JPS5927829A - 抗腫瘍性物質及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は貝類の煮汁の乾燥粉末又は１１１霜縮物から得
た水溶性含糖蛋白質からなる抗腫瘍剤とその製造法に関
する。

従来の抗腫瘍性物質は大部分が低分子化合物であり、癌
細胞に対する直接細胞ｌＪｙ性が主な作用であり、宿主
である生体に対する一般１；Ｊ性が強く・生体の受ける
障害が大きいとい’）　ｌ１ｔｌ　ｊＷｌがｋ）る。そ
のため分子量が比較的高く毒性の低い、しかも免疫賦活
作用を持った抗腫）う他物ＩＪ１である多糖に）１力。

どな植物、微生物等から抽出して粗粉末の形で使用しで
いるが、抗癌スペクトルが狭く臨床的な利用に限界があ
る。

貝１：ｒｉから抗腫瘍性物ヂｆがイ１）られることは特
公昭５７−８０８８号、特開昭５４−４１３１４号及び
同５４−４１３１５号公報に報告されている。

これらの物的公報に開示されている抗腫瘍性物質の製造
は、（１）生の貝類を原料とし、これをその１甘もしく
に１．加熱して貝殻を除去し、（２）肝臓部分を除去し
％　ｆ３１（Ｑられた除肝臓肉を低温伯件下において水
、塩水溶液等の水性溶媒中においてブレンダー等で細断
、磨砕し、あるいはさらに超音波処理等の物理的１ｌｔ
ｉ撃を加え均質化して抽出を行ない、抗１］ｉＴ！瘍性
物質が當湛以下の冷水に可溶化し易いようにし、（４）
生成混合物から遠心分離等によりＡ（１１断された肉等
の水不溶性物質を除却し、（５）この、しうにして得ら
れた抽出液を透析、限外１過、り°ル１）Ｉ過、カラム
クロマトグラフィー等公知のイ１シ白グ！ｔ　（′１重
質分離８製手段で精製して目的とする抗））・０瘍）ツ
１：物質を得るものである。貝ぬ１からイ１ｔられろこ
のＪノ“１゜ルｎ瘍性物質は抗癌スペクトルが広く、そ
の≧１１穫効も強い点で注目に値する。しかしながら上
［；己し７た製造法では、食用どじで利用価値のある高
価な貝類の肉部分を原Ｆｌとしこれをπ１１１断、’ｙ
、）　Ｒ’（し、てし１わなけれＩＸならないうえに、
有効成分の抽出操作が煩雑であり、ＩＩｊＵ−理した細
断肉片のｂ′ｌＳ棄にも問題がル）ろ等工栗的に不利で
あり、活性物質を多′ｌｌｊ′ｉに確保するのにはａｉ
ｔ点があった。

本発明者等は貝ジ頂から得られる抗腫瘍性物質の抗癌ス
ペクトルが広いことに着目して貝Ｏ：１から抗１１ｉ１
ｊ　ＳＩ５性物他物を工恭的有利に得るべく研究なＶ（
み重ねた結果、従来廃物として棄てられていた貝類の煮
汁から・ずｌわち従来食用として貝類を蒸煮もしくは加
熱加工する際副生し、河川を汚染する壱機成分な多ｉ％
に含むためその亮棄に多大の費用を要しでいた貝類の煮
汁から抗ｊ匝瘍剤が得られることを見出し、さらにこの
有効成分＆ｉ塩基ｔ１−陰イオン交換体に吸着きれる分
子量：　１０．０００〜３００．０００のｆｌｉｉΣ囲
内の水溶性含糖蛋白質であることを発見して本発明を完
成し７た。

本発明の主たる目的は貝類の煮汁から抗１１：ｌ’ｉ瘍
ｔ’Ｊ物質を取イＩすする方法を提供することにある。

本発明の他の目的ｔ」、貝Ｍの煮汁から効嶌よく新規な
抗腫瘍性物質を取得する方法を提供するにある。本発明
のさらに他の目的は新規な抗腫）ｑ剤を提供することに
ある。

すなわち本発明の要旨は、貝類の可食部分をｎｊ〜水性
溶繰で蒸煮もしくは加熱加工する際に得られる煮汁の乾
燥粉末もしくは儂縮物を原料とし、これを塩基性陰イオ
ン交換体を使用するイオン′ｙＳ換クロマトグラフィー
及びダルｐ過ケ゛ルを用いるり゛ルｐ過に付して分子ｉ
　１０．０００〜３００．０００　　の範囲内の水溶性
含糖蛋白質からなる抗腫瘍性物質を分取することを特徴
とする抗１１１【瘍剤の製造法にあ広またかく得られる
水溶性含糖蛋白質性物質からなる抗腫瘍剤にある。

添付図面の第１図、第２図＆Ｊ、ホタテ只の煮汁から得
られる水溶液を塩基性陰イオンダｊ（′！体を使用して
イオン交換クロマトグラフィー処」、１．１！　ｌ、、
て１へイオン交換体に吸着された物質を塩化ナトリウム
水溶液で溶出した場合の溶出／臂ターンの結果を示し、
４Ｍ　１１＋　Ｉｔよ溶出液の両分ナンバーを表わし、
白丸は各両分の糖の含有）πの指標、すなわちフェノー
ル硫酸法で発色させ、その４９０　ｎｍ　波長の吸光度
（光学密度）を、黒丸は各両分のイＩＴ白質の含有量の
指標すなわちロウリー（Ｌｏｗｒｙ　）法で発色させ、
その７５０　ｎｍ　波長の吸光度（光学密１（ｉｉ　）
を表わす。第３図は上記のようにしてイオン文担Ｓクロ
ー丁トゲラフイーから溶出分離した第１図のＣ両分を分
子ｒｆｌが１．５００〜１００．０００の中に分画範囲
を持つり゛ルｐ：ｉ１１用ケ°ルでケ°ルｐ過した場冶
の結、！１１を示し、横軸は溶出液の画分ナンバーを表
わし、白丸及び黒丸は第１図、第２図と同じくそれぞれ
各両分の糖含有量及び蛋白質含有量の指標を表わす０第
４図・１′！５図は第３図のようにｒルυコ過にイ・」
シ、その後さらに分子ｉ　３００．０００を超える両分
をり゛°ルｖｉ過により除去した後に得られる分子用１
０　、０００〜３００・０００の水溶性含糖蛋白質物質
の紫外線吸収スペクトル図及び赤外線吸収スペクトル図
をそれぞれ表わす。

本発明でＷ、ネ：１とする貝類の煮汁は、牛久Ｖよ加熱
した貝類の可食部分を熱水性溶媒液又は蒸気で蒸煮もし
くは加熱加二［シて食用貝肉を得る際に副生する煮汁又
は液汁を包含する。貝類を蒸煮もしくは加熱加工する加
熱媒体として使用し得る熱水性溶媒は熱水蒸気、熱水で
も、他の熱水性溶媒蒸気あるいは熱水性溶媒液でもよい
。

貝類は狭錠には軟体動物門（Ｐｈｙｌｕｍ　Ｍｏｌｌｕ
ｇｃｎ）のうちで体を貝からでおおっている種類をいう
が、本発明において使用する用語“貝類”ｔま軟体動物
と同意語として用いられる広義の貝類、すなわち海洋及
び淡水産を含めて広く軟体動物を表わすものとする。

