JPS5925329A - インタ−フエロン誘起剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、硫酸化多糖体ＤＦ−４６３９を有効成分とす
る・ｆンター７エロン誘起剤に関するものである。この
有効成分は、ゲル濾過法による分子１」の主ピークが約
２３，０００である硫酸化多糖体であり、線溶誘導活性
や大賜菌等による感染症の予防及び治療に効果のあるこ
とが知られていた（特開昭５６−６７３０１号及び特開
昭５７−４２６２７号公報参照）。

あることから１種々の有用性が期待される。そこで実用
的な用法を提供する目的で名種σ）試験を行ない、その
生物学的特性を調べた結果、本発明を完成した。

本活性物質の有効量をヒトまたはインターフェロン（以
下Ｉ　Ｆ’Ｎと略す）誘起能を有する動物の体内または
細胞に投与することによりＩＦＮを誘起することができ
る。近年ＩＦＮは抗ウィルス活性と共に抗腫瘍性が期待
されているので１本活性物質をヒト、＠乳類（牛、馬、
豚等）。

鳥類、魚類等の各種を椎動物のウィルス感染症の予防お
よび治療に利用することが期待できるばかりでなく、抗
腫瘍剤としても期待できる。

本活性物質は静脈内注射、腹腔的注射、筋肉内注射、腸
管内、経口、経皮、スプレー等の方法で投与することが
できる。適当な投与量は静脈内投与では、動物では０．
０１〜２０ｎｕｉ／に９であるが、宿主の種類１年令２
体重等の諸条件。

投与目的等によって適当に選ばれる。実用的には動物で
は静脈内投与０．０１−１０■／に９．腹腔内０．１・
・−２０−勾とトでは静脈内０．０１〜１、０　ｍ９７
〜でよく、経口投与の場合は約１００倍多く用いる。Ｉ
ＦＮを投与した後に本活性物質を投与する方法（ブライ
ミング法）によると。

皐独投りの場合よりも生物学的活性を８〜１Ｏ（ｔ′１
高めることができると同時に、宿主の応答性を高め、有
効エリ１間を延長することができる。また本活性物質の
投与鼠を減することができる。

本活性物質は散剤、カプセル剤、顆粒剤９錠ハリ、カプ
セル剤、シロップ、乳剤、懸濁液、ド１２、プまたは水
剤船に製剤したものが用いられ。

投与方法により通官選ばれる。

本活性物質は単−柚の継代培養細胞上ではＩＰ・１１を
産生じない。動物個体か生体から採取したてのリンパ球
やマクロファージに作用して■Ｆ　Ｎをか生ずる。本活
性物質をウサギに注射して産生された血中インターフェ
ロンは５６°Ｃの加熱やｐＨ２の削性条件下ではや＼不
安定である。

次に試験例および実験例により本発明を説明する。

ル（“馴這例１ Ｉト冒４訪起法およびＩＦＮ活性の測定法（ａ）　　ｉ
ｎ　ｖｉｔｒｏ法によるｒｖｕ（Ｄ＃４起方法ウサギ（
日本内色種１体本釣１に９）を全採血して殺し、牌臓、
骨髄およびリンパ節細胞を採取し、１０％子牛血清を含
むイーグルＭＥＭ培地（ＧＩＩ３ＣＯ社製）を用いて、
混合細胞約１０７個／−を含む細胞浮遊液をつくり。

各浮遊区分（１−）に１本発明の薬剤を１００．１０，
１，０．１および０．０ＩＰ！ＩＩ／宙ｄをそれぞれ加
え、２５°Ｃで２４時間培養後。

各培養液を遠心処理してその上清液をとり。

ＩＦＮ活性測定用試刺とした。マウス（ｄａＹ系、６週
令１体爪２５９土１９）は牌臓を用い培養を３７°Ｃで
行う以外は同様に処理した。

（ｂ）　　ｉｎ　ｖｉｖｏ法によるＩＦＨの誘起方法本
発明の薬剤の水溶液（１０ｍｇ　／ｌ＋Ｉｌ　）をウサ
ギ（体本釣２〜２．５９）のη静脈に注射し。

注射前（対照）、注射後２時間、４時間および６時間に
採血（２”）　し＋その血清をＩＦ１１活性測定用試料
とした。マウスは尾静脈から注射する以外は同様に行な
った。

