JPS5870165A - 物質のイムノアツセイ用非遠心分離法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、特定結合アッセイ実施方法の改良に関するも
のである。更に詳細には、本発明は、液相ならびに・固
相が存在する特定結合アッセイを自動的に実施するため
の改良方法に係るものである６よく知られているように
、特定結合アッセイは、結合の限度が未知の配位子の存
在する量の関数である特定の結合反応を標識成分を使っ
てモニターする原則に基いている。公知の方法の中には
次の様な特定結合アッセイのテクニックが知られている
。ラジオイミノアッセイ（ＲＩＡ）、メタロイムノアッ
セイ（ｍｅ　ｔａ　Ｉ　ｌｏ　ｉｒｒｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ　、　Ｍ　Ｉ　Ａ　）、フリーラジカルアッセイ（ｆ
ｒｅｅ　ｒａｄｉｃａｌ　ａｓｓａｙ　ｔｅｃｈｎｉｑ
ｕｅ　。

ＦＲＡＴ）、赤血球凝集抑制（ｈｅｍａｇｌｕｔ　１ｎ
ａｔ　１ｏｎｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　、　ＨＩ　）　、
酵素多重化標識イムノアッセイ（ｅｎｚｙｍｅ　ｍｕｌ
ｔｉｐｌｉｅｄ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　ｔｅｃｈｎ
ｉｑｕｅ　、　ＥＭＩＴ）、螢光イムノアッセイ（ｆｌ
ｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　。

ＦＩＡ）、ルミ木センスイムノアッセイ（ｌｕｍｉｎｅ
ｓｃｅｎｃｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ　、　Ｌ　Ｉ　Ａ
　）等である。これらのテクニックの内のいくつか（Ｒ
ＩＡ、ＭＩＡ、ＦＩＡ、ＬＩＡ）においては、標識をつ
けていない配位子、標識配位子と抗体とから成る混合物
を平衡状態に達せしめ抗体と結合した配位子をフリーな
配位子から分離させることが行われている。

ＲＩＡにおいては、配位子又は抗体を放射性同位元素で
標識化されているが、ＭＩＡでは配位子は金属と同時に
適当な官能基を含有する試薬で標識化されており、これ
により金属試薬をアッセイしようとするハプテンに添加
すること、が出来る。後者についての説明は本出願人の
先願、特願昭５２−６２２８１号において行った。ＰＩ
Ａでは標識は螢光体であり、ＬＩＡでは標識は化学的発
光体又は生物学的発光体である。

フリーな分画と結合分画とを分離する操作は非常に重要
であって、この精度が特定結合アッセイテクニック全体
の感度と正確度を決定する。分離操作の選定ならびに評
′価にあたっては、所望の結果を得るために満たさなけ
ればならない規準を考えることが有用である。理想的分
離に必要な主たる条件を下記に述べる。

（１）結合分画とフリー分画を完全に離し、分離条件中
のエラーに備えて十分な余裕をみるべきである。

（１１）−次抗原一抗体結合反応に干渉すべきでない。

（ｉｉｉ）使用法が簡単、容易で迅速に行えるべきであ
る。

（ｉい安価で、容易に入手可能の試薬と装置を使うもの
でなければならない。

（い−血漿や血清の影響をうけてはならない。

（■１）操作は単一の管内で行わなければならない。

（Ｖｉｉ）オートメーション化に適切。

〜１１Ｄ広範囲の抗原に適切。

（ｉｘ）ＲＩＡにおける操作段階の設計については、放
射能反応システムの取扱いから生じる放射能災害に対す
る最大限の安全を確保すること。

現在利用可能の多種の方法を検討したり、各方法が上述
したような要件の全て又はいずれかをどの程度溝してい
るかを検討するのは本明細書の範囲を超えるものである
。先行技術中量も広く使用されるテクニック■、吸着法
（活性炭、ケイ酸塩）分別沈澱法（硫酸アンモニウム、
エタノール、ジ。

オキサン、ポリエチレン、グリコール）、二重抗体法、
固相法（免疫吸着剤ｐがあるが、これらは全て最終的に
は液状の媒体内の浮遊粒子システムになる。特定のテク
ニックを選択するには化合物の溶解度、°抗血清の特徴
、分画のカウント、非特定結合の程度、放射性同位元素
のタイプ等多くの相関要因を考慮して行う。しかしなが
ら、上記方法全てに共通な特徴は、浮遊固体粒子の凝集
を行う遠心分離工程、これに引続き固相と液相を物理的
に分離する傾瀉（又は吸引）工程を必要とすることで本
る。

テクニオン・リサーチ・アンド・デベロプメント・フウ
ンデーション・リミテッドを譲受人とする先願（特願昭
５５−２９８４４号）において、特定結合アッセイに使
用する方法を開示した。該方法において、遊離分画から
結審分画を券離するのは、溶剤抽出テクニックにより行
い、抽出剤として有ｉ　溶剤ヲ使った。エム・カイス、
エム・シモニならびにテクニオン・リサーチ・アンド・
デペロブメント・ファウンデーション・リミテッドを共
同出願人とする又別の先願（特願昭５５−１７４７７７
号）においては、該溶剤抽出テクニックを実施するため
に設計し、「リデツクス」と命名した装置について開示
した。該発明によれば「リデックス」装置は、ミキサー
／セパレータ（Ｂ）を挿入した混合／貯蔵器（Ｎから成
り、ミキサー／セパレータの縦軸方向に溝を有する。本
質的に不混和性の溶液２種を混合／貯蔵器に導入し、混
合／貯蔵器（Ｎよりミキサー／セパレータ（Ｂ）を出し
入れして２相を完全に混和する。上部と下部相に自発分
離した後、上部相をミキサー／セパレータに押しこんで
除去し、該上部相が集積容器（Ｅ）内に集められる。

