JPS5852635B2 - 菌が少なく、繊維不含のパンクレアチンを製造する方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明ハＵ、Ｓ、Ｐ、 ＸＶＩｌ［（第１８改正米国薬
局方）の規定で望ましくないサルモネラ属菌を完全に遮
断することにより菌数を減少させながら、高いデンプン
分解、脂肪分解及び蛋白質分解活性を有するパンクレア
チンを連続的に製造する方法に関する。

パンクレアチン製造用の出発物質としては、通例低温凍
結した膵臓を使用する、それというのは、凍結した物質
のみが長時間にわたり、酵素活性を多く失なうことなく
貯蔵できるからである。

デンプン分解及び脂肪分解活性の高含分の故に、ブタの
膵臓が有利に使用される。

文献には種々異なる方法が記載されている。

例えば、粉砕された凍結又は解凍した臓器を水、塩溶液
又は溶剤（稀グリセリン、２５％エタノール、２０％酢
酸）で処理することにより、中で種々の場合にトリプシ
ン又はエンテロキナーゼの添加のもとてプロテアーゼの
プレ酵素が活性化される抽出物を製造する。

この抽出物は、引続き、無機塩、有機溶剤、はタンニン
での沈殿を行ない、注意深く乾燥することにより粉末に
変じる。

粉砕した臓器からの水の除去（例えば凍結乾燥、真空乾
燥、共沸蒸溜）及び引続く脱脂（有機溶剤で）により、
又は、同時の脱水及び脱脂（例えばアセトン、アルコー
ルもしくはアセトン−エーテルで）及び引続く乾燥によ
ってパンクレアチンを製造することができる。

英国特許第８２２７４１号（１９５９年１０月２８日登
録）及びフランス特許第１２９５３０２号（１９６２年
７月８日登録）によれば、膵臓から機械的に予備脱脂し
、１〜２間の粒径まで粉砕し、■容器内でジエチルエー
テルで回分式で更に脱脂し、引続き、遠心により三相（
エーテル−脂肪−相、膵液、肉質残分）に変じる。

この膵液から、硫酸アンモニウムの添加によ・す、治療
上有用な生成物が沈殿される。

パンクレアチンを得るための出発物質としてのブタ膵臓
は、もっばら大きい屠殺がま中に集められ、通常の屠殺
条件下で屠殺された動物の内臓からこの臓器を取り出す
際に汚染に実際にさけることはできないので、このよう
に集めた臓器の検査の際に、１ｇ当り１０４〜１０８個
の菌（病源性十非病源性菌）が認められる。

無菌、病原菌不含及び菌が少ないの三群に分類される微
生物的清浄な医薬が従来、製薬工業において、注射剤、
皮膚剤、眼病薬、及び粘膜適用製剤として製造されてい
る。

しかしながら、経口剤にとっても、最近常に、確実な微
生物的清浄即ち臓器製剤においては特に満たすことの困
難な要件が求められる。

パンクレアチンは、その敏感な酵素系を有する天然物と
して汚染され、屡々、病原菌不含ではないＯ 菌数を減らすための操作は、既にパンクレアチンでは行
なわれていた。

例えば、Ｂ、シュラツタ−（Ｂ、 ５ｃｈｌａｔｔｅ
ｒ ； Ｄｉｓｓｅｒｔａｔｉｏｎ ＥＴＨ２ｕｒｉ
ｃｈ （１９７１） ； Ｐｈａｒｍ、 ＡｃｔａＨｅ
ｌｖｅｔｉａｅ ４９ （１９７４） ４１頁参照〕
は、パンクレアチンをイソプロパツール及び水で又はγ
一線で又は、同時に双方で処理している。

イソプロパノ−ルー水−処理の後に、溶剤混合物を共沸
蒸溜により除去する。

チコスロバキア特許第１４７２７４号明細書には、同様
に、パンクレアチンをγ一線で処理して、菌数減少する
ことが記載されている。

最後に、エチレンオキサイドを用いる菌数を減少させる
試みがなされている〔リビ”）キイＡ、（Ｌｉｂｉｃｋ
ｙ ）等によるファルマツィ（Ｐｈａｒｍａｚｉｅ ）
、２２（１９６７）３１１頁、す（１９６８）２１頁参
照〕。

