JPS59155257A - 血液を外部的に処理するための装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、一般的に、生きた哺乳動物の医学的治療のた
めの装置に関する。更に詳しくは、本発明は血液を治療
する方法において、血液中の血液成分の機能的数（ｆｕ
ｎ＝ｔｉｏｎｉｎｇ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　）を減少
する目的で、活性化された際に血液成分とフォトアダク
ト（’ｐｈｏｔｏａｄｄｕｃｔｓ　）を形成する光活性
化学試薬を用いて処理することを特徴とする方法に関す
る。 本発明の方法は、ある型の、荷にリン、８球を含む白血
球の数（ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ）が、その他の有核細胞
の数に比較して゛ζ過度に増大するある種の形態の白血
病を含む多くの極めて重要な病気に特別の応用性を有す
るものである。その様な過度のリンパ球の数は、その病
気の元になる原因よりもむしろ結果を表わすものである
が、その様な過度のリン・ぞ球数は、それを減少する措
置がとられない場合には、患者に直接に悪影響をもたら
す。即ち、体の器官の機能を損う合併病が迅速に広がり
、遂には生命をおびやかす状況が呈示される。 又、リン／ξ性白血病の他にその他のヒトの疾病におい
ても循環血液（ｂｌｏｏｄ　５ｕｐｐｌｙ）のリンパ球
の数の過度の増大が生じうろことにも注意すべきである
。即ち、例えば、薬品などを含む投与試薬に対する激し
いアレルギー反応の結果、或いは多くのその他のリンパ
球媒介疾病においてその様な結果がもたらされることが
おる。本発明の方法によって特に瞳減しやすい一群の病
気は、自己免疫性疾病である。この種の疾病は、例えば
変形関節炎、慢性甲状腺炎、溶血性貧血、感性貧血、お
よび膠原病である。これらの疾病は、宿イのリンパ球が
最初に胎児および新生児のライフ時に宿主に生じる「自
己」組織抗原として認知しかつ許容するのに失敗したこ
とから生ずる。むしろ、宿主リンパ球はこれらの通常の
良性抗原に異物として反応し、増殖して、攻撃抗原全結
合するように構造化−ａｎた抗体様表面受容体と表現さ
れる感作クローンを形成する。本発明は、これらの異常
に活性化されたリンパ球を血液から排除するのに適して
いる方法を提供する。 永年に亘る医薬などの発展により、例えば、リンパ球の
数の基礎的な生産速度を変えることにより非特異的にリ
ンパ球の数が減少されることもあるが、その様な発展の
他にこの問題を直接的に攻撃する努力の過程において、
各種技術が、例えば、その様なリン・９球を循環血液か
ら機械的に取除く方法などにより、その時々に応じて使
用されてきた。従って、例えば、備環血ｇ全遵続的な遠
心分離にかけることが昶らｎており、これにより、選択
的にリンパ球を除去して、加工された循環血液中のリン
・ぞ球の数を減少することが追求されている。例えば、
Ｅ、Ｊ、Ｆｒｅｉｒｅｉｃｈ等Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅａ、
　２５　＋１５１６　（１９６５）参照。しかしながら
、一般的にこの方法は望ましくないリンパ球を貧む血液
画分と、望ましい血液成分、例えば血小板及び赤血球を
含む画分との間のｌｉ＃ｉ差が不十分なため、後者の高
割合を保持すると共に前者の尚割付を除去することを保
証できないこともあって、極めて効率が悪い傾向を有す
る。 又、ＸｅＪ−領域も含む高エネルギー篭磁波照゛射によ
り白血病のような病気を治療することも公知である。そ
の様な治療は血液細胞が発生している内部体内器官にし
ばしば向けられるが、循環血液をｘ７で体の外部の点（
血液がはじめて抜き出された点）で照射することも知ら
れており、これにより照射が体或いは体の内部器官に直
接投射しないようにされる。この方法は強力であるもの
の、強力に破壊的なエネルギーが、望ましくない細胞の
破壊の他に生命に係わる状態において残しておきたい血
液成分金も不能力化或いは破壊する点で無差別的である
。 白血病から生ずる過度のリンパ球数を治療するために用
いられる医薬のうちにはリンパ球自身に対しても活性な
ものがある。コーチシンはその様な薬品の１つである。 しかしながら、その有効性は悪性リンパ球の異常な代謝
活性を完全に抑制しないので限られたものである。コー
チシンがリンパ球細胞に作用する機構は完全には理解さ
れてはいない。しかしながら、リンパ球中のコーチシン
受容体にまず特異的に結合し、これらの可動性受容体に
より細胞の核に運ばれ、そこで細胞の代謝活性を変更す
る作用を行うものとされている。 しかしながら、コーチシンおよびその誘導体は、リン・
９球に対して特異的ではなく、他の組織内での重大な副
作用はこの種の治療において合併症がしばしばおこるこ
とである。例えば、真性糖尿病、高血圧、および骨の砿
物質消失がしばしば起こり、古典的コーチシン療法を限
定する。 ある種のその他の化学試薬は、ある柚の有核細胞の核酸
に弱く結合し、そこでそれらは、一般的に一時的で細胞
内のＤＮＡ合成速度に余り影響を及ぼさない低エネルギ
ーの化学相互作用或いは分子間吸引力を含む分子複合体
を形成することにより介入することが知られており、信
じらｎている。 本出願人に係る米国特許第４，３２１．９１９号明細書
に記載されている「ソラレン類（ｐｓｏｒａｌｅｎａ）
Ｊはその様な化学薬品であるＪ８ 抗体として知られているある棟の連結蛋白質（ｌｉｇａ
ｔｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ）は、又、リンパ球に対して
活性である。ある抗体と特別のリンパ球との相互作用に
は、リン）ｅ球が抗体上の対応する活性部位に幾何学的
に及び化学的に受容的な部位或いは抗原を有することが
必要である。抗体を抗原に結合する力は水素結合、非極
性結合、イオン性相互作用及びＶａｎ　ｄｅｒ　Ｗａａ
ｌｓ　相互作用などの吸引力からなり、それらの強度は
相互作用基間の距離に反比例する。従って、抗原の幾何
学的形状を変化させるのに役立つリンパ球膜中のいかな
る構造的変化も抗体の抗原に対する結合金妨げるのに役
立ち得る。更に、ある抗体が一度ａ＃ｌ上のある抗原に
結合すると、その細胞は「抗原体変調」をおこし、抗体
がもはやそれに結付できないようにその細胞膜を変化さ
せる。リンパ球の膜が抗体をその抗原部位から遮断する
構造を有する場合には、抗体は抗原になお引かれるもの
の、永久的性質の如イＩｊＪなる＃ｌ￥汀も形成するこ
とができない。悪性および活性細胞と共に細胞構造の変
化が例外的というよりもひしろ原則的であり、また「抗
原的変調」がしばしば起こる“限りにおいて、白血病ま
たは活性化細胞を単純な抗体投与で有効に対抗すること
はしばしばできなかった。 望ましくない天然抗体のような血液中に存在する免疫的
化学物質を永久的に不活性化あるいは除去するために抗
体を用いることも又、抗体が抗原と不可逆的或いは強力
に複合化することができないことにより妨けられている
。 ヒトのガンに対抗するための改良技術は、所定の腫瘍細
胞によって表わされる抗原に対して特異的であるモノク
ローナル抗体（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔ　１ｂｏｄ
ｉｅａ）の使用を包含する。例えば、ヒトのリンパ腫細
胞は正常なヒトのリンパ球に融合されて抗原の産生を増
大させてきた。融合生成物は、マウスに注入された。そ
れは、抗体ｔ−ＩＪンノＲ腫抗原に対して産生ずること
によって応答した。次いで、マウスの抗体産生牌細胞は
、マウス骨髄肺細胞と融合されてハイズリドーマを産生
し、このノ・イブリドーマはヒトの患者に存在するリン
パ腫細胞に対抗するのに使用できる特異的抗すン／ｅ腫
抗体を合成した。Ｙ、Ｂａ５ｋｉｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏ
