JPS59228158A - 中性脂質センサ− - Google Patents
中性脂質センサ−Info
- Publication number
- JPS59228158A JPS59228158A JP58103248A JP10324883A JPS59228158A JP S59228158 A JPS59228158 A JP S59228158A JP 58103248 A JP58103248 A JP 58103248A JP 10324883 A JP10324883 A JP 10324883A JP S59228158 A JPS59228158 A JP S59228158A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- neutral lipid
- solution
- sensor
- immobilized enzyme
- blood serum
- Prior art date
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- Granted
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/001—Enzyme electrodes
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- Chemical & Material Sciences (AREA)
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- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、簡単に血清等に含まれる中性脂質の濃度を測
定Ｊることができる固定化酵素を利用した中性脂質セン
サーに関り′る。
定Ｊることができる固定化酵素を利用した中性脂質セン
サーに関り′る。
従来、固定化酵素を利用した中性脂質分析には、固定化
酵素カラムとｐＨ電極を組合Ｕたシス′）ム。
酵素カラムとｐＨ電極を組合Ｕたシス′）ム。
固定化酊累膜ど酸素電極あるい１ｊ過酸化水止（１１２
０２）電極とを組合せたシステムとが利用されている。
０２）電極とを組合せたシステムとが利用されている。
前者のシステムは、１）１１電極を使用し−（おり、測
定がボテンショメ１〜リンクであるｌこめに測定粕１哀
が充分でなく、又、カラムを用いろＩこめ、ポンプや検
出のためのフローレルが必ザとイｊす、システ１１が大
型どなる。一方後省のシス７１＼は、被測定溶媒中に溶
１）込んでいるＦ１１２素分子、あるいは過酸化水素を
電解し、その肋の電解電流を測定りるようにしくおり、
アンベＵメｌヘリツクな測定（・あるために高い精度で
測定を行うことがぐさイ５０しかしながら、中性脂質か
ら過酸化水素を牛成りるまでの反応系が複雑であり、測
定の途中で多数の試薬を溶液中に添加しな（プればなら
ず、複雑り作業が要求される。
定がボテンショメ１〜リンクであるｌこめに測定粕１哀
が充分でなく、又、カラムを用いろＩこめ、ポンプや検
出のためのフローレルが必ザとイｊす、システ１１が大
型どなる。一方後省のシス７１＼は、被測定溶媒中に溶
１）込んでいるＦ１１２素分子、あるいは過酸化水素を
電解し、その肋の電解電流を測定りるようにしくおり、
アンベＵメｌヘリツクな測定（・あるために高い精度で
測定を行うことがぐさイ５０しかしながら、中性脂質か
ら過酸化水素を牛成りるまでの反応系が複雑であり、測
定の途中で多数の試薬を溶液中に添加しな（プればなら
ず、複雑り作業が要求される。
本発明は、上述した点に鑑みでなされ！、：も−ので、
簡単に高い精瓜で中性脂質を測定づることがでさる中性
脂質はンザーを提供することを目的とＪる。
簡単に高い精瓜で中性脂質を測定づることがでさる中性
脂質はンザーを提供することを目的とＪる。
本発明看は、中性脂質がリボプロティンリパーゼ（Ｌ
１ｐｏｐｒｏｒｅｉｎ １ｉｐａｓｅ）を触媒として
