JPS5886076A - 単細胞タンパク質の産生方法 - Google Patents
単細胞タンパク質の産生方法Info
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- JPS5886076A JPS5886076A JP57109076A JP10907682A JPS5886076A JP S5886076 A JPS5886076 A JP S5886076A JP 57109076 A JP57109076 A JP 57109076A JP 10907682 A JP10907682 A JP 10907682A JP S5886076 A JPS5886076 A JP S5886076A
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- plasmid
- dna
- plasmids
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/32—Processes using, or culture media containing, lower alkanols, i.e. C1 to C6
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は値生物学的方法に関し、さらに詳しくは細菌の
遺体子を組換え、その遺伝子組換え細菌を培誉すること
によりメタノールから単細胞タンパク！（ＳＣＰ）を生
産（′る方法に関する。
遺体子を組換え、その遺伝子組換え細菌を培誉すること
によりメタノールから単細胞タンパク！（ＳＣＰ）を生
産（′る方法に関する。
メタノールおよびアンモニアの微生物による資化によっ
てタンパク質が生産される場合Ｋ、アンモニウム化につ
いては下記（α）および（６）の二つノ愼慎が碓１され
ている。
てタンパク質が生産される場合Ｋ、アンモニウム化につ
いては下記（α）および（６）の二つノ愼慎が碓１され
ている。
（α） 直接（Ｇｌ））４）機構
）１０２ｃ（ＣＨｚ）２ＣＯＣＯ２Ｈ＋ＮＨ３＋ＮＡＤ
（）ＭＨ（ｆルファク゛トグルタレート） 、−”ＨＵｚＣ（ＣＨｚｌｚＣｔｌＣＯ２）ｉ→−ＮＡ
Ｄ （Ｐ ）Ｎｋ（２ （グルタメート） この反応はグルタメートデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）酵
素により接触され、グルタメート生成物１分子当り３分
子ハＡＴＰに相当する１分子のＮＡＤ（Ｐ））Ｉを消費
する。
（）ＭＨ（ｆルファク゛トグルタレート） 、−”ＨＵｚＣ（ＣＨｚｌｚＣｔｌＣＯ２）ｉ→−ＮＡ
Ｄ （Ｐ ）Ｎｋ（２ （グルタメート） この反応はグルタメートデヒドロゲナーゼ（ＧＤＨ）酵
素により接触され、グルタメート生成物１分子当り３分
子ハＡＴＰに相当する１分子のＮＡＤ（Ｐ））Ｉを消費
する。
（６） 二段階（ＧＳ−ＧＵＳ）機構１１（）ｚＣ（
ＣＨ２）２ＣＨＣＯ２Ｈ＋ＮＨ３＋ＡＴＰＨ２ （グルタメート） 二：ＨｚＮＣＯ（ＣＨｚ）、２ｃＨｃＯ２Ｈ＋ＡＬ）Ｐ
＋ＰｊＨ２ （グルタミン） この反応はグルタミンシンセターゼ（ＧＳ ）ｍ素によ
って接触される。
ＣＨ２）２ＣＨＣＯ２Ｈ＋ＮＨ３＋ＡＴＰＨ２ （グルタメート） 二：ＨｚＮＣＯ（ＣＨｚ）、２ｃＨｃＯ２Ｈ＋ＡＬ）Ｐ
＋ＰｊＨ２ （グルタミン） この反応はグルタミンシンセターゼ（ＧＳ ）ｍ素によ
って接触される。
Ｈ０２Ｃ（ＣＨ２）２ＣＯＣＯ２Ｈ＋）１２ＮｃＯ（Ｃ
Ｈ２）２ＣＨＣＯ２Ｈ、Ｔ ’ ２ ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２
）２ＣＨＣＯ２Ｈ＋ＮＡＤ（Ｐ ）Ｈ２ この反応は、グルタメートシンセターゼ（ＧＵＳ’）酵
素によって接触される。この両反応の組合せは１分子の
グルタメートを生成するのに第１段階について１分子の
ＡＴＰを消費し、そして第２段についてＡＴＰ３分子当
量を消費する。
Ｈ２）２ＣＨＣＯ２Ｈ、Ｔ ’ ２ ＨＯ２Ｃ（ＣＨ２
）２ＣＨＣＯ２Ｈ＋ＮＡＤ（Ｐ ）Ｈ２ この反応は、グルタメートシンセターゼ（ＧＵＳ’）酵
素によって接触される。この両反応の組合せは１分子の
グルタメートを生成するのに第１段階について１分子の
ＡＴＰを消費し、そして第２段についてＡＴＰ３分子当
量を消費する。
本明細書における略記号の主なものは下記の通りである
。
。
ＮＡＤ（Ｐ）：酸化された型のＧＤＨまたはＧＵＳ酵素
の補助因子を表わす。
の補助因子を表わす。
ＮＡＤ（Ｐ） １１：還元された型のＧＤＨまたはＧＵ
Ｓ酵素の補助因子を表わす。
Ｓ酵素の補助因子を表わす。
ＡＴＰ ：アデノシン三燐酸を表わす。
ＡＤＰ ：アデノシン三燐酸を表わす１゜１）Ｎ
Ａ ：デオキシリボ核酸であり、関与する該生物の
遺伝物質を表わす。
Ａ ：デオキシリボ核酸であり、関与する該生物の
遺伝物質を表わす。
Ｐｉ ：燐酸イオンを表わす。
ＡＴＰが消費される正確な磯檜は余り問題事項ではない
か、ヒ記２ｖｉ階機構において全体としてＡＴＰの消費
量が大であることは、上記直接機構におげろよりも多く
のメタールが炭酸ガスに変化することにｌｆる。
か、ヒ記２ｖｉ階機構において全体としてＡＴＰの消費
量が大であることは、上記直接機構におげろよりも多く
のメタールが炭酸ガスに変化することにｌｆる。
ここに我々は慎重に検討研究することにより、今までに
提案されている方法によってＳＣＰを製造する際には反
応混合物（培地）！ＩＣ遊離アンモニアおよび／または
アンモニウムイオンの十分な供給がなされるにも拘らず
、上記の２段階機構が支配的であること、そしてもしも
遺伝子を組換えた微生物を採用すれば上記の一層経済的
な直接機構が口」能となることを見出した。
提案されている方法によってＳＣＰを製造する際には反
応混合物（培地）！ＩＣ遊離アンモニアおよび／または
アンモニウムイオンの十分な供給がなされるにも拘らず
、上記の２段階機構が支配的であること、そしてもしも
