JPS5920218A - ビタミンｋ含有リポソ−ム - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は経１」投与のためのビタミンＩ（含有リボン、
−１，に関する。さらに詳ｍ１１１こはビタミンＫを経
Ｌ１投与した場合において、その薬理作用をいっそう有
効に発揮せしめるためにに夫されたビタミン■くおよび
リン脂質よりなるビタミンに含有リボソーｌ、に関する
。

ビタミン■くは血液凝固系に関与し、血液凝固因子中　
１ｒ、１°に減少しやすい第１Ｉ因子（プロトロンビン
）。

第■因子（安定因子）、第１Ｘ因子（血友病Ｂ因子）。

第Ｘ因子（スヂュアートブロワア因子）の活性を速やか
に回復ぜしめることができる。また第Ｘｌｌ因子の生成
を賦活して生体止血機構を発動せしめる作用のあること
も確認されている。とりわけビタミンにの特徴的な作用
はプロトロンビン活性を回復する点において明瞭１ζ観
察することができる。従って２例えば閉塞性黄痘、潰瘍
性胃腸炎、各種肝疾患、脳出血、白血病、紫斑病、乳児
特発性ビタミンに欠乏症などの際に低プロトロンビン血
症が発生ずる場合、あるいはクマリン系抗凝血剤、抗生
物質、ザリチル酸剤などの投与の際に低プロトロンビン
血症が発生する場合に、当該低プロトロンビン血症を予
防あるいは治療するときにビタミンにはきわめて有効な
薬剤となることができるのである。具体的には、プロト
ロンビン低下に基づくプロトロンビン時間の延長を阻止
することができる。また、ビタミンに以外の止血剤が使
用によりかえって生理的な止血機構の破綻をまねき、血
栓症や血管内血液凝固症候群などの重篤な副作用を発現
する危険があるのに対し、ビタミンには健康人に大力１
投ｊｊシても血液凝固能、線溶能、血管性状に変化を及
ぼずことがなく、出血に際してのみ速やかに止血機構を
発動するので安全性の高い薬剤である。従って例えば出
血の重篤な外科手術や分娩時に術前上り十分にビタミン
１（を投与しておくことができ、その結果、出血も少な
くてずみ。

輸血ｆｉｔも節約することができるのである。

かくのごとく、ビタミンには有効かつ安全な薬剤である
にもかかわらず、そのより頻度の高い使用が阻害されで
おり、その原因は、当該薬剤がもっばら静注、筋注、皮
下性などの注射投与に依存し”Ｃいる点にある。すなわ
ち、当該薬剤は経１」投与された場合には、後記実験例
において示されるごと（投句、量に応じた十分なる効果
を発揮することができない。これは当該薬剤が脂溶性で
あるから、胆汁により可溶化されて腸管吸収されるので
あるが、その吸収が効果を発揮しうるに足る程度に十分
なものではないためであると考えられる。

ただし、訂細は不明である。しかしいづれにせよ。

経口投与されたビタミンには十分なる薬理作用を発揮す
ることができないのが現状であり、従ってビタミンにの
頻度の高い使用を促進するためには経口投与によっても
十分にビタミン■（の薬理作用を発揮せしめることので
きる技術手段が提供されることが望ま゛れているのであ
る。

かかる実情にかんがみ１本発明者は当該技術手段の提供
を目的として検討をおこない、その結果ビタミンにおよ
びリン脂質よりなるビタミンに含有リポソームを作成し
、これを経口投与することによって所期の目的が達成さ
れることを知り２本発明を完成するに至った。

すなわち２本発明の目的は、ビタミン■（を経１」投与
した場合において、その薬理作用をいっそう有効に発揮
せしめるために工夫された技術手段。

具体的にはビタミンにおよびリン脂質よりなるビタミン
に含有リポソームの提供である。

薬物をリポソームに封入して経１」投与する試みは従来
よりおこなわれており２例えばパーチルおよびライマン
はインシュリンをリポソームに封入して経Ｌ１投勾した
ところ、わずかながら効果がみられたと報告しＣおり、
またツボクラリン。

