JPS59228157A - リン脂質センサ− - Google Patents
リン脂質センサ−Info
- Publication number
- JPS59228157A JPS59228157A JP58103249A JP10324983A JPS59228157A JP S59228157 A JPS59228157 A JP S59228157A JP 58103249 A JP58103249 A JP 58103249A JP 10324983 A JP10324983 A JP 10324983A JP S59228157 A JPS59228157 A JP S59228157A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- phospholipid
- cholin
- solution
- sensor
- immobilized enzyme
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、簡単に血清等に含まれるリン脂質の濃度を測
定することができる固定化酵素を利用したリン脂質セン
サーに関する。
定することができる固定化酵素を利用したリン脂質セン
サーに関する。
従来、固定化酵素を利用しノこリン脂質の４Ｊｉに１．
Ｌ、固定化酵素カラムと過酸化水糸（＋１２０２） ｊ
ｕｌへとを組合Ｕた゛システムが利用され（いる／］（
、こσ）システムは、固定化酵素カラム、ボンへ−ノ１
１−セルを用いており、システムが大型となる。
Ｌ、固定化酵素カラムと過酸化水糸（＋１２０２） ｊ
ｕｌへとを組合Ｕた゛システムが利用され（いる／］（
、こσ）システムは、固定化酵素カラム、ボンへ−ノ１
１−セルを用いており、システムが大型となる。
本発明（ま、上述した点に鑑み（なさｆ′Ｌ！、：ｂの
Ｃ１簡単に高いｆｌ′１度でリン脂質を４１１ｊ定Ｊる
こと／Ｊ〜（さるリン脂質センサーを捉供づることを目
「白とりる９、本発明看は、リン脂質が］ＡスノＡリパ
ーピ（Ｐ ｂｏｓｐｈｏ ｌ ｉ ｐａｓｅ ）を触媒
としく水（＋−１２０＞と反応し、＝１リン（Ｃｈｏｌ
ｉｎｅ）とノＡスノ７１（ジン（Ｐ ｈｏｓｐｂａｔｉ
ｄｉｃ ）酸が牛成さ上しること、ｉｉ＆ ’４Ｅ Ｉ
戊されノこ二」リンがコリンＡキシダーロ（Ｃｈｏ ｌ
ｉ １１０＋ｌＸ１ｄａｓｅ ）を触媒として酸素（
０２）及び水（］」２０）と反応し、ベタイン（１３ｅ
ｌａｉｎ ＞と過酸化７１（素（Ｈ２０２）を生成りる
こと、及びこび）２番口の反応による溶液中の酸素量の
減少あるｕ）ｌ、Ｌ、過酸化水素量の増加を検出づるこ
とにより、該！ノン脂質の昂（潤度）を簡１１ｉに測定
１ノることが（゛いイ）ことを見出した。
Ｃ１簡単に高いｆｌ′１度でリン脂質を４１１ｊ定Ｊる
こと／Ｊ〜（さるリン脂質センサーを捉供づることを目
「白とりる９、本発明看は、リン脂質が］ＡスノＡリパ
ーピ（Ｐ ｂｏｓｐｈｏ ｌ ｉ ｐａｓｅ ）を触媒
としく水（＋−１２０＞と反応し、＝１リン（Ｃｈｏｌ
ｉｎｅ）とノＡスノ７１（ジン（Ｐ ｈｏｓｐｂａｔｉ
ｄｉｃ ）酸が牛成さ上しること、ｉｉ＆ ’４Ｅ Ｉ
戊されノこ二」リンがコリンＡキシダーロ（Ｃｈｏ ｌ
ｉ １１０＋ｌＸ１ｄａｓｅ ）を触媒として酸素（
０２）及び水（］」２０）と反応し、ベタイン（１３ｅ
ｌａｉｎ ＞と過酸化７１（素（Ｈ２０２）を生成りる
こと、及びこび）２番口の反応による溶液中の酸素量の
減少あるｕ）ｌ、Ｌ、過酸化水素量の増加を検出づるこ
とにより、該！ノン脂質の昂（潤度）を簡１１ｉに測定
１ノることが（゛いイ）ことを見出した。