遺伝子を組換えた微生物を採用すれば上記の一層経済的
な直接機構が口」能となることを見出した。
本発明は、ＣＤＩ（＃素経路によるアンモニア固定を特
異化する遺伝物質を含む微生物を好気的に培豊すること
を特徴とするＳＣＰ製造方法を提供ｔ″口。その遺伝物
質は１例えばプラスミドもしくはシラスミド・）１イブ
リツドのＤＮＡ、またはファージもしくはファージ・／
ｈイブリッドのＤＮＡで、ある。
異化する遺伝物質を含む微生物を好気的に培豊すること
を特徴とするＳＣＰ製造方法を提供ｔ″口。その遺伝物
質は１例えばプラスミドもしくはシラスミド・）１イブ
リツドのＤＮＡ、またはファージもしくはファージ・／
ｈイブリッドのＤＮＡで、ある。
４−、発明の上記方法は、資化性炭素源としてσ）メタ
／−ルとＧＤＨ反応機構を維持するに足る濃度のアンモ
ニアおよび／またはアンモニウムイオンとを含む水性培
地中で実施し、次いで単細胞タンパク′ｊｔまたは単細
胞タンパク負含有組成物をそｆ）水性培地から回収する
ことにより行われる。
／−ルとＧＤＨ反応機構を維持するに足る濃度のアンモ
ニアおよび／またはアンモニウムイオンとを含む水性培
地中で実施し、次いで単細胞タンパク′ｊｔまたは単細
胞タンパク負含有組成物をそｆ）水性培地から回収する
ことにより行われる。
この方法の条件は、メタノール濃度分布が最高の値であ
る帯域（単数または複数）で０．５ｍＭ（ミリモル）μ
上にアンモニアおよびアンモニウムイオンの合計濃度を
維持することを除いて、特公昭５５−１０３８号公報（
英国特許第１３７０ら９２号に対応）および特開昭５０
−５２２７０号公＠ｉ（英国特許第１４５１０２０号に
対応）Ｖこ記載されるような条件であるのが好適である
１、特公昭５’５−１０３８号公報ｅこは水１性培地中
における無機化合物の濃度の好ましい範囲はイオンａ度
（血ｉ４）で下配り）ように記載され、Ｋ’
０．０１〜０．２５Ｍ９” ０．００１〜
０．１ ）’０４−−− ０．０１〜０．５Ｓ０４−’
０．０１〜０．２５その他（Ｃａ ＊ Ｃｕ＋
Ｆｇ ＋ Ｃｏ ｒ Ｍｎ等）装置そしてメタノール
濃゛度はＯ，ＯＳ゛〜１０重ｔチ（特に（）、１〜７．
５電１ｉ％）でｋ）ると記載され、適当な培地組成とし
°ＣＦ記の組成が例示されている。
る帯域（単数または複数）で０．５ｍＭ（ミリモル）μ
上にアンモニアおよびアンモニウムイオンの合計濃度を
維持することを除いて、特公昭５５−１０３８号公報（
英国特許第１３７０ら９２号に対応）および特開昭５０
−５２２７０号公＠ｉ（英国特許第１４５１０２０号に
対応）Ｖこ記載されるような条件であるのが好適である
１、特公昭５’５−１０３８号公報ｅこは水１性培地中
における無機化合物の濃度の好ましい範囲はイオンａ度
（血ｉ４）で下配り）ように記載され、Ｋ’
０．０１〜０．２５Ｍ９” ０．００１〜
０．１ ）’０４−−− ０．０１〜０．５Ｓ０４−’
０．０１〜０．２５その他（Ｃａ ＊ Ｃｕ＋
Ｆｇ ＋ Ｃｏ ｒ Ｍｎ等）装置そしてメタノール
濃゛度はＯ，ＯＳ゛〜１０重ｔチ（特に（）、１〜７．
５電１ｉ％）でｋ）ると記載され、適当な培地組成とし
°ＣＦ記の組成が例示されている。
ＣＨ３０Ｈ２０，０９
、Ｈ３ＰＯ４０，０１６５モル
（Ｎ１１４ ）２８０４ ９．０９Ｍ
９ＳＯ４・７Ｈ２０１，０５９ Ｆ’５ＳＯ４・７Ｈ２０５，０１ｎ！Ｊ（：：ｍＳＯ’
４・５Ｈ２００，１”＃Ｈ３Ｂ（’） ３
０．０７７呼−Ｍｎ３Ｏ４・４Ｈ２０Ｑ
、５ｒｑ ＮｃＬ２ＭＯＯ４Ｑ、ｌ＋ｙｙ ＣａＣ１２・２Ｈ２０１３，２４ツ ＣｏＣｌ２”６Ｈ２００，１ｍｌ 水 全体を１ｅとする菫本発明の
この方法はバッチ式または連続式培豐法で実施できる。
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この方法はバッチ式または連続式培豐法で実施できる。
ＡＴＰ消費蓋が少ないことの結果として、全体的に炭ば
ガス−＼のメタノールの転化率、う１低くなり、従って
この発明方法では微生物の７・駐：ｚｌｔｊ １１こ除
しての発熱が小さくなり、培養温度を３ ＝１〜４５℃
力範囲の好ましい値に維持するのに心安ｔよ冷却の程度
を低減できる効呆がある。微生物がＧ Ｄ Ｈ経路によ
って選択的にかつ好ましくはもっばらメタノールを同化
することにより、培養に程の経済ｔｄｔａ化が達成され
る。
ガス−＼のメタノールの転化率、う１低くなり、従って
この発明方法では微生物の７・駐：ｚｌｔｊ １１こ除
しての発熱が小さくなり、培養温度を３ ＝１〜４５℃
力範囲の好ましい値に維持するのに心安ｔよ冷却の程度
を低減できる効呆がある。微生物がＧ Ｄ Ｈ経路によ
って選択的にかつ好ましくはもっばらメタノールを同化
することにより、培養に程の経済ｔｄｔａ化が達成され
る。
本発明は、Ｕ Ｄ Ｈ酵素生産を特異化するＤＮＡをそ
れぞれ有するプラスミド、またはプラスミド−・・イブ
１１ツド【たはファージ、またはファージΦプラスミド
による遺伝子組換えの結果としてＧＤＨアンモニア固定
機構によりタンパク官有細胞を生理す６た。めにメタノ
ールを同化しうる１または２以ヒの独の好気培養微生物
をも提供する。
れぞれ有するプラスミド、またはプラスミド−・・イブ
１１ツド【たはファージ、またはファージΦプラスミド
による遺伝子組換えの結果としてＧＤＨアンモニア固定
機構によりタンパク官有細胞を生理す６た。めにメタノ
ールを同化しうる１または２以ヒの独の好気培養微生物
をも提供する。
遺伝子組換え微生物の誘導源たるｒ′基本」微生物とり
、Ｃは、符にドｍｌ・ハものをかげることができｔｈｙ
ｌｏｔｒｏｐｈａとしても知られている）この特性は英
国特許第１３７０８９２号明細書にｄ１載さ通「〔いる
。そして菌株培養物はＦｉｔ己のようｖｃを此され（い
る。
、Ｃは、符にドｍｌ・ハものをかげることができｔｈｙ
ｌｏｔｒｏｐｈａとしても知られている）この特性は英
国特許第１３７０８９２号明細書にｄ１載さ通「〔いる
。そして菌株培養物はＦｉｔ己のようｖｃを此され（い
