に作
用しない。
）ただし、Ｄ−アシルアミノ＠ＶＣ対しては実質的に作
用しない。
θ アシル−ＣｏＡからのアシル転移または交換能を有
する。
する。
反応例１
ｉＲ’ＣＯ−アシル基ＩＲｔ ＝Ｉｉ、ＯＨ，０８０β
又はＣＢ、） 反応例２ ＋パントテン酸 十 ＣｏＡ （Ｒ，−Ｈ，ＯＨ又１ｄ０８０．ＨＨＲ’Ｃ０−７シル
）反応例３ ０ＯＩｉ ０ＯＨ （ＲＩＣＯ−アシル基） これら反応の具体例は後記試験ｆＩＢ及びＣに示す。
又はＣＢ、） 反応例２ ＋パントテン酸 十 ＣｏＡ （Ｒ，−Ｈ，ＯＨ又１ｄ０８０．ＨＨＲ’Ｃ０−７シル
）反応例３ ０ＯＩｉ ０ＯＨ （ＲＩＣＯ−アシル基） これら反応の具体例は後記試験ｆＩＢ及びＣに示す。
（２）基質特異性
上記（１）に示す作用のうち、［相］のＮ−アジルーア
（）酸に対する基質特異性は下記第１表の通りでおる。
（）酸に対する基質特異性は下記第１表の通りでおる。
なお、第１表中の相対活性はＮ−クロロアセチル−Ｌ−
フェニルアラニンの活性ｔ−１００とした時の活性比で
示す。
フェニルアラニンの活性ｔ−１００とした時の活性比で
示す。
第 １ 表
（３）至適ｐＨ及び安定ｐｌｉ範囲
至適ｐＨは、後記（４）の力価渕定法に示す標準的換え
て力価を測定し、それから相対活性を算出した・ 酢＃Ｒ曖衝液（ｐＨ５〜６）、 ＰＩＰＥＲ緩衝液＜ｐｌｉ６〜８）。
て力価を測定し、それから相対活性を算出した・ 酢＃Ｒ曖衝液（ｐＨ５〜６）、 ＰＩＰＥＲ緩衝液＜ｐｌｉ６〜８）。
ベロナール援傭液（ｐＨ８〜９．’５）＊その結果は第
１図に示すとおりであり、至適ｐＢは、７〜７．５でめ
った。
１図に示すとおりであり、至適ｐＢは、７〜７．５でめ
った。
安定ｐＨＦｉ酵素を各ｐＨの４１１１１４ｉ液（上記と
同じ）中で６℃、１５時間放置後、標準的測定条件下で
力価を測定し、それから残存相対活性（％＞ｔＸ出した
。その結果を第２図に示す。第２図から明らかなように
安’ｄ９Ｂ範囲は６〜８でめった。
同じ）中で６℃、１５時間放置後、標準的測定条件下で
力価を測定し、それから残存相対活性（％＞ｔＸ出した
。その結果を第２図に示す。第２図から明らかなように
安’ｄ９Ｂ範囲は６〜８でめった。
（４） 力価の一１定法
０．２Ｍ、ピペラジン−Ｎ ｙ ｔ’Ｊ’ｌビス（ｆｌ
−ｘ ｐ ンスル、フオン酸）ＰＩＰＥＳ緩備液（ｐ
Ｈ７，３）１０ｊｊ、！：１００惰ＭＮ−クロロアセチ
ル−Ｌ−７エ＝ル７ラニ７ （Ｈａ ＯＨでｐＨ６〜７
に調整）１０ｐｌとｔ−蒸貿水で４０ｐｊＫｌ、、これ
に酵素液（３０〜５０７１１７ｄ） １０７１１を加え
、３マ℃で１５分間反応させた後、ｓＯ％酢酸５ｏｐｉ
ｋ）ＩＱえて酵素反応を停止させる。この反応液中の基
質より１離したＬ−ｙエエルアラニン量を、Ｙ−醜−Ｃ
ｏｏｋｉｎｇのニンヒドリン比色法ｉＥ、Ｗ。
−ｘ ｐ ンスル、フオン酸）ＰＩＰＥＳ緩備液（ｐ
Ｈ７，３）１０ｊｊ、！：１００惰ＭＮ−クロロアセチ
ル−Ｌ−７エ＝ル７ラニ７ （Ｈａ ＯＨでｐＨ６〜７
に調整）１０ｐｌとｔ−蒸貿水で４０ｐｊＫｌ、、これ
に酵素液（３０〜５０７１１７ｄ） １０７１１を加え
、３マ℃で１５分間反応させた後、ｓＯ％酢酸５ｏｐｉ
ｋ）ＩＱえて酵素反応を停止させる。この反応液中の基
質より１離したＬ−ｙエエルアラニン量を、Ｙ−醜−Ｃ
ｏｏｋｉｎｇのニンヒドリン比色法ｉＥ、Ｗ。
Ｙｔｒｒｗｎ ＆ ＆Ｃ１Ｃｏｃｋｉｎｇ： Ａｎａｌ
ｙｓｅ、第８０巻。
ｙｓｅ、第８０巻。
第２０９頁、１９５１５年）によるか、父は日立８３５
−５０型アミノ酸自動分析↑戊によ如定童した。
−５０型アミノ酸自動分析↑戊によ如定童した。
本ｆ建素標品の上古己方法で測定したＬ−フェニルアラ
ニンの生産蹟は酵素蛋白１ｊ９幽り１１．９ ｐｔｎｏ
ｌａａ／’ＩＬＬ％％でめった。なお、−白の定量はＷ
ｈＮαに一デーＧｒａｎａｓ ノＵ Ｖ法ｉＪ、ＲｏＷ
ｈｉｔａｋａｆｈＰ。
ニンの生産蹟は酵素蛋白１ｊ９幽り１１．９ ｐｔｎｏ
ｌａａ／’ＩＬＬ％％でめった。なお、−白の定量はＷ
ｈＮαに一デーＧｒａｎａｓ ノＵ Ｖ法ｉＪ、ＲｏＷ
ｈｉｔａｋａｆｈＰ。
Ｅ、 Ｇｒａｎｓｍ： Ａｎａｌ、 Ｂｉｏ−ル
’−ａ ｍ １ ０ ９ 巻 、第１ｓｓｘ、ｔｓ
ｇｏ年）で測定した。
’−ａ ｍ １ ０ ９ 巻 、第１ｓｓｘ、ｔｓ
ｇｏ年）で測定した。
（５） 作用・！１温の範囲
上記（４）に示す標準的測ボ条件下で、作用感度を種々
変更して力１ｉ＋ｆｉ ｆ、測定し、それから相対活性
（至）を算出し、相対活性と作用ｔＡＡ ［との関係を
グラフルプロットして作用適＋２！を稠べた＠；ｉ’４
３図に示すごとく、作用適温の範囲は２５℃〜４５℃で