ｇｙ　Ｒｅｖｉｅｗ（１９８２年１０月加日）、第１９
頁および米国特許第４．１７２．１２４号明細書および
第４，１９６，２６５号明細書参照。 上記の薬理学的相互作用は、光細胞毒試薬（ｐｈｏｔｏ
ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｇｅｎｔ）からなる光活性化学
試薬或いは紫外線照射（１ｎｃｉｄｅｎｔ　ｕｌｔｒａ
ｖｉｏｌｅｔ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　）により励起され
る一つ以上の官能基を含有しかつ活性化時に近くの化学
基と共有結合を形成する傾向を有する光活性化学試薬の
使用により強めることができる。各種光活性試薬の反応
性はソラレン類および制ガン剤プレオマイシン（ｂｌｅ
ｏｍｙｃｉｎ）などの試薬の場貧にみられる化学的に特
異的なものから、ジアゾ及びアジド基の場合にみられる
ような実質的に任意の基に対しそ大きな反応性を有する
試薬まで色々である。これらのジアゾ及びアジド基は、
本発明の方法において必須である光活性を本発明におい
て使用される通常光不活性化学試薬に導入するのに好ま
しい光活性官能基である。 本発明に至るまでは、光活性化学試薬は極めて限られた
態様においてのみ治療上利用されている。 臨床レベルにおいては、一群の光活性化合物、即ちンラ
レン類が乾麺に悩む患者の治療に用いられている。これ
らの試薬のその他の用途は、殆んど全て細胞生理学及び
化学の実験的研究のものであり、その典型的報告は次の
Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｎ、Ｙ。 Ａｃａｄ、　Ｓｅｔ、　３４６の記事にみられる：Ｒｉ
ｃｈａｒｄａ、　Ｆ、Ｆ、及びＬｉｆｔｅｒ、　Ｊ、に
よる”Ｐｈｏｔｏａｆｆｉｎｉｔｙ　Ｐｒｏｂｅｓ　ｉ
ｎ　ｔｈｅ　ＡｎｔｉｂｏｄｙＣｏｍｂｉｎｉｎｇ　Ｒ
ｅｇｉｏｎ″、ｐｐ、　７８−８９　；及びＣｏｏｐｅ
ｒｍａｎ　＋　Ｂ、　Ｓ、による”　Ｐｈｏｔｏｌａｂ
ｉｌｅＡｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ　ａｓ　Ｐｒｏｂｅｓ　
ｏｆ　Ｒｉｂｏａｏｍａｌ　５ｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄ
　Ｆｕｎｃｔｉｏｎ”＝　ＰＰ、３０２−３２３゜発明
の概要 本発明により、成る株の血液成分の機能的数の安全且つ
有効な減少を可能にする方法が見い出された。より詳細
には、本発明の方法は、ヒトの血液中のある種の有核細
胞及び望ましくない自動−反応性抗体のような望ましく
ない抗原的化学物質の機能的数の減少を可能にするもの
である。 本発明の方法によれば、その様な治療を必要とする血液
を患者から抜き出し、これに、成る種の受容部位と分Ａ
いは化学的会合を行うことのできる種類の有効量の溶解
光活性化学試薬の存在下において、波長範囲が約２００
０〜４０００オングストローム、好ましくは約３２００
〜４０００オングストロームテアＩ７且つ約３３００〜
３７００オングストロームにピーク強度を有する紫外線
を照射する。本発明の実施に関して使用される「受容部
位」なる用語は、下記のものを意味する。 １、有核血液細胞の核酸、 ２、有核血液細胞の分子受容部位、 ３、有核血液細胞上の抗原部位、或いは４、免役原性的
化学物質上の抗原部位。 本発明の方法によれば、□患者の血液流に紫外線を照射
するか、または好ましくは患者の血液の一部分を数を減
少しようとする有核細胞数を選択的に富′ませ、前記画
分に溶解光活性試−の存在下において紫外線ヲ遇択的に
照射する。分別せずに、患者の血液の一部分を照射時に
密度勾配に付し、それにより減少しようとする細胞数を
配回させて他の血液細胞数よりも多い入射放射線全吸収
させることかできる。 いずれの場合にも、照射時に、光活性化学試薬はこの有
核血液細胞中（或いは上）の受容部位と永久的なフォト
アダクトを形成し、これによりアダクト化された成分の
破壊または不活性化が確実となる。この照射された血液
は次いで患者に戻される。この治療法は、患者の血液の
白血球画分の物理的分離および廃棄を包含する方法より
も以下の点で優れている。（１）永久的血液容量不足、
即ち多くの患者によって許容されにくい状態がない。 （２）機能不全細胞数だけが破壊され、一方健全な血液
細胞は体に戻される。（３）処理細胞数の正確に機能的
なものの返送は、フィードバック阻沓ａｉヲ反作用させ
ようとする病理状態に誘導する。 リン・ぞ球のような有核細胞の核酸に対して親和性を有
する元活性化学試楽が、本発明において使用される場合
には、前記分子内吸引力は、この試薬ｔ−ＩＪンパ球の
核酸に挿入された関係となるように引き込む。活性化前
には、この試薬は細胞化学には殆んど或いは何の影響も
及はさない。しかし、照射時にこの試薬は細胞の核酸と
成る種の共有的な結合または他の複合化を形成し、これ
により核酸鎖を不活性化し、細胞の代謝的機能を阻害す
る。 この様にして細胞の過程特に分割能力が崩壊され、その
結果細胞の不活性化或いは死が起こる。 ソラレン類として公知であり本発明において準用する米
１．！ｉｌ特許第４　、３２１　、９１９号明細書によ
り十分に記載されている化ば物群は、上記活性を有し、
本発明において使用するに適したものであることが見い
出された。ソラレン類のようなりＮＡに対して新和性を
有する光活性化学試薬は、本発明に使用する場合に極め
て望ましい効果を有する。即ち、白血病のようなある種
の病気においては、最も減少させたいと思われる細胞が
、最も激しい代謝的活動を開始しているという事実によ
り、リンパ球の損傷及び破壊がその様な細胞に選択的に
起こるので、これらの細胞が、本発明の方法により最も
無能化烙れやすい則廁であるからである。 コーチシンは有核リン・９球細胞内の特別の受容体に対
して親和性を有する化学試薬である。前記の如く、白面
病或いは自己免疫性疾病に悩む患者の機能的リンパ球数
の減少へのコーチシンの適用は全く満足できるものとい
うことはできないものでめった。しかしながら、本発明
によれば、コーチシンを用いて、新しい且つより有効な
態様で白血病或いは活性化リンパ球を治療することがで
きる。 本発明において１史用する前にコーチシンは先ず光活性
化（「光７Ｉ＋ＩＢ胞毒素化」）されなければならない
。当業者には、コーチシン或いは同様のステロイドホル
モンの光活性化が、確立された化学技術上用いて達成さ
れることが了解できるであろう。 本発明は、成る種の化学試薬を用いて、成る棟の血液成
分の機能的数の従来達成することのできなかった減少を
達成することのできる方法に限定されているので、その
様な化学の詳細は本発明の範囲内のものとはみなされな
い。当業者は又、確立された化学方法を用い、必要に応
じて結合部位の保護の操作を用い、コーチシンを光活性
部分で数個の位置（（おいて置換することができ、置換
コーチシンの評価を行うことができ、コーチシンの正常
な生物学的活性の最大割合をとどめる類似体を容易に決
定することができることも了解できるであろう。上記の
ステロイドホルモン光活性化及び最大活性類似休め決定
の化学は次の文献に十分に説明されている： １、　　Ｊ、Ａ、　Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ
＋　Ｈ，Ｎ、　Ｍｙｅｒｓ及びＨｊ、Ｊｏｈｎｓｏｎ、
　Ｊｒ、、　Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、　ａｓ　＋３５２
５−３３　（１９７３）。 ２、　　Ｊ、Ａ、　Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ
、　Ｈ，Ｊ、　Ｊｏｈｎｓｏｎ＋　Ｊｒ。 及びＨ，Ｎ、Ｍｙｅｒｓｙ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ
＋　１２　＋４０８５−９２　（１９７３）。 ３、　　Ｊ＋Ａ、Ｋａｔｚｅｎｅｌｌｅｎｂｏｇｅｎ、
