JPS5911199A - 酢酸又は酢酸塩の定量用組成物 - Google Patents
酢酸又は酢酸塩の定量用組成物Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、酢酸又は酢酸塩の定量用組成物に関するもの
であり、さらに詳細には、ｒ＃素反応を利用した酢酸又
は酢酸塩の定量用組成物に関するものである。
であり、さらに詳細には、ｒ＃素反応を利用した酢酸又
は酢酸塩の定量用組成物に関するものである。
酢酸又は酢酸塩の定量は９食品工業や有機酸工業などに
必要であり、特に食品工業においては。
必要であり、特に食品工業においては。
工程管理や品質保証の検査として重要である。これらの
分析には、従来、化学分析手段あるいはクロマトグツフ
ィーなどによる分離定量手段が用いられている。ところ
が、これらの方法においては他の共存物質による妨害を
受けることが多く、特に類似の有機酸との共存系ｔこお
いて酢酸のみを定量することが困難である。また、操作
も煩雑であり、回虫性に乏しい場合が多い、このような
に点をおぎなう方法として、近年、酵素の文応特異性並
びに基質特馬性を利用した。いわゆる酵素法による定量
用組成物の開発が行われている。このような酵；化法に
よる酢酸又は酢酸塩の定量法には。
分析には、従来、化学分析手段あるいはクロマトグツフ
ィーなどによる分離定量手段が用いられている。ところ
が、これらの方法においては他の共存物質による妨害を
受けることが多く、特に類似の有機酸との共存系ｔこお
いて酢酸のみを定量することが困難である。また、操作
も煩雑であり、回虫性に乏しい場合が多い、このような
に点をおぎなう方法として、近年、酵素の文応特異性並
びに基質特馬性を利用した。いわゆる酵素法による定量
用組成物の開発が行われている。このような酵；化法に
よる酢酸又は酢酸塩の定量法には。
（］）酢酸を酢酸キナーゼとホスホトヲンスアセチヲー
ゼとによりアセチル−ＣｏＡにみちび＃。
ゼとによりアセチル−ＣｏＡにみちび＃。
さらにクエン酸合成酵素とリンゴ酸脱水素酵素とを用い
ＮＡＤの還元される量として測定する方法。
ＮＡＤの還元される量として測定する方法。
（２）上記（１）の方法の酢酸をアセチル−ＣｏＡにみ
ちびくところをアセチｓｙ −ＣｏＡ合成酵素を用い以
下上記（１）と同様の方法により測定する方法。
ちびくところをアセチｓｙ −ＣｏＡ合成酵素を用い以
下上記（１）と同様の方法により測定する方法。
（３）酢酸を、酢酸キｔ−ゼとヒドロキシルアミンとに
よりアセチルヒドロキサム酸に変えることにより測定す
る方法。
よりアセチルヒドロキサム酸に変えることにより測定す
る方法。
（４）アセチ、ＩＬ／ＣＯＡ合成酵素とアリルアミンア
セチルトランスフェラーゼを用い、スルプアニルアミド
の減少量として測定する方法。
セチルトランスフェラーゼを用い、スルプアニルアミド
の減少量として測定する方法。
（５）酢酸キｔ−ゼ、ピルビン酸キナーゼ及び乳酸脱水
素酵素を用い、 ＮＡＤ）１の減少量として測定する
方法つ などが提案されている。
素酵素を用い、 ＮＡＤ）１の減少量として測定する
方法つ などが提案されている。
これらの方法のうち、まず、（１）の方法は、使用する
ホスホトランスアセチラーゼ−が極めて不安定で室温で
の操作に耐えない上に操作手順が極めて複雑であるとい
う問題があり、実用的ではない。
ホスホトランスアセチラーゼ−が極めて不安定で室温で
の操作に耐えない上に操作手順が極めて複雑であるとい
う問題があり、実用的ではない。
（２）の方法は、ホスホトランスアセチラーゼ゛−の開
門は解決されたものの操作手順の複雑さは依然として残
っている上に、使用する酵素が零入手しに＜＜、高価な
ものにつくという問題もある。（３）の方法は、 （１
１，［２１の方法をこ見られた難点は避けられるが、感
度が悪いというに点が致命的である。また、（４）の方
法もこれらの域を出るものでをよなく。
門は解決されたものの操作手順の複雑さは依然として残
