JPS5910598A - 安定なインタ−フエロンβ組成物およびインタ−フエロンβの安定化方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、ヒト繊維芽細胞インターフェロン（ＨＦＩＦ
　）　（一般にインターフェロンβという名称で知られ
ており、本明細書中でもこの用語を用いる）の安定化方
法、及び輸送可能であシ、また密閉した小壜に並びに適
轟な稀釈剤に再懸濁後に長期間貯蔵可能な安定化された
インターフェロンβ組成物に関するものである。

関係文献に記載されているようＫ、成るヒト細胞中に見
い出され、またほんのわずかな量でこれから得られたイ
ンターフェロンβは、非常に活性な抗ビールス性のタン
パク質物質である。

これらの量は多種多様の臨床及び他の試験を行なうため
には不充分であシ、この物質の有望な治療特性を評価・
増進するための研究が必要である。

そのため、大量のインターフェロンβを製造する方法、
主に組織培養による方法を開発するためのあらゆる努力
が、世界中の指導的研究所及び薬品会社によりなされた
きた。

これらの努力の結果、・現在では、インターフェロンβ
は商業的量で得られる。インターフェロンβは、精製さ
れ適当な佐薬と混合され、濾過され、ガラス小壜中に調
剤され、凍結乾燥され、真空下で密封し、−４０°０の
温度にドライアイス中に収めて貯蔵される。

得られるインターフェロンβ調剤は非常に不安定であシ
、比較的短期間にその生物学的活性を失うということが
知られている。インターフェロンβを安定化するための
これまでなされた全ゆる試みは失敗に終っている。

このようなことから見て、全く予期せざることにまた驚
くべきことに、本発明者は、インターフェロンβが、長
い開始んどワインの清液剤としてのみ用いられまた薬物
組成物の分散剤乃至沈澱防止剤として知られるビニルピ
ロリドン重合体（以後、Ｐ、Ｖ、Ｐ、　　と略称する）
により、効果的に安定化されるということを見い出し、
本発明を完成するに至ったものである。Ｐ、Ｖ、Ｐ。

ばｔｏ、０００〜７００　、０００　　の範囲の分子量
を有しており、ボヴイドン（ＰＯＶＩＤＯＮＥ　Ｊなど
の商標として市販されている（　”Ｔｈｅ　Ｍｅｒｃｋ
　Ｉｎｄｅｘ”第９版、第７４８３頁、ＮＯ，７４９ｇ
参照〕。

本発明は、インターフェロンβ、通常の佐薬、緩衝液及
び安定剤としてのビニルピロリドン重合体からなる新規
な安定なインターフェロン組成物に関するものである。

本発明はまた、公知の佐薬と混合された高度に精製され
たインターフェロンβ溶液をｐＨ３，５の酢酸塩緩衝液
に対して約４８時間透析し、得られたインターフェロン
溶液を無菌濾過に付し、Ｆ液を０．５〜１０重量／容量
チ（Ｗ／Ｖチ）のポリビニルピロリドンと混合し、ガラ
ス小壜中に調剤し、凍結乾燥し、次いで小壜を真空下で
密封し、４℃で貯蔵することを特徴とするインターフェ
ロンβの安定化方法に関するものである。

好ましい佐薬は、マンニトール及びヒト血清アルブミン
（Ｈ８Ａ　）である。使用される酢酸塩緩衝液は、酢酸
ナトリウム及びｐＨを３．５に調整するに充分な酢酸を
含有するものである。好適な安定剤は、’　ＰＯＶＩＤ
ＯＮＥ’　　として市販され約ｓｏ、ｏｏｏの分子量を
有するｐ、ｖ、ｐ、であるが、これより低くまたは高い
分子−険を有するＰ、Ｖ、Ｐ。

もまた安定剤として非常に効果的であるということが証
明されている。Ｐ、Ｖ、Ｐ、　　は調剤の約０．５〜ｉ
　０　Ｗ／Ｖ％の最終濃度で使用される。

本発明に係る好ましいインターフェロンβ組成物の調製
を、以下に実施例を示してさらに詳細に説明する。

実施例 酢酸２１．６　ＣＣ及び酢酸す）　ＩＪウム４０２ｇを
所要容積の蒸留水に溶解して、ｐＨ３，５の酢酸塩緩衝
水溶液２０ｔを調製する。

無菌透析バッグの内面を、この中で透析に付されるタン
パク質ダ当シ約１０７国際単位の特異活性を有する高度
に精製されたインターフェロンβ溶液中１係の濃度とな
るように、充分に濃縮されたヒト血清アルブミンで湿潤
する。

得られた溶液を、緩衝溶液に対するインターフェロン溶
液の比率１　：　１００で、２４時間後に緩衝溶液を変
えて、４°０の温度で約４８時間、ｐＨ３，５の酢酸塩
緩衝溶液に対して透析する。

炉液中のアルブミン濃度を２Ｗ／ｖ％に上げるように充
分に濃縮されたヒト血清アルブミンで予め含浸された無
菌フィルターを通しての濾過に先だって、またはこれに
続けて、透析されたインターフェロンβ調剤を、およそ
最終濃度０．５Ｗ　／　’Ｖ　％でのマンニトール及び
最終濃度２％でのＰ、Ｖ、Ｐ、　　と混合する。ｐ液を
無菌小壜中に集める。