あった・ （６） Ｆ＃’＊ｖＡｍなどによる失活凍件安定ｐＨ
範囲のところで示し友ごとく（第２図）、ｐＨ５では６
℃、１５時間で７５％失活し、ｐＨａＳでは同ｍ変、同
時間で６０％失活した。また、温度による失活は本酵素
をｐ Ｈ７，３のＰ Ｉ ＦＥ＆緩衝液中、各感度で１
５時…Ｊａｍ潰、直ちに冷却してその力価’を測定し、
残存相対活性ｃ％）を求めることＫより祠べ友。
変更して力１ｉ＋ｆｉ ｆ、測定し、それから相対活性
（至）を算出し、相対活性と作用ｔＡＡ ［との関係を
グラフルプロットして作用適＋２！を稠べた＠；ｉ’４
３図に示すごとく、作用適温の範囲は２５℃〜４５℃で
あった・ （６） Ｆ＃’＊ｖＡｍなどによる失活凍件安定ｐＨ
範囲のところで示し友ごとく（第２図）、ｐＨ５では６
℃、１５時間で７５％失活し、ｐＨａＳでは同ｍ変、同
時間で６０％失活した。また、温度による失活は本酵素
をｐ Ｈ７，３のＰ Ｉ ＦＥ＆緩衝液中、各感度で１
５時…Ｊａｍ潰、直ちに冷却してその力価’を測定し、
残存相対活性ｃ％）を求めることＫより祠べ友。
その結果１１図に示す、４５４図から明らかなように本
酵素は５０℃では５０％失活し、６６℃でＦｉ、完全に
失活した。
酵素は５０℃では５０％失活し、６６℃でＦｉ、完全に
失活した。
（７） 阻害、活性化及び安定化
各橋金Ｉイオン、中レート剤、−８Ｒ阻害剤などの薬剤
全科感度が下記第２表に示すようになるまで反応液に加
え７を時、その薬剤が本酵素の酵素活性に及ぼす影＃を
ｄ１表Ｋまとめて示す。
全科感度が下記第２表に示すようになるまで反応液に加
え７を時、その薬剤が本酵素の酵素活性に及ぼす影＃を
ｄ１表Ｋまとめて示す。
なお、第！！衣中の１目対活性は系剤無添加時の活性に
対する薬剤小ｉｔａ時の活性比で示す。
対する薬剤小ｉｔａ時の活性比で示す。
既知の多くのアシラーゼ（Ｎ−アジルア々）酸ア々ドヒ
ドロラーゼ）はＣＯ″＋＋イオンの添カロ（一度０．５
〜１０ｍＡｆ）［よって活性化又はをだ化されているが
本酵素は逆１ｃｌｆｉ害を受けている点が特４的で、、
ｂる。
ドロラーゼ）はＣＯ″＋＋イオンの添カロ（一度０．５
〜１０ｍＡｆ）［よって活性化又はをだ化されているが
本酵素は逆１ｃｌｆｉ害を受けている点が特４的で、、
ｂる。
（８） 分子量
七７アデツクスＧ−１！５ｅｔ−用いたゲルー過法によ
り求めた本、＃素の分子量は約１０万である。
り求めた本、＃素の分子量は約１０万である。
（９） 等電点
アンフオライン（ｐＢ３〜五〇）ｔ−用いたポリアクリ
ルアミドゲル等電点電気泳動によ抄測定した結果、本酵
素の等電点Ｆｉｐ Ｉ ｘ Ｎ １である。
ルアミドゲル等電点電気泳動によ抄測定した結果、本酵
素の等電点Ｆｉｐ Ｉ ｘ Ｎ １である。
傾 ディスクゲル電気泳動
ｐｌｉ＆３のディスクゲル電気泳動での本酵素の移動度
は、ブロモフェノールブルーを指標として、相対へ多Ｊ
Ｅｂ度Ｒ？ＩｔＢＰＢ−αＳ２である。
は、ブロモフェノールブルーを指標として、相対へ多Ｊ
Ｅｂ度Ｒ？ＩｔＢＰＢ−αＳ２である。
試験例Ａ
０．２Ｍリンｐカリウム＊１１１ｒ液（ＰＨ７，４）１
０ｐｉ、抗−Ｅ＠繊ｐｓ−ｓ溶液（６００Ｆ＃７１１）
又は抗生吻質０Ａ−６１＊＊Ａ石液（５００μＩ／ｄ）
２０１１１及び実施例１で得られたー累液１０１１１か
らノＩにる反応液５０ＰＩ會３丁℃で３時間反応させた
。
０ｐｉ、抗−Ｅ＠繊ｐｓ−ｓ溶液（６００Ｆ＃７１１）
又は抗生吻質０Ａ−６１＊＊Ａ石液（５００μＩ／ｄ）
２０１１１及び実施例１で得られたー累液１０１１１か
らノＩにる反応液５０ＰＩ會３丁℃で３時間反応させた
。
他方、コント四−ルとして上記組成の反応液から酵素液
ｔ−除いたものも同時に反応させ友。
ｔ−除いたものも同時に反応させ友。
各反１６液３μＩｆワットマンムＩＦ紙にスポットし、
ｐＨ８，６のベロナール４淘液でｔｓｏｏｙ／３Ｇｃｍ
、５０分間′鑞気泳動を行った。泳７Ｊ後コマモナス・
テリゲナＢ−９９６菌を被検菌とするバイオオートダラ
フイーで生成物を検定し友、その粘液、抗生重質Ｐｇ−
ｓを基質とし友反応液は全て陽極側ａ５ｍの所にそれぞ
れ同じ大きさの抗菌スポットが認められるのみであった
。これは同時に泳動した抗生物質ＰＳ−ｓの標準品と同
じ位置である。このことから、本酵素は抗生物質ＰＳ−
５に対し何ら変化を与えていないことがわかる。
ｐＨ８，６のベロナール４淘液でｔｓｏｏｙ／３Ｇｃｍ
、５０分間′鑞気泳動を行った。泳７Ｊ後コマモナス・
テリゲナＢ−９９６菌を被検菌とするバイオオートダラ
フイーで生成物を検定し友、その粘液、抗生重質Ｐｇ−
ｓを基質とし友反応液は全て陽極側ａ５ｍの所にそれぞ
