JPS59184199A - 新規アミドｎ置換ブレオマイシン類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は毒性の少ない新規なアミドＮ置換プレオマイシ
ン類に関するものである。

プレオマイシンは１９６６年本発明者ノー人である梅沢
らによシ発見された制癌性抗生物質で（梅沢らジャーナ
ル・オブ・アンチビオチフス、１９Ａ、２００頁、１９
６６年）放線菌ストレプトミセス・バーチシラスによシ
生産される１原子の２価の銅を容易にキレートする塩基
性水溶性糖ペプチドで、通常の培養法では１６種が生産
され、単離されている。（例えば、梅沢ら：ジャーナル
・オブーアンチビオチクス１９Ａ。

２１０頁、１９６６年）。これらプレオマイシンのうち
、ＡＩ、Ａ２、Ａ５、Ｂ２、デメチルＡ２等は、その混
合物の脱銅体（以下「プレオマイシン・コンプレックス
」という。）が現在すでに癌治療の臨床面で広く使用さ
れており、とくに偏平上皮癌を中心に、皮膚癌、頭頚部
癌、肺癌、悪性リンパ腫などで優れた成績をあげている
。

また、米国特許第３９２２２６２号及び米国特許第Ｒｅ
　３０４５１号には可々のプレオマイシン類が開示され
ている。

これらのプレオマイシン類は通常発酵法において、含銅
体の形で得られるが、それを脱銅することによシ脱銅体
とされる。本発明においては特に断わらない限り、「プ
レオマイシン」という語は含銅体及び脱銅体の両者を含
むものとする。そしてこれらのプレオマイシン類は下記
一般式間 ８　・・・町・・・・・・・・・・・・・・・・・・国
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・・
ｊ（式中Ｒはプレオマイシン類の末端アミン残基）で表
わされる（但し含銅体の場合のキレート銅は省略）。

しかしながら、これらのプレオマイシン類は優れた効果
を示す一方副作用もあるため、よシ副作用が少ないプレ
オマイシン類の開発が要望されている。本発明者らは種
々研究の結果、下記一般式〔■〕 （式中ＢＭはプレオマイシン骨格の残基、Ｒ′は３−（
Ｎ−メチルＮ−（ビス（ｍ、ｐ−ジベンジルオキシベン
ジルアミノ）プロピルコアミノ）プロピルアミン基、Ｘ
′は３−　（（Ｓ）　−１’−フェニルエチルアミノ）
プロピルアミノ基またはｎ−オクチルアミノ基を示す。

）で表わされる新規なアミドＮ置換プレオマイシンが胎
毒性を示さず、かつ急性毒性も屁較的少なく、かつ優れ
た制癌効果を示すことを見い出し本発明を完成した。

なお本発明の一般式における「ＢＭＪで表わされるプレ
オマイシン骨格の残基は前記プレオマイシン類の一般式
において・・・・・・線で囲われている部分を意味し、
特に断わらない限シ、含銅体及び脱銅体のいずれおも含
むものとする。

上記本発明の化合物は例えば次のようにして合成するこ
とができる。

まず、前記一般式ＣＩＩ］で表わされるプレオマイシン
のＲがアグマチンであるプレオマイシンＢ２の脱銅体を
プレオマイ７ン不活化酵素（以下「不活化酵素」とい気
：悔涙ら、：ジャーナル・オプ・アンチビオチク７２７
巻、４１９頁、１９７４）　　例えばラットの不活化酵
素又は、それと同様にして牛又は豚の肝臓から調製した
不活化酵素を用いて加水分解して下記一般式」〕〔式中
ＢＭは前記と同じ。〕 で表わされるデアミドプレオマイシンＢ２とする。