本発明に使用される貝類としてはすべての広義の貝類が
包含され、腹足網（Ｃ１ａｓｓ　Ｇａ１Ｉｔｒｏｐｏｄ
ａ）Ｋｆｉする前さい亜網（５ｕｂｃｌｎｓｎＰｒｏｎ
ｏｂｒｎｎｃｈｌｎ）のアワビ、サザエ等が妨する原始
＋１＋ｙ−カニ、　１．１　（０ｒｄｅ　ｒＡｒａｈｎ
ｅｏｇａｌｒｏｐｏｄａ　）、タニシ、カソニナ、ツメ
タガ・ｆ等が属する中腹星目（０ｒｄｅｒ　ＭｅｎｏＨ
ｎｎｔｒｏ−ｐｏｄｎ　）＊　　パイ等が栴する新ｎ１
足［１（０ｒｄｅｒ　Ｎｅ−ｏＨａｓｔｒｏｐｏｄａ　
）、斧足１’Ｑ　（Ｃ１ａｎＩＩＰｏｌｅｃｙｐｏｄａ
　）、原縛亜１ｆｌＪ　（５ｕｂｃｌａｓｓ　Ｐｒｏｔ
ｏｂｒａｎａｂｉｎ　）　　のザルボウガイ、アカガイ
の槓する真多歯１］　（Ｏｒ＋Ｉｅｒ　Ｅｕ−ｔａｘｏ
ｄｏｎｔｎ　）、イタヤガイ、ホタテガイ、アコヤガイ
、イ〃イ、タイラギの屈する貧歯目（ＯｒｄｅｒＤ）ｓ
ｏｄｏｎｔａ　）、真弁鰐亜１ｆｉ３　（５ｕｂｃｌｉ
ｓｓ　ＥｎＪｎｍｏト目ｂｒｎｎｃｈｌａ　）　　のカ
ラスガイ、ドブガイが日する古異歯目（０ｒｄｅｒ　Ｐ
ａ１ｅｏｈｅｔｅｒｏｄｏｎｔａ　）、　シジミガイ、
ハマグリ、アサリ、ジオフキ、バカ〃イーマデガイが属
する異歯目（０ｒｄｅｒ　ＪｌｅｔａｒｏｄｏｎｔＡ）
。

頭足網（ＣＩ＋ｓｓｓ　ＣＱｐｂａｌｏｐｏｄａ　）、
二さい亜網（Ｓｕｂｏｌａｓｓ　Ｄｌｂｒａｎｅｈｌａ
ｔａ　）のマダコ、イイダコが６するへ腕目（０ｒｄｅ
ｒ　０ｃｔｏｐｏｄａ　）、　コウィヵロヤリイカ、ホ
タルイカ、スルメイカが１１する十腕目（０ｒｄｅｒ　
Ｄｅｅａｐｏｄａ　）　等が広く用いられるが、その中
、生産量等の点から、アワビ（）（：ａｌｉｏｔｌｓｄ
ｌｓｃ＋＋８）の属ずろミミガイ科（）Ｉｎｌｌｏｔｉ
ｄａｇ　）の貝８１、チョウ七ンサザエ（Ｍａｒｍａｒ
ｏｓｔｏ＋ｎａ　Ａｒｇ−ｙｒｏｓｔｏｍＡ）、　タツ
マキザザエ（Ｔｎｒｂｏ　Ｐｅｔｈｏｌ　−ヤガイ利（
Ｐ＠ｃｔｌｎｉｄａｏ　）、　アザリ（Ｔｎｐｅｓ　ｐ
ｉ＋−ＹＴＤＳ　）の日するマルスダレガイ科（Ｖｅｎ
ｏｒｌｄａｅ　）の貝類が特に好丑しく用いられるが、
勿論これらのみに限定されるものではなく、広く貝類の
うちの本発明の意図する抗腫瘍性物質を含イ］しでいろ
貝類を原料として用いることができる。

本発明者等は広く貝類について本発明の物ｙ↓の存在を
確認しているが、以下に特に量的に入手しやすい、 ザザエ（Ｂｎ目１１ｕｓ　ｃｏｒｎｕｔｕ霞）について
詳しく説明する。

本発明で原料として使用する煮汁を（Ｕる工；１１１Ｉ
ｔ二１、貝類を熱水性溶媒で蒸煮もしくは加熱加工して
千０可食部分を採ηゾする工程に該当Ｌ２、この目的の
ために従来慣用の任λｉの方法で行なうことができる。

勿論、本発明においては、煮汁を利用してこれから抗腫
瘍剤有効成分、すなわら分子Ｆｉｌ：　ｌ　０　、００
０〜３００．０００の範囲内の水溶性含糖イ１そｎＰｉ
件抗Ｊｌｉｆｉ　５１’ｉＳ性物質（以下単に有効成分
という）をＪ′だＪしずろものであるから、貝類の可食
部分を採取する本来の目的を」ｊｉなうことなく、しか
も有効成分を効果的に取イ！Ｊできるように該蒸煮もし
くは加熱加工工程を制御することが重要である。よって
以下ではか＼る氷見り」の目的を好１しく達成し得る熱
水性溶媒による蒸煮もしくｔま加熱加工工程の実施た（
１様１コついて煮汁の採取を中心として説す」する。

共力１を熱水性溶媒で蒸煮、加熱加工しで町食部分を採
取しかつ有効成分を含有する煮汁を得ろ蒸煮加熱加工工
程の操作は、熱水性溶媒蒸気又は熱水性溶媒液を加グへ
媒体兼抽出溶媒としで使用し・貝類に熱水性溶媒蒸気及
び／又は熱水性溶媒液を接触させて煮汁を得る操作を一
回又は二回以上行なう方法が採用される。貝類と熱水性
溶４１４との接触方法は、貝類に熱水性溶媒蒸気を直接
当てる方法、貝類に熱水性溶媒液を直接注ぎかける方法
、あるいは貝類を熱水性溶媒液中に浸漬して加熱する方
法等がある。熱水性溶媒蒸気と熱水性溶媒液は一方だけ
を使用しても、両者を同時に使用してもよい。本発明の
目的のためには、処理する貝類の殻や肝ｊ以は除いても
除かなくてもよく、また貝の肉部分は細断したシ、磨砕
、破砕あるいは粉砕したルする必・要がないので、蒸煮
加熱処理後は全量食用に供することができる。蒸煮加熱
の温度条件は約５０〜１２０°Ｃ１特に６０〜＋　２０
０Ｃが好ましい。煮汁を得る操作は一回だけでも、三回
以上行なってもよいが、通常は二回に分けて行なうのが
好ましく、又特１ｃ２回目は０・２〜２０俤の食塩を含
む熱水を用いるのが好ましい。−回だり行なう場合には
生の貝に熱水性溶媒蒸気な偵接吹きつける方法、生の貝
類に熱水性溶媒液をｉｒｉ接注ぎかりる方法、あるいｔ
ｊ、生の貝ぬｉな熱水（・（１溶媒液中に浸漬して加熱
する方法によりイｊ効成分をいわゆる一拓煮汁どしてイ
！Ｊる方法が採用でき、二回に分り”Ｃ行なう場合には
上記の方法で一番煮汁を採をした後、加熱した貝類を食
塩を含む熱水１／Ｉ：溶媒液中に：浸ｆｆｔ　Ｌ、て加
熱する方法によシ有効成分をいわゆる二箱煮汁として得
る方法が好′！）Ｌい。−回だり処■ｉする場合の好貫
しい処理条件を第１３’、Ｅに１どめて示す。また二回
に分りて処理を行ｉ４う場合の好ましい処理条件を第２
表にまとめて示す。上記した方法のうち蒸煮加熱処理を
二回に分りて行なうのが好ましく、その場合第一回の処
理を熱水性溶媒蒸気を使用しイｊ効成分を一番煮汁とし
て採取し、次いで加熱した貝肉を食塩を含も帽！シ水性
溶媒液と接触させて鳴動成分を二番煮汁とし°〔採取す
る方法は熱水性溶媒の使用量が少なく抗腫瘍性物質の抽
出効果も良く、目的とする煮汁の濃縮が簡単であること
・加熱効惠がよいこと、設備が簡単でよいことから最も
好ましい方法である。

