JPS5930699B2 - 新規アゾベンジルアミン化合物の製造法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規アゾベンジルアミン化合物の製造法に関す
る。

本発明方法により得られるアゾベンジルアミン化合物は
生体試料中に含まれるモノアミンオキシダーゼの活性度
を測定する上で優れた基質となり得て、従来の繁雑な測
定方法に比べて簡単で正確な測定方法を可能とするもの
である。

すなわちモノアミンオキシダーゼの測定は肝硬変の予知
に大切な臨床検査手段であつて従来法は基質としてベン
ジルアミンを用いて酵素反応を行なわせ、生成したベン
ズアルデヒドを溶媒で抽出して紫外部吸収スペクトルを
測定するかあるいは適当なアルデヒド試薬と反応させ、
比色定量することによつてベンズアルデヒド生成量を知
りモノアミンオキシダーゼの活性度を求めていたが、ベ
ンジルアミンの自動酸化によリブランク値が増加したり
、ベンジルアミンが基質としての反応性に乏しいため、
酵素反応に長時間を要したり、アルデヒド検出試薬の添
加と発色の安定性に問題がある等モノアミンオキシダー
ゼ測定の従来法は繁雑で不満足なものであつた。

本発明者らはアミノベンジルアミンあるいはベンジルア
ミノ基を容易に脱離できる基で保護されているアミノベ
ンジルアミンより得られるジアゾニウム化合物とＮ−Ｎ
−ジメチルアニリンとをカップリングさせて得られるア
ゾベンジルアミン化合物がモノアミンオキシダーゼに対
して基質適合性が高く該酵素の定量に際し有用な基質に
なりうることを発見し、本発明を完成した。

すなわち本発明に係るジアゾニウム化合物の原料として
はアミノベンジルアミンあるいはベンジルアミノ基を容
易に脱離できる基で保護されているアミノベンジルアミ
ンたとえばｍ−及びｐ−アミノベンジルアミン、Ｎ−（
アミノベンジル）フタルイミド、第３級ブトキシカルボ
アミノメチルアニリン、トリクロロアセトアミノメチル
アニリンなどが一方の反応性成分として有効に使用でき
、公知の方法によりジアゾニウム化合物となし他方の反
応性成分であるＮ−Ｎ−ジメチルアニリンとカップリン
グさせる。

ベンジルアミノ基が保護されている場合は常法に従つて
保護基をはずす。

本発明に係わる新規なアゾベンジルアミン化合物を用い
て、たとえば次のような方法でモノアミンオキシダーゼ
の活性度を測定することができる。

すなわち、Ｏ、ＩＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノ
メタンー塩酸緩衝液にアゾベンジルアミン化合物を溶解
して基質緩衝液を調製する。遠心沈澱管に基質緩衝液２
、Ｏｍｌをとり３７℃で３分間加温したのち、血清０．
３ゴを加え３７℃恒温水槽中で２時間インキユベートす
る。反応液にシクロヘキサン４ｍ１を加えてパイプロミ
キサ一で３０秒間振盪抽出する。３０００ｒ．ｐ．ｍで
１０分間遠心分離して上層（抽出層）をとり酵素反応に
よつて生ずるアゾベンズアルデヒド化合物の可視部にお
ける適当に選ばれた波長における吸光度を測定してモノ
アミンオキシダーゼの活性度を知るものである。

このように本発明方法により得られるアゾベンジルアミ
ン化合物を基質として用いると基質としての反応性が従
来品に比し高いため酵素反応の時間を短縮することがで
き、従来法に比し短時間に測定でき、更に生体試料は少
なく従来法の十量で測定できるから患者より生体試料こ
こでは血液の採取量を少なくでき、したがつて患者に与
える苦痛も少なくなる。

またここで特筆すべきことは、酵素反応によつて生ずる
アゾベンズアルデヒド化合物は、酵素反応終了後酸を加
えて酵素反応を停止させたのち酸性反応液中より水に不
溶の有機溶媒によつて完全に抽出され、そのままでアゾ
化合物特有の色を有するため直ちに可視部で比色が可能
であり、操作が従来法に比し極めて簡略化され、しかも
通常の検査室で持つている比色計又は分光光度計で容易
に測定できることである。

以上の如く本発明に係る新規アゾベンジルアミン化合物
はモノアミンオキシダーゼに対して従来見られなかつた
優れた基質となりえて、しかも比色定量にあたつては単
に溶媒抽出、比色という測定操作のみで生体試料中のモ
ノアミンオキシダーゼの活性度が測定しうる点で臨床診
断学上に有用な化合物であり、臨床医学に貢献するとこ
ろ大なるものがある。

以下に例を示す。

参考例 Ｎ−（３−アミノベンジル）フタルイミド５．０７を塩
酸６ｙと水３００ｍ１の溶液に溶解し、冷却下に亜硝酸
ナトリウム１．４ｙを水５０ｍ１に溶解した溶液を撹拌
しながら注加する。