前記共同出願人の更に別の先願（特願昭５６−１１２３
６４号）においては、特定結合アッセイを含む多様な目
的のだめの質量移送分離（ｙｙＩＨＨｔｒａｎｓ−ｐｏ
ｒｔ　５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　）を選択的バリアーを通
じて行うことを開示した。該発明は特願昭５５−１７４
７７号で述べた「リデックス（Ｌｉｄｅｘ　）　Ｊ装置
と類似の新しい装置を開示し、後者においてはバリアー
がミキサー／分離機に位置する、膜を通してのミキサー
／セパレータ内へ液相の流れに対して抵抗値が上昇す′
る事によりミキサー／セパレータ内の密閉要素のまわり
の流体がミキサー／セパレータが下向きに滑降する際に
浸透し、これによりアッセイが干渉をうけるのは言うま
でもない。該欠陥を除去するために、空気が循環してい
るミキサー／セパレータ上に一つ又はそれ以上の水平方
向、垂直方向又は渦巻き状の溝の如きガス用のくぼみを
装置上に配、し、バリアーにかかる圧力を減少させて、
密閉要素のまわりの液体の該浸透を避けるものとする。

該発明は多様なシステム、相異なる膜、溶剤のタイプ及
び／又は沈澱物に関して、非常に良い結果をもたらすこ
とが見出された。

イムノアッセイにおける主要な要件の内の一つは、二つ
のアッセイの間の差が最少である結果を再現することで
あって、この示唆するところは外的要因によることなし
に取扱い手動操作を最少にとどめて、工程を完全に標準
化することである。

かかる外因の例としてはアッセイ中の相の混合程度があ
る。別の外的要因は所望の相の分離速度であって、これ
は後刻分析しなければならない。

イムノアッセイに使用するバリアーを有しないリデツク
ス装置においては、質量移送を完全に行うための激しく
且つ完全な攪拌と、二つの液相の間の正確な分離がテス
トで要求される。ミキサー／セパレータ（Ｂ）を混合−
貯蔵器替から手動で出し入れして行う攪拌は定量的には
解釈出来ないのは明らかであり、これはイムノアッセイ
を行う技術者の主体性に依るからである、膜を有するラ
イデツクス装置の場合は、問題は更に複雑となるが、こ
れは異なるシステムが特定の膜及び／又は溶剤を必要と
することがあり、従って混合の程度を多様にし及び／又
は分離の経路を違える必要が生じる、これは手動で操作
する場合、特に再現性を可能な限り改良しなければなら
ないイムノアッセイの場合は、非常に困難であり、時と
して不可能となる。イムノアッセイの技術に精通してい
る技術者でさえも、一定の攪拌期間後に完全な質量転移
が行われるかどうかについては確信がもてない。

一方、攪拌期間が延引すると二つの液が介在する相分離
が容易でなくなり、又は沈澱物がある場合に膜に傷をつ
けることがあったシする。

本発明の目的は、イムノアッセイ・テクニックを実施す
る改良方法を提供することにある。本発明の別の目的は
、遠心分離と傾瀉操作を共に省略するイムノアッセイ・
テクニックを実施する改良方法を提供することにある。

本発明の更に別の目的は、攪拌の程度を主観的に測定す
ることを省略し、相分離を改良ｐるイムノアッセイ・テ
クニックを実施する改良方法を提供することによる。本
発明の又別の目的は、効率の良い質量転移のために必要
とされる徹底的な混合を行う激しい手による作業を省い
てイムノアッセイ・テクニックの改良を提供することに
ある。即ち本発明は、ミキサー／セパレータを挿入し、
ミキサー／セパレータの垂直軸に溝を有する混合貯蔵器
から成り、次のステップの組合せから成る。

（ａ）複数の該混合貯蔵器をミキサー／セパレータと共
に保持するだめの特別設計ラック内に混合貯蔵器を配置
すること。

（ｂ）該混合貯蔵器内に試薬と分析物を導入すること。

（Ｃ）該混合貯蔵器に該ミキサー／セパレータを嵌合す
ること。

（ｄ）試薬と分析物とを上記ミキサー／セパレータを嵌
合した混合貯蔵器内で所要時間の間培養すること。

（ｅ）培養試薬と分析物と上記セパレータとを載置した
ラックを下降運動を規制速度で行うように特に設計した
プレス装置内に入れ、これにより−ミキサー／セパレー
タは選択速度により所定の距離だけ混合貯蔵器内へ下向
きに押されて所望の質量転移と分離操作を完了すること
。

（「）該プレス装置の下降運動を所定の速度と距離で行
うこと。

（ｇ）プレス装置の離脱時にラックを除去すること。

（ｈ）セパレータ装置を必要に応じて分離相の内一つ又
は両方の定量的又は定性的測定のだめ所望の分析機器に
入れること。

本方法の特徴は遠心分離やデカンテーション操作を行う
必要がなく、すべての操作を単一試験管装置で行えるも
ので′あり、非常に簡単に実施出来ることである。更に
本発明による方法で得た結果は、先行技術における上記
の公知方法とくらべて大変有利である。