共裏［１からイ〕効成分を効果的に採取するには前述の
ごとく熱水ＰＪＥ、沼ＩＬｌ／；による蒸煮加熱処理の
温度会件に留意すべきであり、好ましい蒸煮加熱温度は
約５０〜１２０°Ｃである。低温すぎると有効成分が効
率良く採取できないし、高温すぎると有効成分が破廉さ
れる。処理時の系の圧力は減圧、常圧、加圧のいずれで
もよい。貝類と熱水性溶媒との接／！ｌ！１１時間は低
温灸件下では畏くし、高ｆｆ１ｉｌ糸ｆ’ｌ二下では短
かくてよい。処理する貝の′１に対する熱水性溶媒の使
用１ｊ１は、少なずき゛ると有効成分の採取効ボが悪く
な−リ、多すぎるとその後の０縮操作が煩雑になる。蒸
煮加熱加エエ稈で使用する水性溶媒の例としでしＬ水、
食塩水、海水、その他各１ｐ水溶性塩頷の水溶液、緩衝
液（塩など添加物質の濃度は約０・５〜２０重月係程度
が好凍しい）、水溶性溶剤、例えばエタノールのような
低級アルコール類の水溶液（溶剤濃度は約１〜５０重−
ｊ？！：チ程度が好ましい）などがあシ、好ましい水性
溶媒は水又は食塩水である。

こうして得られた一番煮汁、二番煮汁等の煮汁中にはい
ずれも有効成分が含凍れるので、このまま、あるいは約
３０〜１００°Ｃ千ｒｌ　１１’のｌ！ｉｉ冒（〔で加
熱ｇ％縮したり、透析や限外ｒ過処：ｌｌｉにより脱塩
（また９、あるいは熱風搬送型乾燥法、凍に１’ｉ乾燥
法等によシ粉末にして抗腫瘍剤として使用し、ても、し
い、。

熱風搬送型乾燥法により煮汁からイ１効成分を粉末とし
て得る場合、乾燥器への熱風人口〃１Ａ度は約２００〜
３５０°Ｃ５特忙約２５０〜３１０°Ｃが好ましく、熱
風出口温度しＬ約８０〜１７０°Ｇ　、　／ｌ’５−に
約（００〜１５０℃が好寸しく、４２【触（ｆ；１ン留
）時間は約５〜８０秒、特に約５〜５０秒が好゛ましｂ
ｏこのような東件下では有効成分が破Ｊ％されることは
ない。

本発明においては、かく得られる貝り：１°１煮汁の乾
燥粉末又は儂縮物から有効成分を分１１１［、［１：取
Ｉ７て抗腫瘍剤として使用するものであるが、本発明者
らは工朶的に多Ｂ′生産に使用し得に）抗１１１１ｔ瘍
剤の分離・精製法について種々検討した結果、最も効率
的に抗腫瘍性を損うことなくしかも経済的に１１７製で
きる方法として本発明の方法を完成した。分子）ハ＋　
ｏ　、　ｏｏｏ〜３００　、０００　　の範囲内の水溶
性含糖蛋白Ｔ（からなる本発明の抗腫瘍剤を製造する好
づ・しい方法に、貝類の煮汁の乾燥粉末またはθ縮物な
水溶液どし、この水溶液を塩基性陰イオン交換体を使用
するイオン交換クロマトグラフィーおよびグルＶゴ適用
ケ゛ルを用いるケ°ルい過にイ・１して塩基性陰イオン
交換体に吸箔される分子月ＩＱ、０００〜３００，００
０の範囲の両分を取イ１）することからなる。イオン交
換クロマトグラフィーによる処理は分子Ｊ？ｌ：１０，
０００〜３００．０００の両分を分離取得するグル濾過
処理の後で行なってもよいが、ダル濾過処理の前に行な
うのが１′イに好ましい。イオン交換クロマ］・グラフ
ィーによる処理によ７−いて塩基性陰イオン交換体に′
吸着さ、Ｉｔた水溶性含糖蛋白質は約０・０７〜０・４
・ｅル儂度、好適には約０・１〜０・３８モル濃度、最
適にし１、約０・１〜０・３モル濃度の塩化ナトリウム
を含有する水溶液を溶出剤として用いることが望せしい
。またイオン交換クロマトグラフィー及びグル濾過処理
に先立って貝類の煮汁から得られる水溶液から不溶解部
を除去しておくことが望咬しく、址だ無機塩も除去して
おかないどイー４ン父Ｊ９．り「Ｊマドグラフィーやグ
ル濾過処理が円、”ｊｊに行なわれない。以下これら工
程の詳細についで述べる・また得られた物の抗腫瘍活性
の検定方法Ｑ１．特記し７ない限り次の方法で行なった
。

抗ルｎ瘍活性の検定方法 ６週令のマウス（ｒｃｒ（基部：）腹腔内に→ノー　ル
ｒ　−マ（Ｓａｒｃｏｍａ　）　ｌ　８０腫瘍卸１胞を
接併し、ｌ　；１１Ｍ間後に増殖した腫瘍細胞を腹水と
共に抜き取り、この細胞４×１０　個を他の６週令マウ
ス（ＩＣＲ系ｄ１１１ｉ　）のそけい部皮下に移植する
。１週間後円形＋＋ｑｉｊｇＪが形成されていることを
確認して、（ｉ；↓定試才１をその腫瘍内もしくはその
周囲に＃植後、５・　７・９　Ｅｌ目に隔日３回投与す
る。＋＋ｉ＋；瘍移槙５　：１ｌ−ｄ　Ｉｆｉ、ｌ後の
固形）重傷の直径又は固形Ｉ重傷を摘出ｔ７、その卸Ｉ
ｆｆを試料の代りに生理食塩水を投与した対照区のＡ’
４ｊ合と比較する。中間経過についｒ　ｔｉｔ固形固形
癌の１α径を測定することによって調べた。１０られた
に＋’已Ｐ：を次の式によって表示した。