西ドイツ特許出願公開公報第２１３５０２５号明細書に
記載の方法によれば、パンクレアチンの苗減少を沸点１
５〜１００℃のハロゲン化炭化水素もしくは脂肪族ケト
ンを用いて、水及びセルロース誘導体の存在で実施され
る。

好適なハロゲン化炭化水素としてはもっばら塩素化炭化
水素、即ち、塩化メチレン及びクロロホルムが挙げられ
る。

この際に得られる流動性パンクレアチン顆粒は、１０４
より少ない合計菌数で、１００ｇ当りサルモネラ菌を含
まず、１ｇ当り大腸菌及びプソイドモナス菌不含である
。

西ドイツ特許第２１０６７０６号明細書に記載の方法に
よれば、カルシウム化合物を加えたパンクレアチン、サ
ルモネラ菌を殺すために常圧下に８２°Ｃで数時間カロ
熱する。

前記方法ではパンクレアチンを苗減少のための出発物質
として使用したが、サルＬネラ菌を殺すために、出発物
質として膵臓を用いる方法も公知である（Ｅ、Ｊ、Ｇ、
グレンクロス（Ｇｌｅｎｃｒｏｓｓ）： Ｂｒ１ｔ
、 Ｍｅｄ、Ｊｏｕｒｎａｌ ２ （１９７２年）３７
６頁参照〕。

その後膵臓を次亜塩素酸塩の水溶液で処理し、粉砕し、
真空乾燥しかつ脱脂する。

菌数を減少するための文献記載のすべての方法は、非常
に煩雑であり、更に１部は非常に著しく活性損失をもた
らす。

ところで、高いデンプン分解、脂肪分解及び蛋白質分解
活性を有し、菌が少なく、繊維不含のパンクレアチンの
製法が発見され、これは、連続的操作法で、凍結細分さ
れた膵臓を場合により、水の添カロの後に、短時間液状
クロル炭化水素と液状フルオルクロル炭化水素との混合
物を用いて、脱脂し、除菌しかつ、脂肪−溶剤相の分離
の後に、酵素相を濃縮し、乾燥させる。

この場合、脱脂の間に、Ｕ、Ｓ、Ｐ、 ＸＶ］［［（第
１８改正米国薬局方）で不都合であると規定されている
サルモネラ属菌を殺すと同時に著しく菌数を減少するこ
とが行なわれ、最終生成物として繊維不含で高い嵩重量
のパンクレアチンが得られることは意想外のことである
。

この連続的工程は、更に注意深い条件下での臓器の非常
に短時間の処理時間を可能とする。

流動性に基づき、ガレヌス製剤で容易に加工しうる澄明
最終生成物は、新規の連続的後処理及び脱脂工程の間の
フルオルクロル炭素の存在に基づく高い酵素活性の点で
優れている。

