JPS60184025A - 多糖類，その単離法及び用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は新規な多糖類、特に霊芝よシ単離しうるガノ
デランＡ及びＢと命名された多糖類、その単離法及び用
途に関する。

霊芝、特にサルノコシカケ科（Ｐｏ１ｙｐｏｒａｃｅａ
ｅ　）に属するマンネンタケ（ガノデルマ・ルキードウ
ム、カルスト、　、　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｌｕｃｉｄ
ｕｍ　Ｋａｒｓｔ−）は、慢性気管支炎、冠不全症、高
脂血症、高血圧症、神経衰弱、肝炎などに有効な薬剤と
して用いられていることは広く知られているところであ
る。しかしこの霊芝の有効成分については何も明らかと
はなっていない。

この発明の発明者らは水可溶画分に血糖降下作用を有す
る成分が含まれているという知見を得、さらにこれを分
離精製した結果ガノデランＡ及びＢと命名した２種類の
多糖類を得た。

この発明のガノデラン類を含有する霊芝としてはマンネ
ンタケが最も好ましいものである。その他これと類縁植
物であるマゴジャクシ（ガノデルマ・ネオヤボニクム、
イマゼキ−Ｇａｎｏｄｅｒｍａｎｅｏ−ｊａｐｏｎｉｃ
ｕｍ　Ｉｍａｚｅｋｉ）、　ツガノマンネンタケ（ガノ
デル−ｒ”ツガエ、マリル、　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　ｔ
ｓｕｇａｅＭｕｒｒｉｌｌ　）、オオマンネンタケ（ガ
ノデルマ・セファクリル＋　Ｇａｎｏｄｅｒｍａ　５ｅ
ｓｓｉｌｅ　Ｍｕｒｒｉｌｌ　）、ツヤケシマンネンタ
ケ（ガノデルマ・クルテイシ、ペルク・Ｇａｎｏｄｅｒ
ｍａ　ｅｕｒｔｉｓｓｉ　Ｂｅｒｋ、）　などが挙げら
れる。

この発明のガノデラン類は、上記のごときマンネンタケ
スは近緑植物を原料として、その生もしくは乾燥物から
抽出分離、精製するか又は上記のごときマンネンタケ又
は近縁植物の菌糸を培養し、次いでこれを抽出分離・精
製することによって得ることができる。具体的にはこの
発明のガノデラン類は次のような方法で単離できる。

まず原料の霊芝を脱脂せずに又社通常の脂溶性有機溶媒
を用いて脱脂後、水又は水性有機溶媒で抽出される。抽
出は水で十分行えるが、抽出液の腐敗を防止しまた抽出
を促進するために水性有機溶媒を用いてもよい。また両
方で抽出してもよい。

水性有機溶媒の有機溶媒としてはメタノール、エタノー
ルなどの低級アルコール、アセトンなどの水溶性有機溶
媒が用いられ、原料の種類などによって約１チの低濃度
から約３０％の濃度のものが用いられる。またこの抽出
は加温することによって促進され、原料は粉砕するのが
好ましい０次いで、上記抽出液をそのま＼、セルロース
透析膜を用いる透析に付すかもしくは限外濾過処理に付
すか、又は抽出液を一旦溶媒留去などの方法で濃縮して
おくかもしくはエタノール、メタノールなどの溶媒を添
加して血糖降下作用を有する物質の沈澱物を作製してお
いて、この濃縮液もしくは沈澱物を水又は前記水性有機
溶媒に溶解した溶液を前記透析に付すかもしくは限外濾
過に付して前記ガノデラン混合物が得られる０ 前記のようにして得られたガノデラン混合物を次のよう
な分画処理に付してガノデランＡ及びＢ　”の各単体に
単離することができる。

まず上記ガノデラン混合物を各ガノデランの電気的性質
の差異を利用して処理し各ガノデランが分離される。す
なわち陰イオン交換樹脂の例えばＤＥＡＥ　セファデッ
クス、ＤＥＡＥ　）ヨノく−ルで処理し、ガノデランＡ
を含有するフラクションとガノデランＢを含有するフラ
クションとに分画する。このようにして得られた２つの
フラクションを次に分子量分画法に付す。この分画法に
はセファロース、セファデックス、セファクリル、アガ
ロースビーズなどを用いるゲル濾過法、分画分子ｉ１４
〜１０万の限外濾過膜を用いる方法が挙げクションを処
理して各ガノデランに分離される。