「１的物質の分離方法につき詳述すると、貝類の煮ン１
かも得られる原料水溶液からまず不溶解部を例えＣ」：
遠心分１’ｉｌＧ　、Ｐ　過あるイｔ：Ｉ：　Ｌ＋１斜
法Ｋ　ｉ　、９）　除去し・後説Ｊ＝ａＸする。脱塩を
：１−例えばｆＲ’二機塩なと低分子化合物を分画でき
るり°゛ル（ｐ適用りルを用いるケ゛ル沖過処耶によ−
り行なっても、原料水溶液をセルロースチューブに入れ
蒸留水を流して透析によシ行在ってもよい。Ｂ・りえば
共力１煮汁の乾燥粉末又はｎ細物を乾燥固形７１ｉ　Ｊ
ｌｉとして約１０〜２５重’ＭＣ％になる、しうに、Ｏ
〜０・１５モル／　ｔ　ｔＶ塩化ナトリウムを含有−Ｊ
−’；ｉｓ　ｐＨ７〜’７．５　）０．Ｏｌ　□　０１
　モル／　ｔｓ好笠しく　＆Ｊ：　０・０１〜０・０５
モル／ｌのリン酸緩衝液よ−りなる溶出剤中に溶解し・
遠心分離機で不溶性物質を沈澱物とＬ７て除去し、得ら
れる溶液な分子量が約５００〜５，０００の分画ｆｌｉ
ｉへ囲を持つり゛ルｆｊ”適用グル（例えばファルマシ
ア　ファイン　ケミカルズ（Ｐｈａｒ＋ｎａｃ１ａ　ｌ
Ｔ’ｌｎｅ　Ｃｈｅ＋ｎ１ｃｎｌｎ　）　　／ｌ！ｌｉ
’！の゛＜１録商標セフアデツクス（５ｅｐｌ＋ａｄｅ
ｘ　）（ｉ　−２５ｏ　Ｃれはデキストランをエビクロ
ロ上１１ノンで三次元的に架橋して得られたケ゛ルであ
る。）を充填１．．．たカラムに注入し、同じ緩衝液を
溶出剤とじて々−ル濾過クロマトグラフィーを行ない、
ｉ’７′Ｊ出液の’ｉｉ気伝導伝導度昇する前の両分を
取ＴｉＩする・この操作により塩化ナトリウムなど無機
ｉＪ、には１ｔ”１１分Ｊ″ｆｊｔの有機物質を主とす
る両分から分離すイ１ことができる。

この操作において高分子の有機物と無１’＜ｊ　塩の両
分を分けるのに電気伝導度の差を見−ご判定したが、こ
のような分離を確認する手段としてシ」その他いかなる
検出器を用いてもよい。

こうして得られる比較的高分子の有１．？’！物を含有
する溶出画分は排除限界分子邪（分ｊＪ＋ｉできる上限
値）が充分大きい、例えば約５００．０（１０かも１　
、０００　、０００の塩基性陰イオン又換ケ°ル、好ｊ
１〈１には解離基としてジエチルアミノエチル〃あるい
（」、アミノエチル基な４１する陰イオン交換ケ°ル（
例えばファルマシア　ファイン　ケミカルズ社製の登録
商標ＤＥＡＥ−士ファロース（８ｅｐｂａｒｏｓｅ　）
　ＣＬ　−６Ｂ、これはアガロースを２．３−ジブロモ
グロパノールを用いて三次元架橋したものにジエチルア
ミノエチル晶をエーテル結合で結合したもので対イオン
としてクロルイオンを持ち、排除限界分子量は約Ｉｘｌ
Ｏ，総交換容月は１５±２　ｍｅｑ　／１００　ｍｅり
′ルである。）を充填したカラムに注入し、吸着されな
い物質（主として多糖類ど溶出剤の塩化ナトリウムとリ
ン酸緩衝液の塩ｉｔ＞度で脱離する低イオン親ｉｌｌ性
の物質からなる。）を素通シさせて取り除き、吸着性物
質をイオン交換体上に吸着させる。溶出剤の塩濃度で吸
着する物質を十分に吸着したイオン交換カラムに０．０
７〜０．４モル６度、好適には０・１〜０．３８モル濃
度、最適には０．１〜０−３−ｅヤ濃度。塩化プ」、リ
ウ、を含有材。

ｐＨ’７・０〜７・５００．０１〜０・１モル濃度のリ
ン酸緩衝液からなる溶出剤を徐々に流し込んで溶出液を
紫外線検出器などのモニターを使用してこのイオン濃度
で脱離溶出してくる両分を採工ｙする。

このイオン交換クロマＩ・−グラフ−１−１７７１，Ｊ
！ｌ！に卦（Ｊる目的物を溶出する塩濃度の決定は次の
実験結果に基づいて行なった。

ホタテ貝煮汁の乾燥粉末を原料とし、セファデックスＧ
２５グルｐ過分離で得られた比較的１１４１分子の有機
物画分の凍結乾燥籾米５〃をｐＨｉ−０の０・ＯＩＭ／
Ｌルん酸緩衝液２０ｍ１Ｋ溶解した試料液を０・ＯＩＭ
／ｌ）ん酸緩衝液で平権化させたＤＥ　ＡＥ−セファロ
ーズＣＬ　−６ＩＳケ９ルカラムに添加する。溶出剤に
塩化ナトリウムの連続的濃度勾配をつけてクロマトグラ
フィーを行うと第１図に示す溶出パターンが得られ、こ
れを塩化ナトリウム濃度がそれぞれ０．　０〜０・１，
０．１〜（Ｌ２５＋０・２５〜０・３８モル／ｌで溶出
しでくるＡ、＋３゜Ｃ，Ｄの４画分に分画し、凍結乾ｊ
４’ｑ３　Ｌで粉末標品Ｄ−Ａ、　　Ｄ−Ｂ、　　Ｄ−
Ｃ，Ｄ−Ｄを得た。これらの両分の抗腫瘍活性はサルコ
ーマ＋８０１１・１１瘍細胞をマウスの右そけい部の皮
下に移植し、固形脂ｊ＋＜、ｓの発生したＩＣＲ系マウ
スの腫瘍内局ハｉ投Ｊヲでの１１１【瘍阻止本で測定し
た結果を下表に示す。

（注）＊１匝瘍移槙後５，７．９．　　ＩＩ日０Ｋ膜力
塩化す）　ＩＪウム濃度が０・１〜０・２５Ｍ／を付近
のＩ）　−Ｃ画分ｔよ肺癌阻止率８８・５俤・腫瘍完全
退消数（完全治癒）４匹中２匹と高い抗腫瘍活性を示し
ている。

そこで上記と同じ原料をＤＥＡ＋・；−セフアローズＣ
Ｌ−６Ｂのカラムに通し、塩化ナトリウム６゛≧度を段
階的に０・０７　Ｍ／ｌ、　　０・２５　Ｍ／Ｉ−、そ
して０．３５八ｉ７ｔ　　と変化させて溶出したＡ青’
Ｊ”！　ｒｔｌ出・？ターンを８１１２図に示す。第２
図に示すように０．２５　Ｍ／Ｌ塩化す）　ＩＪウム緩
価液での溶出画分をピークのない前画分、糖のピークが
ある両分、蛋白ｒノ【の−一りがある両分、後両分のＡ
　＋　　Ｂ　、　　Ｃｒ　　Ｉ）　１１１ｉｉう）に分
り、凍結乾燥してそれぞれＤＳ　　Ａ、　Ｉ）Ｓ　　１
３．１）（３−Ｃ，ＤＳ−Ｄの４画分に分け、１）ＩＩ
述の検定法に従って抗腫瘍性を検討すると、次表の通り
１）Ｓ　　Ａ。

］）Ｓ　−ＩＩ、　ＤＳ−Ｃの３画分に活性をもつ物質
が多く含凍れている。

土ｉ己実験からＤＥＡＥ　−−ヒファローズのカラムに
吸着された画分を０・０゛１〜０・４１ｖｉの塩化ナト
リウムを含有するｎ３出剤で溶出すると目的物質が効果
的に回収できることがわかる。

イオン父換クロマトグラフィー処理により得られた目的
物含有溶液はり″ルｖ目過処理に刊し目的とする分子、
１１０，０００〜３００．０００　　の成分を分内１会
するが・それに先立ち脱塩濃縮する。脱塩はグル濾過に
よシ行なっても、透析によ、０行なってもよい。

