JPS5925688A - 固定化ガラスコ−テイングチユ−ブ及びその製造法 - Google Patents
固定化ガラスコ−テイングチユ−ブ及びその製造法Info
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- JPS5925688A JPS5925688A JP57134309A JP13430982A JPS5925688A JP S5925688 A JPS5925688 A JP S5925688A JP 57134309 A JP57134309 A JP 57134309A JP 13430982 A JP13430982 A JP 13430982A JP S5925688 A JPS5925688 A JP S5925688A
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- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
この発明は、ガンスコーティングテユープに関する。さ
らに詳しくは酵素、抗原、抗体等のペプチド含有機能性
化合物を固定化してなる固定化ガラスコーティングチュ
ーブ及び−七の製造法に関する。
らに詳しくは酵素、抗原、抗体等のペプチド含有機能性
化合物を固定化してなる固定化ガラスコーティングチュ
ーブ及び−七の製造法に関する。
最近、ｒ＋素等のベグチド含有化合物をガラス担体に固
定化した固定化ガラスが診断用や合成用のバイオリアク
ターとして用いられるようｐこなり、ことにかような固
定化ガラスをチューブ内面に被覆した固定化ガラスコー
ティングチューブが液体クロマトグラフやガスクロマト
グラフ用のカラム等に用いらり、るようになった。これ
らのコーティングチューブの製造法としてなよ、溶融法
によって５ｉ０２糸のガラスを作成し、これを、１丙当
な細管に引張るか又はその周りをポリイミド樹脂などで
被覆することによっでガンスコーデイ／グテユーブを得
、このガニ）珂表面をアルカリ処、ｊｊｌ して水酸基
を生成させ、仁れにシランカップリング剤をエステル結
合で導入した後、このカップリング剤に直１λＣ又ｅ」
、変成１７メξ後酊メ＜ Ａ’？’σ）ベグチト稍有化
合物をイー１加させて固定化−ノる方法がり（１られで
ｇす、実用化さルＣいる。。
定化した固定化ガラスが診断用や合成用のバイオリアク
ターとして用いられるようｐこなり、ことにかような固
定化ガラスをチューブ内面に被覆した固定化ガラスコー
ティングチューブが液体クロマトグラフやガスクロマト
グラフ用のカラム等に用いらり、るようになった。これ
らのコーティングチューブの製造法としてなよ、溶融法
によって５ｉ０２糸のガラスを作成し、これを、１丙当
な細管に引張るか又はその周りをポリイミド樹脂などで
被覆することによっでガンスコーデイ／グテユーブを得
、このガニ）珂表面をアルカリ処、ｊｊｌ して水酸基
を生成させ、仁れにシランカップリング剤をエステル結
合で導入した後、このカップリング剤に直１λＣ又ｅ」
、変成１７メξ後酊メ＜ Ａ’？’σ）ベグチト稍有化
合物をイー１加させて固定化−ノる方法がり（１られで
ｇす、実用化さルＣいる。。
しかじ土ｒｔ＋−： ａＹ−来の方法におい−ＣＩｔＪ
、、ガフスコーｉ−・ｆングチュ〜ブ自体の作月１．す
も特殊な装置〆）を必要とＩ−かつ高温力１１熱を必要
とする点不利であり、さらにガラス表面に水酸基を生成
させる工程が必」川であり、千ノしによって生成しりる
水酸ノ、（の１１′Ｌ位？ｌ＜面積当りの１辻ｔま限度
があっ゛（酵素等の固定１．＋Ｌにも制限があり、ガラ
ス被覆面画りの固定１「［を増大しｒ古件の高いＩＩ！
ＩＩ定化ガラス−１−１イノグテユ−グ丘イ４７ること
ｄ、困如トであった。そのだめ、被覆ガラスにハニカム
処理（ホイスカー生成処理）等のｌ＃、１７殊な粗面化
処理を行なってガラス表面積をできるだけ広くするとと
