JPH02154693A - 機能性新規ペプチド及びその利用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は１機能性を有する新規ペプチド及びその利用に
関するものである。

更に詳細には１本発明は、魚介類を自己消化処理と蛋白
分解酵素処理を同時に行って得られたもので、分子量が
５００〜６，０００の機能性ペプチドに関するものであ
る。

更には１本発明は、この機能性ペプチドを有効成分とし
てなる高脂血症治療及び予防剤、糖尿病治療及び予防剤
、又は、血圧降下及び血管拡張剤に関するものである。

（従来技術及び問題点） 一般に、魚介類を酸、アルカリ、蛋白分解酵素等で加水
分解して呈味性の加水分解物を得ることは普通に行われ
ている。

また１本発明者らは、先に、魚介類をまず自己消化分解
し、次いで蛋白分解酵素による処理を行い、新規なペプ
タイドを得ることができたのである（特願昭６Ｏ−２２
６８３４）　。

ここに得られた新規なペプタイドについて各種試験をし
たところ機能性においてすぐれたものがみられたのであ
るが、製造法において、蛋白分解酵素の添加時期にむつ
かしい点があること、また、加水分解後の精製処理に工
業的にかなり困難な点があるなどの問題点があったので
ある。

また、魚介類から得られる各種ペプタイドについては、
牛乳から得られる多くの機能性ペプタイＦ（Ｎｅｗ　　
Ｆｏｏｄ　　Ｉｎｄｕｓｔｒｙ　　Ｖｏｌ、２９．　　
Ｎｏ、４　　（１９８７）２９〜４３頁）と同じ様に、
新らしい機能性ペプタイドの出現が期待されるのである
。

（課題を解決するための手段） 本発明者らは、よりすぐれた機能性ペプチドを求めて鋭
意研究した結果、魚介類を自己消化処理と蛋白分解酵素
処理を同時に行うことによって、分子量５００〜６　、
０００の新規な機能性ペプチドを得ることに成功したの
である。

本発明は、魚介類を、自己消化処理と蛋白分解酵素処理
を同時に行って得られたもので１分子量が５００〜６　
、０００の機能性ペプチドに関するものである。

また、本発明の機能性ペプチドは、高脂血症の治療及び
予防剤、糖尿病の治療及び予防剤、血圧降下及び血管拡
張剤、肥満症の治療及び予防剤、動脈硬化症の治療及び
予防剤のそれぞれの有効成分となるものである。

本発明の機能性ペプチドは、魚介類を原料として製造す
るものであるが、先ず、これを採肉機、デボーナー等に
よって処理して魚肉質を分離する。

原料は出来る限り新鮮なものが好ましい。分離した魚肉
は、１０ｋｇ程度のすり身に分割し、このまま次の処理
に使用してもよいが、−２０〜−５０℃、例えば−３０
℃、程度の冷気を吹き付けて急速凍結し、−２０〜−２
５℃に保存しておき、必要に応じてこれを適宜使用する
ようにしてもよい。

魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、カツオ、サン
マ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス。

コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エイ等
軟骨魚肉：ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚肉
；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カニ、
タコ、アミ類、各種貝類等も適宜使用できる。

本発明においては、採肉した後、粉砕機等によって魚介
肉を粉砕し、加水すると同時に蛋白分解酵素を添加し、
酵素適温（使用酵素によって異なるが、２０〜６０℃程
度）にまで加温し、ｐＨも適値（ｐＨ３〜９程度）に調
整し、ゆるやかに撹拌しつつ、自己消化処理と蛋白分解
酵素処理を同時に行わせ、２〜２０時間、好ましくは３
〜５時間程度で処理を停止するために、処理液を１０〜
１５分煮沸する。

自己消化酵素については、魚介類を酵素処理するまで加
熱しないで保持させる。

また、蛋白分解酵素としては、蛋白質を分解し得る酵素
であればすべての酵素が単独で又は混合して使用し得る
。その起源は、動植物のほか微生物に求めることができ
、ペプシン、レニン、トリプシン、キモトリプシン、パ
パイン、プロメレインのほか、細菌プロテアーゼ、糸状
菌プロテアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く利用でき
る。これらの酵素は、通常、市販されているものが使用
されるが、未精製の酵素、酵素を含有した培養液。