本発明によれば、膵臓を細胞が破壊されるまで細かに砕
解する。

これにより、クロル炭化水素とフルオルクロル炭化水素
との混合物での処理の際に、短時間の高度脱脂が保証さ
れる。

更に、この粉砕により、実際に繊維不含の材料が得られ
、常に酵素損失と関連しているパンクレアチンを更に粉
砕することは、無用となる。

粉砕のために重要なことは、生成物温度を低く保持する
ことである。

粉砕した物質に、水を、場合によりハロゲン化炭化水素
溶剤混合物と共に加えることができる。

膵臓対水の重量比は広範に変動しうる。

これは約１：Ｏ〜１：１０であってよい。

苗減少と関連している脱脂は、高温（約３０〜６０℃）
で短時間で実施される。

この場合、重要な酵素障害は表われない。

遠心分離機中での向流抽出が好適であると立証されてい
る。

抽出時間は、最大温度６０℃〜３００秒である。

本発明によれば、この工程でクロル炭化水素とフルオル
クロル炭化水素とからの混合物を使用する。

この混合物の使用は、高温にもかかわらず、良好な脱脂
及び充分な苗減少で、酵素活性の損失を阻止する。

膵臓対ハロゲン化炭化水素の重量比は広範に変動でき、
約１：２〜１：５０であってよい。

溶剤としては、沸点が２０〜１５０℃のクロル炭化水素
特にジクロルメタン及びトリクロルメタン及び沸点２０
〜１５０℃のフルオルクロル炭化水素特にトリクロルフ
ルオルメタン及びトリクロルトリフルオルエタンが使用
される。

クロル炭化水素及びフルオルクロル炭化水素を１：０．
０５〜１：２の重量比で使用するのが有利である。

酵素相の濃縮は、真空中で低温で実施すべきである。

最大５秒の滞留時間での短時間蒸発により濃縮すること
が推奨され、この際、生成物温度を６０℃より高くすべ
きではない。

この値を越えると、活性損失が現われる。

パンクレアチンの乾燥は、緩和な条件で行なう。

このためには、工業的に公知の乾燥法がある（凍結乾燥
、真空乾燥、スプレー乾燥）。

本発明方法のもう１つの利点は、緩和な乾燥の後に、約
５００〜７００ ｇ／ｌの比較的高い嵩重量及び約３０
〜５０ｍの平均粒径の非常に細かいパンクレアチンが生
じることである。

これら双方の特性の組合せは、パンクレアチンの治療上
使用の際に、嵩張らない高投与量を可能とし、同時に、
粒子の細かさに基づき消化器管内での酵素の促進された
放出が起る。

膵臓の慣用の後処理の際に、約３００〜４００ｇ／ｌの
著しく低い嵩高量の一般的生成物が得られる。

嵩高量の増加は付加的な造粒法又は圧縮法でのみ可能で
ある。

抽出物からの塩によるパンクレアチンの沈殿により高い
嵩重量を得ることもできるが、いずれにせよ、高い嵩重
量は、沈殿剤のパンクレアチンの不純化により限定され
る。

本発明により製造された生成物は、繊維不含の点で優れ
ており、公知生成物の繊維分は屡々非常に多い。

繊維不含でない生成物は、不要物質を有するので、最終
生成物は、１重量単位当り低い酵素活性を有する。

このような生成物からは、酵素もよりゆっくり放出され
る。

錠剤及び糖衣丸の製造は、繊維の存在により困難にされ
、史に、このような形状物は、繊維の存在により亀裂を
形成する傾向がある。

本発明方法で、生成物は粉砕から乾燥まで、流動状態が
保持される。

高い温度が現われる方法工程の後に、生成物を非常に迅
速に、再び酵素を害しない温度まで冷却する。

この冷却後の好適な温度範囲は約Ｏ〜８℃である。

更に、本発明方法は、更に、苗減少工程（脱脂工程）の
後の設備は微生物学的汚染に対して保護されている利点
を有する。

本発明方法の特別な利点は、膵臓の後処理の際の１工程
で脱脂と除菌が同時に行なわれて、酵素活性の損失を甘
受する必要はない。

従来、合計菌数を減少し、ＵＳＰ ＸＶＩＩの規定で不
所望のサルモネラ属菌が完全に排除した方法でパンクレ
アチンを得る方法は未知であった。

既にパンクレアチンを得るための出発物質即ち膵臓をサ
ルモネラ菌を殺すために次亜塩素酸塩溶液で処理する公
知方法では、酵素活性の著しい損失が表れる。

例１ 連続的に作動する装置で、低温凍結した膵臓（−２０℃
）１時間当り２５ｇを数工程で粉砕する。

この除虫じる泥状物（０℃）を循環ミキサー中で１時間
当り２０℃の水６ｋｙと混合し、混合物から、遠心抽出
機中で、ジクロルメタンとトリクロルフルオルメタンと
の混合物（１時間当りジクロルメタン１５０ｋｇ＋ ト
リクロルフルオルメタン５０ｋｇ）との向流で、この脂
肪を６０秒間で抽出する。