従つＣ１本発明に基づくリン脂質セン゛リーは、第１と
第２の電極をイラし、その一方の電極近傍に固定化酵素
を配置りると共に、該両電極間に電圧を印加し、該電極
間に流れる電流に基づいて、被測定溶液中に含まれるリ
ン脂質を測定づるようにしたセンサーにＪ３い（、該固
定化酵素とし乙、フォスフＡリパーロと−」リンＡ−シ
ダーゼを用いたことを特徴としＣいる。
第２の電極をイラし、その一方の電極近傍に固定化酵素
を配置りると共に、該両電極間に電圧を印加し、該電極
間に流れる電流に基づいて、被測定溶液中に含まれるリ
ン脂質を測定づるようにしたセンサーにＪ３い（、該固
定化酵素とし乙、フォスフＡリパーロと−」リンＡ−シ
ダーゼを用いたことを特徴としＣいる。
以下本発明の リ；施例を添句図面に基づき詳述覆る。
第１図は、本発明にム（づくリン脂質センサーどしての
酸素電極を示しており、１はガラス製の内管、２は同じ
くガラス製の外管Ｃあり、該内管１の底部には、白金製
のカソード（第１電極）３が設けられ、又、該外管２の
底部には、酸素分子を透過づるテフロン膜４が取付りら
れＣいる。該内管１と該外管２どの間には、内部液（３
０％ＮａＯ＋−１） ５が入れられ、該内部液中には、
鉛製のアノード（第２電極〉６が配置されている。該カ
ソード３．）ｌノード６には人々白金のリード線１０が
取イ」（）られＣいる。該酸素分子透過慴の７ノＬＪン
膜の外側には、リン１１１？貿がｊ人過（・いる族４＋
ｉ Ｉｉう（７が設りられ、その中に（よ］ＡスフＡリ
バーＵと］」リンＡ−↓シダー１とが混合された固定化
ｎｌ ｊｆ＋ ８か入れられている。尚、９はＯリング
である。
酸素電極を示しており、１はガラス製の内管、２は同じ
くガラス製の外管Ｃあり、該内管１の底部には、白金製
のカソード（第１電極）３が設けられ、又、該外管２の
底部には、酸素分子を透過づるテフロン膜４が取付りら
れＣいる。該内管１と該外管２どの間には、内部液（３
０％ＮａＯ＋−１） ５が入れられ、該内部液中には、
鉛製のアノード（第２電極〉６が配置されている。該カ
ソード３．）ｌノード６には人々白金のリード線１０が
取イ」（）られＣいる。該酸素分子透過慴の７ノＬＪン
膜の外側には、リン１１１？貿がｊ人過（・いる族４＋
ｉ Ｉｉう（７が設りられ、その中に（よ］ＡスフＡリ
バーＵと］」リンＡ−↓シダー１とが混合された固定化
ｎｌ ｊｆ＋ ８か入れられている。尚、９はＯリング
である。
第２図は、」述したセンサーどじ（の酊糸電ｌＢ１１を
用いたリン脂質測定シスｊｌ＼の Ｉｔｌｌを示してい
る。該酸素電極１１は、ζ）０℃に肩１持された水槽１
２中に配置され（いるビーカ′１３３内に１１Ｂ人され
る。該ビー力１３内の溶液中ｉＬ ＩＪ、ツノＩＩンが
二１−ナイングされｌこ磁（Ｉｌイホ１７′Ｉが入れら
れ（，１５す、該ビー力１３の下ｆｉｌ！に設置］られ
た回ｌ匠）鼓Ｊ易斤生装置１５による回転磁場（こＪ、
す、該磁性イホ１４は回転し、その結果、該ビーカゴ３
３中の溶液は１３．ｊ１１′される。該酸素電極１１の
第１と第２の電（上聞に流れた電流は、Ａ 、−Ｖ変換
器１０に、１、・）（電月信号に変換され、レコーダ１
７に供給される。、尚、１８は測定試料をビー力１３内
にン１入りるためのマイクロシリンジである。
用いたリン脂質測定シスｊｌ＼の Ｉｔｌｌを示してい
る。該酸素電極１１は、ζ）０℃に肩１持された水槽１
２中に配置され（いるビーカ′１３３内に１１Ｂ人され
る。該ビー力１３内の溶液中ｉＬ ＩＪ、ツノＩＩンが
二１−ナイングされｌこ磁（Ｉｌイホ１７′Ｉが入れら
れ（，１５す、該ビー力１３の下ｆｉｌ！に設置］られ