も行なわれＣいる。
、、ガフスコーｉ−・ｆングチュ〜ブ自体の作月１．す
も特殊な装置〆）を必要とＩ−かつ高温力１１熱を必要
とする点不利であり、さらにガラス表面に水酸基を生成
させる工程が必」川であり、千ノしによって生成しりる
水酸ノ、（の１１′Ｌ位？ｌ＜面積当りの１辻ｔま限度
があっ゛（酵素等の固定１．＋Ｌにも制限があり、ガラ
ス被覆面画りの固定１「［を増大しｒ古件の高いＩＩ！
ＩＩ定化ガラス−１−１イノグテユ−グ丘イ４７ること
ｄ、困如トであった。そのだめ、被覆ガラスにハニカム
処理（ホイスカー生成処理）等のｌ＃、１７殊な粗面化
処理を行なってガラス表面積をできるだけ広くするとと
も行なわれＣいる。
！
この発明は、かような問題点に鑑みなされた゛ものであ
る。との発明の発明者らｅｊ金４１１番−ｒル：ｊ ＝
ｉシトを原料とし、こ７Ｌを緩１１１な条件ト−でカ１
１水分ｈ・ｆしで生成するゲル状物を酵素等固定用４１
１体として用いることに想着し、これＩｒＣより熱・処
理等を材間とせずかつ水酸基を生成させる工程を行なう
ことなく、相体表面積当りの固定量が増大された固定化
ガラスコーティングチューブが１１１られる事実を見出
しこの発す１Ｊに到達した。
る。との発明の発明者らｅｊ金４１１番−ｒル：ｊ ＝
ｉシトを原料とし、こ７Ｌを緩１１１な条件ト−でカ１
１水分ｈ・ｆしで生成するゲル状物を酵素等固定用４１
１体として用いることに想着し、これＩｒＣより熱・処
理等を材間とせずかつ水酸基を生成させる工程を行なう
ことなく、相体表面積当りの固定量が増大された固定化
ガラスコーティングチューブが１１１られる事実を見出
しこの発す１Ｊに到達した。
かくしてこの発明によればチューブ内面に被覆する固定
化７７１１体として、金属アルコキシドの加水分解で生
成する水酸化金属化合物及び／又けその縮合物からなる
ガラス様ゲル体を用い”Ｃなるベグチド含有化合物の固
定化ガラスコーティングチューブ゛が土ノｈｕｂされる
。
化７７１１体として、金属アルコキシドの加水分解で生
成する水酸化金属化合物及び／又けその縮合物からなる
ガラス様ゲル体を用い”Ｃなるベグチド含有化合物の固
定化ガラスコーティングチューブ゛が土ノｈｕｂされる
。
この発明における金属アルコキシドとしては、ガラス製
造分野やセラミックス製造分野で知られた金属７′ルコ
キシドが種々適用でき、具体的にはＳｉ （ＯＣｌｌＢ
）４、Ｓｉ （ＯＣ２Ｈ５）４ 、 ’ｌ’ｉ （Ｏ
ＣＢＩＩ７）４、Ｖ（ＯＣ２１１６）ａ 、Ａ、６（Ｏ
Ｃ２Ｈ５）３ 、 Ｎａ０Ｃ１１３等の低級アルコキシ
金属が挙げられ、とｉしらのうち低級アルコキシシラン
を用いるのが通常好適であ、る。
造分野やセラミックス製造分野で知られた金属７′ルコ
キシドが種々適用でき、具体的にはＳｉ （ＯＣｌｌＢ
）４、Ｓｉ （ＯＣ２Ｈ５）４ 、 ’ｌ’ｉ （Ｏ
ＣＢＩＩ７）４、Ｖ（ＯＣ２１１６）ａ 、Ａ、６（Ｏ
Ｃ２Ｈ５）３ 、 Ｎａ０Ｃ１１３等の低級アルコキシ
金属が挙げられ、とｉしらのうち低級アルコキシシラン
を用いるのが通常好適であ、る。
なお、こｉＬら二種以上の混合物を用いてもさしつかえ
はない。
はない。
この発明のチューブを製造するに当って、まず上記金属
アルコキシドの溶液が所望のナユ〜プ内に被覆される。
アルコキシドの溶液が所望のナユ〜プ内に被覆される。
通當上記／ｌ−１液をチューブ内に通じることによつで
簡便に被１夏を行なうことができる。これによつ１チユ
一ブ内面に金属アルコキシド含有溶液の薄層がコートさ
れる。仁の際、用いる金属アルコキシド含有溶液は金属
アルコキシドの加水多））ゲｔが実ｔｔ的に牛していな
いものを用いる必要がある。この溶媒とｊノＵ ｔ、を
易揮発性の親水性溶剤や一七の含水物を用いるのが適尚
であり、例えば含水メタノールや含水エタノールが好適
に用いられる。水のみを溶剤とすることもできるが、こ
の際金属アルコキシドの選択によってｔＪ力１１水分解
が負、益にＴ川み１ｔ、ｂぎてゲル化し１皮覆（夕・作