よシ具体的にはたとえば、牛肝臓を燐酸緩衝液とホモジ
ェネエイトとて、８０００　ＲＰＭで遠心分離し、その
上清を燐酸緩衝液に対し透析し粗酵素１屯、それにプレ
オマイシンＢ２を燐酸緩衝液に溶解したものを加え、３
７℃、５〜４８時間反応させる。反応液茅・ら適当な方
法で蛋白質を除き、（たとえば５％となるように、トリ
クロロ酢Ｍ（以下ＴＣＡと略す）を加え蛋白質を沈澱さ
せ、遠心分離で沈澱を除き、沈澱を３回５％ＴＣＡで洗
浄し洗液なあつめる）中和後、プレオマイシンに対して
過剰の酢酸鋼を加え目的物を銅キレートとする。これを
脱塩するため蒸留水で充填した吸着樹脂ダイアイオンＨ
Ｐ４０、のカラムに注ぎ目的物を吸着する。蒸留水で塩
類をあらい流した後、１１５０規定塩酸水溶液−メタノ
ール（１：４ｖ／ｖ）で溶出し、波長２９０ミリミクロ
ン付近に吸収極太を示す分画をあつ［Ｆ］ める。陰イオン交換樹脂、ダウエックス　４４（ＯＨ型
；ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和したのち、減圧下で
濃縮して凍結乾燥する。

上記の粉末を蒸留水に溶解し、あらかじめｐＨ４，５，
１／２０モル酢酸−酢酸す）　ＩＪウム緩衝液■ で平衡化したＣＭセファデックスＣ−２５（Ｎａ十型：
ファルマシア、ファインケミカル社製）を充填したカラ
ムに注入し吸着し、上記の緩衝液に連続的に塩化ナトリ
ウムを加えることによりナトリウム濃度を１．０モルま
で徐々に上昇させる直線濃度勾配法によシ溶出し、目的
物の青紫色の分画な集める。先に用いたダイアイオン■
）ＩＰ４０脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥すると、デ
アミドプレオマイシンＢ２の含銅体が青色の無定形粉末
で得られる。

次にこのデアミドプレオマイシンＢ２に３−（（Ｓ）　
−１’−フェニルエチルアミノ）プロピルアミンまたは
ｎ−オクチルアミンを常法により縮合することにより、
アミドＮ置換プレオマイシンＢ２を得ることができる。

縮合は酸アミド結合を形成するための公知方法、たとえ
ば特公昭５４−６３０８９号記載の方法等を用いること
ができる。

反応は溶媒として水、ジメチルフォルムアミド、アセト
ニトリル、それらの混合液が用いられる。温度は一１０
〜３０℃、反応温度は１〜７０時間がよい。

以上のようにして得られた誘導体を単離するには、アセ
トンまたはエーテル等の有機溶媒を反応液に加え目的物
を沈澱させ、次いで蒸留水に溶解しｐｎを６に合わせ、
脱塩するため吸着樹脂たとえばアンバーライト　ＸＡＤ
−２（ローム・アンド・ハース社製）を蒸留水を用いて
充填したカラムに注入して、目的物を吸着する。蒸留水
で塩類をあらい流した後、酸性の含水メタノール、たと
えばｌ１５０規定塩酸水溶液−メタノール（１：４ｖ／
ｖ）で溶出し、波長２９０ミリミクロン付近に吸収極大
を示す分画をあつめる。陰イオン交換樹脂、ダウエック
ス４４（ＯＨ型；ザ・ダウ・ケミカル社製）で中和した
のち減圧下で濃縮して凍結乾燥すると、誘導体の粗粉末
がえもれる。上記脱塩操作は省略できる場合もあり、そ
のときは上記沈澱を蒸留水に溶解しつぎの操作にうつる
こともできる。

上記の粉末を蒸留水に溶解し、あらかじめｐＨ４，５，
１／２０モル酢酸−酢酸す）　ＩＪウム緩衝液で平衡化
したＣＭセファデックスＣ−２５（Ｎａ＋型：ファルマ
シア、ファインケミカル社製）を充填したカラムに注入
し吸着する。上記の緩衝液に連続的に塩化ナトリウムを
加えることによりナトリウム濃度を１．０モルまで徐々
に上昇させる直線濃度勾配法により溶出する。この時未
反応の原料と副生物はより早く溶出する性質があるので
、紫外線吸収モニターを用いることにより分離除去する
ことが可能である。もし目的物の分画に不純物の混入が
認められれば、上記のクロマトグラフィー馨再度行い完
全除去をはかればよい。