ジアゾ化を完結させたあとＮ−Ｎ−ジメチルアニリン２
．６ｙ１塩酸５ｍ１、水５０ｍ１よりなる溶液を注加し
酢酸ナトリウム水溶液を反応液が黄緑色を保つように加
えながら１時間攪拌する。最後に炭酸ナトリウム水溶液
を加え液性をアルカリとして濾取すれば黄色の結晶のＮ
−（３−（４−Ｎ−Ｎ−ジメチルアミノフエニルアゾ）
ベンジル）フタルイミド７．４７（収率９７％）を得る
。前記で得た結晶を稀メタノール、ヒドラジンヒトラー
ドとともに加熱還流し、その後塩酸を加えて加熱還流す
る。

反応後減圧濃縮し、水を加えてフタルヒドラジドを濾別
する。濾液を炭酸ナトリウム水溶液でＰＨ２としたのち
シクロヘキサンで可溶分を抽出除去する。分離した水層
は炭酸ナトリウム水溶液でＰＨｌ４以上としクロロホル
ムで抽出分液する。クロロホルム層を無水硫酸ナトリウ
ムで脱水後、減圧濃縮する。濃縮残分をアセトンに溶解
し塩酸を加え減圧乾固する。Ｍｐｌ４４〜１４５℃（ｄ
）の青紫色の結晶の４−（３′−アミノメチルフエニル
アゾ）−Ｎ−Ｎ−ジメチルアニリンニ塩酸塩３．５ｙ（
収率５７％）を得る。元素分析：Ｃｌ５Ｈｌ８Ｎ４・２
ＨＣ１実施例 １ Ｎ−（４−アミノベンジル）フタルイミド２６ｖをエタ
ノール１８５ｍ１と９０％抱水ヒドラジン７．５７の溶
液に懸濁し、攪拌下加熱還流させる。

３時間後、塩酸を３０ｍ１注加してさらに１時間半加熱
還流させる。

反応物を室温まで冷却し、析出したフタルヒドラジドを
沢去する。沢液を減圧下濃縮乾固したのち水１５０ｍ１
を加え溶解し、活性炭を使用し脱色▲過する。ｆ液を再
び濃縮乾固し熱乾燥すれば微黄色の４−アミノベンジル
アミン[ラ鮪_塩１８．２ｙ（収率９１％）を得る。Ｍｐ
３ＯＯ℃（ｄ）以上。本品０．２７を精秤し純水５００
ｍ１に溶解しＮ／１０一水酸化ナトリウム規定液で滴定
したところＰＨ６．６とＰＨｌＯ．８に中和変曲点があ
り、含量は１０１．０％であることが求められた。

本品は少量の水で再結晶が可能であるが、精製すること
なく次のジアゾカツプリング反応に使用することができ
る。このようにして得た４−アミノベンジルアミン[ラ
鮪_塩１０．０７に、塩酸２０ｍ１と水１００ｍ１を加
え溶解し、さらに氷１００ｙを加えて攪拌下冷却する。

内温をＯ℃に保ち、亜硝酸ナトリウム３．７ｙを水２０
ｍ１に溶解した溶液を注加しジアゾ化を完結させる。得
られたジアゾニウム塩溶液にＮ−Ｎ−ジメチルアニリン
６．４７、塩酸１０ｍ１１水１００ｍ１からなる溶液を
注加し、酢酸ナトリウム水溶液を反応液が黄緑色を保つ
ように加えながら１時間撹拌する。最後に炭酸ナトリウ
ムの水溶液を加えアルカリ性として沢取し、水洗すれば
４（４′−アミノメチルフエニルアゾ）−Ｎ−Ｎジメチ
ルアニリン１１．６７の黄色結晶が得られる。この結晶
をアセトン５０ｍ１に溶解し１０ｍ１の塩酸を加え減圧
濃縮すればＭｐｌ７５〜１７７℃（ｄ）の青紫色の４−
（４′−アミノメチルフエニルアゾ）Ｎ−Ｎ−ジメチル
アニリンニ塩酸塩１２．２７（収率７１％）を得る。元
素分析 Ｃｌ５Ｈｌ８Ｎ４・２ＨＣ１ 実施例 ２ 原料としてＮ−（３−アミノベンジル）フタルイミドを
用いる以外は実施例１と同様の反応により３−アミノベ
ンジルアミンニ塩酸塩を得、その後も実施例１と同様の
ジアゾカツプリング反応により４−（３′−アミノメチ
ルフエニルアゾ）−Ｎ・Ｎ−ジメチルアニリンニ塩酸塩
を得た。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ アミノベンジルアミンより得られるジアゾニウム化
   合物とＮ・Ｎ−ジメチルアニリンとをカップリングさせ
   ることを特徴とする新規なアゾベンジルアミン化合物で
   ある４−（アミノメチルフェニルアゾ）−Ｎ・Ｎ−ジメ
   チルアニリンの製造方法。