れ同じ大きさの抗菌スポットが認められるのみであった
。これは同時に泳動した抗生物質ＰＳ−ｓの標準品と同
じ位置である。このことから、本酵素は抗生物質ＰＳ−
５に対し何ら変化を与えていないことがわかる。
一方、抗生物質０，４−６１２９Ａを基質とした反応液
の場合、酵素液を加えないものは陽極側４．４儂の（Ｉ
Ｚ置にのみ、また１・４索液を権υｌし九本のは陰極側
１１の所にのみ抗菌スポットが認められた。これらは同
時に泳動した抗生＃ｌＪ實０Ａ−６１２９Ａ及びＮ−説
７ セｆｋ抗生＠質ｐｇ−ｓ（以下抗生物／１７ｔＮ
Ｓ−５という）の標準品とそれぞれ同じ位置である。更
Ｋｉｖ反応液をパントテン酸要求株であるサツカロマイ
セス・カールスベルゲンシスＡＴＣＣ９０８０ｔ−被検
菌とするバイオアッセイで倹ボした所８μＩｉ／Ｍｌの
パントテン酸が認められた。これらの結果から、本４索
は抗生、１勿質０Ａ−６１２９Ａｔ−完全に脱バントチ
イニル化し、抗生′＃！！！ＪｉＮＳ−５Ｋ変換させた
ことがわかる拳 試験例Ｂ ０．２Ｍリン酸カリｔＡ＠ｇ１液（ｐ＃７．４）１４１
μノ、抗生勿買ｏＡ−ｓｌ＊ｅＡ浴液（５００ｓｌ／ｄ
） １ｏｐｌ、アシｓｐ−ＣｍＡ （５ｐ ｍｏｌｅｓ
／ｒｔｒｌ） ｌ Ｏｐｌ及び実施例１で侍られ本酵素
１０ＩＩＩを含む反応液５０μノ１ｒ３７℃で３時間反
応させ友後、試験列Ａと同様にして高電圧Ｐ紙電気泳拗
１ＨＶＰＦｊｐで生成物を検定した。
の場合、酵素液を加えないものは陽極側４．４儂の（Ｉ
Ｚ置にのみ、また１・４索液を権υｌし九本のは陰極側
１１の所にのみ抗菌スポットが認められた。これらは同
時に泳動した抗生＃ｌＪ實０Ａ−６１２９Ａ及びＮ−説
７ セｆｋ抗生＠質ｐｇ−ｓ（以下抗生物／１７ｔＮ
Ｓ−５という）の標準品とそれぞれ同じ位置である。更
Ｋｉｖ反応液をパントテン酸要求株であるサツカロマイ
セス・カールスベルゲンシスＡＴＣＣ９０８０ｔ−被検
菌とするバイオアッセイで倹ボした所８μＩｉ／Ｍｌの
パントテン酸が認められた。これらの結果から、本４索
は抗生、１勿質０Ａ−６１２９Ａｔ−完全に脱バントチ
イニル化し、抗生′＃！！！ＪｉＮＳ−５Ｋ変換させた
ことがわかる拳 試験例Ｂ ０．２Ｍリン酸カリｔＡ＠ｇ１液（ｐ＃７．４）１４１
μノ、抗生勿買ｏＡ−ｓｌ＊ｅＡ浴液（５００ｓｌ／ｄ
） １ｏｐｌ、アシｓｐ−ＣｍＡ （５ｐ ｍｏｌｅｓ
／ｒｔｒｌ） ｌ Ｏｐｌ及び実施例１で侍られ本酵素
１０ＩＩＩを含む反応液５０μノ１ｒ３７℃で３時間反
応させ友後、試験列Ａと同様にして高電圧Ｐ紙電気泳拗
１ＨＶＰＦｊｐで生成物を検定した。
他方、コント四−ルとして上記組成の反応液からアシル
−ＣｏＡｆ除いたもの及び酵素液を除い友もの４同時に
反応させた。なお、ここで用いたアシル−ＣＯＡはアセ
チル−Ｃｏ１％外−プロピオニル−Ｃｏ１１爲−プチリ
ル−ＣｏＡ、グルタリル−ＣｏＡの４種である。
−ＣｏＡｆ除いたもの及び酵素液を除い友もの４同時に
反応させた。なお、ここで用いたアシル−ＣＯＡはアセ
チル−Ｃｏ１％外−プロピオニル−Ｃｏ１１爲−プチリ
ル−ＣｏＡ、グルタリル−ＣｏＡの４種である。
抗菌スポットは、酵素液を加えない反応液では陽７１）
ｌ ４ Ｉｓ ｃａｒ（Ｄ位置（抗生物１ｉ（ＯＡ−６
１２ｅＡ）にのみ、アシル−ＣｏＡを加えない反応液で
は陰極側１１の位置（抗生物質Ｎ５−ｓ）にのみ認めた
。他方、アシル−ＣｏＡ昧加区では全て抗生物質Ｎ５−
ｓの位置と共にＮ−アシル抗生物質Ｎ５−５に相当する
位置にも抗菌スポットが認められた。即ち、アセチル−
ＣｏＡ、ｎ−プロピオニル−〇・Ａ又はｎ−ブチリル−
ＣｏＡ添加では陽極側６１ｃｍ（Ｄ位＃Ｂ５−５の位置
１：、グルタリル−〇〇Ａ添加では陽極側１１．１ｃｓ
＋の位置Ｋｆ／ｉＬ。
ｌ ４ Ｉｓ ｃａｒ（Ｄ位置（抗生物１ｉ（ＯＡ−６
１２ｅＡ）にのみ、アシル−ＣｏＡを加えない反応液で
は陰極側１１の位置（抗生物質Ｎ５−ｓ）にのみ認めた
。他方、アシル−ＣｏＡ昧加区では全て抗生物質Ｎ５−
ｓの位置と共にＮ−アシル抗生物質Ｎ５−５に相当する
位置にも抗菌スポットが認められた。即ち、アセチル−
ＣｏＡ、ｎ−プロピオニル−〇・Ａ又はｎ−ブチリル−
ＣｏＡ添加では陽極側６１ｃｍ（Ｄ位＃Ｂ５−５の位置
１：、グルタリル−〇〇Ａ添加では陽極側１１．１ｃｓ
＋の位置Ｋｆ／ｉＬ。
い抗菌スポットが認められ友、これらの結果から、本酵
素はアシル−Ｃ・Ａの存在下そ抗生物＠０Ａ−６１２９
１のバントティ具ル基ｔ−該当するアシル−ＣｏＡのア
シル基に変換することがわかる。
素はアシル−Ｃ・Ａの存在下そ抗生物＠０Ａ−６１２９