脱塩、濃縮は、例えば本溶出画分を４０°Ｃ以下（好ま
しくは２０ｃ′Ｃ以下）の温度テｒ（ｉ　ｏ、ｌ　ｚｉ
）約１１５〜１／６に減圧下で濃縮し、これを再び分子
Ｊ１１が５００〜５０００　ｆ）　内（ｆ）　分画ｆｆ
（ｊ、　［Ｉ　Ｋ　；Ｄ、、２１　；ｌ；ｉ　？”＋な
’Ｉ’　ル濾過用り°ル（例えばセファデックスｃ；　
　２５　）　中に導き、蒸留水を溶出剤として、Ｃのｌ
ｉ９出液の１１ｃ気伝導度を測定して脱塩処理を行なう
。溶出液ｔま再び減圧下で４０°Ｃ以下（好ゴ：シ〈け
２０’Ｃ以下）の温度で溶出液の１１５〜１／６に濃縮
し、その；シ、とは凍結乾燥で粉末化した。この段（１
１￥［おシフる原料の煮汁粉末又は濃縮物の粉末化した
ものに対する収率は約１／６０〜１／１００　　であっ
た。

こりして１製した目的物含有１′１７．合物のｌｉ’ｆ
　！ｌ！ν度を更にあげるためには分子駕が１　、５０
０〜１００　、０００の中に分画範囲を持つグルｒｐ３
ＩＡ用り°ル（例えｔ、Ｊ゛フアルマシアファイン　ケ
ミカルズ社製のＲｅ、　ｉ＋’（ｉ標セファデックスＧ
−７５゜これりデキストランをエビクロロヒドリνで三
次元的に架４１ｆ６　したもの）を用いて行なうグル濾
過処理が大Ｊｉｆ処１す１としでの流速の確保ができる
のみならず、処理中の原因不明による抗腫瘍性成分の失
活もなく効果的であることを見出し本発明方法に絹み入
れた。この操作例を述べると、゛まう“イオン交換りル
から脱着し・脱塩・粉末化した両分（前＋＋ｅ　Ｉ）　
−Ｃ相当品）１９４）　ｐＨ１，０〜’７．５　ノＯ−
０・Ｉ　Ｍ／　ｔ　　リンＱ９緩衝液５ｍｇ　Ｋ　ｉ３
ｔ　ＦＩＴし、セファデックスＧ−７５を充填し、ｐＩ
ｌ　’Ｉ−０〜’１．５　ノＯ−０，Ｉ　Ｍ／　Ｌ　　
リン酸Ｈ’ｉ液で平衡化したケ°ル濾過カラムに注入し
、ｐＨ７・０〜７．５００〜０・Ｉ　Ｍ／／、　　ＩＪ
、ン酸緩衝液を溶出剤としてゲル済過を行なう。この溶
出ノ母ターンの一例は第３図に示したものであり・蛋白
質と糖の小さいピークのある６１両分、糖のピークがな
く蛋白質をかなり含肩する中両分、蛋白質と糖の大きな
ピークのある後両分のそれぞれＡ、　　Ｂ・　Ｃの３両
分に分け、これらをそれぞれ透析、凍結乾燥してＧＡ、
Ｇ＝Ｒ，Ｇ−Ｃの粉末試料を得た。

この標品の抗ハ・れ癌性活性を調べた結果を次表に示す
。

この結果Ｇ−Ａの画分が他のＧ−１１，ａ−ｃの画分に
比べて腫瘍阻止率も高く、貫たこの画分の収率が原料に
対し約１１５０　　の２１りであることがら精輿効帛も
良く、精製法に取入れた。尚、このＧ−Ａの両分のおお
よその下限の分イ何Ｉ＋を調べるためにファルマシア　
ファイン　ケｉｉＪ＃ズ社與のセファデックスＧ−５０
を用いてトリグトファ質の分子量を測定したところ、Ｇ
−Ａ画分は分子量として約１０．０００　以上のものが
含まれていた。

イｕられたＧ−Ａ画分の精製を更に進めるため、Ｇ−Ａ
画分相笛品１ｇを少月のｏ−ｏ・ＩＭン′ｔ　のｐＩｌ
　７・０〜７・５のリン酸緩衝液に溶かし、ｐＨ７，０
〜えばファルマシア　ファイン　ケミカルズ社製の登録
商標セファクリル（５ｏｐｈａａｒｙｌ　）　８−４０
０゜これはアリルデキストランをＮ、Ｎ’−メチレンビ
スアクリルアミドで架橋したもの。）を充填シタカラム
でグル濾過を行ない、その後透析し、凍結乾燥して粉末
化した。その結果分子ｆｉ３００，０００以上の画分Ｓ
　−Ａ、　分子量が３００．０００〜１５０．０００の
画分８−Ｂ及び分子量が１５０，０００以下の両分Ｓ−
Ｃが得られた。（各両分の分離は別に本ｒル濾過用グル
を用いて分子艮測定用標準物質の溶出位数から求めた検
量線を基準にして行なった。）得られた試料Ｓ−Ａ、８
−Ｂ、Ｓ−Ｃの抗腫瘍活性をサルコーマ１８０結節型腫
瘍に対して調べたところ、次表に示すとおシであった。

本実験結果は分子ｉ：　３００，０００以上の両分は抗
ル■瘍活性が低いこと及び３００　、０００〜１５０，
０００の両分と１５０，０００以下の両分との間に（」
不意差ｔま認められないことを示している。

本発明の水溶性含糖蛋白質か←）なる抗１１・ｆｉ　＋
ｒ−，ｓ剤の理化学的諸性質は次の通りである・ ｔｌ＋　　元素分析：Ｃ＝４３．２％、　　１１＝６．
５’石、　　Ｎ　＝１０．１チ、灰分＝１％、　　１）
＝Ｏ，＋２係、Ｓ＝Ｏ，１％ （２）分子ｆ！ニゲル濾濾過クロマトシラノイーよる分
子量は約１０．０００〜３００　、０００の範囲であっ
た。

（３１融　　点：２３５’Ｃ以上で分）９了シはじめ、
明確な融点は示さない。

（４）　　比旋光度：〔α］　　−１５，７（ｃ　＝０
．５係、水「１す（（５）　　紫外線吸収スペクトル： 水溶液における吸収スペクトルを Ｉ２０ 第４図に示す。λ　　２７８　ｎｍに吸ａｘ 収を示す。

（６１赤外線吸収スペクトル： ■（Ｉ３ｒ錠ニより測定したスゝクトルを８１１５図に
示す。吸収は３５００語３３（］Ｏ＋　　　　ｌ　６５
０　＊　　　　１５４０　、　　　ｌ　４００　　”−
’附近に！ｉ′イ性吸収がみられる。

（７）　溶剤に対する溶解性： 水に易溶。メタノール、エタノ− ル・　アセトン等の有機溶媒に不溶。

＋ｏ＋　　８４色反応：ビウレソト反応、キザントプロ
テイン反応、フェノール試薬による 反応、アンスロン硫酸反応、フェ ノール硫酸反応は陽性、システィ ン硫酸反応は偽１１．す（２１１゜ （り）　　塩基性、酸性、中性の区別：両性′ｖｌＴ、
解質 ｆｌｌ　　物質の色及び外観。

白色又は’４ｉ’ｓ’微褐白色、固秋 １ｌｌ）　　加水分解物中のアミノ酸：６Ｎ塩酸中、１
０５−、　Ｉ　ｔｏ　’Ｃで２４時間の加水分解に上り
少、なくとも 次のアミノ酸が認められた◇ アスパラギン酸、ハメｒドロゾロリ ン、スレオニン、−ヒリン、グルタ ミン酸、プロリン、グリシン、ア ラニン、システィン、バリン、メ ｆオニ”／、　　イ、：／　ｒＪイシン、ロイシン？チ
ロシン、ノエニルアラニン。