ついで、Ｐ、Ｖ、Ｐ、　　濃度を最終的に２ｗ／ｖ％に
、必要に応じてマンニトールの濃度を０．５　Ｗ／Ｖ％
に調整する。、溶液の最終容量を無菌酢酸塩緩衝溶液で
調整する。

得られた溶液の各２ＣＣを無菌コーンウオール（Ｃｏｒ
ｎｗａｌｌ　）　　注入器により無菌ガラス小壜中に調
剤し、引き続き凍結乾燥し、ついで小壜を真空下で密封
し、４゛０で貯蔵する。小壜の内容物は、再蒸留した無
菌水２ＣＣを添加して再懸濁する。

小壜当りの最終製品の組成は以下のとおシである。

酢酸ナトリウム　Ａ　Ｇ　　　　０．４ダ塩化ナトリウ
ム　ＡＧ　　　　Ｌ、Ｓ■ヒト血清アルブミン分画　Ｖ
　　　　　４０．Ｏ＃マンニトール　　ＡＧ　　　　１
０．０ダＰＶＰ−安定剤　　　　　　４０．０”＆ヒト
線維芽細胞インターフェロン　　１．０・ｌｏ’Ｉ　、
Ｕ、（およそ）その組成において、インターフェロンβ
の安定性についての、各種分子量の及び各種濃度におけ
るＰ、Ｖ、Ｐ、　　の有効性を、後掲第１表乃至第６表
に示す。ここで、第１表は、凍結乾燥の型土４ケ月貯蔵
後の、本発明に係る組成におけるインターフェロンβの
安定性についての、０．５〜５％の範囲の濃度において
の分子−ｊ１２４．ｏｏｏのＰ、Ｖ、Ｐ、　　の効果を
示す。第２表及び第３表におけるデータは、それぞれ分
子量５０　、０００及び１６０．０００のＰ、Ｖ、Ｐ、
　　’を用イテノ同一条件下Ｔ（７）組成物の安定性を
示し、これらの表には、　Ｐ、Ｖ、Ｐ。

を含有しないインターフェロンβ組成物及びＰ、Ｖ、Ｐ
、　　に代えて各種濃度のヒト血清アルブミンまたは蔗
糖を含有する組成物についての比較データも併せて示す
。第４表、第５表及び第６表は、（α）前述した再懸濁
直後、及びＬ６１再懸濁した組成物の４℃での１ケ月間
貯蔵後について、本発明に係るインターフェロンβ組成
物の力価と、第１表、第２表及び第３表と同じ分子量の
Ｐ、Ｖ、Ｐ、　　の含有量との間の関係を示す。また、
蔗糖またはヒト血清アルブミンを混合したインターフェ
ロンβ組成物についての比較データも併せて示す。

以下のデータ及び注記はこれらの表を理解する上での基
本的なものである。

（α）　組成物に使用したヒト婦雄芽細胞インターフェ
ロンは、最初にタンパク質〜当り１０〜１０７　国際単
位（１，υ、）の範囲の特異活性に精製したものである
。

［，６＋　　各種＃度のＰ、Ｖ、Ｐ、　　との混合物中
のインターフェロンβの力価に関する各表中のデータ１
１１６カ価測定結果の平均であυ、データは小壜幽りメ
ガ単位で表わされている。

（ＣＩ　　インターフェロンβの最初の力価における差
異は、その特異活性において幾分異なる各拙パッチから
のインターフェロンの使用によるものである。

各表に報告されているデータから明らかなように、１０
チまでの濃度のｐ、ｖ、ｐ、　　を使用してもプラスの
安定化効果が得られるが、各種分子量のＰ、Ｖ、Ｐ、　
　は２〜４％の＃に度で使用したときに最大の安定化効
果を有する。プラスの安定化は１０，０００〜７００．
０００　　の分子量を有するＰ、Ｖ、Ｐ。

を用いても得られる。

前述した方法を他に適当に修正することは轟業者にとっ
て明らかであろうし、このような修正も特許請求の範囲
に明らかにした本発明の精神を逸脱せざる限り本発明の
範囲に含まれるものであふ。

〔以下余白　〕

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、　高度に精製されたインターフェロンβ及び通常の
   佐薬の緩衝溶液からなり、該溶液がα５〜ｌ　Ｑ　７７
   １％のポリビニルピロリドンによシ安定化されてなる安
   定なインターフェロンβ組成物。 ２　佐薬がマンニトール及びヒト血清アルブミンである
   特許請求の範囲第１項に記載の組成物。 ＆　緩衝液がＰＨ３，５の酢酸塩緩衝液である特許請求
   の範囲第１項または第２項に記載の組成物。 歳　ガラス小壜中に充填され、凍結乾燥され、真空下で
   密封されてなる特許請求の範囲第１項乃至第３項のいず
   れかに記載の組成物。 ５、　公知の佐薬と混合された高度に精製されたインタ
   ーフェロンβ溶液を酢酸塩緩衝液に対゛して透析し、得
   られたインターフェロン溶液を、無菌フィルターを通し
   ての濾過に先だっであるいはこれに続けて、０．５〜１
   ０重量／容量チのポリビニルピロリドンと混合し、ガラ
   ス小壜中に調剤し、凍結乾燥し、核小壜を真空下で密封
   し、４℃で貯蔵することを特徴とするインターフェロン
   βの安定化方法。