麹といった固体又は液体の酵素含有物も、目的により必
要に応じて使用することができる。

蛋白分解酵素の量は、酵素の精製度によって相違し、ま
た、処理時間によっても相違するが、処理液の０．０５
〜１％、好ましくは０．１％程度の使用で十分である。

酵素反応停止処理液はバイブロスクリーン等によって濾
過し、必要によりジェクター処理した後、シャープレス
遠心分離機等を用いて例えば１０，０００〜３０，００
０ｒｐ■で遠心分離する。

これを減圧濃縮等によって濃縮しく　３０Ｂｘ程度にま
で）だ後、再度遠心分離してペプチド原液を得る。

こうして得たペプチド原液は、活性炭濾過、珪藻土濾過
等によって精製し、そのまま機能性ペプチド原液として
使用することができる。

ここに得られる機能性ペプチド原液は、更にアルコール
類による精製、イオン交換樹脂による精製等を行うこと
もできるが、これらの精製は特に必要とすることなく、
各種組成物に有効成分として使用できる程に精製されて
いるものである。

ここに得られる機能性ペプチド原液は、デキストリノを
添加もしくは添加せずに、凍結乾燥したり、噴霧乾燥し
たりして、粉末化することもできるものである。

本発明の機能性ペプチドは、文献未載で新規なものであ
り、　ＥＳＰ−２と命名された。

ＥＳＰ−２の物理化学的性質は次のとおりである。

１、元素分析値 Ｃ；　５５．２２％、Ｈ：　５．８３％、Ｎ　；　７．
３１％、○；３Ｌ６４％ ２、分子量 セファデックスＧ−５０カラムクロマトグラフイーによ
り分子量５００〜６，０００と認められる。

ゲル濾過による分子量分布図は第１図に示される。

３、融　点　　　１４５℃分解 ４、比旋光度　　［αコ♂０＝１９゜ ５、　　ＵＶスペクトル　第２図のとおり。

６、ＩＲスペクトル　第３図のとおり。

７、溶剤に対する溶解性 水、メタノール、ｏＭｓＯ＃極性溶媒に可溶であるが、
クロロホルム、ヘキサン等非極性溶媒に不溶 ８、呈色反応 ニンヒドリン反応　　　十 ビウレット反応　　　　十 銅−フォーリン反応　　十 フェノール硫酸反応 ９、塩基性、酸性、中性の区別 微酸性、ＰＨ６，２１（１０％溶液） １０、物質の色、形状 黄白色粉末（凍結乾燥品） １１、水分含量 ３．７５％（常圧乾燥法） １２、塩分 ３．９７％（ＣΩとして電位差滴定法により測定）１３
、全窒素及びアミノ醜態窒素 Ｔ−Ｎ　：　１４．０４％（ミクロケールゾール法）ア
ミノ醜態−Ｎ　：　２．２２％（ホルモール法）本発明
の機能性ペプチドは、各種の生理活性機能を有している
。

本発明の機能性ペプチドは、後記する試験例からも明ら
かなように高脂血症の治療及び予防、糖尿病の治療及び
予防、血圧降下及び血管拡張、肥満症の治療及び予防、
動脈硬化症の治療及び予防にすぐれた効果を示すので、
これらの疾病の予防、治療用医薬、輸液ないし栄養食品
、健康食品として広範に使用することができる。

医薬として使用する場合には、経口又は非経口投与する
ことができる。経口投与の場合には、例えば常法にした
がい、錠剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤、散剤とする
ことができ、又、非経口投与の場合には、例えば注射薬
製剤、点滴剤、半割として使用することができる。

また、本発明の機能性ペプチドは、卵黄と併用して経口
投与した場合、きわめて顕著な薬効が奏される。

卵黄としては、鶏卵のほか、ウズラ、アヒルその地鳥類
の卵が主として使用されるが、他の動物の卵も適宜使用
できる。卵黄としては、卵黄自体をそのまま使用しても
よいが、水や生理的食塩水等溶媒で稀釈して卵黄液とし
て使用してもよく、稀釈率は適宜自由に定めればよい、
経済性と有効性とを両立せしめるには、約１０〜５０％
卵黄液とするのが好都合である。