１のバントティ具ル基ｔ−該当するアシル−ＣｏＡのア
シル基に変換することがわかる。
試験例Ｃ
０，２Ｍリン酸カリウム媛衝液（ｐＨ’１．４ ） ｌ
Ｏμｌ、６−アミノペニシラン酸・（ｓ−ＡＰＡ）＃
！液＜５００Ｐｌｉ／Ｍｌ） ｌＯＰノ、アシル−ＣＯ
Ａ（５ｐｍｏＪｇａ／ｄ）１！０ＩＩＩ及び夾施・Ｍｌ
で得られた酵系液１Ｏｐｊを３丁℃で３時間反応させ、
実施例２と１０」様にしてＩＩ Ｖ Ａ７ Ｆで生成Ｖ
ＩＢを検定し次。但し、ＨＶＰＥの侵爾液は昨ｒＩｌ緩
衝液（ｐＨ４５）ｉｃ＆えて行つ友、また、用いたアシ
ル−ＵｏＡはアセチル−ＣｅＡ及びグルタリル−〇ｏＡ
（／Ｊ ｇ鴇であり、コントロールとして上目己組成の
反応液から：？ｌＩｉ系液又はアシル−ＣｏＡｔ−除い
たものも同時に反応させた。
Ｏμｌ、６−アミノペニシラン酸・（ｓ−ＡＰＡ）＃
！液＜５００Ｐｌｉ／Ｍｌ） ｌＯＰノ、アシル−ＣＯ
Ａ（５ｐｍｏＪｇａ／ｄ）１！０ＩＩＩ及び夾施・Ｍｌ
で得られた酵系液１Ｏｐｊを３丁℃で３時間反応させ、
実施例２と１０」様にしてＩＩ Ｖ Ａ７ Ｆで生成Ｖ
ＩＢを検定し次。但し、ＨＶＰＥの侵爾液は昨ｒＩｌ緩
衝液（ｐＨ４５）ｉｃ＆えて行つ友、また、用いたアシ
ル−ＵｏＡはアセチル−ＣｅＡ及びグルタリル−〇ｏＡ
（／Ｊ ｇ鴇であり、コントロールとして上目己組成の
反応液から：？ｌＩｉ系液又はアシル−ＣｏＡｔ−除い
たものも同時に反応させた。
コントロールの２個の反応液はいずれも陽憾側０、 ？
ｃｘノＱＷ （６−Ａ Ｐ Ａｃｒ＞（４＋ｉ ）
ＶＣのみ”Ａｍスポットが認めら７１友が、アセチル−
ＣｏＡ添刀口区では陽燻１４ｄ Ｏ，７ｆｉと５．３Ｃ
轟の所に、グルタリル−ＣｏＡ伯ｉ刀口区では１４他ｖ
Ａｙ ０．７ ｃｍとａ２儂の所に」九浦スポットが、
はめられた、これらのｍｌ蓑から、本酵素とアシル−Ｃ
ｏＡにより６−ＡＰＡ、よそれぞＪし対応ｒる゛アシル
ー＠−ＡＰＡに変換されたことがわかる。
ｃｘノＱＷ （６−Ａ Ｐ Ａｃｒ＞（４＋ｉ ）
ＶＣのみ”Ａｍスポットが認めら７１友が、アセチル−
ＣｏＡ添刀口区では陽燻１４ｄ Ｏ，７ｆｉと５．３Ｃ
轟の所に、グルタリル−ＣｏＡ伯ｉ刀口区では１４他ｖ
Ａｙ ０．７ ｃｍとａ２儂の所に」九浦スポットが、
はめられた、これらのｍｌ蓑から、本酵素とアシル−Ｃ
ｏＡにより６−ＡＰＡ、よそれぞＪし対応ｒる゛アシル
ー＠−ＡＰＡに変換されたことがわかる。
夫施丙２
グルコースｚｓｙ、コーンステイーフリカー１９、ファ
ルマメディア（トレーダーズオイルミル社、１）ｏ、ｓ
ｙ、酵母エキス０．５．９及びＵａＣＯ＠０、３ ＩＩ
ｉ水道水１００ ｗＪＩｌｃｆｊＤｉ４ Ｌ、ｐＨｆ’
１．ＯＩ／ＣｔｊｌｌｌＥし友鎌、５０．５ｄ）ｌ”り
ｉ暴ｏｄｄエルレンマイヤーフラスコに分注し％ １！
！０℃１５分間殺菌した。培地冷却後、ストレプトきセ
ス・カトレヤＮＲＲＬ８０５マを接糧し、１１８℃で９
０時間振盪培養した。培養後、遠心分廂により菌体を得
、実施例１と同様の操作で１１Ａ胞抽出液２０１１ｊｔ
−得、ｍ＜生成確認のため以下の反応に用いた。
ルマメディア（トレーダーズオイルミル社、１）ｏ、ｓ
ｙ、酵母エキス０．５．９及びＵａＣＯ＠０、３ ＩＩ
ｉ水道水１００ ｗＪＩｌｃｆｊＤｉ４ Ｌ、ｐＨｆ’
１．ＯＩ／ＣｔｊｌｌｌＥし友鎌、５０．５ｄ）ｌ”り
ｉ暴ｏｄｄエルレンマイヤーフラスコに分注し％ １！
！０℃１５分間殺菌した。培地冷却後、ストレプトきセ
ス・カトレヤＮＲＲＬ８０５マを接糧し、１１８℃で９
０時間振盪培養した。培養後、遠心分廂により菌体を得
、実施例１と同様の操作で１１Ａ胞抽出液２０１１ｊｔ
−得、ｍ＜生成確認のため以下の反応に用いた。
０．２Ｍリンを貨カリレム媛備液（ｐ＃７．４）１０μ
ノ、抗生ｑｌＦＩＰＳ−５ｆｄ液（ｓｏａｐＩＩ／−又
はｊう℃生物−＠ＯＡ−’６１２９Ａ溶液（５００μＩ
／−）ｌＯμ１１アシル−ＣｏＡｉＳ声惰ｏ１ａａ／ｍ
／）ｌｏ声！及び上記細真抽出液２０Ｐ１を３１℃で４
時１ＩＪ１１ｙＬ応させた後、試験例Ａと同様にしてＨ
ＶＰＥで・土酸・吻を検定し友・ コントロ、−ルとして上記組成の反応液から？＠鴫抽出
液又はアシル−ＣｏＡｔ−味いたものを同時に反応させ
た０表お、アシル−Ｃ＠Ａとしてはアセチル−ＣｏＡ及
びｎ−プロピオニル−ＣｔｓＡの２種を用いた。
ノ、抗生ｑｌＦＩＰＳ−５ｆｄ液（ｓｏａｐＩＩ／−又
はｊう℃生物−＠ＯＡ−’６１２９Ａ溶液（５００μＩ
／−）ｌＯμ１１アシル−ＣｏＡｉＳ声惰ｏ１ａａ／ｍ
／）ｌｏ声！及び上記細真抽出液２０Ｐ１を３１℃で４
時１ＩＪ１１ｙＬ応させた後、試験例Ａと同様にしてＨ