本発明方法の実施を可能にする要因の一つは、本明細書
でプレソマツ）　（ｐｒｅｓｓｏｍａｔ　）としイ言及
する所の（ｅ）段階で利用するプレス装置である。アッ
セイに使用する試験管の数は少なく、実験室レベルで技
術者がたやすく行うことが出来る。しかしながら、各試
験管を個々に操作しなければならずそのため多数の分析
を行うルーサンな手順の実験室では時間が非常にかかる
。？、また手順標準化を行って外部要因に左右されｔい
ように、することが最も望ましい。圧縮空気メカニズム
又は電動モータのどちらかに基〈プレソマットの種々の
モデルは、いずれも満足すべきものであった。第１図（
ａ）は分離開始時におけるプレンマット１を示し、２個
の試験管ラック２，２を有し、それぞれ２０個のリデツ
クス装置３を保持している。第１図（ｂ）は操作の最終
時における同じ器具を示し、４０本の試験管全部の中の
分離器が所定の最終位置にプレス台４により押し下げら
れ、また分離益金ての中のストッパーＳが年収容器Ｂを
全部密閉した状態を示す。後者の操作は、リデツクス分
離器内の排気をにがすために、プレス台４を下方へ動か
す場合の最後の段階においてだけ行われる。本操作の終
了時に（本発明者らの実験では合計時間は３分以内であ
った）プレス台４は自動的に逆転し、器具の始動位置に
戻る。上向きの動きが紬まると同時に（ＬＥＤディスプ
レイに示される）試験管ラック２゛は、カウンターへ移
動させるためプレンマットから除去する。

プレンマット（第１図）は、台（プレス板４）の動きが
ラック２内のりデツクス分離器と直接接触して押圧する
移動板に連結されたモータ５による密閉プレスの形式構
造を有する。プレンマット装置は、操作中に働く圧力の
結果ひき起される伸び変形を耐えうるものである。モー
タ５は、空気圧、油圧、空気圧−油圧の組合せ又は電気
モータ２でもよく、また直接又は移動板に変速システム
を介して連結することができる。モータは操作の要求に
より移動板の昇降′速度調整を行う制御機構（図示せず
）を有している。プレンマットの操作は非常に簡単であ
る。ンタートボタンを押すと、移動板は下降運動をはじ
め、所定の下降速度ならびに事前に選択した圧力でリデ
ツクス分離器を押圧しはじめる。台４が所定の最下位置
に到達すると、グレソマット内へ事前に導入した試験管
ラック２内のりデツクス分離器全部を等しく閉鎖するた
めに必要且つ所定の時間だけその位置に台を保持する遅
延機構の操作を開始する。この遅延時間が終ると、プレ
ス板４はリデツクス分離器から離脱し、所望の速度で上
向に動き始め、最初の位置〔第１図（ａ）〕に戻る。こ
の段階でプレンマットは次の操作の準備がととのってい
る。

第２図は、イムノアッセイ法に特に有用なりデツクス分
離器の分離操作の開始時〔第２図（ａ）〕と終了時〔第
２図（ｂ）〕を示す概略図でちる。液相しに最初に懸濁
された固体の粒子Ｐは完全に分離され、混合貯蔵器Ａの
底部に保持されている。第２図で示したシステムの他の
特徴は分離器Ｂの軸の溝Ｃにおいたプラスチック製ロッ
ドＲである。本ロッドＲの目′的は、年収容器Ｂへ液相
等前を置き換えるためのものである。ロッドの寸法は溝
Ｃを通る液相の自由な流れを妨げないようにし、同時に
微量の液体が分離操作終了時に溝Ｃに残っているような
寸法とする。その結果、固体と液体相の間で遮蔽された
放射能は、個々に且つ物理的又殆んど完全に分離される
。これはストッパーＳによる密封と同時にアッセイ案に
対し、柔軟性を与える意味で重要である。

正常又は逆向きの位置でカウンターの窪みの中に分離器
をおくだけでガンマ線放射トレーサで固体相及び／又は
液相の両方を随意に計量することができる。

第３図は、分離装置をもつラックの例であり、アッセイ
の手動ビベテーション段階での混合貯蔵器Ａが明視出来
るような、又プレンマット装置に適合するような設計で
ある。

明細書中に記載のリデツクスＰＳ分離器を使用するアッ
セイ案は次の通り構成されている。

（１）一連の混合貯蔵器Ａは対になっているが、試験管
ラック内に配置され、アッセイ試薬、標準試料、臨床試
料がキットの説明書道りに添加される。

（１１）混合貯蔵器は°所定の最初のインキュベーショ
ンの間装置する。

（齢アッセイ用沈澱（又は吸着）試薬を添加して全反応
量が１５〜２０ｍ１となるようにした。

６ｖ）リング０、膜Ｍ１ディスクＤ５０ツドＲを具備し
、ストッパーＳを僅かにかぶせた分離器Ｂを、第２図（
ａ）に示す様に、試験管Ａ内に導入し第２回目のインキ
ュベーションのために放置する（後者がアッセイに必要
でなければ、次の段階に直接移行する）。、 （いリデックス分離器を保持する２個の試験管ラック（
第３図）をプレソマット内におき、器具の操作を開始す
る。

（■１）操作完了後（３分）、混合貯蔵器ラックはプレ
ソマットから取り除き、リデックス分離器をカウンター
へ移動する。

蛋白結合分析を専門に行っている臨床試験所は多くの問
題に直面している。従って、数ケ所から送られてくる膨
大な試料の処理をせねばならず、経験の浅い臨床家に代
って、結果の意味を読みとり、広い範囲の測定値を提供
し、迅速に結果を報告し、中でも各アッセイが正確であ
る様にしなければならない。これは臨床生化学において
使用される他のアッセイの形式と比較して、人手ががが
り、複雑且つ高価であるテクニックにつきものの経済的
困難にも拘らず行わなければならない。分析担当者が試
薬の質、分析案の正確さに依存できるとすれば、商業用
キットにＲＩＡ試薬が容易に入手可能となり始めたとい
う事実からみても、問題の内いくつかは軽減するかもし
れない。高品質の試薬があれば、結合状態のもの、フリ
ーのものの分離は、我々の意見ではアッセイ手法中の最
も重要な段階となろう。本発明による新方法の有効性は
、リデックスＰＳ分離装置とプレソマット器具（第１図
）による自動化の特徴にもとづいているが、商業的キッ
トで最も広範囲に使われる分離器−くし 薬シスアムいくつかを使って実験した。普通に使われる
分離試薬をいくつか使ってみるため、キット案では遠心
分離とデカンテーションを必要とする＋２５　Ｉ　−Ｒ
Ｉ　Ａキットを選び、これを分離試薬によって４種類に
分離した。