っている上に、使用する酵素が零入手しに＜＜、高価な
ものにつくという問題もある。（３）の方法は、 （１
１，［２１の方法をこ見られた難点は避けられるが、感
度が悪いというに点が致命的である。また、（４）の方
法もこれらの域を出るものでをよなく。
結局、り６）の方法が最も有利なように思える力ζ、ク
オらによれば、測定に長時間（３５〜９５分）を要する
という欠点が見出されているのである（アテリテイカル
・バイオグミストリー、５５巻、１頁、 １９７５年
）。
オらによれば、測定に長時間（３５〜９５分）を要する
という欠点が見出されているのである（アテリテイカル
・バイオグミストリー、５５巻、１頁、 １９７５年
）。
本発明者らは、酢酸又は酢酸塩の定量用組成物を提供す
ることを目的として鋭意研究した結果。
ることを目的として鋭意研究した結果。
上述のような従来技術のうち、（５）の方法ｔこａ目し
最適生育ｍ麿が５０℃ないし８５℃である微生物の産生
ずる酢酸キナーゼを使用すると、測定温度はクオらと同
様の室温付近にもかかわらず、驚くべきことに測定が短
時間で終了しうろことを見出し、本発明に到達した。
最適生育ｍ麿が５０℃ないし８５℃である微生物の産生
ずる酢酸キナーゼを使用すると、測定温度はクオらと同
様の室温付近にもかかわらず、驚くべきことに測定が短
時間で終了しうろことを見出し、本発明に到達した。
すなわち１本発明は酢酸キ六−ゼとピルビン酸キナーゼ
を含む酢酸又は酢酸塩の定量用組成物において、酢酸キ
テーゼが、最適生育温度が５０℃ないし８５℃である微
生物の産生する酢酸キ六−ゼであることを特徴とする酢
酸又は酢酸塩の定量用組成物である。
を含む酢酸又は酢酸塩の定量用組成物において、酢酸キ
テーゼが、最適生育温度が５０℃ないし８５℃である微
生物の産生する酢酸キ六−ゼであることを特徴とする酢
酸又は酢酸塩の定量用組成物である。
本発明の定量用組成物に説明すると、アデノシン三リン
酸（以下ＡＴＰという、）を補基質として試料中の酢酸
又は酢酸塩に酢酸キナーゼを作用させると、酢酸はアセ
チルリン酸ｔこ変イヒし、ＡＴＰＩよアデノシン三リン
酸（以下ＡＤＰとｂ・う、ｌ ）＃こ変イヒする。この
反応様式を下式をこ示す。
酸（以下ＡＴＰという、）を補基質として試料中の酢酸
又は酢酸塩に酢酸キナーゼを作用させると、酢酸はアセ
チルリン酸ｔこ変イヒし、ＡＴＰＩよアデノシン三リン
酸（以下ＡＤＰとｂ・う、ｌ ）＃こ変イヒする。この
反応様式を下式をこ示す。
酢酸キナ−７−ｈ’ ４” ）ｖ ＋） ｙ酸＋ＡＤＰ
酢酸＋ＡＴＰ −−−−−、−−−−−一−→この酢酸
キテーゼの作用番よ、酢酸のみに基質特異性を有するも
のであって、他の有機酸、無機酸などが共存しでいても
作用するものでＩよな（Ｘ、次いで、ここで生成したア
セチ１ｖＩＪン酸又ｔよＡＤＰを定款すればよいが、そ
の際、 ＡＤＰにピルビン酸キナーゼを作用させるの
力１１１である。この反応様式を下式に示す。
酢酸＋ＡＴＰ −−−−−、−−−−−一−→この酢酸
キテーゼの作用番よ、酢酸のみに基質特異性を有するも
のであって、他の有機酸、無機酸などが共存しでいても
作用するものでＩよな（Ｘ、次いで、ここで生成したア
セチ１ｖＩＪン酸又ｔよＡＤＰを定款すればよいが、そ
の際、 ＡＤＰにピルビン酸キナーゼを作用させるの
力１１１である。この反応様式を下式に示す。
ピルビン酸キ
ＡＤＰ＋ホスホエノー／Ｉ／２＊ルピン酸−−□−−−
テーゼ 一一今ＡＴＰ＋ピルビン酸 ここで生成したピルビン酸ｌよ適当な色源体と反応させ
れば可視部の比色法としても定量可ｆｉヒであるが、乳
酸脱水素酵素を使用すると全反応系を酵素系として行う
ことになり、共存物質σ）影響を受けにくい極めて有利
な方法となる。この場合の反応式を下式に示すが、 Ｎ
ＡＤＨの紫外部（５４０ｎ瓜）の吸光度を測定すること
により、極めて容易に高精度の定量を行うことかできる
。
テーゼ 一一今ＡＴＰ＋ピルビン酸 ここで生成したピルビン酸ｌよ適当な色源体と反応させ
れば可視部の比色法としても定量可ｆｉヒであるが、乳