この際、酵素相は５０まで昇温する。生じる脂肪−溶剤
一相から、再蒸溜により溶剤混合物を連続的に回収し、
この方法に再び供給する。

脱脂した酵素相を１熱交換器中で５°Ｃに冷却し、その
後、４０℃／１５０ｉｍＨｇでの短時間の蒸発により、
約２５％の乾燥含分に濃縮する。

生成物と加熱媒体との接触時間は約１秒間である。

得られる濃縮物を５℃まで冷却し、引続き、スプレー乾
燥器上で濾過通気を用いて乾燥させる。

パンクレアチンの収量約５ｋｇ／ｌｈｏ得られた生成物
は次の特性を有する： アミラーゼ活性 ４２０００ ＦＩＰ一単位／ｉ’ 、
９リパーゼ活性 ５８０００ ＦＩＰ一単位／１．９
プロテアーゼ活性 ２８００ ＦＩＰ一単位／１ｇＨ２
Ｏ含分 ２．０％ 脂肪含分 ０．６％ 嵩重量 ５１０ｇ／１７ 粒子の大きさ： ３０〜５０ＩＸｎ ８０％ １０−３０μｍ １０％ １０μｍ より小 １０％ 菌数 菌２Ｘ１０３／１ｇ 菌分類：最終生成物中で、出発物質中に存在する非病源
性胞子形成体のみが認められた。

サルモネラ属菌は、最終生成物中でもはや検出できなか
った。

＊フエデラシオン・インターナショナル・ファルマシュ
ーテイク（Ｆｅｄｅｒａｔ ｉｏｎ Ｉｎｔｅｒｎａ−
ｔ １ｏｎａ Ｉｅ Ｐ’ｈａｒｍａｃｅｕｔ １ｑｕ
ｅ ）の規定〔Ｈｅｎｎｒｉｃｌｌ 、ＩＢｅｓｔｉｍ
ｍｕｎｇ ＶｏｎＰａｎｋｒｅａｒｔｉｎ ｉｎ Ｐｈ
ａｒｍ、Ｉｎｄ、 ３１（１９６９年）２２８頁参照
〕により測定。

比較のために、トリクロルフルオルメタンを共用せずに
ジクロルメタンのみを用いた場合に得られた生成物は、
水を添カロしない場合と水を添加した場合に、次の特性
を有した： ａ）水を添加しない場合： 菌数 ＞１０’／１．９ アミラーゼ ＜２８０００ ＦＩＰ一単位／９（これ
は〉３０％の消失に相当） ｂ）水を添加した場合： 菌数 １０３／ｇ プロテアーゼ ＜２２００ＦＩＰ一単位／ｇ（これは〉
１５％の消失に相 当） 従って、クロル炭化水素のみを用い、水を添刃口せずに
操作する場合には、除菌は行なわれず、かつアミラーゼ
活性を著るしく失ない、水を添刃口して操作する場合に
は、プロテアーゼ活性を著るしく失なった。

これらの操作のちがいによって、リパーゼ活性に関して
は差異はなかった。

例２ 連続的に操作する装置中で、低温凍結膵臓（＝４０℃）
１時間当り３０ｋｇを数工程で微細に粉砕する。

この除虫じる微細粉末（−２０℃）を混和機中で差当り
トリクロルメタンとトリクロルトリフルオルエタンとか
ら（７，５ｋｇ＋ ’７．５ｋｇ）の混合物（２０℃）
１５ｋｇ／ｌｈ及びその抜水（２０℃）６０ｋｇ／ １
ｈと混合する。

その後、泥状物を熱交換器中で、１５℃まで加温し、こ
れから、遠心抽出機中、３０’Ｃ以下でトリクロルメタ
ンとトリクロルトリフルオルエタンとの混合物（５００
ｋｇ＋５００ｋｇ／ｌ ｈ ）を用い、６０秒間で抽出
する。