上記のクロマトグラフィーな行うかわりに吸■ 着樹脂たとえばアンバーライ）ＸＡＤ＝２を用いるクロ
マトグラフィーをおこなってもよい。

樹脂を緩衝液、たとえば１％酢酸アンモニウム水溶液、
を用いて充填したカラムに粗物質の水溶液を注入して、
目的物を吸着する。緩衝液に連続的にメタノールを加え
ることによジメタツール濃度を徐々に上昇させる直線濃
度勾配法により溶出する。この時未反応の原料はよシ早
く主な副生物はより遅く溶出する性質があるので紫外線
吸収モニターを用いることにより分離除去することが可
能である。もし目的物の分画に不純物の混入が認められ
れば、上記のクロマトグラフィーを再度行い完全除去を
はかればよい。

上記２種の精製操作は単独でも、又組合せて行ってもよ
い。

このようにして得られる目的物の分画を上述した吸着樹
脂、例えばアンバーライ）’ＸＡＤ−２を用いた脱塩法
で脱塩したのち、凍結乾燥すると、アミドＮ置換プレオ
マイシン類の含銅体が青色の無定形粉末で得られる。

このようにして得られる上記アミドＮ置換プレオマイシ
ン類の含銅体を公知の方法、たとえばＥＤＴＡを用いる
方法（特公昭５２−３１８７５）で脱銅すれば脱銅体が
得られる。

その−例を説明すると、含銅体ビ蒸留水に溶解し、これ
を蒸留水で充填したアンバーライト０ＸＡＤ−２０カラ
ムに注入し吸着する。樹脂を塩化ナトリウムと５ｑｂの
エチレンジアミン四酢酸ψ２ナトリウム（以下「ＥＤＴ
Ａ・２　Ｎａ　Ｊという）からなる水溶液でカラムを洗
うと、銅イオンはＥＤＴＡ・２Ｎａによシ運び去られ、
上記アミドＮ置換プレオマイシンＢ２（脱銅体）が樹脂
上に残る。塩化す）　ＩＪウムで洗いＥＤＴＡ・２Ｎａ
を除去し、さらに蒸留水で洗浄する。最後に酸性含水メ
タノール、たとえば１１５０規定垣酸水溶液−メタノー
ル（１：　４　ｖ／ｖ）で溶出し波長２９０ミリミクロ
ン付近に吸収極太を示す分画を集める。ダウエックス”
４４（ＯＨ型：ザ・ダウ・ケミカル社規）でｐＨ６，０
に合わせた後、減圧下で濃縮し、凍結乾燥すると上記ア
ミドＮ置換プレオマイシンＢ２の脱銅体・塩酸塩が白色
の無定型粉末で得られる。

もし、上記の塩化ナトリウム及び塩酸水溶液のかわシに
、硫酸ナトリウムおよび硫酸水溶液を用いれば硫酸塩が
得られる。このように、上記溶出工程で用いられる塩及
び酸の種類を選択することにより、任意の酸との間の塩
かえられる。このようにして得られる塩の例として塩酸
塩、硫酸塩の他、酢酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、マレ
イン酸塩、乳酸塩などがあげられる。

次にこのアミドＮ置換プレオマイシンＢ２を公知のプレ
オマイシンの末端アミン基の部分を加水分解する菌体（
例えばＩＦＯ７１８９：ＡＴＣＣ２０３５２またはＩＦ
Ｏ８５０２：　ＡＴＣＣ２０３５５）等を用いる方法（
例えば特開昭５３−１９６７７）によって加水分解して
、対応するアミドＮ置換プレオマイシン酸を得ることが
できる。