リジン、アルギニン、ヒスチジン。

ハイドロ４″シリシン。

ａ２　　加水分解物中の糖： ２Ｎ塩酸中、８０〜９０　’、：でｔｏｌｌ、７間の加
水分解を行ない、イオン父 換によりアミノ酸を除いたものを 還元し、た中に少なくとも次の糖が 認められた。

フルクトース、マンノース、フコ −７、イノシトール、ガラクト、− スＯ ａ３　　イ１ｉ白貿含有ｂ１： ローリーフオーリ−法によるフェ ノール試薬に」、る発色の結果、牛 脂充血ｄ１アルブミソ拡！算の蛋白賃 金１−孟−６０・５係で）、つた。

（１４）　　糖含有旦：フェノール硫酸法によって測定
したグルコース換１′１の糖？；有ｊＪｋけ１９・９チ
であった。

（【１　核酸含路：ディッシュ反応によるジフェニルア
ミン法で測定したアゾニール酸 換算の核酸含量は０．８チ以下であ った。

以上のようなＨｒｆ性質について、貝類から得た抗腫瘍
性物質についての文献を調べたが、特公昭５７−８０８
８号、特開昭５４＝４．１３１４号及び回５４　４１３
１５号公報、さらにＪ、　ＮｎｔｉｏｎｎｌＣａｎｃｅ
ｒ　　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ、　　６ｏ、＆　６　　（ｌ
’７７ｇ）　　１４（）９−　１５００に記載の佐々木
らの報告するｔ＜Ｌ　ｌ’ｉと比べでも同一性は見られ
ず、全く新規な物質である。

本発明の水溶性含糖蛋白質からなる抗１１巾１０剤は退
効果を示すきわめてすぐれた抗ルａ瘍剤である。

さらに本発明に従う抗腫瘍剤しｌ仙の抗腫瘍剤と併用す
ることもできる０免疫学的〃１果の増強をもたらすよう
な併用は特に効果的で７←）る。

１だ本発明に従う抗１ｍ瘍剤の製３ｉ：ｊ方法によると
、従来は島棄されていた貝類煮汁から抗肺）易剤として
有効な成分が動車よ〈分離される。本発明による貝類煮
汁の取得方法及び煮汁からの有効ｈν分の採取方法は非
常圧簡単であシ、４“１１に工業的生産ｒ（適する方法
である。本発明方法と特公昭５７５７−８Ｏ号、特開昭
５４−４１３１４号及び同５４−／１１３１５号公報に
記載の周造方法との相違点について述べると、これら従
来方法では貝の肉部分を原料とし、このも°のがら肝臓
を除去しなけれはならないし、低温売件下に保って貝肉
を粉砕し、超貧波処Ｊ！ｌ！等で均ｐｆ化して冷水で抽
出１〜、大Ｊｕｌの固形物（粉砕肉）を遠心分離して除
去す２）など煩雑な多くの操作を必要とするし、水抽出
物が目的物以外に多くの他の物質を含イ１するためその
分離に手間がかかるというＡ７１ｊ点がある。これに対
し、本発明方法では貝の肉部分は粉砕しないので煮汁と
の分離がイ浜めて簡単であるし、蒸煮加熱処理後の肉部
分は食用資源として本来の目的に使用でき・従来方法で
は不要物として廃棄されていた廃物の煮汁を利用したも
ので、原料面からも大ｌ〕のコスト低下ができるうえに
、この煮汁は不純物、特に分子量の高い不純物の含有量
が少なく、その分離精製工程も簡単化できる効果がある
・従来、抗腫瘍性物質を海洋生物から抽出、分離する際
にＵ二できる限υ低漏で処理するのが普通であ、す、加
熱などの方法は有効成分を変質させる可能性があるので
高渦灸件下での処理は通常行なわれでいなかった。本発
明方法で使用する貝類煮汁（」−高ｄ１、−条件十で処
理されたものであり・この高＋７；、＋処ｊ１１１によ
っても薬効が損なわれずかつ煮汁中に有効成分が高収率
で得られたことは驚くべきことであった。かくして本発
明によれば、食用とじて価値の力）る貝肉部を損傷する
ことなくまた食用とし°（の味覚、外観等の商品価値を
損なうことなく、簡単な処理操作によって貫電な抗腫瘍
性成分を同時に刊することができる。さらに従来食用を
目的として内部を加工していた際産業用排水としては好
１しくない河川を汚染する有機成分を含有した１°ｉ：
廃棄されでいた排水中の有機成分を減少させることがで
きるので、環境衛生の面でも利点がある。すなわち本発
明方法は経済的に有利であるばか−りでなく、３ｍ境保
全の見地からも従来方法よす優れた方法である。

以下実施例により本発明をさらに説明する。

実施例１ 生ホタテ貝に対し０・１０重量倍の月の１０５〜１１０
°Ｃの熱スチームを生ポタテ貝に＠接吹き付け、１０分
間９０〜ｌ　ＯＯＬＣに蒸煮することによ）有効成分が
凝縮水に溶りた一番煮汁を７（Ｊだ。原料としたホタデ
貝Ｋ　ｉｆぞのＭ邦の約０．１倍−ｈｌのフジ貝が（＝
Ｊ着しでいるものであった。一番煮汁は７時間テｑ　ｏ
ｏｃかう５０°ＧＫ徐冷した後、熱風入口温度２８０℃
・　出１」湛１１ＣＩ　２　ｓ’ｃの噴バ乾燥器によル
ア１１ｙ留時間４．５秒で１ト１間的に乾燥して有効成
分を粉末標品（１ａ）どして得た。この粉末の収率は貝
に対して０．２７重ｊｉ’ｉ：　’％であった。

一番煮汁を取得した後の加熱ホタテ貝から貝柱部分のみ
を取り出しこれを原料とした。沸騰している食塩水（塩
儂度１０重訊゛係）４５０像の中へ貝柱５０に４９を浸
漬した◇浸漬によル液渦は７ｏ″ＣＫなるが２０分間加
熱して再度沸騰させ、この時点で貝柱を食塩水から引き
揚げた。得られた煮汁中で上６Ｃと同様にして貝柱５０
．Ｉｇｚずつをさらに３回処理した。こうして得られた
二番煮汁を１５時間で９０’Ｃかも４０’Ｃに徐冷した
後、一番煮汁の乾燥と同じ条件で噴筋乾燥器により有効
成分な粉末としてイ（Ｉた。この粉末標品（Ｉ　ｂ　）
の収率＆ＪＪ１に対して０・２０重１１係であった。

一番煮汁から得た粉末２重Ｊ召部ど二！ｌ：’　；ｉ’
、ｉ、７１から得た粉末１爪星部とを混合してγ１６イ
）粉末の仲１ｉｉ″１（Ｉａ）を調合した。

実施例２ 実施０・１１１と同様の方法でイＲた混冶粉末（ＩＣ）
６００ｙにその５爪力１、倍の蒸留７Ｊ（を加えた懸濁
液とし、この懸濁液を１０．０００　Ｇ、　５°Ｃで２
０分間遠心分離して沈澱物を除き、上清液３ｔを刊だ。