Ｈ，Ｊ、Ｊｏｈｎｓｏｎ。 Ｊｒ、、　Ｋ、Ｅ、Ｃａｒｌｓｏｎ及びＨ，Ｎ、Ｍｙｅ
ｒｓ＋Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙｅ　１３　；　２９８
６−９４（１９７４）。 これらの文献に記載されている如く、ステロイＰ類の光
活性化はジアゾ及びアジド基として知られている光活性
部分の置換により大きな成功をもって達成されている。 これらの基は各々高度の固有の光活性を有し、その活性
はそれらの基が別の化学試薬内に導入される場曾にも保
持され、それによりその試薬を光活性にする。 次いで、光誘導化の公知の技術を用い、高度のコーチシ
ンの元の薬理学的活性を保持するために本発明において
好ましい１６−ジアシコーチグンは、先ずコーチシンを
ニトロン化する（　ｎｉ　ｔｒｏｓａｔ　ｉｎｇ）こと
によって１６−オキシモコーチプンとし、これｆｔ仄い
てクロロアミン酸化により１６−ジアシコーチゾンに転
化して良好な収量で合成することができる。その他の置
換コーチシンも氷酢酸中で硝酸七尾いてコーチシンをニ
トロ化することにより誘導することができる。このニト
ロ化工程の生成物は多くのアジｒ誘導体であり、これら
は容易にカラムクロマトグラフにより分離することがで
きる。 これらの生成物全作成するために用いられる反応パラメ
ーターは、前記Ｊ、Ｏｒｇ、Ｃｈｅｍ、ｔ　３８＋　３
５２５−３３のＫａｔｚｅｎｅｌ　ｌｅｎｂｏｇｅｎの
文献に実施可能な程度に詳細に記載されている。 上記開示の好ましい構造をＭする光−誘導コーチジン或
いはその他の多分これより好ましくはない類似体の一つ
を血液に添加すると、容易にリンパ球その他の有核細胞
内に入り、それ自身それらの細胞の中のコーチシン受容
部位と会合する。それにより、細胞は光増感され、紫外
線での照射によって強く影響され得る。高割合の置換光
細胞毒コーチシンが、これらの受容部位に到達するよう
に計算された適当な時間、典型的には１分〜２時間の範
囲、好ましくは５〜Ｌ５分の範囲の間隔の後に、ガン或
いは免疫抑圧（ｉｍｎｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ）
治療に通常用いられる量にほぼ等しい投与量、典型的に
は１ｍｌの１１Ｌ液当り約１ｎｇ〜１００μｇの溶解し
た光活性化コーチシンを含有する血′ｅ、

【紫外縁で照
射する。血液の照射は、コーチシン分子上の光活性部分
をコーチシン受容体部位のその場で活性化し、置換コー
チシンとコーチシン受容体との間にフォトアダクトを形
成させ、その結果細胞の代謝活性の継続に致命的な受容
体のコーチシン伝達能の破壊が起こる。従って、υノッ
ク球ヒコのコーチシン受容体の極めて大部分が不活性化
されると、細胞は迅速に機能することができなくなり、
殆んどが特に分割できなくなり、引続きそれらの不活性
化または破壊が迅速におこる。 下記のその他の化学光活性試薬が紫外線及び可視光線照
射後に完全な細胞と直接相互作用して細胞状ＤＮＡを開
裂または失活することが知られている。その関連部分が
準用される以下の文献は、本発明の実施に有用であるこ
ともできる光細胞毒試薬を開示している。 ｌ）エチジウム及びアクリジン＠（Ｋ、Ｌ。 Ｙｉｅｌｄｉｎｇ及びり、Ｗ、　Ｙｉｅｌｄｉｎｇ　：
　「ＤＮＡの光親和性標識化Ｊ　Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　
Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、。 ３４６、　３６８−３７８　（１９８０）、Ｙ、に、Ｈ
ｏ’等Ｂｌｏｏｄ＋　５２９１０９９−１１１４　（１
９７８）　、又、７１’　ＩＪ　７　フイ’／７、ダウ
ンマイシン、ルビダゾン）。 ２）スルホンアミｌ−′類、スルホニル尿素類、テトラ
サイクリン類、コールタール誘導体、ピレン類、アント
ラセン、ピリジン、フェナントレン（Ｋｏｒｎｈａｕｓ
ｅｒ　Ａ　：　「光毒性の分子的側面」、Ａｎｎａｌｓ
　　ｏｆ　　Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ｔ　３４６＊
　　３９８−４１４（１９８０））。 ３）％異的反応性抗体（Ｆ、Ｆ、　Ｒｉｃｈａｒｄ及び
Ｊ、　Ｌｉｆｔｃｒ　：　［抗体結合領域における光親
和性検査Ｊ　Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　Ｎ、Ｙ、Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、、　３４Ｌ７８−８９．　（１９８０）　）。 ４）ブレオマイシン、デグリコプレオマイシンまたはそ
れらのＤＮＡ活性活性体導体移金属錯体、即ち銅錯体、
鉄錯体およびコバルト錯体（Ｊ、Ｌ。 Ｆｏｘ　：その効能への薬物シェッド光合成、Ｃｈｅｍ
。 ａｎｄ　Ｅｎｇ、　Ｎｅｗｓ、　１９８２年１０月１８
日、第ゐ頁）。 ５）有機白金制ガン剤（Ａ、Ｌ、　Ｚｗｅｌｌｉｎｇ及
びに、Ｗ、Ｃｏｈｎ、　ｒガン治療の原理」、Ｂ、　Ｃ
ｈａｂｎｅｒ編、　　５ａｕｎｄｅｒｓ　　４行　（１
９８２ン、　第　３０９　頁〜ｇ　　３３９頁）。 ６）ピレンコレステリルオレエート（Ｓ、Ｔ。 Ｍｏａ１ｅｙ等、Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　
Ｓｃｉ、　ＵＳＡ＋７８　、５７１７−５７２１　（１
９８１）。 ７）プロフィリン誘導体（１，Ｄｉａｍｏｎｄ等、Ｌａ
ｎｃｅｔ、　３．１１７５−１１７７（１９７２）　）
。 特別の血液成分に対して特異性の抗体を生成することも
できるが、しかし、前記の如く、悪性の細胞に共通した
構造の多様性及び細胞が特異性抗体に対して抵抗性とな
ることのできる抗原的変調のような細胞現象のために、
それらを用いて血液中の悪性細胞の数を減少する際に良
好な結果を得ることができなかった。即ち、例えば、特
別の悪性’ｌ’　＋　ＩＪンパ球型に対して特異的な抗
体は、血液中のこの型の大部分の細胞とそれらの細胞に
対する親和性を有する抗体であるかどうかの如イロ」に
拘らず複合化することができず、又、抗体により複合化
されていた相当数のリンパ球は、それらの結合抗原を抗
原上の抗体の拘束を破ることにより流してしまった。し
かしながら、本発明によれば、光活性化された抗体を用
いて抗原的変調を防止することによって機能的リン・ξ
球の数を従来見られなかった程度にまで減少させること
ができる。更に、本発明の方法を用いて、特に悪性細胞
を循環することによって発生されたその他の血液成分、
例えば望ましくない抗体、に対して特異的に反応性のあ
る光活性化された抗体を用いて、血液中のそれらの成分
の数を同様に極めて有効に減少させることができる。 特別の細胞或いは免疫原性化学物質に対して特異的な抗
体を製造及び精製する方法は公知であり、一般的にはす
でに前記されている通りである。極めて多量の、極めて
特異的なモノクローナル抗体が、ハイブリドーマ（Ｈｙ
ｂｒｉｄｏｍａ　）或いはその他の確立された技術によ
り作ることができると述べれば足りる。 本発明において使用するのが望ましい抗体全光活性化す
る化学技術も又当業者に公知である。又、実質的に全て
の抗体が光活性誘導化に適した多くの部位を有すること
も当業者に自明である。抗体にない部分を、抗体の特別
な抗原と複合化する能力を損うことなく抗体に付加する
方法は、例えば、Ｈａｎｄｂｏｏｋ　ｏｆ　Ｅｘｐｅｒ
ｉｍｅｎｔａｌ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、　Ｗｅｉｒ＋
Ｄ、Ｍ、、　Ｊ、Ｂ、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ刊＋　１９
７８　ｖ　ｐｐ　１５．１−１５．３０　　に開示され
ている。本発明の目的の促進において、この誘導方法が
目標細胞に特異的な抗体の結合領域を破壊しないことが
重要である。これに関して、殆んどの抗体上の潜在的誘