（ａ）二重抗体（ＤＡＢ）（プロラクチンとＦ８Ｈキッ
ト　）　、 （ｂ）二重抗体／ポリエチレングリコール（ＤＡＢ／Ｐ
ＥＧ）（フェリチン、エストリオール、コレステロール
、テストステロン、フロゲステロン、β−ｈｃｏ、イン
シュリン、ｈＰＬキット）、（Ｃ）固体相（不溶性Ｔ４
−抗体）１ （ｄ）活性炭（ジゴキシン・キット） 上記すべては遠心分離を必要としないリデックス分離法
の実施可能性と潜在性を明らかにした。

ここに示す結果は全て、リデックスＰＳ分離装置に市販
キットを適合させるための事前の作業を行うことなしに
行い得たことを強調したい。高品質の試薬を使用し、リ
デツクス・アッセイ案（インキュベーション、反応量、
沈澱試薬）の適性化を行って実験を行った場合は、リデ
ックスＰＳ方法を使ったアッセイの結果は商業的キット
を使ったアッセイで得られたものと十分比肩し得るもの
であった。

予備結果によれば、適当な遮断膜があれば、沈澱や吸収
試薬の添加を必要とすることなく最初のインキュベーシ
ョン段階の直後に、リデツクス分離装置の使用が可能と
なる。

明細書前文において先行技術分野において集大成された
理想的な分離テクニックの主要件を゛列挙した。得られ
た結果に基いて、本発明方法は次の様な利点を有する。

（１）完全に、あるいはそれに近い形で結合あるいはフ
リーの分画を分離出来るが、分離条件のエラーは大巾に
みるものとする。

（１１）最初の抗原−抗体結合反応を干渉しない。

（ｉｉｉ）使用が簡単、容易かつ迅速である。

（１０安価で、入手容易な（又は近い将来そうなる）試
薬と装置を使用する。

（Ｖ）血漿や血清の影響をうけない。

（ｖｌ）すべての手動操作は単一管／分離装置内で行わ
れる。

（ｖｉＤオートメーション化に非常に適している。

（Ｖｉｉｉ）広範囲の抗原に応用可能である。

（ｉＸ）分離器装置の方法と設計によシ放射性反応混合
物との潜在的接触を事実上なくし、放射性災害について
最大限の安全を確保する。

以上本発明を特定の実施例について説明したが更に変更
が可能であり、本特許は発明の変更、利用および適用を
カバーする様に意図としており、本発明の関連技術分野
で公知の又は通常行われるが如き且つ前記の本質的特徴
に適用可能であシ、更に又本発明の範囲内に在る本明細
書の開示からの逸脱をも含むことが理解されるで・あろ
う。本発明を更に例示し、その実施の方法を明らかにす
るため以下の通り実施例を記載するが、これは本発明の
理解の一助とするのみであって、限定であるとされては
ならない。

実施例 本発明による方法を下記の分離試薬と関連して使用した
。

ａ）二重抗体 ｂ）二重抗体／ＰＥＧ Ｃ）固体相アッセイ ｄ）活性炭 各試薬について少くとも二つの実験を平行して行った。

実験のうち、一つは遠心分離とデカンテーション操作を
含むキットの指示に正確に従った。

もう一方の実験では、リデツクスＰＳ分離器や、試験管
、プレソマット器具を結合又はフリー分離に使用したこ
とを除いては、試薬、基準試料、臨床試料の添加、イン
キュベーション時間についてキットの指示に従った。更
に全反応量は必要に応じて調整した。

（ａ）　＋２５Ｉ−ＦＳＨと１２５Ｉ−グロラクション
［：ＨＰＲＬ）アッセイで得られた標準曲線を、第４図
（ａ）および（ｂ）にそれぞれ示す。二つのアッセイで
保持された臨床血清価の比較を第１表（ＦＳＨ）および
第２表（ＨＰＲＬ）に示す。二重抗体（山羊、杭先Ｉｇ
Ｇ　）が沈澱試薬でたった。

（ｂ）二重抗体／ＰＥＧ（２０％）を第４図（Ｃ）で示
した標準曲線・を得た１２５Ｉ−フェリチンアッセイの
だめの沈澱試薬として使用し、臨床血清価は第３表に示
す。沈澱７ステムの使用はピペット操作を２鼎１５分間
インキュベーションの追加を要した（二重抗体添加後）
。二重抗体／’ＰＥＧ（８％）試薬のプレミックスをピ
ペットで一度操作することにより直ちに沈澱が生じ、２
度目のインキュベーションは必要ないことを見出した。

リデツクス分離器と関連して、本試薬の有効性が同様に
１′Ｉ−エトトリオール〔第６図（ａ）〕、コルチゾル
〔第６図（ｂ）〕、〕１２５■−テストステロン第６図
（Ｃ）〕、〕宜２１１−プロジエステロン第６図（−）
〕、＋２５Ｉ−ＢＨＧ（第５図（ｅ）　）　、ＵＳ　Ｉ
−インシュリン〔第５図（ｄ）　）　、Ｉｆ！ＩＩ−ｈ
ＰＬ７図（ｂ）〕、ＰＡＰ（第７図（Ｃ）〕、α−ＦＥ
Ｔ／）蛋白〔第７図（ｄ）〕の標準曲線により明らかと
なった。