水（１」２０）と反応し、グリセロール（Ｇ １ｙｃｅ
ｒｏｌ ）と脂肪酸が生成されること、該生成されたグ
リセロールがグリセ１」−ルＡ４．シダー１２ （Ｑ
１ｙｃｅｒｏｌｏｘｉｄａｓｅ ）を触媒として酸素分
子（０２）と反応し、グリヒルアルデハイド（Ｑ １ｙ
ｃｅｒａｌｄｅ１１ｙｄｅ ）と過酸化水素（１１＋
０２ ）を生成すること、及びこの２番目の反応による
溶液中の酸素量の減少あるいは、過酸化水素量の増加を
検出づ−ることにより、該中性脂質のｍ、 （ｌｃ＝
ＩＯ）を簡単に測定することができることを見出した。
１ｐｏｐｒｏｒｅｉｎ １ｉｐａｓｅ）を触媒として
水（１」２０）と反応し、グリセロール（Ｇ １ｙｃｅ
ｒｏｌ ）と脂肪酸が生成されること、該生成されたグ
リセロールがグリセ１」−ルＡ４．シダー１２ （Ｑ
１ｙｃｅｒｏｌｏｘｉｄａｓｅ ）を触媒として酸素分
子（０２）と反応し、グリヒルアルデハイド（Ｑ １ｙ
ｃｅｒａｌｄｅ１１ｙｄｅ ）と過酸化水素（１１＋
０２ ）を生成すること、及びこの２番目の反応による
溶液中の酸素量の減少あるいは、過酸化水素量の増加を
検出づ−ることにより、該中性脂質のｍ、 （ｌｃ＝
ＩＯ）を簡単に測定することができることを見出した。
従って、本発明に基づく中性脂質センサーは、第１と第
２の電極を有し、その一方の電極近傍に固定化酵素を配
置し、該電極間に流れる電流に以づい−Ｃ１被測定溶液
中に含まれる中性脂質を測定づるようにしたセンサーに
（Ｉ３いて、該固定化酵素として、リボプロディンリパ
ーゼとグリセロールオキシダーＵを用いたことを特徴と
している。
２の電極を有し、その一方の電極近傍に固定化酵素を配
置し、該電極間に流れる電流に以づい−Ｃ１被測定溶液
中に含まれる中性脂質を測定づるようにしたセンサーに
（Ｉ３いて、該固定化酵素として、リボプロディンリパ
ーゼとグリセロールオキシダーＵを用いたことを特徴と
している。
以上本発明の一実施例を添（＝１図面に工１１づさ計速
づる。
づる。
第１図（よ、本発明に基づ゛く中＋’ｌ脂ｙＴレンセン
どしての酸素電極を示しており、′１はガラス製の内管
、２は同じくガラス製の外管であり、該内管′１の底部
には、白金製のカソード（第１電極） １３が設けられ
、又、該外管２の底部には、酸木分イを透過り一ζテフ
ロン１．膜４が取イ」（プられＣいる。該内管１と該外
管２との間に１よ、内部液（：（（１％Ｎａ（’）１−
１）５が入れられ、該内部液中には、鉛製の７７ノード
（第２電極）６が配にＩさね（いる。該カソード３．ア
ノード６には夫々白金のリード線１０が取イ」りられ（
いる。該酸素の了透過↑４の−ｊ〕１１ン膜の外側には
、中性脂質が透過′Ｃ−さる透析ＩＩＩ！ ７ ｊ〕一
般）フられ、その中にはりボブ［」ｊインリパーゼとグ
リセロールオキシダーゼとが渥含された固定化酵素８が
入れられている。尚、９１．、Ｌ ＯリングＫ・ｒ１９
る。
どしての酸素電極を示しており、′１はガラス製の内管
、２は同じくガラス製の外管であり、該内管′１の底部
には、白金製のカソード（第１電極） １３が設けられ
、又、該外管２の底部には、酸木分イを透過り一ζテフ
ロン１．膜４が取イ」（プられＣいる。該内管１と該外
管２との間に１よ、内部液（：（（１％Ｎａ（’）１−
１）５が入れられ、該内部液中には、鉛製の７７ノード
（第２電極）６が配にＩさね（いる。該カソード３．ア
ノード６には夫々白金のリード線１０が取イ」りられ（
いる。該酸素の了透過↑４の−ｊ〕１１ン膜の外側には
、中性脂質が透過′Ｃ−さる透析ＩＩＩ！ ７ ｊ〕一
般）フられ、その中にはりボブ［」ｊインリパーゼとグ
リセロールオキシダーゼとが渥含された固定化酵素８が
入れられている。尚、９１．、Ｌ ＯリングＫ・ｒ１９
る。
第２図は、上述したセンサーどしでの酸素電極１１を用
いた中性脂質測定システ１１の一例を示している。該酸
素電極１１は、３０’Ｃに維持された水ＩＱ１２中に配
置されでいるビー力１３内に挿入される。該じ一力１３
内の溶液中には、テフロンがコーフーイング凸れたＩａ
性鉢体１７１入れられており、該ビー力１３の下部に設