Ａｒａ−Ｃ，フレオマイシン、抗血友病凝固因子をリポ
ソームに旧人し経１−１投与した例もみられるのである
。しかし、リポソームの経口投与については未だ疑問が
多く、消化管内においてリポソームはそのままの状態で
吸収されるのであるか否か不明である。下記１こ参考文
献を列挙する。

Ｈ，Ｍ、　　Ｐａｌ；ｅｌ　　ａｎｄ　　Ｂ、Ｅ、　　
Ｒｙｍｎｎ、　　ＦＥＢＳ　　Ｌｅｔｔ、、　　６２゜
６０　（１９７Ｇ、）。

Ｇ、　Ｄａｐｅｒｇｏｌａｓ、　Ｅ、Ｄ、　Ｎｅｅｒｕ
ｎｊｕｎ　ａｎｄ　Ｇ、　Ｏｒｅｇｏｒｉａ−ｄｉｓ、
　ＦＥＢＳ　Ｌｅｔｔ、、　６３．２３５　（１９７６
）。

Ｇ、　Ｊ）ａｐｅｒｇｏｌａｓ　ａｎｄ　Ｇ、　Ｇｒａ
ｇｏｒｉａｔｌｉＳ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｓｏｃ、　’ｌ″ｒａｎＳ、、　５．１３８３　（１９
７７）。

Ｙ、Ｍ、　Ｉｌｕｓｔｏｍ、　Ｃ，Ｌｌａｖｅ、　Ｅ、
　ＭａｙＪｔｅｗ　ａｎｄ　Ｐ、　Ｐａｐａ−ｂａｄｊ
ｏｐｏｕｌｏｓ、　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ、
　３９．１３９０　（１９７９）。

１１、Ｃ，Ｈｅｍｋｅｒ　ａｎｄ　Ｗ、Ｔ、　）Ｉｃｒ
ｍｅｎｓ、　Ｌａｎｃｅｔ、　８１５９゜′ｔｏ　（１
９８０）。

Ｒ，Ｎ、　Ｒｏｗｌｎｎｄ　ａｎｄ　Ｊ、Ｆ、　Ｗｏｏ
ｄｌｅｙ、　Ｂｉｏｃｂｅｍ、　Ｂｉｏｐ）ｘｙｓ。

Ａｃｔｎ、　６７３．２１７　（１９８１）。

Ｄ、Ｓ、　Ｄｅｓｈｍｕｌｄｔ、　Ｗ、Ｄ、　Ｂｅａｒ
　１１４１（ｌ　Ｈ，Ｂｒｏｃｈｅｒｈｏｆｆ。

Ｌｉｆｅ　５ｃｉｅｎｃｅｓ、　２８．２３９　（１９
８１）。

Ｍ、Ｈ，Ｒｉｃｈａｒｄｓ　ａｎｄ　Ｃ，Ｒ，Ｇａｒｄ
ｕｎｅｒ、　Ｂｉｏｃｈｅｍ。

Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ａｃｔａ、　５４３．５０８　（１
９７８）。

Ｒ，Ｎ、　Ｒｏｗｌａｎｄ　ａｎｄ　Ｊ、Ｆ、　Ｗｏｏ
ｄｌｅｙ、　Ｂｉｏｃｈｅｔｎ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ。

Ａｃｔａ、　６２０．４００　（１９８０）。

医学、薬学の分野において、いわゆる臓器指向型製剤へ
の関心が徐々に高まるに伴ない、この目的を達成するた
めの−っの手段としてリポソームを利用する技術が重要
視されるに至っていることは周知のとおりである。すな
わち、リポソームは臓器毎にそれぞれ固有のリポソーム
として存在しているという点に着目し、所定の薬物を所
定のリポソームに含有ぜしめて投与することにより、薬
物を目標臓器に選択的かつ集中的に運搬ぜしめようと意
図する技術が開発されつつあるのである。

かかる発明として例えば特開昭５２−１４３２１８．特
開昭５２１５１７１８．特開昭５３−１３３６１６．特
公昭５５８４８Ｂにおける発明を挙げることができる。

いずれもリポソームを担体として、これに特定の生体成
分あるいは医薬成分を保持さぜる技術に関する発明であ
り、いずれこれらの技術は医学薬学における他の生体成
分、医薬成分にまで応用されるものと予想される。