このアミドＮ置換プレオマイシン酸と下記因で示される
３−（Ｎ−メチルＮ−［ビス（ｍ。

ｐ−ジベンジルオキシベンジル）アミノプロピル〕アミ
ン）プロピルアミンを縮合することにより、前記一般式
（Ｉ）の化合物を得ることができる。この縮合は例えば
特公昭ｊ４−６３０８９号記載の方法に準じて行うこと
ができる。

目的物の単離は、ＣＭ−セファローズＣＬ−６Ｂ（Ｎａ
＋型：ファルマシアファインケミカル社製）を充填した
カラムを用いてクロマトグラフィーによシ、直線濃度勾
配法により溶出し、目的物質の溶出する分画を集めるこ
とにより行うことができる。

本発明化合物を下記に示す。なお化合御名において、「
ＢＬＭ」はプレオマイシンの語を示し一般式〔ＩＤで示
される化付物は、Ｒ′の名称−アミド−Ｎ　−［Ｘ’の
名称’］−ＢＬＭと呼ぶものとする。

（１）３−（Ｎ−メチ／ｌ／　−Ｎ　−［：　３’−ビ
ｘ（ｍ。

ｐ−ジベンジルオキシベンジル）アミノプロピルコアミ
ノ）プロピルアミノ−アミド−Ｎ−Ｃ３−（（Ｓ）　−
１’−フェニルエチル）アミノプロピル）−ＢＬＭ（以
下ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＰＥＰという。） （２）３−（Ｎ−メチ／ｌ／　−Ｎ　−（３’−ビス（
ｍ　。

ｐ−ジベンジルオキシベンジル）アミノプロピルコアミ
ノ）プロピルアミノ−アミド−Ｎ−〔オクチル］−ＢＬ
Ｍ（以下ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＯＣＴという。） 次にこの化合物の物性値を下記に示す。

ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＰＥＰ　　２８５（７４）　　　
　　０．０９　　　　　０．９３ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−
ＯＣＴ　　２８５（７６）　　　　　０．０４　　　　
　　０．６４註１ シリカゲル６０Ｆ２５４シラナイズド（メルク社）・メ
タノール−６％酢酢酸アンノン６０：４０ｖ／ｖ）但し
＊印をつけたものはＲ，ｆ値が０．９０を越えるので（
６５：３４ｖ／ｖ）で測定した。

註２ アビセルＳＦ”（ＦＭＣ社）・ギ酸−酢酸一水（２７：
７５：９００ｖ／ｖ）８００Ｖ、１’５分次に本発明の
化合物の生物学的諸性質を以下に説明する。

１’）　　ミコバクテリウム・スメグマチス・ＡＴＣＣ
６０７、及びバチルス・ズブチリスに対する抗菌活性 上記の検定菌を用いて、寒天平板円筒法により測定した
。ただし、標準物質プレオマイシンＡ２（脱銅体）を１
０００　ｍｃｇ力価／ｍ９とした。その結果を第３表に
示した。

２）培養Ｈｅ　Ｌａ　Ｓ　３細胞に対する増殖阻害効果
プラスチック・シャーレの培養基（１０％仔牛血清添加
ＭＥＭ）にＨｅ　Ｌａ　８３細胞を接種し２日後にプレ
オマイシン類を添加した。さらに３日間培養を続げた後
、細胞数を測定した。

増殖阻害率は次式 数、Ｂは被験試料を添加しない対照における最終細胞数
、Ｃは被験試料添加時の細胞数を表わす。〕を用いて算
出した。試料濃度と阻止率のグラフから、ＩＤ６．値（
５０％阻害のための濃度）を求めた。その結果を次に示
した。

ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＰＥＰ　　　１１５　　　　２３
　　　　　０．０５８ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＯＣＴ　　
１５３　　．１３　　’　　０．３０３）マウスの胎毒
性（肺線維化）ＩＣＲ系マウス（雄性１５週令）を一群
９匹として用いた。