る。
ＮＣＩＢ １０５０８〜１０５１５および１０５９２
〜１０５９６゜ Ｎ１（１（Ｌ ８５３５２〜Ｂ５３６４、砿丁ｕ
Ｊｔ薗寄第１２１５〜１２２７号。
〜１０５９６゜ Ｎ１（１（Ｌ ８５３５２〜Ｂ５３６４、砿丁ｕ
Ｊｔ薗寄第１２１５〜１２２７号。
プソイドモナス・メチロ二カ（ｐＢｅｕ、ｄｏηＬＯｎ
ＣＬ８ｍａｔｈｙｌｏｎｉｃα） こ１）ものの特性は英国特許第１４５１０２０号明細書
に記載され、その培養物は下記Ｊ）ように寄託されてい
る。
ＣＬ８ｍａｔｈｙｌｏｎｉｃα） こ１）ものの特性は英国特許第１４５１０２０号明細書
に記載され、その培養物は下記Ｊ）ように寄託されてい
る。
微工研藺寄第２２４７号（ｎｏｖ、 ｓｐ ）および同
＠２２４８号（ｎｏｖ、ａｐ ）。
＠２２４８号（ｎｏｖ、ａｐ ）。
本発明に使用のためのその他の基本微生物の例としては
下ｉαのものがある。
下ｉαのものがある。
ｍａｔ ノＬａｎｐ ｔ、ｉｃａ ）このものは英国
特許第１３５２７２８号明細書にｍｌ械され、Ａ−ＴＣ
Ｃ２１７０４として寄託され゛でいｌる。
特許第１３５２７２８号明細書にｍｌ械され、Ａ−ＴＣ
Ｃ２１７０４として寄託され゛でいｌる。
このものは英国特許第１３２６５８２号明細書に記載さ
れ、ＡＴＣ，Ｃ２１４３８および２１４３９として寄託
されている。また微工研菌寄第６５９８および６５９９
号として寄託されている。
れ、ＡＴＣ，Ｃ２１４３８および２１４３９として寄託
されている。また微工研菌寄第６５９８および６５９９
号として寄託されている。
ｍｇｔｈａｎｏｔｉｃａ ）
このものは英国特許第１４２０２６４号明細書に記載さ
れ、ＮＲＲＬ Ｂ−５４５８として寄託されている。土
た微工研菌寄第６６００号として寄託され−Ｃいる。
れ、ＮＲＲＬ Ｂ−５４５８として寄託されている。土
た微工研菌寄第６６００号として寄託され−Ｃいる。
ｕｔｉｌｉｓ ）
このものは英国特許第１４４４０７２号明細書に記載さ
れ、倣工ω［薗寄第１６９０および１６９１号として寄
託されている。
れ、倣工ω［薗寄第１６９０および１６９１号として寄
託されている。
１ｎａｓｃｄｉｔａ ）
このものＧ工英国特許第１４４４０７２号明細書に記載
され、ｅＴ研―寄第１６９３および１６９４号として寄
託されている。
され、ｅＴ研―寄第１６９３および１６９４号として寄
託されている。
（ＮＣＩＲは、スコツトランド、アバ−ゾーンのトーリ
イ・リザーチ・ステーションのザ・ナショナル・コレク
ション・オプーーｒンダストリアル・バクテリアであり
； Ａ ’１’ ＣＣは、ジ・アメリカン・タイプ農カルチ
アｍ ニーコレクションであり； １１１ζｋＬＬは、イリノイ州ベオリアの米国農務省で
ｊａ −１，Ｓ、 、、： ｉ ｔているコレクション
である。）、１に発明は、ＩＺ記の棟の儲生物中へにＤ
Ｉ−１機構の籠し子を有するｌまたは２ｕ上のプラスミ
ドあるい１４１または２以とのファージを尋人すること
により遺伝子組換えした微生物を調製する方法を包８１
句。その組換えをプラスミドで行なう場合。
イ・リザーチ・ステーションのザ・ナショナル・コレク
ション・オプーーｒンダストリアル・バクテリアであり
； Ａ ’１’ ＣＣは、ジ・アメリカン・タイプ農カルチ
アｍ ニーコレクションであり； １１１ζｋＬＬは、イリノイ州ベオリアの米国農務省で
ｊａ −１，Ｓ、 、、： ｉ ｔているコレクション
である。）、１に発明は、ＩＺ記の棟の儲生物中へにＤ
Ｉ−１機構の籠し子を有するｌまたは２ｕ上のプラスミ
ドあるい１４１または２以とのファージを尋人すること
により遺伝子組換えした微生物を調製する方法を包８１
句。その組換えをプラスミドで行なう場合。
七ノ）方法は：
（Ｃｃ） 基本微生物から、ＧＵＳｆｉ構によるグル
タメ・−ト合成を特異化する遺伝物置を欠く突然変異株
を生じさせ。
タメ・−ト合成を特異化する遺伝物置を欠く突然変異株
を生じさせ。
ｔｂ）ＧＤＨｍ素の生産を特異化するＤＮＡ４Ｃ共有結
合したプラスミドＤＮＡからなるプラスミド・八・イブ
リッドをＡｌ１１製し、 ｆｔ；ｌ このプラスミド・ハイブリッドをＧＵＳ欠
失欠失麹化微生物入し、 （ｄ） 得られた微生物をＧＤＨ磯構による繁殖に好
適な条件中で培養し。
合したプラスミドＤＮＡからなるプラスミド・八・イブ
リッドをＡｌ１１製し、 ｆｔ；ｌ このプラスミド・ハイブリッドをＧＵＳ欠
失欠失麹化微生物入し、 （ｄ） 得られた微生物をＧＤＨ磯構による繁殖に好
適な条件中で培養し。
（ｇ） Ｇ Ｉ） ｆ１機構により繁殖する微生物の
１または２以ヒのクローンを、“赳釈する、各工程から
なる１゜組換えをファージによって行なう場ａ・、その
方法は、 （ａ） 基本越生物ｈ）ら、ＧＵＳ４１！構によるグ
ル、！メート合１反を特異化する遺伝子物質を欠く突然
変異株を生じさせ、 （す基本微生物のためのフニｊ−ジ１）ＮＡまたはｆン
ペレート・−ツアー） （ｔ 同定Ｌ、（ｃ） その
ファージまたはファージＬ）ＮＡへ、ＧＤ ［１ｍ素の
生産を特異化するＩ） Ｎ Ａ断片を導入することによ
り、ファージ・ノ１イブリッドを生じさぎ、 （力 ＧｔＪＳ欠失基本微生物を７７−ジφ）・イブリ
ッドで溶原化し、 （６） かくして得られた微生物を、Ｇ Ｄ Ｈ機構
によるｍＭに好適な条件中で培養し、 （７１Ｇｌ）Ｈ機構で繁殖する微生物の１または２ｙｈ
のクローンを選択する、各工程からなる。
１または２以ヒのクローンを、“赳釈する、各工程から
なる１゜組換えをファージによって行なう場ａ・、その
方法は、 （ａ） 基本越生物ｈ）ら、ＧＵＳ４１！構によるグ
ル、！メート合１反を特異化する遺伝子物質を欠く突然
変異株を生じさせ、 （す基本微生物のためのフニｊ−ジ１）ＮＡまたはｆン
ペレート・−ツアー） （ｔ 同定Ｌ、（ｃ） その
ファージまたはファージＬ）ＮＡへ、ＧＤ ［１ｍ素の
生産を特異化するＩ） Ｎ Ａ断片を導入することによ
り、ファージ・ノ１イブリッドを生じさぎ、 （力 ＧｔＪＳ欠失基本微生物を７７−ジφ）・イブリ