導部位の数及び好ましいジアゾ及びアジド基のような光
活性部分で置換できる各種の技術に鑑み、特別に結合領
域を保瑣する予防策ｅ［しる必要は殆んどないと思われ
る。しかしながら、くうしなければその抗体の光誘導化
により抗体上の結合領域が破壊される場合には、結合部
位の保護及び保護基の除去についての確立された技術を
使用することができる。 ある血液成分、例えば、本発明の好ましい態様において
、患者の悪性’ｌ’−ＩＪンパ球、に対して特異的に反
応性を有する光活性化された抗体を、本発明の方法にお
いて患者の血液に添加すると、それらは、必要な抗体結
合領域及び細胞抗原的部位の対応が存在する’Ｊ’　＋
　ＩＪンパ球と極めて迅速に複合化する。しかしながら
、数多くの抗体は、それら自身の結合領域の欠落成いは
それらの目標細胞の受容体の欠落により目標リン・七球
に引きつけられながらも抗体−抗原複合体を形成するこ
とができず、細胞の不活性化または破壊？もたらすであ
ろう。抗体に結合された特別の光活性部分を活性するこ
とのできる波長の紫外線で照射すると、複合化した抗体
上の光活性部分が優先的に複合化細胞とフォトアダクト
全形成し、それによりこれらの細１＠をそれらの複合化
抗原抗体に永久的に結合させ、複合体が破壊される手段
としての抗原的変調を除去する。目標細胞に引きつけら
れたにも拘らず、それらの各々の結合領域における対応
が不十分であったために、目標細胞のいずれとも従来有
効に複合化することのできなかったその他の抗体も、光
活性化により、それらの細胞と優先的にフォトアダクト
を形成することにより、以前は全く存在しなかったフォ
トアダクト複合体を生成する。この様にして、通常、病
気の治療に用いられている血７夜１ｍｌ当り１　ｎｇ〜
１００μｇのオーダーの投与量に等しい光活性化抗体の
投与量を病気に適用することにより治療効果を得ること
ができる。 前記光−誘発抗体−抗原複合化は、抗体構造中に複数の
光活性基を導入することにより増幅される。何故ならば
、抗体上のいくつかの光活性部分の存在により、単一の
抗体が一個より多い目標細胞と複合化することのできる
可能性が増大するからである。本発明の方法により、そ
の様な抗体が用いられる場合には、それらは血液から極
めて特別の各易さをもって除去することのできる複合化
細胞の網目或いは鎖を形成する傾向が高められる。 更に又、特別の望ましくない天然の抗体或いはその他の
免疫原性化学物質に対して特異的な抗体を光活性とし、
本発明の方法に従って使用してそれらの化学物質を強く
結合する４１８体を形成して、それらを以前よりもはる
かに効率よく体から除去することを可能ならしめること
も、又、本発明Ｑ範囲内である。 本発明の実施に有用な光活性化学試薬は、前記光細胞毒
細胞排除剤のいずれ盆も目標細胞に有効なほど近くに配
送するのを高めるために選ばれるキャリヤ一部分も含む
ことができる。前記試薬との組み合わせで有用なキャリ
ヤーは、目標細胞、例えば増感’］’　−ＩＪン′パ球
或いは他の有核血液細胞上または内の受容体に対して強
い親和力を有するものから選ばれる。光細胞毒試薬は、
キャリヤ一部分に物理的に配合されるか化学的に結合さ
れる。 キャリヤ一部分は、体外血液流中に導入された際に光１
１ｆｉｌ胞毒試薬を目標細胞の近くに運ぶように作用す
る。次いで、ここに記載のような血液流への照射は、試
薬を活性化させて目標細胞の代謝を妨げる。 活性化’］’−ＩＪンパ球および他の有核血孜細胞は、
それに結合された際にリンパ球の代謝要求を達成するよ
うに作用する各種のポリペプチドに対して特異的な受容
体を冗現することがボされている。 この特異性は、「受容体依存光増感」と称すことのでき
る技術によって望ましくない細胞数を排除するのに利用
され得る。例えば、天然および生曾成インシュリン用の
受容体は、活性化Ｔ−リンノぞ球上に確認されている。 ポリペゾテドインターロイキン、トランスフェリンおよ
びチモポイエチンも、特異的受容体の存在によるとされ
る活性化Ｔ＋　９７１４球に対する強い親和力を示すこ
とが実証されている。これらのリンパ親和性（ｌｙｍｐ
ｈｏｔｒｏｐｉｃ）ポリペプチド金、紫外線による活性
時にリンパ球代謝を妨げるであろう分子に共Ｍ結合させ
ることによって生成された新しい光活性化学試薬を利用
することは、本発明の一部分である。この種の分子は、
不明細書において既に記載さ扛ており、細胞光増感剤ま
たは光細胞毒（ｐｈｏｔｏｃｙｔｏｔｏｘｉｎｓ　）と
称すことができる。ポリペプチド結合領域は、容易にリ
ンパ球受答体と会合し、細胞光増感剤を破壊しようとす
るリンパ球内に吸収し、一方正常なリンパ球の破壊を回
避する。 光細胞毒染料（ｐｈｏｔｏｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｄｙｅ
ｓ）　ｆインシュリンに結合させる方法は、開発されて
おり、各種の細胞光増感剤をインシュリン、インターロ
イキン、トランスフェリンまたはチモポイエチンに結合
させるのに一般に有用であると予期されるであろう。例
えば、インシュリンのりシンＢ−２９のε−アミン基は
、ｍ−プレイイミド−ベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスク
シンイミドエステルで誘導化され、蛋白質部分の遊離チ
オール基を経てα−ラクトアルブミン（不活性蛋白質）
のローダミン誘導体とカップリングされてジスルフィド
ブリッジを形成している。変性インシュリンの結合効率
および生物活性は、実質上保持された。Ｙ。 ５ｈｅｃｈｔｅｒ等、Ｐｒｏｃ、Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ
、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ。 戸−、２１３５−２１３９（１９７８）。フルオレセイ
ン−イソチオシアネート標識インシュリンは、Ｓｉｇｍ
ａ（ミズーリ州セントルイス）から市販されており、Ｒ
，Ｆ−Ｍｕｒｐｂｙ＃によりＣｙｔｏｍｅｔｒｙ、　２
　＋　４０２（１９８２）において細胞リオゾーム（ｌ
ｙｏｇｏｍｅａ）に迅速に内部移行されることが実証さ
ｇでいる。同様の化学結合反応は、他の細胞光増感剤、
例えばプレオマイシン類、ンラレン類、コルチコステロ
イド類、ボルフリン類（ｐｈｏｒｐｈｒ　１ｎａ））ピ
レン＠１アクリジン類、有機白金等のインシュリン誘導
体、インターロイキン誘導体、トランスフェリン誘導体
またはチモポイエチン誘導体の生成全可能とさせるでお
ろう。 これらの光活性試薬は、患者の体外血液流に導入され、
す／パ球−試薬複合体は前記のように照射されて、目標
細胞数の排除筐たは減少を達成するであろう。或いは、
元細胞毒染料それ自体、例えばローダミ／およびフルオ
レセイ／が目標細胞に供給され、照射することができる
。 目標細胞の受容体依存光増感用の別の技術は、リポソー
ムをそれに共有結合されたり／−ξ親和性ポリペプチド
或いは抗体、好ましくはモノクローナル抗体と併用する
ことを包含する。リポソームは、球状す／脂質２層小胞
である。５００オ／ゲストローム〜０．５μｍの範囲内
の有用直径を有するリポソームが、調製でき、そして有
効量の細胞光増感化学薬品、例えば染料、ステロイド誘
導体および他の制ガン剤で負荷され得る。Ｊ、Ｎ、Ｗｅ
ｉｎｓｔｅｉｎ等によりＡｎｎ、　Ｎ、Ｙ、　Ａｃａｄ
、　Ｓｃｉ、、　３０８　、４３３　（１９７８）に開
示の方法のような方法が使用されて、リポソームに前記
の如何なる元細胞毒試薬も負荷させることができる。脂
質出発材料は、脂質をリポソーム壁に導入する前ｆたは
好ましくは後に抗体またはポリペプチドで誘導化され得
る。Ｆ、　Ｊ　、　Ｍａｒｔｉｎ等、Ｂ　ｉ　ｏｃｈｅ
ｍ　、、Δ！、　４２２９　（１９８１）、Ｊ、　Ｂ　
ｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　。 ２５７　、２８６　（１９８２）およびり、Ｄ、　Ｌｅ
ｓｅｒｍａｎ等、Ｎａｔｕｒｅ、　２８８　、６０２　