この際、酵素相は最大４０℃に昇温する。

得られる脂肪溶剤相から、再蒸溜により溶剤混合物を連
続的に回収し、再び工程に供給する。

脱脂した酵素相を熱交換器中で５℃まで冷却し、その後
、短時間蒸発器中で４０〜５０°Ｃ／１５０〜２３０１
ｎ７ＩＬＨｇで、乾燥含分１８％まで濃縮する。

生成物と力ロ熱媒体との接触時間は、約３秒である。

得られる濃縮物を連続的に凍結乾燥させる。

パンクレアチンの収量 ５．９に９／ｌｈ０得ら
れた生成物は次の特性を有する： アミラーゼ活性 ４４５００ＦＩＰ一単位／［リパー
ゼ活性 ５７２００ＦＩＰ一単位／１ｇプロテアー
ゼ活性 ２５００ＦＩＰ一単位／１ｇＨ２Ｏ含分
１．５％ 脂肪含分 １．１％ 嵩重量 ５００ ｇ／ＩＪ 粒径分布 ３０〜５０Ｐ１ ８０％ １０〜３０１Ｅｎ １０％ １０μ 以下 １０％ 菌数： 菌４×１０３ 個／１ｇ菌分
類：最終生成物中で、出発物質中に存在する非病源性胞
子形成体のみが認められた。

サルモネラ属菌は最終生成物中でもはや検出できなかっ
た。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 高いデンプン分解、脂肪分解及び蛋白質分解作用を
   有し、菌が少なく、繊維不含のパンクレアチンを製造す
   るために、連続的方法で、凍結粉砕した膵臓を、場合に
   より水の添刃口の後に、短時間で、液状のクロル炭化水
   素と液状のフルオルクロル炭化水素とからの混合物中で
   脱脂しかつ除菌し、脂肪−溶剤一相の分離の後に、酵素
   相を濃縮し、乾燥させることを特徴とする、菌が少なく
   、繊維不含のパンクレアチンを製造する方法。 ２ 脱脂かつ菌数を減少させるためのハロゲン化された
   炭化水素の混合物での処理を、サルモネラ属菌の排除下
   に、数秒、特に３０〜３００秒、高めた温度特に３０〜
   ６０℃で実施する、特許請求の範囲第１項記載の方法。 ３ クロル炭化水素及びフルオルクロル炭化水素の沸点
   が２０〜１５０℃の間にあるものを特徴する特許請求の
   範囲第１項又は２項のいずれか１項に記載の方法。 ４ 塩素化された炭化水素としてトリクロルメタン及び
   ／又はジクロルメタンを特徴する特許請求の範囲１〜３
   項いずれか１項に記載の方法。 ５ フルオルクロル炭化水素としてトリクロルフルオル
   メタン及び／又はトリクロルトリフルオルエタンを使用
   する特許請求の範囲１〜４項いずれか１項に記載の方法
   。 ６ クロル炭化水素及びフルオルクロル炭化水素を約１
   ：０．０５〜１：２の混合比で使用する、特許請求の範
   囲１〜５項いずれか１項に記載の方法。 ７ 膵臓対ハロゲン化溶剤混合物の重量比は約１：２〜
   １：５０である、特許請求の範囲１〜６項いずれか１項
   に記載の方法。 ８ 膵臓対水の重量比は約１：Ｏ〜１：１０である、特
   許請求の範囲１〜７項いずれか１項に記載の方法。 ９ 脱脂した酵素溶液の蒸発濃縮は、最大５秒間の攪拌
   時間で、６０°Ｃの温度、真空中で短時間蒸発を行なう
   、特許請求の範囲１〜８項いずれか１項に記載の方法。 １０酵素溶液を、高温の現われる方法工程の後に、迅速
   に０〜８℃の温度まで冷却する、特許請求の範囲１〜９
   項いずれか１項に記載の方法。 １１ 流動性の嵩重量５００〜７００ ｇ／１１及び平
   均粒径約３０〜５０μｍのパンクレアチンを特徴する特
   許請求の範囲１〜１１項いずれか１項に記載の方法。