が困勇１ｔとｔする惧りがあり、また乾燥」二不利であ
り！ｌｌｆましくない。
簡便に被１夏を行なうことができる。これによつ１チユ
一ブ内面に金属アルコキシド含有溶液の薄層がコートさ
れる。仁の際、用いる金属アルコキシド含有溶液は金属
アルコキシドの加水多））ゲｔが実ｔｔ的に牛していな
いものを用いる必要がある。この溶媒とｊノＵ ｔ、を
易揮発性の親水性溶剤や一七の含水物を用いるのが適尚
であり、例えば含水メタノールや含水エタノールが好適
に用いられる。水のみを溶剤とすることもできるが、こ
の際金属アルコキシドの選択によってｔＪ力１１水分解
が負、益にＴ川み１ｔ、ｂぎてゲル化し１皮覆（夕・作
が困勇１ｔとｔする惧りがあり、また乾燥」二不利であ
り！ｌｌｆましくない。
−に記被覆された鵜層内の金属゛１ルコギシドＱ」加水
分解によつ−Ｃガラス様ゲル体全形成する。か↓うな加
水分解は緩４１１な条件でかつｆＲ媒の蒸１ｉ（と共に
進行する。例えば低級アルコキシシラノを用いた場合；
ＩＴ１常１）Ｉｔ ｌ〜３稈度にｈｌ、！製された水性
（排水）溶媒を用い、これをチューブ内しこ被覆した後
、室温Ｆで放置することにより加水分解を迅速（通常数
分程度）に行なうことができる。ことにこの方法によれ
ばチューブ内に薄層の溶液が被覆されるため、溶媒の蒸
散は速めらＪｔ、そり、に上り被覆前にはｔｌとんと進
行しない加水分解が進行するものと考えられる。
分解によつ−Ｃガラス様ゲル体全形成する。か↓うな加
水分解は緩４１１な条件でかつｆＲ媒の蒸１ｉ（と共に
進行する。例えば低級アルコキシシラノを用いた場合；
ＩＴ１常１）Ｉｔ ｌ〜３稈度にｈｌ、！製された水性
（排水）溶媒を用い、これをチューブ内しこ被覆した後
、室温Ｆで放置することにより加水分解を迅速（通常数
分程度）に行なうことができる。ことにこの方法によれ
ばチューブ内に薄層の溶液が被覆されるため、溶媒の蒸
散は速めらＪｔ、そり、に上り被覆前にはｔｌとんと進
行しない加水分解が進行するものと考えられる。
ただし、上記力１１水分解は室温下のごとき緩和な榮件
下で行ない加温を避けできるだけ力１１水分解物（例え
ば５ｉ（０１１）４）の高縮合化が防止されたゲル体を
形成させることが必要である。
下で行ない加温を避けできるだけ力１１水分解物（例え
ば５ｉ（０１１）４）の高縮合化が防止されたゲル体を
形成させることが必要である。
例えば、金属アルコキシドとしで５１（ＯＣ２１１５）
４を用いた。１劾合にはチューブ内１ｎｌに被ＩＭされ
たガラス様のゲル体が得ら・れるがその組成は５ｉ（Ｏ
Ｃ２１１５）４の力ＩＪ水分Ｗｌ物であるＳｊ、（ＯＨ
）４又はその低縮合物からなるため、従来のコーティン
グチューブのＳ：１．０２系ガラスにアルカリ処理によ
シ生成された水酸基に比して非常に多数の水酸基をそれ
自身有しでいる。従って従来の固定化ガラスに比して多
量の酵素等を固定化できるものと考えられる。仙の＜Ｄ
Ｍアルコキシドについても同様に、イυ１つレタガラ
ス様ゲル体１」、水ｒｂ化金ル、４化合物やその低縮合
物からなるだめ、多Ｊｉｌのｒ・１・）メ（等を固定化
できるものと考えられる。
４を用いた。１劾合にはチューブ内１ｎｌに被ＩＭされ
たガラス様のゲル体が得ら・れるがその組成は５ｉ（Ｏ
Ｃ２１１５）４の力ＩＪ水分Ｗｌ物であるＳｊ、（ＯＨ
）４又はその低縮合物からなるため、従来のコーティン
グチューブのＳ：１．０２系ガラスにアルカリ処理によ
シ生成された水酸基に比して非常に多数の水酸基をそれ
自身有しでいる。従って従来の固定化ガラスに比して多
量の酵素等を固定化できるものと考えられる。仙の＜Ｄ
Ｍアルコキシドについても同様に、イυ１つレタガラ
ス様ゲル体１」、水ｒｂ化金ル、４化合物やその低縮合
物からなるだめ、多Ｊｉｌのｒ・１・）メ（等を固定化
できるものと考えられる。
このようしこし”〔イ４Ｉられたガラス様ゲ几体コーデ
ィングチューブをよ、その゛止まもしくは任意に乾燥し