りられだ回転磁場発生装置１５にＪ、る回転！１揚にＪ
、す、該磁性体１４は回転し、その結果、該ビー力１３
中の溶液は攪拌される。該酸素電極１１の第１と第２の
電極間に流れた電θ＋ｊＩＪ、△−Ｖ変換器１６によっ
て電圧信号に変換され、レニ１−ダ１７に供給される。
いた中性脂質測定システ１１の一例を示している。該酸
素電極１１は、３０’Ｃに維持された水ＩＱ１２中に配
置されでいるビー力１３内に挿入される。該じ一力１３
内の溶液中には、テフロンがコーフーイング凸れたＩａ
性鉢体１７１入れられており、該ビー力１３の下部に設
りられだ回転磁場発生装置１５にＪ、る回転！１揚にＪ
、す、該磁性体１４は回転し、その結果、該ビー力１３
中の溶液は攪拌される。該酸素電極１１の第１と第２の
電極間に流れた電θ＋ｊＩＪ、△−Ｖ変換器１６によっ
て電圧信号に変換され、レニ１−ダ１７に供給される。
尚、１８は測定試７３＋をビーカゴ３内に注入りるため
のマイクロシリンジ（・ある。
のマイクロシリンジ（・ある。
上述した如さ」１１１成において、ビーカゴ３内に酸素
電極１１を挿入し、磁性体１４を回転させＣ該ビーカ内
の溶液の攪拌を行う。該１ｔ１２拌により、該ビーカ１
３内部の溶液中の酸系濃度はプラトーの状態となり、ぞ
の後、マイクロシリンジ１８より血清が該溶液中にンー
１人される。該血泊中に含まれる中性脂質は、該酸素電
極１１底部に設（プられている固定化酵素の内のりボブ
１］テインリパーピを触媒として識溶液中の水と反応り
る。この反応により、グリセ［」−ルと脂肪酸がイ１成
、＼１′シるが、１−１曳生成されたグリセロールは、
固定化耐糸の内のグリセロールオキシダーゼを触媒とし
く該溶液中の酸比分子と反応し、グリセルアル）゛ハイ
ドど逮）酸化水素を生成づる。この結果、酸）：６０ｆ
、底）１１；のカソード３周辺の酸素分子の量（淵麿）
は、該２番目の反応によって少くなり、該カソード３と
アノード１どの間に流れる電流は低く ’＜４−る。数
分の後、該電流値はプラトーの状態と（＜す、グリセロ
ールとの反応に？ｊ与りる酵素の吊に比例し）こ該？ｔ
ｉ流碩の変化から、中性脂質のＭ（濃ｊ良）を測定リイ
２ことができる１゜ 次に実験例を示づ。
電極１１を挿入し、磁性体１４を回転させＣ該ビーカ内
の溶液の攪拌を行う。該１ｔ１２拌により、該ビーカ１
３内部の溶液中の酸系濃度はプラトーの状態となり、ぞ
の後、マイクロシリンジ１８より血清が該溶液中にンー
１人される。該血泊中に含まれる中性脂質は、該酸素電
極１１底部に設（プられている固定化酵素の内のりボブ
１］テインリパーピを触媒として識溶液中の水と反応り
る。この反応により、グリセ［」−ルと脂肪酸がイ１成
、＼１′シるが、１−１曳生成されたグリセロールは、
固定化耐糸の内のグリセロールオキシダーゼを触媒とし
く該溶液中の酸比分子と反応し、グリセルアル）゛ハイ
ドど逮）酸化水素を生成づる。この結果、酸）：６０ｆ
、底）１１；のカソード３周辺の酸素分子の量（淵麿）
は、該２番目の反応によって少くなり、該カソード３と
アノード１どの間に流れる電流は低く ’＜４−る。数
分の後、該電流値はプラトーの状態と（＜す、グリセロ
ールとの反応に？ｊ与りる酵素の吊に比例し）こ該？ｔ
ｉ流碩の変化から、中性脂質のＭ（濃ｊ良）を測定リイ
２ことができる１゜ 次に実験例を示づ。
実施例
人コントロール面清のイ釈系列を試別としく、本発明に
基づくセンサーの特性を調べた。＝１ン（〜ロール血清
は、栄研化学（株）製すビッドト−゛ツムｌを用いた。
基づくセンサーの特性を調べた。＝１ン（〜ロール血清
は、栄研化学（株）製すビッドト−゛ツムｌを用いた。
分析条件は、Ｗ衝液：Ｑ、ＩＭ。
１）Ｎ８．Ｑリン酸緩衝液（トリｌ−ンＸ１００４％）
、反応温Ｕ：３０℃、試イ′＋１♀：５０μ妃であった
。
、反応温Ｕ：３０℃、試イ′＋１♀：５０μ妃であった
。
各濃度にＪ５１ノる応答曲線を第３図に示づが、この図
におい゛（、縦Ｑ＋１＋は検出電流値（μ△）、横軸は
［１（分）である。第１Ｉ図（３Ｌ、第３図の測定結果