各薬剤の投与量は、５ｍ９／ｋｙとし、１日１回連続１
０日間、腹腔内注射し、投与終了後、−５週間飼育し、
観察後、屠殺剖検し、肺の線維化の頻度、及び程度を調
べた。

について比較した。その結果を第４表に示す。

表中の点数は下記のとおりである。

０点：線維化を認めない。

１点：肺胞に浸出液の著積がみられ、肺胞中隔に線維化
様変化が見られる。

２点：数か所にみられる線維化 ４点：散在性にみられる線維化 ６点：２／３以上の広範囲にみられる線維化 また、表中の比はプレオマイシンコンプレックスとの比
率を示す。

頻　　　度　　　　　　程　　　度 略　　　　号　　　肺繊維化を持つ　肺繊維化総点数／
　　比マウス数（％）総標本数（％） ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＰＥＰ　　Ｏ／９　　（０）　　
０／２７　　（０）　　　ＯｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＯＣ
Ｔ　　Ｏ／９　　（０）　　Ｑ／２７’（０）　　　０
４）マウスでの１０日間連続投与におけるＬＤ５ｏ。

Ｃ’ＤＦ□／８ＬＣ系雄性マウス（６週令）に各種投与
量のＢＬＭ誘導体を１日１回１０日間皮下投与した。一
群は７匹のマウスで構成した。

投与期間中のマウスの死亡数からＢｅｈｒｅｎｓ−ＫＭ
ｒｂｅｒ法によりＬ　Ｄｓｏ値（１日投与量）を求めた
。

その結果を下記に示す。

ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＰＥＰ　　　　〉８１．４ｄＭＤ
ＤＢＺＯＢＺ−ＯＣＴ　　　　〉７５．７以上の結果か
ら明らかなように、本発明化合物は、培養Ｈｅ　Ｌａ　
８３細胞に対する増殖阻害活性が強く、優れた抗菌活性
をも有しておυ、胎毒性を著しく減じており、連設にお
ける急性毒性も少ないものであることがわかり、臨床面
での有用性を強く示喫している。

次に本発明を実施例によシ具体的に説明する。

実施例１゜ Ａステップ 新鮮な牛肝臓２００？を４００　ｍｌの０．０５モル燐
酸緩衝液（ｐＩ４ニア、２）とホモジエネエイトして８
０００　ＲＰＭで３０分遠心分離し、その上清を０．０
５モル燐酸緩衝液に対し透析し粗酵素液とする。プレオ
マイシンＢ２．１０ｆＰに上記粗酵素液４００　ｒｎｌ
を加え、３７℃、２４時間反応させる。

反応液に５５％トリクロロ酢酸（以下ＴＣＡと略す）　
４０’ｍｌを加え蛋白質を沈澱させ、遠心分離で沈澱を
除き、沈澱を３回５％ＴＣＡで洗浄し濾液と洗液をあつ
め４ＭＮａＯＨで中和後、３．２ｆの酢酸銅（プレオマ
イシンに対して２．４等量）を加え目的物を銅キレート
とする。これを脱塩するため蒸■ 留水で充填した吸着樹脂ダイアイオンＩ（Ｐ２Ｏ、（三
菱化成社製）のカラム（ＩＬ容）に注ぎ目的物を吸着し
た。１．５−１２の蒸留水で塩類をあらい流した後、１
１５０規率塩酸水溶液−メタノール（１：４ｖ／ｖ）で
溶出し、波長２９０ミリミクロン付近に吸収極太を示す
分画をあつめた。ダウエックス　４４（ＯＲ型、ザ・ダ
ウ・ケミカル社製）で中和したの□ち減圧下で濃縮した
。