ッドで溶原化し、 （６） かくして得られた微生物を、Ｇ Ｄ Ｈ機構
によるｍＭに好適な条件中で培養し、 （７１Ｇｌ）Ｈ機構で繁殖する微生物の１または２ｙｈ
のクローンを選択する、各工程からなる。
このような遺伝子組換えを行なうだめの適当な−・般操
作は英国特許出願第３４．９９４７７４号町細書（ドイ
ツ特許公告２５３５５５４号、ｖｆ開昭５１−１２５７
８２号［ｉＪ応）に記載され、公知でゼＮる。
作は英国特許出願第３４．９９４７７４号町細書（ドイ
ツ特許公告２５３５５５４号、ｖｆ開昭５１−１２５７
８２号［ｉＪ応）に記載され、公知でゼＮる。
突然変異株は標準的な技法ＶＣよって作ることかＱ、−
にる。例えばガンマ線、Ｘ線または紫外線のような物理
的突然変異誘発因子、亜揃酸、メタンスル小ネートエス
テル（例：メチルモシくハエチル・エステル）、５−プ
ロ七ウリジン、ループロモウフシル、２−アミノピユリ
ンまたは窒累マスタード０ような化学的突然笈異訪発因
子、あるいはミュー・ファージのような生物学的突然変
異誘発国ｆ−のドで処理することができる。
にる。例えばガンマ線、Ｘ線または紫外線のような物理
的突然変異誘発因子、亜揃酸、メタンスル小ネートエス
テル（例：メチルモシくハエチル・エステル）、５−プ
ロ七ウリジン、ループロモウフシル、２−アミノピユリ
ンまたは窒累マスタード０ような化学的突然笈異訪発因
子、あるいはミュー・ファージのような生物学的突然変
異誘発国ｆ−のドで処理することができる。
欠天曵然変異株を生じさせるような処理が好ましい１１
曲常、突然変異株はなおＧＳ反応を行なう能力を維持し
ているので、唯一の室索源としてアンモニアでなくグル
タメートで生材する能力を基準にして選択することがで
きる。
曲常、突然変異株はなおＧＳ反応を行なう能力を維持し
ているので、唯一の室索源としてアンモニアでなくグル
タメートで生材する能力を基準にして選択することがで
きる。
さらに処理されるために選択される突然変異基本微生物
は％ＧＵＳを欠くことに加えて、トリプトファン合成（
ｔｒｐ ）を特異化する遺伝子Ａおよび／またはＥをも
欠くものであることが好ましい。
は％ＧＵＳを欠くことに加えて、トリプトファン合成（
ｔｒｐ ）を特異化する遺伝子Ａおよび／またはＥをも
欠くものであることが好ましい。
この理由は、所要のｔ； Ｄ ＩＩ特異化プラスミドま
たはファージを生成させるために好都合なれ路は。
たはファージを生成させるために好都合なれ路は。
訃−記に述べるようにｔｒｐ特異化１）ＮＡの存在をも
許容するからである。
許容するからである。
基本値生物の１つへ移入しうろことを条件とじて、プラ
スミドはいずれの源から訪導されてもよ（Ｋｌｅｂｓｉ
ｅｌｌａ ’）がある。［Ｐ 、Ｊ不和合性群のプラス
ミドは、基本微生物として使用されうる種々のダラム陰
性細菌の間に・自由に伝達しうるので、適当である。例
えば１ｉ、 ｃｏｌｉからσ汗ＰＪ群プラスミドＲＰ４
は非常によく伝達することができ、それがどこえ移転さ
れても抗生物質のカナマイシン、テトラサイクリンおよ
びアンピシリンに耐性であるその特性を表わす。
スミドはいずれの源から訪導されてもよ（Ｋｌｅｂｓｉ
ｅｌｌａ ’）がある。［Ｐ 、Ｊ不和合性群のプラス
ミドは、基本微生物として使用されうる種々のダラム陰
性細菌の間に・自由に伝達しうるので、適当である。例
えば１ｉ、 ｃｏｌｉからσ汗ＰＪ群プラスミドＲＰ４
は非常によく伝達することができ、それがどこえ移転さ
れても抗生物質のカナマイシン、テトラサイクリンおよ
びアンピシリンに耐性であるその特性を表わす。
「Ｐ」不和合性群のプラスミドについては、例えばＡ、
１． Ｂｕｋにａｒｉ 等の「ＤＮＡ Ｉｎｓｅｒ
ｔｉｏｎＥ１ｍｍｇｎｔｓ＋ ｐｌａｓｍｉｄｓ ａｎ
ｄ Ｅｐｉｓｏｍｅｒａ Ｊ（３９７７年Ｃｏ１ｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔ−ｏｒｙ
発行発行１標際標準書籍ｌ５ＢＮＯ−８７９６９−１１
８−２）に記載され、同書第６３０−６３１負にはｒＰ
Ｊ不和合性群に楓するプラスミドの一覧表が示されそれ
らのプラスミドについての電殺な特徴が与えられ、また
同書第６７５−６７８頁にはプラスミドＲＰ４の１限酵
素マツプが記載されている。これらのマツプと前記一覧
表の抗性物置耐性とによって「Ｐ」不和合性群のプラス
ミドが定義される。「Ｐ」不和合性群プラスミドＲＰ４
はＥ、 ｃｏＬｉ に含まれ、例えば接合またはトラ
ンスノォーメーションのような慣用法によって他の４Ｉ
ｌｌ−へ移入される。
１． Ｂｕｋにａｒｉ 等の「ＤＮＡ Ｉｎｓｅｒ
ｔｉｏｎＥ１ｍｍｇｎｔｓ＋ ｐｌａｓｍｉｄｓ ａｎ
ｄ Ｅｐｉｓｏｍｅｒａ Ｊ（３９７７年Ｃｏ１ｄ Ｓ
ｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｕｒ Ｌａｂｏｒａｔ−ｏｒｙ
発行発行１標際標準書籍ｌ５ＢＮＯ−８７９６９−１１
８−２）に記載され、同書第６３０−６３１負にはｒＰ
Ｊ不和合性群に楓するプラスミドの一覧表が示されそれ
らのプラスミドについての電殺な特徴が与えられ、また
同書第６７５−６７８頁にはプラスミドＲＰ４の１限酵
素マツプが記載されている。これらのマツプと前記一覧
表の抗性物置耐性とによって「Ｐ」不和合性群のプラス
ミドが定義される。「Ｐ」不和合性群プラスミドＲＰ４
はＥ、 ｃｏＬｉ に含まれ、例えば接合またはトラ
ンスノォーメーションのような慣用法によって他の４Ｉ
ｌｌ−へ移入される。
プラスミド・・・イブリッドは多くのプラスミド綜（例
えば基本微生物中に存在するいずれか１７）プラスミド
）から１Ｍ接生じさせることができる。しかし、それを
取扱う隙に得た多くの経験によれば、薬剤耐性Ｅ、 ｃ
ｏｌｉからのプラスミドＲＰ４は好適便宜な出発材料で
ある。そのとき、第１段階は、多くの異／、Ｃる宿主微
生物中に機軸する能力を維持するけれども薬剤耐性標識
を有しないＲＰ４酩導体を作ることである。（初期の薬