投与する場合は、卵黄（液）に機能性ペプチドを５〜５
０％程度溶解させて用いてもよいし、両者を単に混合し
て用いてもよいし、両者をカプセルに入れ体内で混合す
るようにしてもよい、このように卵黄を用いれば経口投
与しても所期の薬効を得ることができる。

本発明の機能性ペプチドは、天然起源でありしかも食品
でもあるために毒性が全くないが又は極めて低く、きわ
めて安全である（ＬＤ、　、　＞　３　、０００■／−
皮下、＞５，０００１ｇ／ｋｇ経口：いずれもラット）
。

本発明の機能性ペプチドは、その種類、投与方法、患者
の症状、年令等によって異なるが、約０．１〜６０００
＋ａｇ／）ｃｇ／日であり、１日に１〜４回投与するの
が好ましい、なお、予防目的のために健常人が服用する
場合には、投与量、投与回数等に格別の制限はない、ま
た必要ある場合には、他の薬剤との併用も可能である。

以下、本発明を、試験例、製造例、調剤例により更に詳
細に説明する。

試験例１ 製造例によってイワシから調製した機能性ペプチドＥＳ
Ｐ−２を用い、ラットを次の３群に分けて血圧降下効果
を試験した。

１）　静脈注射群 ２）生理食塩水溶解経口投与群 ３）３０％卵黄水溶液経口投与群。

ラットは、Ｈａｓ　：　５ＨＲ（高血圧自然発症ラット
）１０週金製星野実験動物（株）から購入し、これを１
週間予備飼育したものを使用した。

投与は、次のようにして行い、投与後、非観血的尾動脈
血圧装置（（株）理研開発製ｐｓ−ｉｏｏ）を用いて経
時的に血圧を測定し１表−１の結果を得た。

静注投与：１１７■／ｋｇの投与量になるように、機能
性ペプチドＥＳＰ−２を生理食塩水に溶解したもの１ｎ
＋ｕ／ａｎｉｍａｌをラットに投与した。

経口投与：（イ）機能性ペプチドＥＳＰ−２の投与量が
４０００■／ｋｇになるようにイワ シペプチドを生理食塩水に溶解 したもの６ｍΩ／ａｎｉｍａｌ　を投与した。

（ロ）機能性ペプチドＥＳＰ−２の投与量が４０００■
／ｋｇになるようにイワ シペプチドを３０％卵黄液に溶解 したもの６　ｍ１２／ａｎｉｍａｌを投与した。

表１から次のことが判る。

り静脈内への投与で明らかに血圧降下効果が認められた
。

２）機能性ペプチドＥＳＰ−２を卵黄に溶解して経口投
与した場合、血圧は顕著に降下した。

試験例２ 本試験例では機能性ペプチドＥＳＰ−２を卵黄に溶解し
た系で、投与量と血圧降下との関係を、Ｎ１ｆｅｄｉｐ
ｉｎａを陽性対照試料とし、試験例１と同様にＳＨＲラ
ットを用いて試験した。

所定量のイワシペプチドを３０％卵黄液になるように卵
黄水に溶解して経口投与した。

投与後、非観血的尾動脈血圧装置（（株）理研開発製Ｐ
Ｓ−１００）を用いて経時的に血圧を測定した。

測定は５回繰返して行ない、最高最低値を棄却し３点の
平均を測定値とし、第４図の結果を得た。

第４図から次のことが判る。

１）投与量の増加とともに血圧降下量は確実に増大した
。

２）投与後、約３時間まで降下量は増大し、投与後６時
間経過後も、なお降圧効果は持続していた。

対照試料として用いたＮ１ｆｅｄｉｐｉｎｅの場合は、
投口３０分後で降圧量４６　、３　ｎｕ　Ｈｇと、急速
に降圧したが、投与後３時間後には、１４．９ｎｙｎｌ
１ｇへと減少し、６時間後には６頭中４頭は投与前の血
圧値にまで上昇してしまった。