上記の濃縮液を、あらかじめｐＨ４，５，１／２０モル
酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液で平衡化したＣＭセファデ
ックスＣ−２５（’Ｎａ型：ファルマシア、ファインケ
ミカル社製）を充填したカラム（ＩＬ容）に注入し吸着
した。上記の緩衝液に連続的に塩化ナトリウムを加える
ことによりナトリウム濃度を１．０モルまで徐々に上昇
させる直線濃度勾配法により溶出した。０．３Ｍ前後で
溶出する青色の分画を集め、先に用いたダイアイオンＨ
Ｐ４０脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥すると、デアミ
ドプレオマイシンＢ２の含銅体が８．５ｆ！−青色の無
定形粉末で得られた。（収率８３％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極太および（Ｅ１％／
１ｃｒｎ）は２４２ｍμ（１３８）、２９１ｍバ１１５
）であった。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸収極大波
数（ｆｆｉ””）は　３４２５，２９７５．２９４０゜
１７２０．１６４０．１５７５，１４６０．１４２０゜
１４００．１３７５，１２８０．１２６０，１２４０゜
１１９０．１１４０，１１００．ｊ０６０．１０２０゜
６０ であった。その他の理化学的性状は下記に示す。

含銅体の紫外吸収極太　　　　２４２．　　（１，３８
）ｍμ’　　（ＥＩ％／１Ｃｒｎ）　　　　　２９２　
　（１１５）含銅体の薄層クロマドグ　　　　　　０．
９５ラフイーＲｆ値（註１）　　　　　　　０．６４＊
含銅体の電気泳動、ｈ値 ７２ （アラニンを１，０とする） 註１．ニジリカゲル６０Ｆ２ｊ４シラナイズド（メルク
社）・メタノール−６％酢酸ア／モン（６０：　４０　
ｖ／ｖ）但し＊印をつけたものは（６５：３４Ｖ／Ｖ）
で測定した。

註２．：アビセルＳＦ０（ＦＭＣ社）・ギ酸−酢酸一水
（２７：７５：９００ｖ／ｖ）８００Ｖ、１５分Ｂステ
ップ Ａステップで得たデアミドプレオマイシンＢ２のｔ銅体
ＩＰと１．７７ｆ／−の１−ヒドロキシベンズトリアゾ
ール（以下ＨＯＢＴと略す）を１０ｍ１のジメチルフォ
ルムアミドに溶解し、０℃に冷却攪拌し１．３５ｇ−の
ジシクロへキシルカルボジイミド（以下ＤＣＣと略す）
（プレオマイシンに対して１０倍量）を加える。５分後
３−　（（８）　−１’−フェニルエチル）アミノプロ
ピルアミン塩酸塩８４０■（プレオマイシンに対して５
倍量）とＮ−メチルモルフォリン０．７２ｍ１を加える
。室温で１６時間攪拌し反応させる。

反応液に１００倍量アセトンを加え、目的物を沈澱させ
、アセトンでよく洗った後この沈澱を蒸留水に溶解し、
あらかじめｐＨ４，５，１／２０モル酢酸−酢酸す）　
ＩＪウム緩衝液で平衡化したＣＭセファデックスＣ−２
５（Ｎａ　型、ファルマシア、ファインケミカル社製）
を充填したカラム（１００ｍｌ容）に注入し吸着した。

上記の緩衝液に連続的に塩化ナトリウムを加えることに
よりナトリウム濃度を１．０モルまで徐々に上昇させる
直線濃度勾配法により溶出した。０．６モル前後で溶出
する青■ 色の分画を集め、先に用いたダイアイオンＨＰ−４０（
１００ｍＡ使用）の脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥す
るとアミドＮ−（３−（（Ｓ）−１’−フェニルエチル
）アミノプロピル〕−ブレオマイシンＢ２の含銅体８８
０ｍｇが青色の無定形粉末で得られた。

（収率７．６％）本品の蒸留水で測定した紫外吸収極太
および（Ｅ１％／ＩＣｍ）は２４３ｒｌ（１２５）、２
９２ｍμ（９６）であった。臭化カリ錠剤法で測定した
赤外吸収極太波数（ｄｌ）は、 ３４２５．２９７５．　２９３ｏ、１７２０．　１６４
０゜１５８０、　１５７５．１５．５０．　１４５５．
　１４３０゜１４０．０，１３７０．１２９０．１２４
０，１１９０゜１１３０、　１０９５．　１０．６０．
　１００５．９８０゜８７５．７６０ であった。