剤耐性標識除去をせずに実施する別法は原理的にはｉＪ
能であるが、大規模実施に′ついては環境に対して危険
である）。
えば基本微生物中に存在するいずれか１７）プラスミド
）から１Ｍ接生じさせることができる。しかし、それを
取扱う隙に得た多くの経験によれば、薬剤耐性Ｅ、 ｃ
ｏｌｉからのプラスミドＲＰ４は好適便宜な出発材料で
ある。そのとき、第１段階は、多くの異／、Ｃる宿主微
生物中に機軸する能力を維持するけれども薬剤耐性標識
を有しないＲＰ４酩導体を作ることである。（初期の薬
剤耐性標識除去をせずに実施する別法は原理的にはｉＪ
能であるが、大規模実施に′ついては環境に対して危険
である）。
これはクラス１１のエンドヌクレアーゼ〔すなわち位置
のｒれた切断点（従って付着性端部２）を会する多数、
７）ｌ） Ｎ Ａ断片を生成させるタイプのエンドヌク
レアーゼ〕での処理により、ＲＰ４上の遺伝情報ＤＮＡ
を切断し１次いでそれらの断片を無作為（γツ［・フン
ダムＬＫ再結介させることにより行うことがＣさる。適
当なエンドヌクレアーゼ（制限＃系）はＥ、Ｃ０ＲＩで
ある。またＤＮＡ断片の再結合は、酵素法、適当にはり
ガーゼを使用することにより実施する。
のｒれた切断点（従って付着性端部２）を会する多数、
７）ｌ） Ｎ Ａ断片を生成させるタイプのエンドヌク
レアーゼ〕での処理により、ＲＰ４上の遺伝情報ＤＮＡ
を切断し１次いでそれらの断片を無作為（γツ［・フン
ダムＬＫ再結介させることにより行うことがＣさる。適
当なエンドヌクレアーゼ（制限＃系）はＥ、Ｃ０ＲＩで
ある。またＤＮＡ断片の再結合は、酵素法、適当にはり
ガーゼを使用することにより実施する。
Ｅ、 ｃｏ）ｊＩはＥ、 ｃｏＬｉ から通常のタンパ
ク分離法で得られる制限酵素の一檜である。前記のＡ、
Ｌ５３ｕｋｈａｒｉ 等の文献の第７５７〜７６’８
頁にはＥ、 ｃｏＲＩ を包含する多くのエンドヌク
レアーゼの基本的な性質が記載されている。またｒ Ｐ
ｒｏＣ。
ク分離法で得られる制限酵素の一檜である。前記のＡ、
Ｌ５３ｕｋｈａｒｉ 等の文献の第７５７〜７６’８
頁にはＥ、 ｃｏＲＩ を包含する多くのエンドヌク
レアーゼの基本的な性質が記載されている。またｒ Ｐ
ｒｏＣ。
ＮＬＬｔ、 ｆｉ、ｋａｄ、 Ｓｃｉ、 ＵＳＡ Ｊ
ｖＪ６９巻第４４号（１９７２年１１月）第３４４８〜
３４５２号にもｉ、ｃｏＲＩＫついての記載がある。ま
た英国のマイルズＣＭｉ１ｍｓ）・ラボラトリーズ・リ
ミテッドのリサーチ・プロダクツφディビジョンの１９
８０年カタログの第８８頁には酵素Ｅ、ＣＯ１ζＩの分
離源が記載され、精製法に関しての）’、Ｊ。
ｖＪ６９巻第４４号（１９７２年１１月）第３４４８〜
３４５２号にもｉ、ｃｏＲＩＫついての記載がある。ま
た英国のマイルズＣＭｉ１ｍｓ）・ラボラトリーズ・リ
ミテッドのリサーチ・プロダクツφディビジョンの１９
８０年カタログの第８８頁には酵素Ｅ、ＣＯ１ζＩの分
離源が記載され、精製法に関しての）’、Ｊ。
Ｇｒ＊ｍｎｇ等の文献ｒ Ｍｔｔｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｎ
１ｏＬｅｃｕＬａｒＢｉｏ、１ｏ（Ｊｕ ｌ （
１９７４年＋ Ｍａｒｃｅｌ Ｂｅｋｋｅｒｌｌ、
＋；、発行、ニューφヨーク）が引用されている。
１ｏＬｅｃｕＬａｒＢｉｏ、１ｏ（Ｊｕ ｌ （
１９７４年＋ Ｍａｒｃｅｌ Ｂｅｋｋｅｒｌｌ、
＋；、発行、ニューφヨーク）が引用されている。
ｌｄ、＋；ｏｌζｌ ＃素は％汐Ｕえば前記−ｌイルズ
・ラボラトリーズ・リミテッド等から市販されている。
・ラボラトリーズ・リミテッド等から市販されている。
マイルズのラボラトリーズ・リミテッドの住所はｒ Ｐ
ＯＢｏｘ ３７．５ｔｏｋ、ａ （：ｏｗｒｔ、 ５ｔ
ｏｋｅ ＰｏｇｔｔｓｒＳｌｏｕｇｈ、 Ｅｎｇｌａｎ
ｄ−Ｓ Ｌ ２４８ ｋＣＪである。
ＯＢｏｘ ３７．５ｔｏｋ、ａ （：ｏｗｒｔ、 ５ｔ
ｏｋｅ ＰｏｇｔｔｓｒＳｌｏｕｇｈ、 Ｅｎｇｌａｎ
ｄ−Ｓ Ｌ ２４８ ｋＣＪである。
１： １４ｉｉ一般法の好ましい一態様では、プシスミ
ドＪＪＫ伝１１ｖ報の切断および結合は（プラスミドが
薬剤耐性標識をｉ′んでい／１くても）、ｔｒｐ 遺
伝子のような遺伝標識を含む追加の１）ＮＡ断片の存在
下に行われる。、（そσ）ような遺伝子はＵ下に述べる
ようにＥ、ｃｏｋｔＬ を用いて適当な形質導入ファー
ジ・ゲシムＯ・ら切削により容易に調製できる）。
ドＪＪＫ伝１１ｖ報の切断および結合は（プラスミドが
薬剤耐性標識をｉ′んでい／１くても）、ｔｒｐ 遺
伝子のような遺伝標識を含む追加の１）ＮＡ断片の存在
下に行われる。、（そσ）ような遺伝子はＵ下に述べる
ようにＥ、ｃｏｋｔＬ を用いて適当な形質導入ファー
ジ・ゲシムＯ・ら切削により容易に調製できる）。
Ｅ、 ｃｏｌｉのｔｒｐ遺伝子Ｂ、ＣおよびＤは、Ｈｉ
７４ｄ■制限酔素ハ標的である。従って、選択的標識
を破巌−Ｃることなく、外来のＤＮＡ断片を挿入するぞ
〇次σ）操作のだめに用いることができる。その理由は
遺伝子ＡおよびＥは制限酵素Ｈｉｎｄ 厘の作用を・妃
ける保的ノ）りｔにあり、それらの→能は容易ｖｃ選択
されうるからである。次いでプラスミド経路をりｈ−ゼ
と共に反応さ仕で、二重らせん１ＪＮＡ中に共、ｔＳ結
行を内び形成、′８Ｍ％がくしてｔｒｐ遺協子を４４′
−４句か桑削■→性各七［７ない若干のプラスミドを生
じさＣ６８ 基本欧生物か前述））ようなｔｒｐ欠失突然変異を受げ
たも力である場合には、 ｔｒｐ□れ伝子を含−１−１
１−―□１−□□−−−−□□□むプラスミドが特に用
いられる。
７４ｄ■制限酔素ハ標的である。従って、選択的標識
を破巌−Ｃることなく、外来のＤＮＡ断片を挿入するぞ
〇次σ）操作のだめに用いることができる。その理由は
遺伝子ＡおよびＥは制限酵素Ｈｉｎｄ 厘の作用を・妃
ける保的ノ）りｔにあり、それらの→能は容易ｖｃ選択
されうるからである。次いでプラスミド経路をりｈ−ゼ
と共に反応さ仕で、二重らせん１ＪＮＡ中に共、ｔＳ結