試験例３ 機能性ペプチドＥＳＰ−２の２．４．８および１６ｇ／
ａｎｉｍａｌを各々２０ｍ１２の精製水に溶解し、カニ
ユーレを用いて１個体別にウサギに経口的に投与した。

ウサギの耳は刺毛して、血管をａｆｆ！ｍしやすくして
から投薬し、耳血管の変化をｌ！察して血管拡張試験を
行った。

ウサギはＳｔｄ　：　ＮＺＷ　にュージーランドホワイ
ト種）、１４〜１５週令、体金製、０±０．５ｋｇの雄
を静岡系実験動物農業協同組合より購入し、１週間予備
飼育した後、健常な動物を試験に供した６に！察の時期
は、投薬前、２０．３０．６０および１２０分とし、そ
の都度ウサギの耳をｍａｔ、、たところ。

２ｇの投与で３０分後にはがなりの血管拡張がみとめら
れた。

試験例４ 高脂血症及び動脈硬化に対する作用 体重約２２０ｇのＷｉｓｔａｒ系雄性ラットを１群６匹
とし、粉末飼料（ＣＡ−１、日本タレア社製）にコレス
テロールおよびコール酸をそれぞれ１および０．５％混
合したものを１４日間摂取させ、同時に機能性ペプチド
ＥＳＰ−２を５００および１０００＋ｎｇ／ｋｇ、比較
対照薬クロフィブレートを２００■／ｋｇをそれぞれ金
属製胃ゾンデを用いて経口投与した。投与期間終了後。

上述の正常ラットの場合と同様に血液および肝臓を採取
して脂質含有量を測定した。

結果は表２に示される。

試験例５ 糖尿病に対する作用 体重約１８０ｇのＷｉｓｔａｒ系雄性ラットに０．０１
Ｍクエン酸バッファー（ｐＨ４，５）に溶解したストレ
プトゾシン（Ｕｐｊｏｈｎ社製）を４５■／眩静脈内投
与し、投与１週間後に尾静脈より採血し、血中グルコー
ス値が２７０〜３３０■／准の範囲内にある動物をＳＴ
Ｚ糖尿病ラットとみなした。このＳＴＺＭ尿病ラットを
１群６匹とし、粉末飼料（ＣＡ−１、日本タレア社製）
にＤＡＮ−１００を１．２５．２．５または５％の割合
に混合したものを４０ｇ／匹／ｄａｙ　７日間摂取させ
た。投与期間終了後、上述の正常ラットの場合と同様に
血液および肝臓を採取してグルコース量及び脂質含有量
を測定した。

結果は表３に示される。

試験例６ 肥満症に対する作用 体重約３００ｇの雄性Ｚｕｃｋｅｒ　（遺伝性肥満）ラ
ット（ｆａｆａ）を１群３〜４匹とし、粉末飼料（ＣＡ
−１、日本タレア社製）にＥＳＰ−２を５または１０％
の割合に混合したものを２０ｇ／匹／ｄａｙ　ａケ月間
摂取させた。

投与期間終了後、血液および肝臓を採取して脂質含有量
を測定した。

結果は表４に示される。

製造例１ 新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉し、得られたイ
ワシ肉身１０ｋｇを粉砕機で粉砕した後９等量の水及び
ブナチーム（市販プロテアーゼ製剤商品名）Ｌｏｇを加
え、よく混合し、４５℃に４時間保持して自己消化及び
酵素分解を行った６反応液をｐＨ７に中和し、次いで１
５分間煮沸して酵素を失活せしめた。