Ｃ以下の工程に供さ）しる。プこだ（７、か１うなガシ
ス様ゲル体＝１−テ・ｆフグチー１．−ブ自体、従来の
ガラスコーティングチューブとｐ、ｌその表面活性が異
なるため、特殊な分離うＪ析用カラノ、としＣも使用で
き、さらに高温処理（〕１１１′畠、コ１００〜５００
℃フし’ｔ Ｓ ３．０２系ガラスコーテイングチユー
ブに変換することもできる。ことしこ、５４０２系ガラ
スコーデイングチユーブの製造法としでＩｔ、Ｌ Ｋ来
に比［７゛〔簡便であり、極め−〔有用である。従って
この観点から、この発明Ｃま金属アルコキシドの一柚叉
ｔま一棹以上を含有する溶液をチューブ内面に被覆し、
金属アルコキシドを加水分１’／Ｉ Ｌ １ニガラス様
ゲル体の被榎層を形成し、これを加熱処理することを特
徴とするガラスコーティングチューブの製造法をも提供
するものである。
ィングチューブをよ、その゛止まもしくは任意に乾燥し
Ｃ以下の工程に供さ）しる。プこだ（７、か１うなガシ
ス様ゲル体＝１−テ・ｆフグチー１．−ブ自体、従来の
ガラスコーティングチューブとｐ、ｌその表面活性が異
なるため、特殊な分離うＪ析用カラノ、としＣも使用で
き、さらに高温処理（〕１１１′畠、コ１００〜５００
℃フし’ｔ Ｓ ３．０２系ガラスコーテイングチユー
ブに変換することもできる。ことしこ、５４０２系ガラ
スコーデイングチユーブの製造法としでＩｔ、Ｌ Ｋ来
に比［７゛〔簡便であり、極め−〔有用である。従って
この観点から、この発明Ｃま金属アルコキシドの一柚叉
ｔま一棹以上を含有する溶液をチューブ内面に被覆し、
金属アルコキシドを加水分１’／Ｉ Ｌ １ニガラス様
ゲル体の被榎層を形成し、これを加熱処理することを特
徴とするガラスコーティングチューブの製造法をも提供
するものである。
上ｉ己ゲル体しこ反応させるシラノカップリング剤とし
てｔユ、アミノ基、チオール基、−Ｌボキシ基などの′
白面性基を有する当該外１１ｊｆで公／）１１のシラン
肋導体が適用でき、具体的にｒＪ： Ｔ−アミ７グロビ
ルトリエｌ−キシシラノ、Ｔ−りτコロブロビルトリメ
トギシシラン、ビニルトリエ］・キシシラノ、Ｔ −グ
リシドキシグロピルトリメトキシシラノ、Ｎ−β−（ア
ミノエチル）−７−アミノプロビルトリメトギンシラン
等が使用される。かようなシラノカップリング剤との反
応は、当該分野で公知の条ｆｌ下で行なわＪＬる。例え
ばＴ−アミノプロピルトリーＩ−トキシシンンを用い／
（」助合、とのカップリング剤を水に溶カイして１〜ｌ
Ｏｗｊ％水７′（ｉ液、好ましくｔま２ｗＬ％水溶液と
しかつｐＨを３〜５に調整した後、この溶液を前記チュ
ーブ内にｔ］二人し加温下数時間接触させた後、水洗し
て未反工Ｌ・のカップリング剤を除去することによりイ
ＵらノＬる。かようなシューブはυｆ−来のガラスコル
ティノブチューフレこルしｔ内面に多くのカップ１コ／
グ基を有しでいる。
てｔユ、アミノ基、チオール基、−Ｌボキシ基などの′
白面性基を有する当該外１１ｊｆで公／）１１のシラン
肋導体が適用でき、具体的にｒＪ： Ｔ−アミ７グロビ
ルトリエｌ−キシシラノ、Ｔ−りτコロブロビルトリメ
トギシシラン、ビニルトリエ］・キシシラノ、Ｔ −グ
リシドキシグロピルトリメトキシシラノ、Ｎ−β−（ア
ミノエチル）−７−アミノプロビルトリメトギンシラン
等が使用される。かようなシラノカップリング剤との反
応は、当該分野で公知の条ｆｌ下で行なわＪＬる。例え
ばＴ−アミノプロピルトリーＩ−トキシシンンを用い／
（」助合、とのカップリング剤を水に溶カイして１〜ｌ
Ｏｗｊ％水７′（ｉ液、好ましくｔま２ｗＬ％水溶液と
しかつｐＨを３〜５に調整した後、この溶液を前記チュ
ーブ内にｔ］二人し加温下数時間接触させた後、水洗し
て未反工Ｌ・のカップリング剤を除去することによりイ
ＵらノＬる。かようなシューブはυｆ−来のガラスコル
ティノブチューフレこルしｔ内面に多くのカップ１コ／
グ基を有しでいる。
このようにして処理さね７だチューブ内面に公知の方法