（１９８０）の方法によって、抗体またはポリペプチド
分子上のチオール基は、ジスルフィドブリッジを経てピ
リジルジチオプロビオニル誘導脂質、例えばホス７アチ
ジルエタノールアミンに結合され、そして置換脂質は元
細胞毒をカプセル化するリポソームにされる。 前記方法によって体外血液流に導入された場合、ポリペ
プチド−または抗体−結合リポソームは、それ自体で結
合し、そして使用された特別の抗体またはポ０ぺ′ゾチ
ドに対する表面受容部位を有するす７２球によって吸収
される。リポソームは、細胞間酵素によって浴菌され、
そしてカプセル化細胞元増感化学薬品は離脱される。或
いは、リポソームは、細胞膜と融合され、細胞膜内に組
み込まれる。 血液流に紫外線を照射すると、前記のように細胞代謝を
途絶することによって光増感化細胞を失活させる。 本発明の方法によれば、それに用いられる光活性化学試
薬の種類の如何を問わず、治療のために患者から抜散ら
れた血液はパッチ形ゆで取扱うことができるが、好まし
くは、体外流（ｅＸｔｒａＣＯｒｐＯ−ｒｅａｌ　ｓｔ
ｒｅａｍ）に形成し、照射が行われる治療区域（ｔｒｅ
ａｔｍｅｎｔ　５ｔａｔｉｏｎ）を通過させるのが好ま
しい。 その様な治療区域は、その壁が光活性化学試薬を活性化
するために用いられる紫外線（ＵＶ）の入射光に対して
、実質的に透明である長く平たいチューブ状の通路の形
態をとることができる。典型的な照射線量は、方法が連
続的及び非連続的に行われると否とを問わず、約０．１
〜１００ジユール／に２−血液表面積、好ましくは約５
〜６０ジュール／硼２−血液表面積であり、照射区域を
通過する典型的流速は約１０〜７５１７分の範囲にあり
得る。治療区域（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　５ｔａｔｉｏｎ
）は、内部に位置決めされた実質上中心点の紫外線源を
設けた遠心分離機を含むこともできる。即ち、血液が操
作遠心分離機内に流されると、血液の最内容積をす／ノ
ぞ球のような成分に富まさせる（血液の最外容積に濃縮
される赤血球よりも密ではない）のに有効な密度勾配に
付される。それ故、中心に位置決めされた紫外線源から
の放射線は、赤血球によってよりもり／・ぐ球によって
完全に吸収され、赤血球を紫外線から部分的に遮断しな
がらリン・ξ球と光活性試薬との反応を高める。 連続または、？ツチ式の遠心分離機が使用されて、患者
の血液の画分を分離し、そして光活性化学試薬とカツプ
リングさせることにより排除しようとする成分に富まさ
せることもできる。即ち、遠心分離機は、血液照射前処
使用されて、赤血球に富んだ血液画分およびり７２球お
よび他の有核白血球に富んだ画分に分離することができ
る。赤血球は、即座に大部分の血液血漿と一緒に患者に
戻すことができ、一方濃縮り／パ球画分は必要に応じて
希釈され、照射区域に配送される。 す７２球に富みかつ赤血球および血小板を大部分ストリ
ツピングするように遠心分離されたこの種の血液画分は
、この技術によって処理されてぃない血液よりも有効ま
たは低い紫外線量で照射され得る。照射効惠の増大は、
す７７９球の更に有効な化学結合およびそれに伴う生存
能力または機能の損失速度の増大を生ず゛る。多くの場
合、照射を受げさせようとする血液画分だけを投与する
ことによって、従来使用された量よりも少ない量の光活
性化学試薬を使用することが可能である。 赤血球および而／」１板の流出物が患者への返送用に連
続的に利用可能であるので、連続法での好適な遠心分離
機の操作によって、患者の全面液り／／ぐ球の２５〜７
５％が比較的短時間、例えば１．０〜３．０時間で微量
の血漿、赤血球および血小板を含有する容量約２５０〜
７５０継で分離され得る。このように、多量の患者の全
リン・ソ球が、患者の全血液リンパ球の約７だけを含有
する血液５００ｒｆＬｔを処理するのに従来必要とされ
たのと同一時間で処理され得る。このように、遠心分離
機の使用は、前記のようにリンパ球結合に包含される化
学反応の効率を増大すると共に、患者の血液が容量不足
になる合計時間を短くし、患者の不快および危険な少な
く１へる。　。 治療後、全・々ツチ、或いは照射された進路’＆５！血
液流は患者に戻すことができる。しかしながら、血液の
治療に使用された光活性化学試薬の種類に応じて、それ
を患者に戻す前に処理血液を濾過、透析或いは遠心分離
することが好ましい場合がある。その様な治療が適当と
思われる場合は、以下の本発明の詳細な説明において更
に十分に明らかにされる。 好複しい実施態様の説明 第１図は本発明による装置ＩＯの概略図である。 照射区域以外は、装置１００大部分の構成部分はそれ自
体通常の公知のものであり、それ故これらを極めて詳細
に説明することは適当でも或いは必要でもない。 図示した如く、血液は先ずヒトの患者或いは他の貯蔵器
（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ　）から１２において抜出される
。 第１図においては、本発明に従った血液の処理は連続ベ
ース、即ち、現在の説明の目的のために、流れは１２に
おける接散りから１４における貯蔵器への血液の最終的
返還まで連続的とみなされる。流れが連続的であるｉ合
には、本発明に実施するに利用可能な典型的な血液流は
約１０〜７５祷／分の範囲であり、より好ましい範囲は
約４０〜６ＯＮ／分である。これらの示された流速は、
一般的に１８で示された体外血液流内に位置した、血液
流治療目的で用いられる多くの型のポンプ、例えばＨａ
ｅｍｏ−ｎｅｔｉｃｓ社から型番号（資）として市販さ
れているポンプなどの一つよりなるポンプ１６により行
われる。 関連する医学技術上公知の如く、抗血液凝固剤は加、即
ち血液抜出し点の近くの血液流中に注入するのが好まし
い。その様な抗血液凝固剤は、酸性クエン酸デキストロ
ース及び／又はヘパリン誘導体の溶液或いはこの目的で
用いつるような他の公知の組成物よりなる。 閉塞された静脈センサーｎを、この分野で公知の目的の
ために流れ１８内に設げるのが好ましい。 その様なセンサーは基本的には、貯蔵器、即ち緩衝容積
よりなり、その目的は血液流内に気泡の生成或いは連続
的存在を防止或いは阻止することである。 本発明の実施の好ましい態様に従えば、光活性化学薬品
は、その様な患者の外部の血液に添加するのが好ましい
。従って、第１図の装置【０に示される如く、ポンプ１
６の血液流の下流で血液が照射区域列に入る直前の上流
において与えられる。 光活性化学試薬の導入に用いられる基本的技術は、これ
らを等張溶液に啓解または混合し、これを直接あにおい
て流れている血液流中に注入する。 これらの試薬は、血液流速度に対して、その後に照射区
域Ｕに通される血液中の濃度が、本発明の各々の化学試
薬に対しての望ましい有効範囲になるような速度で注入
される。 前記の関連において、これまで説明した操作の主たる目
的は、血液を照射区域に導入する前に、光活性化学試薬
の望ましい濃度を達成する一方法であることを了解すべ
きである。本発明の更に別の側面においては、従って、
該光活性試薬は、必ずしも第１図において流れる体外血
液１８中に注入により直接投入する必要はないことは了
解すべきである。むしろ、光活性試薬の望ましい濃度を
経口的或いはその他の投与方法で化合物を直接患者に投
与することにより達成することも可能である。 しかしながら、より正確な濃度レベルを達成するために
、本発明の光活性化学試薬は体外流（或いは体外の・々
ツチ容積）に導入することが好まし　　□い。試薬約１
ｎｇ〜約１００μｇ７ｍｌ血液、最も好ましくは約２０
〜３００ｎｇ／ｒＩＬｌの血液濃度レベルを達成するこ
とが好ましい。 照射室側及び照射源例よりなる照射区域列において、今
や溶液中に望ましい濃度の光活性化学試薬を運んでいる
血液は紫外線照射（ＵＶ）に付され、好ましくは紫外線
照射は行われる治療に用いられる特別の光活性試薬の活
性化に好ましい範囲に大部分のスペクトル成分を有する
ものが用いられる。 照射区域列を構成する材料はＵＶスペクトルの望ましい