これをバイブロスクリーン（１５０メツシユ）で濾過し
、濾液を５００Ｏｒｐｍでジエクター処理した後。

シャープレス遠心分離機で処理しく　１５，０００ｒｐ
ｍ）、２０Ｂｘとなるまで常温加熱濃縮し、そして再度
シャープレス遠沈処理（１５，ＯＯＯｒｐｍ）　シた。

得られた清澄液を減圧濃縮機にて４倍に濃縮し、濃縮液
を活性炭濾過し、次いで珪藻土濾過し、わずか黄色を帯
び透明な機能性ペプチドＥＳＰ−２の溶液を得た。

製造例２ 製造例１で得た機能性ペプチドＥＳＰ−２をそのまま凍
結乾燥し、黄白色の機能性ペプチドＥＳＰ−２を得た。

製造例３ 製造例１で得た機能性ペプチドＥＳＰ−２溶液に５％の
デキストリンを加え、噴霧乾燥して、機能性ペプチドＥ
ＳＰ−２乾燥粉末を得た。

製造例４ 凍結イワシｌｏｋｇを粉砕し、等量の水及びペプシン（
市販）８ｇを添加して、よく混合し、４５℃で３時間保
持し、自己消化及び酵素分解を行った。反応液をｐＨ７
に調整し、１５分間煮沸して酵素を失活せしめた。

反応液を冷却後、遠心分離し１分離液を限外濾過により
５倍に濃縮し、濃縮液を活性炭濾過し、次いで珪藻土濾
過し、わずか黄色を帯び透明な機能性ペプチドＥＳＰ−
２の溶液を得た。

調剤例１ （１）　ＥＳＰ−２の凍結乾燥粉末（製造例２）　　１
０ｇ（２）塩化ナトリウム　　　　　　　　　９ｇ（３
）クロロブタノール　　　　　　　　５ｇ（４）炭酸水
素ナトリウム　　　　　　　１ｇ全成分を蒸留水１００
１００Ｏに溶解し、褐色アンプル１０００個にＩＩずつ
分注し、窒拳ガスで置換して封入し、注射剤を製造した
。

調剤例２ （１）　ＥＳＰ−２の噴霧乾燥粉末（Ｉｔ造例３）　　
１０ｇ（２）卵黄粉末　　　　　　　　　　　　３ｇ（
３）乳糖　　　　　　　　　　　　　　８７ｇ（４）コ
ーンスターチ　　　　　　　　　２９ｇ（５）ステアリ
ン酸マグネシウム　　　　Ｉｇ（１）、　（２）　、　
（３）及び１７ｇのコーンスターチを混和し、７ｇのコ
ーンスターチから作ったペーストとともに顆粒化し、こ
の顆粒に５ｇのコーンスターチと（５）とを加え、得ら
れた混合物を圧縮錠剤機で打錠し２錠剤１０００個を製
造した。

調剤例３ ＥＳＰ−２の溶液（製造例４）２０ｋｇ、卵黄３０ｋｇ
、グラニユー糖１０ｋｇに水を加えて全量を１００ｋｇ
とし、これを良く混合した。

次いで９０〜９５℃で１５〜３０秒間殺菌処理し１品温
を７０℃程度にまで急冷し、予じめ殺菌した褐色ビンに
１００ｇずつ充填し、直ちに密栓し、ドリンク剤１００
０本を製造した。

【図面の簡単な説明】

第１図は機能性ペプチドＥＳＰ−２のゲル濾過による分
子量分布を示す図で、第２図はＥＳＰ−２のＵＶスペク
トルを示す図で、第３図はＥＳＰ−２のＩＲスペクトル
を示す図で、第４図はＥＳＰ−２の降圧効果を図示した
グラフである。 代理人　弁理士　戸　１）親　男

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、魚介類を、自己消化処理と蛋白分解酵素処理を同時
   に行って得られたもので、分子量５００〜６，０００の
   機能性ペプチド。 ２、請求項第１項の機能性ペプチドを有効成分とする高
   脂血症の治療及び予防の組成物。 ３、請求項第１項の機能性ペプチドを有効成分とする糖
   尿病の治療及び予防の組成物。 ４、請求項第１項の機能性ペプチドを有効成分とする血
   圧降下及び血管拡張の組成物。 ５、請求項第１項の機能性ペプチドを有効成分とする肥
   満症の治療及び予防の組成物。 ６、請求項第１項の機能性ペプチドを有効成分とする動
   脈硬化症の治療及び予防の組成物。