（Ｃ）リデツクス分離器法は固体相イムノアッセイとの
使用に著しく適している。−例を１２５Ｉ−チロキシン
固体相アッセイ（固定された抗体）について示す。標準
曲線を第４図（ｄ）に示す。二つの曲線（キット法とり
デツクス法）が上記におけるほど完全には重ならないが
、各曲線から計算した臨床血清価はほとんど同一であっ
た（第４表）。

（ｄ）活性炭をリデヅクス分離法に関して吸着剤として
１２５Ｉ−ジゴキシン・キットとあわせて使用した。本
実施例では三つの実験を平行して行い、キットの指示（
２０分間の遠心分離とデカンテーション）を正確に守っ
て得た結果を、選択的ノ（リアを使ってリデツクスＬＤ
分離器と溶媒抽出法を使用するアッセイと新規のりデツ
クスＰＳ分離器を使用するアッセイから得た結果と比較
した。後者の実験においては、分離器の集成容器Ｅへ液
相で移転された結合分画を先端を覆ったりデツクスＰＳ
分離器を逆にカウンター内の窪みにおいて計量した。三
つの実験の標準曲線を各図に示す。臨床的血清試料のジ
ゴキシン濃度は他の実験室（シバ国立病院）で他の商業
的キット（診断用製品）を使って同じ血清について得た
結果と比較するだめの盲実験を行い、三つの分析すべて
について測定した。データを第５表に示す。

公知のキットでの比較データを得るだめ類似の実験をい
ろいろな臨床血清を使用して行い、第１〜）４表に示す
。

同様な方法で、酵素イムノアッセイＨＰＬノステイコン
エリザシステムおよび固相ジエンタミシン（ＧＥＮＴＡ
ＭＩＳＩＮ　）螢光イムノアッセイについても比較試験
を行なった。