で酵素、抗ｊケ、抗体等のペプチド含有化合物が固定化
される。例えば、カップリング剤とし−Ｕ Ｔ−アミノ
ブ「１ピルトリエトキシシランを用いＬ’ｒミノ′ｒル
ギル基を水酸基にニスフル結合で多（（２Ｎ・大したゲ
ル体被覆チｊ−−ブを用いる場合、」−記°ｊミノ°ｒ
ルギル基にグルタルアルデヒドを用い′じ１ルラ′ヒト
基をイｊず２〕ンツフベースを導入し、これにｒ；チ素
等を接触さＩｉ又アルデヒド基と酵素等のアミノ基間で
さらしこシッフベースを形成させ一〇結合することによ
り固定化を行なうことができ、これ以外にもアミノアル
ギル基をジｊ′ゾ化して芳−１族−１ミノ基を導入しこ
ｉシ＆こ酵素等を固定化し一〇もよく、またカルボジイ
ミドを用いてアミノアルギル基と酵ぶ等との間に直接ペ
グノー１゛結合を行ない固定化を行なってもよく酵素等
の抽類しこ応じで適宜選択すり、ぼよい。仙のカップリ
ング剤使用時しこも同様に直接又は適宜変換したカツノ
°す／グ基によって酵素等を固定化することができる。
で酵素、抗ｊケ、抗体等のペプチド含有化合物が固定化
される。例えば、カップリング剤とし−Ｕ Ｔ−アミノ
ブ「１ピルトリエトキシシランを用いＬ’ｒミノ′ｒル
ギル基を水酸基にニスフル結合で多（（２Ｎ・大したゲ
ル体被覆チｊ−−ブを用いる場合、」−記°ｊミノ°ｒ
ルギル基にグルタルアルデヒドを用い′じ１ルラ′ヒト
基をイｊず２〕ンツフベースを導入し、これにｒ；チ素
等を接触さＩｉ又アルデヒド基と酵素等のアミノ基間で
さらしこシッフベースを形成させ一〇結合することによ
り固定化を行なうことができ、これ以外にもアミノアル
ギル基をジｊ′ゾ化して芳−１族−１ミノ基を導入しこ
ｉシ＆こ酵素等を固定化し一〇もよく、またカルボジイ
ミドを用いてアミノアルギル基と酵ぶ等との間に直接ペ
グノー１゛結合を行ない固定化を行なってもよく酵素等
の抽類しこ応じで適宜選択すり、ぼよい。仙のカップリ
ング剤使用時しこも同様に直接又は適宜変換したカツノ
°す／グ基によって酵素等を固定化することができる。
固定化用の１；ＩＦ素としでは具体的にはグルコースメ
キシダーゼ、ウリカーゼ、ウレアーゼ、タレアチニナー
ゼ、ＣｏＡ−シ／デターゼ、ＣｏＡ−オキシダーゼ、コ
レステロールメキシターゼ、コレステ【１−ルヒドロラ
ーゼ等が挙げられるが限定されることはなく 、 Ｊ＞
’＋：原や抗体を固定化することもできる。
キシダーゼ、ウリカーゼ、ウレアーゼ、タレアチニナー
ゼ、ＣｏＡ−シ／デターゼ、ＣｏＡ−オキシダーゼ、コ
レステロールメキシターゼ、コレステ【１−ルヒドロラ
ーゼ等が挙げられるが限定されることはなく 、 Ｊ＞
’＋：原や抗体を固定化することもできる。
なお、この発明に用いるチューブとして目１、ガスクロ
マトグラフ、（１１体クロマトグラフ等の分野や各１１
［（診断用、合成用のカラム用チューブが適用でき、キ
ャピラリーカラム等の細管を用いることもできる。そし
てその月質としては、金属、ガラス、セラミックス、グ
ラスチック等のいず〕Ｌでもよく、通常ガラスが適当で
ある。
マトグラフ、（１１体クロマトグラフ等の分野や各１１
［（診断用、合成用のカラム用チューブが適用でき、キ
ャピラリーカラム等の細管を用いることもできる。そし
てその月質としては、金属、ガラス、セラミックス、グ
ラスチック等のいず〕Ｌでもよく、通常ガラスが適当で
ある。
このようにして得られたこの発明の固定化ガラスコーデ
ィングチューブは従来の固定化ガラスコーティングチュ
ーブに比して酵素等の固定Ｊａは増大されて」？す、種
々の分野でバイオリアクターとして有用であり、クロマ
トグラフ用カラムとしても有用である。
ィングチューブは従来の固定化ガラスコーティングチュ
ーブに比して酵素等の固定Ｊａは増大されて」？す、種
々の分野でバイオリアクターとして有用であり、クロマ
トグラフ用カラムとしても有用である。
さらにこの発明リコーーノ「／グチ：Ｌ−ノの製攬（１
ｉｈ ＆こよｈ−げ、 ｊ烏ｌ席カ１ｊ声八処」甲を？