られる。このようにして先に得られた２つのフラかくし
てこの発明はサルノコシカケ科に属する　□マンネンタ
ケ又は近縁枢動の生もしくは乾燥物を、脱脂もしくは脱
脂せずして、水又は水性有機溶媒で常温もしくは加熱し
て抽出し、得られた抽出液のま＼又は一旦その濃縮液と
するか又れ血糖降下作用を有する物質の沈澱物を作って
、この濃縮液、又は沈澱物を水又は水性有機溶媒に溶解
した液を、透析もしくは限外済過に付してガノデランＡ
及びＢを含有するガノデラン混合物を得、さらにこのガ
ノデラン混合物を分画処理に付して、後記の特性を有す
るガノデランＡとＢの個々の成分を分離することを特徴
とする多糖類の単離法を提供するものである。

上記のようにして得られた多糖類は後記のように優れた
血糖降下作用を有しかつ副作用がほとんど認められない
ことが判明し血糖降下剤として極めて有用なものである
。かくしてこの発明は、後記の特性を有するガノデラン
Ａ及びＢの１種又は混合物からなる多糖類を有効成分と
して含有する血糖降下剤を提供するものでおる。

この発明の血糖降下剤の投与量は病状に応じて異なるが
成人に対する内服の場合、ガノデラン類として１日当９
１０〜３００■、好ましくは３０〜１００キを２〜３回
に分けて投与することによって効力を発揮することがで
きる。

この発明による血糖降下剤はガノデラン類の単体又はそ
の混合物と、固体もしくは液体の賦形剤とからなるもの
である。そして投与法ならびに投与の剤型としては、通
常、散剤、舌下錠を含む錠剤、乳剤、カプセル剤、薬剤
、顆粒剤、液剤（流エキス剤、シロップ剤などを含む）
などの内服の形がある。また注射剤の形でおってもよい
。ここに使用される固体また社液体の賦形剤としては、
当該分野で公知のものが使用される。ただ前述したよう
な１回の投与量に必要なこの発明の化合物を含むように
製剤化するのが望ましい。

いくつかの具体例を挙げると散剤、その他の内服用粉末
剤における賦形剤としては、乳糖、澱粉、デキストリン
、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合成および天然
ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、乾燥水酸化ア
ルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、重炭酸ナトリ
ウム、乾燥酵母などが挙けられる。

この他通常の賦形剤を添加して作製した経皮吸収剤もこ
の発明に含まれる。

なおレインの水抽出物は健康食品的に使用されているが
、この発明のガノデランＡとＢは医薬的な治療効果を現
さない量で健康維持のための量で健康食品として用いる
ことができる。その剤形としては液剤、カプセル剤、軟
カプセル剤、顆粒剤、・茶剤などが好適である。

次に実施例と動物実験によってこの発明を説明する。

実施例 成熟したマンネンタケの子実体を充分乾燥させ、その約
１０に９を冷水で軽く洗い、水を充分に切って乾燥後、
破砕機にかけ、細かく破砕された子実体の小片に約１０
０ｔの脱イオン水を加えて煮沸下に約３時間抽出する。

この抽出を３回繰返す。

得られた抽出液を合し５０〜６０℃の温度にて減圧下で
蒸発乾燥して０．６紛の褐色粉末のエキス囚を得た。

このエキス（Ａ）１００　ｆを水４００−に溶解し、そ
の溶液を、吸引済過して不溶分を除去した０このＦ液を
内液とし２ｔの水を外液として、ビスキング・チューブ
３６７３２　（Ｖｉｓｋｉｎｇ社製セルロース透析チュ
ーブ、２４オングストローム以下の大きさの粒子を通過
）を用い、１０日間外液の水を１日１回取り換えて透析
を行った。

得られた透析内液をＤＥＡＥ）ヨパールカラム（２、２
ｃｍφＸ　４５　ｃｍ　）によるクロマトグラフィに付
し、まず水２ｔで溶出し続いてＩＭ濃度の塩化ナトリウ
ム水溶液２ｔで溶出し、水溶出７ラクシヨンＧ−１とＮ
ａＣ１水溶液溶出フラクシヨンＧ−２を得た。

フラクションＧ−１を減圧下５０〜６０℃で蒸発乾固し
て５２の粉末を得た。この粉末２？を４０−の水に溶解
してセファロース６Ｂカラム（４，０αφ×９５σ）の
クロマトグラフィに付して０．１ＭＮａＣ１溶液で溶離
しく流速２’／＝　）　２０１！１！づつの複数のフラ
クションを得、そのなかのガノデラン含有フラクション
を次のようにして選択して合し減圧下５０〜６０℃で１
０〇−迄濃縮した。