（以下余白） 第１表　　キットプロトコル（遠心分離）およびリデツ
クスＰＳ法でＭ９　　　　　　　　　　　　　　　１５
．６７　　　　　　　１６．０３Ｌ　　　　＋　　　　
　　　　　　　　　　３．７５　　　　　　　　３．４
７８　　　　　　　　　　　　　　　　５９．４８　　
　　　　　５７．５９Ｈ（１：２）　　　　　　　　　
　　５９．６Ｂ　　　　　　　　５３．４５９メノプ（
ｍｅｎｏｐ、）　　　　　　　　４７．１９　　　　　
　、　３７．１５ｓ　　　１：２　　　　　　　　　　
５３．１０　　　　　　　３７．０４ｎ　　　１：、４
　　　　　　　　　　５Ｇ、Ｑ４　　　　　　　４４．
０４Ｑ　　　　　　　　　　　　　　　　　　６．１０
　　　　　　　　７．０１Ｑ　　　　　　　　　　　　
　　　　　　Ｏ，６１０，６２ｃｆ１３．０７　　　　
　　　　３．３２０’７　　　　　　　　　　　　　　
　　４，１９　　　　　　　　５．１９ＬＨＲＨＳｉｍ
　　Ｏ’　　　　　　　　　　８，１１　　　　　　　
　９．１０ｔｔ　　　　　３０’　　　　　　　　　１
１．６９　　　　　　　１０．７８／Ｆ　　　　　６０
’　　　　　　　　　１４．９８　　　　　　　１４．
３５オルソ　ＩＩＩ　　　　　　　　　　　５．６９　
　　　　　　４．３１オル７　　ＩＶ　　　　　　　　
　　　　４．２１　　　　　　　　３．８４オルソ　ｌ
０ＴＩＯ２Ａ　　　　　　　　９．２６　　　　　　　
１１．８７オルソ　ｌ０ＴＩＯ２Ｂ　　　　　　　　４
．４５　　　　　　　４．６２オルソ　ｌ０ＴＩＯ２Ｃ
３，６４２，７７第２表　　キットプロトコル（遠心分
離）およびリデツクスＰＳ法でＭ　９　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　１１．６８　　　　　　　　　
１３．９６Ｍ７　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　１０，００　　　　　　　　　　９．６７Ｌ　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　、　　　４．０７　
　　　　　　　　　５．０８Ｈ’７６．４２　　　　　
　　　１００．７７Ｈ（１：　２．）　　　　　　　　
　　７５．６４　　　　　　　７９．８０♂　　　　　
　　　　　　　　　　　２．４０　　　　　　　　２．
６５ｏ’　　　　　　　　　　　　　　　　ｓ、ｚｓ　
　　　　　　　　６．１８Ｑ　　　　　　　　　　　　
　　　　　４．０２　　　　　　　　４．４３Ｑ　　　
　　　　　　　　　　　　　　９．９４　　　　　　　
１０．７３メノプ（ｍｅｎｏｐ、）　Ｑ　　　　　　　
　　　７．３１　　　　　　　　　７．７１メノプ（ｍ
ｅｎｏｐ、）　９　　　　　　　　　４，７０　　　　
　　　　　６．７８オルソ−リガンド １０ＴＩＯ２Ａ　　　　　　　　　　　１．８９　　　
　　　　　１．９０１０ＴＩＯ２Ｂ　　　　　　　　　
　　１，５８　　　　　　　　１．５３１０ＴＩＯ２Ｃ
１，８４２，７６ 第３表　キットプロトコル（遠心分離）およびリデツク
スＰＳ法１　　　　　　　〈　２０　　　　　　　　　
〈　２０２　　　　　　　　（２０（２０ ３７１，４７０，３ ４３２，１３６・３ ５　　　　　　　　１３５．７　　　　　　　　　１３
１６　　　　　　　　５６．７　　　　　　　　　　６
５．４７　　　　　　　〈　２０　　　　　　　　　〈
　２０８　　　　　　＜、２０　　　　　　　　（２０
第４表　キットプロトコル（遠心分離）およびリデツク
スＰＳ法Ｍ９　　　　　　　’　　　　　　　　　６．
７６　　　　　　　　　　　６．６２Ｌ　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　１．７０　　　　　　　　　
　　　１．３０Ｍ　　　−２２，４４）２０ 血漿−５９，６６９，８０ 血漿−１８１６，８４１７，８０ 血漿−６９，７６１０，５８ 血漿−３０５，０５４，５Ｂ 血漿−２０７，００７，７５ オルンーリガンド １０ＴＩＯ２Ａ　　　　　　　　Ｏ，６１０，６７１０
ＴＩＯ２Ｂ　　　　　　　　７，２４　　　　　　　　
　６．７４１０ＴＩＯ２Ｃ１３，６１１５，２４ 第５表　キットプロトコル（遠心分離）、リデツクスＬ
Ｓ（溶媒抽出）、リデツクスＰＳ法および（別の）シェ
μ・ホスピタル・ラボラトリ−（異なるキットで遠心分
離）で得られたジゴキシン臨床血清値ジゴキシン濃度（
ｒＬｇ／ｒｒＬｌ） １　　　０．５　　　　０．３　　　０．５　　　　０
．４２　　　１．８　　　２．３　　　　１．９　　　
　２．２３　　　　　　０、７　　　　　　　０．９　
　　　　　０．９　　　　　　　１，０４　　　　　　
０、５　　　　　　０．７　　　　　　　０．６　　　
　　　　０．６５　　　　　　１．４．　　　　　　　
１．５　　　　　　　１．６　　　　　　　　１，６６
　　　　　　１．０　　　　　　　１．４　　　　　　
　１．４　　　　　　　　１，３７　　　　　　０、３
　　　　　　　０．７　　　　　　　０．７　　　　　
　　０．５８　　　　　　０．７　　　　　　　１．１
　　　　　　　１．２　　　　　　　　１，４９　　　
４．１　　　　４．１　　　３．４　　　　５．７第６
表　バイオデータキットプロトコルおよびリデツクス法
最高結合 （％）　　　　　　３２，２　　　　２９．０　　　　
４５Ｎ、　Ｓ、　Ｂ　　　　　　３．７　　　　６，９
　　　　　９．５３１．２　ｐ９７ｆｎｌ’　　　７０
，０　　　　６８．４６２．５　　ｔｔ６８．０　　　
　５７．５１２５、Ｏｒｔ　　　　５４．７　　　　５
０．１２５０　　＃　　　　４２．２　　　　４０．７
５００　　ｔｔ　　　　３４．３　　　　３３．２１０
００　　ｎ　　　　２８，９　　　　２４．７２０００
　　＃　　　　１９．７　　　　１９．３Ｂｒ、Ｓ、　
５６　　　Ｂｒ、　８．５７第７表　　セロノキットプ
ロトコルおよびリデックス法に最大結合　　４０７チ　
　　４１３％　　４４．１チＣ０Ｒ，１，１９１，２３
１，１８ １０，９３０，９４１，０６ ２０，９６０，９９１，０３− ３０，９６０，９７１，０ ４０，９４０，９７０，９９− ５０，９８１，６１，０３− ６０，９６０，９９１，０１− ７０，９７０，９９０，９７− ８１，１１１，１２１，１３ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ
９　　　　　　　１．１２　　　　　　１，１６　　　
　　１．１９　　　　ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅｌｏ　
　１．３１１．３５０．９４　＋１１　　　　　　　　
１．８１　　　　　　　１，９２　　　　　０．９２　
　　　　　　＋１２　　　　　　　　３．４６　　　　
　　　４．５４　　　　　　５．０５　　　　　　　　
＋１３　　　　　　　　３．５８　　　　　　　４，７
６　　　　　　４．４１　　　　　　　　＋１４　　　
　　　　　１．３５　　　　　　　１．４３　　　　　
１．４８　　　　　　　＋１５　　　　　　　　１．８
１　　　　　　　１，９３　　　　　　１．１５　　　
　　　　　＋１６　　　　　　　　１．４６　　　　　
　　１．６１　　　　　　１．７４　　　　　　　　＋
第８表　　ヒポラブキットプロトコルおよびリデツクス
法最高結合 移）　　　　　　　６９，８　　　　　７３゜８６５７
１２．５　　　＄６　　１０２　　　　　　９４．２２
５　　　　　　＃　　　　　　　９０，４　　　　　　
　　８３．２５０　　　　　　ＩＩ　　　　　　　７９
．１　　　　　　　　７３．８Ｚｏｏ　　　　　　＃　
　　　　　　６２　　　　　　　　　６２２００　　　
　　　ｐ　　　　　　　　４２　　　　　　　　　４０
４００　　　　　　ｔｔ　　　　　　　　２６．５　　
　　　　　　２６セロテスト　　　　９４，７　　　　
　７７．９　　　　　　８９．１１）　　　　　　　）
ｓｏｏ　　　　　：＞ｓｏｏ　　　　　　：）ｓｏ。