に基づいて得られた電流価差ど濃度との関係を示リグラ
フであり、このグラフを用い、未知試料中の中１ｉ脂質
の濃度を求めることかできる。尚、この試験の同時再現
性は、５回の測定℃゛相対標準偏差饋６．６％であった
。
におい゛（、縦Ｑ＋１＋は検出電流値（μ△）、横軸は
［１（分）である。第１Ｉ図（３Ｌ、第３図の測定結果
に基づいて得られた電流価差ど濃度との関係を示リグラ
フであり、このグラフを用い、未知試料中の中１ｉ脂質
の濃度を求めることかできる。尚、この試験の同時再現
性は、５回の測定℃゛相対標準偏差饋６．６％であった
。
（試験例２）
イ匁４（的中す１１脂７’、ｉ Ｉ／） １つて′ある
１〜リオレインを試料とじ（本発明に基づくセンリーー
の特性を調べｌこ。
１〜リオレインを試料とじ（本発明に基づくセンリーー
の特性を調べｌこ。
トリスレインは東京化成（株）製のものを使用した。分
析条イ′１（緩町液９反応温磨、試判量）は、上述した
試験例１ど同じでｄうり、この試験の結果得られた検量
線を第５ｑに示づ。尚、この時の同時再現性は、５回の
測定で相対標準偏差（１ｆ５．７％であった。
析条イ′１（緩町液９反応温磨、試判量）は、上述した
試験例１ど同じでｄうり、この試験の結果得られた検量
線を第５ｑに示づ。尚、この時の同時再現性は、５回の
測定で相対標準偏差（１ｆ５．７％であった。
（試験例３）
試料としての人血れ！■を本発明に基づくセンサ゛−と
従来法によって分析し、比較した１２分析条ｉ′１（緩
衝液１反応温庶、試１１年）は°、１−記試験例１ど同
じて・あり、検量線は、試験例ＩＣｌ：？られたしのを
使用した。この分析結果を人’ｌ ｌｊ−、；＋、・Ｊ
か、Ｊ゛５、のｄｉ １ｉン（、上、ｍｑ／ｄｌ−（”
ある。尚、従来法と（，１、自動化学分析装置を用い、
試お１ど酵バ・、試桑どを′置台しく反応８υ−１反応
溶液をＩｆ： ｅ ａｉ１１定したしの（：ある。
従来法によって分析し、比較した１２分析条ｉ′１（緩
衝液１反応温庶、試１１年）は°、１−記試験例１ど同
じて・あり、検量線は、試験例ＩＣｌ：？られたしのを
使用した。この分析結果を人’ｌ ｌｊ−、；＋、・Ｊ
か、Ｊ゛５、のｄｉ １ｉン（、上、ｍｑ／ｄｌ−（”
ある。尚、従来法と（，１、自動化学分析装置を用い、
試お１ど酵バ・、試桑どを′置台しく反応８υ−１反応
溶液をＩｆ： ｅ ａｉ１１定したしの（：ある。
以上詳述した如く、本発明ｆｊ： 、Ｊ、、 ＩＩば、
固）」−°化醇素どしてリポプロディンリバーじどグリ
し・［１−ルＡキシダー口を用いる簡ｊｌ’ｉな１☆１
成で、１ｉ＋ｉ：ｌ脂τ：１の検出をアンベロメ］−リ
ックに１６〒１゛白％（行うことｉ＋・でさる。尚、本
発明は上述した実施例に限定、＼４′；ることなく幾多
の変形が可能（・ある。例えば、ハ！：索電掩を使用せ
ず、グリヒＬ〕−ルと酸素との反応によっ−（生成され
る過酸化水素を検出覆るための過酸化水素電極を用いて
も良い。又、測定システムは第２図の４ｙ４成に限定さ
れないもので、溶液の撹拌手段、試料の注入手段６９は
、他の機構を用いることができる。
固）」−°化醇素どしてリポプロディンリバーじどグリ
し・［１−ルＡキシダー口を用いる簡ｊｌ’ｉな１☆１
成で、１ｉ＋ｉ：ｌ脂τ：１の検出をアンベロメ］−リ
ックに１６〒１゛白％（行うことｉ＋・でさる。尚、本
発明は上述した実施例に限定、＼４′；ることなく幾多
の変形が可能（・ある。例えば、ハ！：索電掩を使用せ
ず、グリヒＬ〕−ルと酸素との反応によっ−（生成され
る過酸化水素を検出覆るための過酸化水素電極を用いて
も良い。又、測定システムは第２図の４ｙ４成に限定さ
れないもので、溶液の撹拌手段、試料の注入手段６９は
、他の機構を用いることができる。
第１図は、本発明に赫づくセンサーの一実施例を示１図
、第２図は中性脂質測定システムの一例１・・・内ｉ”
”、２・・・外管 ３３・・・カソード ４・・・酸素ガス透過性膜 ６・・・）ノノード ７・・・透析膜８・・・固定
化酵素 １１・・・ｈシ桑電極 １２・・・水槽１３・・・ビ
ー力 １４・・・磁性体１５・・・回転磁場発生装