酸脱水素酵素を使用すると全反応系を酵素系として行う
ことになり、共存物質σ）影響を受けにくい極めて有利
な方法となる。この場合の反応式を下式に示すが、 Ｎ
ＡＤＨの紫外部（５４０ｎ瓜）の吸光度を測定すること
により、極めて容易に高精度の定量を行うことかできる
。
乳酸脱水素酵素
ピルビン酸十ＮＡＤＨ−，−−−−−−−−−−−−−
−や′乳酸＋ＮＡＤ＋このように本発明は、酢酸キテー
ゼを一成分とする酢酸又は酢酸塩の定量用組成物である
が、この酢酸キカーゼは、最適生育温度が５０℃ないし
８５℃である微生物の産生する酢酸キ六−ゼであること
が必要である。すなわち、 １ｌｉｌ述のクオらの一研
究は、酢酸ギカーゼとして代表的なエシェリキア・コリ
（潜堝生育微生物）の産生ずるｌ￥ｆ：素を使用するも
のであったが１本発明者らは最適生育温度が５０′ｃな
いし８５℃である微生物の産生ずる酢酸キナーゼを使用
すると測定時間が著しく短縮されることを見出したもの
である（この効果はクオらと同一測定温度で見出したも
のであり、測定温度を高くしたということではない。）
、このような微生物としては９例えば、バチルス・ステ
アロサーモプイルス、バチルス・プレビス、バチルス・
コアギユランス、バチμスＯサーモグロテオリデイクス
、バチルス・アシドカルダリウスなど（Ｄ ハ４−ルス
属の微生物、クロス） ＩＪジウム属の微生物、サーモ
アクチノマイセス属の微生物、−ｒクロモにフタ−属の
微生物、ス１−レグトマイセス属の微生物、ミクロボリ
スボヲ属の微生物、サーマス・アクアティクス、サーマ
ス・サーモフィルス。
−や′乳酸＋ＮＡＤ＋このように本発明は、酢酸キテー
ゼを一成分とする酢酸又は酢酸塩の定量用組成物である
が、この酢酸キカーゼは、最適生育温度が５０℃ないし
８５℃である微生物の産生する酢酸キ六−ゼであること
が必要である。すなわち、 １ｌｉｌ述のクオらの一研
究は、酢酸ギカーゼとして代表的なエシェリキア・コリ
（潜堝生育微生物）の産生ずるｌ￥ｆ：素を使用するも
のであったが１本発明者らは最適生育温度が５０′ｃな
いし８５℃である微生物の産生ずる酢酸キナーゼを使用
すると測定時間が著しく短縮されることを見出したもの
である（この効果はクオらと同一測定温度で見出したも
のであり、測定温度を高くしたということではない。）
、このような微生物としては９例えば、バチルス・ステ
アロサーモプイルス、バチルス・プレビス、バチルス・
コアギユランス、バチμスＯサーモグロテオリデイクス
、バチルス・アシドカルダリウスなど（Ｄ ハ４−ルス
属の微生物、クロス） ＩＪジウム属の微生物、サーモ
アクチノマイセス属の微生物、−ｒクロモにフタ−属の
微生物、ス１−レグトマイセス属の微生物、ミクロボリ
スボヲ属の微生物、サーマス・アクアティクス、サーマ
ス・サーモフィルス。
サーマス費フラプスなどのす〜マス属のｍ生物。
サーモミクロビウム属の微生物、カルブリア属の微生物
などがあげられる。また、これら微生物の遺伝モを導入
した常温生育微生物も含まれる。なお、これら微生物の
中でも酢酸キナーゼの産生に特に適したものはバチルス
・ステアロサーモフィルスである。この微生物から得ら
れる酢酸キナーゼは、精製が容易であり、比活性が高い
。また。
などがあげられる。また、これら微生物の遺伝モを導入
した常温生育微生物も含まれる。なお、これら微生物の
中でも酢酸キナーゼの産生に特に適したものはバチルス
・ステアロサーモフィルスである。この微生物から得ら
れる酢酸キナーゼは、精製が容易であり、比活性が高い
。また。
Ｌに述べたように酢酸キナーゼと共役してビルビン酸キ
六−ゼと乳酸脱水素酵素を使用することにより全反応系
を酵素系として行うことが可能であるが、これらの酵素
は酢酸キｔ−ゼとは異なり。
六−ゼと乳酸脱水素酵素を使用することにより全反応系
を酵素系として行うことが可能であるが、これらの酵素
は酢酸キｔ−ゼとは異なり。
特定の生育温度の微生物に由来するものを使用する必要
はなく、各種微生物由来のもの、動物組織由来のものな