２）８．１　　　　　．１５．６ ３）　　　　　　　　　１６，２　　　　　１９．０第
９表　　ヒポラブキットプロトコルおよびリデツクス法
に最大結合 （チ）　　　　２３．６　　　２８，８　　３９．２２
　ｍＩＵ７ｆｎｌ　　８５．７　　　８９．９５　　　
　　＃　　　　　　　　６３．９　　　　　　　　　６
９．６１０　　　　　＃　　　　　　　４９．０　　　
　　　　　　５１．３２０　　ｐ　　　３ｔ４３３．７ ４０　　　　　ｐ　　　　　　　２１．１　　　　　　
　　　２２．３１００　　　　７Ｆ　　　　　　　　　
５．５　　　　　　　　　　７．２ｊ）　　２３０　　
　２．３　　　　３．３　　　　ｚ、８第１０表　　ヒ
ポラブキットプロトコルおよびリデックス法によるＴ、
Ｕ、Ｅ、（全尿エストロゲン類）臨床血清値（ｎｇＡｌ
）（チ）　　　　　　　　ａ　９．４　　　　　　２２
，８　　　　　　３５．９０．５　　リ／ｍｌ　　　　
　８２．８　　　　　　８３．６１　　　　ｔｔ　　　
　　　７１，６　　　　　７５．３２　　　　ｐ　　　
　　　６２．６　　　　　６４．２４　　　　ｔｔ　　
　　　　３３．４　　　　　　３７．５８　　　　ｔｔ
　　　　　　１４．６　　　　　　１６．１セロテスト
　　　　４７．３　　　　　４４，９　　　　　２９．
４８０ 平均 ８０ 雌　　　　　　　５４．８２　　　　　４９．１４雄　
　　　　　　４７，１　　　　　　４２．６第１１表　
バイオデータキットプロトコルおよびリデックス最大結
合 （％）　　　　　６２．９％　　　６０．２　％０．１
２５　　ｎｌ、４ｎｌ　　　９６．２　　　　９６．０
０．２５　　　　　　Ｉｆ　　　　　　　９２．６　　
　　　　　　９４．５０．５　　　　　　７　　　　　
　８２，１　　　　　　　　８３．２１．０　　　　　
　　／／　　　　　　　５９．９　　　　　　　　　６
１．９２．０　　　７Ｆ　　　　４２，７　　　　３８
．９４．０　　　　／／　　　　２５．９　　　　２６
．１セロテスト　　　　０．８２　　　　０．６８ＤＩ
Ｌ　　１．２　　　１，０２　　　　０．６ｎｌ／／ｍ
ｌ　　　　　ｎｌｉ／ｍｌ 正常値：　ｏ、ｅ　−１，７ｎｉｌ／ｍｌ第１２表　　
ヒポラブキットプロトコルおよびリデックスにＴ、Ｃ，
Ｔ、Ｃ。

１：１　　　　　　　１６８６．２　　　　　８．９％
　　　　２６２５．７　　　　１３．９１：２０　　　
　　　２０１４．６　　　　　１０．６％　　　　３９
０２．５　　　　　２０．６１：１００　　　　　２９
１７．０５　　　１５．４各　　　　５９８２．２５　
　　３１．６１：１０００　　　　３３２６．９５　　
　　１７．６％　　　　７１２０．８５　　　　３７．
７１　：１００００　　　５２４５．３５　　　２７ｊ
：Ａ　　　　　８３４７．３５　　　４４．１１：２０
０００　　　６２６９．２　　　　３３．ＩＪ　　　　
　９１０２．５５　　　　４８．ＩＰ、Ｃ０４７２６，
９２５，０２７８９１，５４１，７Ｎ、Ｃ，８８６，９
４，６１８８０，１５９，９ａ）　　　　　　１６５０
．１５　　　８．７　　　　１５４０．４５　　　８．
１ｂ）　　　　　　１５７０．９６　　　８．３　　　
　１９５５．９　　　１０．３ｃ）　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　１７７７．２５　　　９．４第１
３表　ヒポラブキットプロトコルおよびリデツクス法に
最大結合 （チ）　　　　　４１３％　　　　４１．８チ　　　５
８．６チ０．６２μＩＵ／ｆｎｌ　　　９８．６　　　
　９５．８１．２５　　ｔｔ　　　　８５．７　　　　
８７．２２．５　　　ＩＩ　　　　７６．３　　　　７
８．６５．０　　　＃　　　　４９．７　　　　５９．
８１０．０　　７　　　２８，１　　　　２９．８２０
、Ｏｔｔ　　　　１４．０　　　　１Ｂ、２臨床サンプ
ル セロチスト　　　　　４，６２　　　　　７．９４５．
ＩＤ１ｌ　１：２　　４．２　　４，３７　　４．４ａ
）　　　　　２，０６　　２．４１ ｂ）　　　　　１，７８　　１．９８ ｃ）　　　　　２，９１　　３．０５ ｆ）−−一−−−ユ悲−−−コ、９９−一−−−一一第
１４表　　バイオデータキットプロトコルおよびリデッ
クス法ａ）　　１５１　　　　　　２．７９　　　　　
３，５３　　　　　　２．７ｂ）　　１６８　　　　　
　８，７８　　　　　９，４８　　　　　　６．６ｃ）
　　２２７　　　　　　６．５５　　　　　６，７３　
　　　　　５．６ｄ）　　２２８　　　　　　５．９７
　　　　　７，５１　　　　　　５．６ｅ）　　２５６
　　　　　３１．９　　　　　３４．７４　　　　　３
４ｆ）　　２６８　　　　　８１．１８　　　　　７２
．７５　　　　　６０ｇ）　　２７７　　　　　３３．
１７　　　　　３１．０　　　　　　２５ｈ）　　６５
１　　　　　　２．４　　　　　　２．６６　　　　　
　−ｉ）　　６５８　　　　　　１．３９　　　　　２
．５６　　　　　　２ｊ）　　６６１　　　　　　１．
９８　　　　　２．６４　　　　　　２．４ｋ）　　６
８１　　　　　　８．９８　　　　　１０，５６　　　
　　　７．８