この上清液をダル濾過用ケ゛ルセファデツクスＧ−２５
を膨潤させて充填したのちｐＨ７，５の０．０１　Ｍ／
ｌのリン酸緩衝液に０．０７Ｍ／ｌの塩化ナトリウムを
加えた溶出剤で平衡化したカラムヘチャーソしで同じ組
成の溶出剤で溶出させ、溶出液のｆｆ１ｉ□気伝勇度が
塩などの溶出によって上昇しはじめる前の両分を採り、
これを更に約１を容の先に示り、たと同様の溶出剤で平
衡化したＤＥＡＦ−センアＬ１−ズＣＬ−６Ｂカラム中
を通し、素通りする両分を捨で、充分に素通シ画分がな
くなったことを紫外線モニターで確認したのち、溶出剤
を０．、ＯＩ　Ｍ／ｌのｐｌ＋７゛５のリン酸緩衝液に
０．２５　Ｍ／ｌの食塩を加えた溶出剤に替えて同じカ
ラムへ導入し、これＫよって溶出する両分を取得した。

この両分を５°Ｃの条件で２昼夜透析して脱塩し、凍結
乾燥して７．２　！９の粉末標品（２ｄ）を得た。

本標品の抗１ｔ、ｎ　］う性をサルコーマ１８０肉腫結
節型に対してり、１べたところ、４００グ／　Ｉｃｇｘ
　３回の投与で腫瘍阻止率６ｄ係であった。

また粉末（３１ｐ品（２ｄ）は繊維両肘ｉ　Ｍｅ　ｔ　
ｂ　／Ａフィブロザルコーマを接種したＢＡＬＩＩ　／
　ｃ系のマウスに対しで４００　ｍｙ　／　Ｉ（１７Ｘ
　６回の投与光で腫瘍阻止ホ１００’ｌ、完全治癒６匹
中６匹の成績を示した。

実施例３ 実施例２と同様の方法で得た粉末標品（２ｄ）３０ｇを
０・ＩＭのｐＨ７，５のリン酸緩衝液１５０ｄに溶かし
て高さｑＯｔｔｎ、直径１４ｔｎのカラムにセファデッ
クスＧ７５を充填しＯ，ｌ　Ｍ／ｌのｐＨ７，５のリン
酸緩衝液の溶出剤で平衡化したカラムヘチャージし、ｐ
Ｈ７・５のリン酸緩衝液で溶出させた０この条件で溶出
した液の内、排除限界分子：Ｉ７ｉから約１０．０００
　の分子量までの溶出画分をイ！Ｉて、２　Ｊｌｊ、夜
の透析によル脱塩したのち粉末標品（３ｏ）０・８Ｉを
得た。この標品の抗腫瘍性を−リ′ルニ１−マ１８０肉
胛結節型に対して調べたところ、４０ｎ＋ｇ／ｋｇｘ３
回の投与で腫瘍阻止率８０・５％であった。

実施例４ 実施例３と同様にして得た粉末標品（３ｏ）相当品１．
０．ｐを１ｏＩｎｌの０．０１　Ｍ／ｌのｐＨ７，５の
リン酸緩衝液に溶解し、内径２．５国、高さ５０　ａｎ
のカラムヘセフアクリルＳ−４００を充填Ｌ、ｐ！ｌ　
’１．５００・ｏ　＋　ｙｖｔのリン酸緩衝液で充分に
平衡化したカラムにチャージしｂ　＋”　／Ｌ／Ｐ３ｆ
ｊｌクロマトグラフ　−（−を行なった。そして検量線
から溶出画分を取る位置を逆算し、溶出する溶出液を分
子量が３００．０００以上の画分Ｓ−Ａ、分子景が３０
０，０００〜１５０　、０００の画分Ｓ−Ｂ及び分子量
が＋　５０　、０００以下の両分Ｓ−〇に分画した。本
実験で得られた各画分ｉ；Ｌ２　Ｊｌｌ薫蒸留水透析し
、凍結乾燥してＳ−Ａが０・１８ｐ、Ｓ−Ｂが０・３５
．！ｉｉ’、　Ｓ−Ｃが０．３０．９’各々得られた。

この標品Ｓ−Ａ、Ｓ−Ｂ、Ｓ−Ｃの抗腫瘍性をザルコー
マ１８０肉腫結節型に対して調べたところ、本文中にも
示した。しうに、５−１１とＳ−Ｃの画分が強い抗腫瘍
性を示したが、Ｓ−Ａの分子Ｎｔ３００．０００以上の
両分りま強い抗腫瘍活性のものを含まないことが判った
・ 実施例５ 実施例４で強い抗腫瘍活性を示したＳ−ＢとＳ−〇をこ
れらがイ（Ｉられた比率でＳ−ｎ画分２１０りとＳ−Ｃ
画分＋８０１ｎｇを混合し、蒸留水に溶解し、凍結乾燥
した。かくして粉末標品（４ｆ）を０・３９ｇ得た。

本文中に示した本発明の水溶性含糖蛋白質からなる抗腫
瘍性物質の理化学的諸性質は本粉末標品（４ｆ）を使用
して測定したものである。

実施例６ 実施例５で得た粉末標品（４ｆ）のザルコーマ１８０肉
腫結節型に対する抗腫瘍効果を次の表に示す・ 木実１倹で粉末標品（４ｆ）は胛瘍内投Ｊシに、しって
腫瘍を著しく縮退させる効果がｋ）す、適当な投与量−
Ｃは完治させることができる。

実施例７ 実施例４で得られた粉末標品Ｓ　Ｂ＝８Ｃ及び実施例５
で得られた粉末標品（４ｆ）の１１１［接細胞毒性を次
の方法で調べたが毒性＆：ｌ認められない。

マウス白血病（Ｌ　５１７８　Ｙ　Ｌｙｍｐｈｏｎｔｎ
　）細胞を組織培養用培地イーグルＭＥＭ　（仔牛」ｒ
ｌ（清１５係庁有）Ｋ　５　Ｘ　Ｉ　ＯＪ’Ｊ／　ｍＩ
！にｆｆ１ｌｉｆｆＪ　ｉぜ、倹定試ｔ１を添加して５
％炭酸ガス含有空気流下、３７°（ｌｃｆｔｆｆ＜。

４８時間後、細胞の生死を公知の方法に従いトリパップ
ルーに上る染色にょっ°Ｃ判定する。対照区とし゛Ｃｌ
：！三理食塩ンに添加区及び公知の抗腫瘍剤である一フ
イトマ・イシンＣ添加区を股りた。次表に抗ル１ｉ５ｒ
、　１ｉｌ−物ＴＪ　Ｏ）　ｉｉ’４　接＃（Ｉ＋　胞
’ｌ’−４１ヲ示−ｊ。

実施例 本実施例では、これまでと同様な方法で同様の腫瘍細胞
を使って腫瘍細胞を移植し、固形腫瘍が形成されている
ことを確認後、実施例５で得た粉末標品４ｆをマウスの
尾の静脈に１〜３回注射（１マ　投与）した。セして肺
瘍移稙５週間後の固形＋１！ｌｉ　Ｊｆｆｌを摘出し、
前述の抗腫瘍活性の検定方法と同様にして検定した。そ
の結果は下表の通υで、本物質は静脈内注射による投与
でも効呆がある。

実施例９ 抗腫瘍活性の検定方法の中、検定試料の投馬方法をマウ
スの腹腔中へ投カする（　Ｉｐ　　投カ）方法に変更す
る他は前述の検定方法と全く同様にしで実施例５で１）
だ粉末標品４ｆをマウス−匹当、す２ダを４１＝＋Ｊ投
与した。その〃ｌ果は下表のとおシであ乙。