ＶＰＥで・土酸・吻を検定し友・ コントロ、−ルとして上記組成の反応液から？＠鴫抽出
液又はアシル−ＣｏＡｔ−味いたものを同時に反応させ
た０表お、アシル−Ｃ＠Ａとしてはアセチル−ＣｏＡ及
びｎ−プロピオニル−ＣｔｓＡの２種を用いた。
抗生物′ＨＰＳ−ｓを基質とした場合には、全て１ｌ１
１慣似ａ８傷の位置（抗生物質ＰＳ−ｓの位ｔｉｔ）の
みにそれぞれ同じ大きさの抗菌スポットが認められ九に
、Ｘ値ぎず、上記細胞抽出液及びアシル−ＣｏＡの添加
によって何ら変化を受けない、すなわち上記細胞抽出液
は抗生物質ｐｓ−ｓに対して説アシル化反応及びアシル
−ＣｏＡからのアシル転移又は交換反応を行なわないこ
とがわかる拳一方、抗生ｇ＠ＯＡ −６１２ｓ Ａｋ：
基ｔＭとした・ｉ汗、上１１１；の網側抽出液を除いた
ものは陽極側４．５ｃｓ＋ｈノし生物質０Ａ−６１２９
Ａの位置）に、アシル−ＣｏＡｔ−除いたものは限億側
１．１ ｃｍ （抗生Ｘ１質Ｎ５−ｓの位置）に、アシ
ル−ＣｏＡを加えたものは陽極１ＩｌｌＪ ａ ８傷（
抗生物質Ｐｇ−ｒｓの位＋Ａ’ ） ＋’ζ・それぞれ
琳独の抗菌スポットが昭められ友。
１慣似ａ８傷の位置（抗生物質ＰＳ−ｓの位ｔｉｔ）の
みにそれぞれ同じ大きさの抗菌スポットが認められ九に
、Ｘ値ぎず、上記細胞抽出液及びアシル−ＣｏＡの添加
によって何ら変化を受けない、すなわち上記細胞抽出液
は抗生物質ｐｓ−ｓに対して説アシル化反応及びアシル
−ＣｏＡからのアシル転移又は交換反応を行なわないこ
とがわかる拳一方、抗生ｇ＠ＯＡ −６１２ｓ Ａｋ：
基ｔＭとした・ｉ汗、上１１１；の網側抽出液を除いた
ものは陽極側４．５ｃｓ＋ｈノし生物質０Ａ−６１２９
Ａの位置）に、アシル−ＣｏＡｔ−除いたものは限億側
１．１ ｃｍ （抗生Ｘ１質Ｎ５−ｓの位置）に、アシ
ル−ＣｏＡを加えたものは陽極１ＩｌｌＪ ａ ８傷（
抗生物質Ｐｇ−ｒｓの位＋Ａ’ ） ＋’ζ・それぞれ
琳独の抗菌スポットが昭められ友。
これらの結果から、上記の細胞抽出液の硝加により、仇
生切質ＯＡ−６１雪書Ａ−＋抗生物質Ｎ５−５の脱バン
トチイニル化反応が生じ、更にアシル−Ｃ４１ＡのＦｒ
Ｓ ／７１１ Ｋより抗生物質□Ａ−１１１１１１１→
抗生物質ＵＳ−Ｓ→Ｎ−アシル抗生物質Ｎ５−５の脱バ
ントチイニル化及びＮ−アシル転移反応が完全に進行し
たことがわかる。
生切質ＯＡ−６１雪書Ａ−＋抗生物質Ｎ５−５の脱バン
トチイニル化反応が生じ、更にアシル−Ｃ４１ＡのＦｒ
Ｓ ／７１１ Ｋより抗生物質□Ａ−１１１１１１１→
抗生物質ＵＳ−Ｓ→Ｎ−アシル抗生物質Ｎ５−５の脱バ
ントチイニル化及びＮ−アシル転移反応が完全に進行し
たことがわかる。
央 施 列 ３
可ｍ性デ／プン＆ｇＮ、ニスサンミー）１．１ｍＮ。
Ｎａ ＣＩ ０．１６１１ ％ＫＪＩＰ０４α０８１及
びＭｇＳＯ３゜７鵡ｏｏ、ｏ４ｉτ水遣水に浴解し全菫
を８０−にした後、４９ｍ７ずつ２５０１１ｊ谷エルレ
ンマイヤーフラスコに分注し、１２０℃で１５分間殺−
した。
びＭｇＳＯ３゜７鵡ｏｏ、ｏ４ｉτ水遣水に浴解し全菫
を８０−にした後、４９ｍ７ずつ２５０１１ｊ谷エルレ
ンマイヤーフラスコに分注し、１２０℃で１５分間殺−
した。
培地を冷却恢、ストレプトマイ七スＱクレメウス・サブ
スビシス・オーラテイリ又はＡｇ？ １（Ａ７’Ｇ’（
、’３１３５８）ｔ−接種し％ ｇ８℃６８時同培養し
た。培９！後実ＩＩＩＡ例１と同様の操作で細劇抽出液
２（ｉｔＪを母、この細胞抽出液の酵素活性確認のため
ｕ下の反応に用いた。
スビシス・オーラテイリ又はＡｇ？ １（Ａ７’Ｇ’（
、’３１３５８）ｔ−接種し％ ｇ８℃６８時同培養し
た。培９！後実ＩＩＩＡ例１と同様の操作で細劇抽出液
２（ｉｔＪを母、この細胞抽出液の酵素活性確認のため
ｕ下の反応に用いた。
０．２Ｍリン酸カリウム緩備°液ｌＯμ！、抗生１勿質
ｐｓ−ｓ浴液（５００μ９／−）又は抗生物質□Ａ−６
１２９Ａ浴液（５００μＩｉ／Ｍｌ）ｔ。
ｐｓ−ｓ浴液（５００μ９／−）又は抗生物質□Ａ−６
１２９Ａ浴液（５００μＩｉ／Ｍｌ）ｔ。
μノ及び上記４Ｉ胞抽出液２０μＩを含む反応液５ｏｐ
ｉを３７℃、４時間反応させた後、試験例Ａと同様にＨ
ＶＰＥで生成物を検だした。
ｉを３７℃、４時間反応させた後、試験例Ａと同様にＨ
ＶＰＥで生成物を検だした。
コントロールとして上記組成の反応液から細胞抽出液を
９よい友ものを同時に反応させた。
９よい友ものを同時に反応させた。
抗生物質ＰＳ−Ｂｔ″基質とした爛酋には、細胞抽出液
ｍｉ ）ｍのＭ無に拘わらずＩＩＩＩら変化が行らず、
−４＠ ａ ５ ｃＩＬの位置にそれぞれ同じ大きさの
尻重スポットが認められ友。一方、゛抗生−質０Ａ−６