で各種のものを使用することができる。
はなく、各種微生物由来のもの、動物組織由来のものな
で各種のものを使用することができる。
本発明の組成物の具体的な使用量としては９例えば、酢
酸キナーゼ５〜５０μ／ＪＩＺ、 ＡＴＰ ｉ、５〜
１５ＦＦＩＭ、 ピルビン酸キナーゼ３− ′５０
μａｍ！、 ホスホエノールピルビン酸０．１〜２ｍ
ｋＡ程度が適当である。また、全反応系を酵素系とする
場合には乳酸脱水素酵素１−２０ ｐ／ｗｌ、 ＮＡＤ
Ｈ０，１−Ｉ ｍ Ｖ程度を使用すればよい。
酸キナーゼ５〜５０μ／ＪＩＺ、 ＡＴＰ ｉ、５〜
１５ＦＦＩＭ、 ピルビン酸キナーゼ３− ′５０
μａｍ！、 ホスホエノールピルビン酸０．１〜２ｍ
ｋＡ程度が適当である。また、全反応系を酵素系とする
場合には乳酸脱水素酵素１−２０ ｐ／ｗｌ、 ＮＡＤ
Ｈ０，１−Ｉ ｍ Ｖ程度を使用すればよい。
本発明の組成物を用いる場合、最適生育温度が室温より
かなｒ）高い微生物の産生する酢酸キｆ−ゼを使用する
にもかかわらず９反応温度としては室温付近を採用する
ことができる。例えば、２０〜４０℃の温度で好都合に
使用することがで診る。
かなｒ）高い微生物の産生する酢酸キｆ−ゼを使用する
にもかかわらず９反応温度としては室温付近を採用する
ことができる。例えば、２０〜４０℃の温度で好都合に
使用することがで診る。
反応ｐＨとしでは、６．０〜８．５．特に７．０〜７．
５が好ましい、反応時間は５〜２０分程度でよい。
５が好ましい、反応時間は５〜２０分程度でよい。
本発明の定量用組成物を用いることにより、酢酸又は酢
酸塩の定量を極めて容易に、短時間で精度よく行うこと
がで縁る。
酸塩の定量を極めて容易に、短時間で精度よく行うこと
がで縁る。
次に本発明を実施例により具体的に説明する。
実施例１
ＡＴＰ５ｆｆＭ、 ホスホエノールピルビン酸ＩＦＦ
ＩＭ。
ＩＭ。
ＮＡＤＨＯ，３Ｍ Ｍ、硫酸マグネシウム１０ｍＭｒ
ピルビン酸キナーゼ１０μ／ａｔ 、乳酸脱水素酵素
１０μ／−を含翁するリン酸カリウム緩衝液（７０７Ｆ
ＩＭ、Ｉ）Ｈ７，３） ）こバチルス・ステアロサーモ
フィルスを給源とする酢酸キナーゼ２５μ／ｍｅを加え
、試薬液とした。
ピルビン酸キナーゼ１０μ／ａｔ 、乳酸脱水素酵素
１０μ／−を含翁するリン酸カリウム緩衝液（７０７Ｆ
ＩＭ、Ｉ）Ｈ７，３） ）こバチルス・ステアロサーモ
フィルスを給源とする酢酸キナーゼ２５μ／ｍｅを加え
、試薬液とした。
この試薬液に対し、全量上５ ｍｌになるようにして種
々の容量の酢酸を添加し、３０℃で１０分ｎｌ酵累反応
を行った。
々の容量の酢酸を添加し、３０℃で１０分ｎｌ酵累反応
を行った。
その結果、 ＮＡＤＨの３４０ ｎ ｍにおける吸光度
変化から酢酸量を算出したところ、第１図に示すように
きれいなｌＸ線関係で酢酸量がほぼ１００％定量できる
ことがわかった。
変化から酢酸量を算出したところ、第１図に示すように
きれいなｌＸ線関係で酢酸量がほぼ１００％定量できる
ことがわかった。
比較例１
酢＃０．ｌｆｆＭを含有する系についてクオらの方法（
アｔリディカル・バイオグミストリー、５５巻、１頁、
１９７３年）に従ってエシェリキア・コリ（常温生育
微生物）の産生ずる酢酸キナーゼを使用して酢酸の定量
を行った。
アｔリディカル・バイオグミストリー、５５巻、１頁、
１９７３年）に従ってエシェリキア・コリ（常温生育
微生物）の産生ずる酢酸キナーゼを使用して酢酸の定量
を行った。
その結果、 ０．０９４ ｍ Ｍの酢酸が実測された
が。
が。
測定時間に５５分間を要し、エシェリキア・コリの産生
ずる酢酸キナーゼの代りに、実施例１で用いた酢酸キナ
ーゼを上記同じ糸に適用した（ ０．０９８ｍｄの実測
、測定時間は１０分間。）ものに比べて、非常に長時間
であった。
ずる酢酸キナーゼの代りに、実施例１で用いた酢酸キナ
ーゼを上記同じ糸に適用した（ ０．０９８ｍｄの実測
、測定時間は１０分間。）ものに比べて、非常に長時間
であった。
第１川は９反応液０．５ｇｌ中の添加酢酸量（横軸）と