ｊな う こ占な 〈 シー、ユーブ内に４１１休を？
ＪＩｉ、覆でき、さらに固定化に当って水酸基を導入す
る工程を必；２２としない〆こめ従来に比しｔ犬１１す
、〜しこ二１ストをＩＩ朧威できる。−Ｌ−レ’−／ｉ
’ｉ ’／ｆ’ｉ−を用いるため仙１り７等の内面にも
１７ｉｊ便に１１１°Ｕでき（愼め°ｔ ？Ｗいコーデ
ィングも’Ｊ’ ｆｉＨである。−Ｌ−Ｌ−口（１ら］
した固定化ガラス：１−１（ノブチューブも従来に比し
て活性が高くイｊ利である。
ｉｈ ＆こよｈ−げ、 ｊ烏ｌ席カ１ｊ声八処」甲を？
ｊな う こ占な 〈 シー、ユーブ内に４１１休を？
ＪＩｉ、覆でき、さらに固定化に当って水酸基を導入す
る工程を必；２２としない〆こめ従来に比しｔ犬１１す
、〜しこ二１ストをＩＩ朧威できる。−Ｌ−レ’−／ｉ
’ｉ ’／ｆ’ｉ−を用いるため仙１り７等の内面にも
１７ｉｊ便に１１１°Ｕでき（愼め°ｔ ？Ｗいコーデ
ィングも’Ｊ’ ｆｉＨである。−Ｌ−Ｌ−口（１ら］
した固定化ガラス：１−１（ノブチューブも従来に比し
て活性が高くイｊ利である。
以ト−１この発明を参考ｆｋｌｌに１つ−し説明する。
参考例１．（ゲル状物の作製）
テトラエトキシシラノ５ｉ（ＯＣ２１１５）４ ｌ
０９エタノールＩ ＯＪ 、水３．８４及び塩酸〔ＩＮ
〕１、４−ｅ （７）ｉ）１５合物（ｐａｌ２ ） ’
ｆ＋Ｔ室（１，Ａ ”ｔ′均一１ｃ ｆｌるまで約１１
Ｌ’Ｊ’間ＩＪ■拌混合した。この混合物全空気中に約
４［１開放１ｃｃしｔカ１１水分ブデｆと水及びエタノ
ールの蒸発を進め、約１２ （１℃で乾燥させ−ＣＳｉ
（０１１）４糸のゲル状物を得た。
０９エタノールＩ ＯＪ 、水３．８４及び塩酸〔ＩＮ
〕１、４−ｅ （７）ｉ）１５合物（ｐａｌ２ ） ’
ｆ＋Ｔ室（１，Ａ ”ｔ′均一１ｃ ｆｌるまで約１１
Ｌ’Ｊ’間ＩＪ■拌混合した。この混合物全空気中に約
４［１開放１ｃｃしｔカ１１水分ブデｆと水及びエタノ
ールの蒸発を進め、約１２ （１℃で乾燥させ−ＣＳｉ
（０１１）４糸のゲル状物を得た。
（アミノ“ｒルキル化）
イ！Ｉられたゲル状物を乳鉢で１；）砕し、ふるいをＪ
４して平均粒匝６０／、８０／Ｉ２ｏ、 ／２００の
ビ２０ ０ 一ズをイ（Ｉだ。
４して平均粒匝６０／、８０／Ｉ２ｏ、 ／２００の
ビ２０ ０ 一ズをイ（Ｉだ。
５ ｗｔ％の′ｒ−アミノグロビルトリエトキシシラン
水溶液を５Ｎ塩酸でｐＨ３，５に調整（７、この溶液４
５Ｊに対し、上記ビーズ状ゲル状物を各々５ｙ投入し、
さらにｐＨ８，５になるように調整した。この混合物を
、撹拌機、ｔｈＬＩｏｌｒｔｌ、ジムロートを付設した
四ツ目フラスコに入れつＡ−ターバスで温度を７５℃に
保ち、激しく１貨１打させながら３時間反応を行なった
。反応終了後、ビーズを吸引、メンブランフィルタ−に
移し、１ｅの蒸留水で未反応のＴ−アミノグロビルトリ
エトギシシランを除去した後、デシグーターで乾燥させ
て粒径の異なる三棟の゛アミノアルキル化ゲル状物をイ
ＩＪだ。このアミノアルギル化ゲル状物ｔよデシクー−
ター内で保存する。
水溶液を５Ｎ塩酸でｐＨ３，５に調整（７、この溶液４
５Ｊに対し、上記ビーズ状ゲル状物を各々５ｙ投入し、
さらにｐＨ８，５になるように調整した。この混合物を
、撹拌機、ｔｈＬＩｏｌｒｔｌ、ジムロートを付設した
四ツ目フラスコに入れつＡ−ターバスで温度を７５℃に
保ち、激しく１貨１打させながら３時間反応を行なった
。反応終了後、ビーズを吸引、メンブランフィルタ−に
移し、１ｅの蒸留水で未反応のＴ−アミノグロビルトリ
エトギシシランを除去した後、デシグーターで乾燥させ
て粒径の異なる三棟の゛アミノアルキル化ゲル状物をイ
ＩＪだ。このアミノアルギル化ゲル状物ｔよデシクー−
ター内で保存する。
（酵素の固定化）
上記アミノ−ｒルキル化ゲル状′吻（ビーズ状）を名々
二官ｆｉｔ′、Ｉ牛のグルタル“１ルブヒド（２，ｆｉ
ｗｔ％）ｔｙ） ！Ｊ ン酸Ｊ４１＆ｔ＞ｆｔ１ｉＪ溶
？ＩＶ （１）ＩＩ ７． （１） ｋｔ［（Ｊ’／