１２９Ａを基質とした場合には、細胞抽出液無添加では
陽極側４．！ＩｃＩＬ（抗生物質υ、４−６１２９Ａの
位置）に、細胞抽出液、く−加区では陽極側１．１１（
抗生・歯質Ｎ５−ｓの位置）にそれぞれ４ｄの抗菌スポ
ットが認められた。これらの結果から、上記細胞抽出液
は抗生物質ＰＳ−ｓの脱アセチル化、、Ｉよ有していな
匹が、抗生物質０Ａ−６１２９Ａの脱バントチイニル化
能を有していることがわかる。
ｍｉ ）ｍのＭ無に拘わらずＩＩＩＩら変化が行らず、
−４＠ ａ ５ ｃＩＬの位置にそれぞれ同じ大きさの
尻重スポットが認められ友。一方、゛抗生−質０Ａ−６
１２９Ａを基質とした場合には、細胞抽出液無添加では
陽極側４．！ＩｃＩＬ（抗生物質υ、４−６１２９Ａの
位置）に、細胞抽出液、く−加区では陽極側１．１１（
抗生・歯質Ｎ５−ｓの位置）にそれぞれ４ｄの抗菌スポ
ットが認められた。これらの結果から、上記細胞抽出液
は抗生物質ＰＳ−ｓの脱アセチル化、、Ｉよ有していな
匹が、抗生物質０Ａ−６１２９Ａの脱バントチイニル化
能を有していることがわかる。
実、残物４
グリセリン４ｇ、ペプトンα５ｊｌ、グルコースαｇｊ
ｌ、ｃ＋Ｊ浴イ生デンプン（１１Ｎ、エスサンンートｏ
、 ｓ ＃ 、 Ｉ：を燥岬母ｏ、ｉｐ及びＮａＣ１α
５１ 、 ＣａＣ０゜０、２．９ 、：水道水１００ｊ
！ｊＫ＠解し、２５ｍずつ２５０ｍｊ４エルレンマイヤ
ーフラスコに分ｔｆシて１２０℃、１５分間殺蜜し友、
培地冷却後ストレブトマイセスーアルゲンテオルス１Ａ
Ｔｃｃ１１００９）を接種し、２８℃、６８時間振嫌培
、−シた。培誉茨４８．廊例１と同様の操作で誦１抽出
液２０ｙｔｊを寿、−Ａ施例３と同様の反応清浄を行つ
た・ 試験例Ａ並びに実施例８及び３における場合と全く同様
に、上記ｌｌ１ＩＩｌ抽出液は抗生物質ｐｓ−ｓの脱ア
セチル化能はもたないが、抗生物質ＯＡ−ｓｔｇｓＡの
脱バントチイニル化能は有していることが認められた。
ｌ、ｃ＋Ｊ浴イ生デンプン（１１Ｎ、エスサンンートｏ
、 ｓ ＃ 、 Ｉ：を燥岬母ｏ、ｉｐ及びＮａＣ１α
５１ 、 ＣａＣ０゜０、２．９ 、：水道水１００ｊ
！ｊＫ＠解し、２５ｍずつ２５０ｍｊ４エルレンマイヤ
ーフラスコに分ｔｆシて１２０℃、１５分間殺蜜し友、
培地冷却後ストレブトマイセスーアルゲンテオルス１Ａ
Ｔｃｃ１１００９）を接種し、２８℃、６８時間振嫌培
、−シた。培誉茨４８．廊例１と同様の操作で誦１抽出
液２０ｙｔｊを寿、−Ａ施例３と同様の反応清浄を行つ
た・ 試験例Ａ並びに実施例８及び３における場合と全く同様
に、上記ｌｌ１ＩＩｌ抽出液は抗生物質ｐｓ−ｓの脱ア
セチル化能はもたないが、抗生物質ＯＡ−ｓｔｇｓＡの
脱バントチイニル化能は有していることが認められた。
第１図は実施例１で得られた酵素の至適ｐＨが７〜７．
５にあることを示すグラフであり、第８図は該＆４累の
安定ｐＨを示すグラフでめり、第３図は葭酵ぶの作用魯
ｌｔ示すグラフでめり、第４図番よ該酵素の１、Ａ度女
定性を示すグラフである。 ｌ１図 峯３図 第２図 察４図 温＆（０Ｃ）
５にあることを示すグラフであり、第８図は該＆４累の
安定ｐＨを示すグラフでめり、第３図は葭酵ぶの作用魯
ｌｔ示すグラフでめり、第４図番よ該酵素の１、Ａ度女
定性を示すグラフである。 ｌ１図 峯３図 第２図 察４図 温＆（０Ｃ）
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、式 で示される抗生物質０Ａ−６１１９Ａの脱ハ／トチイニ
ル化能を有するが、式 で示される抗生物質ＰＳ−ｓの脱アセチル化能を実質的
に有しないアンドヒドロラーゼである新規酵素。 ２ ストレプト電セスＩＩＩ４ＫＭするカルバペネム系
抗生物質生歯１によって生産される特許請求の範囲第１
項記載の＃素。 ＆ ＃４Ｊ１１がストレプト電セスやフルボビリデ４
ス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙａａａ ｆｌｓｖａｖｉｒｉｄ
４ｍ’１．ストレプト電セス・カトレヤ（Ｓｔｒａｐｔ
ｏｍｙａａａ ｅａｔｇｌａｙｍ）。 ストレプドオセス管りレメウス・サブスビシス・オーラ
ティリス（Ｓｇｒａｐｇ＊ｔｎｙａａａ ６ｒａｍｍｅ
ｓ ａｓｈｓ＠αｘｒａｔｔ１４ｍ）又はストレプト建
七スーアルゲンテオルｘ （Ｓｔｒａｐｔｏｍｙａａａ
ａｒｇａ＠ｔａａｌｕｍ）である特許請求の範囲第２
項記載の酵素。 ４ 該生産−がストレプト電七ス・フルボビリディｘＡ
９３３ （Ｓｔｒｍｐｔ＊ｔｍｙａ＊ａ ｆｌｕ會ｏ
＊１ｒｔｄｉａＡ９３Ｂ）で必る特許請求の範囲第２墳