３４０ｎｍの吸光度から算出した９！測酢酸ｔ（縦軸）
との関係を示す図である。 特許出願人 ユニチカ株式会社
３４０ｎｍの吸光度から算出した９！測酢酸ｔ（縦軸）
との関係を示す図である。 特許出願人 ユニチカ株式会社
Claims (1)
- （１）酢酸キナーゼとピルビン酸キナーゼを含む酢酸又
は酢酸塩の定量用組成物において、酢酸キナーゼが、最
適生育温度が５１］Ｃないし８５Ｃである微生物の産生
する酢酸キ對−ゼであることを特徴とする酢酸又は酢酸
塩の定量用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12149182A JPS5911199A (ja) | 1982-07-12 | 1982-07-12 | 酢酸又は酢酸塩の定量用組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12149182A JPS5911199A (ja) | 1982-07-12 | 1982-07-12 | 酢酸又は酢酸塩の定量用組成物 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5911199A true JPS5911199A (ja) | 1984-01-20 |
Family
ID=14812472
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12149182A Pending JPS5911199A (ja) | 1982-07-12 | 1982-07-12 | 酢酸又は酢酸塩の定量用組成物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5911199A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6474037A (en) * | 1987-09-12 | 1989-03-20 | Nec Corp | No-break feeder |
| WO2002094949A3 (de) * | 2001-05-21 | 2003-10-02 | Basf Ag | Nachweisverfahren zur identifizierung von hydrolasen |
| WO2012147822A1 (ja) * | 2011-04-25 | 2012-11-01 | 国立大学法人東京農工大学 | 油劣化の判定方法およびこれを用いる装置 |
-
1982
- 1982-07-12 JP JP12149182A patent/JPS5911199A/ja active Pending
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6474037A (en) * | 1987-09-12 | 1989-03-20 | Nec Corp | No-break feeder |
| WO2002094949A3 (de) * | 2001-05-21 | 2003-10-02 | Basf Ag | Nachweisverfahren zur identifizierung von hydrolasen |
| WO2012147822A1 (ja) * | 2011-04-25 | 2012-11-01 | 国立大学法人東京農工大学 | 油劣化の判定方法およびこれを用いる装置 |
| JPWO2012147822A1 (ja) * | 2011-04-25 | 2014-07-28 | 国立大学法人東京農工大学 | 油劣化の判定方法およびこれを用いる装置 |
| JP6125423B2 (ja) * | 2011-04-25 | 2017-05-10 | 国立大学法人東京農工大学 | 油劣化の判定方法およびこれを用いる装置 |
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