た回ｌ匠）鼓Ｊ易斤生装置１５による回転磁場（こＪ、
す、該磁性イホ１４は回転し、その結果、該ビーカゴ３
３中の溶液は１３．ｊ１１′される。該酸素電極１１の
第１と第２の電（上聞に流れた電流は、Ａ 、−Ｖ変換
器１０に、１、・）（電月信号に変換され、レコーダ１
７に供給される。、尚、１８は測定試料をビー力１３内
にン１入りるためのマイクロシリンジである。
上述した如ぎ構成におい−Ｃ１ビーカ１３内に酸素電極
１１を挿入し、磁性体１４を回転さｕ′で該ビーカ内の
溶液の担拌を行う。該攪拌により、該ビーカゴ３内部の
溶液中の酸素濃度はブラ１〜−の状態となり、その後、
マイクロシリンジ１８より血清が該溶液中に注入される
。該血清中に含まれるリン脂質は、該酸素電極１１底部
に設（Ｊられ（いる固定化酵素の内の］ＡスフＡリパー
ゼを触媒として該溶液中の水と反応する。この反応にＪ
、す、コリンと脂肪酸が生成されるが、該生成された二
重１リンは、固定化酵素の内のコリンＡギシダーゼを触
媒どして該溶液中の酸素と反応し、ベタインど過酸化水
素を生成りる。この結果、酸素電極底部のカソード３周
辺の酸素分子の量（濃度）は、該２番目の反応によつ（
少くなり、該カソード３とアノード１どの間に流れる電
流は低く’＜’ｉる。数分の後、該電流値はアシ１−一
の状態となり、コリンとの反応に奇ちりる酸素分子のａ
″ｉに比例した該電流値の変化からリン脂質の♀（帽〔
を測定することができる。
１１を挿入し、磁性体１４を回転さｕ′で該ビーカ内の
溶液の担拌を行う。該攪拌により、該ビーカゴ３内部の
溶液中の酸素濃度はブラ１〜−の状態となり、その後、
マイクロシリンジ１８より血清が該溶液中に注入される
。該血清中に含まれるリン脂質は、該酸素電極１１底部
に設（Ｊられ（いる固定化酵素の内の］ＡスフＡリパー
ゼを触媒として該溶液中の水と反応する。この反応にＪ
、す、コリンと脂肪酸が生成されるが、該生成された二
重１リンは、固定化酵素の内のコリンＡギシダーゼを触
媒どして該溶液中の酸素と反応し、ベタインど過酸化水
素を生成りる。この結果、酸素電極底部のカソード３周
辺の酸素分子の量（濃度）は、該２番目の反応によつ（
少くなり、該カソード３とアノード１どの間に流れる電
流は低く’＜’ｉる。数分の後、該電流値はアシ１−一
の状態となり、コリンとの反応に奇ちりる酸素分子のａ
″ｉに比例した該電流値の変化からリン脂質の♀（帽〔
を測定することができる。
次に実験例を示す。
（実験Ｉ！１Ｉ１１）
人：１ン１−ロール血清の希釈系列を試料どしく、本発
明に基づくセンサーの特性を調べた。：１ント口−ル＋
（＋１積は、栄研化学（株）製すビッドＱ −、Ｈニー
ム を用いた。分析条件は、緩衝液：０．１Ｎ４゜ｐｌ
−１８，０リンＭ緩衝液（１〜す１〜ンＸ １０ （：
） ４ ％ ）、反応温度：３０℃、試料量： ５０
／ｌＱ、であつ７ζ、。
明に基づくセンサーの特性を調べた。：１ント口−ル＋
（＋１積は、栄研化学（株）製すビッドＱ −、Ｈニー
ム を用いた。分析条件は、緩衝液：０．１Ｎ４゜ｐｌ
−１８，０リンＭ緩衝液（１〜す１〜ンＸ １０ （：
） ４ ％ ）、反応温度：３０℃、試料量： ５０
／ｌＱ、であつ７ζ、。
各濃度における応答曲線を第３図に承りが、ごの図にお
いで、縦軸は検出電流（１０（μΔ） 、 ４．Ｉｉ軸
は時間（分）（・ある。第４図は、第３図の測定結末に
基づいて１ｑられた電流１１１′Ｉ差とＬ石どの関係を
示リグラフであり、このグラフを用い、人知試わ）中の
中性脂質の濃度を求めることが（込る１、尚、この試験
の同性再現性は、５回の３ｔ’ｌシＬ′で・相対標’！