この実験で標品４ｆは腹腔内投力でも抗腫瘍効果があり
、／ｉ￥に５匹゛中２匹が完治することは注目に値する
。

実施例ＩＯ ５週令１７）　ＩＣＲ系雌のマウスの腹腔内にサルツー
１１８０種瘍πＩＩＪ胞を接種し、１週問後に増殖した
＋１’ｎ瘍細胞を腹水と共に抜き取！ン、この細胞４×
１０個を他の５週令のＩＣＲ系雌マウスの腋下皮下に移
植する。腫瘍移植後１．　３．　５日目に実施例瘍移＃
ｆ１３週間後の固形腫瘍を摘出し、その重ｆｆｉを試料
の代、りに生理食塩水を投与した対照群の場合と比較１
−て、抗１１ｉｉ瘍活性の検定方法と同様に胛５う阻止
車幅）を求めた。

この結果、標品４　ｆ　Ｈ皮下膜力によってもわ℃腫瘍
効果があり、８菌中１匹は完Ｒ’ｔすることは注目に値
１′る・ 実施例５の粉末標品４ｆについて抗Ｉ１１活悟ミをザル
コーマ１８０固形腫搗以外の各’Ｉ’ＩＲＩｉ’ｆｌ　
７杉月市）勤であるエールリッヒ痛、１血性１水月：Ｆ
ｉ５月（ＳＮ　−３６）、ＮＴＦ細網細胞肉胛（ＮＴＦ
　ｒｅｔｌｅｕｌｕｍ　ｃｅｌｌ　Ｓａｒｃｏ−ｍｎ　
）、線維肉ルロ（Ｆｉｂｒｏｓｎｒｃｏｍａ　）　　を
−ｔｆｔぞＪｔ１０個を他の６週令のマウスのそけい部
皮下に移植し、１週間後の固形腫瘍に対ｔ７て実施例５
σ）標品４ｆを５η／マウス×３回、隔日に膜力し、Ｉ
Ｉ屯）ａ移植５週［［Ｘ」後の固形１１…５Ｂを摘出し
、その重訂１を試料の代りに生理食塩水を膜力した対照
？ｌ’ＰとＬし較した。

実施例１２ −ｔＪ−ｑ）’　ｘ　ヲ使い、実施例１〜５と同様Ｅｌ
、テ白色粉末を得た。本標品（１２Ｘ）の抗腫瘍活性は
４００η／　ｋｙ　Ｘ　３回投与で腫ｍ阻止率６５チで
あった。

実施例１３ アワビを使い、実施例１〜５と同様にして白色粉末を得
た。本標品（＋３７）の抗腫瘍活性は・４００循／に５
／Ｘ３回投写で腫瘍μ■血止率３チであつプこ　〇 実施例１４ ハマグリを使い、実施例１〜５と同様にして白色粉末を
得た。本標品（１４ｚ）の抗腫瘍活悼１：ｌ：４００　
＊ｙ／ｋｌ？ｘ　３回稜Ｊジで腫瘍阻止率６７係であっ
た〇 実施例１５ ホタテ共煮汁の乾燥粉末として実施例１で得た粉末ＩＣ
の代りに１８を使用した以外は実施例２〜５ど同様にし
て分離精製し２、実施例５で得ら才した抗腫瘍剤とほと
んど同じ理化学的性状および抗Ｊ＋＋、＋ｉ瘍活性を有
する抗腫瘍剤を得た。

実施例１６ ホタテ貝煮汁の乾燥粉末として実ｈｆクレ１１１で得た
粉末ＩＣの代りに１ｂを使用した以外は実施（Ｐｌ　２
〜５と同様にして分１ζＩＣＮ′ｆｊ製し、実施例５で
イη）られた抗腫瘍剤とほとんど同じ理化学的は秋およ
び抗ｊ１・■１瘍活性な有する抗腫瘍剤を得た。

【図面の簡単な説明】

第１図、第２図は本発明方法において、予備処理したホ
タテ貝煮汁粉末の水溶液をイオソ父換クロマトグラフィ
ーに付して塩化ナトリウム溶液で溶出した場合の溶出ノ
ぐターンを示し、第３図は第１図のＣ画分をダルｐ過ク
ロマトグラフィーに付した場合の溶出ノ４ターンを示す
。８１１４図は本発明の水溶性含糖蛋白質性抗１沌瘍物
５１の０．４ｎＩＩ／、７７！水溶液の紫外線吸収スペ
クトル図を示し、第５図は同物質の赤外吸、収スペクト
ル図（ＫＢｒ錠）を示す。 手続補正書（自発） 昭和５８年　１月２４日 特許庁長官殿 ■、事件の表示 昭和　５７　年特許願第１３７２０８号２、発明の名称 抗腫瘍剤及びその製造法 ３、補正をする者 事件との関係　　　　　特ｒ「出願人 性　所　　大阪府大阪市南区島之内１丁目２０番１９号
（５８６）名称　　丸善石油株式会社 ４、代理人 ５、補正の対象 明細書の発明の詳細な説明の欄 ６、補正の内容 （１）　　明細書、第４７頁の表中左端欄（投与量の欄
）下から第５行のｌ−ｏ、５ｘ３Ｊを「０．０５Ｘ３」
と補正する。 （２）同書、第４７頁の表中、下から第４行の記載をす
べて削除する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ｌ・　貝類の煮汁粉末又は濃縮物から得た次のｎＦｆ性
   質を有する水溶性含糖蛋白質からなる抗腫ｉｓ剤。 １）帯微褐白色ないしは白色の固状： １１）水に易溶性でメタノール、エタノール。 アセトンなどの有機溶媒に不溶： １１１）両性電解質： ＩＶ）　　ＫＢｒ　”！レノｌ−１７よる赤外線吸収ス
   イク１、ルで３５００〜３３００　ｔｔｎ　　＊　　Ｉ
   　６５００ｉｌ　　＊　　Ｉ　５４０ｃｒｎ　　附近に
   主ピークを示す： ■）ビウレット反応、キサントプロティン反応、フェノ
   ール試薬による反応が陽性：ｖｌ）　　アンスロン硫酸
   反応、フェノール硫酸反応が陽性でシスティン硫酸反応
   が偽陽性：Ｖｌｌ）　紫外線吸収スペクトルにおいてλ
   １１２０ａｘ ２７８　ｎｍ　に吸収を持っ； ｖｉｉｌ）　　分子ＩＬＵ囲としテ１０．０００〜３０
   ０．０００　７７）ものを含む。 ２、貝類の可食部分を熱水性情ｌｌ１１１で蒸煮もしく
   は加熱加工する際に得られる煮汁の乾１Ｆ’ｌ：粉末又
   は濃縮物を原料とし、これを塩基性陰イオン交換体を使
   用するイオン交換クロマトグラフィー及びり”ルｐ過ケ
   °ルを用いるケ°ル濾過に伺Ｌ−ｃ、分子、［ａｌｏ、
   　ｏｏｏ　〜３００　、０００　１）　範囲内（１）水
   溶性でｕ！ｔ’ｉ　Ｔｒ’ｃ　白’１５からなる抗腫瘍
   性物質を分取することを特徴とする抗腫瘍剤の製造法０ ８、イオン交換クロマトグラフィーに」−９処理した後
   にケ゛ルｐ過を行なう特許請求の範囲第２項８８戦の製
   造法。 ４、ケ°ルｐ過によ多処理した後にイオン交換クロマト
   グラフィーな行なう特許ｔｔＦＪ求の範囲第２項記載の
   製造法。