部分の照射を遮蔽しないように選ばれる。 第２図には、本発明に使用するに適した型の照射区域Ｕ
の概略立面図が示されている。このような区域は、室内
を血液流を流すことを可能にする入口３１及び出口３２
を有する血液処理或いは照射室部及び間隔をおいて置か
れた紫外線照射源Ｉとからなる。家路は各種形轢を取り
得るが、これに対する原理的な要請は、照射源例に対向
する壁３４が入射紫外線照射に対して実質的に透明であ
るべきということである。該室（少なくとも壁３４）は
、従って、通常標準的静脈内溶液の投与のチューブ構成
に用いられるような各種の実質的にＵＶ透明のプラスチ
ック類、例えば、ポリ塩化ビニルなどのプラスチックに
より典型的に構成される。 本発明の連続及びノ々ツチ法のいずれにおいても、容易
に使用するに適した照射室あの一つの好ましい実施態様
においては、この装置は上下から照射される簡単な封筒
状の袋よりなる。従って、この態様においては、治療さ
れる血液は、照射室側の実質的に薄い直方形の断面を有
する中心通路３６を流れる。室あの表面積はその中に含
まれる血液に望ましい照射線量の範囲を与えるように、
光源とのかね合いにおいて調整される。別の実施態様に
おいては、血液処理室あは第３図、第４図及び第５図に
示したような立体構造を有する。この場合には、その断
面（第５図）が極めて伸長されただ円形に平たくされた
チューブ状コイル関が支持板ω内戚いは上に固定されて
いる。このコイルへの血液人口３】は、円状の断面であ
り、第１図においてはポンプ１６の下流の点にある。光
活性化学試薬の流入ばあにより模式的に示されている。 極めて平たくされたコイルの断面により、コイルを通過
する血液の流れを良好にするが、より重要なことは、流
動血液の入射紫外線に対する良好な露光を可能にするこ
とである。出口３２は再び円形の断面に戻される。 家路に選択された設計の如伺を問わず、この室は実用可
能な限り薄いのが好ましい。約０．０５〜［００の厚さ
の室が本発明の範囲のものであるが約０．０５ｊｌｉ１
〜約１闘の範囲の室の厚が好ましい。 紫外線源菊は、１個或いは複数個の各々反射鏡４２を背
にした隣接或いはその他の方法で配置された紫外線光源
４１よりなる。紫外線源は市販のう／ゾよりなることが
でき、その多くの型のものが公知である。 例えば、紫外線源間は０ｒｉｅｌ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉ
ｏｎ　（コネチカット州、メタ／フォード）から型番号
６２８７として市販されている１個のｉｏｏｏｗのＨｇ
う／プよりなることができる。適当なフィルターと共に
使用する場合には、この光源は約３４００〜３８００オ
／ゲストロームにピーク発光を有し、３２００〜４００
０オングストロームの高強度放射の良好な比較的連続的
なスペクトルを与え、ソラン／が本発明の方法において
用いられる光活性試薬である場合には好ましい。該２／
プは適白な反射鏡と共に、室あからほぼ５〜３０ｃＩｒ
Ｌの距離に配置される。本発明の一つの側面に従って利
用される流速を用いた場合には、その様な光源は、流動
血液に、本発明の方法の実施に有用な範囲の吸収エネル
ギーを与える。 照射区域列から出口３２を経由して第１図に示した如く
流れる血液流は１４における貯蔵器に直接に戻すことが
できる。血液は、照射室を囲むジャケットに冷却水を流
すととＫよって、はぼ体温の温度、即ち３７〜４０℃に
維持され得る。 悪性のり７２球に対して特異的な光活性化抗体が、本発
明の他の好ましい実施態様において用いられた場合には
、患者に戻された血液は、そのり７７９球（或いは望ま
しくない抗体）が活性化された抗体により複合化される
ので、従って、血液流から除去されるように標識化され
る。しかしながら、本発明のこの実施態様により形成さ
れた光活性化された抗体複合体は、照射区域列から血液
が出る前に実質的に完全に形成されているので、患者の
生物学的血液ｐ過系統にショック或いは過負荷を与えな
いように血液には比較的少量の活性化された抗体を投与
するか、或いは治療した血液をそれを患者に戻す前に濾
過、透析或いは遠心分離しなげればならない。 何れの光活性化試薬が本発明において用いられ、或いは
それが如何なる速度で投与されるとに拘らず、身体の器
官系統に課される負担は、本発明の装置と共に数個の機
能を果たす連続的遠心分離機４４（或いはその他のν過
装置）を利用することにより更に軽減することができる
。 ここに利用される型の連続遠心分離機は、マサチューセ
ッツ州ゾレイ／トリーのＨａｅｍｏｎｅｔｉｃｓ社およ
びニューヨーク州モ／ゼイのＩＢＭ社医薬製品部を含む
幾つかの製造元より市販されている血液流処理装置にお
いて長く使用されてきていることに注目されたい。その
様な装置が利用されている従来の装置においては、第１
図のあらゆる要素は、唯一の重要な例外である照射区域
列な除いては、存在していた。その様な従来の装置にお
ける連続遠心分離機の機能は過剰のり７２球或いはその
他の関心のある血液成分を分離することの機能であった
。その様に使用された場合の、この装置の欠点はその効
率の悪さであり、即ち、この遠心分離方法はす７２球の
せいぜい約４０〜（資）％を除去することができるに丁
ぎず、又不幸なことに実際は残しておきたい成分も除去
することである。 本発明の装置ＩＯにおいては、連続遠心分離機４４によ
り二つの機能が行われる。これらの一つは、前記の如く
、す／ノミ球その他の複合化血液成分の除去である。本
発明は、その治療の実施態様において、主としてす７７
９球の機能の損傷によって最終的にその機能的数を減少
するものであるから、遠心分離機材は、それが前記従来
の装置におけると同程度に信頼される必要はない。機械
的な見地から、これは血液のり／パ球画分と血液の残し
ておくべき望ましい両分との間の比重の差について厳密
に覗扱わなくてもよいことを意味する。即ち、全血液の
望ましい画分の不当な分離を避けることが可能となる。 光活性化抗体を用いる本発明の実施態様においては、形
成された抗体複合体は濾過或いは示された遠心分離型の
装置ａによりその他の望ましい血液画分から容易に分離
される。 連続遠心分離機材は、更にその他の重要な目的のために
利用することができる。特に、血液血漿の一部或いは実
質的に全部が４６において除去され、招において新鮮な
血漿と置換することができる。 この洗浄技術により、血液血漿中に存在する過剰の光活
性化学試薬を有効に抜き出し、４８において血漿をその
様な化合物のない等張液と置換することが可能となる。 かようにして、血液が１４において貯蔵器に戻された際
に、その血液は如伺なる過剰の化孝試薬、即ち治療血液
成分に望ましいと思われるように結合された化学試薬以
外は実質的に含まれないことになる。 又、ここで再度強調されるべきことは、第１図に示され
る本発明を実施するに好ましい態様は、連続操作である
が、本発明に従った血液処理はパッチ式技術により行う
こともできることである。 その様な量、即ちパッチ、はその中に所望量の溶解光活
性化学試薬を既に、即ち患者に予備投与することにより
含有して有するか、或いはその様な試薬を抜出された血
液と外部的に混合することもできる。望ましい試薬を含
有する該血液パッチを、次いで、照射区域に持ってゆき
、そこで所望数の紫外線エネルギーをこれに照射する。 この操作中、血液の・々ツチは、前記の如く、照射区域
内を循環させることもでき、或いは血液の歇が適量であ
り血液処理室側が適当な寸法である場合には所望のエネ
ルギーが放出されるまで静的条件下にノ々ツチを単に処
理丁ればよい。その後、治療血液を照射区域から取出し
、前記の如く遠心分離するか直接貯蔵器に戻す。 第６図に示されるように、血液は血液貯蔵ノ々ッグまた
は同様の貯蔵器であることができる貯蔵器間から移送さ
れる。前記のように、照射を受けるべき血液は前記のよ
うに光活性化学試薬で処理され、次いでポンプ１６およ
び入口ライ１５１を経て遠心分離機５２に供給される。 この遠心分離機５２は、更に抗血液凝固剤を血液流入物
に導入するのに適しており、そして典型的には血液を少