’ １１１１１斤（直１，７％であっｌζ１゜ （試験例２） 代表的リン脂質の１−）である１ノシΣンを試′Ａ８１
どして本発明に基づくセンサーの’ｌカ性を調べた。レ
シチンはＢ Ｄ １１ｃｈｅＩＩｌｉｃａｌｓ Ｊｔ
％の卵黄由来のｂのを使用した１１分析条（！ｌ（ＧＭ
衝液１反応温度、試料Ｈ）は、上述した試験例１と同じ
であり、この試験の結果得られた検量線を第５図に示づ
。尚、この詩の同１ｆ、Ｙ ？Ｔ］現竹は、５回の測定
で相対標準偏差値３．２％であった。
いで、縦軸は検出電流（１０（μΔ） 、 ４．Ｉｉ軸
は時間（分）（・ある。第４図は、第３図の測定結末に
基づいて１ｑられた電流１１１′Ｉ差とＬ石どの関係を
示リグラフであり、このグラフを用い、人知試わ）中の
中性脂質の濃度を求めることが（込る１、尚、この試験
の同性再現性は、５回の３ｔ’ｌシＬ′で・相対標’！
’ １１１１１斤（直１，７％であっｌζ１゜ （試験例２） 代表的リン脂質の１−）である１ノシΣンを試′Ａ８１
どして本発明に基づくセンサーの’ｌカ性を調べた。レ
シチンはＢ Ｄ １１ｃｈｅＩＩｌｉｃａｌｓ Ｊｔ
％の卵黄由来のｂのを使用した１１分析条（！ｌ（ＧＭ
衝液１反応温度、試料Ｈ）は、上述した試験例１と同じ
であり、この試験の結果得られた検量線を第５図に示づ
。尚、この詩の同１ｆ、Ｙ ？Ｔ］現竹は、５回の測定
で相対標準偏差値３．２％であった。
（試験例３）
試お１どし−Ｃの人血桔を本発明に基づくヒンーリーと
従来法によって分析し、比較した。分析条件（緩衝液２
反応温度、試１′３１量）は、上記試験例１と同じであ
り、検量線は、試験例１で得られたものを使用しＩＣ８
この分析結果を表１に示Ｊが、表の単位は、ｍｇ／ｄ
ｌ ｃある。尚、従来法とは、自動化学分析装置６を用
い、試料と酵素試薬とを況合しＣ反応させ、反応溶液を
比色測定したものである。
従来法によって分析し、比較した。分析条件（緩衝液２
反応温度、試１′３１量）は、上記試験例１と同じであ
り、検量線は、試験例１で得られたものを使用しＩＣ８
この分析結果を表１に示Ｊが、表の単位は、ｍｇ／ｄ
ｌ ｃある。尚、従来法とは、自動化学分析装置６を用
い、試料と酵素試薬とを況合しＣ反応させ、反応溶液を
比色測定したものである。
表１
以上詳述した如く、本発明によれば、固定化酵素どじ（
フォスノＡリパーゼと一１リンＡ１シク−ゼを用い、カ
ラム、ポンプ、）【−１−レルを必要どじない簡単な（
ｆ４成で、リン脂質の（尖出を）ＪンベＩＪメ１ヘリツ
タに高精麿で行うことが（・さる１、尚、本発明は上述
した実施例に限定されることなく幾多の変形が可能Ｃあ
る。例えば、酸素電極を使用μヂ、」リンと酸素及び水
どの反）芯ｔＬ−、、ｌ、つ（／ｌ ）反される過酸化
水系を検出づるｌζめの過酸化水バ１電極を用いＣＧ良
い。又、測定？ス１ムは第２図０ｆｆｌ’１成に限定さ
れないもので、溶液の撹拌手段、試おＩの注入１段等は
、他の機構を用いることかＣフートイー。
フォスノＡリパーゼと一１リンＡ１シク−ゼを用い、カ
ラム、ポンプ、）【−１−レルを必要どじない簡単な（
ｆ４成で、リン脂質の（尖出を）ＪンベＩＪメ１ヘリツ
タに高精麿で行うことが（・さる１、尚、本発明は上述
した実施例に限定されることなく幾多の変形が可能Ｃあ
る。例えば、酸素電極を使用μヂ、」リンと酸素及び水
どの反）芯ｔＬ−、、ｌ、つ（／ｌ ）反される過酸化
水系を検出づるｌζめの過酸化水バ１電極を用いＣＧ良
い。又、測定？ス１ムは第２図０ｆｆｌ’１成に限定さ
れないもので、溶液の撹拌手段、試おＩの注入１段等は
、他の機構を用いることかＣフートイー。