行を内び形成、′８Ｍ％がくしてｔｒｐ遺協子を４４′
−４句か桑削■→性各七［７ない若干のプラスミドを生
じさＣ６８ 基本欧生物か前述））ようなｔｒｐ欠失突然変異を受げ
たも力である場合には、 ｔｒｐ□れ伝子を含−１−１
１−―□１−□□−−−−□□□むプラスミドが特に用
いられる。
ｋ：、記ＫｉｔＬｄ ｌ制限酵素は１例えば前記のマイ
ルズ・ラボラトリ−ズ・リミテッド（英国）から入手−
（：きる。この制限酵素の梢製法はＨ，０，スミス轡の
ｒ Ｊ、Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、 Ｊ 第５１巻第３７
９負（１９７０年）に記載さｔしている。また前記の１
゛外米のＤＮＡ断片」とは、それが導入されようとして
いる。または導入された細―中には元来存イ１．ぜず、
当該細菌μ外のものから分離されたＤＮ、Ａ断片を意味
する。
ルズ・ラボラトリ−ズ・リミテッド（英国）から入手−
（：きる。この制限酵素の梢製法はＨ，０，スミス轡の
ｒ Ｊ、Ｍｏ１． Ｂｉｏｌ、 Ｊ 第５１巻第３７
９負（１９７０年）に記載さｔしている。また前記の１
゛外米のＤＮＡ断片」とは、それが導入されようとして
いる。または導入された細―中には元来存イ１．ぜず、
当該細菌μ外のものから分離されたＤＮ、Ａ断片を意味
する。
Ｅ、６０ＲＩ制限酵素を用いて７） Ｄ Ｎ Ａ切断操
作Ｏ′こＪ６ける条件は、この酵素のＥ、ｃｏＲＩ活性
を与ん乙ようなもの、すなわち高ｐＨおよび低Ｍ、＋＋
線度においＣその活性を与える１うなものとすべがであ
る。これら力条件において、Ｄ Ｎ Ａ二本らせん中の
１基配列 が認識され、開裂され、その＃系が通常の条件に良いて ｅＴＴＡＡ↓（］ Ｇ↑ＡＡＴＴＣ での切断に際し−〔作られると同じ付着性端部が生ずる
。かかるＥ、ｃｏＲＩの一層短い認識配列は、いずれの
二本らせん状ＤＮＡ分子について非常にスくの１ｌＪＴ
パが開裂され易いことを意味する。
作Ｏ′こＪ６ける条件は、この酵素のＥ、ｃｏＲＩ活性
を与ん乙ようなもの、すなわち高ｐＨおよび低Ｍ、＋＋
線度においＣその活性を与える１うなものとすべがであ
る。これら力条件において、Ｄ Ｎ Ａ二本らせん中の
１基配列 が認識され、開裂され、その＃系が通常の条件に良いて ｅＴＴＡＡ↓（］ Ｇ↑ＡＡＴＴＣ での切断に際し−〔作られると同じ付着性端部が生ずる
。かかるＥ、ｃｏＲＩの一層短い認識配列は、いずれの
二本らせん状ＤＮＡ分子について非常にスくの１ｌＪＴ
パが開裂され易いことを意味する。
Ｌ記の表示において、
Ａ＝アデニン
Ｃ−−−シトシン
Ｇ−グアニン
１゛＝リーイミン、。
ファージを用いて行な５方法について、もしあるファー
ジがｌＩ：！接に用いられるときにはそｔしは（突然変
異株も含め）、野生型宿主範囲の基本微生物を含むタイ
プ１）ものであるべきである。もしファージ１） Ｎ
Ａを用いるときには、それは野生型ファージｂ・ら、ま
たは野生型宿主範囲の基本微生物を通常は含まないファ
ージから抽出することができる。
ジがｌＩ：！接に用いられるときにはそｔしは（突然変
異株も含め）、野生型宿主範囲の基本微生物を含むタイ
プ１）ものであるべきである。もしファージ１） Ｎ
Ａを用いるときには、それは野生型ファージｂ・ら、ま
たは野生型宿主範囲の基本微生物を通常は含まないファ
ージから抽出することができる。
いずれのＪｊ法において、も、Ｇ ＩＪ Ｈ特異化遺伝
子がプラスミド経路の工程１ｃ）またはファージ経路の
工程（ｄ）によって、基本微生物のＧＵＳ欠失突然変貢
株中へ尋人された場合には、ＧＤ）ｌ−利用微生つＪノ
仔庄は、唯一の窒素源とじて°γンモニγを利用４ζ、
１］Ｌ力によって認識されａ０ ト肥の表におい−〔： 衣１は遺伝子組換え微生物を作るためのブラスミじ経路
を最も単純化した形態を示し。
子がプラスミド経路の工程１ｃ）またはファージ経路の
工程（ｄ）によって、基本微生物のＧＵＳ欠失突然変貢
株中へ尋人された場合には、ＧＤ）ｌ−利用微生つＪノ
仔庄は、唯一の窒素源とじて°γンモニγを利用４ζ、
１］Ｌ力によって認識されａ０ ト肥の表におい−〔： 衣１は遺伝子組換え微生物を作るためのブラスミじ経路
を最も単純化した形態を示し。
イく２・は表１中の経路の好ましい一態様を示し。
衣３は衣２中の経路の好ましい一改変をボし、表４はノ
アージ法の三態様をン」、す。
アージ法の三態様をン」、す。
これらの表は一般的に自明であると考えられ乙１゜し、
７戸し表３について述べると、完全微生物から作られた
ＤＮＡ断片Ｂは所要のＧ ｏ Ｋ’−ｓ伝子を低濃度で
のみ會むので、その結果シラスミドｐ（ｋｔａ−。
７戸し表３について述べると、完全微生物から作られた
ＤＮＡ断片Ｂは所要のＧ ｏ Ｋ’−ｓ伝子を低濃度で
のみ會むので、その結果シラスミドｐ（ｋｔａ−。
ｔｒｐ”ｋ−Ｅ）とこれらの遺伝子がリガーゼで結合さ
１する確率は高くない。しかしもしＤＮＡ断八Ｂへ完全
微生物から得られた）が、フムダ・ファージもしくはプ
ラスミドから酩導さ・れたＤＮｌｄｒ片Ｃとリガーゼで
結合されると、それによって得られる１）ＮＡ組合せは
ＧＤＨ欠失Ｅ、 ｃｏｌｉ中で殖えることができ、次い
で分離されうろ。七ハ生成物は、ファージまたはプラス
ミド中に存在するＤ １’Ｊ Ａの存在においＣ，７）
み比較的高濃度のＧＤＨ”遺伝子Ｃニル・す、１それは
完全微生物中に１６けるよりも小域である。プラスミド
ＰＣｋｔα−，ｔｒｐ＋Ａ−Ｅ）との結合の確率はかく
して有効に向ヒされる。
１する確率は高くない。しかしもしＤＮＡ断八Ｂへ完全
微生物から得られた）が、フムダ・ファージもしくはプ
ラスミドから酩導さ・れたＤＮｌｄｒ片Ｃとリガーゼで
結合されると、それによって得られる１）ＮＡ組合せは
ＧＤＨ欠失Ｅ、 ｃｏｌｉ中で殖えることができ、次い
で分離されうろ。七ハ生成物は、ファージまたはプラス
ミド中に存在するＤ １’Ｊ Ａの存在においＣ，７）
み比較的高濃度のＧＤＨ”遺伝子Ｃニル・す、１それは
完全微生物中に１６けるよりも小域である。プラスミド