Ｌ、−ｒスビレータ−で減圧させつつ約８０分（１゛Ｌ
拌１゛反応ネーｔＩ−た。続いＵさらに約ｉｔ Ｏ分′
畠ＬＩ：で撹Ｊｆ、ト反応さす／ζ。反応温度ｆ」、２
５℃であった。こ］］、をＯＩＩ ７．０のリン酸Ｊ、
ＩＫ緩衝液で充づ）にｂＩゴｒＣＬ、乾燥させた。
二官ｆｉｔ′、Ｉ牛のグルタル“１ルブヒド（２，ｆｉ
ｗｔ％）ｔｙ） ！Ｊ ン酸Ｊ４１＆ｔ＞ｆｔ１ｉＪ溶
？ＩＶ （１）ＩＩ ７． （１） ｋｔ［（Ｊ’／
Ｌ、−ｒスビレータ−で減圧させつつ約８０分（１゛Ｌ
拌１゛反応ネーｔＩ−た。続いＵさらに約ｉｔ Ｏ分′
畠ＬＩ：で撹Ｊｆ、ト反応さす／ζ。反応温度ｆ」、２
５℃であった。こ］］、をＯＩＩ ７．０のリン酸Ｊ、
ＩＫ緩衝液で充づ）にｂＩゴｒＣＬ、乾燥させた。
この処理によりゲル状物の１ルデヒド基を有するシッフ
ベースが導入さノしる。
ベースが導入さノしる。
イＵられたゲル状物をＩ＝ｆ！７−ｇ （グルコース調
キシターゼ／ ｐＨ７，Ｏリン「１２塩緩辿ｉ’／ｊＥ
）中に浸でｔ’ｊ Ｌ、２５℃］・まず８０分減圧トで
緩やかに１１１．拌しく反応を行ない、続いて６０分’
；１ｔｌｌ二’）で緩かにｌｒ／、拌して１−１１定化
反応を行ｑ−Ｚ）た。この処４Ｈ（ｊによりグルコース
オキシダーゼのアミン基が反応に１４Ｗ与し、相体（ゲ
ル状物）のアルデヒド基と宴うにシッフペースを形成（
７固定化される。このようにしてこの発明のグルコース
オギシダーゼ固定化ゲル状物（ガラス）が各々得られた
。
キシターゼ／ ｐＨ７，Ｏリン「１２塩緩辿ｉ’／ｊＥ
）中に浸でｔ’ｊ Ｌ、２５℃］・まず８０分減圧トで
緩やかに１１１．拌しく反応を行ない、続いて６０分’
；１ｔｌｌ二’）で緩かにｌｒ／、拌して１−１１定化
反応を行ｑ−Ｚ）た。この処４Ｈ（ｊによりグルコース
オキシダーゼのアミン基が反応に１４Ｗ与し、相体（ゲ
ル状物）のアルデヒド基と宴うにシッフペースを形成（
７固定化される。このようにしてこの発明のグルコース
オギシダーゼ固定化ゲル状物（ガラス）が各々得られた
。
（活性試験）
上記（Ｉ−・１定化ガラスピーズのうち２００メツシユ
のものの固定化度合を従来と比較するためボルタメント
ｌ）−法により活性試験を行なった。まず、１ｗｔ％の
β−Ｄグルコース溶液＜ ｐａｌ ７．０リン酸塩緩イ
ｌｌ１ｊ液） ｌ （１−ｇを、上記この発明の固定化
ガラスピーズ！ｉを入れたビーカーに注入し＋５分間緩
かに撹拌しで反応させ、反応液から９ｍｅを採取し’Ｕ
５％ヨウ化カリウム溶液１ ｍ（ｌを添加した。
のものの固定化度合を従来と比較するためボルタメント
ｌ）−法により活性試験を行なった。まず、１ｗｔ％の
β−Ｄグルコース溶液＜ ｐａｌ ７．０リン酸塩緩イ
ｌｌ１ｊ液） ｌ （１−ｇを、上記この発明の固定化
ガラスピーズ！ｉを入れたビーカーに注入し＋５分間緩
かに撹拌しで反応させ、反応液から９ｍｅを採取し’Ｕ
５％ヨウ化カリウム溶液１ ｍ（ｌを添加した。
この］・■作により、酵素反応により発生した過酸化水
素でＩ−が１．２（ａ（１）に酸化される。この■２を
ポルタンメトリー法により還元し、還元波を測定するこ
とにより１２員が定量でき、ひいでは固定化ガラスピー
ズにおける酵素の固定化のイー゛一度すなわち活性の程
度がわかる。
素でＩ−が１．２（ａ（１）に酸化される。この■２を
ポルタンメトリー法により還元し、還元波を測定するこ
とにより１２員が定量でき、ひいでは固定化ガラスピー
ズにおける酵素の固定化のイー゛一度すなわち活性の程
度がわかる。
従来のガラスを１ｊ１体として前記と同様にして得た固
定化カラスビーズとこの発明の固定化ガラスピーズとの
ポルタンメトリー法による結果を表１ｅこ示す。
定化カラスビーズとこの発明の固定化ガラスピーズとの
ポルタンメトリー法による結果を表１ｅこ示す。
表 １
※０．５８ ＶＳＮＩＩＥ −Ｃ還元ｈｔ、流Ｑよフ゛
ラック値を差し引いたもめであり、’ｊｌｔＧｔ走査速
度２走査速度２０心Ｖ掬 、のようにこの発明のチューフ゛内ｋｃネ皮横さノした