記賊の酵素・
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56101161A JPS585189A (ja) | 1981-07-01 | 1981-07-01 | 新規なアミドヒドロラ−ゼ |
| DE8282105733T DE3271129D1 (de) | 1981-07-01 | 1982-06-28 | Novel amidohydrolase |
| EP82105733A EP0068486B1 (en) | 1981-07-01 | 1982-06-28 | Novel amidohydrolase |
| US06/394,169 US4438201A (en) | 1981-07-01 | 1982-07-01 | Amidohydrolase having ability to depantothenylate an antibiotic |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP56101161A JPS585189A (ja) | 1981-07-01 | 1981-07-01 | 新規なアミドヒドロラ−ゼ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS585189A true JPS585189A (ja) | 1983-01-12 |
| JPH038197B2 JPH038197B2 (ja) | 1991-02-05 |
Family
ID=14293315
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP56101161A Granted JPS585189A (ja) | 1981-07-01 | 1981-07-01 | 新規なアミドヒドロラ−ゼ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4438201A (ja) |
| EP (1) | EP0068486B1 (ja) |
| JP (1) | JPS585189A (ja) |
| DE (1) | DE3271129D1 (ja) |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3741723A1 (de) * | 1987-12-09 | 1989-06-22 | Uniroyal Englebert Gmbh | Fahrzeugluftreifen |
| ATE544851T1 (de) * | 1996-03-08 | 2012-02-15 | Astellas Pharma Inc | Verfahren zur deacylierung von zyklischen lipopeptiden |
| EP1013663A1 (en) * | 1998-12-22 | 2000-06-28 | Holland Sweetener Company V.O.F. | Synthesis and recovery of aspartame involving enzymatic deformylation step |
| US6617127B2 (en) * | 1998-12-22 | 2003-09-09 | Holland Sweetener Company, V.O.F. | Synthesis and recovery of aspartame involving enzymatic deformylation step |
| WO2000037486A1 (en) * | 1998-12-22 | 2000-06-29 | Holland Sweetener Company V.O.F. | Synthesis and recovery of aspartame involving enzymatic deformylation step |
| WO2010077806A1 (en) | 2008-12-15 | 2010-07-08 | Greenlight Biosciences, Inc. | Methods for control of flux in metabolic pathways |
| KR20110134380A (ko) * | 2008-12-22 | 2011-12-14 | 그린라이트 바이오사이언시스, 아이엔씨. | 화합물의 제조를 위한 조성물 및 방법 |