ＰＣｋｔα−，ｔｒｐ＋Ａ−Ｅ）との結合の確率はかく
して有効に向ヒされる。
各表中に特定した出発物グ）うち下記ノ）ものについ゛
（さらに蒲団する。ｔｒｐ形實導入ラムう°・ファージ
：良好に特性比され、ｔｒｐオペロンの遺伝子Ａ−Ｅを
ｊ゛むものが入手できる。
（さらに蒲団する。ｔｒｐ形實導入ラムう°・ファージ
：良好に特性比され、ｔｒｐオペロンの遺伝子Ａ−Ｅを
ｊ゛むものが入手できる。
Ｇ ｌ） ｌ（特異化ＩＪ ｉ’Ｊ Ａ （’ｒ／ｆわ
ちＧ Ｄ ＨＤＮＡ ）ＧＤＨ利用＜ｅｊ七を作り、そ
れからＤＮＡを分離し。
ちＧ Ｄ ＨＤＮＡ ）ＧＤＨ利用＜ｅｊ七を作り、そ
れからＤＮＡを分離し。
１１ｉｎ、ｄ ｌノ）ような制限酵素で１．） Ｎ Ａ
を切断し、それを同じ制限酵素を用いて作ったベクター
ＤＮＡの断片とりガーゼで結合することにより同定でき
る。この結合ＭＮＤＡを次いでに Ｄ Ｈ欠失宿主中へ
移入する。そｈ別人処理済の宿主をＧＤＨ経路が機能し
うる適当な条件中で繁殖させ１次いでそれからベクター
・ハイブリッドＤＮＡを分離する。
を切断し、それを同じ制限酵素を用いて作ったベクター
ＤＮＡの断片とりガーゼで結合することにより同定でき
る。この結合ＭＮＤＡを次いでに Ｄ Ｈ欠失宿主中へ
移入する。そｈ別人処理済の宿主をＧＤＨ経路が機能し
うる適当な条件中で繁殖させ１次いでそれからベクター
・ハイブリッドＤＮＡを分離する。
各人中に鳩、定の酵素がボされている場合に、単に例示
であると理解されるべきである。
であると理解されるべきである。
表 １
Ｅ、ｃｏｌｉ
□ 単離 Ｐ ＃ １）ＮＡ断
片プラスミド Ｈｉｎｄ Ｉ ＧＤＨ＋ ＧＤＨ＋ Ｉ
）［（Ａ断片微生物 ＤＮＡ 第１頁の続き ０発 明 者 ピータ−・ジエームズ・シニアイギリス
国クリーブランド・ス トラフトン・オン・ティース・ ツートン・ザ・グリーン・ツー トン・ホール（番地なし） ０発 明 者 アイアン・ジョン・ティラーイギリス国
クリーブランド・ス トラフトン・オン・ティース・ ツートン・ザ・グリーン・ツー トン・ホール（番地なし） 手続補正書（方式） １、事件の表示 昭和Ｓ７年釉 願第、ｏｐｏ２ｂ号 Ｙ糸田シンへ”）’１ｉＪ９１％ゎλ ６、補正をする者 事件との関係 出 願 人 住所 ！ｄ本 イン′（ゝソテル・ケＳカル・Ｘンタ′ンリー
ス“・シシデ、ト４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和ダ７年７）月３０日（発送
日）６、補正の対象 ２イク゛、八 日月蚤＝＝１
片プラスミド Ｈｉｎｄ Ｉ ＧＤＨ＋ ＧＤＨ＋ Ｉ
）［（Ａ断片微生物 ＤＮＡ 第１頁の続き ０発 明 者 ピータ−・ジエームズ・シニアイギリス
国クリーブランド・ス トラフトン・オン・ティース・ ツートン・ザ・グリーン・ツー トン・ホール（番地なし） ０発 明 者 アイアン・ジョン・ティラーイギリス国
クリーブランド・ス トラフトン・オン・ティース・ ツートン・ザ・グリーン・ツー トン・ホール（番地なし） 手続補正書（方式） １、事件の表示 昭和Ｓ７年釉 願第、ｏｐｏ２ｂ号 Ｙ糸田シンへ”）’１ｉＪ９１％ゎλ ６、補正をする者 事件との関係 出 願 人 住所 ！ｄ本 イン′（ゝソテル・ケＳカル・Ｘンタ′ンリー
ス“・シシデ、ト４、代理人 ５、補正命令の日付 昭和ダ７年７）月３０日（発送
日）６、補正の対象 ２イク゛、八 日月蚤＝＝１
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 （１）（イ）Ｇ Ｄ Ｈ酵素の産生を特異化するＤＮＡ
をそれぞれ４４６ブラスミドもしくはプラスミド・・・
イブリッド、またはファージもしくはファージ・・・イ
ブリッドによる遺伝子組換えの結果としてＧＤＨ酵素経
路によるアンモニア固定特異比１に伝物岨を言む、メタ
ノール資化性グアム隙性、好気性桿状菌であるメチロモ
ナダクアＺ （ＷｉｅｔｈｙＬｏｍｏｎａｄａｃｅａｅ
）科バ一または二μヒク）種の微生物を、資化性炭素
源としてノ）メタノールとＧＤ）１反応機構を維持する
ｔＣ足る濃度のアンモニアおよび／またはアンモニウム
イオンとをよむ水性培地中で好気培養し１次いで （ロ） 単細胞タンパク質または単細胞タンパク質言有
組１戊物をその培地から回収する、ことを特徴とする単
細胞タンパク賀の産生方法。 （２）遺伝物質はプラスミドもしくはプラスミド・・・
イブリッドのＤＮＡ、またはファージもしくはファージ
・ハイブリッドの１）ＮＡである特許請求の範囲第１項
に記載の方法。 （３）アンモニアおよびアンモニウムイオンの合一［８
度を、メタノール一度最高一度帯域で、Ｌｌ、５ｍＭ以
上に維持することを特徴とする特許請求の範囲第１また
は２項に記載の方法、。 ｉ４） 好気培養温度は３４〜４５℃である特許請求
の範囲第１〜３項のいずれかに記載の方法１１（：））
遺伝子組換え微生物はメナロソイラス・メナロトロ
ファス柚の一または二以ヒの菌株がら妨纏されたもので
ある特許請求の範囲第１〜４項のいｒれかに記載の方法
。 （０）遺伝子組換え微生物は、倣工研繭−第６５９８号
のプソイドモナス極、倣工研菌寄第株の一または二ｌｄ
上から１導されたものである特許請求の範囲第１〜４項
りいずれかに記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB37559/77 | 1977-09-08 | ||
| GB3755977 | 1977-09-08 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5886076A true JPS5886076A (ja) | 1983-05-23 |
Family
ID=10397383
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11057278A Granted JPS5467084A (en) | 1977-09-08 | 1978-09-08 | Production of unicellular protein |