なくとも３つの画分に分離するように操作される。最も
密な画分５３は、大部分の赤血球を含有し、そして大部
分の血漿画分印と一緒にライン５６を経て貯蔵器に戻さ
れる。 白血球画分聞は、中間密度を有し、そして多数の血液す
７７２球並びに少量の残りの血液成分を含有する。遠心
分離機は、連続法で操作でき、それ故実質的にすべての
血液が処理されるまで遠心分離機への未処理血液の定常
流入量が赤血球画分、血漿画分および白血球画分の定常
流出量を生じ、または白血球画分の次の処理前に所定ノ
９ツチを完全に分別するように操作され得る。 血液への光活性試薬の投入は、分別が完了されるまで遅
延でき、それ故照射されない両分への前記試薬の一部分
の損失は回避される。 第６図に示されるように、場合によって一部分の血漿で
希釈された白血球画分シは、次いで照射室路に送られ、
そこで内部通路間に流され、照射源Ｉによって照射され
る。その後、照射血液は、第１図の場合に記載したよう
に貯蔵器５０に戻される前に連続的遠心分離機に給送さ
れて、光化学結合す／・９球および付随の血漿置換物も
含有することのある血漿画分を除去することができる。 照射前に遠心分離を使用する典型的ノ々ツチ法において
は、ソラレ／が摂敞約２，０時間後に約加〜３００　ｎ
ｇ／ｍＪの血漿ンラレ／量を生ずるのに十分な量で患者
に経口投与される。血液約５００〜６００祷が、血液パ
ックに捕集され、そして遠心分離様に給送され、そこで
抗血液凝固剤溶液を投入し、かつ圧縮された赤血球、白
血球画分および血漿に分別する。赤血球および血漿が捕
集され、かつ患者に戻され、そして前記操作が３〜４回
繰り返されて患者の全血液り７２球の約３０〜７０％を
含有する白血球画分約２５０祷を蓄積する。この画分は
、後の実験から保存される血漿で約６００〜６５０ｒｎ
Ａに希釈され、照射区域に４０〜６０祷／分において４
〜７通過でポンプ給送され（３６〜３９°Ｃ〕、患者に
戻される。 或いは、連続操作用に好適な遠心分離機、例えばＩＢＭ
　Ｃｅｌｌｔｒｉｆｕｇｅ■が使用でき、そｈＫ、１．
’ｌ場合によって少量の血漿画分で希釈された白血球画
分が遠心分離機ボウルから連続的に移送され、そして好
適に減圧した室領域および増大した紫外線束な有する照
射区域にポンプ給送される。装置が最初に白血球約７０
〜１５０祷の初期負荷で装填された後、照射白血球流は
患者に連続的に戻されるであろう。赤血球および血漿は
、供血者に連続的に再注輸されるであろう。 或いは、別の処理区域、例えば閣が省略でき、そして白
血球画分５４は、遠心分離機５２の内部での役人血液か
らの調製と同時に、中心点５５に設置された紫外線また
は他の放射線源によって照射され得る。より密な赤血球
は、遠心分離機コアの外方部分に向けて移動されるので
、赤血球は、白血球部分５４を照射から遮断されるのを
有効に防止し、同様にそれら自体放射線の有害な影響か
ら保護される。 前記のように、紫外腺照射源付き遠心分離機は、断続（
）々ツチ）または連続法で操作されて病気または機能不
全り７２球への導入光活性化学試薬の結合を達成できる
。 以下１体例により、ヒトの血液中の、ある血液、　成分
の機能的数の治療的減少をもたらす本発明の方法及び装
置の応用を説明する。 例　　ｌ ５００ミリリツトル（５００ｍＡ）の血液を急性白血病
に悩む患者から抜出した。この血液を血液バッグ内に入
れ、この血液バッグから血液治療装置に血液供給管をつ
なぎ、次いでその装置′から血液ノ々ッグへの環流管を
連結した。 この実験において用いた装置は、ポンプ及び１．０１に
＋１の厚さ及び０．３１２７７１２の全表面積の照射室
を有する多透過（ｍｕｌｔｉ−ｐａｓｓ）　ＵＶＡ照射
区域からなるものであった。照射室の上部及び下部から
、大部分の照射スペクトル成分を３２００〜４０００オ
／ゲストローム領域に有し、ピーク強度を約３４００〜
３７００オ／ゲストロームに有する照射を与える紫外線
Ａ光源で照射した。照射室の表面に入射ｊ　ル放射綜ｃ
ｎ　ｖ　ヘ／ｌ／　ハ約２８　、８　Ｊ　／ｌｘ２／ｈ
ｒ、と測定された。 この試験のために血液の採取２時間前に、ソラレ／を患
者に経口投与して、治療血液中１１００ｎ／祷のソラレ
／濃度を達成した。血液採取に引続き、血液試料の装置
内での凝固を防止するために血液祷当９２０単位の硫酸
へパリ／を投与した。 試験開始前の血液試料の白血球カウ／ト数は正常なカウ
ント数である５０００細＠／祷と対比して極めて好まし
くないレベルである５００，０００／祷であった。細胞
の検査の結果、試料中の実質的に全ての細胞が悪性のＴ
−９７２球であることが判明した。 操作に際して血液を血液ノ々ッグから４０　＋＋＋Ｊ　
／分の速度で抜出し、照射室を通過させ次いで血液ノ々
ッグに戻した。血液流は、冷却水をジャケットに流丁こ
とによって３７〜３８℃に維持された。試料はＵＶＡ照
射開始前及びその後１時間の間隔で環流管から採取し、
最後の試料は照射開始３時間後に採取した。これらの試
料は培養液中に保存し、それからアリコートを抜出して
照射後３日目、４日目、５日目及び６日目の評価を行っ
た。 三つの照射血液試料から抜出された各アリコートについ
て、全有核血液細胞及び生存力のあるこれら細胞の数の
試験を行った。試料中に残存する生存力のある有核細胞
の数は、死んだ有核細胞によって吸収され生存する細胞
によっては拒絶されるトリ・ξ／青（ｔｒｙｐａｎ　ｂ
ｌｕｅ　）を用いて処理することにより決定した。 表に示されるデータは下記の如く構成されている： 欄Ｉ−照射後の試料の細胞カウントの評価までの間隔（
日数） 欄■−評価時の試料の有核細胞カウ／ト数（ＸＩＯ） 欄■−全有核細胞カウント数（生存＋死亡）７時間ゼロ
における有核細胞カウ／ト数（％）欄■−生存有核細胞
カウント数／時間ゼロにおける全有核細胞カウント数（
％） 表　　　　Ｉ Ｉ　ＩＩ　ｍ　ｒｖ 対照例（非照射）　　　６　　　９４　　　９４　　　
８６５　　　２１　　　２９　　　１４ ６　　　２７　　　３７　　　１３ ＵＶＡ照射２時間　　０　　１２５　　１００　　　Ｚ
ｏ。 後′取出された試　　３　　　８３　　　６６　　　４
８科 ４　　　　４７　　　　３７　　　　２１５　　　　４
．１　　　　３２　　　　１３６　　　　１３　　　　
１０　　　　　２４　　　４３　　．３１　　　１２ ５　　　　１２　　　　１６　　　　　２６　　　　９
　　　　７　　　　１ 上記表から、本発明は、その他の血液成分に対する臨床
的に悪影響がみられることなく、治療血液中の過剰のり
７２球数の迅速な破壊をもたらすことが明らかである。 分析の結果、本発明の方法に従った処理６日以内に各血
液試料中の生存リン・ぞ球細胞の数は顕著に減少した。 より具体的には、前記装置内において、１．２及び３時
間照射後、６日以内に治療血液中に残存する生存リン・
ソ球の割合はそれぞれ元の値の１３．２及び１％に減少
した。ＵＶＡの照射されなかった比較対照例については
、同一時間後の生存す／ノ七球数は８６％であった。 例■ ５００ミリリツトル（５００ｒＩＬｅ）の血液を慢性Ｔ
−細胞白血病に悩む患者から抜き出した。この血液を血
液パツ、グ内に入れ、この血液／々ッグから）（ａｅｍ
ｏｎｅｔｉｃｓ＠　３０−　Ｓ血液処理遠心分離機に血
液供給管をつないだ。遠心分離機を調整して、流れ中の
血液を、容量：容量比１：１０で血液と混合されたヘパ
リンナトリウム（４０Ｕ、／ｄ生理食塩水）で連続的に
処理した。血液−ヘノξす／混合物を４５００　ｒｐｍ
で遠心分離して血液を分別し、赤血球を含有する画分を
大部分の血漿画分と一緒に患者に戻した。白血球画分約
８０ｍＡを得た。全白血球画分２５０ｍ１が得られるま
で、前記操作を繰り返した。 得られたものを血漿で６５０Ｃ（！の容量に希釈し、照
射室に５０　ｍＡ　／分で５回循環させ、例Ｉに記載の
ようにソラレ／ｌｏｏｎｇ／祷の存在下において照射を
行った。 遠心分離および照射前の血液試料の白血球カウント数は
１０，０００／祷であった。細胞の検査の結果、試料中
の実質的に全ての細胞が悪性のＴ−リンパ球であること