すなわぢ、生体成分あるいは医薬成分にリポソーム技術
を適用すること自体は公知であり、またリポソームの一
般的な製法についても公知の常法のものがある。しかし
ながら、リポソーム技術をビタミンＫに応用し、ビタミ
ン■く含有リポソームを収得し、それによってビタミン
■（における前記基本的問題を解決し、ビタミン■くの
利用価値をいぢぢるしく高めることに成功したのは本発
明において初め°Ｃなされたものである。

以下に本発明の詳細な説明する。

本発明におい゛Ｃビタミンにとは血液凝固作用を呈する
ビタミン■ぐ類化合物を言い、具体的にはビタミンに１
（フィトナジオン）、ビタミンに２　（オールトランス
型メナテトレノン）が特に好ましい例である。

本発明において使用されるリーン脂質としては。

例えばホスファヂヂルコリン、ホスファチデルエタノー
ルアミン、ボスファチヂルセリン、スフィンゴミエリン
、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、ホスファヂヂル
グリセロール、ホスファチヂン酸、ホスフ′アチヂルイ
ノシトール、およびこれらの混合物をあげることができ
るが、特にこれらに限定されない。

また、リポソーム二分子膜の補強剤として中性脂質であ
るコレステロールを２０〜３０％加えてもよい。要はリ
ポソームを形成することのできるリン脂質であればよく
、レシチンのごときホスファチデルコリ、ンはリポソー
ム基本構成リン脂質として好ましい材料である。

本発明においてリボソートとは、リン脂質を塩類溶液中
に分散せしめて得られる脂質多重層構造。

の閉鎖小胞であり、ビタミンには当該小胞中に均一に分
配している。ビタミンにとリン脂質との組成比率につい
てはビタミン■ぐ１重量比に対して。

リン脂質が２重量比以上であればよい。

本発明リポソームはリポソームの製法として一般公知の
ものを準用すればよい。例えばリン脂質おＪ：びビタミ
ン■くをエーテルに溶解し、これを塩溶液９例えば生理
食塩水に加え、超音波照射して油中水型エマルジョンを
調製し９次に３０〜４０℃に加温しながらエーテルを減
圧情夫せしめればよい。

この結果、粘性の高いクリーム状物体が得られる。

さらに、これを経［Ｊ投与に適した製剤とするためには
、当該クリーム状物体を生理食塩水などに分散せしめて
内服液とするか、あるいは製剤用粉体と混合して粉末と
ずればよい。得られる粉末はさらに顆粒剤となし、硬カ
プセルに充填するかあるいはさらに！１錠して錠剤とな
すことができる。しかし、これらの製剤的形態はいずれ
も本発明リボソートを利用するものであり、従って本発
明の間接的な実施に係る物である。

本発明リポソームは前記したごとく経１」投与によって
ビタミンにの凝血作用、具体的にはプロトロンビン時間
の短縮をもたらすことである。その効果は後記実験例に
よって示されるごとく静脈内注射投与によって得られる
効果にはおよばないまでも、リポソーム化されずに経口
投与される場合。

例えば、シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、
ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等によって分散した状
態で経口投与される場合に比較して。

それらにおける効果を」１廻るものであった。

この効果を検証するためには１例えば次のような実験を
おこなえばよい。家兎にクマリン系抗凝血剤ワーファリ
ンを投与して低プロトロンビン血症状態を形成し２次に
ビタミンｌぐを投与して当該状態からの回復を観察すれ
ばよい。予実験の結果によれば、ワーファリン１２ｍｙ
Ａｙを家兎耳静脈に投与するとプロトロンビン時間が延
長シ、２１〜２４時間経過後にはその最高に達し、プロ
トロンビン活性自体は正常値の２０％以下に低下する。