置 １６・・・八−Ｖ変換器 １７・・・し］−ダ １８・・・ンイクロシリンジ 特許出願人 日本電子株式会７１ 代表者 １’Ｊ’ ＩＩ！ −人 石 第２図 ｕ ＋ｏｏ ｚｏｏ Ｊｌ）Ｃ１４
ｏｏ ｓｏ。 第５１ （ＪＡ） ５０ ２（ （ｍ。 閃 一〇 ２／、、ｔｔ）
、第２図は中性脂質測定システムの一例１・・・内ｉ”
”、２・・・外管 ３３・・・カソード ４・・・酸素ガス透過性膜 ６・・・）ノノード ７・・・透析膜８・・・固定
化酵素 １１・・・ｈシ桑電極 １２・・・水槽１３・・・ビ
ー力 １４・・・磁性体１５・・・回転磁場発生装
置 １６・・・八−Ｖ変換器 １７・・・し］−ダ １８・・・ンイクロシリンジ 特許出願人 日本電子株式会７１ 代表者 １’Ｊ’ ＩＩ！ −人 石 第２図 ｕ ＋ｏｏ ｚｏｏ Ｊｌ）Ｃ１４
ｏｏ ｓｏ。 第５１ （ＪＡ） ５０ ２（ （ｍ。 閃 一〇 ２／、、ｔｔ）
Claims (3)
- （１）第１と第２の電極を有し、その一方の電極近傍に
固定化酵素を配回し、該電極間に流れる電流に基づいて
、被測定溶液中に含まれる中性脂質を測定するようにし
たセンサーにおいて、該固定化酵素として、リボプロテ
ィンリパーゼとグリセロールＡキシダーピを用い！ここ
とを特徴と覆る中性脂質センサー。 - （２）該両電極間に流れる電流は、該一方の電極近傍の
酸素の量に応じて変化づる特許請求の範囲第１項記載の
中性脂質センナ−０ - （３）該両電極間に流れる電流は、該一方の電極近傍の
過酸化水素の辺に応じて変化する特許請求の範囲第１項
記載の中性脂質センサー。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58103248A JPS59228158A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | 中性脂質センサ− |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP58103248A JPS59228158A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | 中性脂質センサ− |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS59228158A true JPS59228158A (ja) | 1984-12-21 |
| JPH043501B2 JPH043501B2 (ja) | 1992-01-23 |
Family
ID=14349137
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP58103248A Granted JPS59228158A (ja) | 1983-06-09 | 1983-06-09 | 中性脂質センサ− |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS59228158A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9957542B2 (en) | 2005-03-29 | 2018-05-01 | Cci Corporation | Biosensor |
-
1983
- 1983-06-09 JP JP58103248A patent/JPS59228158A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9957542B2 (en) | 2005-03-29 | 2018-05-01 | Cci Corporation | Biosensor |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH043501B2 (ja) | 1992-01-23 |
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