が判明した。 試料はＵＶＡ照射開始前及びその後１時間の間隔で採取
し、最後の試料は照射開始３時間後に採取した。これら
の試料は培養液中に保存し、それからアリコートを抜出
して照射後１日目、２日目、３日目及び４日目の評価を
行った。 三つの照射試料から抜出された各アリコートについて、
全単核白血球及び生存力のあるこれら細胞の数の試験を
行った（トリノＩｉ′／青の方法）。表■に総括される
ようにこれらの試験結果は、全単核白血球の％として表
示される生存力のある細胞の数を表わす数を与えた。 表　　　　■ ０　９６９２９５９７ １　９３７８６８５３ ２　９３６７５１２７ ３９５・５５３７１５ ５　９２１６１７７ 表Ｈの結果は、本発明が過剰のリンパ球数σ）迅速な破
壊をもたらすことを実証する。処理５日以内忙各血液試
料中の生存り７２球細胞は顕著に減少した。前記装置内
において、１．２及び３時間照射後、５日以内に治療血
液中に残存する生存り７７９球の割合はそれぞれ元の値
の１６．１７及び７％に減少した。照射されなかった比
較対照例については、同一時間後の生存り７２球数は９
２％である。 表■のデータを表Ｉのデータと比較すると、血液の遠心
分離によって得られた白血球に富んだ白液画分への２時
間および３時間の紫外線照射が、例Ｉの方法に従っての
未処理血液への２時間および３時間の照射よりも生存す
７７９球の％をかなり迅速に減少させることがわかる。 更に詳細には、遠心分離白血球に富んだ血液画分の２時
間照射および３時間照射後の３日目に見い出される生存
り７２球の％は、それぞれ３７および１５であり、一方
未処理血液の照射はそれぞれ招および２９の生存白血球
％をもたらした。 本発明はその特別の実施態様について特に説明が行われ
たが、本発明の開示内容に基づいて多くの変化が当業者
に可能であり、その様な変化も又本発明の範囲内のもの
であると理解されるべきである。従って、本発明は広く
解釈されるべきであり、特許請求の範囲及びその趣旨に
よってのみ限定されるべきものである。

【図面の簡単な説明】

第１図は、本発明に従って操作されている装置の一轢様
を説明するための概略フローシートである。 第２図は、第１図の装置の照射区域部分り）概略立面図
である。 第３図は、第２図の照射区域の一態様の概略平面図であ
る。 第４図及び第５図は、第３図の４−４線及び５−５線で
切断された断面図であり、それぞれ第３図の装置の流路
出口及び流路を示すものである。 第６図は、本発明に従って操作されている装置の好まし
い態様を説明するための概略フローシートである。 出願人代理人　　　猪　　股　　　　　清図面の浄書（
内容に変更なし） 手続補正＃（方式） 昭和５９年３月２９日 特許庁長官　若杉和夫　殿 １　事件の表示 昭和５８年　特許願　第２３２２０２号２　発明の名称 血液を外部的に処理するための装置 ３　補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ケニョン、エンド、ケニ」ン ４　　代　　理　　人 昭　　和　　５９年　　２　　月　　８　　日（発送日
　昭和５９年　２月２８日） ある証明書を提出します。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、血液成分を光活性化学試薬と会合させ且つ反応させ
   ることによって血液成分の機能的数を減少させるように
   血液を処理する装置において、（、）　　該血液を受取
   り且つ該血液を密度勾配に付し、それにより赤血球金線
   血液成分から笑質上分離する手段および （ｂ）　　放射線を該血液成分上に優先的に衝突させて
   会合化学試薬を該成分と反応させるように配向された紫
   外線照射源 全含んでなることを特徴とする装置。 ２、該手段が、該血液を実質的部分の該成分からなり且
   つ未処理血液の濃度よりも低い濃度の該赤血球を有する
   血液画分に分離するように機能する遠心分離機全含み、
   そして前記装置が該画分を該照射源を具備する血液処理
   室−に輸送する手段を特徴とする特許請求の範囲第１項
   記載の装置。 ３、該手段が、内部且つ実質上中心にその中に配置され
   た紫外線照射源を有し、それにより該血液を該密度勾配
   に同時に付し且つ照射を行うことができる遠心分離機を
   含む、特許請求の範囲第１項記載の装置。 ４、該光活性化学試薬が、血液成分中或いはその上の受
   容部位に対して特異的であり、且つ該紫外線照射時に血
   液成分受容部位とフォトアダクトを形成する能力を有す
   ることにより、該光活性化化学試薬と該受容部位の間に
   化学結合を生ぜしめ、よって、血液からの該血液成分の
   破壊及び／又は除去を開始する試薬からなる、特許請求
   の範囲第１項記載の装置。 ５、光活性化化学試薬が、インシュリン、インターロイ
   キン、デモポイエチンおよびトランスフェリンよりなる
   群から選ばれるポリペプチドを含み、そして該試薬が更
   に該ポリペプチドに共有結合された光細胞毒化学試薬を
   含む、特許請求の範囲第４項記載の装置。 ６、光活性化化学試薬がリポソームを含み、該リポソー
   ムがその外面に共有結合された該成分受容部位に結合で
   きる抗体またはポリペプチドを有し、そして該リポソー
   ムは内部に有効量の光細胞毒試薬を有する、特許請求の
   範囲第４項記載の装置。 ７、光活性化学試薬が、ソラレン、ピレン、コレステリ
   ルオレエート、アクリジン、プロフィリン、フルオレセ
   イン、ローダミン、１６−ジアシコーチゾン、エチジウ
   ム、プレオマイシンの遷移金属錯体、デグリコブレ第４
   イシンの遷移金属一体および有機白金錯体よりなる群か
   ら選ばれる部分を含む、特許請求の範囲第５項または第
   ６項記載の装置。 ８、血＃七光活性化学試薬を用いて処理する装置におい
   て、 （、）　　紫外線照射源 （ｂ）　　該照射源から該光活性化学試薬が活性化され
   る放射線を受取るようにされた血液処理室、および （ｃ）貯蔵器から該血液処理室を通り再び該貯蔵器に戻
   るように血′Ｑ、を輸送するようにされた連続的輸送手
   段 を含んでなる装置であって、該光活性化学試薬が血液成
   分中或いはその上の受容部位に対して特異的であり、且
   つ該紫外線照射時に該受容部位とフォトアダクト金形成
   する能力を有することにより、該光活性化化学試薬と該
   受容部位の間に化学結合を生せしめ、よって、患者の循
   環血液からの該血液成分の破壊及び／又は除去を開始し
   、更に該化学試薬が（１）光Ａｄ胞胞化化学試薬共有結
   合されたポリペブチｒおよび（２）それに共有結合され
   たポリペプチドまたは抗体金有し且つその中に光細胞毒
   化学試薬を有するリポソームよりなる群から選ばｎるこ
   とを特徴とする装置。 ９、ヒトの患者の循環血液中の血液成分の機能的成分数
   を減少させる方法において、該患者から血液を抜き出す
   工程、該抜き出した血液に、その血液成分中或いはその
   上の受容部位に対して特異的であり且つ紫外線照射によ
   り活性化された際に該受容部位とフォトアダクトを形成
   する能力を有する有効量の溶解した光活性化化学試薬の
   存在下において、紫外線を照射することにより、該光活
   性化化学試薬及び該受容部位間に化学結合を生ぜしめ、
   よって患者の循環血液からの゛線面液成分の破壊及び／
   又は除去を開始する工程、及び該照射血液を該患者に戻
   す工程を含む方法であって、該化学試薬が、（１）光細
   胞毒化学試薬に共有結合されたポリペプチドおよび（２
   ）それに共有結合されたポリペプチドまたは抗体を有し
   且つその中に光細胞毒化学試薬を有するリポソームより
   なる群から選ばれることを特−徴とする方法。 １０、血液を密度勾配に付し、それによシ赤血球を実質
   上線血液成分から分離し、そして紫外線を該成分上に優
   先的に衝突させるように配向させる、特許請求の範囲第
   ９項記載の方法。