、　すなわち各７ラクシヨンの０．２　ｙｄ！に０．８
−の水を加え、２チフェノール含有水溶液１−を加え、
さらに硫酸５ｍｌ＋を添加して３０分間放置後、λｍａ
ｘ：４９０ｎｍ　の吸光度を測定し、その吸光度の高い
フラクションを選択した。

前記濃縮液（ｉ　ｏ　０ｓｄ）を内液としてビスキング
・チューブ３．６７３２に入れ、外液として２ｔの水を
用い、３日間にわたって１日１回外液を交換して透析を
行なった（３日間透析）０得られた内液を減圧下５０〜
６０℃で濃縮して４０ｍｇとした。

上記濃縮液（４０ｍｌ　）をＤＥＡＥ）ヨバールカラム
（２，２ｃｍφＸ　４５０ｎ）のクロマトグラフィに付
し、これをまず流速２１ｚ□の水で５　ｈｒ溶離し、続
いて０〜Ｉ　Ｍ　１３度のＮａＣ１水溶液（流速２呵−
）で２０ｈｒかけてグラジェント溶出を行った。グラジ
ェント溶出で得られた溶出液のフラクション（２０ｄフ
ラクシヨン）から前記と同様の方法でカップラン含有フ
ラクションを選択して合し減圧下５０〜６０℃で１００
−迄濃縮した。

得られた濃縮液を前記と同様の３日間透析に付し、得ら
れた内液を減圧下５０〜６０℃で４０ｍに濃縮した。

この濃縮液をセファクリルＳ−２００カラム（４、０ｃ
ｍφＸ　９５　ｃｍ　）のカラムクロマトグラフィに付
し、トリスヒドロキシメチルアミノメタン３０．３２の
食塩水（ＮａＣｌ２３．０５　ｆの水２．５ｔによる溶
液）による溶液を１５〜２０％塩酸でｐＨを７．０に調
整した０、　１　Ｍ　）　ｌｊスス−酸緩衝液で溶離（
流速２”／ｒｉｇ　）　Ｌ　、得られた２０ｍｅづつの
フラクションから前記と同様の方法でガノデラン含有フ
ラクションを選択して合し減圧下５０〜６０℃で１００
ゴ迄濃縮した。

得られた濃縮液を前記と同様の３日間透析を行い得られ
た内液を減圧下５０〜６０℃で蒸発乾固して白色粉末の
ガノデランＡ　（９０ｍｙ　）を得た。

ガノデランＡは後記のような特性を有し、単一物質であ
るととが確認され、次に述べるガノデランＢも同様に確
認された。

前記フラクションＧ−２を減圧下５０〜６０℃で１００
−に濃縮し、この濃縮液を前記と同様の３日間透析に付
し、得られた内液を減圧下５０〜６０℃で４０−に濃縮
した。

得られた濃縮液（４０ｄ）について、フラクションＧ−
１の場合と同様に、セファロース６Ｂカラムによるクロ
マトグラフィ→透析→ＤＥＡＥ）ヨパールカラムによる
クロマトグラフィ→透析に付した。得られた内液１００
ｍを減圧下５０〜６０℃で４０−に濃縮し、セファデッ
クスＧ５０カラム（４，０ｃｒｎφＸ９５ｃｒｎ）のク
ロマドグ２フイに付して０．０５Ｍ燐酸緩衝液ｐＨ７，
０で溶離しく流速０．５’／＝）、１ｏ−づつのフラク
ションを得た。このフラクションについて前記と同様の
方法で検査してガノデラン含有フラクションを選択して
合し、これを減圧下５０〜６０℃で１００−に濃縮した
。

この濃縮液を前記と同様の３日間透析に付し、得られた
内液を減圧下５０〜６０℃で蒸発乾固して白色の粉末の
ガノデランＢ（１８０■）を得た。

上記のようにして得られた各ガノデランはそｉｚぞれ次
のような特性を有する（下記元素分析におけるＣ　、Ｈ
，Ｎ以外の残余は０である）。

イ）ガノデランＡ 分子量（ゲル濾過法）：９３００ 比旋光度：〔α）ｐ　＋５８．８０（ｃ　Ｏ，１９，水
）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）νｎ１ａＸ　（ｃｒ
ｎ−１）　：３２７０．１０１３ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：１．１２．（中広）。