| CA2797786C (en) | 2010-05-07 | 2020-09-22 | Greenlight Biosciences, Inc. | Methods for control of flux in metabolic pathways through enzyme relocation |
| KR101988063B1 (ko) | 2010-08-31 | 2019-09-30 | 그린라이트 바이오사이언시스, 아이엔씨. | 프로테아제 조작을 통한 대사 경로에서 유동의 제어 방법 |
| CA2846893A1 (en) | 2011-09-09 | 2013-03-14 | Greenlight Biosciences, Inc. | Cell-free preparation of carbapenems |
| EP3030671B1 (en) | 2013-08-05 | 2018-10-03 | Greenlight Biosciences, Inc. | Engineered proteins with a protease cleavage site |
| WO2016160936A1 (en) | 2015-03-30 | 2016-10-06 | Greenlight Biosciences, Inc. | Cell-free production of ribonucleic acid |
| MY195729A (en) | 2016-04-06 | 2023-02-07 | Greenlight Biosciences Inc | Cell-Free Production of Ribonucleic Acid |
| AR113764A1 (es) | 2017-10-11 | 2020-06-10 | Greenlight Biosciences Inc | Métodos y composiciones para la producción de nucleósido trifosfato y ácido ribonucleico |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4282322A (en) * | 1975-11-24 | 1981-08-04 | Merck & Co., Inc. | Process for enzymatic deacylation of antibiotics |
| US4135978A (en) * | 1977-08-19 | 1979-01-23 | Merck & Co., Inc. | Production of n-acyl-thienamycins |
| JPS5473788A (en) * | 1977-11-17 | 1979-06-13 | Sanraku Inc | Antibiotic n-desacetyl ps-5 |
| US4207395A (en) * | 1978-11-02 | 1980-06-10 | Merck & Co., Inc. | Process for deacylating N-acyl-6-substituted-2-[2-aminoethylthio]-1-carbadethiapen-2-em-3-carboxylic acids |
-
1981
- 1981-07-01 JP JP56101161A patent/JPS585189A/ja active Granted
-
1982
- 1982-06-28 EP EP82105733A patent/EP0068486B1/en not_active Expired
- 1982-06-28 DE DE8282105733T patent/DE3271129D1/de not_active Expired
- 1982-07-01 US US06/394,169 patent/US4438201A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0068486A3 (en) | 1983-06-29 |
| DE3271129D1 (de) | 1986-06-19 |
| US4438201A (en) | 1984-03-20 |
| JPH038197B2 (ja) | 1991-02-05 |
| EP0068486A2 (en) | 1983-01-05 |
| EP0068486B1 (en) | 1986-05-14 |
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