（ｃ）ＩＦＮ活性の測定 産生されたＩＦＨの活性の測定は、常法にならいウサギ
の実験系ではウサギ株化細胞ＲＫ−１３，マウスにおい
てはマウス株化細胞ｒ、を用いて行なった。まず予めシ
ャーレに帛備しておいた上記細胞の単層培養上に、適当
に希釈したＩ　Ｆ　Ｎ試料溶液を加え、８７°Ｃで一夜
培養後、水庖性ロ内炎ウィルス （Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ　ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ　ｖｉｒ
ｕｓ　）　（Ｖ　Ｓ　Ｖ　）を攻撃用ウィルスとし、そ
のブラックの減少率を指標としてＩ　Ｆ　Ｎ活性を測定
した。なおＩＦＮ活性の単位は？δ法にならい、ＩＦＮ
無処置細胞におけるブラック数の５０％を示す希釈σ）
逆数として表現する。

試験例２ ｘＦＮｕ起剤であることの証明 本活性物質で産生されたＩＦＮ試料は、ウサギを用いた
実験系では、同じ動物種の細胞株ＲＫ−１３細胞トでＶ
ＳＶの増殖を抑制する他。

血清学的に異るワタシニアウイルス（Ｖａｃｃｉｎｉａ
ｖｉｒｕｓ　）の増殖を抑制するが、動物種の異るマウ
スの細胞株り細ｌｌａ上ではＶＳＶの増殖を抑制しない
。またマウスを用いた実験系では同種のマウスのＬ細胞
上ではＶＳＶの増殖を抑制するが。

異種のウサギのＲＫ−１３細胞ではＶＳＶの増殖を抑制
しない。

これらの産生されたＩＦＮ試利は、１０万りで遠心して
も活性成分は沈降しないし、この活性成分は透析もされ
ない。また、この試料を０．０８％トリプシン濃度で８
７”ｃ２時間処理するとＩＦＮ活性は失活する。

ウサギのｉｎ　ｖｉｖｏ　で産生（２時間目の血清）さ
れたｒ　ＦＮ試料は５６°ＣａＯ分間の加熱、あるいＧ
。１１＋ｌＩ２で一晩透析を行なうとその活性の約７０
％は失活する。

本活性物質そのものはｉｎ　ｖｉｔｒｏで継代培養細胞
に作用して抗ウイルス効果を発揮しないし。

工ＦＮも産生じない。また、　ｉｎ　ｖｉｔｒｏにてｖ
ｓＶそのものを直接不活化もしない。

実施例 （＋）　　ｉｎ　ｖｉｔｒｏにおりるＩＦＮの誘起試験
動物として、試験例１で用いたと同種のウサギおよびマ
ウスを用いた。各細胞浮遊液（ｉ　ｏ７個／　１ｎｌ　
）を１ｕ７ｊ製し、ソノ各区分（ｌ−）に柚々希釈した
試料を加える。希釈液は子牛血清ｌＯ％を含むイーグル
ＭＥＭ培地を用いた。培養はウサギ細胞では２５°Ｃ，
マウス網側では３７°Ｃで２４時間行ない、培養後の液
を遠心処理して得た上清液を試「例１に亭じてｒ　Ｆ　
ｔｌ活性を測定した。

第１表　ｉｎ　ＶｉｔｒＯにおけるＩＦＨの誘起（２）
ｌｎ　ｖｉｙｏにおりるｒＦＮ９起試料全試料Ｑ　ｔ＋
Ｉｇ、へＩになるように燐酸繰勘液（ＰＢＳ）で溶ｌｌ
Ｊ・γし、ウサギ（体重２〜）の耳静脈より注射し、注
射前、注射後２，４゜６１１＆曲にｅｌｍｌ　（２ｔｎ
ｌ　）　Ｌ、その血清についてｒＦＮ活性を測定した。