２．０７（中広）、４．８６（中広） 元素分析値：　Ｃ，４１，７９；Ｈ，６，０７：Ｎ、０
．００％０％グラスファイバール気泳動度：１５．４ｃ
ｍ（グルコース１１．８ｍ） ＤＥＡＥ）ヨバールクロマトグラフイの溶出時間：９．
３時間 口）ガノデランＢ 分子量（ゲル濾過法）：３６００ 比旋光度：〔αＩＤ　３３．３０（ｃ　Ｏ，２０、水）
赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ　）　νｍａｘ（ｃｙ−
１）　：３２１０．１０２８ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：４．４０（中広）元素分
析値：　Ｃ，４２，９４：Ｈ，５，８２：Ｎ、１．２６
％ゲラスフアイバーチ紙電気泳動度：　１６．１　ｃｍ
　（グルコース１１．８ｃｒｎ） ＤＥＡＥ）ヨバールクロマトグラフイの溶出時間：１０
．３時間 なお上記特性のうち分子量、グラスファイノ（−濾紙電
気泳動度及びＤＥＡＥ　）ヨバールクロマトグラフイの
溶出時間の測定は次のようにして行った。

■）分子量 各ガノデランはセファクリルＳ−２００を用いてゲル済
過を行って各保持容量をめ、デキストマンＴシリーズを
用いて作製した標準曲線から分子量をｑ゛出した。

分子量　測定に使ったセファクリル ガノデラｙＡ　９３００　セファクリルＳ−２００＃　
Ｂ　３６００　−２００ ■）グラスファイバーＦ紙電気泳動度 グラスファイバーＦ紙（ワットマンＧＦ／Ｃ。

１５Ｘ４０ｃｍ）によシ、以下の移動距離（ｍ）を示す
。（条件：アルカリ性ホウ酸緩衝液ｐＨ９，３゜４５０
Ｖ、２時間） 移動距離　ガノデランＡ　Ｉ５．４ Ｂ　１６．．１ グルコース　１１．８ １［）　ＤＥＡＥ）ヨバールクロマトグラフイの溶出時
間ＤＥＡＥ）ヨパールカラム（２，２ｃｍφＸ　４５　
ｃｍ　）を用い、０．０５モルのトリス−塩酸緩衝液（
ｐＨｓ、ｏ　）により最初の５時間溶出を行い、さらに
同じ緩衝液に塩化ナトリウムを添加（０〜７モル、２０
時間）して溶出（１ｍｊ／ｓ−）を行うとき、以下の溶
出時間（時間）を与える。

溶出時間　ガノデランＡ９．３ Ｂ１０．３ 次にこの発明のガノデラン類の薬理効果を示す〇薬理効
果試験 血糖値１４０〜１７０■／ｄｔ↓量２５〜３０ｆの正常
ｄｄ系マウスの５匹ずつを一群としＣ１これらの群ごと
にこの発明のガノデラン類を種々の投与量で復腔内投与
し、一定時間後の相対血糖値（コントロールに対するチ
）を測定し下記の表に示した。その結果ガノデラン類投
与群はコントロール群よシも相対血糖値が低いことが明
らかである０