固定化ガラスは従来のガラスを担イ本とするものしこ比
して明らかに酊、ｉ！＜活性が高いことカー１１Ｊる。
ラック値を差し引いたもめであり、’ｊｌｔＧｔ走査速
度２走査速度２０心Ｖ掬 、のようにこの発明のチューフ゛内ｋｃネ皮横さノした
固定化ガラスは従来のガラスを担イ本とするものしこ比
して明らかに酊、ｉ！＜活性が高いことカー１１Ｊる。
４１９−
Claims (2)
- （１） チューブ内面に被覆する１ｂｊ定化川Ｊ用１
体として、金属アルコキシドの〃１１水分解で生成する
水酸化金属化合物及び／又は七の縮合物からなるガラス
様ゲル体を用い′［なるベノ゛チド含有化合物の固定化
ガラスコーディングチューブ。 - （２）全組アルコキシドの一４ｉ１ｉ又はニオ１ム以」
二を含−（４するｆｆＩ液をチューブ内面に扱覆し、金
車４アルコキシドを加水分解１〜でガラス様ゲル体の被
覆層を形成し、こ）１［アミン基、チメール基、エボギ
シ基なとのば能性基を有するンラ／カップリング剤を反
応きせ、−（の反応体にベグチド含７ｆｊ化合物を固定
化することを行値とする固定化ガラスコーディングチュ
ーブの製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57134309A JPS5925688A (ja) | 1982-07-31 | 1982-07-31 | 固定化ガラスコ−テイングチユ−ブ及びその製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP57134309A JPS5925688A (ja) | 1982-07-31 | 1982-07-31 | 固定化ガラスコ−テイングチユ−ブ及びその製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5925688A true JPS5925688A (ja) | 1984-02-09 |
| JPH0372274B2 JPH0372274B2 (ja) | 1991-11-18 |
Family
ID=15125277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP57134309A Granted JPS5925688A (ja) | 1982-07-31 | 1982-07-31 | 固定化ガラスコ−テイングチユ−ブ及びその製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5925688A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012001241A1 (en) * | 2010-07-02 | 2012-01-05 | Oulun Yliopisto | Functionalized films, sensory films, biosensors and methods for manufacturing them |
-
1982
- 1982-07-31 JP JP57134309A patent/JPS5925688A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012001241A1 (en) * | 2010-07-02 | 2012-01-05 | Oulun Yliopisto | Functionalized films, sensory films, biosensors and methods for manufacturing them |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0372274B2 (ja) | 1991-11-18 |
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