７１クスについては尾静脈より注射し、１群５匹で行な
った。本活性物質の各濃度を含むよう、ウサギではｌ−
。

マウスでは０．２ＴＩ７！容量で注射した。マウスの経
１］投与では２５０　ｍ９７に９７０．２　ｙｄで行な
った。

第２表　ウサギにおけるＩＦＮ読起（静脈注射） 第３表　マウスにおけるＩＦＮ、ｉ起（静脈注射） 第４表　マウスにおけるＩＦＮ＠起（経口投与） 本活性物質は、ウサギあるいはマウスに静脈より注射し
た場合２時間をピークにＩＦＮが血中に出現する。マウ
スに経口的に与えると６〜１５時間にわたって血中にＩ
ＦＮが検出された。これらの１ＦＮはいずれも試験例２
に合致する。

実施例 （１）　　ウサギ皮膚局所におけるワタシニアウィルス
発痘の抑制 生理食塩水で希釈した各濃度の試料を１群８匹のウサギ
背部の皮肉局所に０．２−づつ注射し、２４時間後に同
じ局所にワタシニアウイルスの最小発痘針の十倍（０，
１ｔｎｔ）を接種し、７１１１１に局所の発痘を調べた
。発痘の大きざは直径６關以上を（＋）とし、１Ｑｓａ
以上を（１１）とした。

第５表に見られるように２μ９濃度以上にて発痘の抑制
がみられる。

（２）　　マウスにおけるヘルペスウィルスの感染致死
の抑制 ＰＢＳで希釈した各濃度の試料を１群１０匹のマウスに
腹腔内注射しく０．５ｇｎｔ）、６時間後および２４時
間後にヘルペスウィルス（ｌ型ミャマ株、　７　Ｘ　１
０”Ｐ　Ｆ　Ｕｌｏ、５−）を腹腔内投与し、ヘルペス
ウィルスによる感染死に対する本活性物質の効果を調べ
た（期１用３０日）。

本活性物質はウィルス攻撃２４時間前に与えても有効で
あるが、６時間前に与えた方がより良い感染防禦を示す
。

（Ｂ）　　マウス尾部におけるワクシニアウィルス発痘
の抑制 ＰＢＳで希釈した各濃度の試料を１群１０匹のマウスの
腹腔内に注射しくｏ、５ｍｊ）＋６時間後にワクシニア
ウィルスを静脈内注射しく０．１４／）も、８日後に尾
部の発痘数をしらぺた。

第７表 ※　Ｐ＜０．００５ この表より１２．５　Ｔｎ９以上で発痘の抑制に有効で
あることが認められる。

本活性物質をヒトまたは動物に投与するために１本活性
物質を有効成分とし、薬学的に許容し得る担体または賦
形剤を含有する薬学的組成物が提供される。この組成物
は経口、直腸内。

経皮または粘膜内投与に適した形態であり得る。

たとえば経口投与用は固体でも液体でもよく。

敗剤、カプセル剤、顆粒２錠剤、コートされた錠剤、シ
ロップ、乳剤、懸濁液またはドロップの形でもよい。こ
の種の組成物は製薬に常用される担体または賦形剤を含
んでいる。適当な錠剤用賦形剤の例はラクトース、バレ
イショ澱粉または可溶性澱粉およびステアリン酸マグネ
シウムで、胆管りＩ投与用担体の例は、滅菌された水、
生理的食塩水またはアーモンド油であってアンプルに入
れてもよいし、または使用直前に活性物質を加えてもよ
い。

これらの組成物は所望により、製薬に常用される結合剤
、安定化剤、潤渭剤、防腐剤、増鼠剤等を含んでもよい
。

実用的な剤形の他の例は、粘膜用としては。

バッカル、トローチ、点眼剤、平削等、注射用としては
、水溶剤、油溶剤、懸濁剤等、吸入用とじｉ、　１．１
．　、　ＩＰ＆人剤、噴霧剤等、外用としては。

軟膏、硬角、塗布剤、浴剤、噴拐剤等である。

これらの組成物を活性物質の一宇量を供給できるように
成形された用Ｈｉｄ位としてＷ１■製すると有利である
。用量単位に含有される活性物質の実用的な足は、ｆ７
？脈注射剤の単位含有量を１とした場合、たとえば経口
投与剤では約５〜１００倍、皮下注射剤では約２〜３倍
、筋向注射剤では約１．５〜３倍、バッカル、トローチ
では約２〜・を倍、平削では約５〜２０倍がよい。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 硫酸化多糖体ＤＦ−４６３９を有効成分とするインター
   フェロン誘起剤