【図面の簡単な説明】

第１図（ａ）　、　（ｂ）は本発明方法を行なうだめの
装置の一例を示す斜視図、第２図（ａ）、”（ｂ）は本
発明で使用される分離器の一例を示す断面図、第３図は
本発明で使用されるラックの一例を示す斜視図、第４図
（ａ）、　（ｂ）　、　（Ｃ）　、（ｄ＞、第５図（ａ
）　、　（ｂ）　、　（Ｃ）　ｔ　（ｄ）　、第６図（
ａ）　、　（ｂ）　、　（Ｃ）　、　（ｄ）および第７
図（ａ）　、　（ｂ）　、　（Ｃ）　？　（ｄ）は各試
薬の有効性を示すグラフである。 １・・・プシＶマット、２・・・ラック、３・・・リデ
ックス装置、４・・・プレス台、５・・・モータ。 特許出願人　　　テクニオン、リサーチ、アンド、デベ
ロプメント、ファウンデーション、リミテッド ミカエル、カイス。 モークエ、シモニ 、−３８３ 第１ （ａ） 図 （０ン 第３図 第 （ｏ） （Ｃ） ４図 （ｂ） （ｄ） ２］てル毛ン濃皮　６９％） 第 （０） オシシＬン’１９　　（ｎｇｔｒｒｄ）（Ｃ） ズトル毛、ン濃＆　　　ｔｍｒｕｉｒｒＩ）（ｂ） ノド、Ａ（ン導ノタミ　　（ｍｉｌｌ／ｒｎｌ）（ｄ） 、ホｔｌｙ　ＥンＪ　）’ｉ−（ｐ　Ｉｕａｍ　ｌ　）
第 （ａ） （Ｃ） ホルを源泉（ｎｇ／ｍ１） （ｂ） （ｄ） ｊ）ｌ／ＴＩＺ＞Ｊ皮　　ｔｎ（ｙｍｎ（ｏ）第 Ｊ（）［４シン−ＪしＦｊ　　　（ｎｇｔｒｎＤ７図　
　３．） （ｄ）

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）混合貯蔵器と、垂直軸に溝を有し、混合貯蔵器に
   密接に嵌合したミキサー／セパレータから成る特別設計
   装置において、 （ａ）複数の混合貯蔵器をミキサー／セパレータと共に
   保持するように特に設計したラックに該混合貯蔵器を配
   置すること、 （ｂ）該混合貯蔵器内に試薬と分析物を導入すること、
   （Ｃ）該混合貯蔵器に該ミキサー／セパレータで嵌合す
   ること、 （ｄ）試薬と分析物とを上記ミキサー／セパレータで嵌
   合した混合貯蔵器内で所定時間インキュベーションを行
   わせしめること、 （ｅ）上記のインキュベートした試薬・と分析物と共に
   セパレータ装置を載置したラックを、規制速度で下降運
   動を行うよう特に設計したプレス装置に載置して、ミキ
   サー７／セパレータを所定の速度で且つ事前に定めた距
   離だけ混合貯蔵器内に押圧し、所望の質量移送と分離操
   作を行わせしめること、（ｆ）該プレス装置の下降運動
   を事前に定めた速度と距離だけ行うこと、 （ｇ）ラックをプレス装置の離脱時に取り除くこと、及
   び （ｈ）分離器装置を所望の分析機器内におき、必要に応
   じて分離相の内のどちらが一方、又は両方の定量又は定
   性測定を行うこと の操作手段のｒ合せから成る遠心分離なしにイムノアッ
   セイを行う改良方法。 （２）イムノアッセイ法は、ラジオイムノアッセイ、ケ
   ミルミネセンス、バイオイムノアッセイ、酵素イムノア
   ッセイ、螢光イムノアッセイ、メタロイムノアッセイお
   よびこれらの組合わせである特許請求の範囲第１項に記
   載の方法。 （３）プレス装置はプレス板の運動がモータにょシ生ず
   る閉塞プレスの形で形成されてなる特許請求の範囲第１
   項に記載の方法。 （４）モータは空気圧、電気的、液体圧またはこれらの
   結合わせて操作されてなる特許請求の範囲第３項に記載
   の方法。 （５）ラックは検定中に混合容器の最大視、覚用に設計
   されている特許請求の範囲第１項に記載の方法。 （６）ミキサー／セパレータはバリヤーを備えてなる特
   許請求の範囲第１項に記載の方法。 （７）オートマチックに行なわれるものである特許請求
   の範囲第１項ないし第６項のいずれか一つに記載の方法
   。 （８）イムノアッセイは抗原類、ホルモン類、バルビッ
   ル酸塩類、ステロイド類、ビタミン類、トランキライザ
   ー類、医薬類およびアルカロイド類の測定用に用いられ
   てなる特許請求の範囲第１項ないし第７項のいずれか一
   つに記載の方法。 （９）　Ｆ　Ｓ　Ｈに適用される特許請求の範囲第８項
   に記載の方法。 （１０）　ＨＰ　ＲＬに適用される特許請求の範囲第８
   項に記載の方法。 （１１）フェリチンに適用される特許請求の範囲第８項
   に記載の方法。 （１２）チロキシンに適用される特許請求の範囲第８項
   に記載の方法。 （１３）ジゴキシンに適用される特許請求の範囲第８項
   に記載の方法。 （１４）スストラジオールに適用される特許請求の範囲
   第８項に記載の方法。 （１５）プレグスタットに適用される特許請求の範囲第
   ８項に記載の方法。 （１６）　ｈＰＬに適用される特許請求の範囲第８項に
   記載の方法。 （１７）全尿エストロゲンに適用される特許請求の範囲
   第８項に記載の方法。 （１Ｂ）　Ｔ、に適用される特許請求の範囲第８項に記
   載の方法。 （１９）　Ｔｇ　−Ａｂに適用される特許請求の範囲第
   ８項に記載の方法。 （２０）　Ｔ　Ｓ　Ｈに適用される特許請求の範囲第８
   項に記載の方法。 （２１）　酵素イムノアッセイＨＰＬノステイコンエリ
   ザシステムに適用される特許請求の範囲第８項に記載の
   方法。 （２２）固相ジエンタミン螢光イムノアッセイに適用さ
   れる特許請求の範囲第８項に記載の方法。