アミンとしてｎ−オクチルアミンを用いることによシ、
アミドＮ　−ｎ−オクチル−プレオマイシンＢ２が合成
された。

Ｃステップ フザリウム・ロゼラム財団法人発酵研究所保存番号ＩＥ
Ｏ７１８９を培養して得られる菌体４００？を４Ｌのｌ
／２０モル燐酸緩衝液（ｐＨニア、５）とホモジェネエ
イトする。これにアミドＮ−（３−（（Ｓ）　−１’−
フェニルエチル）アミノプロピルコープレオマイシンＢ
２の含銅体１０１をＩＬの上記燐酸緩衝液に溶解したも
のを加え、３７℃２０時間反応させる。反応液に濾過助
剤を加え吸引濾過し残渣を上記燐酸緩衝液で洗浄し、濾
液を集めた。

これを蒸留水で充填した吸着樹脂アンバーライト０ＸＡ
Ｄ−２（Ｉ　Ｌ容）のカラムに注ぎ目的物を吸着した。

２Ｌの蒸留水で塩類をあらい流した後、５０％メタノー
ルで溶出し、青〜青緑色を示す分画５Ｌをあつめた。減
圧下濃縮した後、これを８０％メタノール３５０　ｒｒ
ｔｌに溶解し、８０％メタノールで充填した７０ｒｎｌ
のアルミナのカラムに注いだ。１００−の８０％メタノ
ールで洗った後４０％メタノールで展開し、溶出される
青色の分画３５０　Ｒ１を集め減圧下で濃縮した。これ
を蒸留水に溶解し、あらかじめｐＨ４，５、１／　２．
．０モル酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液で平衡化したＣＭ
セファデックスＣ−２５（Ｎａ”Ｊ　：ファルマシア・
ファインケミカル社製）を充填したカラム（６００ｍｌ
容）に注入し吸着した。上記の緩衝液に連続的に塩化ナ
トリウムを加えることによりナトリウム濃度を１．０モ
ルまで徐々に上昇させる直線濃度勾配法により溶出した
。０．２モル前後で溶出する青色の分画を集め、ダイア
イオンＨＰ　４　Ｑ脱塩法で脱塩したのち、凍結乾燥す
るとアミドＮ−〔３−（（Ｓ）　−１′−フェニルエチ
ル〕アミノプロピル〕プレオマイシン酸の含銅体７．Ｉ
ＬｉＰが青色の無定形粉末で得られた。（収率７９％） 本品の蒸留水で測定した紫外吸収極太および（Ｅ１％／
　１　ｃｍ　）は２４５ｍμ（１２１）、２９３ｍμ（
１１−９）であった。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸
収極太波数（ｃｒｎ）は、 ３４５０．２９７５，２９４０，１７２０，１６４５゜
１５８０．１５５５，１４６０．１３７０．１３’ＯＯ
。