その後。

徐々に回復し約８０時間経過後には正常値の６０％以上
にまで回復する。そこで後記実験例においては家兎耳静
脈にワーファリン１２ｒｖＡｇを投与し２４時間後にビ
タミンにの所定量を所定経路によって投与し９　ビタミ
ンＫを投与してから一定時間経過後にＱｕｉｃ占父法に
よりプロトロンビン時間（ＰＴと略記）を測定し、一定
時間経過後における各プロトロンビン活性（ＰＣＡと略
記）を求めた。

以下の実験例をもって本発明の詳細な説明する。

実施例 試料 丸底フラスコにレシチン１４０ｍｇを含有するクロロホ
ルム溶液をとり、減圧乾固し、これに９　ｍ、ｌの５分
間超音波処理し油中水型エマルジョンとした。

次に３０°Ｃでエーテルを減圧情夫し、１１１られるゲ
ル状物ＴＩを２０耐の生理食塩水に分散した。この結果
。

レシチン１８０７ＬｙｎｏｌをビタミンＫｌ　１１０ｌ
１０７Ｌが２０　ｒｎＬの水相中に分散したものが得ら
れ、これを検体試料とした。別にビタミンに、をゴマ油
およびポリオキシエヂレン硬化ヒマシ油で水に溶解して
ビタミンに、の１％水溶液としたものを調製し、対照試
料としプこ。

方法 家兎耳静脈にワーファリン１２　ｍｙＡｙを投与し。

２４時間経過後に検体試料はカテーテルを通して経口投
与し、対照試料は静脈内投与した。試料投与から一定時
間経過後１こ血液１．８ｒａＬを３．８％クエン酸プ川
用リウムＯ−２ｍＬ中にとり、室温で１０分間、　３０
００ｒｐｍの遠心分離をおこない、その血漿０ＪｒｎＬ
に０．１ｍｌの０．９％生理食塩水を加え、この半量に
トロンボキナーゼ液０．２ｍｌを加え、３７°Ｃで１分
間加温し、フィブロメーターににってプロトロンビン時
間を測定した。なお、家兎体重は３．０〜４．５ｋｇで
あり、水および固形試料を十分に与え、２５°Ｃで飼育
した家兎を使用した。また各一群は６匹とした。

結果 結果を図１に示す。図の横軸はビタミンに＋の投与量で
あり、タデ軸はプロトロンビン活性ＰＣＡが正常値の６
０９６にまで回復するのに要する時間（’Ｉ’ＰＣ！Ａ
、と略記する）である。図中、○印線は検体試料につい
て、・印線は対照試料についての結果を示す。

図１よりビタミンに＋　１２ｍｇ／ｈｇを検体試料によ
って経［］投与した場合に得られるＴＰＣＡｏｏはビタ
ミン１（１３ｍｇ／ｈｇを対照試料によって静脈内投与
した場合１こ得られるｉ’ＰｃＡ１１ｏに相当すること
か判明する。従って本発明リポソームの効果はビタミン
に１注η・１剤の効果に及ばないまでも、それに接近し
たバイオアベイラビリティ−のものであること力（１ｌ
ｌｉ解される。

実施例 五代料 実験例１試料の項に記載の検体試料と同一の試１゛コ１
を用意し２本実験例の検体試料とした。別に対照試料と
して下記ａ−ｅを用意した。

８、ビタミンに１およびポリオキシエチレン硬化ヒマシ
油を重量比で１＝７の割合で混合し、水に分ｉｎｋ　シ
てビタミンに＋の５０　ｍｐ１２０ｒｎｌとした水性液
す、ビタミンに、およびβ−シクロデキストリンをモル
比で１　：　１２．５の割合で混合し、水に分散してビ
タミンに、の５０　ｍｇ／２０　ｒｎＬとした水性液ｃ
、ヒタミン■ぐ、およびポリビニルピロリドンを重量比
で１：３０の割合で混合し、水に分散してビタミンに、
の５０　ｍｇ／２０　ｔｎＬとした水性液調製した。

θ、検体試料′の調製において、９ｍｌのエーテルにビ
タミンＫｌ　５０ｍｇを溶解したものを加えるかわり１
こ９ｍｌのエーテルを加えた点を除いて同様に調製した
ものを用意し、これと試料（Ｉとの混合液 方法 実験例１方法の項において対照試料を静脈内投与した代
わりに、対照試料をカテーテルを通して経１」投与した
点を除いて同項記載と同一の方法によりおこなった。な
お投与量はすべてビタミン■ぐ。