| JP57109076A Pending JPS5886076A (ja) | 1977-09-08 | 1982-06-24 | 単細胞タンパク質の産生方法 |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP11057278A Granted JPS5467084A (en) | 1977-09-08 | 1978-09-08 | Production of unicellular protein |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (2) | JPS5467084A (ja) |
| AU (1) | AU525490B2 (ja) |
| BE (1) | BE870188A (ja) |
| DE (1) | DE2839052A1 (ja) |
| FR (1) | FR2402704A1 (ja) |
| NL (1) | NL7809125A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6156093A (ja) * | 1984-07-13 | 1986-03-20 | フセソユズニイ ナウチノ− イススレドバテルスキ インステイテユト ゲネテイキ イ セレクツイイ プロミイシレンニイフ ミクロオルガニズモフ（フニイゲネテイカ） | ヒト白血球インタ−フエロンα−２の製造方法 |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4171824A (en) * | 1977-05-23 | 1979-10-23 | Foster Edwin E | Bicyle |
| EP0035831B1 (en) * | 1980-03-07 | 1986-01-08 | Imperial Chemical Industries Plc | Method for making genetically modified microorganisms |
| JPS58115846A (ja) * | 1981-12-28 | 1983-07-09 | Matsushita Electric Ind Co Ltd | 相補型絶縁ゲ−ト型半導体装置 |
| JPS63159098U (ja) * | 1987-04-07 | 1988-10-18 | ||
| JPH0586788A (ja) * | 1991-09-26 | 1993-04-06 | Sanwa Shutter Corp | 電動ブラインドシヤツターにおける停電時操作可能な開閉機 |
| DK2575558T3 (en) | 2010-05-28 | 2019-04-01 | Hunter Douglas | COVERINGS FOR ARCHITECTURAL OPENINGS OPERATED BY ROTATING ENGINES |
| WO2013052084A1 (en) | 2011-10-03 | 2013-04-11 | Hunter Douglas Inc. | Control of architectural opening coverings |
| CA2828819C (en) | 2012-10-03 | 2020-03-10 | Hunter Douglas Inc. | Methods and apparatus to control an architectural opening covering assembly |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1521032A (en) * | 1974-08-08 | 1978-08-09 | Ici Ltd | Biological treatment |
-
1978
- 1978-09-04 BE BE190240A patent/BE870188A/xx not_active IP Right Cessation
- 1978-09-05 FR FR7825482A patent/FR2402704A1/fr active Granted
- 1978-09-05 AU AU39546/78A patent/AU525490B2/en not_active Expired
- 1978-09-07 NL NL7809125A patent/NL7809125A/xx not_active Application Discontinuation
- 1978-09-07 DE DE19782839052 patent/DE2839052A1/de not_active Ceased
- 1978-09-08 JP JP11057278A patent/JPS5467084A/ja active Granted
-
1982
- 1982-06-24 JP JP57109076A patent/JPS5886076A/ja active Pending
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|---|---|---|---|---|
| JPS6156093A (ja) * | 1984-07-13 | 1986-03-20 | フセソユズニイ ナウチノ− イススレドバテルスキ インステイテユト ゲネテイキ イ セレクツイイ プロミイシレンニイフ ミクロオルガニズモフ（フニイゲネテイカ） | ヒト白血球インタ−フエロンα−２の製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU525490B2 (en) | 1982-11-11 |
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