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ／　次の特性： １）多糖類であり、 ２）血糖降下作用を有し、 ３）個々の物質が イ）ガノデランＡ 分子量（ゲル漣過法）：９３００ 比旋光度：〔α）＋５８．８°（ｃ　Ｏ，１９、水）赤
   外線吸収スペクト＃　（ＫＢｒ）νｍａｘ（ｃｒｎ−１
   ）：　３２７０　。 ０１３ １Ｈ核磁気共鳴スベク゛トルδ：１．１２（中広）、２
   ２．０７（中広）、４．８６（中広） 元素分析値：　Ｃ，４１，７９；Ｈ，６，０７；Ｎ、　
   ０．００チグラスファイバー沖紙電気泳動度：１５．４
   ｃｒｎ（グルコース１１．８　ｃｍ　） ＤＥＡＥ　）ヨバールクロマトグラフイの溶出時間＝９
   ．３時間 口）ガノデランＢ 分子量（ゲル沖過法）：３６００ 比旋光度：〔α）Ｄ−３３，３°（ｃｏ、２０．水）赤
   外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）νｍａｘ（σ−１）：３
   ２１０　．１０２８ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：４．４０（中広）元素分
   析値：　Ｃ，４２，９４：Ｈ，５，８２：Ｎ、１．２６
   ％グラスファイバーＰ紙電気泳動度：　１６．１ｃｒｎ
   （グルコース１１．８６ｎ） ＤＥＡＥ　）ヨパールクロマトグラフィの溶出時間＝１
   ０３時間 を有するガノデランＡ及び／又はガノデランＢからなる
   多糖類。 サルノコシカケ科に属するマンネンタケ又は近縁植物の
   子実体すなわち霊芝の生もしくは乾燥物を脱脂処理する
   か、又はせずして、水もしくは水性有機溶媒で抽出する
   か、又はその両方で抽出し、得られた抽出液のまま、又
   は一旦その濃縮液とするかもしくは血糖降下作用を有す
   る物質の沈澱物を作ってその濃縮液もしく社沈澱物を水
   又は水性有機溶媒に溶解した液を、透析もしくは限外濾
   過に付して下記特性を有するガノデランＡ及びＢを含有
   するガノデラン混合物を得、さらにこのガノデラン混合
   物を分画処理して、 次の特性： １）多糖類であシ、 ２）血糖降下作用を有し、 ３）個々の物質が イ）ガノデランＡ 分子量（ゲル濾過法）：９３００ 比旋光度：〔α）ｎ　＋　５８．８０（ｃ　Ｏ，１９、
   水）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）　ｖｍａｘ　（ｍ
   −’）　：３２７０．１０１３ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：１．１２（中広）。 ２．０７（中広）、４．８６（中広） 元素分析値：　Ｃ，４１，７９；Ｈ，６，０７：Ｎ、０
   ．００％グラスファイ、バー沖紙を気泳動度：１５．４
   ｃｒｎ（グルコース１１．８０） ＤＥＡＥ　）ヨパールクロマトグラフイの溶出時間：９
   ．３時間 口）ガノデランＢ 分子量（ゲル濾過法）：３６００ 比旋光度：〔α）ｐ　３３．３０（ｃ　Ｏ，２０、水）
   赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）ｖｍａｘ（ｃｒｎ）　
   。 ３２１０．１０２８ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：４．４０（中広）元素分
   析値：　Ｃ，４２，９４：Ｈ，５，８２：Ｎ、１．２６
   ％グラスファイバー濾紙電気泳動度１１１６．１ｃＩｎ
   （グルコース１１．８ｃｍ） ＤＥＡＥ）ヨパールクロマトグラフイの浴出時間：１０
   ．３時間 であるガノデランＡ又はＢの個々の成分を分離すること
   を特徴とする多糖類の単離法。 ３　霊芝がサルノコシカケ科に属するマンネンタケ（ガ
   ノデルマ・ルキードウム、カルスト、）、マゴジャクシ
   （ガノデルマ・ネオヤボニクム、イマゼキ）、ツガノマ
   ンネ／タケ（ガノデルマ・ツガエ。 マリル）、オオマンネンタケ（ガノデルマ・セシレ、マ
   リル）、又はツヤケシマンネンタケ（ガノデルマ・クル
   テイシ、ベルク、）である特許請求の範囲第２項記載の
   単離法０ ４！、霊芝がサルノコシカケ科に属するマンネンタケ（
   ガノデルマ・ルキードウム、カルスト、）である特許請
   求の範囲第２項記載の単離法。 ｊ　水性有機溶媒が低級脂族アルコール、アセトン又は
   他の水溶性有機溶媒含有の水溶液でおる特許請求の範囲
   第２項記載の単離法。 Ａ　分画処理が、分子量分画処理とイオン交換樹脂処理
   とで行う特許請求の範囲第２項記載の単離法。 Ｚ　次の特性： ■）多糖類であり、 ２）血糖降下作用を有し、 ３）個々の物質が イ）ガノデランＡ 分子量（ゲル濾過法）：９３００ 比旋光度：〔α）ｐ　＋　５８．８０（ｃ　Ｏ，１９、
   水）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）νｍｆ１　ｘ（Ｃ
   １ｎ　−”　）　：３２７０．１０１３ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：１．１２（中広）。 ２．０７（中広）、４．８６（中広） 元素分析値：　Ｃ，４１，７９；Ｈ，６，０７：Ｎ、０
   ．００％グラスファイバーｒ紙を気泳動度：１ｓ、４ｃ
   ＋＋＋（グルコース１１．８ｃＩｎ） ＤＥＡＥ）ヨパールクロマトグラフイの溶出時間：９．
   ３時間 口）ガノデランＢ 分子量（ゲル濾過法）：３６００ 比旋光度：〔α）Ｄ−３３，３°（ｃｏ、２０．水）赤
   外線吸収スペクトル（Ｋｎｒ）ｖｍａｘ（６ｎ−’）　
   ：３２１０．１０２８ １Ｈ核磁気共鳴スペクトルδ：４．４０（中広）　゛元
   素分析値：　Ｃ，４２，９４：Ｈ，５，８２；Ｎ、１．
   ２６チグラスファイバー濾紙電気泳動度：　１６．１ｃ
   ｍ　（グルコース１１．８ｍ） ＤＥＡＥ　）ヨパールクロマトグラフイの溶出時間＝１
   ０゜３時間 でおるガノデランＡ及び／又はＢからなる多糖類を有効
   成分として含有する血糖降下剤Ｑ