１２　ｍｙＡｙとした。

結果 結果を表１に示す。表１は各試料についてＴＰＣＡ、。

（ＨＲ）および有効度（イ）を示す表である。なお有効
度とは次のように定義する。ずなわち、実検測１の実験
において実験例１の対照試料を１２ｍＢ７７ｋｇの投与
量をもって静脈内投与した場合に求められた正常値への
回復短縮時間と同一の回復短縮時間が得られるときに、
その有効度は１００％であると定めでそれとの相対比を
もって示されるものとする。従って式をもって示せば次
式のごとくになる。

ここで、ワーファリン１２　ｍｙＡｙを投与後、ビタミ
ン■ぐ、は投与せずに、自動的にプロトロンビン活廿が
回復するのを待った場合、をコントロール（１）とし−
Ｃ２その場合のＴＰＯ八〇へを上記式中でｉ’ＰｃＡ６
Ｑ［１）と表わし、また実験例１の実験において実験例
１の対照試料をＪ２ｍｇ刀２ｇの投Ｌｇ量をもって静脈
内投与した場合をフントロール（２）として、その場合
のＴＰＣＡ、ｏを同様にＴＰＣＡ、ｎ　（２１と表わす
。さらに式中ＴＪｒＣＡｎｏは対照試料および検体試料
について求められたｌ’ＰｃＡｌ、ｏ（ＨＲ）のそれぞ
れの値を示す。

なお、フントロール（１）の場合におけるプロトロンビ
ン時間（Ｐ’Ｉ’）　、プロトロンビン活性（ＰＣＡ）
おヨヒ’Ｉ’ＰＣＡ、。の三者間の関係を参考のために
図２に示ず。

また本実験例における評価方法について下記文献を参考
のために列挙する。

■医薬品開発基礎講座Ｖ　薬効の評価け）（地人書館）
　　　　薬理試験法（下）抗凝血薬Ｐ、１２１３ ■臨床検査法提要　血液−膜検査法ＶＩ　８９■１（金
属出版）　無線プロトロンビン値測定法■血液と脈管　
２Ｎα１（昭４６．１　）　Ｐ、３５−４１山中ら表１
より本発明リポソームの経口投与が他の分散型試料の経
口投与に比較して優れて高い有効度を示すことが判明す
る。

以下に記載する実施例をもって本発明をさらに翼体的に
説明する。

実施例１ 精製レシチン１４０ｍｇをエーテル９ｒｒＬＬに溶解す
る。

さらにビタミンＫｌ　５０ｍｇを加えて溶解する。この
混合溶液に３ｍｌの生理食塩水を加え水浴型超音波照射
装置で約５分間照射し油中水型エマルジョンを調製する
。

次にエマルジョンをロータリーエバポレーターで約３０
°Ｃに保ちながらエーテルを除く。得られた物体は粘性
の高いクリーム状である。これに約２０ｒｎＬの生理食
塩水を加えｒ　屯」ニミキザーで撹拌する。

【図面の簡単な説明】

図１は実験例１結果の項に記載の図１に相当し。 ＴＰＣＡ、ｏの用量依存性を示すグラフである。 図２は実験例２結果の項に記載の図２に相当し。 コントロール（１）の場合におけるＰＴ、　ＰＣＡおよ
びＴＰＣＡ６ｏの王者間の関係を示すグラフである。 特Ｗ’Ｆ出願人　　エーザイａ式余社 し１面 図　　　１ ビタミンに投与ｍ：　（ｍｇ／に５１ 図面 瞳１２ １ン１’Ｐ（ＥΔ１１１１〕ｆノΔ６゜−２００２０４
〔１６ＬＩ　ＩＩ（＋ ＴＩＭＬＣ（Ｉｌｌす）

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ｆｌ＋　　ビタミンにおよびリン脂質よりなる経し１投
   与のためのビタミンに含有リボン・−ム（２）リン脂質
   がレシチンである特許請求の範囲第１項記載のビタミン
   に含有リポソーム