εＣ３１図は、本発明に基づくセンリーの 丈゛隔１ζ
１を示ず図、第２図はリン脂質ｄ１１１定シス）ムの一
例１・・・内管 ２・・・外管 ３・・・カソード ４・・・酸累万ス透過性膜 Ｏ・・・）ノノード ７・・・透析膜８・・・固定
化酵素 １１・・・酔系電（ル １２・・・水槽１３・・・ビ
ー力 １４・・・磁性体１５・・・回１１：ｌ；磁
場発生装買 １６・・・Δ−Ｖ変挽器 １７・・・し］−ダ １８・・・マイク［１シリンジ 特δ′）出願人 １１本電子株式会社 代表石 伊腔 −大 第２図
１を示ず図、第２図はリン脂質ｄ１１１定シス）ムの一
例１・・・内管 ２・・・外管 ３・・・カソード ４・・・酸累万ス透過性膜 Ｏ・・・）ノノード ７・・・透析膜８・・・固定
化酵素 １１・・・酔系電（ル １２・・・水槽１３・・・ビ
ー力 １４・・・磁性体１５・・・回１１：ｌ；磁
場発生装買 １６・・・Δ−Ｖ変挽器 １７・・・し］−ダ １８・・・マイク［１シリンジ 特δ′）出願人 １１本電子株式会社 代表石 伊腔 −大 第２図
Claims (3)
- （１）第１と第２の電極を右し、ぞの一方の電極近傍に
固定化酵素を配置し、該電極間に流れる電流に基づいて
、被測定溶液中に含まれるリン脂質を測定りるようにし
たピン１ナーにおいて、該固定化酵素として、フＡスフ
Ａリバーげとコリンオキシダーげを用いたことを特徴と
づるリン脂質センサー。 - （２）該両市極間に流れる電流は、該一方の電極近傍の
酸素の量に応じで変化する特許請求の範囲第１項記載の
リン脂′ｆ１．ｐンザー。 - （３）該両電極間に流れる電流は、該一方の電極近傍の
過酸化水素の量に応じて変化りる！ｌＪ ｉ’ｔ ｉ／
ｉ求の範囲第１項記載のリン脂質センサー。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58103249A JPS59228157A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | リン脂質センサ− |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58103249A JPS59228157A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | リン脂質センサ− |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59228157A true JPS59228157A (ja) | 1984-12-21 |
Family
ID=14349167
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58103249A Pending JPS59228157A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | リン脂質センサ− |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59228157A (ja) |
-
1983
- 1983-06-09 JP JP58103249A patent/JPS59228157A/ja active Pending
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ANALYTICA CHIMICA ACTA=1979 * |
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