１１９０．１１４０，１０９５，１０６０，１００５゜
９８０．　８８０．　７６５．　７００であった。

その他の理化学的性状は次表に示した通りである。

本実施例と同様にアミドＮ−ｎ−オクチル−プレオマイ
シンＢ２がら、アミドＮｎ−オクチル−プレオマイシン
酸が得られた。これらの理化学的性質を次表にしめす。

＾　　Ｃ−・ Ｄステップ Ｃステップで得たアミド−Ｎ　−（３−（（Ｓ）　−１
’−フェニルエチル）アミノプロピルコープレオマイシ
ン酸含銅体１．０９Ｆ！−と、１．８１ＰのＨＯＢＴと
を８ｒｆＬｌのジメチルフォルムアミドに溶解し、以下
ステップＢと同様にして、１．３７ＰのＤＣＣを用い９
３０ｒｆ１ｇ＋７）３−（Ｎ−メチ／ｌ／　−Ｎ　−（
３’　−（ビス（ｍ、ｐ−ジベンジルオキシベンジル）
アミノ）プロピル〕）アミノプロピルアミンと１６時間
反応させた。反応液を、ステップＢと同様にアセトン処
理したのち、あらかじめｐＨ４，５の酢酸緩衝液で平衡
化後メタノールー水（７：３）で洗ってお［Ｆ］ いたＣＭ−セフ７０−ズＣ−Ｌ　−６Ｂ　（Ｎａ　型、
ファルマシアファインケミカル社製〕を充填したカラム
（２８０ｒａｌ容）に注入し吸着した。メタノール−水
（７：３）に連続的に塩化す）　ＩＪウムを加えること
によシ、ナトリウム濃度を０．２モルまで徐々に上昇さ
せる直線濃度勾配法により溶出した。

０．１２モル前後で溶出する青色の分画を集め、アンバ
ーライト’ＸＡＤ−２のカラム（２７０ｍｌ容）に吸着
させた。１．５形のｐＨ４，５酢酸緩衝液と１．５１の
メタノールを用いた直線濃度勾配法によシ、メタノール
濃度を直線的に上昇させて溶出を行った。目的物はメタ
ノール濃度９０％付近で溶出さ■ れた。溶出液をアンバーライト　ＸＡＤ−２のカラム（
１００Ｍ容）に吸着させ、次に樹脂を５％ＥＤＴＡ　−
２Ｎａ水溶液３００ｒｎｌ、’２％塩化ナトリウム溶液
１００　ｍｌ、蒸留水２５ｏｍｇ４順序で洗浄したのち
、最後に１１５０規定塩酸水溶液−メタノール（１：　
４　ｖ／ｖ）で溶出した。波長２９　Ｑ１ｍ付［Ｆ］ 近に吸収極大を示す分画を集め、ダウエックス４４（Ｏ
Ｈ型：ザ・ダウ・ケミカル社製）でｐＨ６，０に合せた
のち凍結乾燥し、ｄＭＤＤＢＺＯＢＺ−ＰＥＰの脱銅体
塩酸塩１．２０６５’を白色無定形粉末として得た（収
率７１％）。

本品の蒸留水で測定した紫外吸収極太および１％ （Ｅｌ、、）は、２８５ｎｍ（７４，４）であった。臭
化カリ錠剤法で測定した赤外吸収極太波数（ｃｒｎ）は
、３４００．２９４０．１？１０，１６５０．１５４５
゜１５０５．１４５０，１３８０，１２６０，１１３５
゜１０６０、　１０１０．８００，７３０．６９０であ
った。

その他の物性は前記した通９である。

本ステップにおいて、アミド−Ｎ−オクチルプレオマイ
シン酸を原料として用いることによシ、ｄＭＤＤＢＺＯ
’ＢＺ−ＯＣＴが得られた。このものの蒸２８５ｎｍ（
７６，３）であった。臭化カリ錠剤法で測定した赤外吸
収極太波数（ｄｌ）は、 ３４００．２９４０．　１７２０．　１６５０．　１５
５０゜１５０５．１４５０．１４２５，１３８０．　１
３２０゜１２６５．１１３５．１０６０，１０２０，９
０５゜８０５．７３０，６９０ であった。

その他の理化学的性状は前記した通りである。

特許出願人　日本化薬株式会社

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 〔１〕　　一般式 〔式中ＢＭはプレオマイシン骨格の残基〕（式中Ｒ′は
   ３−（Ｎ−メチルＮ−（ビス（ｍ　、　ｐ−ジベンジル
   オキシベンジルアミノ）プロピルコアミノ）プロピルア
   ミン基、Ｘ′ハ３−（（８）−１’−フェニルエチルア
   ミノ）プロピルアミン基または０−オクチルアミノ基を
   示す。）で示される新規アミドＮ置換プレオマイシン類